Έρευνα παρέμβασης της φαινυλαιθυλικής αλκοόλης Glycosidesin Cistanche σε ζωικό μοντέλο με περιεμμηνοπαυσιακό σύνδρομο Ⅲ

Πείραμα 2

Επίδραση τουΓλυκοζίτης φαινυλαιθανόλης Cistancheστο ποντίκιπεριεμμηνοπαυσιακήμοντέλο Υλικά και μέθοδοι

Πειραματικά υλικά

1.1 Πειραματόζωα

Ποντίκια βαθμού SPF, είδη Kunming, θηλυκά, 20-25g, παρέχονται από το Ινστιτούτο Βιολογικών Προϊόντων της Γουχάν. Αριθμός πιστοποιητικού: 42000400000611; Αριθμός πιστοποιητικού εργαστηρίου SYXK (Yu) 2010-001. 1.2 Πειραματικά φάρμακα

Ο γλυκοζίτης φαινυλαιθανόλης Cistanche deserticola παρασκευάστηκε σύμφωνα με τη μέθοδο του Πειράματος 1, και η περιεκτικότητα έφτασε το 66,47%. Κάψουλα Gengnian'an, συστατικά: Rehmannia glutinosa, Rehmannia glutinosa, Alisma, Ophiopogon japonicus, Scrophulariaceae, φλοιός παιώνιας, Poria cocos, φίλντισι, curculigo, Schisandra chinensis, μαγνητίτης, Polygonum multifloratum multicaria, . Λειτουργίες και ενδείξεις: Θρέψτε το γιν και υποτάξτε το γιανγκ, ανακουφίστε τα προβλήματα και ηρεμήστε το μυαλό. Χρησιμοποιείται για τις εξάψεις της εμμηνόπαυσης και την εφίδρωση, τη ζάλη, τις εμβοές, την ευερεθιστότητα και την αϋπνία. Προδιαγραφές: 0.3g ανά κάψουλα. Χρήση και δοσολογία: Από του στόματος, 3 κάψουλες τη φορά, 3 φορές την ημέρα. Κατασκευαστής: Shanxi Tianxing Pharmaceutical Co., Ltd. Αριθμός παρτίδας παραγωγής: 121104. Αριθμός έγκρισης: Εθνική έγκριση φαρμάκου Αρ. Z14021848.

Ισοφλαβόνες σόγιας και μαλακές κάψουλες βιταμίνης Ε, λίστα συστατικών: ισοφλαβόνες σόγιας σε σκόνη, βιταμίνη Ε, ηλιέλαιο, ζελατίνη, γλυκερίνη, νερό, ταρτραζίνη, διοξείδιο του τιτανίου. Εμβληματικά συστατικά και περιεχόμενο: Κάθε 100g περιέχει 55,2 mg ισοφλαβόνες σόγιας (υπολογιζόμενες ως γενιστεΐνη) και 608,5 mg βιταμίνη Ε. Λειτουργίες υγείας: Αύξηση της οστικής πυκνότητας. Οδηγίες και δοσολογία: Λαμβάνετε 1 κάψουλα 2 φορές την ημέρα με ζεστό νερό. Προδιαγραφές: 500mg×100 κάψουλες. Κατασκευαστής: Weihai Ziguang Biotechnology Development Co., Ltd. Αριθμός παρτίδας παραγωγής: 13070302. Αριθμός έγκρισης: National Food Health G20080032.

Αποτέλεσμα 1 Επίδραση στις αυτόνομες δραστηριότητες σε μοντέλο περιεμμηνοπαυσιακού ποντικιού

Τα αποτελέσματα της δοκιμής αυτόνομης δραστηριότητας ποντικών σε κάθε πειραματική ομάδα φαίνονται στον Πίνακα 2 και στο Σχήμα 2.

1.3 Πειραματικά αντιδραστήρια

Νατριούχος καρβοξυμεθυλοκυτταρίνη, Tianjin Hengxing Chemical Reagent Manufacturing Co., Ltd., αριθμός παρτίδας: 20120418; πενικιλίνη νάτριο για ένεση, North China Pharmaceutical Co., Ltd., προδιαγραφή: 4 εκατομμύρια μονάδες, αριθμός παρτίδας παραγωγής: c1206807; διάλυμα φορμαλδεΰδης (αναλυτικής ποιότητας), Yantai City Shuangshuang Chemical Co., Ltd., αριθμός παρτίδας παραγωγής: 20130902; 0,9% ένεση χλωριούχου νατρίου, Chenxin Pharmaceutical Co., Ltd.; προδιαγραφή: 250ml, αριθμός παρτίδας παραγωγής: 1301265303;

Ένυδρο χλωράλη, Tianjin Guangfu Fine Chemical Research Institute, αριθμός παρτίδας 20120827; Κιτ ανίχνευσης ποντικιού E2 ELISA, Εταιρεία Ε&Α, αριθμός παρτίδας: 20131001A; Κιτ ανίχνευσης ποντικιού T ELISA, Εταιρεία Ε&Α, αριθμός παρτίδας: 20131001A; Κιτ δοκιμής ανίχνευσης ποντικιού LH ELISA, Εταιρεία Ε&Α, αριθμός παρτίδας: 20131001A;

Κιτ ανίχνευσης ποντικιού FSH ELISA, R&D Company, αριθμός παρτίδας: 20131001A. 1.4 Πειραματικά όργανα

Ηλεκτρονική ζυγαριά, Shanghai Minqiao Medical Instrument Co., Ltd., μοντέλο: JY601; ηλεκτρονική αναλυτική ισορροπία, Ohaus (Shanghai) Company, μοντέλο: AR1140/C; επιτραπέζιος φυγόκεντρος υψηλής ταχύτητας, Shanghai Anting Scientific Instrument Factory, μοντέλο: TGL-168; Ηλεκτρικό θερμοστατικό λουτρό νερού, Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd., μοντέλο: HWS12; Ελεγκτής αυτόνομης δραστηριότητας ποντικιού, Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd., μοντέλο: ZZ-6; Μετρητής αποφυγής σκότους ποντικιού, Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd., μοντέλο: BA-200; φυγόκεντρος ψύξης υψηλής ταχύτητας, Zhongjia Branch της HKUST Innovation Co., Ltd., μοντέλο: KDC-160HR; ρυθμιζόμενη πιπέτα, Shanghai Leibo Analytical Instrument Co., Ltd.;

Αναγνώστης μικροπλάκας, American BIO-RAD Company, μοντέλο: 680;

Ηλεκτρικό μικροσκόπιο, Ιαπωνική εταιρεία OLYMPUS, μοντέλο: BX61

ΠΟΣΟ ΧΡΕΙΑΖΕΤΑΙ ΓΙΑ ΝΑ ΔΟΥΛΕΨΕΙ ΤΟ CISTANCHE;

2 Πειραματικές μέθοδοι

2.1 Μοντελοποίηση και χορήγηση φαρμάκων

Μέθοδος μοντελοποίησης: Πάρτε 100 θηλυκά ποντίκια Kunming βάρους 23-25g, επιλέξτε τυχαία 12 ποντίκια ως κενή ομάδα και πραγματοποιήστε ψευδή χειρουργική επέμβαση και τα υπόλοιπα ποντίκια χρησιμοποιούνται για τη δημιουργία μοντέλων εμμηνόπαυσης . Μετά τη ζύγιση, τα ποντίκια αναισθητοποιήθηκαν με ενδοπεριτοναϊκή ένεση 10% ένυδρης χλωράλης (0,03 ml/10 g) και σταθεροποιήθηκαν στην κοιλιακή θέση. Στη συνέχεια, τα μαλλιά κόπηκαν από το πίσω μέρος του ποντικιού κάτω από την τελευταία πλευρά στη διασταύρωση της μέσης μασχαλιαίας γραμμής και περίπου 1 cm από το εξωτερικό της σπονδυλικής στήλης, και στη συνέχεια απολυμάνθηκαν και κόπηκαν. Το δέρμα και οι μύες της πλάτης ανοίγουν περίπου 0,5-1cm, και μια γαλακτώδης λευκή γυαλιστερή μάζα λίπους μπορεί να φανεί στο πεδίο της τομής και η ωοθήκη είναι ενσωματωμένη σε αυτό. Χρησιμοποιήστε μικρά τσιμπιδάκια για να πιάσετε απαλά τη λιπώδη μάζα και τραβήξτε την έξω από την τομή, διαχωρίστε τη λιπώδη μάζα και θα δείτε μια ομάδα από λεπτές, ακανόνιστες, κιτρινοκόκκινες ωοθήκες. Κατά την κοπή, συνδέστε πρώτα τις σάλπιγγες (συμπεριλαμβανομένου του λίπους) κάτω από τις ωοθήκες με λεπτές κλωστές και, στη συνέχεια, αφαιρέστε τις ωοθήκες. Μετά την επέμβαση, τα κέρατα της μήτρας επανατοποθετούνται στην κοιλιακή κοιλότητα, ράβονται οι μύες και το δέρμα και αφαιρούνται και οι δύο ωοθήκες με τον ίδιο τρόπο. Μετά την επέμβαση, τα ζώα ανατράφηκαν προσεκτικά και εγχύθηκε ενδομυϊκά 200,000 u/kg (0,1 mL το καθένα) πενικιλίνη για να αποφευχθεί η μόλυνση, μία φορά την ημέρα για 3 συνεχόμενες ημέρες. Έγινε εξέταση κολπικού επιχρίσματος σε κάθε ποντίκι 5 ημέρες μετά την επέμβαση, μία φορά την ημέρα για 5 συνεχόμενες ημέρες για να διαπιστωθεί εάν οι ωοθήκες αφαιρέθηκαν πλήρως. Τα ποντίκια που εμφάνισαν οιστρική αντίδραση στο επίχρισμα απορρίφθηκαν και 72 πλήρως ευνουχισμένα ποντίκια χωρίστηκαν τυχαία και ομοιόμορφα σε 6 ομάδες για πειραματικούς σκοπούς, συγκεκριμένα την ομάδα μοντέλου,Ομάδα καψουλών Gengniang'an, ομάδα μαλακών καψουλών ισοφλαβόνης σόγιας και μεγάλη ομάδα. , μεσαίες και μικρές δόσεις απόΓλυκοζίτης φαινυλαιθανόλης Cistancheομάδα. Μέθοδος παρασκευής: {{0}}.5% CMC Μέθοδος παρασκευής: Ζυγίζουμε 4 g νατριούχου καρβοξυμεθυλοκυτταρίνης και ανακατεύουμε με απεσταγμένο νερό για να γίνουν 800ml. Οι δόσεις των μεγάλων, μεσαίων και μικρών δόσεων της ομάδας γλυκοσίδης φαινυλαιθανόλης Cistanche ήταν 20{{3{3{35}}}}mg/kg, 100 mg/kg και 50 mg/kg αντίστοιχα (όγκος χορήγησης 0,1 ml/ 10 γρ.). Τρόπος παρασκευής: Ζυγίστε 2000 mg, 1000 mg και 500 mg φαινυλαιθανοειδούς γλυκοσίδης Cistanche αντίστοιχα, διαλύστε το με μια μικρή ποσότητα 0,5% CMC, στη συνέχεια ρυθμίστε τον όγκο στα 100 ml, ανακατέψτε καλά και τέλος. Κάψουλες Gengniangan (675 mg/kg, αναμεμειγμένα με απεσταγμένο νερό έως 67,5 mg/ml, 0,1 ml/10 g, ισοδύναμο με 15 φορές την κλινική δόση). μέθοδος προετοιμασίας: πάρτε 9 κάψουλες Gengniangan, χρησιμοποιήστε πρώτα μια μικρή ποσότητα 0,5% CMC Dissolve, μετά ρυθμίστε τον όγκο στα 40 ml και ανακατέψτε καλά για να λάβετε τη δόση του εναιωρήματος κάψουλας Gengnianan (675 mg/kg). Μαλακή κάψουλα ισοφλαβόνης βιταμίνης Ε σόγιας (250 mg/kg, χρησιμοποιήστε απεσταγμένο νερό για την παρασκευή 25 mg/ml, 0,1 ml/10 g, ισοδύναμο με 15 φορές την κλινική δόση). μέθοδος παρασκευής: πάρτε 2 κάψουλες ισοφλαβόνης σόγιας, χρησιμοποιήστε πρώτα μια μικρή ποσότητα 0,5 Διαλύστε %CMC, στη συνέχεια ρυθμίστε τον όγκο στα 40 ml και ανακατέψτε καλά για να λάβετε τη δόση του εναιωρήματος κάψουλας ισοφλαβόνης σόγιας (250 mg/kg).

Τρόπος αποθήκευσης: φυλάξτε το στο ψυγείο, διατηρήστε το ζεστό κατά τη χρήση.

Τρόπος χορήγησης: Στα ζώα σε κάθε ομάδα χορηγήθηκαν αντίστοιχα φάρμακα τη 10η ημέρα μετά την επέμβαση. Στην ομάδα καψουλών Gengnian'an χορηγήθηκε από του στόματος εναιώρημα κάψουλας Gengniang'an 675 mg·kg-1 και στην ομάδα μαλακών καψακίων ισοφλαβόνης σόγιας χορηγήθηκε από το στόμα εναιώρημα μαλακής κάψουλας ισοφλαβόνης σόγιας 250 mg·kg-1, και μεγάλο, μεσαίο καιμικρές δόσεις βενζολίου Cistancheχορηγήθηκαν. Στην ομάδα γλυκοσιδίων αιθανόλης χορηγήθηκαν από το στόμα μεγάλες, μεσαίες και μικρές δόσεις Cistanche φαινυλαιθανοειδούς γλυκοσίδης 200mg·kg-1, 10mg·kg-1, 50mg·kg{ {5}}, 0,1 ml/10 g αντίστοιχα. Η τυφλή ομάδα και η ομάδα μοντέλου χορηγήθηκαν με τον ίδιο όγκο διαλύματος CMC 0,5% μία φορά την ημέρα για 21 διαδοχικές ημέρες.

Κιτ ανίχνευσης ποντικιού FSH ELISA, R&D Company, αριθμός παρτίδας: 20131001A. 1.4 Πειραματικά όργανα

Ηλεκτρονική ζυγαριά, Shanghai Minqiao Medical Instrument Co., Ltd., μοντέλο: JY601; ηλεκτρονική αναλυτική ισορροπία, Ohaus (Shanghai) Company, μοντέλο: AR1140/C; επιτραπέζιος φυγόκεντρος υψηλής ταχύτητας, Shanghai Anting Scientific Instrument Factory, μοντέλο: TGL-168 ; Ηλεκτρικό θερμοστατικό λουτρό νερού, Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd., μοντέλο: HWS12; Ελεγκτής αυτόνομης δραστηριότητας ποντικιού, Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd., μοντέλο: ZZ-6; Μετρητής αποφυγής σκοταδιού ποντικιού, Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd. , μοντέλο: BA-200; φυγόκεντρος ψύξης υψηλής ταχύτητας, Zhongjia Branch της HKUST Innovation Co., Ltd., μοντέλο: KDC-160HR; ρυθμιζόμενη πιπέτα, Shanghai Leibo Analytical Instrument Co., Ltd.;

Αναγνώστης μικροπλάκας, American BIO-RAD Company, μοντέλο: 680;

Ηλεκτρικό μικροσκόπιο, Ιαπωνική εταιρεία OLYMPUS, μοντέλο: BX61

2 Πειραματικές μέθοδοι

2.1 Μοντελοποίηση και χορήγηση φαρμάκων

Μέθοδος μοντελοποίησης: Πάρτε 100 θηλυκά ποντίκια Kunming βάρους 23-25g, επιλέξτε τυχαία 12 ποντίκια ως κενή ομάδα και πραγματοποιήστε ψευδή χειρουργική επέμβαση και τα υπόλοιπα ποντίκια χρησιμοποιούνται για τη δημιουργία μοντέλων εμμηνόπαυσης . Μετά τη ζύγιση, τα ποντίκια αναισθητοποιήθηκαν με ενδοπεριτοναϊκή ένεση 10% ένυδρης χλωράλης (0,03 ml/10 g) και σταθεροποιήθηκαν στην κοιλιακή θέση. Στη συνέχεια, τα μαλλιά κόπηκαν από το πίσω μέρος του ποντικιού κάτω από την τελευταία πλευρά στη διασταύρωση της μέσης μασχαλιαίας γραμμής και περίπου 1 cm από το εξωτερικό της σπονδυλικής στήλης, και στη συνέχεια απολυμάνθηκαν και κόπηκαν. Το δέρμα και οι μύες της πλάτης ανοίγουν περίπου 0,5-1cm, και μια γαλακτώδης λευκή γυαλιστερή μάζα λίπους μπορεί να φανεί στο πεδίο της τομής και η ωοθήκη είναι ενσωματωμένη σε αυτό. Χρησιμοποιήστε μικρά τσιμπιδάκια για να πιάσετε απαλά τη λιπώδη μάζα και τραβήξτε την έξω από την τομή, διαχωρίστε τη λιπώδη μάζα και θα δείτε μια ομάδα από λεπτές, ακανόνιστες, κιτρινοκόκκινες ωοθήκες. Κατά την κοπή, συνδέστε πρώτα τις σάλπιγγες (συμπεριλαμβανομένου του λίπους) κάτω από τις ωοθήκες με λεπτές κλωστές και, στη συνέχεια, αφαιρέστε τις ωοθήκες. Μετά την επέμβαση, τα κέρατα της μήτρας επανατοποθετούνται στην κοιλιακή κοιλότητα, ράβονται οι μύες και το δέρμα και αφαιρούνται και οι δύο ωοθήκες με τον ίδιο τρόπο. Μετά την επέμβαση, τα ζώα ανατράφηκαν προσεκτικά και εγχύθηκε ενδομυϊκά 200,000 u/kg (0,1 mL το καθένα) πενικιλίνη για να αποφευχθεί η μόλυνση, μία φορά την ημέρα για 3 συνεχόμενες ημέρες. Έγινε εξέταση κολπικού επιχρίσματος σε κάθε ποντίκι 5 ημέρες μετά την επέμβαση, μία φορά την ημέρα για 5 συνεχόμενες ημέρες για να διαπιστωθεί εάν οι ωοθήκες αφαιρέθηκαν πλήρως. Τα ποντίκια που έδειξαν οιστρική αντίδραση στο επίχρισμα απορρίφθηκαν και 72 πλήρως ευνουχισμένα ποντίκια χωρίστηκαν τυχαία και ομοιόμορφα σε 6 ομάδες για πειραματικούς σκοπούς, συγκεκριμένα ομάδα μοντέλου, ομάδα κάψουλας Gengniang'an, ομάδα μαλακής κάψουλας ισοφλαβόνης σόγιας και μεγάλη ομάδα. , μεσαίες και μικρές δόσεις απόΓλυκοζίτης φαινυλαιθανόλης Cistancheομάδα. Μέθοδος παρασκευής: 0.5% CMC Μέθοδος παρασκευής: Ζυγίζουμε 4 g νατριούχου καρβοξυμεθυλοκυτταρίνης και ανακατεύουμε με απεσταγμένο νερό για να γίνουν 800 ml. Οι δόσεις των μεγάλων, μεσαίων και μικρών δόσεων τουΓλυκοζίτης φαινυλαιθανόλης Cistancheη ομάδα ήταν 200mg/kg, 10{{20}}mg/kg και 50mg/kg αντίστοιχα (όγκος χορήγησης 0,1 ml/10 g). Τρόπος παρασκευής: Ζυγίστε 2000 mg, 1000 mg και 500 mg φαινυλαιθανοειδούς γλυκοσίδης Cistanche αντίστοιχα, διαλύστε το με μια μικρή ποσότητα 0,5% CMC, στη συνέχεια ρυθμίστε τον όγκο στα 100 ml, ανακατέψτε καλά και τέλος. Κάψουλες Gengniangan (675 mg/kg, αναμεμειγμένα με απεσταγμένο νερό έως 67,5 mg/ml, 0,1 ml/10 g, ισοδύναμο με 15 φορές την κλινική δόση). μέθοδος προετοιμασίας: πάρτε 9 κάψουλες Gengniangan, χρησιμοποιήστε πρώτα μια μικρή ποσότητα 0,5% CMC Dissolve, μετά ρυθμίστε τον όγκο στα 40 ml και ανακατέψτε καλά για να λάβετε τη δόση του εναιωρήματος κάψουλας Gengnianan (675 mg/kg). Μαλακή κάψουλα ισοφλαβόνης βιταμίνης Ε σόγιας (250 mg/kg, χρησιμοποιήστε απεσταγμένο νερό για την παρασκευή 25 mg/ml, 0,1 ml/10 g, ισοδύναμο με 15 φορές την κλινική δόση). μέθοδος παρασκευής: πάρτε 2 κάψουλες ισοφλαβόνης σόγιας, χρησιμοποιήστε πρώτα μια μικρή ποσότητα 0,5 Διαλύστε %CMC, στη συνέχεια ρυθμίστε τον όγκο στα 40 ml και ανακατέψτε καλά για να λάβετε τη δόση του εναιωρήματος κάψουλας ισοφλαβόνης σόγιας (250 mg/kg).

Τρόπος αποθήκευσης: φυλάξτε το στο ψυγείο, διατηρήστε το ζεστό κατά τη χρήση.

Μέθοδος χορήγησης: Τα ζώα σε κάθε ομάδα έλαβαν αντίστοιχα φάρμακα την 10ημέρα μετά την επέμβαση. Στην ομάδα καψουλών Gengnian'an χορηγήθηκε από το στόμα εναιώρημα καψακίων Gengniang'an 675 mg·kg-1 και στην ομάδα μαλακών καψακίων ισοφλαβόνης σόγιας χορηγήθηκαν από το στόμα 250 mg·kg-1 ισοφλαβόνης σόγιας μαλακό εναιώρημα κάψουλας και μεγάλες, μεσαίες και μικρές δόσεις βενζολίου Cistanche χορηγήθηκαν. Στην ομάδα γλυκοσιδών αιθανόλης χορηγήθηκαν από το στόμα μεγάλες, μεσαίες και μικρές δόσεις γλυκοζίτη φαινυλαιθανοειδούς Cistanche 200 mg·kg-1, 10 mg·kg-1, 50 mg·kg-1, 0,1 ml/10g αντίστοιχα. Η τυφλή ομάδα και η ομάδα μοντέλου χορηγήθηκαν με τον ίδιο όγκο διαλύματος CMC 0,5% μία φορά την ημέρα για 21 διαδοχικές ημέρες.

2.2 Στοιχεία παρατήρησης και μέθοδοι ανίχνευσης

Ο αριθμός των αυθόρμητων δραστηριοτήτων των ποντικών σε κάθε ομάδα μέσα σε 5 λεπτά μετρήθηκε τη 18η ημέρα χορήγησης. Η καθυστέρηση των ποντικών που εισήλθαν στο σκοτεινό θάλαμο για πρώτη φορά και ο αριθμός των ηλεκτροσόκ που δέχθηκαν μέσα σε 5 λεπτά από την είσοδο στο σκοτεινό θάλαμο μετρήθηκαν την 19η έως την 20η ημέρα χορήγησης. 2 ώρες μετά την τελευταία δόση (12 ώρες χωρίς τροφή ή νερό), τα ποντίκια ζυγίστηκαν, αφαιρέθηκαν τα μάτια τους, συλλέχθηκε αίμα, διαχωρίστηκε ο ορός και τα περιεχόμενα E2, T, LH και FSH στον ορό μετρημένος; τα ποντίκια στη συνέχεια θυσιάστηκαν με εξάρθρωση του τραχήλου της μήτρας και ανατέμθηκαν. , αφαιρέστε τον θύμο, τη σπλήνα και τον ιστό της μήτρας, ζυγίστε το υγρό βάρος τους και υπολογίστε τον δείκτη οργάνου (δείκτης οργάνου=υγρό βάρος οργάνου mg/βάρος ποντικού g) και, στη συνέχεια, αφαιρέστε την υπόφυση. στερεώστε τον θύμο, τη σπλήνα, τη μήτρα και την υπόφυση σε διάλυμα φορμαλίνης 10%, ενσωματωμένο σε παραφίνη, τομή, χρώση HE και οι μορφολογικές αλλαγές των ιστών κάθε ομάδας παρατηρήθηκαν κάτω από ελαφρύ μικροσκόπιο.

2.2.1 Δοκιμή για τον αριθμό των ανεξάρτητων δραστηριοτήτων

Τα ποντίκια σε κάθε ομάδα τοποθετήθηκαν στη συσκευή εθελοντικής δραστηριότητας, προσαρμόστηκαν πρώτα στο περιβάλλον για 1 λεπτό και στη συνέχεια μετρήθηκε ο αριθμός των εθελοντικών δραστηριοτήτων εντός 5 λεπτών.

2.2.2 Δοκιμή αποφυγής σκότους

Βάλτε τα ποντίκια σε κάθε ομάδα στο κουτί δοκιμής με τις ουρές τους στραμμένες προς το μικρό άνοιγμα στο σκοτεινό θάλαμο και κάντε εκπαίδευση. Μετά από 24 ώρες, η περίοδος λανθάνουσας κατάστασης των ποντικών που εισήλθαν στο σκοτεινό θάλαμο για πρώτη φορά και ο αριθμός των ηλεκτροσόκ που έλαβαν μέσα σε 5 λεπτά μετά την είσοδο στο σκοτεινό θάλαμο μετρήθηκαν εκ νέου.

2.2.3 Μέθοδος προσδιορισμού κιτ

Λήψη δειγμάτων ορού: Χρησιμοποιήστε δοκιμαστικούς σωλήνες που δεν περιέχουν πυρετογόνα και ενδοτοξίνες. Αποφύγετε οποιαδήποτε κυτταρική διέγερση κατά τη διάρκεια της επέμβασης. Αφού συλλέξετε το αίμα, φυγοκεντρήστε το στις 3000 rpm για 10 λεπτά για να διαχωρίσετε γρήγορα και προσεκτικά τον ορό και τα ερυθρά αιμοσφαίρια. Μέθοδος προσδιορισμού κιτ ανίχνευσης οιστραδιόλης ποντικιού (E2): Βγάλτε τις απαιτούμενες λωρίδες από τη σακούλα από αλουμινόχαρτο που έχει εξισορροπηθεί σε θερμοκρασία δωματίου για 20 λεπτά και σφραγίστε τις υπόλοιπες λωρίδες σε μια αυτοσφραγιζόμενη σακούλα και επιστρέψτε τις στους 4 βαθμούς . Εγκαταστήστε τυπικά φρεάτια και φρεάτια δειγματοληψίας και προσθέστε 50 μL προτύπων διαφορετικών συγκεντρώσεων σε κάθε τυπικό φρεάτιο. Πρώτα, προσθέστε 10 μL του προς δοκιμή δείγματος στο πηγαδάκι του δείγματος και, στη συνέχεια, προσθέστε 40 μL αραιωτικού δείγματος (δηλαδή, το δείγμα αραιώνεται 5 φορές). μην το προσθέσετε στο κενό καλά. Εκτός από το τυφλό φρεάτιο, προσθέστε 100 μL αντισώματος ανίχνευσης σημασμένο με υπεροξειδάση χρένου σε κάθε φρεάτιο του τυπικού φρεατίου και δειγματοληψίας και σφραγίστε καλά την αντίδραση με μια μεμβράνη σφράγισης. Επωάστε σε υδατόλουτρο 37 μοιρών ή επωαστήρα για 60 λεπτά. Απορρίψτε το υγρό, στεγνώστε τα σε απορροφητικό χαρτί, γεμίστε κάθε φρεάτιο με διάλυμα πλύσης και αφήστε το να σταθεί για 1 λεπτό. Ανακινήστε το υγρό πλυσίματος, στεγνώστε το σε απορροφητικό χαρτί και επαναλάβετε το πλύσιμο του πιάτου 5 φορές. Προσθέστε πρώτα 50 μL καθένα από τα υποστρώματα Α και Β σε κάθε φρεάτιο και επωάστε στους 37 βαθμούς στο σκοτάδι για 15 λεπτά. Αφαιρέστε την πλάκα ενζύμου, προσθέστε 50 μL διαλύματος τερματισμού σε κάθε φρεάτιο και μέσα σε 15 λεπτά, μετρήστε την τιμή απορρόφησης (τιμή OD) κάθε φρεατίου σε μήκος κύματος 450 nm. Σύμφωνα με τη συγκέντρωση του τυπικού προϊόντος και την αντίστοιχη τιμή OD, σχεδιάστε την τυπική καμπύλη παλινδρόμησης προϊόντος και υπολογίστε την τιμή συγκέντρωσης κάθε δείγματος σύμφωνα με την εξίσωση της καμπύλης. Η τελική συγκέντρωση είναι η πραγματική μετρούμενη συγκέντρωση πολλαπλασιαζόμενη επί τον συντελεστή αραίωσης. Μεταξύ αυτών, οι συγκεντρώσεις των τυπικών προϊόντων (S0-S5) είναι 0, 4, 8, 16, 32 και 64 pmol/L. Οι συγκεντρώσεις του προτύπου κιτ ανίχνευσης ELISA τεστοστερόνης (Τ) ποντικού (S0-55) είναι 0, 50, 100, 200, 400 και 800 pg/mL.

Οι συγκεντρώσεις του προτύπου κιτ ανίχνευσης ELISA της ωχρινοτρόπου ορμόνης (LH) ποντικού (S{0}}) είναι 0, 0,5, 1, 2, 4, 8mIU/mL.

Οι συγκεντρώσεις του προτύπου κιτ ανίχνευσης της ωοθυλακιοτρόπου ορμόνης (FSH) ποντικού (S0-55) είναι 0, 5, 10, 20, 40 και 80 mIU/mL.

2.3 Μέθοδοι στατιστικής επεξεργασίας

Για την ανάλυση δεδομένων, χρησιμοποιήθηκε ιατρικό στατιστικό πακέτο SPSS17.{1}} για τη στατιστική επεξεργασία των δεδομένων. Τα δεδομένα μετρήσεων εκφράστηκαν ως μέση ± τυπική απόκλιση (-x±s). Η μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης χρησιμοποιήθηκε για σύγκριση μεταξύ των ομάδων. Η μέθοδος LSD χρησιμοποιήθηκε για τον έλεγχο της ομοιογένειας των διακυμάνσεων. , η δοκιμή Games-Howell χρησιμοποιήθηκε για ανομοιόμορφες διακυμάνσεις και η δοκιμή Ridit χρησιμοποιήθηκε για δεδομένα βαθμού.

Σχήμα 3 Επίδραση του γλυκοζίτη φαινυλαιθανόλης Cistanche στην λανθάνουσα περίοδο πειράματος αποφυγής σκοταδιού σε μοντέλο περιεμμηνοπαυσιακού ποντικού

Σχήμα 4 Η επίδραση του γλυκοζίτη φαινυλαιθανόλης Cistanche στον αριθμό των ηλεκτροσόκ στο πείραμα αποφυγής του σκοταδιού του μοντέλου ποντικού περιεμμηνοπαυσιακής περιόδου. Μπορεί να φανεί από τον Πίνακα 3 και τα Σχήματα 3~4 ότι σε σύγκριση με την κενή ομάδα, η περίοδος επώασης και ο αριθμός των ηλεκτροσόκ των ποντικών στην ομάδα μοντέλου μειώθηκαν σημαντικά (Ρ<0.01), reflecting the decline in memory in the mouse perimenopausal model. Compared with the model group, Gengnianan, soybean isoflavones, and large and medium doses of Cistanche phenylethanoid glycosides could significantly increase the latency of the dark avoidance test in mice, reduce the number of electric shocks (P<0.01), and improve the memory of mice.

3 Επιδράσεις στον δείκτη οργάνων σε μοντέλο περιεμμηνοπαυσιακού ποντικού

Οι δείκτες θύμου, σπλήνας και μήτρας ποντικών σε κάθε πειραματική ομάδα φαίνονται στον Πίνακα 4 και στο Σχήμα 5.

Όπως φαίνεται από τον Πίνακα 4 και το Σχήμα 5, σε σύγκριση με την κενή ομάδα, ο δείκτης της μήτρας των ποντικών στην ομάδα μοντέλου ήταν σημαντικά χαμηλότερος (Ρ<0.01), indicating that removal of the ovaries caused uterine atrophy in the perimenopausal model mice, and removal of the ovaries resulted in insufficient estrogen secretion. Causes immune organ atrophy in perimenopausal mice. Compared with the model group, soy isoflavones, Gengnianan, large and medium doses of Cistanche phenylethanol glycoside can significantly improve the thymus, spleen and uterine index (P<0.01), and low dose Cistanche phenylethanol glycoside can significantly improve the perimenopausal model. Mouse uterine index (P<0.05). 4 Effects on serum sex hormone levels in mouse perimenopausal model

Περιεχόμενα E2, T, FSH και LH στον ορό ποντικών σε κάθε ομάδα. Δείτε τους Πίνακες 5~6 και τις Εικόνες 6~9. Μπορεί να φανεί από τους πίνακες 5~6 και τα σχήματα 6~9 ότι σε σύγκριση με την τυφλή ομάδα, τα επίπεδα Ε2 και Τ στον ορό των ποντικών στην ομάδα μοντέλου ήταν σημαντικά μειωμένα (Ρ<0.01), and the levels of LH and FSH were significantly increased (P<0.01). , indicating that removal of ovaries leads to disorders of sex hormone levels in the serum of perimenopausal model mice and the perimenopausal mouse model was successfully replicated. Compared with the model group, each administration group can significantly reduce the elevated LH level in serum (P<0.01); large and medium doses of Cistanche phenylethanol glycoside, Gengniangan, and soybean isoflavones can significantly increase the levels of perimenopausal mice. E2 and T levels in the serum of the early-stage model (P<0.01) and reduced elevated FSH and LH levels in the serum. Low-dose Cistanche phenylethanol glycoside can significantly increase serum E2 levels and reduce serum FSH levels (P<0.05); low-dose Cistanche phenylethanoid glycoside has a tendency to increase serum T levels.

4 Επιδράσεις στα επίπεδα ορμονών φύλου στον ορό σε μοντέλο περιεμμηνοπαυσιακού ποντικού

Περιεχόμενα E2, T, FSH και LH στον ορό ποντικών σε κάθε ομάδα. Δείτε τους Πίνακες 5~6 και τις Εικόνες 6~9.

Μπορεί να φανεί από τους πίνακες 5~6 και τα σχήματα 6~9 ότι σε σύγκριση με την τυφλή ομάδα, τα επίπεδα Ε2 και Τ στον ορό των ποντικών στην ομάδα μοντέλου ήταν σημαντικά μειωμένα (Ρ<0.01), and the levels of LH and FSH were significantly increased (P< 0.01), indicating that removal of ovaries leads to disorder of sex hormone levels in the serum of perimenopausal model mice, and the perimenopausal mouse model was successfully replicated. Compared with the model group, each administration group can significantly reduce the elevated LH level in serum (P<0.01); large and medium doses of Cistanche deserticola phenylethanol glycoside, Gengniannian, and soybean isoflavones can significantly reduce the level of LH in mice. E2 and T levels in serum of perimenopausal model (P<0.01) and reduced elevated FSH and LH levels in serum. Low-dose Cistanche deserticola phenylethanol glycoside can significantly increase serum E2 levels and reduce serum FSH levels (P<0.05); low-dose Cistanche deserticola phenylethanoid glycoside has a tendency to increase serum T levels. 5. Effects on organ tissue morphology in perimenopausal model mice

Τα παθολογικά και ιστολογικά αποτελέσματα παρατήρησης της μήτρας, του θύμου αδένα, της σπλήνας και της υπόφυσης ποντικών σε κάθε πειραματική ομάδα έχουν ως εξής. Οι παθολογικές φωτογραφίες φαίνονται στο Παράρτημα 1 για τις παθολογικές φωτογραφίες περιεμμηνοπαυσιακών ποντικών.

5.1 Επίδραση στη μορφολογία του ιστού της μήτρας ποντικών περιεμμηνοπαυσιακών μοντέλων

Σύμφωνα με τους διαφορετικούς βαθμούς αλλαγών στο ενδομήτριο, στους αδένες και στο μυομήτριο των ποντικών σε κάθε ομάδα πειραμάτων, χρησιμοποιήθηκαν ημιποσοτικά πρότυπα για τη διαίρεση της μορφολογίας του παθολογικού ιστού σε τέσσερα επίπεδα. Μετρήθηκαν οι μήτρες ποντικών σε κάθε ομάδα πειραμάτων. Τα αποτελέσματα της παρατήρησης φαίνονται στον Πίνακα 7. Πίνακας 7 Επίδραση του γλυκοζίτη φαινυλαιθανόλης Cistanche deserticola στις παθολογικές αλλαγές της μήτρας σε ποντίκια μοντέλα περιεμμηνοπαυσιακής Μονάδας: μόνο

"-" Τα ενδομήτρια επιθηλιακά κύτταρα, οι αδένες, το μυομήτριο και ο ορός είναι όλα φυσιολογικά. "+" τα ενδομήτρια επιθηλιακά κύτταρα και οι αδένες είναι ατροφημένα και το μυομήτριο και ο ορός είναι φυσιολογικά. "++" το ενδομήτριο επιθήλιο Τα κύτταρα και οι αδένες είναι μερικώς ατροφημένα, το μυϊκό στρώμα είναι ελαφρώς ατροφημένο και ο ορός είναι φυσιολογικός. Τα "+++" επιθηλιακά κύτταρα και αδένες του ενδομητρίου είναι σημαντικά ατροφημένα και ο ορός είναι φυσιολογικός.

Μετά τη δοκιμή Ridit, μπορεί να φανεί από τον παραπάνω πίνακα ότι σε σύγκριση με την κενή ομάδα, η μήτρα των ποντικών στην ομάδα μοντέλου παρουσίασε σημαντικές παθολογικές βλάβες ιστού (P<0.01). Compared with the model group, soy isoflavone vitamin E soft capsules, Gengnianan capsules, and high-dose Cistanche deserticola phenylethanol glycoside can significantly improve the uterine pathological tissue lesions of mice (P<0.01), and medium-dose Cistanche deserticola phenylethanol glycoside can Significantly improved uterine pathological tissue lesions in mice (P<0.05). 5.2 Effect on thymus and spleen tissue morphology in mouse perimenopausal model

Χρησιμοποιήστε ένα μικρόμετρο για να μετρήσετε το πάχος των παχύτερων και στενότερων τμημάτων του φλοιού του θύμου αδένα κάθε ποντικού σε κάθε πειραματική ομάδα για να λάβετε τον μέσο όρο. χρησιμοποιήστε ένα μικρόμετρο για να τοποθετήσετε τη γραμμή βάσης στο σπληνικό οζίδιο και μετρήστε τα δύο πάχη με την κεντρική αρτηρία ως κέντρο. Το πάχος των σπληνικών όζων και στις δύο πλευρές υπολογίστηκε και υπολογίστηκε ο μέσος όρος. τα αποτελέσματα φαίνονται στον Πίνακα 8 και στο Σχήμα 10.

Πίνακας 8 Επιδράσεις του γλυκοζίτη φαινυλαιθανόλης Cistanche deserticola σε παθολογικές αλλαγές του θύμου αδένα και του σπλήνα σε ποντίκια μοντέλα περιεμμηνοπαυσιακής περιόδου (-x±s)

Όπως φαίνεται από τον Πίνακα 8 και το Σχήμα 10, σε σύγκριση με την τυφλή ομάδα, το πάχος του φλοιού του θύμου και ο όγκος των σπληνικών όζων στην ομάδα μοντέλου μειώθηκαν σημαντικά (Ρ<0.01), indicating that the thymus and spleen volumes atrophied after the perimenopausal model was created in mice. Compared with the model group, high-dose Cistanche deserticola phenylethanol glycoside can significantly thicken the thymic cortex (P<0.01), and medium-dose Cistanche deserticola phenylethanoid glycoside can significantly thicken the thymic cortex (P<0.05). Each medication group could significantly increase the volume of splenic nodules. 5.3 Effect on pituitary tissue morphology in mouse perimenopausal model

Το οπτικό πεδίο υψηλής μεγέθυνσης καλύπτει μια περιοχή 10000μm

2. Μετρήστε τον αριθμό των βασεόφιλων κυττάρων και των κυττάρων της πρόσθιας υπόφυσης στο μικροορθογώνιο πλαίσιο. Τα αποτελέσματα φαίνονται στον Πίνακα 9 και στα Σχήματα 11~12.

Μπορεί να φανεί από τον Πίνακα 9 και τα Σχήματα 11-12 ότι σε σύγκριση με την τυφλή ομάδα, ο αριθμός των βασεόφιλων κυττάρων και των κυττάρων της πρόσθιας υπόφυσης στην ομάδα μοντέλου ήταν σημαντικά μειωμένος (Ρ<0.01), indicating that after the perimenopausal model was created in mice, secretion of The cellular source of gonadotropins is reduced. Compared with the model group, each medication group could significantly increase the number of pituitary basophil cells (P<0.01). Except for the low-dose Cistanche deserticola phenylethanol glycoside group, all other medication groups could significantly increase the number of anterior pituitary cells (P<0.01). P<0.01).