grΓλώσσα
Σπίτι / Η γνώση / Περιεχόμενο

Η γνώση

Το Kuwanon T και το Sanggenon A που απομονώνονται από το Morus Alba ασκούν αντιφλεγμονώδη αποτελέσματα ρυθμίζοντας τις οδούς σηματοδότησης NF-κB και HO-1/Nrf2 σε κύτταρα BV2 και RAW264.7

Mar 30, 2022

Για περισσότερες πληροφορίες. Επικοινωνίαtina.xiang@wecistanche.com

Αφηρημένη: Ερευνήσαμε προηγουμένως το μεθανολικό εκχύλισμα του φλοιού Morus alba και χαρακτηρίσαμε 11 ενώσεις από το εκχύλισμα: kuwanon G(1), Kuwana E (2), Kuwana T(3), sanggenon A(4), sanggenon M(5), sanggenol Α(6), μουλμπεροφουράνιο Β(7), μουλμπεροφουράνιο G(8), μορασίνη Μ(9), μορασίνη Ο(10) και νοαρτοκαρπανόνη (11). Εδώ, ερευνήσαμε τοαντιφλεγμονώδηεπιδράσεις αυτών των ενώσεων σε μικρογλοιακά κύτταρα (BV2) και μακροφάγα (RAW264.7). Μεταξύ αυτών, το 3 και το 4 ανέστειλαν σημαντικά την επαγόμενη από λιποπολυσακχαρίτες (LPS) παραγωγή μονοξειδίου του αζώτου σε αυτά τα κύτταρα, υποδηλώνοντας τις αντιφλεγμονώδεις ιδιότητες αυτών των δύο ενώσεων. Αυτές οι ενώσεις ανέστειλαν την παραγωγή προσταγλανδίνης Ε2, ιντερλευκίνης-6 και παράγοντα νέκρωσης όγκων-c και την έκφραση επαγώγιμης συνθάσης νιτρικού οξειδίου και κυκλοοξυγενάσης-2 μετά από διέγερση με LPS. Η προεπεξεργασία με 3 και 4 ανέστειλε την ενεργοποίηση της οδού σηματοδότησης του πυρηνικού παράγοντα κάπα Β και στους δύο τύπους κυττάρων. Οι ενώσεις προκάλεσαν επίσης την έκφραση της οξυγενάσης της αίμης (HO)-1 μέσω της ενεργοποίησης του πυρηνικού παράγοντα ερυθροειδούς 2-που σχετίζεται με τον παράγοντα 2. Η καταστολή της δραστηριότητας του HO-1 ανέστρεψε τα αντιφλεγμονώδη αποτελέσματα που προκλήθηκαν με προεπεξεργασία με 3 και 4, υποδηλώνοντας ότι τα αντιφλεγμονώδη αποτελέσματα ρυθμίζονταν από HO-1. Συνολικά, τα 3 και 4 είναι πιθανοί υποψήφιοι για την ανάπτυξη θεραπευτικών και προληπτικών παραγόντων γιαφλεγμονώδεις ασθένειες.

Λέξεις-κλειδιά: Morus alba; Kuwanon T; sanggenon A; BV2; Κυψέλες RAW264.7; αντιφλεγμονώδη αποτελέσματα

flavonoids anti-inflammatory

Κάντε κλικ εδώ για να μάθετε περισσότερα προϊόντα

1. Εισαγωγή

Το Morus alba, ένα φαρμακευτικό φυτό που ανήκει στην οικογένεια Moraceae, έχει χρησιμοποιηθεί για τη θεραπεία πνευμονικών φλεγμονωδών καταστάσεων στην παραδοσιακή ιατρική [1]. Ο φλοιός της ρίζας του περιέχει διάφορα ενεργά συστατικά όπως ομπελιφερόνη, σκοπολετίνη, βλεννίνες, τανίνες,φλαβονοειδή(μορουσίνη, μουλμπερίνη, μουλβερριχρωμένιο, κυκλομουλμπερίνη, μορασίνη P, μορασίνη Ο, mulberrofuran Q, Kuwana E και kuwanon H)[2], 2-αρυλβενζοφουράνια (moracenin D, moracin P, moracin O και mulberrofuran O), και πρενυλιωμένα φλαβονοειδή (λικοφλαβόνη C, cyclomulberrin, neocyclomorusin, sanggenon I, morusin και Kuwana U)[3,4]. Τα εκχυλίσματα M. alba και οι δραστικές ενώσεις μπορούν να ανακουφίσουν τις πνευμονικές παθήσεις, όπως αποκαλύπτεται από πρόσφατες μελέτες [5-7]. Εκτός από τη φαρμακολογική επίδραση του M.alba στους πνεύμονες, τα ισοπρενυλιωμένα φλαβονοειδή (sanggenol Q, Kuwana T, sanggenon N, mulberrofuran G και mulberrofuran C) ασκούν ηπατοπροστατευτικά αποτελέσματα σε κύτταρα HepG2 που προκαλούνται από t-BHP [8]. Τα πρενυλ-φλαβονοειδή (kuwanon A, Kuwana C, Kuwana T και μορουσίνη) και τα τριτερπενοειδή (βετουλίνη οξύ, αβιλ και -σιτοστερόλη) αναστέλλουν ουσιαστικά τη διαφοροποίηση των λιποκυττάρων 3T3-L1 [9]. Η ένυδρη μορίνη, το κύριο φλαβονοειδές συστατικό του M. alba, ανακουφίζει τη χρόνια απρόβλεπτη εξασθένηση της μνήμης που προκαλείται από το στρες, υποδεικνύοντας ότι αυτή η ένωση θα μπορούσε να ενισχύσει το αντιοξειδωτικό αμυντικό σύστημα και να αναστείλει τις νευροφλεγμονώδεις οδούς [10]. Αυτές οι μελέτες υποδηλώνουν ότι τα συστατικά που περιέχονται στο M.alba είναι πιθανά υποψήφια για τη θεραπεία διαφόρων ασθενειών.

Φλεγμονή, μια πολύπλοκη απάντηση αυτοάμυνας σε βλαβερά ερεθίσματα, παίζει σημαντικό ρόλο στην άμυνα του ανοσοποιητικού μέσω της ενεργοποίησης αρκετών ανοσοκυττάρων, συμπεριλαμβανομένων των μακροφάγων, των μονοκυττάρων, των λευκοκυττάρων, των μαστοκυττάρων και άλλων τύπων κυττάρων [11]. Τα μακροφάγα είναι τα πιο άφθονα και ευρέως κατανεμημένα κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος στο σώμα και τα μικρογλοία είναι μακροφάγα που κατοικούν στο κεντρικό νευρικό σύστημα (ΚΝΣ)[12]. Τα μακροφάγα και τα μικρογλοιακά κύτταρα είναι βασικοί παράγοντες στη φλεγμονώδη απόκριση. Μπορούν να ενεργοποιηθούν ως απόκριση σε ερεθίσματα όπως ο λιποπολυσακχαρίτης (LPS), οι κυτοκίνες και οι χημειοκίνες και να προκαλέσουν φλεγμονώδεις καταστάσεις [13]. Υπό φλεγμονώδεις συνθήκες, τα υπερβολικά ενεργοποιημένα μακροφάγα και τα μικρογλοιακά κύτταρα προκαλούν ανώμαλη ρύθμιση των προφλεγμονωδών μεσολαβητών (νιτρικό οξείδιο (NO), προσταγλανδίνη E2 (PGE,), επαγώγιμη συνθάση μονοξειδίου του αζώτου (iNOS) και κυκλοοξυγενάση (COX)-2 ) και προφλεγμονώδεις κυτοκίνες (ιντερλευκίνη (IL)-6 και παράγοντας νέκρωσης όγκου (TNF)-a), μέσω της ενεργοποίησης της οδού σηματοδότησης του πυρηνικού παράγοντα κάπα Β (NF-B)[14,15]. Τα αυξημένα επίπεδα προφλεγμονωδών μεσολαβητών επιδεινώνουν περαιτέρω την εξέλιξη των φλεγμονωδών νόσων, οι οποίες αυξάνουν περαιτέρω την ενεργοποίηση των φλεγμονωδών παραγόντων, οδηγώντας έτσι σε έναν φαύλο κύκλο[16]. Επομένως, η ρύθμιση των φλεγμονωδών μεσολαβητών είναι απαραίτητη για τη θεραπεία και την πρόληψη των φλεγμονωδών ασθενειών.

Η οξυγενάση της αίμης (HO)-1 είναι ένα ένζυμο περιορισμού του ρυθμού που καταλύει την αποδόμηση της αίμης σε μπιλιβερδίνη, ιόν σιδήρου (Fe2 plus) και μονοξείδιο του άνθρακα (CO)[17]. Η επαγωγή HO-1 ρυθμίζεται από την ενεργοποίηση του πυρηνικού παράγοντα ερυθροειδούς 2-σχετικού παράγοντα 2 (Nrf2). Το HO-1 μπορεί να προκληθεί ως απόκριση στο οξειδωτικό στρες και τη φλεγμονή για την προστασία των ιστών και τη διατήρηση της ομοιόστασης στο σώμα[18]. Επομένως, η στόχευση της επαγωγής HO{10}} είναι μία από τις πιθανές στρατηγικές για τη θεραπεία φλεγμονωδών ασθενειών.

Στη συνεχιζόμενη προσπάθειά μας για διερεύνηση υποψηφίων από φυσικά προϊόντα για τη θεραπεία φλεγμονωδών ασθενειών, παρουσιάζουμε εδώ τοαντιφλεγμονώδη αποτελέσματαενώσεων 11 λίτρων που απομονώθηκαν από M.alba σε κύτταρα BV2 και RAW264.7 που προκαλούνται από LPS.

4flavonoids anti-inflammatory

2. Αποτελέσματα

2.1. Επιδράσεις 11 ενώσεων που απομονώθηκαν από το M.alba στη βιωσιμότητα των κυττάρων BV2 και RAW264.7

Στην προηγούμενη μελέτη, ο φλοιός της ρίζας του M.alba εκχυλίστηκε σε υδατική μεθανόλη και τα ληφθέντα εκχυλίσματα κατανεμήθηκαν διαδοχικά σε EtOAc, n-BuOH και H2O2. Η επαναλαμβανόμενη χρωματογραφία στήλης SiO2, ODS και Sephadex LH-20 του κλάσματος EtOAc έδωσε 11 ενώσεις, όπως kuwanon G(1), Kuwana E(2), Kuwana T (3), sanggenon A(4), sanggenon Μ(5), sanggenol A(6), mulberofuran B(7), mulberofuran G(8), moracin M(9), moracin O(10) και noartocarpanone (11)[6,19,20]. Οι χημικές δομές 11 ενώσεων που απομονώθηκαν από το M.alba απεικονίζονται στο Σχήμα 1. Για τον προσδιορισμό των κυτταροτοξικών επιδράσεων αυτών των ενώσεων, ένα 3-(4,5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ){{ 26}}.5-διφαινυλτετραζόλιο βρωμιούχου (MTT) δοκιμασία, τα κύτταρα BV2 και RAW264.7 υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με τις υποδεικνυόμενες συγκεντρώσεις των ενώσεων για 48 ώρες, σε συγκεντρώσεις έως και 80 μΜ. (Σχήμα 2). Οι ενώσεις 2, 3 και 4 είχαν τοξικά αποτελέσματα στα 80 μΜ, η ένωση 5 είχε τοξικά αποτελέσματα στα 40 μΜ. Με βάση το αποτέλεσμα της αξιολόγησης τοξικότητας, επιλέχθηκε ένα εύρος μη τοξικών συγκεντρώσεων για μεταγενέστερες μελέτες σχετικά με τα αντιφλεγμονώδη αποτελέσματα (ένωση 2, 3,4 στα 40 μΜ, ένωση 5 στα 200 μΜ και άλλες ενώσεις στα 80 μΜ) .

Chemical structures of compounds 1–11 isolated from M. alba

Cytotoxic effects of compounds 1–11 isolated from M. alba on BV2 (A) and RAW264.7 (B) cells. The cells were incubated for 48 h with various concentrations of the compounds, and their viability was determined using MTT (3-(4,5- dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) assay. Error bars represent mean ± standard deviation of three independent experiments. * p < 0.05, ** p < 0.01 ,*** p < 0.001 compared with the control group. Figure 2. Cytotoxic effects of compounds 1–11 isolated from M. alba on BV2 (A) and RAW

2.2. Επιδράσεις των ενώσεων l1 που απομονώθηκαν από το M. alba στην έκφραση των φλεγμονωδών παραγόντων και της πρωτεΐνης iNOS σε κύτταρα BV2 και RAW264.7

Το ΝΟ είναι μια ελεύθερη ρίζα στο καρδιαγγειακό, νευρικό καιανοσοποιητικά συστήματα. Διατηρεί την ενδοκυτταρική ομοιόσταση, μεταφέρει νευροδιαβιβαστές και ρυθμίζει την αντιφλεγμονώδη δράση και την κυτταροτοξικότητα. Ωστόσο, όταν παράγεται μεγάλη ποσότητα ΝΟ, έχει επιβλαβείς επιπτώσεις στον οργανισμό, συμπεριλαμβανομένης της αγγειοδιαστολής, της κυτταροτοξικότητας και της βλάβης των ιστών [21,22]. Στη συνέχεια εξετάσαμε τα αποτελέσματα αυτών των ενώσεων στην παραγωγή νιτρωδών σε κύτταρα BV2 και RAW264.7 που προκαλούνται από LPS. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διαφορετικές συγκεντρώσεις ενώσεων για 2 ώρες πριν από τη διέγερση με LPS (1 μg/mL) για 24 ώρες. Μεταξύ των ενώσεων, μόνο η Ένωση 3 (kuwanonT) και 4 (sanggenon A) ανέστειλαν σημαντικά την παραγωγή νιτρωδών και στις κυτταρικές σειρές BV2 και RAW264.7 (Εικόνα 3). Επιπλέον, πραγματοποιήσαμε ένα πρόσθετο πείραμα για να συγκρίνουμε την ανασταλτική επίδραση της παραγωγής νιτρωδών μεταξύ της ομάδας που υποβλήθηκε σε επεξεργασία με LPS μετά την προεπεξεργασία της ένωσης και της ομάδας που υποβλήθηκε σε αγωγή με ένωση μετά την προεπεξεργασία με LPS. Ως αποτέλεσμα, δεν υπήρχε διαφορά στην ανασταλτική επίδραση της παραγωγής νιτρωδών μεταξύ των δύο πειραματικών ομάδων (Συμπληρωματικό Σχήμα S1). Επομένως, σε αυτή τη μελέτη, τα ακόλουθα πειράματα διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας την προκατεργασία με ενώσεις εντός 2~3 ωρών πριν από την επεξεργασία του LPS.

. Inhibitory effects of compounds 1–11 on nitrite production in BV2 (A) and RAW264.7 (B) cells. The cells were pretreated for 2 h with concentrations of compounds and stimulated for 24 h with lipopolysaccharide (LPS; 1 µg/mL). Error bars represent mean ± standard deviation of three independent experiments. * p < 0.05 and *** p < 0.001 compared with the LPS-treated group

Η παραγωγή του ΝΟ αυξάνεται από τις προφλεγμονώδεις πρωτεΐνες που επάγονται από τη συνθάση του μονοξειδίου του αζώτου (iNOS). Ωστόσο, η υπερέκφραση του iNOS βλάπτει σοβαρά την παθοφυσιολογία της νόσου [23]. Οι ενώσεις 3 και 4 ανέστειλαν την έκφραση του iNOS με τρόπο εξαρτώμενο από τη συγκέντρωση (Εικόνα 4). Εξετάσαμε τα αποτελέσματα των ενώσεων 3 και 4 στην επαγόμενη από LPS έκφραση φλεγμονωδών παραγόντων σε κύτταρα BV2 και RAW264.7. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διαφορετικές συγκεντρώσεις των ενώσεων 3 και 4 για 2 ώρες πριν από τη διέγερση με LPS (1 μg/mL) για 24 ώρες. Και οι δύο ενώσεις ανέστειλαν σημαντικά την επαγόμενη από LPS έκφραση των PGE2, TNF και IL{19}} σε κύτταρα BV2 και RAW264.7 (Εικόνα 5). Τα αποτελέσματα φάνηκε να δείχνουν ότι η προ-αγωγή με την ένωση 3 και 4 κατέστειλε την επαγόμενη από το LPS φλεγμονή στα κύτταρα BV2 και RAW264.7.

Protein expression levels of inducible nitric oxide synthase (iNOS) in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated BV2 (A) and RAW264.7 (C) cells. The cells were pretreated for 2 h with various concentrations of compounds 3 or 4 and stimulated for 24 h with LPS (1 μg/mL). Representative blots from three independent experiments are shown. Immunoblots were quantified using the ImageJ software. Band intensities are normalized to that of β-actin (B, D). Error bars represent mean ± standard deviation of three independent experiments. * p < 0.05, ** p < 0.01, and *** p < 0.001 compared with the LPS-treated group. Figure 5. Inhibitory effects of compounds 3 and 4 on the level of PGE2 (A and D), IL-6 (B and E), and TNF-α (C and F) in BV2 and RAW264.7 cells. The cells were pretreated for 2 h with various concentrations of compounds 3 or 4 and stimulated for 24 h with lipopolysaccharide (LPS; 1 μg/mL). Error bars represent mean ± standard deviation of three independent experiments. * p < 0.05, ** p < 0.01 and *** p < 0.001 compared with the LPS-treated group. Figure 4. Protein expression levels of inducible nitric oxide synthase (iNOS) in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated BV2 (A) and RAW264.7 (C) cells. The cells were pretreated for 2 h with various concentrations of compounds 3 or 4 and stimulated for 24 h with LPS (1 µg/mL). Representative blots from three independent experiments are shown. Immunoblots were quantified using the ImageJ software. Band intensities are normalized to that of β-actin (B,D). Error bars represent mean ± standard deviation of three independent experiments. * p < 0.05, ** p < 0.01, and *** p < 0.001 compared with the LPS-treated group

Inhibitory effects of compounds 3 and 4 on the level of PGE2 (A and D), IL-6 (B and E), and TNF-α (C and F) in BV2 and RAW264.7 cells. The cells were pretreated for 2 h with various concentrations of compounds 3 or 4 and stimulated for 24 h with lipopolysaccharide (LPS; 1 μg/mL). Error bars represent mean ± standard deviation of three independent experiments. * p < 0.05, ** p < 0.01 and *** p < 0.001 compared with the LPS-treated group. Figure 4. Protein expression levels of inducible nitric oxide synthase (iNOS) in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated BV2 (A) and RAW264.7 (C) cells. The cells were pretreated for 2 h with various concentrations of compounds 3 or 4 and stimulated for 24 h with LPS (1 µg/mL). Representative blots from three independent experiments are shown. Immunoblots were quantified using the ImageJ software. Band intensities are normalized to that of β-actin (B,D). Error bars represent mean ± standard deviation of three independent experiments. * p < 0.05, ** p < 0.01, and *** p < 0.001 compared with the LPS-treated group. Molecules 2021, 26, x FOR PEER REVIEW 5 of 16 Figure 3. Inhibitory effects of compounds 1–11 on nitrite production in BV2 (A) and RAW264.7 (B) cells. The cells were pretreated for 2 h with concentrations of compounds and stimulated for 24 h with lipopolysaccharide (LPS; 1 μg/mL). Error bars represent mean ± standard deviation of three independent experiments. * p < 0.05 and *** p < 0.001 compared with the LPS-treated group. Figure 4. Protein expression levels of inducible nitric oxide synthase (iNOS) in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated BV2 (A) and RAW264.7 (C) cells. The cells were pretreated for 2 h with various concentrations of compounds 3 or 4 and stimulated for 24 h with LPS (1 μg/mL). Representative blots from three independent experiments are shown. Immunoblots were quantified using the ImageJ software. Band intensities are normalized to that of β-actin (B, D). Error bars represent mean ± standard deviation of three independent experiments. * p < 0.05, ** p < 0.01, and *** p < 0.001 compared with the LPS-treated group. Figure 5. Inhibitory effects of compounds 3 and 4 on the level of PGE2 (A and D), IL-6 (B and E), and TNF-α (C and F) in BV2 and RAW264.7 cells. The cells were pretreated for 2 h with various concentrations of compounds 3 or 4 and stimulated for 24 h with lipopolysaccharide (LPS; 1 μg/mL). Error bars represent mean ± standard deviation of three independent experiments. * p < 0.05, ** p < 0.01 and *** p < 0.001 compared with the LPS-treated group. Figure 5. Inhibitory effects of compounds 3 and 4 on the level of PGE2 (A,D), IL-6 (B,E), and TNF-α (C,F) in BV2 and RAW264.7 cells. The cells were pretreated for 2 h with various concentrations of compounds 3 or 4 and stimulated for 24 h with lipopolysaccharide (LPS; 1 µg/mL). Error bars represent mean ± standard deviation of three independent experiments. * p < 0.05, ** p < 0.01 and *** p < 0.001 compared with the LPS-treated group

effects of cistanche improve immunity (33)

2.3. Επιδράσεις των ενώσεων 3 και 4 στη μετατόπιση NF-xB σε κύτταρα BV2 και RAW264.7

Το NF-kB είναι ένας μεταγραφικός παράγοντας που ρυθμίζει την έκφραση του iNOS [24]. Το κανονικό NF-kB παραμένει στην ανενεργή του μορφή σχηματίζοντας σύμπλοκα με ρυθμιστικές πρωτεΐνες όπως το IKB. Ωστόσο, όταν ενεργοποιείται από το LPS, το IkBa αποικοδομείται με φωσφορυλίωση και το NF-kB (όπως το p65) μετατοπίζεται στον πυρήνα [25], ο οποίος προάγει το γονίδιο του φλεγμονώδους μεσολαβητή και επάγει την έκφραση φλεγμονωδών παραγόντων [26]. Για να εξετάσουμε περαιτέρω την ανασταλτική επίδραση των ενώσεων 3 και 4 στην παραγωγή προφλεγμονωδών παραγόντων σε ενεργοποιημένα με LPS κύτταρα BV2 και RAW264.7, ερευνήσαμε την πυρηνική μετατόπιση έκφρασης του p65 σε κύτταρα που υποβλήθηκαν σε αγωγή με ενώσεις 3 και 4, LPS ή και τα δύο χρησιμοποιώντας ένα αντίσωμα σημασμένο με FITC αντι-ρ65. Το DAPI χρησιμοποιήθηκε για πυρηνική χρώση. Στην ομάδα ελέγχου, η έκφραση ρ65 ανιχνεύθηκε στο κυτταρόπλασμα. Ωστόσο, στα επαγόμενα από LPS κύτταρα, ανιχνεύθηκε συσσώρευση p65 στον πυρήνα, όπως υποδεικνύεται στις συγχωνευμένες εικόνες της χρώσης DAPI και p65. Επιπλέον, σε σύγκριση με τα επαγόμενα από LPS κύτταρα, οι ενώσεις 3 και 4 μείωσαν σημαντικά την προκαλούμενη από LPS αύξηση στη δραστηριότητα δέσμευσης DNA NF-KB (ρ65) (Εικόνα 6Α, Β) και στην πυρηνική μετατόπιση (Εικόνα 6C-F). Αυτά τα ευρήματα υποδεικνύουν ότι οι ενώσεις 3 και 4 είναι αρνητικοί ρυθμιστές της πυρηνικής μετατόπισης NF-kB που διεγείρεται από LPS.

Effects of compounds 3 and 4 on and NF-κB DNA-binding activity (A,B) and NF-κB (p65) localization (C–F) in BV2 and RAW264.7 cells. The cells were pretreated with compounds 3 or 4 for 2 h and stimulated with liposaccharide (LPS; 1 µg/mL) for 1 h. Experiments were performed using a commercially available enzyme-linked immunosorbent assay kit, as described in the Materials and Methods section. ** p and *** p < 0.001 compared with the LPS-treated group

2.4. Επιδράσεις των ενώσεων 3 και 4 στο μονοπάτι Nrf2/HO-1 στο BV2 και στο RAW264.7

Η οξυγενάση της αίμης των κυττάρων-1(HO-1) είναι στόχος του πυρηνικού παράγοντα Ε2-που σχετίζεται με τον παράγοντα 2 (Nrf2), η οδός Nrf2/HO-1 είναι ένα ισχυρό αντιοξειδωτικό σύστημα σηματοδότησης για την προώθηση του ελεύθερου σιδήρου σε μονοξείδιο του άνθρακα (CO), μπιλιβερδίνη και αίμη [27]. Το μονοξείδιο του άνθρακα, ένας αέριος μεταβολίτης του καταβολισμού της αίμης, εμφανίζει ρυθμιστικά αποτελέσματα αγγειοδιαστολής και προφλεγμονωδών αποκρίσεων [28]. Εκτός αυτού, το HO-1 είναι επίσης γνωστό ότι παίζει σημαντικό ρόλο στην προστασία των κυττάρων από τη φλεγμονή και το οξειδωτικό στρες και στη ρύθμιση της παραγωγής νιτρωδών σε ενεργοποιημένα μακροφάγα [29]. Πραγματοποιήσαμε Western blotting για να διερευνήσουμε εάν οι ενώσεις 3 και 4 αυξάνουν το επίπεδο έκφρασης του HO{-1, όπου ο γνωστός επαγωγέας HO-1 πρωτοπορφυρίνης κοβαλτίου (CoPP) χρησιμοποιήθηκε ως θετικός μάρτυρας που αυξάνει το HO{{{ 16}} έκφραση πρωτεΐνης. [30]. Τα αποτελέσματα αποκάλυψαν ότι οι ενώσεις 3 και 4 ρύθμισαν επίσης προς τα πάνω την έκφραση του ΗΟ-1 (Εικόνα 7). Εξερευνήσαμε περαιτέρω εάν οι ενώσεις 3 και 4 ρυθμίζουν την ενεργοποίηση του Nrf2. Η μετατόπιση του Nrf2 στον πυρήνα αυξήθηκε με τρόπο εξαρτώμενο από το χρόνο, υποδεικνύοντας ότι οι ενώσεις 3 και 4 ρύθμισαν σημαντικά την οδό Nrf2/HO-1 στα κύτταρα BV2 και RAW264.7 (Εικόνα 8).

ffects of compounds 3 and 4 on heme oxygenase (HO)-1 expression in BV2 (A) and RAW264.7 (C) cells. The cells were treated with compounds 3 or 4 or CoPP (10 μM) for 12 h. Representative blots from three independent experiments are shown. Immunoblots were quantified using the ImageJ software. Band intensity was normalized to each total form expression (B and D). * p < 0.05, ** p < 0.01, and *** p < 0.001 compared with the control group. Figure 7. Effects of compounds 3 and 4 on heme oxygenase (HO)-1 expression in BV2 (A) and RAW264.7 (C) cells. The cells were treated with compounds 3 or 4 or CoPP (10 µM) for 12 h. Representative blots from three independent experiments are shown. Immunoblots were quantified using the ImageJ software. Band intensity was normalized to each total form expression (B,D). * p < 0.05, ** p < 0.01, and *** p < 0.001 compared with the control group.

Effects of compounds 3 and 4 on Nrf2 activation in BV2 (A,C) and RAW264.7 (B,D) cells. The cells were treated with compounds 3 or 4 for 0.5, 1, and 1.5 h. Representative blots from three independent experiments are shown. Immunoblots were quantified using the ImageJ software. Band intensity was normalized to each β-actin or PCNA. * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0.001, # p < 0.05, ## p < 0.01, and ### p < 0.001, compared with the control group

Effects of compounds 3 and 4 on Nrf2 activation in BV2 (A,C) and RAW264.7 (B,D) cells. The cells were treated with compounds 3 or 4 for 0.5, 1, and 1.5 h. Representative blots from three independent experiments are shown. Immunoblots were quantified using the ImageJ software. Band intensity was normalized to each β-actin or PCNA. * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0.001, # p < 0.05, ## p < 0.01, and ### p < 0.001, compared with the control group

Για να εξετάσουμε περαιτέρω εάν τα αντινευροφλεγμονώδη και αντιφλεγμονώδη αποτελέσματα των ενώσεων 3 και 4 συσχετίζονται με την έκφραση HO-1 σε κύτταρα BV2 και RAW264.7, πραγματοποιήσαμε ένα σύνολο πειραμάτων με κασσίτερο πρωτοπορφυρίνη-IX (SNPP) που είναι ένας επιλεκτικός αναστολέας δραστηριότητας του HO-1. Χρησιμοποιώντας SNPP που μπορεί να μειώσει την έκφραση του HO-1, προσπαθήσαμε να προσδιορίσουμε εάν το HO-1 μεσολαβεί στην ανασταλτική δράση των παραπάνω ενώσεων στη φλεγμονώδη απόκριση που προκαλείται από το LPS 【31】. Μετά την επεξεργασία των κυττάρων με 20 μΜ των ενώσεων 3 και 4 για 2 ώρες με ή χωρίς 50 uM SNPP, υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με LPS για 24 ώρες. Αν και οι ενώσεις 3 και 4 μείωσαν την παραγωγή νιτρωδών σε κύτταρα BV2 και RAW264.7 που επάγονται από LPS, τα αντιφλεγμονώδη αποτελέσματά τους αντιστράφηκαν με θεραπεία SNPP (Εικόνα 9). Το SNPP από μόνο του δεν επηρέασε την παραγωγή μονοξειδίου του αζώτου (ΝΟ) μετά από διέγερση LPS, υποδηλώνοντας ότι τα αντιφλεγμονώδη αποτελέσματα των ενώσεων 3 και 4 ρυθμίζονται από την έκφραση HO-1.

image

Inhibitory effects of compounds 3 and 4 on nitrite production through the regulation of HO-1 activity in BV2 (A,C,E) and RAW264.7 (B,D,F) cells. The cells were treated with 50 µM of tin protoporphyrin-IX (SnPP) or compounds 3 or 4 and stimulated for 24 h with lipopolysaccharide (LPS; 1 µg/mL). Data are presented as mean ± standard deviation of three independent experiments. ** p < 0.01 and *** p < 0.001

3. Συζήτηση

Η παρούσα μελέτη έδειξε ότι το Kuwana T και το sanggenon A ασκούν κατασταλτική φλεγμονή που προκαλείται από LPS σε κύτταρα BV2 και RAW264.7. Αυτές οι ενώσεις ανέστειλαν την επαγόμενη από LPS παραγωγή ΝΟ, PGE2 και προφλεγμονωδών κυτοκινών, συμπεριλαμβανομένων των IL-6 και TNF-, και την έκφραση των iNOS και COX-2 τόσο στα BV2 όσο και στα RAW264.7 κύτταρα. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το Kuwana T και το sanggenon A άσκησαν τις αντιφλεγμονώδεις επιδράσεις τους απενεργοποιώντας το μονοπάτι σηματοδότησης NF-kB. Επιπλέον, αυτές οι ενώσεις προκάλεσαν την έκφραση του HO-1 μέσω της ενεργοποίησης του Nrf2. Επιπλέον, αυτές οι ενώσεις προκάλεσαν την έκφραση του HO-1 μέσω της ενεργοποίησης του Nrf2 και αυτό το αποτέλεσμα επιβεβαιώθηκε επίσης ότι σχετίζεται με την αντιφλεγμονώδη δράση.

Nitric oxide synthase (NOS) has three isoforms: neuronal NOS (nNOS; NOS1), iNOS (NOS2), and endothelial eNOS (NOS3)[32]. iNOS is an inducible form that is upregulated in response to various stimuli, including LPS, cytokines, chemokines, and stress, while nNOS and eNOS are constitutive forms that catalyze continuous NO secretion at basal concentrations J33]. Similar to iNOS, COX-2 is also an inducible form upregulated by various inflammatory stimuli, such as cytokines, growth factors, tumor promoters, and bacterial LPS[34]. Its other isoform, COX-1, is constitutively expressed in most tissues under normal physiological conditions [35].COX-2 exerts an enzymatic effect on the conversion of prostaglandin H2 (PGH2), which converts arachidonic acid to PGE, prostaglandin 12(PGI2), prostaglandin F2a (PGF>.), και θρομβοξάνη Α2(ΤΧΑ,)[361. Υπό φλεγμονώδεις καταστάσεις, τα επίπεδα iNOS και COX-2 αυξάνονται, με αποτέλεσμα την υπερπαραγωγή NO και PGE2, αντίστοιχα, και οδηγώντας στην έξαρση των φλεγμονωδών διαταραχών [37]. Στην παρούσα μελέτη, αξιολογήσαμε πρώτα 11 ενώσεις που απομονώθηκαν από το M.alba για να προσδιορίσουμε εάν η παραγωγή ΝΟ αναστέλλεται σε κύτταρα BV2 και RAW264.7 που διεγείρονται από LPS. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι το kuwanon T και το sanggenon A άσκησαν τα ισχυρότερα ανασταλτικά αποτελέσματα τόσο στα κύτταρα BV2 όσο και στα κύτταρα RAW264.7 (Εικόνα 3). Στην προηγούμενη μελέτη μας, η μορακίνη Μ είχε αντιφλεγμονώδη δράση στα κυψελιδικά μακροφάγα, αλλά τα αποτελέσματά μας έδειξαν διαφορετική πρότυπο. Ωστόσο, δεδομένου ότι κάθε κύτταρο έχει διαφορετικά χαρακτηριστικά, μπορεί να εμφανιστούν διαφορετικές δραστηριότητες ακόμη και με τον ίδιο μηχανισμό J38]. Ως εκ τούτου, όπως και στα αποτελέσματα αυτής της εργασίας, επιβεβαιώθηκε ότι η μορακίνη Μ δεν είχε αντιφλεγμονώδη δράση στα κύτταρα BV2 και RAW264.7 μέχρι τη συγκέντρωση θεραπείας. Επομένως, το kuwanon T και το sanggenon A επιλέχθηκαν για περαιτέρω πειράματα.

Οι κυτοκίνες έχουν πολύπλοκη ρυθμιστική επίδραση στις φλεγμονώδεις και ανοσολογικές αποκρίσεις [39]. Η ενεργοποίηση των μακροφάγων και των μικρογλοιακών κυττάρων ενισχύει την έκκριση των προφλεγμονωδών κυτοκινών J40 και αυτή η αυξημένη έκκριση οδηγεί σε περαιτέρω απελευθέρωση κυτοκίνης [41]. Η IL-6 είναι μία από τις κύριες κυτοκίνες και είναι ένας διαλυτός μεσολαβητής υπεύθυνος για τη φλεγμονή, την ανοσοαπόκριση και την αιμοποίηση [42]. Η σηματοδότηση της IL-6 ρυθμίζεται μέσω δύο διαφορετικών μηχανισμών, συμπεριλαμβανομένης της δέσμευσης στον υποδοχέα IL-6 που συνδέεται με τη μεμβράνη (mblL6R) και της αναγνώρισης του διαλυτού υποδοχέα IL-6 (sIL6R)[43]. Και οι δύο μηχανισμοί σχετίζονται με την ενεργοποίηση της γλυκοπρωτεΐνης (GP) 130, η οποία έχει ως αποτέλεσμα την ενεργοποίηση των μορίων σηματοδότησης κατάντη, συμπεριλαμβανομένης της κινάσης Janus (IAK)/μετατροπέα σήματος και του ενεργοποιητή των μεταγραφικών (STAT)κινασών, της φωσφοϊνοσιτιδικής {{14}κινάσης (PI3K ), και ενεργοποιημένη από μιτογόνο πρωτεϊνική κινάση (MAPK)[44]. Η IL-6 χρησιμοποιείται για την πρόβλεψη και την αξιολόγηση των επιπέδων φλεγμονής σε ασθενείς με καρκίνο, λοίμωξη, αυτοάνοσα νοσήματα, παγκρεατικές παθήσεις και καρδιαγγειακές παθήσεις.

Το TNF-, μια άλλη κύρια κυτοκίνη, παίζει επίσης σημαντικό ρόλο σε πολλές ανοσολογικές και φλεγμονώδεις διεργασίες, όπως ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων του ανοσοποιητικού, η απόπτωση, η νέκρωση και η επιβίωση. Οι βιολογικές επιδράσεις του TNF- ρυθμίζονται με σύνδεση σε δύο διαφορετικούς υποδοχείς, τον υποδοχέα παράγοντα νέκρωσης όγκου (TNFR)1 και τον TNFR2. Ο TNFR1 είναι ο κύριος μεσολαβητής της δραστηριότητας του TNF στα περισσότερα κύτταρα, επειδή ο TNFR2 έχει λιγότερη συγγένεια δέσμευσης για τον TNF-, με αποτέλεσμα ο TNF- να διαχωρίζεται πιο εύκολα από τον TNFR2 παρά από τον TNFR1. Οι ανωμαλίες στη σηματοδότηση του TNF και η υπερπαραγωγή του TNF- οδηγούν στην ανάπτυξη πολλών ασθενειών, όπως η ρευματοειδής αρθρίτιδα, η ψωρίαση, η νόσος του Crohn, η αθηροσκλήρωση, η σήψη, ο διαβήτης και η παχυσαρκία [45,46. Ως εκ τούτου, είναι σημαντικό να αναστέλλεται η παραγωγή προφλεγμονωδών κυτοκινών για την καταστολή και την πρόληψη των φλεγμονωδών αντιδράσεων και της ανάπτυξης φλεγμονωδών ασθενειών. Στην παρούσα μελέτη, το kuwanon T και το sanggenon A ανέστειλαν την επαγόμενη από LPS παραγωγή IL-6 και TNF- τόσο στα κύτταρα BV2 όσο και στα RAW264.7.

Ο NF-KB είναι ο πιο πανταχού παρών μεταγραφικός παράγοντας[47] και η σηματοδότηση NF-kB παίζει σημαντικό ρόλο στην έκφραση γονιδίων που σχετίζονται με φλεγμονώδεις αποκρίσεις, συμπεριλαμβανομένων αυτών που κωδικοποιούν iNOS, COX-2 και προφλεγμονώδεις κυτοκίνες [ 48]. Στην αδρανοποιημένη κατάσταση, υπάρχουν υπομονάδες NF-kB στο κυτταρόπλασμα συνδεδεμένες με την πρωτεΐνη αναστολέα του, τον αναστολέα κάπα Β (kB)-. Αρκετά ερεθίσματα, συμπεριλαμβανομένων των LPS και των κυτοκινών, επάγουν τη φωσφορυλίωση και την αποικοδόμηση του IkB-, επιτρέποντας την απελευθέρωση και τη μετατόπιση των υπομονάδων NF-kB στον πυρήνα. Οι μετατοπισμένες υπομονάδες συνδέονται με θέσεις kB των γονιδίων-στόχων στο DNA, με αποτέλεσμα την επαγωγή μεταγραφής γονιδίων που κωδικοποιούν προφλεγμονώδεις μεσολαβητές [49]. Επομένως, η απενεργοποίηση της οδού NF-kB μπορεί να είναι ένας θεραπευτικός στόχος για φλεγμονώδεις ασθένειες. Στην παρούσα μελέτη, η προεπεξεργασία με kuwanon T και sanggenon A ανέστειλε την επαγόμενη από LPS ενεργοποίηση της σηματοδότησης NF-kB αναστέλλοντας τη δραστηριότητα σύνδεσης DNA και την πυρηνική μετατόπιση των υπομονάδων NF-kB (Εικόνα 6). Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι τα αντιφλεγμονώδη αποτελέσματα του kuwanon T και του sanggenon A ασκούνται μέσω της ρύθμισης της οδού σηματοδότησης NF-kB.

Υπό κανονικές συνθήκες, το Nrf2 συνδέεται με την πρωτεΐνη 1 (Keap1) που σχετίζεται με την ECH παρόμοια με Kelch στο κυτταρόπλασμα. Ωστόσο, διασπάται από το Keapl, μετατοπίζεται στον πυρήνα και συνδέεται με θέσεις αντιοξειδωτικής απόκρισης (ARE) στο DNA, οδηγώντας στην έκφραση διαφόρων αντιοξειδωτικών γονιδίων, συμπεριλαμβανομένων εκείνων που κωδικοποιούν HO-1, NAD(P)H : οξειδορεδουκτάση κινόνης 1 (NQO1), υπεροξιρεδοξίνη (Prx) και θειορεδοξίνη (Trx)[50]. Συγκεκριμένα, το HO-1 είναι γνωστό ότι σχετίζεται με αντιφλεγμονώδη αποτελέσματα και η δραστηριότητά του αντιπροσωπεύεται από τα επίπεδα του CO, ενός από τα τρία παραπροϊόντα που παράγονται από την αίμη από την ενζυματική δραστηριότητα του ΗΟ{{12 }} [51]. Στην παρούσα μελέτη, βρήκαμε ότι το kuwanon T και το sanggenon A προκάλεσαν την έκφραση HO-1 ενεργοποιώντας το Nrf2 (Εικόνες 7 και 8). Επιπλέον, επαληθεύσαμε τη συσχέτιση μεταξύ της αντιφλεγμονώδους δράσης του kuwanon T και της έκφρασης sanggenon A και HO{-1 χρησιμοποιώντας SNPP, έναν εκλεκτικό αναστολέα της δραστηριότητας HO{-1. Οι ανασταλτικές επιδράσεις του kuwanon T και του sanggenon A στην παραγωγή NO και TNF- και την ενεργοποίηση NF-kB αντιστράφηκαν εν μέρει με τη συν-θεραπεία με SNPP (Εικόνα 9). Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι οι αντιφλεγμονώδεις επιδράσεις του kuwanon T και του sanggenon A ρυθμίζονται από την έκφραση HO-1.

effects of cistanche improve immunity (11)

4. Υλικά και Μέθοδοι

4.1. Υλικά

Roswell Park Memorial Institute 1640 (RPMI 1640) και εμβρυϊκός βόειος ορός αγοράστηκαν από την Gibco BRL Co. (Grand Island, Νέα Υόρκη, ΗΠΑ). Όλα τα χημικά ελήφθησαν από τη Sigma-Aldrich Chemical Co. (St. Louis, ΜΟ, ΗΠΑ). Τα κύρια αντισώματα anti-iNOS, anti{4}}ακτίνη, anti-p65 και anti-HO-1 αγοράστηκαν από την Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA). και δευτερογενή αντισώματα κατά κουνελιού και ποντικού από την Millipore

(Billerica, MA, ΗΠΑ). Κιτ ανοσοπροσροφητικού προσδιορισμού (ELISA) συνδεδεμένου με ένζυμο για PGE,, IL-6 και TNF- αγοράστηκαν από την R&DSystems Inc. (Minneapolis, MN, USA). Η απομόνωση και ο δομικός προσδιορισμός των 11 ενώσεων από το Morus alba έχει περιγραφεί αλλού [19-21].

4.2. Αναλύσεις Κυτταρικής Καλλιέργειας και Βιωσιμότητας

Τα κύτταρα BV2 και RAW264.7 σπάρθηκαν σε πυκνότητα 5x105 κύτταρα/mL σε RPMI 1640 συμπληρωμένο με 1 τοις εκατό αντιβιοτικό (πενικιλλίνη-στρεπτομυκίνη) και 10 τοις εκατό αδρανοποιημένο με θερμότητα FBS. Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν στους 37 βαθμούς σε υγροποιημένο 5 τοις εκατό CO, με ατμόσφαιρα αέρα 95 τοις εκατό, σύμφωνα με μια μέθοδο που περιγράφηκε προηγουμένως [52].

4.3. Μέτρηση Παραγωγής ΟΧΙ

Η παραγωγή νιτρωδών, ενός σταθερού τελικού προϊόντος οξείδωσης ΝΟ, μετρήθηκε ως δείκτης παραγωγής ΝΟ στα κύτταρα. Εν συντομία, η συγκέντρωση των νιτρωδών στα ρυθμισμένα μέσα προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας μια μέθοδο που βασίζεται στην αντίδραση Griess [53]. Οι λεπτομέρειες της δοκιμασίας έχουν περιγραφεί προηγουμένως [54].

4.4. PGE2 Ass4y/

Η συγκέντρωση του PGEz σε κάθε δείγμα μετρήθηκε χρησιμοποιώντας ένα κιτ ELISA που διατίθεται στο εμπόριο, σύμφωνα με μια μέθοδο που περιγράφηκε προηγουμένως [55].

4.5. Μέτρηση των επιπέδων IL-6 και TNF-a

Το μέσο καλλιέργειας συλλέχθηκε για τον προσδιορισμό των επιπέδων IL-6 και TNF- χρησιμοποιώντας ένα εμπορικά διαθέσιμο κιτ (BioLegend, San Diego, CA, USA). Η ανάλυση πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Εν συντομία, κύτταρα BV2 και RAW264.7 σπάρθηκαν σε 24-πλάκες καλλιέργειας φρεατίων σε πυκνότητα 20×10 κύτταρα/φρεάτιο. Μετά την επώαση, το υπερκείμενο συλλέχθηκε και χρησιμοποιήθηκε για τη μέτρηση των συγκεντρώσεων της IL-6 και του TNF- με κιτ ELISA.

4.6. Ανάλυση Western Blot

Τα σφαιροποιημένα κύτταρα BV2 και RAW264.7 πλύθηκαν με PBS και λύθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα RIPA. Ίσες ποσότητες πρωτεϊνών ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας συμπύκνωμα αντιδραστηρίου βαφής δοκιμασίας πρωτεΐνης που ελήφθη από την Bio-Rad Laboratories (#5000006· Hercules, CA, USA), αναμίχθηκαν στο ρυθμιστικό διάλυμα φόρτωσης δείγματος και διαχωρίστηκαν χρησιμοποιώντας SDS-PAGE. Οι διαχωρισμένες πρωτεΐνες στη συνέχεια μεταφέρθηκαν σε μεμβράνη νιτροκυτταρίνης. Η μη ειδική δέσμευση στη μεμβράνη αποκλείστηκε με επώαση σε διάλυμα αποβουτυρωμένου γάλακτος. Η μεμβράνη επωάστηκε με πρωτογενή αντισώματα (όλα χρησιμοποιήθηκαν σε 1:1000) στους 4 βαθμούς κατά τη διάρκεια της νύχτας και στη συνέχεια αντέδρασε με ένα δευτερεύον αντίσωμα συζευγμένο με υπεροξειδάση χρένου (όλα τα οποία χρησιμοποιήθηκαν σε 1:5000) (Milipore) [ 31].

4.7. NF-xB Εντοπισμός και Ανάλυση Ανοσοφθορισμού

Για να μελετηθεί ο εντοπισμός του NF-kB, κύτταρα BV2 και RAW264.7 καλλιεργήθηκαν σε αντικειμενοφόρους θαλάμου Lab-Tek II και υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διαφορετικές συγκεντρώσεις ενώσεων για 2 ώρες πριν από τη διέγερση LPS (0.5 μg/mL) για 1 η. Τα κύτταρα στη συνέχεια σταθεροποιήθηκαν σε φορμαλίνη και διαπερατήθηκαν με ψυχρή ακετόνη και ανιχνεύθηκαν με αντισώματα αντι-ρ65 (1:200), ακολουθούμενη από επώαση με δευτερεύον αντίσωμα επισημασμένο με ισοθειοκυανική φλουορεσκεΐνη (1:1000) (Alexa Fluor 488, Invitrogen). Για να οπτικοποιηθούν οι πυρήνες, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 1 ug/mL 4'6-διαμιδινο-2-φαινυλινδόλης (DAPI για 30 λεπτά, πλύθηκαν με PBS για 5 λεπτά και υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 50 μL VectaShield (Vector Laboratories, Burlingame, CA, ΗΠΑ). Τα χρωματισμένα κύτταρα οπτικοποιήθηκαν και οι εικόνες αποκτήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα μικροσκόπιο φθορισμού Zeiss (Provis ΑΧ70, Olympus Optical Co., Τόκιο, Ιαπωνία). [31].

4.8. Στατιστική ανάλυση

Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± τυπική απόκλιση τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. Η μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης, ακολουθούμενη από τη δοκιμασία πολλαπλής σύγκρισης του Tukey, χρησιμοποιήθηκε για να συγκριθούν οι διαφορές μεταξύ των τριών ομάδων. Οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό GraphPad Prism (έκδοση 5.01, GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA),

5. Συμπεράσματα

Το Kuwanon T και το sanggenon A άσκησαν αντιφλεγμονώδη αποτελέσματα σε κύτταρα BV2 και RAW264.7 που προκαλούνται από LPS αναστέλλοντας την παραγωγή NO, PGE2, IL-6 και TNF- και την έκφραση iNOS και COX{{8} }. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι αυτές οι ανασταλτικές επιδράσεις προκλήθηκαν μέσω αδρανοποίησης της οδού NF-KB με θεραπεία με kuwanon T και sanggenon A. Επιπλέον, αυτές οι ενώσεις προκάλεσαν την έκφραση του HO{10}} ενεργοποιώντας τη μετατόπιση του Nrf2 στον πυρήνα . Τα ευρήματά μας έδειξαν ότι η έκφραση HO-1 που προκαλείται από το kuwanon T και το sanggenon A συσχετίστηκε με τα κατασταλτικά αποτελέσματα κατά της φλεγμονής που προκαλείται από το LPS. Συνολικά, τα αποτελέσματά μας παρέχουν στοιχεία ότι το Kuwana T και το sanggenon A που απομονώθηκαν από το M. Albu θα μπορούσαν να είναι υποψήφιοι για την ανάπτυξη θεραπευτικών και προληπτικών παραγόντων για νευροφλεγμονώδεις νόσους όπως η νόσος του Alzheimer και η νόσος του Parkinson.


Μπορεί επίσης να σας αρέσει