Παράγοντας που προκαλείται από υποξία από περικύτταρα νεφρού ρυθμίζει την ερυθροποίηση αλλά όχι την ίνωση των νεφρών
Mar 13, 2022
Επικοινωνία:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Szu-Yu Pan1,2,3 et al
Οι αναστολείς του ενζύμου τομέα της προλυλ υδροξυλάσης (PHD) είναι αποτελεσματικοί στη θεραπεία τηςχρόνια νεφρική νόσος(ΧΝΝ)-σχετιζόμενη αναιμία με σταθεροποίηση του επαγόμενου από υποξία παράγοντα (HIF), αυξάνοντας έτσι την ερυθροποιητίνη και κατά συνέπεια την ερυθροποίηση. Ωστόσο, η ανησυχία για την εξέλιξη της ΧΝΝ πρέπει να αντιμετωπιστεί σε κλινικές δοκιμές. Αν και προκλινικές μελέτες έδειξαν αντιφλεγμονώδη δράση σενεφρόμοντέλα ασθενειών, η επίδραση των αναστολέων PHD σενεφρόίνωσηήταν ασυνεπής πιθανώς επειδή οι επιδράσεις του HIF εξαρτώνται από τον τύπο κυττάρου και το περιβάλλον. Ο δήμαρχοςνεφρόΤα κύτταρα που παράγουν ερυθροποιητίνη είναι περικύτταρα που παράγουν ερυθροποιητίνη μέσω μεταγραφής γονιδίου που εξαρτάται από το HIF-2. Η ανησυχία για την επίδραση του HIF στα περικύτταρα στανεφρόίνωσηπροκύπτει από το γεγονός ότι τα περικύτταρα είναι τα κύρια πρόδρομα κύτταρα των μυοϊνοβλαστών στη ΧΝΝ. Δεδομένου ότι τα κύτταρα που εκφράζουν Gli1 πληρούν τα μορφολογικά και ανατομικά κριτήρια για τα περικύτταρα, προκαλέσαμε σταθεροποίηση ή νοκ-άουτ ειδική για κύτταρα Gli1 plus για να μελετήσουμε την επίδραση του HIF στα περικύτταρανεφρόπαθολογία ποντικών με ή χωρίς ινωτική βλάβη που προκαλείται από μονόπλευρη απόφραξη του ουρητήρα. Σε σύγκριση με τους συγγενείς μάρτυρες, τα ποντίκια με ειδική για περικύτταρα σταθεροποίηση HIF λόγω πρωτεΐνης von Hippel-Lindau ή PHD2 νοκ-άουτ εμφάνισαν αυξημένη ερυθροποιητίνη ορού και πολυκυτταραιμία παρά μια ευδιάκριτη διαφορά σενεφρόίνωση. Σε σύγκριση με το Gli1συνπερικύτταρα ταξινομημένα από συγγενείς μάρτυρες, Gli1συνπερικύτταρα που ταξινομήθηκαν από ποντίκια PHD2 νοκ-άουτ εμφάνισαν αυξημένη έκφραση γονιδίου ερυθροποιητίνης παρά ευδιάκριτες αλλαγές στην έκφραση Col1a1 ή Acta2. Επιπλέον, το ειδικό για περικύτταρο νοκ-άουτ του HIF-1a ή του HIF-2a δεν επηρέασενεφρόίνωση. Έτσι, η μελέτη μας υποστηρίζει την απουσία αρνητικών επιδράσεων των αναστολέων PHDνεφρόίνωσηποντικών παρά τη σταθεροποίηση του HIF στα περικύτταρα.
ΛΕΞΕΙΣ ΚΛΕΙΔΙΑ: ερυθροποιητίνη;ίνωση; παράγοντας που προκαλείται από υποξία. περικύτταρο
Cistancheείναι καλό γιανεφρώνλειτουργία
Μεταφραστική δήλωση
Οι αναστολείς του ενζύμου τομέα της προλυλ υδροξυλάσης (PHD) είναι αποτελεσματικοί στη θεραπεία της αναιμίας σεχρόνιοςνεφρόνόσος(ΧΝΝ) μέσω της σταθεροποίησης του επαγόμενου από την υποξία παράγοντα (HIF), αυξάνοντας έτσι την ερυθροποιητίνη (EPO) και την ερυθροποίηση. Τα νεφρικά περικύτταρα παράγουν EPO μέσω HIF-2a στη φυσιολογική φυσιολογία, αλλά διαφοροποιούνται σε μυοϊνοβλάστες που παράγουν ουλές στη ΧΝΝ. Δεν είναι σαφές εάν η έκφραση HIF στα νεφρικά περικύτταρα επηρεάζεινεφρώνίνωση. Με προκλινικά μοντέλα ποντικού χειρισμού HIF και νεφρικής ίνωσης, δείχνουμε ότι ο ειδικός χειρισμός HIF Gli1 συν περικύτταρα επηρεάζει την παραγωγή και την ερυθροποίηση EPO αλλά όχινεφρική ίνωση. Η μελέτη μας υποστηρίζει την απουσία αρνητικών επιδράσεων των αναστολέων PHD στη νεφρική ίνωση.
Η κύρια θεραπεία για την αναιμία σε ασθενείς μεχρόνιοςνεφρόνόσος(ΧΝΝ) είναι παράγοντες διέγερσης της ερυθροποίησης και συμπληρώματα σιδήρου. 1,2 Πρόσφατα, ο αναστολέας του ενζύμου της περιοχής της προλυλ υδροξυλάσης (PHD) αναδεικνύεται ως ένας πολλά υποσχόμενος θεραπευτικός παράγοντας για την αναιμία που σχετίζεται με ΧΝΝ, κυρίως μέσω της σταθεροποίησης του επαγόμενου από την υποξία παράγοντα (HIF) και συνεπώς της αύξησης της παραγωγής ερυθροποιητίνης (EPO).3-5 Η κλινική Η εφαρμογή αναστολέων PHD ή σταθεροποιητών HIF σε ασθενείς με ΧΝΝ είναι επικείμενη στο άμεσο μέλλον εάν οι ανησυχίες σχετικά με πιθανή αγγειογένεση, ανάπτυξη όγκου, μη φυσιολογικό μεταβολισμό γλυκόζης και επιταχυνόμενη μείωση τηςνεφρόλειτουργία πρέπει να αντιμετωπιστεί στις κλινικές δοκιμές.
Το HIF είναι ο πιο σημαντικός γνωστός κυτταρικός μηχανισμός ανίχνευσης οξυγόνου.6,7 Το λειτουργικό HIF αποτελείται από α και β υπομονάδες. Το HIF-a είναι μια ασταθής υπομονάδα στο οξυγόνο που αποικοδομείται ταχέως σε μια νορμοξική κατάσταση παρουσία συμπαραγόντων. Το HIF-b δεν ρυθμίζεται από την τάση οξυγόνου. Η αποικοδόμηση του HIF-a προηγείται από υδροξυλίωση προλίνης και πολυουβικουϊτινίωση. Η υδροξυλίωση της προλίνης καταλύεται με PHD παρουσία οξυγόνου, σιδήρου και 2-οξογλουταρικού ως συμπαράγοντες. Η πολυουβικουϊτινίωση στη συνέχεια καταλύεται από μια λιγκάση ουβικιτίνης Ε3 που αποτελείται από σύμπλοκο πρωτεΐνης von Hippel Lindau (pVHL)-Elongin BC-CUL2. Η απαίτηση σιδήρου, PHD και pVHL για την αποικοδόμηση του HIF καθιστά δυνατή τη σταθεροποίηση του HIF στη νορμοξική κατάσταση με την αναστολή ή τη μείωση οποιουδήποτε από αυτά τα βασικά συστατικά.
Τα νεφρικά περικύτταρα είναι ενσωματωμένα στη μικροαγγειακή βασική μεμβράνη και σε στενή επαφή με τα ενδοθηλιακά κύτταρα για να υποστηρίξουν τη μικροαγγείωση και να ρυθμίσουν τη ροή του αίματος.8–13 Έχουμε αναφέρει ότι τα νεφρικά περικύτταρα είναι κύτταρα που παράγουν νεφρική EPO (REPCs) που παράγουν EPO μέσω HIF{{3 }}α-εξαρτώμενη γονιδιακή μεταγραφή που προκαλείται από αναιμία ή υποξία.14 Τα περικύτταρα έχουν αποδειχθεί ως η κύρια πηγή μυοϊνοβλαστών που παράγουν ουλές στη ΧΝΝ,8,10,11,15,16, εύρημα που υποστηρίζεται από άλλες ανεξάρτητες αναφορές.17, 18 Αν και η μετάβαση στους μυοϊνοβλάστες οδηγεί στην καταστολή της μεταγραφής της Epo, η υπερέκφραση του HIF-2α αποκαθιστά εν μέρει την παραγωγή EPO στους μυοϊνοβλάστες.14,17
Οι μελέτες μας το έχουν δείξεινεφρική ίνωσημπορεί να εξασθενήσει με διακοπή της μετάβασης περικυττάρων-μυοϊνοβλαστών μέσω φαρμακολογικού αποκλεισμού του μετασχηματιστικού αυξητικού παράγοντα-b, 19 αυξητικού παράγοντα που προέρχεται από αιμοπετάλια, 20 αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα, 21 ή οδών WNT/b-κατενίνης.22
Όσον αφορά την ανησυχία για επιταχυνόμενη πτώση τωννεφρόλειτουργία σε ασθενείς υπό θεραπεία με αναστολείς PHD, λίγα είναι γνωστά για τις επιδράσεις της δραστηριότητας του HIF σε περικύτταρα ή μυοϊνοβλάστες σενεφρική ίνωση.23 Αντίθετα, οι επιπτώσεις της υπερέκφρασης ή νοκ-άουτ του HIFνεφρική ίνωσηέχουν μελετηθεί εκτενώς, είτε μη εκλεκτικά24-27 είτε επιλεκτικά σε σωληναριακά κύτταρα, 28,29 ενδοθηλιακά κύτταρα,30 και ποδοκύτταρα.31,32 Ωστόσο, τα αποτελέσματα ήταν ασυνεπή πιθανώς επειδή οι επιδράσεις του HIF εξαρτώνται από τον κυτταρικό τύπο και το περιβάλλον.
Μελέτες in vitro που χρησιμοποιούν απομονωμένους ανθρώπινους νεφρικούς ινοβλάστες33 και νεφρικά μυελικά διάμεση κύτταρα επίμυος34 υπέδειξαν έναν πλεονεκτικό ρόλο του HIF-1a. Ωστόσο, οι Souma et al.17 ανέφεραν ότι το ταυτόχρονο νοκ-άουτ των PHD1, PHD2 και PHD3 σε REPC ποντικών Tg(Epo-Cre) που εκφράζουν την ανασυνδυάση Cre υπό τον έλεγχο του προαγωγέα Epo δεν επηρεάζεινεφρική ίνωσηστο μοντέλο της μονόπλευρης απόφραξης του ουρητήρα (UUO). Ωστόσο, η έκφραση της νεφρικής Epo είναι χαμηλή και το μέγεθος της δεξαμενής των REPC είναι μικρό σε σταθερή κατάσταση χωρίς υποξία ή αναιμία,35 υποδηλώνοντας ότι το διαγονίδιο Epo-Cre ορίζει μόνο ένα μικρό κλάσμα των συνολικών REPC. Πρόσφατα, τα κύτταρα που εκφράζουν το νεφρικό Gli{2}}είναι περικύτταρα και διαφοροποιούνται σε μυοϊνοβλάστεςνεφρότραυματισμός.11,36 Η κατάλυση των κυττάρων Gli1 plus βελτιώνει την επαγόμενη από την UUOνεφρώνίνωση.11 Εδώ χρησιμοποιήσαμε ποντίκια με Cre recombinase υπό τον έλεγχο του προαγωγέα/ενισχυτή Gli1 για να μελετήσουμε τις επιδράσεις της σταθεροποίησης του HIF ειδικού για τα περικύτταρα ή του νοκ-άουτ σεrεναλιακή ίνωση.
το cistanche είναι καλό γιανεφρό
ΜΕΘΟΔΟΙ
Ποντίκια
Gli1CreERT2/ συν, Tg(UBC-CreERT2), VhlF/F,ROSA26fstdΝτομάτα/fstdΝτομάτα, Hif1aF/Fκαι Hif2aF/F ποντίκια αγοράστηκαν από το Jackson Laboratory (Bar Harbor, ΜΕ). Egln1F/F Τα ποντίκια παρασχέθηκαν ευγενικά από τον καθηγητή Guo-Hua Fong (Κέντρο Υγείας του Πανεπιστημίου του Κονέκτικατ, Farmington, CT). Όλες οι μελέτες διεξήχθησαν σύμφωνα με ένα πρωτόκολλο εγκεκριμένο από την Επιτροπή Ιδρυματικής Φροντίδας και Χρήσης Ζώων, Εθνικό Ιατρικό Πανεπιστήμιο της Ταϊβάν (IACUC 20160499).
Μονόπλευρη απόφραξη του ουρητήρα
Η διαδικασία είχε αναφερθεί λεπτομερώς σε προηγούμενη μελέτη.14 Εν ολίγοις, σε ενήλικα ποντίκια ηλικίας 7 έως 9 εβδομάδων υπό αναισθησία με κεταμίνη/ξυλαζίνη (κεταμίνη 100 mg/kg, ξυλαζίνη 10 mg/kg), το αριστερό ουρητήρες των ποντικών εκτέθηκαν και απολινώθηκαν με νάιλον ράμμα μέσω μιας τομής στην αριστερή πλευρά. Η ημερομηνία της χειρουργικής επέμβασης UUO προσδιορίστηκε ως η ημέρα 0 του πειράματος.
Στατιστικές αναλύσεις
Τα δεδομένα εκφράστηκαν ως μέσος όροςσυνSD. Διεξήχθησαν στατιστικές αναλύσεις χρησιμοποιώντας GraphPad Prism (GraphPad Software, San Diego, CA). Η στατιστική σημασία προσδιορίστηκε με το Student t-test ή το Mann-Whitney U test, όπως φαίνεται στις λεζάντες.
Συμπληρωματικές μέθοδοι
Πλήρεις μέθοδοι που περιλαμβάνουν ποντίκια, UUO, χορήγηση ταμοξιφαίνης, ποσοτική αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης, ανοσοστύπωση, ανοσοϊστοχημεία, υβριδισμό RNA in situ, μικροσκοπία, κυτταρομετρία ροής και απομόνωση νεφρικών κυττάρων Gli1 plus περιλαμβάνονται στις Συμπληρωματικές Μέθοδοι.
ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ
Αυξημένη παραγωγή EPO και ερυθροποίηση σε ποντίκια με Gli1 συν ειδική για περικύτταρα PHD2 knockout
Για να αποδείξουμε ότι τα περικύτταρα Gli1 συν παρήγαγαν EPO πριν ξεκινήσουμε να μελετήσουμε την επίδραση του χειρισμού του HIF ειδικού για περικύτταρα στονεφρική ίνωση, δημιουργήσαμε το Gli1CreERT2/ συν; Egln1F/Fποντίκια να προκαλέσουν PHD2 νοκ-άουτ σε Gli1 συν περικύτταρα υπό όρους (Εικόνα 1α). Σε σύγκριση με τη γέννα Egln1F/Fποντίκια, Gli1CreERT2/ συν; Egln1F/Fτα ποντίκια έδειξαν υψηλότερο επίπεδο EPO ορού (Εικόνα 1β), μεγαλύτερο βάρος σπλήνας (Εικόνα 1γ), περισσότερο TER-119συνερυθροειδής γενεαλογία στα σπληνοκύτταρα την ημέρα 14 μετά την ταμοξιφαίνη (Εικόνα 1δ), αλλά παρόμοια αλλαγή σωματικού βάρους μετά τη χορήγηση ταμοξιφαίνης (Συμπληρωματικό Σχήμα S1A). Ο αιματοκρίτης (Hct) ήταν υψηλότερος στο Gli1CreERT2/ συν; Egln1F/Fποντίκια την ημέρα 21 (Εικόνα 1e). Αναλύσαμε νεφρική Epo mRNA και περιφερικό αίμα 14 ημέρες μετά την ταμοξιφαίνη. Σε σύγκριση με τη γέννα Egln1F/Fποντίκια, Gli1CreERT2/ συν; Egln1F/FΤα ποντίκια είχαν αυξημένη έκφραση νεφρικής Epo (Εικόνα 1f) και περιφερειακά δικτυοερυθρά αιμοσφαίρια (Εικόνα 1g), ενώ ο αριθμός των περιφερικών λευκών αιμοσφαιρίων και ο αριθμός των αιμοπεταλίων δεν ήταν διαφορετικοί (Συμπληρωματικό Σχήμα S1B και C). Για να ταυτοποιήσουμε τα νεφρικά κύτταρα που είναι υπεύθυνα για την έκφραση της Epo, πραγματοποιήσαμε in situ υβριδισμό της Epo στιςνεφρότμήματα από τα Egln1F/F και Gli1CreERT2/συν; Egln1F/Fποντίκια (Συμπληρωματικό Σχήμα S2A–F). Αυξημένα ενδιάμεσα κύτταρα που εκφράζουν Epo θα μπορούσαν να εντοπιστούν κυρίως στη φλοιομυελική συμβολή και σε μικρότερο βαθμό στον έσω μυελό και τον φλοιό στο Gli1CreERT2/συν; Egln1F/Fποντίκια. Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι το Gli1 συν το ειδικό για περικύτταρα PHD2 knockout προκάλεσε παραγωγή νεφρικής EPO και ερυθροποίηση.
Για να προσδιοριστεί εάν το PHD2 ρυθμίζει την παραγωγή EPO σε κυτταρικούς τύπους και όργανα άλλα από τα περικύτταρα στονεφρό, δημιουργήσαμε Tg(UBC-CreERT2); Egln1F/Fποντίκια για να προκαλέσουν παγκόσμιο νοκ-άουτ PHD2 (Συμπληρωματικό Σχήμα S3A). Μετά τη χορήγηση ταμοξιφαίνης, νοκ-άουτ του γονιδίου Egln1 στονεφρό, το ήπαρ, ο σπλήνας, η καρδιά και ο πνεύμονας θα μπορούσαν να ανιχνευθούν (Συμπληρωματικό Σχήμα S4). Στονεφρό, η έκφραση του mRNA Egln1 μειώθηκε στο 4 τοις εκατό, υποδεικνύοντας υψηλή αποτελεσματικότητα του PHD2 knockout (Συμπληρωματικό Σχήμα S3B). Όπως και στο Gli1CreERT2/ συν; Egln1F/Fποντίκια, Tg(UBC-CreERT2); Egln1F/FΤα ποντίκια εμφάνισαν προοδευτική αύξηση της Hct σε σύγκριση με την γέννα Egln1F/Fποντίκια (Συμπληρωματικό Σχήμα S3C). Συγκεκριμένα, Tg(UBC-CreERT2); Egln1F/Fποντίκια εμφάνισαν μείωση στο σωματικό βάρος (Συμπληρωματικό Σχήμα S3D). Αξιοσημείωτα υψηλό επίπεδο EPO ορού, περίπου 130,000 pg/ml, βρέθηκε στο Tg(UBC-CreERT2). Egln1F/F ποντίκια, το οποίο ήταν πολύ υψηλότερο από αυτό που επιτεύχθηκε με φλεβοτομή (λιγότερο από 5,000 pg/ml) σε ποντίκια άγριου τύπου (Συμπληρωματικό Σχήμα S3E). Για να προσδιορίσουμε την πηγή της EPO στον ορό, ελέγξαμε τα επίπεδα mRNA της Epo σε διαφορετικά όργανα από το Tg(UBC-CreERT2). Egln1F/F,και ποντίκια ελέγχου γέννας την ημέρα 15. Σε ποντικούς ελέγχου γέννας, το Epo mRNA δεν ανιχνεύτηκε σχεδόν σε κανένα όργανο. Σε 5 κύρια όργανα (νεφρό, ήπαρ, πνεύμονας, καρδιά, σπλήνα) του Tg(UBC-CreERT2); Egln1F/F ποντίκια, μόνο τονεφρόέδειξε αξιοσημείωτη αύξηση του mRNA της Epo, υποδηλώνοντας τηννεφρόως κύρια πηγή EPO ορού (Συμπληρωματικό Σχήμα S3F και G). Ιη situ υβριδισμός του mRNA Epo σενεφρόΟι τομές αποκάλυψαν ότι τα νεφρικά κύτταρα με έκφραση Epo ήταν διάμεση κύτταρα με μορφολογία περικυττάρων σε Tg(UBC-CreERT2). Egln1F/Fποντίκια (Συμπληρωματικό Σχήμα S5). Επομένως, αυτά τα δεδομένα επιβεβαίωσαν ότι τα νεφρικά Gli1 συν περικύτταρα παρήγαγαν ΕΡΟ στο PHD2 knockout, αυξάνοντας έτσι την ερυθροποίηση και την Hct.
Το Gli1 plus το ειδικό για περικύτταρο pVHL knockout οδηγεί σε πολυκυτταραιμία αλλά δεν έχει καμία επίδραση στη νεφρική ίνωση
Σε συμφωνία με προηγούμενες αναφορές, 11,36 αυξήθηκε το Gli1συνπερικύτταρα εμφανίστηκαν στη φλοιομυελική συμβολή και στο μυελό μετά από τραυματισμό UUO στο Gli1CreERT2/συν; ROSA26fstdTomato/ fstdTomatoποντίκια αναφοράς (Συμπληρωματικό Σχήμα S6), υποδηλώνοντας ότι τα περικύτταρα Gli1 συν πολλαπλασιάζονται και συμβάλλουν σημαντικά στους μυοϊνοβλάστες κατά τη διάρκειανεφρική ίνωση.Ως εκ τούτου, μελετήσαμε την επίδραση της σταθεροποίησης του HIF ή του νοκ-άουτ στο Gli1συνπερικύτταρα επάνωνεφρική ίνωση.
Χρησιμοποιήσαμε ποντίκια με Gli1συνΕιδικό για περικύτταρα νοκ-άουτ pVHL, όχι PHD2 λόγω πιθανού πλεονασμού σε 3 διαφορετικά PHD. Για τη διερεύνηση της μακροπρόθεσμης επίδρασης της ειδικής για περικύτταρα σταθεροποίησης HIF σενεφράσε ποντίκια χωρίς ΧΝΝ, Gli1CreERT2/συν; VhlF/Fποντίκια, και VhlF/Fστα νεογνά χορηγήθηκε ταμοξιφαίνη σε ηλικία 6 εβδομάδων και στη συνέχεια παρατηρήθηκαν μέχρι την ηλικία των 30 εβδομάδων (Συμπληρωματικό Σχήμα S7A). Ένας απροσδόκητος θάνατος στο Gli1CreERT2/συν; VhlF/Fποντίκια σημειώθηκαν σε ηλικία 25 εβδομάδων (ποσοστό θνησιμότητας 14,3%), αλλά δεν υπήρξαν θάνατοι στο VhlF/Fσυγγενείς. Αδυναμία και μειωμένη αύξηση σωματικού βάρους βρέθηκαν στο Gli1CreERT2/ συν; VhlF/Fποντίκια ήδη από την ηλικία των 16 εβδομάδων (Συμπληρωματικό Σχήμα S7B). Λόγω αδυνατίσματος και απροσδόκητου θανάτου, μερικά ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία πριν από την ηλικία των 30 εβδομάδων. Η παθολογία αποκάλυψε διάχυτη σοβαρή ερυθροποίηση στον σπλήνα και συμφόρηση ερυθρών αιμοσφαιρίων στο ήπαρ, τους πνεύμονες καινεφρόσε ηλικία 18 εβδομάδων (Συμπληρωματικό Σχήμα S8). Εκτός από συμφόρηση ερυθρών αιμοσφαιρίων, δεν διακρίνεταιίνωσηπαρατηρήθηκε σε κύρια όργανα συμπεριλαμβανομένωννεφρά. Τα επίπεδα Hct και EPO ορού αυξήθηκαν σε 87 συν -2,6 τοις εκατό και 1604 συν -141 pg/ml σε ηλικία 30 εβδομάδων (δηλαδή, 24 εβδομάδες μετά την ταμοξιφαίνη) (Συμπληρωματικό Σχήμα S9A και B)
Επειδή δεν διακρίνεταινεφρική ίνωσησε ποντίκια με Gli1 συν ειδικό για περικύτταρο pVHL knockout, προκαλέσαμε UUO σε ποντίκια και αξιολογήσαμε τη σοβαρότητα της νεφρικής ίνωσης 7 ή 14 ημέρες αργότερα (Εικόνα 2α). Διαγραμμένα αλληλόμορφα Vhl στο Gli1CreERT2/þ; VhlF/Fποντίκια εντοπίστηκαν σενεφρόγονιδιωματικό DNA με αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης, υποδεικνύοντας εξουδετέρωση του pVHL στα περικύτταρα (Συμπληρωματικό Σχήμα S10). Η Hct αυξήθηκε στο Gli1CreERT2/ συν; VhlF/Fποντίκια ακόμη και μετά από χειρουργική επέμβαση UUO (Εικόνα 2β). Αξιοσημείωτα, η έκφραση του mRNA της ΕΡΟ αυξήθηκε τόσο στο ετερόπλευρο όσο και στο UUOνεφράτου Gli1CreERT2/ συν; VhlF/Fποντίκια (Εικόνα 2γ), υποδηλώνοντας ότι η σταθεροποίηση του HIF θα μπορούσε να ενεργοποιήσει τη μεταγραφή Epo τόσο στα περικύτταρα όσο και στους μυοϊνοβλάστες. Ωστόσο, καμία διαφορά σενεφρική ίνωσημεταξύ Gli1CreERT2/ συν; VhlF/Fκαι συγγενής VhlF/F ποντίκια θα μπορούσαν να ανιχνευθούν, όπως μετρήθηκε από την περιοχή με κόκκινο χρώμα του picrosirius (Εικόνες 2d και 3a και b) και την έκφραση του mRNA Col1a1 (Εικόνα 2e) στονεφρό. Επιπλέον, τα επίπεδα mRNA και πρωτεΐνης της ακτίνης α-λείου μυός δεν ήταν διαφορετικά σενεφρά(Εικόνα 2στ και ζ και Συμπληρωματικό Σχήμα S11). Για να επιβεβαιώσουμε ότι οι μυοϊνοβλάστες διατήρησαν την ικανότητα έκφρασης της Epo μετά το knockout pVHL, πραγματοποιήσαμε in situ υβριδισμό των Epo και Acta2 σενεφρότμήματα (Συμπληρωματικά Σχήματα S12 και S13). Η νεφρική έκφραση Acta2 αυξήθηκε δραστικά και συγκρίσιμα μετά από τραυματισμό UUO και στα δύο Gli1CreERT2/ συν; VhlF/Fκαι VhlF/Fποντίκια. Περισσότερα διάμεση κύτταρα που εκφράζουν Epo μπορούν να παρατηρηθούν στο Gli1CreERT2/ συν; VhlF/Fποντίκια παρά σε VhlF/F ποντίκια, ανεξάρτητα από την παρουσία τραυματισμού UUO. Επιπλέον, κύτταρα με ταυτόχρονη έκφραση Acta2 και Epo μπορούσαν να ταυτοποιηθούν σε UUOνεφρόαπό το Gli1CreERT2/ συν; VhlF/Fποντίκια αλλά όχι VhlF/Fποντίκια. Στην πραγματικότητα, δύσκολα μπορούσαμε να αναγνωρίσουμε κύτταρα που εκφράζουν Epo στο UUOνεφρόαπό VhlF/Fποντίκια. Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι το Gli1 συν το περιορισμένο σε περικύτταρα pVHL νοκ-άουτ προώθησε την έκφραση της Epo αλλά όχι τη διαφοροποίηση των μυοϊνοβλαστών ή την παραγωγή κολλαγόνου ακόμη και μετά από τραυματισμό UUO.
Επειδή ο τραυματισμός UUO έχει ως αποτέλεσμα βλάβη των εγγύς σωληναριακών κυττάρων και στρατολόγηση μακροφάγων,37 επίπεδα mRNA του Havcr1 (κωδικοποιούννεφρόμόριο τραυματισμού-1) (Εικόνα 4α) και Adgre1 (που κωδικοποιεί δομοστοιχείο τύπου βλεννίνης-όπως ορμονικό υποδοχέα παρόμοιας με ενδοθηλιακό αυξητικό παράγοντα, γνωστό και ως F4/80) (Εικόνα 4β) αυξήθηκε σε UUOνεφρά, αλλά δεν μπόρεσε να εντοπιστεί διαφορά μεταξύ του Gli1CreERT2/ συν; VhlF/Fκαι συγγενής VhlF/F ποντίκια. Τα επίπεδα mRNA των Vegfa, Hmox1, Egln1 και Egln3 (που κωδικοποιεί αυξητικό παράγοντα αγγειακών ενδοθηλιακών κυττάρων-Α, οξυγενάση αίμης-1, PHD2 και PHD3, αντίστοιχα) σενεφράδεν άλλαξαν (Εικόνα 4γ–στ), πιθανώς αντανακλώντας ότι αυτές οι μεταγραφές δεν παρήχθησαν κατά κύριο λόγο από τα περικύτταρα Gli1 συν ή δεν άλλαξαν μετά το νοκ-άουτ VHL με περιορισμό Gli1 συν περικύτταρα. Αξιολογήσαμε τη σωληναριδική διάμεση βλάβη σε βαφή με περιοδικό οξύ – Schiffνεφρόενότητες και δεν εντοπίστηκε διαφορά μεταξύ του Gli1-CreERT2/ συν; VhlF/F,και συγγενής VhlF/Fποντίκια (Εικόνες 4g και 5α και β). Επειδή η ταμοξιφαίνη αναφέρεται ότι εξασθενείίνωση,38,39 παρατείναμε την περίοδο έκπλυσης μεταξύ της τελευταίας χορήγησης ταμοξιφαίνης και της χειρουργικής επέμβασης UUO από 2 εβδομάδες σε 4 εβδομάδες (Συμπληρωματικό Σχήμα S14A). Και πάλι, δεν εντοπίστηκε διαφορά μεταξύ του Gli1CreERT2/ συν; VhlF/F και συγγενής VhlF/F ποντίκια (Συμπληρωματικό Σχήμα S14B–E). Αυτά τα ευρήματα έδειξαν ότι το Gli1 συν περικύτταρο ειδικό pVHL knockout οδηγεί σε παραγωγή EPO και πολυκυτταραιμία, αλλά δεν έχει καμία επίδραση στηννεφρώνίνωση.
το cistanche είναι καλό γιανεφρό
Το Gli1 plus το ειδικό για περικύτταρα PHD2 knockout αυξάνει την παραγωγή EPO αλλά όχι την παραγωγή κολλαγόνου ή τη διαφοροποίηση των μυοϊνοβλαστών
Για να επιβεβαιώσουμε τα αποτελέσματα της σταθεροποίησης του HIF στα περικύτταρα Gli1 συν σε κυτταρικό επίπεδο, ταξινομήσαμε τα κύτταρα tdTomato plus από τονεφράτου Gli1CreERT2/ συν; ROSA26fstdΝτομάτα/fstdΝτομάτακαι Gli1CreERT2/ συν; Egln1F/F; ROSA26fstdΝτομάτα/fstdΝτομάταποντίκια μετά από τραυματισμό UUO (Συμπληρωματικά Σχήματα S15 και S16). Κάτω από μικροσκοπική εξέταση, τα ταξινομημένα κύτταρα εξέπεμψαν πορτοκαλοκόκκινο φθορισμό κατά τη διέγερση (Συμπληρωματικό Σχήμα S17A-C). Σε σύγκριση με αυτά της Gli1CreERT2/ συν; ROSA26fstdΝτομάτα/fstdΝτομάταποντίκια, το επίπεδο Egln1 mRNA σε tdTomato συν κύτταρα ταξινομημένα από ετερόπλευρα και UUOνεφράτου Gli1CreERT2/ συν; Egln1F/F; ROSA26fstdΝτομάτα/fstdΝτομάταποντίκια 7 ημέρες μετά τον τραυματισμό UUO μειώθηκαν σε 46 τοις εκατό και 33 τοις εκατό, αντίστοιχα (Συμπληρωματικό Σχήμα S17D και E).
Αναλύσαμε τα επίπεδα mRNA των Epo, Col1a1, Col3a1 και Acta2 στο ταξινομημένο tdTomato συν Gli1 συν περικύτταρα από το Gli1CreERT2/ συνROSA26fstdΝτομάτα/fstdΝτομάτακαι Gli1CreERT2/ συν; Egln1F/F; ROSA26fstdΝτομάτα/fstdΝτομάταποντίκια. Σε συμφωνία με τα αποτελέσματα που ελήφθησαν από ποντικούς με Gli1 συν περικύτταρο ειδικό pVHL knockout, το PHD2 knockout σε Gli1 συν περικύτταρα οδήγησε σε αυξημένη έκφραση Epo, αλλά δεν είχε καμία επίδραση στην έκφραση των Col1a1, Col3a1 και Acta2 σε κυτταρικό επίπεδο (Εικόνα 6). , επιβεβαιώνοντας την ουδέτερη επίδραση της σταθεροποίησης του HIF στις προϊβρωτικές ιδιότητες των περικυττάρων/μυοϊνοβλαστών.
Το νοκ-άουτ HIF του ειδικού για περικύτταρα Gli1þ δεν επηρεάζει τη νεφρική ίνωση
Επειδή αυτά τα πειράματα επιβεβαίωσαν την ουδέτερη επίδραση της σταθεροποίησης του HIF στις προϊβρωτικές ιδιότητες των περικυττάρων/μυοϊνοβλαστών, δημιουργήσαμε το Gli1CreERT2/ plus. Hif1aF/F; Hif2aF/F ποντίκια για να μελετήσουν την επίδραση του HIF knockout σε περικύτταρα/μυοϊνοβλάστες σενεφρική ίνωση(Εικόνα 7α). Διαγραφή Hif1a και Hif2a στονεφρόμπορούσε να εντοπιστεί σενεφρόγονιδιωματικό DNA μετά από χορήγηση ταμοξιφαίνης (Συμπληρωματικό Σχήμα S18). Σε σύγκριση με τον έλεγχο απορριμμάτων, Gli1CreERT2/ συν; Hif1aF/F; Hif2aF/F ποντίκια είχαν παρόμοια αλλαγή σωματικού βάρους και επίπεδο Hct 7 ημέρες μετά την UUO (Εικόνα 7β και γ). Από την άποψη τουνεφρική ίνωση, δεν μπόρεσε να ανιχνευθεί καμία διαφορά στην περιοχή με κόκκινη χρώση picrosirius, τα επίπεδα mRNA του Col1a1 και του Acta2 στονεφρό(Εικόνα 7δ–στ). Τα επίπεδα mRNA των Havcr1 και Adgre1 δεν ήταν επίσης διαφορετικά (Εικόνα 7g και h). Αλλάξαμε τη δόση και την περίοδο έκπλυσης της ταμοξιφαίνης (Συμπληρωματικές Εικόνες S19A και S20A) και τα αποτελέσματα για την εναπόθεση κολλαγόνου και την έκφραση γονιδίου ήταν παρόμοια (Συμπληρωματικά Σχήματα S19B–E, S20B–E). Επαναλάβαμε τα πειράματα στο Gli1CreERT2/ συν; Hif1aF/F(Εικόνα 8a–c) και Gli1- CreERT2/ plus ; Hif2aF/F(Σχήμα 8δ-στ) ποντίκια και δεν κατέδειξαν τη διαφορά στην επαγόμενη από UUOνεφρική ίνωσησε σύγκριση με τον μάρτυρα της γέννας.
ΣΥΖΗΤΗΣΗ
Τα κύρια ευρήματα αυτής της μελέτης περιελάμβαναν τα ακόλουθα: (i) Η νεφρική Gli1 συν η σταθεροποίηση του HIF ειδικού για περικύτταρα οδήγησε σε παραγωγή EPO και ερυθροποίηση, αλλά καμία επίδραση στην παθολογία των νεφρών με ή χωρίς βλάβη UUO. και (ii) νεφρική Gli1 συν HIF ειδική για περικύτταρα-1a και HIF-2ένα νοκ άουτ δεν επηρέασαννεφρική ίνωσηείτε.
Αναφέραμε προηγουμένως ότι το νεφρικό Foxd1 συν τα περικύτταρα που προέρχονται από προγονικό είναι REPC και ρυθμίζονται από το HIF-2a. 14 Σε αυτή τη μελέτη, δείξαμε ότι τα νεφρικά κύτταρα Gli1 plus είναι επίσης REPC. Αν και κανένα άμεσο στοιχείο δεν εξηγεί τη σχέση μεταξύ FOXD1 και GLI1 στα περικύτταρα, προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι τόσο τα νεφρικά κύτταρα Foxd1 plus προερχόμενα από προγονικό όσο και τα κύτταρα Gli1 plus είναι περικύτταρα και μπορούν να διαφοροποιηθούν από τους μυοϊνοβλάστες στο τραύμα.10,11,36 Τα δεδομένα έδειξαν ότι το knockout είτε του PHD2 είτε του pVHL ειδικά στα Gli1 συν περικύτταρα είχε ως αποτέλεσμα αυξημένη παραγωγή νεφρικής EPO, ερυθροποίηση και πολυκυτταραιμία, κάτι που συμφωνεί με μια πρόσφατη αναφορά των Greenwald et al.40 Επιπλέον, σε σύγκριση με μια αξιοσημείωτη μείωση της EPO έκφραση στον νεφρό UUO γέννας άγριου τύπου, η έκφραση Epo σε νεφρό UUO ποντικών με Gli1-ειδικό knockout pVHL ήταν συγκρίσιμη με το επίπεδο που εμφανίζεται στο ετερόπλευρο έλεγχονεφρό, η έγκριση της σταθεροποίησης του HIF θα μπορούσε να υπερνικήσει τον μηχανισμό καταστολής της EPO στους μυοϊνοβλάστες των ινωτικών νεφρών.14,17 Σύμφωνα με το εύρημα μας, οι Souma et al.17 ανέφεραν ότι η σύνθεση EPO αποκαθίσταται σε UUO-νεφρόμυοϊνοβλάστες σε ποντίκια με νοκ-άουτ PHD2. Σε αντιστοιχία με τα ευρήματά μας, μια πολύ πρόσφατη μελέτη41 ανέφερε ότι τα νεφρικά κύτταρα Gli1 plus είναι ένας υποπληθυσμός υποδοχέα αυξητικού παράγοντα που προέρχεται από αιμοπετάλια συν REPCs και διατηρούν την ικανότητα παραγωγής EPO σε UUOνεφρά.
Κλινικές δοκιμές έχουν αποδείξει την αποτελεσματικότητα των αναστολέων PHD στη θεραπεία της αναιμίας που σχετίζεται με ΧΝΝ.3–5,42–45 Είναι σημαντικό, συγκεντρωτικές αναλύσεις δοκιμών φάσης ΙΙΙ του roxadustat έδειξαν μη κατώτερο ή ακόμη καλύτερο καρδιαγγειακό αποτέλεσμα.46 Ωστόσο, κανένα επίσημο Μέχρι στιγμής έχει δημοσιευτεί έκθεση σχετικά με την επίδραση των αναστολέων PHD στην εξέλιξη της ΧΝΝ. Πειραματικά, ο ρόλος της υποξίας και του HIF στηννεφρική ίνωσηείναι αμφιλεγόμενη.47,48 Σε ποντίκια που υποβλήθηκαν σε οξεία νεφρική βλάβη (ΑΚΙ) που προκαλείται από τραυματισμό ισχαιμίας-επαναιμάτωσης, ο Καπιτσίνου και συν.24 απέδειξαν ότι η αναστολή της PHD πριν από την ΑΚΙ βελτιώνεταιίνωση, ενώ η αναστολή στην πρώιμη φάση ανάρρωσης της ΑΚΙ όχι. Επιπλέον, οι Uchida et al.26 απέδειξαν ότι ο αναστολέας PHD μπορεί να βελτιωθείνεφρική ίνωσησε συνδυασμό με τη μείωση των προφλεγμονωδών κυτοκινών και την αποκατάσταση της πυκνότητας των τριχοειδών στο νεφρό ενός μοντέλου ΧΝΝ αρουραίου που προκλήθηκε από 5/6 υποολική νεφρεκτομή, αν και δεν φαίνεται καμία επίδραση στην πρωτεϊνουρία και στα επίπεδα κρεατινίνης ορού. Αντίθετα, μια πρόσφατη αναφορά έδειξε ότι ο αναστολέας PHD συμβάλλει στην πολυκυτταραιμία και την εξασθένηση της σωληναριδικής διάμεσης νεφρίτιδας, αλλά δεν έχει καμία επίδραση στη νεφρική ίνωση σε ένα μοντέλο χρόνιας σωληναριδικής διάμεσης νεφρίτιδας που προκαλείται από αδενίνη.25 Η αντιφλεγμονώδης δράση των αναστολέων PHD καταδείχθηκε επίσης στο νεφρό ενός παχύσαρκου διαβήτη τύπου 2 μοντέλου ποντικού.27 Το εάν οι αναστολείς PHD βελτιώνουν τη νεφρική ίνωση μέσω της εξασθένησης της διάμεσης φλεγμονής απαιτεί περαιτέρω μελέτη. Αν και αυτές οι μελέτες δεν ανέφεραν τις επιδράσεις των αναστολέων PHD στην ενεργοποίηση των νεφρικών μυοϊνοβλαστών, η απουσία αρνητικής επίδρασης στη νεφρική ίνωση μπορεί να υποστηρίξει την αμελητέα επίδραση της έκφρασης HIF στην παραγωγή κολλαγόνου στα νεφρικά περικύτταρα. Η αξιολόγηση της επίδρασης του HIF στους νεφρούς είναι πολύπλοκη.49 Πρώτον, διαφορετικοί τύποι κυττάρων μπορεί να εκφράζουν διαφορετικές ισόμορφες HIF.50 Δεύτερον, ακόμη και η ίδια ισομορφή HIF μπορεί να ρυθμίζει διαφορετικά γονίδια στόχους σε διαφορετικούς κυτταρικούς τύπους.51 Τρίτον, η έκφραση και η ρύθμιση του HIF στη φυσιολογική κατάσταση μπορεί να διαφέρει από τον άρρωστο νεφρό.50 Επιπλέον, η ταχεία αποικοδόμηση του HIF σε κανονικές συνθήκες αυξάνει τη δυσκολία των ανακριβών αναλύσεων των επιπέδων πρωτεΐνης HIF στον ιστό.52 Επομένως, προηγούμενα ασυνεπή αποτελέσματα σχετικά με την επίδραση στη νεφρική ίνωση είναι πιθανώς επειδή τα αποτελέσματα του HIF εξαρτώνται από τον τύπο κυττάρου και το περιβάλλον. Για παράδειγμα, στοιχεία έχουν δείξει ότι ο αναστολέας PHD πριν από την επαγόμενη από τραυματισμό από ισχαιμία επαναιμάτωσης βελτιώνει την ίνωση μετά την ΑΚΙ μέσω ενός μηχανισμού που εξαρτάται από το ενδοθηλιακό HIF, 24,30 ενώ η φλεγμονή από HIF-1α , ίνωση και νεφρική κυτταρική δυσπλασία έχουν βρεθεί στο Tg(Hoxb7-Cre); VhlF/Fποντίκια που έχουν knockout pVHL στους αγωγούς συλλογής και ένα υποσύνολο περιφερικών σωληναρίων.29 Στη μελέτη μας εστιάζουμε στο εάν η δραστηριότητα HIF στα περικύτταρα ρυθμίζεταινεφρική ίνωση,δείξαμε ότι η παραγωγή EPO αυξήθηκε σημαντικά στα νεφρικά περικύτταρα σε ποντίκια με Gli1 συν ειδική για περικύτταρα σταθεροποίηση HIF με το ειδικό για κύτταρο pVHL ή PHD2 νοκ-άουτ, και συγκεκριμένα, η έκφραση Epo διατηρήθηκε στους μυοϊνοβλάστες UUO-νεφρού. Ωστόσο, δεν βρήκαμε ότι η ειδική για περικύτταρα σταθεροποίηση HIF επηρέασε τη μετάβαση περικυττάρου-μυοϊνοβλάστης, την παραγωγή κολλαγόνου στους μυοϊνοβλάστες ή την επαγόμενη από UUOνεφρόίνωση. Επιπλέον, οι εκφράσεις των Havcr1 και Adgre1 δεν επηρεάστηκαν στον νεφρό UUO, υπονοώντας ότι η σοβαρότητα της βλάβης των νεφρικών σωληναριακών και η νεφρική φλεγμονή δεν επηρεάστηκε σε ποντικούς με σταθεροποίηση HIF ειδική για περικύτταρα. Επειδή ο μυοϊνοβλαστής είναι ο κυτταρικός τύπος που παράγει ουλές κατά τη διάρκειανεφρική ίνωση, τα αποτελέσματά μας μπορεί να παρέχουν πειραματικά στοιχεία για την απουσία αρνητικής επίδρασης της σταθεροποίησης του HIF από αναστολείς PHD στη νεφρική ίνωση. Σύμφωνα με τη μελέτη μας, οι Souma et al.17 ανέφεραν επίσης ότινεφρική ίνωσηδεν επηρεάζεται από ταυτόχρονο νοκ άουτ των PHD1, PHD2 και PHD3 σε REPC ποντικών Tg(Epo-Cre).
το cistanche είναι καλό γιανεφρών
Στη μελέτη μας, το Gli1CreERT2/ plus ; VhlF/F Τα ποντίκια χαρακτηρίστηκαν τόσο από αυξημένη παραγωγή ενδογενούς ΕΡΟ όσο και από πολυκυτταραιμία. Αν επηρεάζει το αυξημένο επίπεδο πολυκυτταραιμίας ΕΡΟ ορούνεφρική ίνωσηείναι αμφιλεγόμενη. Υπάρχουν εκτενείς μελέτες σχετικά με τις επιδράσεις της εξωγενούς ανασυνδυασμένης EPO στην ΑΚΙ ή τη ΧΝΝ.53–57 Σε προηγούμενες μελέτες, η υψηλή δόση ανασυνδυασμένης ΕΡΟ έχει αναφερθεί ότι προκαλεί πολυκυτταραιμία, υπέρταση και επιδείνωση της νεφρικής λειτουργίας.56,58 Είναι ενδιαφέρον, ορισμένες μελέτες αποκάλυψαν ότι το εξωγενές ανάλογο ΕΡΟ χαμηλής δόσης, τόσο χαμηλό ώστε να μην προκαλεί ερυθροποίηση, έχει ως αποτέλεσμα νεφροπροστατευτικά αποτελέσματα στο υπόλοιπονεφρόκαι μοντέλα ποντικών db/db.59,60 Επιπλέον, η φλεβοτομή για την ομαλοποίηση της πολυκυτταραιμίας φάνηκε ότι βελτιώνει την αυξημένη λευκωματουρία σε ποντικούς db/db που υποβλήθηκαν σε υψηλής δόσης εξωγενές ανάλογο ΕΡΟ.60 Σε μια κλινική κοόρτη ασθενών με αληθή πολυκυτταραιμία, νόσος που χαρακτηρίζεται με πολυκυτταραιμία χωρίς αυξημένη ενδογενή EPO,61 η συχνότητα της ΧΝΝ (που ορίζεται ως εκτιμώμενος ρυθμός σπειραματικής διήθησης<60 ml/min="" per="" 1.73="" m2="" )="" was="" 27%,="" which="" was="" higher="" than="" in="" the="" general="" population.62,63="" however,="" the="" annual="" decline="" rate="" of="" estimated="" glomerular="" filtration="" rate="" was="" slower="" in="" patients="" with="" polycythemia="" vera="" than="" with="" other="" myeloproliferative="" diseases.="" in="" the="" study="" of="">CreERT2/ συν; VhlF/F ποντίκια που υποβλήθηκαν σε τραυματισμό UUO, τα δεδομένα μας έδειξαν αυξημένη έκφραση νεφρικής Epo και πολυκυτταραιμία, αλλά καμία μεταβολήνεφρική ίνωση, φλεγμονή και σωληναριακό τραυματισμό. Ως εκ τούτου, οι συνολικές επιδράσεις της σταθεροποίησης του HIF ειδικού περικυττάρου στη νεφρική βλάβη, τη φλεγμονή και την ίνωση ήταν ουδέτερες, υποστηρίζοντας την ασφάλεια των αναστολέων PHD στην εξέλιξη της ΧΝΝ. Τα νεφρικά περικύτταρα μπορούν να οριστούν ως ένας ετερογενής πληθυσμός ινοβλαστών σε στενή επαφή με τα ενδοθηλιακά κύτταρα τουνεφρό.8-13 Λόγω της αναπτυξιακής πολυπλοκότητας, της 64,65 ετερογενούς βιολογικής λειτουργίας, 8,11-13,23 και της διαφορικής ρύθμισης PHD και HIF,17,41,66 ο βέλτιστος γενετικός δείκτης για τα νεφρικά περικύτταρα δεν έχει ακόμη καθοριστεί. Τα κύτταρα Gli1 plus πληρούν τα μορφολογικά και ανατομικά κριτήρια για τα περικύτταρα. Μετά από τραυματισμό UUO, τα νεφρικά κύτταρα Gli1 plus πολλαπλασιάζονται και διαφοροποιούνται σε μυοϊνοβλάστες. Τα νεφρικά κύτταρα Gli1 plus αντιπροσώπευαν περίπου το 45 τοις εκατό της συνολικής δεξαμενής νεφρικών μυοϊνοβλαστών και η κατάλυση των νεφρικών κυττάρων Gli1 plus μειώθηκενεφρική ίνωση.11,36 Γνωρίζαμε ότι τα νεφρικά κύτταρα Gli1 plus είναι ένας υποπληθυσμός υποδοχέα αυξητικού παράγοντα-b συν κύτταρα που προέρχονται από αιμοπετάλια11,36,41 και ότι τα αποτελέσματα της γενετικής χειραγώγησης με περιορισμό Gli1 συν περικύτταρα μπορεί να καλυφθούν από άλλους ινοβλάστες. Ωστόσο, τα πειράματά μας σε ταξινομημένα νεφρικά κύτταρα Gli1 plus απέδειξαν ότι η σταθεροποίηση του HIF ήταν ικανή να αυξήσει την έκφραση Epo αλλά όχι κολλαγόνο ή Acta2 σε κυτταρικό επίπεδο. Δεν μπορούμε να αποκλείσουμε την πιθανότητα η σταθεροποίηση του HIF που προκαλείται από άλλους δείκτες περικυττάρων να έχει διαφορετικά αποτελέσματα. Τα ποντίκια με Cre recombinase καθοδηγούνται από τον προαγωγέα Col1a1, Foxd1 ή Pdgfrb δεν χρησιμοποιήθηκαν για τον ορισμό περικυττάρων σε αυτή τη μελέτη επειδή η ανασυνδυάση Cre τους είναι επίσης ενεργή σε σπειραματικά ποδοκύτταρα, 8 σπειραματικά μεσαγγειακά κύτταρα, 67 αγγειακά λεία μυϊκά κύτταρα, 68 και πιθανώς κάποια σωληναριακά επιθηλιακά κύτταρα.69 pVHL knockout σε ποδοκύτταρα και σωληναριακά κύτταρα αναφέρθηκε ότι επάγει νεφρικές παθολογίες όπως ημισφαίριο σπειραματονεφρίτιδα31 και νεφρικές κύστεις. στάδιο και νοκ-άουτ είτε του pVHL είτε του PHD2 σε περικύτταρα που εκφράζουν Foxd1-έχει αποδειχθεί ότι επηρεάζουν τη νεφρογένεση.71,72
Σε ταξινομημένα νεφρικά κύτταρα Gli1 plus με PHD2 knockout χρησιμοποιώντας Gli1CreERT2/ συν; Egln1F/F; ROSA26fstdΝτομάτα/fstdΝτομάταποντίκια, παρατηρήσαμε σημαντική αύξηση της κυτταρικής έκφρασης mRNA του Epo αλλά όχι Col1a1 ή Acta2. Η 50-πλάσια αύξηση του mRNA της Epo επιβεβαίωσε την υπερέκφραση του HIF σε ταξινομημένα νεφρικά Gli1 συν περικύτταρα με PHD2 knockout. Επιπλέον, in vivo pVHL ή PHD2 knockout σε Gli1 συν περικύτταρα οδήγησε σε αυξημένη έκφραση νεφρικής Epo και πολυκυτταραιμία, αλλά όχινεφρική ίνωση. Πιστεύουμε ότι εάν επηρεαστούν τα κατάντη HIF μόρια στα περικύτταρανεφρική ίνωση, θα παρατηρηθεί στη μελέτη μας. Τα αποτελέσματα της απενεργοποίησης της PHD2 στη σταθεροποίηση του HIF μπορεί να καλυφθούν από τον βιολογικό πλεονασμό των PHD1 και PHD3. Ωστόσο, παρατηρήσαμε σταθερές επιδράσεις στην EPO και την παραγωγή κολλαγόνου σε Gli1 συν περικύτταρα με νοκ-άουτ είτε pVHL είτε PHD2, υποστηρίζοντας περαιτέρω τη σταθεροποίηση του HIF στα περικύτταρα προάγει την ερυθροποίηση αλλά όχιίνωση. Δεν μπορέσαμε να δημιουργήσουμε το Gli1CreERT2/ συν;VhlF/F; ROSA26fstdΝτομάτα/fstdΝτομάταποντίκια μέσω του σταυρού του Gli1CreERT2/þ; VhlF/Fκαι ROSA26fstdΝτομάτα/fstdΝτομάταποντίκια επειδή τόσο το Vhl όσο και το ROSA26 βρίσκονται στο χρωμόσωμα 6.
Χρησιμοποιήσαμε το UUO ως ανεφρόμοντέλο τραυματισμού για τη διερεύνηση των επιπτώσεων της ειδικής για περικύτταρα χειρισμού του HIFνεφρική ίνωσηεπειδή στο μοντέλο UUO τα περισσότερα περικύτταρα Gli1 plus διαφοροποιήθηκαν σε μυοϊνοβλάστες και η κατάλυση των κυττάρων Gli1 plus βελτίωσε τη νεφρική ίνωση. άλλοι.14,17,41 Ωστόσο, το UUO έχει τους δικούς του περιορισμούς ως μοντέλο ΧΝΝ και τα ευρήματά μας σε αυτήν τη μελέτη ενδέχεται να μην γενικευθούν σε άλλα μοντέλα ΧΝΝ. Μελλοντικές μελέτες δικαιολογούνται για τη δοκιμή των επιδράσεων του χειρισμού του HIF ειδικού για περικύτταρα σε διαφορετικά μοντέλα ΧΝΝ.
Συμπερασματικά, δείξαμε ότι η σταθεροποίηση του Gli1 συν περικυττάρου ειδική για HIF αυξάνει την EPO, την ερυθροποίηση, αλλά δεν επηρεάζειίνωσησε μοντέλα με ή χωρίς τραυματισμό UUO. Σε κυτταρικό επίπεδο, η σταθεροποίηση HIF με ειδικό για περικύτταρα Gli1 αυξάνει την έκφραση της Epo, αλλά όχι την έκφραση των Col1a1, Col3a1 και Acta2. Το νοκ-άουτ του HIF ειδικά για περικύτταρα δεν επηρέασενεφρική ίνωση, είτε. Αυτά τα αποτελέσματα παρέχουν πειραματικές ενδείξεις για την απουσία αρνητικών επιδράσεων των αναστολέων PHD στη νεφρική ίνωση και την εξέλιξη της ΧΝΝ.
Cistanche για βελτίωσηνεφρόλειτουργία
ΑΠΟΚΑΛΥΨΗ
Όλοι οι συγγραφείς δεν δήλωσαν ανταγωνιστικά συμφέροντα.
ΕΥΧΑΡΙΣΤΙΕΣ
Το SYP υποστηρίζεται από το Υπουργείο Επιστημών και Τεχνολογίας (επιχορηγήσεις 106-2314-B-418-006, 107-2314-B-418-001 και 108-2314-B-418-004) και Far Eastern Memorial Hospital (χορηγεί 2017-C-037 και 2020-C- 037). Το SLL υποστηρίζεται από το Υπουργείο Επιστήμης και Τεχνολογίας (επιχορηγήσεις 108-2314-B-002-078-MY3 και 109-2314-B-002-260), Εθνικά Ινστιτούτα Ερευνών Υγείας (επιχορήγηση EX108-10633 SI), Εθνικό Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο της Ταϊβάν (NTUH; υποτροφίες 108-T16 και 109-T16), NTUH και NTU College of Medicine (επιχορήγηση NSCCMOH-131-43), κα Hsiu-Chin LeeΝεφρόΊδρυμα Ερευνών και Ίδρυμα Υγείας της Ταϊβάν.
Ευχαριστούμε τον καθηγητή Guo-Hua Fong (Κέντρο Υγείας του Πανεπιστημίου του Κονέκτικατ) για το Egln1F/Fποντίκια? Yi-Ting Tsai (NTU College of Medicine) για την παθολογική εξέταση του Gli1CreERT2/ συν; VhlF/Fκαι VhlF/Fποντίκια? και το Τμήμα Ιατρικής Έρευνας του NTUH, το Cell Sorting and Imaging Core Facility του First Core Laboratory, το Transgenic Mouse Model Core Facility και το Gene Knockout Mouse Core Laboratory του NTU College of Medicine για υποστήριξη εξοπλισμού και τεχνική βοήθεια.
ΣΥΝΕΙΣΦΟΡΕΣ ΣΥΓΓΡΑΦΕΩΝ
Οι SYP, PZT, YHC, YTC, FCC, YLC και WCC πραγματοποίησαν πειράματα και ανέλυσαν δεδομένα. Οι SYP, YLC, TH, YMC και TSC συμμετείχαν στον σχεδιασμό του πειράματος και στην ανάλυση δεδομένων. Η SLL σχεδίασε και διηύθυνε το έργο. Οι SYP και SLL έγραψαν το χειρόγραφο.
ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΙΚΟ ΥΛΙΚΟ
Συμπληρωματικό αρχείο (PDF)
Συμπληρωματικές Μέθοδοι.
Εικόνα S1. Το σωματικό βάρος, ο αριθμός των περιφερικών λευκών αιμοσφαιρίων και ο αριθμός των αιμοπεταλίων δεν άλλαξαν σε ποντίκια με PHD2 knockout ειδικό για περικύτταρα.
Εικόνα S2. Αντιπροσωπευτικές εικόνες του Epo mRNA που ανιχνεύθηκαν με υβριδισμό RNA in situ στονεφρότων Egln1F/F και Gli1CreERT2/þ; Egln1F/F ποντίκια. Εικόνα S3. Το παγκόσμιο νοκ-άουτ PHD2 προωθεί την παραγωγή EPO και
ερυθροποίηση.
Εικόνα S4. Ανάλυση PCR του γονιδιωματικού DNA που εξήχθη από τονεφρό, ήπαρ, σπλήνα, καρδιά και πνεύμονες σε Tg(UBC-CreERT2); Egln1F/F και ποντίκια ελέγχου γέννας.
Εικόνα S5. Αντιπροσωπευτικές εικόνες του Epo mRNA που ανιχνεύθηκαν με υβριδισμό RNA in situ στονεφρόποντικών Egln1F/F.
Εικόνα S6. Αντιπροσωπευτικές εικόνες των περικυττάρων Gli1þ στο CLK και το UUOνεφράμετά από τραυματισμό UUO.
Εικόνα S7. Μακροπρόθεσμες επιδράσεις σταθεροποίησης HIF ειδικού για περικύτταρα σε
Ποντίκια Gli1CreERT2/þ;VhlF/F.
Εικόνα S8. Αναφορά παθολογίας του Gli1CreERT2/ plus ; Ποντίκια VhlF/F.
Εικόνα S9. Αυξημένα επίπεδα αιματοκρίτη και EPO ορού στο Gli1CreERT2/ plus. VhlF/Fποντίκια.
Εικόνα S10. Ανάλυση PCR τουνεφρόγονιδιωματικό DNA μετά από επαγωγή ταμοξιφαίνης.
Εικόνα S11. Πλήρεις εικόνες γέλης για ανοσοστύπωση a-SMA και μιας [1]τουμπουλίνης.
Εικόνα S12. Έκφραση νεφρικής Epo και Acta2 στο VhlF/F και Gli1CreERT2/ plus ; VhlF/Fποντίκια 7 ημέρες μετά τον τραυματισμό UUO.
Εικόνα S13. Έκφραση νεφρικής Epo και Acta2 στο VhlF/F και Gli1CreERT2/ plus ; VhlF/Fποντίκια 14 ημέρες μετά τον τραυματισμό UUO.
Εικόνα S14.Νεφρική ίνωσηστο εκτεταμένο μοντέλο έκπλυσης ταμοξιφαίνης.
Εικόνα S15. Πειραματικό σχήμα για την επισήμανση νεφρικών κυττάρων Gli1þ με tdTomato.
Εικόνα S16. Στρατηγική πυλών για ταξινόμηση νεφρικών κυττάρων tdTomatoþ.
Εικόνα S17. Επικύρωση έκφρασης tdTomato και διαγραφή Egln1 στα ταξινομημένα νεφρικά κύτταρα tdTomatoþ.
Εικόνα S18. Ανάλυση PCR τουνεφρόγονιδιωματικό DNA από Gli1CreERT2/ plus ; Hif1aF/F; Hif2aF/Fκαι η συγγένεια Hif1aF/F; Hif2aF/Fποντίκια ελέγχου μετά τη χορήγηση ταμοξιφαίνης.
Εικόνα S19. UUO που προκαλείταινεφρική ίνωσηστο Gli1CreERT2/ συν; Hif1aF/F; Hif2aF/Fποντίκια μετά από υψηλή δόση και σύντομη περίοδο έκπλυσης ταμοξιφαίνης.
Εικόνα S20. UUO που προκαλείταινεφρική ίνωσηστο Gli1CreERT2/ συν; Hif1aF/F; Hif2aF/F ποντίκια μετά από μισή δόση και παρατεταμένη περίοδο έκπλυσης ταμοξιφαίνης.
Πίνακας S1. Εκκινητές που χρησιμοποιούνται για γονότυπο.
Πίνακας S2. Εκκινητές που χρησιμοποιούνται για ποσοτική PCR.
Συμπληρωματική Μακροεντολή. Μακροεντολή για αυτόματη ποσοτικοποίηση του picrosirius που έχει κοκκινίσεινεφρόπεριοχή από ImageJ.
Τα προϊόντα Cistanche είναι καλά γιανεφρών
ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΑΝΑΦΟΡΕΣ
1. Νεφρική Νόσος: Ομάδα Εργασίας για τη βελτίωση των παγκόσμιων αποτελεσμάτων (KDIGO) για την αναιμία. Οδηγίες κλινικής πρακτικής KDIGO για την αναιμία σεχρόνια νεφρική νόσος.Kidney Int Suppl. 2012; 2:279-335.
2. Astor BC, Muntner P, Levin A, et al. Σύλλογος τωννεφρόλειτουργία με αναιμία: η Τρίτη Εθνική Έρευνα Εξέτασης Υγείας και Διατροφής (1988-1994). Arch Intern Med. 2002; 162: 1401-1408.
3. Maxwell PH, Eckardt KU. Αναστολείς HIF προλυλ υδροξυλάσης για τη θεραπεία της νεφρικής αναιμίας και όχι μόνο. Nat Rev Nephrol. 2016; 12:157–168.
4. Chen N, Hao C, Peng X, et αϊ. Roxadustat για αναιμία σε ασθενείς μενεφρόασθένεια που δεν υποβάλλεται σε αιμοκάθαρση. N Engl J Med. 2019; 381:1001–1010.
5. Chen N, Hao C, Liu BC, et αϊ. Θεραπεία με Roxadustat για την αναιμία σε ασθενείς που υποβάλλονται σε μακροχρόνια αιμοκάθαρση. N Engl J Med. 2019; 381:1011–1022.
6. Schodel J, Ratcliffe PJ. Μηχανισμοί σηματοδότησης υποξίας: νέες επιπτώσεις για τη νεφρολογία. Nat Rev Nephrol. 2019; 15:641–659.
7. Pan SY, Chiang WC, Chen YM. Το ταξίδι από την ερυθροποιητίνη στο βραβείο Νόμπελ 2019: εστίαση σε παράγοντες που προκαλούν υποξία στηννεφρό. J Formos Med Assoc. 2021; 120:60–67.
8. Lin SL, Kisseleva Τ, Brenner DA, et al. Τα περικύτταρα και οι περιαγγειακοί ινοβλάστες είναι η κύρια πηγή κυττάρων που παράγουν κολλαγόνο σε αποφρακτικάίνωσητου νεφρού. Am J Pathol. 2008, 173:1617–1627.
9. Pan SY, Chang YT, Lin SL. Μικροαγγειακά περικύτταρα σε υγιείς και ασθενείς νεφρούς. Int J Nephrol Renovasc Dis. 2014; 7:39–48.
10. Humphreys BD, Lin SL, Kobayashi Α, et al. Η ανίχνευση της μοίρας αποκαλύπτει την περικυτταρική και όχι την επιθηλιακή προέλευση των μυοϊνοβλαστώνίνωση των νεφρών. Am J Pathol. 2010; 176:85–97.
11. Kramann R, Schneider RK, DiRocco DP, et αϊ. Οι περιαγγειακοί πρόγονοι Gli1þ είναι βασικοί συνεισφέροντες στο όργανο που προκαλείται από τραυματισμόίνωση. Βλαστοκύτταρο κυττάρων. 2015; 16:51–66.
12. Schrimpf C, Xin C, Campanholle G, et αϊ. Το περικύτταρο TIMP3 και ADAMTS1 ρυθμίζουν την αγγειακή σταθερότητα μετάνεφρόβλάβη. J Am Soc Nephrol. 2012;23: 868–883.
13. Lemos DR, Marsh G, Huang Α, et al. Η διατήρηση της αγγειακής ακεραιότητας από τα περικύτταρα είναι απαραίτητη για το φυσιολογικόνεφρόλειτουργία. Am J Physiol Renal Physiol. 2016;311:F1230–F1242.
14. Chang YT, Yang CC, Pan SY, et al. Η αναστολή της μεθυλτρανσφεράσης του DNA αποκαθιστά την παραγωγή ερυθροποιητίνης σε ινωτικούς νεφρούς ποντικού. J Clin Invest. 2016; 126:721-731.
15. Chou YH, Pan SY, Shao YH, et al. Η μεθυλίωση στα περικύτταρα μετά από οξύ τραυματισμό προάγει τη χρόνιανεφρόνόσος. J Clin Invest. 2020; 130:4845–4857.
16. Chang FC, Chou YH, Chen YT, et al. Νέες γνώσεις για τη μετάβαση των περικυτταροϊνοβλαστών και τους θεραπευτικούς στόχους στονεφρική ίνωση. J Formos Med Assoc. 2012; 111:589–598.
17. Souma T, Nezu M, Nakano D, et al. Η σύνθεση της ερυθροποιητίνης στους νεφρικούς μυοϊνοβλάστες αποκαθίσταται με την ενεργοποίηση της σηματοδότησης υποξίας. J Am Soc Nephrol. 2016; 27:428–438.
18. Asada Ν, Takase Μ, Nakamura J, et αϊ. Η δυσλειτουργία των ινοβλαστών εξωνεφρικής προέλευσης βρίσκεται στη βάσηνεφρική ίνωσηκαι νεφρική αναιμία σε ποντίκια. J Clin Invest. 2011; 121:3981–3990.
19. Wu CF, Chiang WC, Lai CF, et al. Ο μετασχηματιστικός αυξητικός παράγοντας βήτα-1 διεγείρει τη σηματοδότηση του επιθηλίου για την ενεργοποίηση της μετάβασης περικυττάρων-μυοϊνοβλαστών σε αποφρακτικήίνωση των νεφρών.Am J Pathol. 2013; 182:118–131.
20. Chen YT, Chang FC, Wu CF, et al. Η σηματοδότηση υποδοχέα αυξητικού παράγοντα που προέρχεται από αιμοπετάλια ενεργοποιεί τη μετάβαση περικύτταρου-μυοϊνοβλάστης σε αποφρακτική και μετα-ισχαιμικήνεφρόίνωση. Kidney Int. 2011; 80:1170-1181.
21. Lin SL, Chang FC, Schrimpf C, et al. Στόχευση διασταυρούμενης ομιλίας ενδοθηλίου-περικυττάρου με αναστολή της σηματοδότησης των υποδοχέων VEGF εξασθενείνεφρόμικροαγγειακή αραίωση καιίνωση. Am J Pathol. 2011; 178:911-923.
22. Ren S, Johnson BG, Kida Υ, et αϊ. Το LRP-6 είναι ένας συνυποδοχέας για πολλαπλές ινογονικές οδούς σηματοδότησης σε περικύτταρα και μυοϊνοβλάστες που αναστέλλονται από το DKK-1. Proc Natl Acad Sci US A. 2013;110:1440–1445.
23. Kawakami T, Mimura I, Shoji K, et al. Υποξία καιίνωσησεχρόνιες νεφρικές παθήσειςe: διέλευση στα περικύτταρα. Kidney Int Suppl. 2014; 4:107–112.
24. Kapitsinou PP, Jaffe J, Michael M, et al. Η προισχαιμική στόχευση της HIF προλυλ υδροξυλίωσης αναστέλλειίνωσησχετίζεται με οξείανεφρόβλάβη. Am J Physiol Renal Physiol. 2012;302:F1172–F1179.
25. Schley G, Klanke Β, Kalucka J, et αϊ. Τα μονοπύρηνα φαγοκύτταρα ενορχηστρώνουν την επαναπροστασία που προκαλείται από την αναστολή της προλυλικής υδροξυλάσης σε χρόνια σωληναρισιακή διάμεση νεφρίτιδα. Kidney Int. 2019; 96:378–396.
26. Uchida L, Tanaka Τ, Saito Η, et αϊ. Επιδράσεις ενός αναστολέα προλυλ υδροξυλάσης σενεφρόκαι καρδιαγγειακές επιπλοκές σε μοντέλο αρουραίου χρόνιας νεφρικής νόσου. Am J Physiol Renal Physiol. 2020;318:F388–F401.
27. Sugahara Μ, Tanaka S, Tanaka Τ, et αϊ. Ο αναστολέας της περιοχής προλυλ υδροξυλάσης προστατεύει από μεταβολικές διαταραχές και συναφείςνεφρόασθένεια σε παχύσαρκα διαβητικά ποντίκια τύπου 2. J Am Soc Nephrol. 2020; 31:560-577.
28. Higgins DF, Kimura Κ, Bernhardt WM, et αϊ. Η υποξία προάγει την ινογένεση in vivo μέσω διέγερσης HIF-1 της μετάβασης από το επιθήλιο στο μεσεγχυματικό. J Clin Invest. 2007; 117:3810–3820.
29. Pritchett TL, Bader HL, Henderson J, et αϊ. Η υπό όρους αδρανοποίηση του ογκοκατασταλτικού γονιδίου ποντικού von Hippel-Lindau οδηγεί σε ευρέως διαδεδομένες υπερπλαστικές, φλεγμονώδεις και ινωτικές αλλοιώσεις στο νεφρό. Ογκογόνο. 2014; 34:2631.
30. Kapitsinou PP, Sano H, Michael M, et al. Το ενδοθηλιακό HIF-2 μεσολαβεί στην προστασία και την ανάρρωση από το ισχαιμικόνεφρόβλάβη. J Clin Invest. 2014;124:2396–2409.
31. Ding Μ, Cui S, Li C, et αϊ. Η απώλεια του ογκοκατασταλτικού Vhlh οδηγεί σε ρύθμιση προς τα πάνω του Cxcr4 και ταχέως προοδευτική σπειραματονεφρίτιδα σε ποντίκια. Nat Med. 2006; 12:1081-1087.
32. Ding Μ, Coward RJ, Jeansson Μ, et al. Η ρύθμιση του επαγόμενου από την υποξία παράγοντα 2-a είναι απαραίτητη για την ακεραιότητα του σπειραματικού φραγμού. Am J Physiol Renal Physiol. 2013;304:F120–F126.
33. Norman JT, Clark IM, Garcia PL. Η υποξία προάγει την ινογένεση στους ανθρώπινους νεφρικούς ινοβλάστες. Kidney Int. 2000; 58:2351-2366.
34. Wang Ζ, Tang L, Zhu Q, et αϊ. Ο επαγόμενος από την υποξία παράγοντας-1άλφα συμβάλλει στην πλεονασματική δράση της αγγειοτενσίνης ΙΙ στα νεφρικά μυελικά διάμεση κύτταρα.ΝεφρόInt. 2011; 79:300–310.
35. Koury MJ, Haase VH. Αναιμία σενεφρόασθένεια: αξιοποίηση ανταποκρίσεων υποξίας για θεραπεία. Nat Rev Nephrol. 2015; 11:394–410.
36. Fabian SL, Penchev RR, St-Jacques B, et al. Ενεργοποίηση οδού Hedgehog-Gli κατά τη διάρκειαίνωση των νεφρών.Am J Pathol. 2012, 180:1441–1453.
37. Lin SL, Castano AP, Nowlin BT, et al. Τα μονοκύτταρα Ly6Chigh μυελού των οστών στρατολογούνται επιλεκτικά σε τραυματίεςνεφράκαι διαφοροποιούνται σε λειτουργικά διακριτούς πληθυσμούς. J Immunol. 2009; 183:6733–6743.
38. Delle Η, Rocha JR, Cavaglieri RC, et αϊ. Αντιϊνωτική δράση της ταμοξιφαίνης σε ένα μοντέλο προοδευτικής νεφρικής νόσου. J Am Soc Nephrol. 2012; 23:37–48.
39. Falke LL, Broekhuizen R, Huitema Α, et αϊ. Η ταμοξιφαίνη για πρόκληση Crerecombination μπορεί να προκαλέσει σύγχυσηίνωσημελέτες σε θηλυκά ποντίκια. J Cell Commun Signal. 2017; 11:205–211.
40. Greenwald AC, Licht T, Kumar S, et al. Ο VEGF επεκτείνει την ερυθροποίηση μέσω της ανεξάρτητης από την υποξία επαγωγής της ερυθροποιητίνης σε μη κανονικά περιαγγειακά στρωματικά κύτταρα. J Εχρ Med. 2019; 216:215–230.
41. Broeker ΚΑΕ, Fuchs ΜΑΑ, Schrankl J, et al. Διαφορετικοί υποπληθυσμοί τωννεφρότα διάμεση κύτταρα παράγουν ερυθροποιητίνη και παράγοντες που υποστηρίζουν την οξυγόνωση των ιστών σε απόκριση στην υποξία in vivo.ΝεφρόInt. 2020; 98:918-931.