Πώς να χρησιμοποιήσετε τη φόρμουλα τονωτικής νεφρών για να προστατέψετε την οξειδωτική βλάβη στα κύτταρα MES23.5;

Επικοινωνία: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Yihui Xu,¹Γουέι Λιν,²Shuifen Ye,³Huajin Wang,⁴Tingting Wang,⁵Youyan Su, ⁵Liangning Wu,⁶Yuanwang Wang,⁷Qian Xu,⁵Chuanshan Xu,⁸και Jing Cai 5, *

Αφηρημένη

Οξειδωτική βλάβηδιαδραματίζει κρίσιμο ρόλο στην αιτιολογία των νευροεκφυλιστικών διαταραχών συμπεριλαμβανομένης της νόσου του Πάρκινσον (PD). Στη μελέτη μας, ένας αρχαίος Κινέζοςτονωτικό των νεφρώνη φόρμουλα, η οποία αποτελείται από Cistanche, Epimedii και Polygonatum cirrhifolium, διερευνήθηκε για την προστασία των ντοπαμινεργικών νευρώνων του MES23.5 έναντι του υπεροξειδίου του υδρογόνου (H2O2-) που προκαλείταιοξειδωτική βλάβη. Οι βλάβες του H2O2 σεMES23.5 κύτταρακαι τα προστατευτικά αποτελέσματα του KTF έναντιοξειδωτικόΤο στρες αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία ΜΤΤ, την ηλεκτρονική μικροσκοπία μετάδοσης (TEM), την ανοσοκυτταροχημεία (ICC), την ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία (ELISA) και την ανοσοστύπωση. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η βιωσιμότητα των κυττάρων μειώθηκε δραματικά μετά από έκθεση 12 ωρών σε 150 μM H2O2. Η παρατήρηση TEM διαπίστωσε ότι το H2O2-επεξεργάστηκεMES23.5 κύτταραπαρουσίασε βλάβη των κυτταρικών οργανιδίων. Ωστόσο, όταν τα κύτταρα επωάστηκαν με KTF (3.125, 6.25 και 12.5 ug/ml) για 24 ώρες μετά την έκθεση σε H2O2, παρατηρήθηκε σημαντική προστατευτική δράση έναντι της βλάβης που προκαλείται από το H2O{10}}MES23.5 κύτταρα. Χρησιμοποιώντας το ICC, βρήκαμε ότι το KTF ανέστειλε τη μείωση της υδροξυλάσης τυροσίνης (TH) που επάγεται από το H2O2, ρύθμισε προς τα πάνω την έκφραση του mRNA και της πρωτεΐνης των HO-1, CAT και GPx-1 και μείωσε την έκφραση του κασπάση 3. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το KTF μπορεί να παρέχει προστασία των νευρώνων έναντι της κυτταρικής βλάβης που προκαλείται από H2O2- μέσω βελτίωσηςοξειδωτικόστρες και τα ευρήματά μας παρέχουν μια νέα πιθανή στρατηγική για την πρόληψη και τη θεραπεία της νόσου του Πάρκινσον.

ΟΦΕΛΗ CISTANCHE:θεραπεία της νόσου του Πάρκινσον

1. Εισαγωγή

Οι νευροεκφυλιστικές ασθένειες έχουν γίνει πρόσφατα ένα σημαντικό πρόβλημα δημόσιας υγείας. Η νόσος του Πάρκινσον (PD) είναι μια νευροεκφυλιστική ασθένεια που χαρακτηρίζεται από την προοδευτική απώλεια ντοπαμινεργικών νευρώνων στη μέλαινα ουσία. Παρόλο που η αιτία της PD μένει να διευκρινιστεί, αρκετές σειρές αποδεικτικών στοιχείων υποδηλώνουν έντονα αυτόοξειδωτική βλάβηκαι η μιτοχονδριακή δυσλειτουργία παίζουν σημαντικό ρόλο στους παθολογικούς μηχανισμούς της PD [1-3]. Αυξημένηοξειδωτικότο άγχος προκύπτει από μια ανισορροπία μεταξύοξειδωτικόπροϊόντα όπως τα αντιδραστικά είδη οξυγόνου (ROS) και τα αντιοξειδωτικά μόρια στο κύτταρο [4]. Η ενίσχυση της αντιοξειδωτικής ικανότητας των εγκεφαλικών κυττάρων έχει γίνει μια αποτελεσματική στρατηγική για την προστασία των νευρικών κυττάρων από τη βλάβη του οξειδωτικού στρες.

Η PD είναι μια δύσκολα θεραπεύσιμη ασθένεια που απειλεί τους ηλικιωμένους παγκοσμίως. Τα τρέχοντα θεραπευτικά φάρμακα έχουν περιορισμένη αποτελεσματικότητα με σοβαρές παρενέργειες. Παραδοσιακά κινέζικα βότανα και συνθέσεις έχουν χρησιμοποιηθεί ευρέως στη λαϊκή ιατρική για τη θεραπεία νευροεκφυλιστικών ασθενειών συμπεριλαμβανομένης της PD για μεγάλο χρονικό διάστημα. Σύμφωνα με την κινεζική ιατρική θεωρία, η ανεπάρκεια τουνεφρόείναι ο κύριος παθολογικός μηχανισμός της Π.Δ. Το Cistanche deserticola YC Ma, ένα είδος Cistanche που ανήκει στην οικογένεια Orobanchaceae, είναι ένα πολύ γνωστό βότανο στην παραδοσιακή κινεζική ιατρική με τα λεγόμενατονωτικό των νεφρώναποτελεσματικότητα και χρησιμοποιείται για τη θεραπεία τηςνεφρόανεπάρκεια, γυναικεία υπογονιμότητα, νοσηρή λευκόρροια, νευρασθένεια και γεροντική δυσκοιλιότητα [5]. Έχει αναφερθεί ότι οι ολικές γλυκοσίδες Cistanche άσκησαν προστατευτικά αποτελέσματα στους ντοπαμινεργικούς νευρώνες της μέλαινας ουσίας σε μοντέλα ποντικών και κύτταρα με PD [6, 7]. Επιπλέον, τα ενεργά συστατικά του Cistanche έχουν τεκμηριωθεί ότι διαθέτουν νευροπροστατευτική δράση μέσω της ενίσχυσης της αντιοξειδωτικής ικανότητας και της αναστολής της απόπτωσης των νευρώνων [8-15]. Το Herba Epimedii είναι επίσης παραδοσιακότονωτικό των νεφρώνΚινέζικο βότανο με σημαντική αντιοξειδωτική δράση, το οποίο χρησιμοποιείται ευρέως στη θεραπεία της οστεοπόρωσης και των καρδιαγγειακών παθήσεων και στη βελτίωση των σεξουαλικών και νευρολογικών λειτουργιών [16]. Το Polygonatum sibiricum χρησιμοποιείται συχνά ως βοηθός για τη βελτίωση της αποτελεσματικότητας του φαρμάκου μονάρχης και του φαρμάκου υπουργού στην παραδοσιακή κινεζική φόρμουλα. Μια πρόσφατη αναφορά έδειξε ότι τα εκχυλίσματα νερού του Polygonatum sibiricum είναι φυσικά αντιοξειδωτικά.

Με βάση αυτά τα οφέλη από τους αρχαίους Κινέζουςτονωτικό των νεφρώντύπος (KTF) που αποτελείται από Cistanche, Epimedii και Polygonatum cirrhifolium, υποθέσαμε ότι το KTF μπορεί να προστατεύει τους ντοπαμινεργικούς νευρώνες του MES23.5 έναντι του υπεροξειδίου του υδρογόνου (H2O2-) που προκαλείταιοξειδωτική βλάβη. Εδώ, ως απόδειξη της ιδέας, πραγματοποιήσαμε μια σειρά πειραμάτων για να εξετάσουμε τις επιδράσεις του KTF στον κυτταρικό θάνατο και την έκφραση αντιοξειδωτικών ενζύμων στο H2O2-MES23.5 κύτταρα.

Η τονωτική φόρμουλα νεφρών μπορεί να προστατεύσει την οξειδωτική βλάβη στα κύτταρα MES23.5

2. Υλικά και μέθοδοι

2.1. Χημικά και Αντιδραστήρια

Τα αντισώματα HO-1, CAT, κασπάσης 3 και -ακτίνης ελήφθησαν από την Cell Signaling Technology Inc. (Βοστώνη, ΗΠΑ). Το αντίσωμα GPx-1 ήταν από την Abcam (Cambridge Science Park, UK). Το Rabbit Anti-Tyrosine Hydroxylase ήταν από την Boster (BA1454, Κίνα). Το IgG1 αντι-κουνελιού κατσίκας συζευγμένο με ετικέτα υπεροξειδάσης χρένου ήταν από την Santa Cruz Biotechnology Inc. (Καλιφόρνια, ΗΠΑ). Το τροποποιημένο μέσο Eagle's Dulbecco (DMEM) αγοράστηκε από την GIBCO BRL Co. Ltd. (Gaithersburg, MD, ΗΠΑ). Όλα τα άλλα αντιδραστήρια, εκτός αν αναφέρεται διαφορετικά, ήταν από τη Sigma Chemical Co. (St. Louis, ΜΟ, ΗΠΑ). Το RevertAid™ First Strand cDNA Synthesis Kit ήταν από την Fermentas Inc. (Burlington, ΗΠΑ). Το DreamTaq Green PCR Master Mix (2x) ήταν από την Fermentas Inc. (Burlington, ΗΠΑ). Το Bio DL100 ήταν από την BioFlux (Τόκιο, Ιαπωνία). Το Polink-2 plus Polymer HRP Detection System for Rabbit Primary Antibody (PV-9001) και το DAB (3, 3'-διαμινοβενζιδίνη τετραϋδροχλωρική) (ZLI-9032) ήταν από το ZSGB-BIO (Πεκίνο, Κίνα). Τα κιτ ELISA για τη μέτρηση CAT, GPx-1 και GSH ήταν από τη Hufeng Biotechnology Inc. (Σαγκάη, Κίνα). Τα εκχυλίσματα Ginkgo biloba (GE) ήταν από την Shanghai Sine Promod Pharmaceutical Co., Ltd. (Σαγκάη, Κίνα).

2.2. Παρασκευή και τυποποίηση φόρμουλας τονωτικής νεφρού

Τα συστατικά τουτονωτικό των νεφρώνformula, Cistanche deserticola, Epimedium brevicornum και Polygonatum sibiricum, παρασχέθηκαν από το Second Affiliated People's Hospital, Fujian University of Traditional Chinese Medicine, και επικυρώθηκαν προσεκτικά σύμφωνα με την κινεζική φαρμακοποιία (The Pharmacopoeia Commission of China, 2005). Για την παρασκευή δειγμάτων KTF, τα Cistanche deserticola, Epimedium brevicornum και Polygonatum sibiricum σε αναλογία βάρους 1 : 1 : 1,2 αναμίχθηκαν και αλέστηκαν στη σκόνη και μετά βυθίστηκαν σε συνολικό όγκο 10 φορές (w/v) απεσταγμένο νερό για 1 h και βράζουμε για 2 ώρες. Αφού το διάλυμα διηθήθηκε, το διήθημα συλλέχθηκε. Ολόκληρο το υπόλειμμα συλλέχθηκε και έβρασε περαιτέρω με συνολικό όγκο 8 φορές (β/ο) απεσταγμένο νερό για 2 ώρες. Το διάλυμα διηθήθηκε και τα δύο διηθήματα συνδυάστηκαν, συμπυκνώθηκαν και λυοφιλοποιήθηκαν. Η απόδοση του τελικού αποξηραμένου εκχυλίσματος ήταν 25 τοις εκατό (w/w) των αρχικών ακατέργαστων φυτικών υλών και αποθηκεύτηκε στους -20 βαθμούς μέχρι να χρησιμοποιηθεί. Το αποθεματικό διάλυμα KTF (10 mg/ml) παρασκευάστηκε με διάλυση KTF σε διάλυμα φωσφορικού-ρυθμιστικού διαλύματος (PBS), ακολουθούμενο από υπερήχους, αποστείρωση στους 100 βαθμούς και διήθηση.

2.3. Κυτταρική καλλιέργεια και θεραπεία H2O2

MES23.5 κύτταρακαλλιεργήθηκαν και εκτέθηκαν σε H2O2 όπως περιγράφεται στην προηγούμενη εργασία μας [10]. Εν ολίγοις,MES23.5 κύτταρααναπτύχθηκαν σε μέσο DMEM/F12 (GIBCO BRL Co. Ltd., Gaithersburg, MD, USA) που περιέχει 5 τοις εκατό (vol/vol) FBS (GIBCO BRL Co. Ltd., Gaithersburg, MD, USA), 1{{12} }0 U πενικιλλίνη/στρεπτομυκίνη, 2 mM L-γλουταμίνη (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, ΗΠΑ) και Sato's (50 × Sato's: ινσουλίνη 25 mg, μεταφορά 25 mg, πυροσταφυλικό οξύ, 243 mg, πουτρεσκίνη 20 mg· 1 mg/ml σεληνικό νάτριο, 25 μΙ· 0,315 mg/ml προγεστερόνης) στους 37 βαθμούς με 5 τοις εκατό CO2. Αναπτύχθηκε ολονύκτιαMES23.5 κύτταραεπωάστηκαν περαιτέρω με 150 μM H2O2 για 12 ώρες.

2.4. Θεραπεία KTF

MES23.5 κύτταραχωρίστηκαν τυχαία στην ομάδα ελέγχου (φρέσκο ​​μέσο καλλιέργειας), την ομάδα H2O2 (μέσο καλλιέργειας H2O2), την ομάδα εκχυλίσματος Ginkgo biloba (GE) (H2O2 και μέσο καλλιέργειας GE) και τις ομάδες KTF που περιλαμβάνουν τη χαμηλή δόση θεραπείας KTF, μια μεσαία δόση Θεραπεία FTF και υψηλή δόση θεραπείας KTF.MES23.5 κύτταραστη λογαριθμική φάση σπάρθηκαν σε μια πλάκα καλλιέργειας επικαλυμμένη με πολυ-L-λυσίνη (PLL) για 24 ώρες. Τα κύτταρα στην ομάδα ελέγχου υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με το φρέσκο ​​μέσο καλλιέργειας και εκείνα σε όλες τις άλλες ομάδες υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με το μέσο καλλιέργειας που περιείχε 150 μΜ H2O2 για 12 ώρες. Τα κύτταρα στην ομάδα GE υποβλήθηκαν σε αγωγή με το μέσο καλλιέργειας που περιείχε 12,5 ug/ml GE, και εκείνα στην ομάδα χαμηλής δόσης KTF, ομάδα KTF μέσης δόσης και ομάδα KTF υψηλής δόσης υποβλήθηκαν σε αγωγή με KTF στις συγκεντρώσεις 3,125, 6,25, και 12,5 ug/ml για 24 ώρες, αντίστοιχα.

2.5. Βιωσιμότητα κυττάρων

Μετά από επεξεργασία με KTF για 20 ώρες, τα κύτταρα επωάστηκαν με ΜΤΤ (0,5 mg/ml) για 4 ώρες στους 37 βαθμούς και τα μέσα αφαιρέθηκαν προσεκτικά και προστέθηκαν 150 μL DMSO σε κάθε φρεάτιο. Οι κρύσταλλοι φορμαζάνης διαλύθηκαν για 10 λεπτά και η απορρόφηση μετρήθηκε στα 490 nm. Η οπτική πυκνότητα (OD) κάθε φρεατίου μετρήθηκε με φασματοφωτόμετρο (BIO-TEK ELX 800, BioTek Instruments Inc., Vermont, USA). Ως αρνητικός έλεγχος χρησιμοποιήθηκε μέσο καλλιέργειας φρέσκων κυττάρων.

Η τονωτική φόρμουλα νεφρών μπορεί να προστατεύσει την οξειδωτική βλάβη στα κύτταρα MES23.5

2.6. Παρατήρηση Υπερδομικής Μορφολογίας

Μετά από επεξεργασία KTF για 24 ώρες, τα κύτταρα συλλέχθηκαν, εναιωρήθηκαν και σταθεροποιήθηκαν με 3 τοις εκατό γλουταραλδεΰδη σε 1,5 τοις εκατό διάλυμα παραφορμαλδεΰδης (ρΗ 7,3) στους 4 βαθμούς για 24 ώρες. Τα κυτταρικά εναιωρήματα στη συνέχεια ξεπλύθηκαν δύο φορές με PBS και σταθεροποιήθηκαν εκ των υστέρων με 1 τοις εκατό ωσμικό οξύ και 1,5 τοις εκατό διάλυμα εξακυανοφερρικού καλίου (II) (ρΗ 7,3) και επωάστηκαν στους 4 βαθμούς για 2 ώρες. στη συνέχεια τα κυτταρικά εναιωρήματα αφυδατώθηκαν σε μια διαβαθμισμένη σειρά αλκοόλης για 5 λεπτά το καθένα. Τα αφυδατωμένα σφαιρίδια ενσωματώθηκαν τρεις φορές με οξείδιο προπυλενίου για 1 ώρα και διηθήθηκαν με ένα μίγμα ρητίνης/οξειδίου προπυλενίου σε αναλογία 1:1 για 2 ώρες και στη συνέχεια με ρητίνη για 12 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου. Το έγκλεισμα έγινε με εποξική ρητίνη 618 και αραλδίτη και ο πολυμερισμός έγινε στους 60 βαθμούς για 48 ώρες. Τέλος, εξαιρετικά λεπτές τομές (80 nm) χρωματίστηκαν με οξικό ουρανύλιο και αντιχρωματίστηκαν με κιτρικό μόλυβδο για 5 λεπτά. Τα χρωματισμένα κύτταρα εξετάστηκαν με το ηλεκτρονικό μικροσκόπιο μετάδοσης H7650 (Hitachi, Ιαπωνία).

2.7. Ανοσοκυτταροχημική δοκιμασία υδροξυλάσης τυροσίνης (TH)

Μετά από επεξεργασία με KTF για 24 ώρες, τα κύτταρα πλύθηκαν δύο φορές για 2 λεπτά με PBS και σταθεροποιήθηκαν με 4 τοις εκατό παραφορμαλδεΰδη για 15 λεπτά. Τα σταθεροποιημένα κύτταρα πλύθηκαν 3 φορές και στη συνέχεια υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 0,5 τοις εκατό Triton X-100 για 20 λεπτά. Στη συνέχεια, τα κύτταρα πλύθηκαν 3 φορές και υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 3 τοις εκατό H2O2 για 10 λεπτά. Τα κύτταρα που υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με H2O{15}}πλύθηκαν 3 φορές και στη συνέχεια στυπώθηκαν με ορό κατσίκας για 20 λεπτά. Αφού αποτυπώθηκε, προστέθηκε αντι-ΤΗ κουνελιού (1:400) σε κάθε δείγμα στους 4 βαθμούς όλη τη νύχτα. Τα δείγματα στη συνέχεια πλύθηκαν 3 φορές και υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με Polymer Helper για 20 λεπτά. Μετά την επεξεργασία με πολυμερές τα κύτταρα πλύθηκαν 3 φορές και υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με πολυ-ΗΡΡ αντι-κουνελιού IgG για 20 λεπτά. Τα κύτταρα πλύθηκαν 3 φορές και υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με DAB για 3 λεπτά. Τέλος, τα δείγματα πλύθηκαν με τρεχούμενο νερό και υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με αντιχρώση αιματοξυλίνης για 1 λεπτό και στη συνέχεια πλύθηκαν με τρεχούμενο νερό και σφραγίστηκαν με πρωταρχικό μέσο στερέωσης.

2.8. Μέτρηση Αντιοξειδωτικών Ενζύμων με ELISA

Μετά από θεραπεία με KTF για 24 ώρες, το επίπεδο δραστηριότητας του ενδοκυτταρικού CAT, GPx-1 και GSH μετρήθηκε χρησιμοποιώντας κιτ ELISA (Hufeng Biotechnology Inc., Shanghai, Κίνα) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Εν συντομία, 100 μL ομογενοποιημένου υπερκείμενου του προϊόντος λύσης των επεξεργασμένων κυττάρων προστέθηκαν στα φρεάτια ELISA και στη συνέχεια επωάστηκαν στους 37 βαθμούς για 30 λεπτά. Αφού πλύθηκε πέντε φορές και στέγνωσε, προστέθηκαν 50 μL διαλύματος εργασίας αντισώματος σημασμένου με ένζυμο σε κάθε φρεάτιο (αναμενόμενος σωλήνας ελέγχου). Το προκύπτον διάλυμα επωάστηκε για 30 λεπτά στους 37 βαθμούς και πλύθηκε πέντε φορές και ξηράνθηκε. Προστέθηκε διάλυμα εργασίας υποστρώματος (150 μL) σε κάθε φρεάτιο και επωάστηκε για 15 λεπτά στους 37 βαθμούς. Τέλος, ένα διάλυμα διακοπής (50 μL) προστέθηκε σε κάθε φρεάτιο και η τιμή απορρόφησης προσδιορίστηκε στα 450 nm χρησιμοποιώντας έναν αυτόματο αναγνώστη ELISA (XL800, BioTex, Incorporated, Houston, TX, USA).

2.9. Ανάλυση Western Blot

Μετά από επεξεργασία με KTF για 24 ώρες, τα κύτταρα πλύθηκαν με παγωμένο PBS και οι πρωτεΐνες εκχυλίστηκαν σε ρυθμιστικό λύσης που περιείχε 50 mM Tris-HCl (ρΗ 7,4), 1 mM EDTA, 150 mM NaCl, 1 τοις εκατό Nonidet P{{ 9}}, 1 mM φαινυλομεθυλσουλφονυλοφθορίδιο και 10 μg/mL απρωτινίνης. Η συγκέντρωση πρωτεΐνης προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας κιτ δοκιμασίας πρωτεΐνης BCA (Thermo Scientific Pierce, Rockford, Illinois, USA). Η πρωτεΐνη διαχωρίστηκε με ηλεκτροφόρηση SDS-PAGE και μεταφέρθηκε σε PVDF (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Ο αποκλεισμός πραγματοποιήθηκε με 5 τοις εκατό μη λιπαρό ξηρό γάλα. η μεμβράνη επωάστηκε με το αντίσωμα κουνελιού αντι-αρουραίου HO{-1, CAT, κασπάση 3, αντίσωμα -ακτίνης (1 : 1000, Cell Signaling) και αντίσωμα GPx-1 κουνελιού κατά αρουραίου (1: 1000 , Abcam) κατά τη διάρκεια της νύχτας στους 4 βαθμούς . Η επεξεργασμένη μεμβράνη πλύθηκε και στη συνέχεια εκτέθηκε σε IgG1 αντι-κουνελιού κατσίκας συζευγμένη με ετικέτα υπεροξειδάσης χρένου (1:5000, Santa Cruz, USA) για 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά από πέντε ακόμη πλύσεις, η διασταυρούμενη αντιδραστικότητα οπτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας αντιδραστήρια ανίχνευσης κηλίδωσης Western Electrochemiluminescence (ECL) και αναλύθηκε χρησιμοποιώντας πυκνομετρία σάρωσης σε ένα σύστημα εικόνας (Bio-Rad, Hercules, CA, USA).

2.10. Ανάλυση RT-PCR

PCR εκκινητές των HO-1, CAT, GPx-1 και -ακτίνης αγοράστηκαν από τη Sangon Biotech Co. Ltd. (Σαγκάη, Κίνα). Μετά από επεξεργασία με KTF για 24 ώρες, το συνολικό RNA των κυττάρων απομονώθηκε χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο Trizol σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Η αντίστροφη μεταγραφή (RT) πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το σύστημα αντίστροφης μεταγραφής AMV (Fermentas, Burlington, ΗΠΑ). Το θραύσμα cDNA και η -ακτίνη ενισχύθηκαν χρησιμοποιώντας Κιτ MIX Master Green PCR (Fermentas, Burlington, USA). Το DNA ενισχύθηκε αμέσως με έναν μόνο κύκλο στις 94 μοίρες για 5 λεπτά και 30 κύκλους στους 94 βαθμούς για 30 δευτερόλεπτα και στους 58 βαθμούς για 30 δευτερόλεπτα και στους 72 βαθμούς για 30 δευτερόλεπτα για την -ακτίνη, και πραγματοποιήθηκε ένα τελικό βήμα επέκτασης στους 72 βαθμούς για 10 λεπτά. Τα πηκτώματα που χρωματίστηκαν με βρωμιούχο αιθίδιο σαρώθηκαν και πιστοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό Tanon Image. Η ένταση κάθε ζώνης κανονικοποιήθηκε έναντι της έντασης της -ακτίνης.

2.11. Στατιστική ανάλυση

Η στατιστική ανάλυση έγινε με SPSS 18.0 (SPSS Inc., Chicago, IL). Όλα τα δεδομένα παρουσιάστηκαν ως μέσος όρος ± SD (τυπική απόκλιση) και η στατιστική σημασία της διαφοράς εκτελέστηκε με μονόδρομη ANOVA και LSD (γραμμική τυπική απόκλιση). Μια διαφορά θεωρήθηκε σημαντική στο P <>

Η τονωτική φόρμουλα νεφρών μπορεί να προστατεύσει την οξειδωτική βλάβη στα κύτταρα MES23.5

3. Αποτελέσματα

3.1. Οι επιδράσεις βλάβης του H2O2 στα κύτταρα MES23.5 και οι προστατευτικές επιδράσεις του KTF έναντι του οξειδωτικού στρες

Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1(α), το H2O2 εμφάνισε μια δοσοεξαρτώμενη και χρονικά εξαρτώμενη αναστολή στη βιωσιμότητα των ντοπαμινεργικών νευρωνικών κυττάρων MES23.5. Μετά από 12 ώρες έκθεσης σε 50 μM H2O2, σημειώθηκε σημαντική απώλεια βιωσιμότητας των κυττάρων και η απώλεια βιωσιμότητας των κυττάρων αυξήθηκε σταδιακά με τη δόση H2O2 να αυξάνεται στα 150 μM. Ωστόσο, η περαιτέρω αύξηση της δόσης H2O2 από 200 σε 500 μM δεν είχε ως αποτέλεσμα σημαντικά υψηλότερη απώλεια βιωσιμότητας των κυττάρων. ΕπέκτασηMES23.5 κύτταραΗ έκθεση στο H2O2 από 12 ώρες έως 24 ώρες και 48 ώρες αύξησε την απώλεια βιωσιμότητας των κυττάρων σε χαμηλότερες συγκεντρώσεις H2O2. Σημαντική απώλεια βιωσιμότητας των κυττάρων MES23.5 σημειώθηκε μετά από 24 ώρες έκθεσης σε 25 μM H2O2 και 48 ώρες έκθεσης σε 12,5 μM H2O2. Ένας εξαρτώμενος από το χρόνο τρόπος απώλειας βιωσιμότητας των κυττάρων παρατηρήθηκε σε όλες τις ελεγχόμενες συγκεντρώσεις H2O2.

Σχήμα 1 Οι επιπτώσεις της βλάβης του H2O2 σεMES23.5 κύτταρακαι τα προστατευτικά αποτελέσματα του KTF έναντιοξειδωτικόΤο στρες αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία ΜΤΤ. (α) Επιδράσεις διαφορετικών συγκεντρώσεων επεξεργασίας H2O2 στην κυτταρική βλάβη. Τα κύτταρα MES23.5 υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 12,5, 25, 50, 100, 150, 200, 300, 400 και 500 μMol/L H2O2 για 12, 24 και 48 ώρες. (β) Προστατευτικές επιδράσεις διαφορετικών συγκεντρώσεων θεραπείας με KTF σε κυτταρική βλάβη που προκαλείται από H2O2-. Η επεξεργασία του KTF οδήγησε σε αύξηση της βιωσιμότητας των κυττάρων MES23.5 μετά την προσθήκη H2O2.MES23.5 κύτταραεπωάστηκαν με GE (12,5 ug/ml) ή KTF (3,125, 6,25, 12,5 ug/ml) για 24 ώρες μετά την προσθήκη H2O2. Η βιωσιμότητα των κυττάρων μετρήθηκε με ΜΤΤ. Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσος όρος ± SD (τυπική απόκλιση) σε τρία ανεξάρτητα πειράματα. #P < 0.05="" σε="" σύγκριση="" με="" την="" ομάδα="" ελέγχου.="" ∗p="">< 0,05="" σε="" σύγκριση="" με="" την="" ομάδα="" θεραπείας="">

ΕκθέτονταςMES23.5 κύτταραμόνο στο KTF δεν είχε σημαντική κυτταροτοξική δράση ακόμη και όταν η συγκέντρωση του KTF ήταν μέχρι 100 μg/ml. Τα κύτταρα MES23.5 που συγκαλλιεργήθηκαν με 150 μM H2O2 για 12 ώρες προκάλεσαν απώλεια βιωσιμότητας των κυττάρων κατά 46,76 τοις εκατό. Η κυτταροτοξική επίδραση του H2O2 στα κύτταρα MES23.5 μειώθηκε σημαντικά κατά την επεξεργασία με KTF για 24 ώρες (Εικόνα 1(β)). Αυξημένη βιωσιμότητα του H2O2 που υποβλήθηκε σε επεξεργασίαMES23.5 κύτταρααποκαταστάθηκε στο 95,86 τοις εκατό ± 7,18 τοις εκατό , 96,49 τοις εκατό ± 15,07 τοις εκατό και 99,04 τοις εκατό ± 10,57 τοις εκατό με επεξεργασία με KTF σε συγκεντρώσεις 3,125, 6,25 και 12,5 ug/ml, αντίστοιχα.

Το TEM έδειξε ότι τα φυσιολογικά κύτταρα στην ομάδα ελέγχου εμφάνισαν ωοειδές σχήμα με άθικτη κυτταρική μεμβράνη που έχει πολλές αυλακώσεις και δομές που μοιάζουν με μικρολάχνες. Ο πυρήνας του κυττάρου ήταν ελλειπτικός στο κέντρο με έναν μόνο πυρήνα και είχε φυσιολογική ευχρωματίνη και διάσπαρτη ετεροχρωματίνη. Τα μιτοχόνδρια παρουσίαζαν ράβδους ή ελλειπτικά, διάσπαρτα και με φυσιολογικά μιτοχόνδρια cristae. Το τραχύ ενδοπλασματικό δίκτυο ήταν καλά αναπτυγμένο και δεν είχε εμφανή αποκοκκίωση (Εικόνα 2(α)). Ωστόσο, τα κύτταρα που υποβλήθηκαν σε αγωγή με H2O2 ήταν τυπικάοξειδωτική βλάβημε μικρότερους, ακανόνιστους πυρήνες και διογκωμένα μιτοχόνδρια. Προφανής αποκοκκίωση βρέθηκε στο τραχύ ενδοπλασματικό δίκτυο (Εικόνα 2(β)). Στα κύτταρα που υποβλήθηκαν σε αγωγή με KTF προκλήθηκε βελτιωμένο H2O2-οξειδωτική βλάβη, τα μιτοχόνδρια παρουσίαζαν ράβδους ή ελλειπτικά, διάσπαρτα και με περισσότερα μιτοχόνδρια cristae. Το τραχύ ενδοπλασματικό δίκτυο δεν είχε εμφανή αποκοκκίωση (Εικόνες 2(δ), 2(ε) και 2(στ)).

Σχήμα 2 Επίδραση του KTF στην κυτταρική υπερδομή σε H2O2-επαγόμενηMES23.5 κύτταρα. Παρατηρήθηκε κυτταρική υπερδομή υπό ΤΕΜ. Φυσιολογική μορφολογία κυτταροπλάσματος, κυτταρικά οργανίδια στην ομάδα ελέγχου ((a), ×15,000), χαρακτηριστική υπερδομική μορφολογία τουοξειδωτική βλάβηστην ομάδα που υποβλήθηκε σε θεραπεία με H2O2-(β), ×15,000), θεραπεία με ομάδα KTF (3.125, 6.25 και 12.5 ug/ml, αντίστοιχα) ((d), (e), (f), ×15,000) ή εκχύλισμα Ginkgo (12,5 ug/ml) ((c), ×15,000).

3.2. Αύξηση της έκφρασης της TH σε κύτταρα MES23.5 μετά από θεραπεία με KTF

Η ΤΗ είναι ένα κρίσιμο καταλυτικό ένζυμο στη μετατροπή του αμινοξέος L-τυροσίνη σε L-3,4-διυδροξυφαινυλαλανίνη (L-DOPA) που είναι ο πρόδρομος των νευροδιαβιβαστών ντοπαμίνη. Η φυσιολογική έκφραση της ΤΗ είναι το σημάδι των ενεργών νευρώνων. Επομένως, συγκρίναμε την έκφραση TH στο H2O2- που επωάστηκεMES23.5 κύτταραμε ή χωρίς μετά από θεραπεία KTF με ανοσοϊστοχημεία. Το αποτέλεσμα έδειξε ότι το H2O2 μείωσε την έκφραση TH στα κύτταρα MES23.5 και μετά από θεραπεία με KTF θα μπορούσε να βελτιώσει σημαντικά την έκφραση TH (Εικόνα 3). Αυτό υποδεικνύει ότι η θεραπεία με KTF ήταν σε θέση να αποκαταστήσει τη λειτουργία των κυττάρων MES23.5 που υποβλήθηκαν σε αγωγή με H2O2-.

Σχήμα 3 Ο KTF βελτίωσε το H2O2-επαγόμενη μείωση της ΤΗ σεMES23.5 κύτταρα. Τα κύτταρα σταθεροποιήθηκαν με 4 τοις εκατό παραφορμαλδεΰδη και η έκφραση της ΤΗ ανιχνεύθηκε με ανοσοκυτταροχημεία. (α) Το Tan αντιπροσωπεύει τη θετική έκφραση TH (×400). (β) Αρνητικός έλεγχος. (γ) Τα αποτελέσματα εκφράζονται ως μέσος βαθμός γκρι. Τα δεδομένα είναι μέσος όρος ± SD σε τρία ανεξάρτητα πειράματα. #P <0,05 σε="" σύγκριση="" με="" την="" ομάδα="" ελέγχου.="" ∗p="">< 0,05="" σε="" σύγκριση="" με="" την="" ομάδα="" θεραπείας="">

3.3. KTF καταστολή H2O2-Επαγόμενη ενεργοποίηση κασπάσης 3 σε κύτταρα MES23.5

Για περαιτέρω διερεύνηση του μηχανισμού της κυτταρικής βλάβης MES23.5, αξιολογήσαμε την έκφραση της κασπάσης 3 του παράγοντα προαποπτώσεως με ανοσοστύπωση. Το αποτέλεσμα έδειξε ότι η θεραπεία με H2O2 μείωσε σημαντικά την έκφραση της προκασπάσης 3 και ρύθμισε προς τα πάνω την έκφραση της κασπάσης 3. Αντίθετα, η θεραπεία με KTF αποκατέστησε την ισορροπία της προκασπάσης 3 και της κασπάσης 3 αυξάνοντας τις εκφράσεις της προκασπάσης 3 και μειώνοντας την έκφραση της κασπάσης 3 (Εικόνα 4 ). Αυτά τα ευρήματα δείχνουν ότι η θεραπεία με KTF ανέστειλε αποτελεσματικά τις ενεργοποιήσεις της κασπάσης 3.

Εικόνα 4 Επίδραση του KTF στην έκφραση πρωτεΐνης της κασπάσης 3 σε H2O2-επαγόμενηMES23.5 κύτταρα. (α) Η έκφραση πρωτεΐνης της κασπάσης 3 προσδιορίστηκε με στύπωμα western και ποσοτικοποιήθηκε στο (β). Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσος όρος ± SD σε τρία ανεξάρτητα πειράματα. #P < 0.05="" σε="" σύγκριση="" με="" την="" ομάδα="" ελέγχου.="" ∗p="">< 0,05="" σε="" σύγκριση="" με="" την="" ομάδα="" που="" υποβλήθηκε="" σε="" θεραπεία="" με="" h2o2="">

3.4. Αυξημένη έκφραση των αντιοξειδωτικών ενζύμων σε κύτταρα MES23.5 με θεραπεία KTF

Η ανάλυση ELISA αποκάλυψε ότι τα ενδοκυτταρικά CAT, GPx-1 και GSH ρυθμίστηκαν προς τα κάτω μετά από θεραπεία 150 μΜ H2O2 σε κύτταρα MES23.5. Αξίζει να σημειωθεί ότι μετά τη θεραπεία του KTF αποκατέστησε την ενδοκυτταρική έκφραση CAT, GPx-1 και GSH. Η ανάλυση RT-PCR έδειξε ότι η θεραπεία με H2O2 μείωσε την έκφραση του mRNA CAT και GPx{10}}. ωστόσο, η θεραπεία με KTF αποκατέστησε τις εκφράσεις του mRNA CAT και GPx-1 σεMES23.5 κύτταρα. Η ανοσοκηλίδα με συγκεκριμένα αντισώματα επιβεβαίωσε επίσης ότι η έκφραση πρωτεΐνης CAT και GPx-1 σεMES23.5 κύτταραυπορυθμίστηκαν με τη θεραπεία με H2O2 και η θεραπεία με KTF ήταν σε θέση να αποκαταστήσει την έκφραση πρωτεΐνης CAT και GPx-1. Επιπλέον, έκφραση mRNA τουοξειδωτικόΗ πρωτεΐνη HO{0}} που ανταποκρίνεται στο στρες ανεστάλη επίσης μετά τη θεραπεία με H2O2 και στη συνέχεια αποκαταστάθηκε ακολουθώντας τη θεραπεία με KTF. Η ανοσοστύπωση απέδειξε επίσης ότι η έκφραση της πρωτεΐνης HO-1 μειώθηκε σημαντικά από το H2O2, αλλά η θεραπεία με KTF ήταν σε θέση να αποκαταστήσει την έκφραση της πρωτεΐνης HO{-1. Όπως αναμενόταν, η υψηλότερη συγκέντρωση KTF που χρησιμοποιήθηκε στην έρευνά μας έχει την καλύτερη επίδραση στην αποκατάσταση της έκφρασης CAT, GPx{-1, GSH και HO-1 (Εικόνες (Εικόνες 55 και και 6).6). Συνολικά, τα ληφθέντα αποτελέσματα καταδεικνύουν ότι η θεραπεία με KTF ρύθμισε σημαντικά τα αντιοξειδωτικά υποστρώματα στα κύτταρα MES23.3 που έλαβαν H2O2-.

Σχήμα 5 Επίδραση του KTF στο επίπεδο των ενδοκυτταρικών CAT, GPx-1 και GSH σε H2O2-που προκαλείταιMES23.5 κύτταρα. Το επίπεδο δραστηριότητας των ενδοκυτταρικών CAT, GPx{{0}} και GSH μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας κιτ ELISA. Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσος όρος ± SD σε τρία ανεξάρτητα πειράματα. #P < 0.05="" σε="" σύγκριση="" με="" την="" ομάδα="" ελέγχου.="" ∗p="">< 0,05="" σε="" σύγκριση="" με="" την="" ομάδα="" θεραπείας="">

Εικόνα 6 Το KTF αύξησε την έκφραση πρωτεΐνης και mRNA των αντιοξειδωτικών ενζύμων στο H2O2- που επάγεταιMES23.5 κύτταρα. (α) Οι εκφράσεις πρωτεΐνης των ΗΟ{{0}}, CAT και GPx-1 προσδιορίστηκαν με στύπωμα Western και ποσοτικοποιήθηκαν στο (γ). (β) Οι εκφράσεις mRNA των HO-1, CAT και GPx-1 προσδιορίστηκαν με RT-PCR και ποσοτικοποιήθηκαν στο (d). Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσος όρος ± SD σε τρία ανεξάρτητα πειράματα. #P < 0.05="" σε="" σύγκριση="" με="" την="" ομάδα="" ελέγχου.="" ∗p="">< 0,05="" σε="" σύγκριση="" με="" την="" ομάδα="" θεραπείας="">

4. Συζήτηση

Ως σημαντικό συστατικό του συστήματος οξειδοαναγωγής, το ROS παίζει σημαντικό ρόλο στη ρύθμιση της λειτουργίας των κυττάρων. Τα μέτρια επίπεδα ROS μπορεί να λειτουργήσουν ως σήματα για την προώθηση του πολλαπλασιασμού και της επιβίωσης των κυττάρων. Υπό φυσιολογικές συνθήκες, η ισορροπία μεταξύ της παραγωγής και της εξάλειψης των ROS διατηρεί τη σωστή λειτουργία του ευαίσθητου στην οξειδοαναγωγή συστήματος σηματοδότησης. Η οξειδοαναγωγική ομοιόσταση μπορεί να διαταραχθεί από την αύξηση της παραγωγής ROS ή τη μείωση της ικανότητας δέσμευσης ROS, οδηγώντας σε συνολική αύξηση τουοξειδωτικόστρες [17, 18], προκαλώντας στη συνέχεια μη αναστρέψιμη βλάβη της ενδοκυτταρικής δομής και προκαλώντας κυτταρικό θάνατο.

Η υψηλή κατανάλωση O2 στον εγκέφαλο οδηγεί στη συσσώρευση ROS. Έτσι, οι νευρώνες είναι ιδιαίτερα ευάλωτοι στην επίθεση τουοξειδωτικόστρες. Οι μεταθανάτιες έρευνες έχουν δείξει υπεροξείδωση λιπιδίων καιοξειδωτική βλάβηστα εγκεφαλικά κύτταρα σε ασθενείς με PD [19]. Οι αυξανόμενες μελέτες το επιβεβαιώνουνοξειδωτική βλάβηδιαδραματίζει κρίσιμο ρόλο στην παθογένεση των εκφυλιστικών ασθενειών των νευρώνων, όπως η AD, η PD, η HD και η ALS [18, 20]. Στην παρούσα μελέτη, παρατηρήθηκε σημαντική απώλεια βιωσιμότητας των κυττάρων στα ντοπαμινεργικά νευρωνικά κύτταρα MES23.5 μετά από έκθεση σε 50 μM H2O2 για 12 ώρες, 25 μM H2O2 για 24 ώρες ή 12,5 μM H2O2 για 48 ώρες. Όπως φαίνεται από την παρατήρηση μορφολογίας, τα κύτταρα που εκτέθηκαν 12 ώρες σε 150 μM H2O2 εμφάνισαν μια τυπική οξειδωτική βλάβη που περιελάμβανε πολλαπλά μεμβρανώδη κενοτόπια στο κυτταρόπλασμα, διάσπαση του ενδοπλασματικού δικτύου και του μιτοχονδρίου και συμπύκνωση ευχρωματίνης στον πυρήνα του κυττάρου.

Σύμφωνα με την κινεζική ιατρική θεωρία, η ανεπάρκεια τουνεφρόείναι ο κύριος παθολογικός μηχανισμός της Π.Δ. Τονώνοντας τονεφρόαποτελεί σημαντική στρατηγική στη θεραπεία της Π.Δ. Στην παρούσα μελέτη διαπιστώσαμε ότι το παραδοσιακότονωτικό των νεφρώνο τύπος KTF, ο οποίος αποτελείται από Cistanche, Epimedii και Polygonatum sibiricum, ενίσχυσε σημαντικά τη βιωσιμότητα των κυττάρων και την έκφραση της TH του H2O2-που υποβλήθηκε σε επεξεργασίαMES23.5 κύτταρα.

Η κυτταρική απόπτωση είναι ένας τρόπος προγραμματισμένου κυτταρικού θανάτου μετά από διάφορα ερεθίσματα που ενεργοποιούν είτε εξωγενείς είτε ενδογενείς οδούς. Οι ειδικές για το κυστεϊνυλοασπαρτικό πρωτεάσες (κασπάσες) διατηρούνται σε μεγάλο βαθμό στους πολυκύτταρους οργανισμούς και λειτουργούν ως κεντρικοί ρυθμιστές της απόπτωσης. Η ενεργοποίηση των κασπασών είναι ο κύριος άξονας όλων των συμβάντων απόπτωσης. Μεταξύ αυτών των κασπασών, η κασπάση 3 έχει αναγνωριστεί ως βασικός μεσολαβητής και δείκτης της κυτταρικής απόπτωσης. Όπως και άλλες κασπάσες, η κασπάση 3 υπάρχει συνήθως ως ανενεργό προένζυμο (προκασπάση 3). Μετά την πρωτεολυτική επεξεργασία, θα παράγει δύο υπομονάδες που μπορούν να διμεριστούν για να σχηματίσουν ενεργή κασπάση 3, προκαλώντας στη συνέχεια πολλές από τις βιοχημικές και βιοφυσικές αλλαγές για την πρόκληση απόπτωσης των κυττάρων [21]. Η παρούσα μελέτη μας αποκάλυψε ότι η θεραπεία με H2O2 ρύθμισε σημαντικά προς τα πάνω την κασπάση 3, αλλά αυτή η τάση αντιστράφηκε από τη θεραπεία με KTF σεMES23.5 κύτταρα, υποδεικνύοντας ότι το KTF μείωσε την κυτταρική απόπτωση των κυττάρων MES23.5 που έλαβαν H2O2-.

Τα αντιοξειδωτικά ένζυμα, όπως η υπεροξειδική δισμουτάση (SOD), η CAT, η GPx-1, η GSH και η HO-1, είναι σημαντικοί αμυντικοί μηχανισμοί των κυττάρων κατάοξειδωτικόστρες. Ως αντιοξειδωτικό ένζυμο, το SOD μπορεί να μετατρέψει τις ρίζες υπεροξειδίου σε υπεροξείδιο του υδρογόνου το οποίο στη συνέχεια μετατράπηκε σε H2O από το CAT και το GPx [22]. Η GSH είναι επίσης ένα σημαντικό αντιοξειδωτικό. Η καταλυτική μετατροπή της ανηγμένης γλουταθειόνης (GSH) σε οξειδωμένη γλουταθειόνη (GSSG) από το GPx είναι χρήσιμη για τη μετατροπή του H2O2 σε O2. Έχει αναφερθεί ότι η δραστηριότητα του αντιοξειδωτικού μειώθηκε σε ποντίκια μοντέλου PD [23-25]. Ως εκ τούτου, φάρμακα που ρυθμίζουν την έκφραση των ενζυματικών αντιοξειδωτικών μπορεί να χρησιμεύσουν ως πιθανοί υποψήφιοι για τη θεραπεία της PD. Τα δεδομένα μας έδειξαν ότι η θεραπεία με H2O2 κατέστειλε τα CAT, GPx, GSH και HO-1 σεMES23.5 κύτταρα, ενώ η θεραπεία με KTF σε διαφορετικές συγκεντρώσεις αποκατέστησε αποτελεσματικά την έκφραση των CAT, GPx, GSH και HO-1.

Συμπερασματικά, τα ευρήματά μας καταδεικνύουν ότι το παραδοσιακό κινέζικο βότανοτονωτικό των νεφρώνΤο σκεύασμα, το οποίο αποτελείται από Cistanche, Epimedii και Polygonatum sibiricum, έχει ισχυρή αντιοξειδωτική ικανότητα και σημαντική νευροπροστατευτική δράση. Αυτή η μελέτη παρέχει μια ένδειξη για την ανάπτυξη τουτονωτικό των νεφρώνως δυνητικός θεραπευτικός παράγοντας για την πρόληψη και τη θεραπεία της νόσου του Πάρκινσον.

Η τονωτική φόρμουλα νεφρών μπορεί να προστατεύσει την οξειδωτική βλάβη στα κύτταρα MES23.5

Ευχαριστίες

Αυτή η εργασία υποστηρίχθηκε από το Επιστημονικό Ταμείο της Εθνικής Επιτροπής Υγείας και Οικογενειακού Προγραμματισμού της Λαϊκής Δημοκρατίας της Κίνας (WKJ-FJ-38), το Ταμείο Ανάπτυξης Ολοκληρωμένης Ιατρικής του Chen Keji (CKJ2014012) και το Fund Of Key Disciplinary ( X2014010-σεισμός). Οι συγγραφείς εκφράζουν τις ειλικρινείς ευχαριστίες τους στη Miss Xin Pan για τη χρήσιμη βοήθειά της.

Ανταγωνιστικά Συμφέροντα

Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι η έρευνα διεξήχθη απουσία εμπορικών ή οικονομικών σχέσεων που θα μπορούσαν να ερμηνευθούν ως πιθανή σύγκρουση συμφερόντων.

Συνεισφορές Συγγραφέων

Ο Yihui Xu και ο Wei Lin μοιράζονται την ίδια συνεισφορά στο άρθρο. Ο Chuanshan Xu είναι ο αντίστοιχος συγγραφέας.

βιβλιογραφικές αναφορές

1. Fahn S., Cohen G. Η υπόθεση του οξειδωτικού στρες στη νόσο του Πάρκινσον: στοιχεία που την υποστηρίζουν. Annals of Neurology. 1992, 32(6):804–812. doi: 10.1002/ana.410320616. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

2. Jenner P., Olanow CWΟξειδωτικόστρες και την παθογένεια της νόσου του Πάρκινσον. Νευρολογία. 1996;47 (συμπλήρωμα 3): S161–S170. doi: 10.1212/wnl.47.6_suppl_3.161s. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

3. Akaneya Y., Takahashi Μ., Hatanaka Η. Εμπλοκή ελεύθερων ριζών σε MPP συν νευροτοξικότητα έναντι ντοπαμινεργικών νευρώνων αρουραίου σε καλλιέργεια. Επιστολές Νευροεπιστήμης. 1995, 193(1):53–56. doi: 10.1016/0304-3940(95){10}}Μ. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

4. Emerit J., Ideas M., Bricaire F. Νευροεκφυλιστικές ασθένειες καιοξειδωτικόστρες. Βιοϊατρική & Φαρμακοθεραπεία. 2004; 58 (1): 39–46. doi: 10.1016/j.biopha.2003.11.004. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

5. Κινεζική Επιτροπή Φαρμακοποιίας. Φαρμακοποιία της Λαϊκής Δημοκρατίας της Κίνας. Τομ. 1. Πεκίνο, Κίνα: People's Medical Publishing House; 2010. [Google Scholar]

6. Cai J., Tian Y., Lin R., Chen X., Liu Z., Xie J. Protective effect ofτονωτικό των νεφρώνΚινεζικό φυτικό παρασκεύασμα σε νευρώνες της μέλαινας ουσίας σε μοντέλο ποντικού της νόσου του Πάρκινσον. Έρευνα Νευρικής Αναγέννησης. 2012; 7 (6): 413-420. [Δωρεάν άρθρο PMC] [PubMed] [Google Scholar]

7. Li WW, Yang R., Cai DF Προστατευτικές επιδράσεις των ολικών γλυκοσιδών Cistanche σε έναν ντοπαμινεργικό νευρώνα σε μέλαινα ουσία ποντικών-μοντέλων της νόσου του Πάρκινσον. Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 2008;28(3):248–251. [PubMed] [Google Scholar]

8. Wei W., Jing C. Μια ανάλυση του προτύπου και του τύπου TCM για τη νόσο του Πάρκινσον. Περιοδικό Παραδοσιακής Κινεζικής Ιατρικής. 2013;54(20):1778–1782. [Μελετητής Google]

9. Tian Y., Cai J., Chen X. Protection ofτονωτικό των νεφρώνΚινεζικό βότανο στους ραβδωτούς νευρώνες της μέλαινας ποντίκια με νόσο του Πάρκινσον. Κινεζική Εφημερίδα Γεροντολογίας. 2011; 31 (3): 440-443. [Μελετητής Google]

10. Lin SG, Ye SF, Huang JM, et al. Πώς τα κινέζικα φάρμακα που τονώνουν τηννεφρόαναστέλλουν την απόπτωση των ντοπαμινεργικών νευρώνων; Έρευνα Νευρικής Αναγέννησης. 2013; 8(30):2820–2826. doi: 10.3969/j.issn.1673-5374.2013.30.004. [άρθρο δωρεάν PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

11. Wang Η., Li W.-W., Cai D.-F., Yang R. Προστατευτική επίδραση των εκχυλισμάτων Cistanche σε τραυματισμό που προκαλείται από MPP plus του κυτταρικού μοντέλου της νόσου του Parkinson. Περιοδικό Κινεζικής Ολοκληρωμένης Ιατρικής. 2007; 5 (4): 407-411. doi: 10.3736/jcim20070409. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

12. Geng X., Tian X., Tu P., Pu X. Νευροπροστατευτικά αποτελέσματα της εχινακοσίδης στο μοντέλο MPTP ποντικού της νόσου του Πάρκινσον. European Journal of Pharmacology. 2007; 564 (1–3): 66–74. doi: 10.1016/j.ejphar.2007.01.084. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

13. Tian X.-F., Pu X.-P. Οι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες από το Cistanches salsa αναστέλλουν την απόπτωση που προκαλείται από το ιόν 1-μεθυλ-4-φαινυλοπυριδίνιο στους νευρώνες. Περιοδικό Εθνοφαρμακολογίας. 2005; 97 (1): 59–63. doi: 10.1016/j.jep.2004.10.014. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

14. Geng X., Song L., Pu X., Tu P. Neuroprotective effect of phenylethanoid glycosides from Cistanches salsa έναντι 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,{{ 6}}επαγόμενη από τετραϋδροπυριδίνη (MPTP) ντοπαμινεργική τοξικότητα σε ποντικούς C57. Βιολογικό και Φαρμακευτικό Δελτίο. 2004;27(6):797–801. doi: 10.1248/bpb.27.797. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

15. Το Wong HS, Ko KM Herba Cistanches διεγείρει τον κύκλο της οξειδοαναγωγής της γλουταθειόνης από τα ενεργά είδη οξυγόνου που παράγονται από τη μιτοχονδριακή αναπνοή στα καρδιομυοκύτταρα H9c2. Φαρμακευτική Βιολογία. 2013; 51 (1): 64–73. doi: 10.3109/13880209.2012.710242. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

16. Wing Sze SC, Tong Y., Ng TB, Yin Cheng CL, Cheung HP Herba Epimedii: anti-οξειδωτικόιδιότητες και τις ιατρικές επιπτώσεις του. Μόρια. 2010; 15(11):7861–7870. doi: 10,3390/μόρια15117861. [άρθρο δωρεάν PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

17. Trachootham D., Lu W., Ogasawara ΜΑ, Valle NR-D., Huang P. Redox ρύθμιση της κυτταρικής επιβίωσης. Αντιοξειδωτικά και Οξειδοαναγωγική Σηματοδότηση. 2008, 10(8):1343–1374. doi: 10.1089/ars.2007.1957. [άρθρο δωρεάν PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

18. Moore DJ, West AB, Dawson VL, Dawson TM Molecular pathophysiology of Parkinson's disease. Annual Review of Neuroscience. 2005; 28:57–87. doi: 10.1146/annurev.neuro.28.061604.135718. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

19. Sian J., Dexter DT, Lees AJ, et αϊ. Μεταβολές στα επίπεδα γλουταθειόνης στη νόσο του Πάρκινσον και άλλες νευροεκφυλιστικές διαταραχές που επηρεάζουν τα βασικά γάγγλια. Annals of Neurology. 1994;36(3):348-355. doi: 10.1002/ana.410360305. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

20. Halliwell B., Gutteridge JMC Ο ρόλος των ελεύθερων ριζών στις ανθρώπινες ασθένειες: μια επισκόπηση. Μέθοδοι στην Ενζυμολογία. 1990, 186:1–85. [PubMed] [Google Scholar]

21. Venderova K., Park DS Προγραμματισμένος κυτταρικός θάνατος στη νόσο του Πάρκινσον. Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2012;2(8) doi: 10.1101/cshperspect.a009365.a009365 [άρθρο χωρίς PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

22. Fridovich I. Θεμελιώδεις πτυχές των ενεργών ειδών οξυγόνου, ή τι συμβαίνει με το οξυγόνο; Annals of the New York Academy of Sciences. 1999; 893:13-18. doi: 10.1111/j.1749-6632.1999.tb07814.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

23. Xiong Q., Kadota S., Tani T., Namba Τ. Αντιοξειδωτικά αποτελέσματα φαινυλαιθανοειδών από Cistanche deserticola. Βιολογικό και Φαρμακευτικό Δελτίο. 1996, 19(12):1580–1585. doi: 10.1248/bpb.19.1580. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

24. Koppula S., Kumar Η., More SV, Lim H.-W., Hong S.-M., Choi D.-K. Πρόσφατες ενημερώσεις στη ρύθμιση οξειδοαναγωγής και τα αποτελέσματα σάρωσης ελεύθερων ριζών από φυτικά προϊόντα σε πειραματικά μοντέλα της νόσου του Πάρκινσον. Μόρια. 2012; 17(10):11391–11420. doi: 10,3390/μόρια171011391. [άρθρο δωρεάν PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

25. Fang Z., Wang Y. Επίδραση της ισατίνης στις δραστηριότητες της αντιοξειδάσης σε ποντικούς μοντέλου PD. Φαρμακείο Κίνας. 2008;19(22):1696–1697. [Μελετητής Google]