Πόσα γνωρίζετε για τη χρόνια νεφρική νόσο;

Επικοινωνία: emily.li@wecistanche.com

Αξιολόγηση της λευκωματουρίας και η σχέση της με την αρτηριακή πίεση σε σκύλους με χρόνια νεφρική νόσο

Άντζελα Μπάτσιτς¹, Marcia M. Kogika¹, et.al

Λέξεις-κλειδιάΛευκωματουρία, κυνικός,χρόνια νεφρική νόσος, ELISA, υπέρταση,νεφρική λειτουργία

ΙστορικόΗ μικρολευκωματινουρία και η υπέρταση έχουν από καιρό συσχετιστεί με μια φυλασσόμενη πρόγνωση σε ανθρώπους με ποικίλες ασθένειες. Στην κτηνιατρική, δοκιμές για μικρολευκωματινουρία έχουν χρησιμοποιηθεί για έγκαιρη ανίχνευσηνεφρική βλάβη, αλλά υπάρχουν λίγες πληροφορίες σχετικά με τη συσχέτισή της με την υψηλή αρτηριακή πίεση σε σκύλους μεχρόνια νεφρική νόσος(ΧΝΝ). Στόχος: Ο στόχος αυτής της μελέτης ήταν η αξιολόγηση της λευκωματουρίας και η συσχέτισή της με την αρτηριακή υπέρταση σε σκύλους με ΧΝΝ.

ΜέθοδοιΗ αναλογία λευκωματίνης ούρων: κρεατινίνη (UAC), η αναλογία πρωτεΐνης ούρων: κρεατινίνης (UPC) και η συστολική αρτηριακή πίεση προσδιορίστηκαν σε 39 κλινικά υγιείς σκύλους και 40 σκύλους με ΧΝΝ.

ΑποτελέσματαΗ UAC σε σκύλους με ΧΝΝ (εύρος, {{{0}}.002–7,99; διάμεσος, {{1{0}}}}, ήταν στατιστικά διαφορετική. από αυτό των σκύλων ελέγχου (εύρος, 0.0005–{0.01; διάμεσος, {{42} }.002). Η μικρολευκωματινουρία (UAC 0,03–0,3) και η μικρολευκωματινουρία (UAC 4 0.3) ανιχνεύθηκαν στο 32,5 τοις εκατό και στο 50 τοις εκατό των σκύλων με ΧΝΝ, αντίστοιχα. Το 60% (24/40) των σκύλων με ΧΝΝ είχαν συστολική πίεση Z180 mmHg. σε αυτούς τους σκύλους, ο λόγος UAC (εύρος, 0,006-7,99, διάμεσος, 1,72) ήταν σημαντικά υψηλότερος από ό,τι σε σκύλους με ΧΝΝ και συστολική πίεση o 180 mmHg (εύρος, 0,002-4,83, διάμεσος, 0,10). Από υπερτασικούς σκύλους με ΧΝΝ, εκείνοι με UPC 41.0 είχαν συνήθως μακρολευκωματουρία, εκείνοι με UPC 0.5–1.0 είχαν συνήθως μικρολευκωματινουρία και εκείνοι με UPC o 0.5 συνήθως δεν είχαν λευκωματουρία.

συμπεράσματαΗ αναλογία UAC ήταν υψηλότερη σε υπερτασικούς από ό,τι σε κανονικά τασικούς σκύλους με ΧΝΝ. Οι δοκιμές που έχουν σχεδιαστεί για την ανίχνευση της μικρολευκωματινουρίας μπορεί να είναι χρήσιμες για υπερτασικούς σκύλους με ΧΝΝ και UPC 1.0 για την ανίχνευση της έναρξης και του μεγέθους της λευκωματουρίας. Μόλις εμφανιστεί η μακρολευκωματινουρία, η ίδια η αναλογία UPC μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τον ίδιο σκοπό.

Το Cistanche θεραπεύει τη νεφρική νόσο

Εισαγωγή

Η πρωτεϊνουρία έχει ενοχοποιηθεί ως ανεξάρτητος μεσολαβητής της εξέλιξης τουνεφρική νόσο.^1,2Σε αρουραίους με πειραματικά επαγόμενη πρωτεϊνουρία και σε ανθρώπους με φυσική εμφάνισηΝΕΦΡΙΚΗ ΑΝΕΠΑΡΚΕΙΑ, το μέγεθος της πρωτεϊνουρίας συσχετίζεται με το ρυθμό εξέλιξης τηςΝΕΦΡΙΚΗ ΑΝΕΠΑΡΚΕΙΑ.^3,4 Πρόσφατα, η συνολική θνησιμότητα και ο αριθμός των ουραιμικών κρίσεων σχετίστηκαν με πρωτεϊνουρία σε σκύλους μεχρόνια νεφρική νόσος(ΧΝΝ).⁵

Η μικρολευκωματινουρία γενικά ορίζεται ως η υποκλινική λευκωματουρία, δηλαδή ένας ρυθμός απέκκρισης λευκωματίνης που είναι ασυνήθιστα αυξημένος αλλά δεν μπορεί να ανιχνευθεί με τυπικές εργαστηριακές διαδικασίες, όπως η μέθοδος ρουτίνας dipstick.⁶ Αυτό σημαίνει ότι ο ρυθμός απέκκρισης λευκωματίνης είναι πάνω από το φυσιολογικό επίπεδο αλλά κάτω από το συνηθισμένο επίπεδο πρωτεϊνουρίας. Στους ανθρώπους, η μικρολευκωματινουρία έχει αναγνωριστεί από καιρό ως προγνωστικός παράγοντας όψιμης έναρξης κλινικής πρωτεϊνουρίας και νεφρικής νόσου τελικού σταδίου⁶καθώς και της ανάπτυξης διαβητικής νεφροπάθειας.⁷Ομοίως, η μικρολευκωματινουρία μπορεί να προηγείται της πρωτεϊνουρίας σε σκύλους με κληρονομική νεφροπάθεια^,8σε σκύλους που έχουν προσβληθεί από Dirofilaria immitis,⁹και σε τεριέ σιταριού με μαλακή επίστρωση που είναι γενετικά προδιατεθειμένα στην ανάπτυξη σπειραματικής νόσου.¹⁰

Η συνύπαρξη υπέρτασης και πρωτεϊνουρίας έχει ήδη αναφερθεί σε σκύλους με υπεραδρενοκορτιτισμό^11–13και σακχαρώδη διαβήτη,^14,15αλλά δεν έχουν δημοσιευθεί αναφορές σχετικά με τη συσχέτιση της συστηματικής αρτηριακής πίεσης με τη σοβαρότητα της πρωτεϊνουρίας και/ή της λευκωματουρίας σε σκύλους με ΧΝΝ. Οι Whittemore et al¹⁶ανέφερε ότι στις γάτες υπάρχει σημαντική συσχέτιση μεταξύ της αναλογίας λευκωματίνης ούρων: κρεατινίνης (UAC), υπέρτασης και αζωθαιμίας, και παρόμοια αποτελέσματα θα αναμένονταν σε σκύλους, αλλά η μελέτη δεν υποστήριξε αυτό το συμπέρασμα.
Είναι σημαντικό όχι μόνο να διαγνωστεί η λευκωματουρία και/ή η πρωτεϊνουρία, αλλά να εντοπιστούν και να ελέγχονται άλλοι παράγοντες που επίσης την επιδεινώνουν.^17–19Συστηματική υπέρταση, πιθανότατα δευτεροπαθής σε σκύλους μενεφρική νόσο^,20μπορεί να οδηγήσει σε σπειραματοσκλήρωση, σπειραματική ατροφία και πολλαπλασιαστική σπειραματίτιδα. Οι υπερτασικές νεφρικές αρτηριοαρτηριακές βλάβες μπορεί να προκαλέσουν εκφύλιση των νεφρικών σωληναρίων και διάμεση ίνωση.²¹

Οι ημιποσοτικές αναλύσεις (π.χ. ράβδοι στάθμης) συχνά υποτιμούν την πρωτεϊνουρία επειδή οι σκύλοι με ΧΝΝ συνήθως έχουν αραιωμένα δείγματα ούρων. Από την άλλη πλευρά, η αναλογία UAC συσχετίζεται σε μεγάλο βαθμό με τη συγκέντρωση λευκωματίνης στα ούρα που μετράται με χρονομετρημένη συλλογή ούρων και διορθώνει τη μεταβλητότητα στη διούρηση και τη συγκέντρωση των ούρων.^22,23 Στον άνθρωπο, η μικρολευκωματινουρία ορίζεται ως 30–300 mg λευκωματίνης/g κρεατινίνης, με αναλογία UAC 0,03–0,3 mg/mg.^24,25Έτσι, ο στόχος αυτής της μελέτης ήταν να προσδιοριστεί ο επιπολασμός και το μέγεθος της λευκωματουρίας σε σκύλους με ΧΝΝ και να διερευνηθεί εάν η υπέρταση σχετίζεται με την αύξηση της απέκκρισης λευκωματίνης. Για να επιτευχθεί αυτός ο στόχος, αναπτύχθηκε ένα ELISA ποσοτικής σύλληψης για την ποσοτικοποίηση της αλβουμίνης σε δείγματα ούρων από σκύλους με ΧΝΝ και προσδιορίστηκε η αναλογία UAC για την αξιολόγηση της σοβαρότητας της λευκωματουρίας.

Cistanche για βελτίωσηνεφρική λειτουργία

Υλικά και μέθοδοι

Των ζώων

Όλες οι διαδικασίες που αφορούν τη χρήση ζώων εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Δεοντολογίας για τη Φροντίδα και τη Χρήση των Ζώων της Σχολής Κτηνιατρικής του Πανεπιστημίου του Σάο Πάολο (πρωτόκολλο #378/2003). Η ομάδα ελέγχου περιελάμβανε 39 κλινικά υγιείς νορμοτασικούς σκύλους και των δύο φύλων (23 αρσενικά και 16 θηλυκά), ηλικίας 1-5 ετών και διαφορετικών φυλών. Η ομάδα ΧΝΝ περιελάμβανε 40 σκύλους (20 αρσενικά και 20 θηλυκά), 2-18 ετών, καθώς και από διαφορετικές ράτσες, με κλινική διάγνωση ΧΝΝ που κατηγοριοποιήθηκε στα στάδια 3 ή 4 σύμφωνα με την ταξινόμηση του συστήματος σταδιοποίησης που προτείνεται από το International Renal Interest Society.26 Τα κριτήρια για τη συμπερίληψη σκύλων στην ομάδα ΧΝΝ ήταν: ιστορικό και συμπληρωματικά εργαστηριακά ευρήματα συμβατά με ΧΝΝ, συμπεριλαμβανομένης της μη αναγεννητικής αναιμίας, της ισοσθενουρίας και της χρόνιας νεφρικής αζωθαιμίας (συγκέντρωση ορού κρεατινίνης Z2,0 mg/dL για 4 2 μήνες σε ενυδατωμένους σκύλους), καθώς και καμία προηγούμενη χορήγηση αντιυπερτασικών φαρμάκων.

Πίεση αίματος

Η συστολική αρτηριακή πίεση μετρήθηκε χρησιμοποιώντας τον ανιχνευτή ροής Doppler (Doppler Ultrasound Parks Medical Model 811B, Las Vegas, NV, USA). Το πλάτος της περιχειρίδας επιλέχθηκε να είναι 30-40 τοις εκατό της περιφέρειας του άκρου στο σημείο της τοποθέτησης. Για αυτήν τη μελέτη, η υπέρταση θεωρήθηκε παρούσα όταν ο μέσος όρος τουλάχιστον 5 διαφορετικών μετρήσεων που πραγματοποιήθηκαν διαδοχικά ήτανZ180 mmHg.27 Τα σκυλιά τοποθετήθηκαν και κρατήθηκαν σε ήσυχο περιβάλλον με τον ιδιοκτήτη πριν από τη διαδικασία. Ο ίδιος κλινικός ιατρός πραγματοποίησε τις μετρήσεις της αρτηριακής πίεσης σε όλους τους σκύλους της μελέτης.

Ουροανάλυση

Τα δείγματα ούρων συλλέχθηκαν ασηπτικά με κυστεοκέντηση ή καθετηριασμό ουρήθρας και υποβλήθηκαν για πλήρη ανάλυση ούρων, συμπεριλαμβανομένης της μικροσκοπικής αξιολόγησης του ιζήματος των ούρων. Τα ζώα των οποίων τα δείγματα ούρων είχαν μακροσκοπικές ενδείξεις αιματουρίας ή/και μικροσκοπικές ενδείξεις πυουρίας και βακτηριουρίας αποκλείστηκαν. Δείγματα υπερκειμένου ούρων καταψύχθηκαν και αποθηκεύτηκαν στους -201 C για έως και 1 έτος για τον μετέπειτα προσδιορισμό της αναλογίας UAC.

Καθαρισμός αλβουμίνης σκύλου και ανοσοποίηση κουνελιών

Πρώτον, η λυοφιλοποιημένη αλβουμίνη σκύλου (Fraction V, #A9263, Sigma, St Louis, ΜΟ, ΗΠΑ) καθαρίστηκε περαιτέρω με χρωματογραφία συγγένειας σε στήλες Blue Sepharose και Q-sepharose (GE Biotech, Piscataway, NJ, USA). Στη συνέχεια, 2 κουνέλια ανοσοποιήθηκαν ενδομυϊκά με

η καθαρισμένη λευκωματίνη στο ανοσοενισχυτικό Freund σε διαστήματα δεκαπενθήμερων και η IgG απομονώθηκε από τον ορό.²⁸

Ηλεκτροφόρηση και Western blotting καθαρισμένης αλβουμίνης σκύλου

Η κηλίδωση Western επιτεύχθηκε με τροποποίηση ενός πρωτοκόλλου που περιγράφηκε προηγουμένως.²⁹ Εν συντομία, μη ανηγμένα δείγματα ούρων από υγιή σκύλο και σκύλο με ΧΝΝ, δείγμα ορού από υγιή σκύλο και καθαρισμένη αλβουμίνη σκύλου ηλεκτροφορήθηκαν σε γέλες δωδεκυλοθειικού νατρίου-πολυακρυλαμιδίου 11 τοις εκατό.³⁰Οι πρωτεΐνες μεταφέρθηκαν σε φύλλα μεμβράνης νιτροκυτταρίνης ({{0}}.22 mm μέγεθος πόρων, Sigma) στα 15 V για 2 ώρες, χρησιμοποιώντας ένα ημιξηρό σύστημα στύπωσης μεταφοράς (BioRad, Hercules, CA, USA). Οι μεμβράνες ξεπλύθηκαν με ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης (10 mM Tris, 150 mM NaCl, 0,1 τοις εκατό [v/v] Tween 20, pH 7,5) και στη συνέχεια επωάστηκαν με διάλυμα αποκλεισμού (5 τοις εκατό [v /v] ζελατίνη από δέρμα ψαριού κρύου νερού [Sigma G7765] διαλυμένη σε ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης) για 18 ώρες στους 41 C. Οι μεμβράνες επωάστηκαν με αντισώματα διαλυμένα σε ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης που περιείχε 0,5 τοις εκατό (ο/ο) ζελατίνη ψαριού για 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου υπό ανάδευση. Για να αξιολογηθεί η ειδικότητα των αντισωμάτων έναντι της καθαρισμένης αλβουμίνης σκύλου, οι μεμβράνες επωάστηκαν με ολική IgG λευκωματίνης σκύλου κατά του σκύλου. Μετά το πλύσιμο, οι λωρίδες επωάστηκαν με σύζευγμα IgG-υπεροξειδάσης αντι-κουνελιού κατσίκας (Sigma A6154) για 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου με ανάδευση. Όλα τα αντισώματα και τα συζεύγματα αραιώθηκαν σε ένα ρυθμιστικό έκπλυσης που περιείχε 0,5 τοις εκατό (ο/ο) ζελατίνη ψαριού. Η αντίδραση αναπτύχθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως.³¹

ELISA για αλβουμίνη σκύλου σε δείγματα ούρων

Για τη μέτρηση της λευκωματίνης σε δείγματα ούρων, πλάκες μικροτιτλοδότησης (Maxisorp-Nunc Immunoplate, Μόντρεαλ, Καναδάς) επικαλύφθηκαν όλη τη νύχτα στους 41 C με ένα διάλυμα 1{4}}0 mg/mL αλβουμίνης κατά του σκύλου IgG κουνελιού διαλυμένο σε 0.1 Μ ανθρακικό ρυθμιστικό διάλυμα (ρΗ 9,6) και στη συνέχεια μπλοκαρίστηκε με 3 τοις εκατό καζεΐνη διαλυμένη σε ανθρακικό ρυθμιστικό. Οι τυπικές καμπύλες έξι σημείων για την αλβουμίνη κατασκευάστηκαν χρησιμοποιώντας καθαρισμένη αλβουμίνη σκύλου, σειριακά αραιωμένη (σε συγκεντρώσεις 250.0, 83,3, 27,8, 9,3, 3,1 και 1,0 ng/mL) σε επώαση ρυθμιστικό διάλυμα (0,05 τοις εκατό Tween 20 και 0,6 τοις εκατό ζελατίνη ψαριού σε αλατούχο διάλυμα ρυθμισμένο με φωσφορικά, ρΗ 7,4). Τα δείγματα ούρων αραιώθηκαν επίσης κατάλληλα (1:100, 1:300, 1:500, 1:1000, 1:10,000 και 1:50.000) σε ρυθμιστικό διάλυμα επώασης, έτσι ώστε οι αντιδράσεις να εμφανίζονται εντός του γραμμικού εύρους της τυπικής καμπύλης (1,03–250 ng/mL). Τα δείγματα και τα πρότυπα αναλύθηκαν εις τριπλούν. Το ίδιο αντίσωμα χρησιμοποιήθηκε ως δευτερεύον αντίσωμα, αλλά συζεύχθηκε με βιοτίνη29,32 και χρησιμοποιήθηκε σε συγκέντρωση 3,15 ng/mL, διαλυμένο σε ρυθμιστικό διάλυμα επώασης. Οι πλάκες στη συνέχεια επωάστηκαν με 100 ng/mL συζυγές αβιδίνης-υπεροξειδάσης (Sigma A3151) και στη συνέχεια με ένα φρέσκο ​​αντιδραστήριο ανάπτυξης χρώματος, όπως περιγράφεται αλλού.33 Η συγκέντρωση λευκωματίνης ούρων για κάθε δείγμα προέκταση από την τυπική καμπύλη και τα αποτελέσματα διορθώθηκαν την αρχική αραίωση του δείγματος.

Cistanche γιανεφρό

Αναλογίες UAC και πρωτεΐνης ούρων: κρεατινίνης (UPC).

Η συγκέντρωση της ολικής πρωτεΐνης στα ούρα (mg/dL) μετρήθηκε χρησιμοποιώντας μια ανάλυση Coomassie G{{0}}34. κάθε δείγμα αναλύθηκε εις τριπλούν και οι τιμές λήφθηκαν από μια 8-σημειακή τυπική καμπύλη (0.025, 0.075, {{16} }}.10, 0,50, 1,0, 1,5, 2,0, 2,5 και 3,0 mg/mL). Η συγκέντρωση κρεατινίνης ούρων (mg/dL) προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας μια δοκιμασία πικρικού οξέος35 σε έναν αυτοματοποιημένο αναλυτή κλινικής χημείας (Liasys, AMS, Ρώμη, Ιταλία) και εκτελέστηκε με ελέγχους ποιότητας (Precinorm Uplus and Precipath Uplus, Roche Diagnostics, Mannheim, Γερμανία). Η UAC προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας τη συγκέντρωση λευκωματίνης (mg/dL) που ελήφθη με ELISA. Επειδή όλες οι αναλύσεις αναφέρθηκαν ως mg/dL, το UAC και το UPC εκφράστηκαν χωρίς μονάδες.

Στατιστική ανάλυση

Η κατανομή Gauss διερευνήθηκε χρησιμοποιώντας τη δοκιμή Kolmogorov-Smirnov. Οι αναλογίες UPC και UAC δεν ήταν κανονικά κατανεμημένες, επομένως η δοκιμή Mann-Whitney χρησιμοποιήθηκε σε συγκρίσεις. Για στατιστική ανάλυση χρησιμοποιήθηκε το πακέτο λογισμικού SigmaStat 3.1 (Chicago, IL, USA). Οι διαφορές με το P .05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές.

Αποτελέσματα

Η λευκωματίνη κατά του σκύλου IgG κουνελιού ήταν ειδική για καθαρισμένη λευκωματίνη σκύλου με βάση την κηλίδωση Western (Εικόνα 1), επειδή μόνο 1 ζώνη πρωτεΐνης σχετικής μοριακής μάζας παρόμοια με εκείνη της λευκωματίνης σκύλου βρέθηκε σε όλες τις λωρίδες. Το πρωτόκολλο ELISA που χρησιμοποιήθηκε για τη μέτρηση της συγκέντρωσης λευκωματίνης στα δείγματα ούρων ήταν εξαιρετικά ευαίσθητο, με όριο ανίχνευσης περίπου 0,5 ng/mL.

Η αναλογία UPC σε κλινικά υγιείς νορμοτασικούς σκύλους (n {{0}}; εύρος, 0.04–{0.29; διάμεσος, 0 .10) ήταν σημαντικά χαμηλότερο (P o.0{{30}}}01) από ότι σε σκύλους με ΧΝΝ (n=40; εύρος, 0,13–25,08 ; διάμεσος, 1.86). Το εξήντα πέντε τοις εκατό (26/40) των σκύλων με ΧΝΝ είχαν UPC 4 1.0, το 20 τοις εκατό (8/40) είχαν UPC μεταξύ 0,5 και 1,0 και το 15 τοις εκατό (6/40) είχαν UPC o 0,5 (Πίνακας 1). Η πλειοψηφία (38/40, 95 τοις εκατό) των σκύλων με ΧΝΝ είχαν αναλογία UPC Z0,2.
Η αναλογία UAC σε κλινικά υγιείς σκύλους (εύρος, {{0}}.0005–{{0.01; διάμεσος, 0,002) ήταν επίσης σημαντικά χαμηλότερος (P o,0001) από ό,τι σε σκύλους με ΧΝΝ (εύρος, 0,002-7,99, διάμεσος, 0,38) (Εικόνα 2). Η αναλογία UAC κυμαινόταν από 0,03 έως 0,3 (μικρολευκωματινουρία) στο 32,5 τοις εκατό (13/40) των σκύλων με ΧΝΝ και ήταν 4 0.3 (μακρολευκωματινουρία) στο 50 τοις εκατό (20/40) των σκύλων με ΧΝΝ (Πίνακας 1 ).

Υπέρταση ανιχνεύθηκε σε 24/40 (60 τοις εκατό) σκύλους με ΧΝΝ. Οι σκύλοι με υπέρταση κυμαίνονταν σε ηλικία από 2 έως 18 ετών (μέσος όρος συν -SD, 9,1 συν - 3,7 έτη), ενώ οι φυσιολογικοί σκύλοι κυμαίνονταν από 2 έως 12 ετών (7,9 συν - 3,3 έτη ).

Λαμβάνοντας υπόψη τη μικρολευκωματινουρία ως το εύρος UAC που ορίζεται για τους ανθρώπους ({{0}}.03–0,3), η μικρολευκωματινουρία ανιχνεύτηκε πιο συχνά στους φυσιολογικούς ασθενείς (7/16, 43,7 τοις εκατό ) παρά στους υπερτασικούς (6 /24, 25 τοις εκατό ) σκύλοι με ΧΝΝ. Αντίθετα, η μακρολευκωματινουρία παρατηρήθηκε συχνότερα σε υπερτασικούς (15/24, 62,5 τοις εκατό ) παρά σε κανονικά (5/16, 31,3 τοις εκατό) σκύλους με ΧΝΝ. Δεν παρατηρήθηκε λευκωματουρία σε 3/24 (12,5 τοις εκατό ) υπερτασικούς και σε 4/16 (25,0 τοις εκατό ) κανονικά σκύλους με ΧΝΝ (Πίνακας 1).

Η αναλογία UAC σε υπερτασικούς σκύλους με ΧΝΝ (n {{0}}; εύρος, {{1{0}}.006–7,99; διάμεσος, 1,72. ) ήταν σημαντικά υψηλότερο (P =,0183) από ό,τι σε σκύλους με φυσιολογική πίεση με ΧΝΝ (n=16; εύρος, 0,002–4,83, διάμεσος, 0,10) (Εικόνα 3). Υπέρταση παρατηρήθηκε σε 6/13 (46,1 τοις εκατό) σκύλους μικρολευκωματινουρικούς και σε 15/20 (75 τοις εκατό) σκύλους με μακρολευκωματινουρικούς σκύλους με ΧΝΝ. Δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά (P =.062) στην αναλογία UPC μεταξύ υπερτασικού (n {= 24· εύρος, 0,20–25,08· διάμεσος, 3,07) και φυσιολογικής πίεσης (n=16· εύρος, 0,13–4,70, διάμεσος, 1,10) σκύλοι με ΧΝΝ.

Συζήτηση

Οι αναλογίες UAC που λήφθηκαν σε κλινικά υγιείς σκύλους χρησιμοποιώντας την τεχνική μας ELISA ποσοτικής σύλληψης ήταν παρόμοιες με αυτές που αναφέρθηκαν για υγιή άτομα^36,37και γάτες.³⁸Το μέγεθος της λευκωματουρίας σε σκύλους με ΧΝΝ, όπως εκτιμήθηκε από το UAC, ήταν στατιστικά υψηλότερο από αυτό των υγιών σκύλων ελέγχου. Λαμβάνοντας υπόψη ότι οι σκύλοι με ΧΝΝ ταξινομήθηκαν ως με στάδια 3 και 4 της νόσου, το μεγαλύτερο μέγεθος της λευκωματουρίας σε αυτήν την ομάδα μπορεί να συσχετιστεί με το ρυθμό εξέλιξης της νεφρικής νόσου όπως είχε αποδειχθεί προηγουμένως σε αρουραίους και ανθρώπους.^3,4

Οι μισοί από τους σκύλους με ΧΝΝ είχαν συγκεντρώσεις λευκωματίνης ούρων στο εύρος των μακρολευκωματινουρικών, όπως θα αναμενόταν, αλλά το 32,5 τοις εκατό των σκύλων με ΧΝΝ ήταν μικρολευκωματινουρικά και το 17,5 τοις εκατό ήταν φυσιολογικά λευκωματινουρικά. Ως εκ τούτου, στην τελευταία ομάδα, η χρήση μεθόδων ρουτίνας για την ανίχνευση της μικρολευκωματινουρίας θα μπορούσε να έχει κάποιο όφελος. Επιπλέον, οι δοκιμές για την ανίχνευση της μικρολευκωματινουρίας θα μπορούσαν να χρησιμοποιηθούν για την παρακολούθηση της θεραπείας καθώς και για την παρακολούθηση της εξέλιξης της νόσου όχι μόνο σε μικρολευκωματινουρικούς σκύλους αλλά και σε φυσιολογικούς σκύλους με ΧΝΝ. Η χρήση αυτών των δοκιμών σε σκύλους με φυσιολογική λευκωματουρία θα μπορούσε να βοηθήσει τους κλινικούς ιατρούς να αναγνωρίσουν την πρώιμη έναρξη της λευκωματουρίας και να εισαγάγουν επαρκή θεραπευτικά μέτρα αμέσως μόλις εντοπιστεί. Από την άλλη πλευρά, στους μικρολευκωματινουρικούς σκύλους, ο στόχος θα ήταν η προσθήκη νέων φαρμάκων στο θεραπευτικό σχήμα ή/και η αύξηση της δόσης των τρεχόντων φαρμάκων για τη μείωση του μεγέθους της λευκωματουρίας και συνεπώς την καθυστέρηση της εξέλιξής της σε μακρολευκωματινουρία.

The data reported herein that all dogs with CKD and macroalbuminuria also had a UPC>1.0 μπορεί να προτείνει ότι όταν η μακρολευκωματουρία έχει ήδη εκδηλωθεί, οι τιμές UPC μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τους σκοπούς που αναφέρθηκαν προηγουμένως, καθώς οι σκύλοι έχουν εξελιχθεί σε εμφανή πρωτεϊνουρία. Θα ήταν περιττό να χρησιμοποιηθούν δοκιμές τόσο ευαίσθητες όσο η ELISA. Οι περισσότεροι σκύλοι ΧΝΝ με αναλογίες UPC μεταξύ 0.5 και 1.0 παρουσίασαν μικρολευκωματινουρία και οι περισσότεροι από αυτούς με UPC< 0.5="" were="" no="" albuminuria.="" these="" findings="" suggest="" that="" upc="" values="" between="" 0.5="" and="" 1.0="" reflect="" the="" presence="" of="" microalbuminuria.="" for="" upc=""><0.5, the="" specific measurement="" of="" albuminuria="" would="" be="" recommended to="" detect="" the="" initial="" development="" of="">
Υπέρταση διαγνώστηκε στο 60% των σκύλων με ΧΝΝ, εύρημα που συμφωνεί με προηγούμενες μελέτες.^20,39,40Ένα υψηλό ποσοστό (62,5 τοις εκατό) των σκύλων με υπέρταση είχαν μακρολευκωματουρική ΧΝΝ. Υψηλή συστολική αρτηριακή πίεση ήταν παρούσα στο 46,1 τοις εκατό των σκύλων με μικρολευκωματουρική ΧΝΝ. Επειδή η πρωτεϊνουρία σχετίζεται με μεγαλύτερο κίνδυνο για την ανάπτυξη της ουραιμικής κρίσης, της εξέλιξης της ΧΝΝ και του θανάτου,5 οι θεραπείες που έχουν σχεδιαστεί για τη μείωση της υπέρτασης θα μπορούσαν να επιβραδύνουν την εξέλιξη της νεφρικής ανεπάρκειας και να παρατείνουν την επιβίωση σε υπερτασικούς σκύλους με ΧΝΝ. Η σύγκριση μεταξύ των τιμών UAC σε νορμοτασικούς και υπερτασικούς σκύλους με ΧΝΝ αποδείχθηκε στατιστικά σημαντική, καταδεικνύοντας τόσο την πιθανή σχέση μεταξύ αυτών των παραμέτρων όσο και τις ανεπιθύμητες ενέργειες που θα μπορούσε να έχει η υψηλή συστολική αρτηριακή πίεση στην ανάπτυξη λευκωματουρίας, παρόμοια με αυτή που έχει αποδειχθεί για του ανθρώπου.^41–43

Θα μπορούσαν να τεθούν ερωτήματα σχετικά με τις διαφορές στις τιμές UAC μεταξύ υπερτασικών και νορμοτασικών σκύλων με ΧΝΝ σε αυτή τη μελέτη, καθώς μπορεί να αποδοθούν σε άνιση κατανομή των ζώων. Ωστόσο, όλοι οι σκύλοι ήταν στα στάδια 3 και 4 της νόσου και η σοβαρότητα της αναιμίας και της αζωθαιμίας ήταν παρόμοια και για τις δύο ομάδες, σύμφωνα με τα προχωρημένα στάδια της νόσου.

Στην ανθρώπινη ιατρική, η ταυτόχρονη διαπίστωση μικρολευκωματινουρίας και υπέρτασης γενικά οδηγεί στην υιοθέτηση ειδικών θεραπευτικών στρατηγικών. Η χρήση αναστολέων του μετατρεπτικού ενζύμου της αγγειοτενσίνης σε ανθρώπους με σακχαρώδη διαβήτη τύπου 1, υπέρταση και μικρολευκωματινουρία μπορεί να μειώσει την προοδευτική πορεία σε μαζική πρωτεϊνουρία.⁴⁴Αυτή η ίδια θεραπεία είναι επίσης ευεργετική σε μικρολευκωματινουρικούς νορμοτασικούς διαβητικούς.^45,46Σε υπερτασικούς αρουραίους με κατάλοιπονεφρά,Η θεραπεία με εναλαπρίλη διατήρησε τη συστηματική αρτηριακή πίεση σε φυσιολογικά επίπεδα και περιόρισε δραματικά την ανάπτυξη πρωτεϊνουρίας και σπειραματικών αλλοιώσεων.⁴⁷Τα ευρήματά μας υποδεικνύουν ότι η εξέταση για μικρολευκωματινουρία μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως εργαλείο παρακολούθησης για την αξιολόγηση της εξέλιξης της νόσου και την καθιέρωση θεραπευτικών και προληπτικών προσεγγίσεων σε σκύλους ασθενείς, ειδικά όταν η μικρολευκωματινουρία επιδεινώνεται σταδιακά λόγω υπέρτασης.

Συμπερασματικά, οι αναλογίες UAC σε υπερτασικούς σκύλους με ΧΝΝ στη μελέτη μας ήταν υψηλότεροι από εκείνους σε σκύλους με φυσιολογική πίεση, υποδηλώνοντας ότι η υψηλή συστολική πίεση μπορεί να σχετίζεται με αλλαγές στη σπειραματική δομή. Οι δοκιμές που έχουν σχεδιαστεί για την ανίχνευση της μικρολευκωματινουρίας μπορεί να είναι χρήσιμες σε υπερτασικούς σκύλους με ΧΝΝ και UPC 1.0 για την ανίχνευση της έναρξης της λευκωματουρίας ή για την παρακολούθηση της δοσολογίας των αντιυπερτασικών φαρμάκων. Μόλις εμφανιστεί η μακρολευκωματινουρία, η ίδια η αναλογία UPC μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τον ίδιο σκοπό.

Cistanche για βελτίωσηνεφρική λειτουργία

Ευχαριστίες

Υποστηρίζεται από επιχορήγηση (#03/10,426-3) από το Fundaca˜o de Amparo a` Pesquisa do Estado de Sa˜o Paulo – FAPESP.

Αποκάλυψη: Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν έχουν σχέσεις ή οικονομική ανάμειξη με οποιονδήποτε οργανισμό ή οντότητα με οικονομικό συμφέρον ή σε οικονομικό ανταγωνισμό με το θέμα ή το υλικό που συζητείται σε αυτό το άρθρο.

Από: 'Αξιολόγηση της λευκωματουρίας και η σχέση της με την αρτηριακή πίεση σε σκύλους με χρόνια νεφρική νόσο» απόΆντζελα Μπάτσιτς¹, Marcia M. Kogika¹, et.al

-----Vet Clin Pathol39/2 (2010) 203–209 c 2010 American Society for Veterinary Clinical Pathology DOI:10.1111/j.1939-165X.2009.00207.x

βιβλιογραφικές αναφορές

1. Burton C, Harris KP. Ο ρόλος της πρωτεϊνουρίας στην εξέλιξη της χρόνιας νεφρικής ανεπάρκειας. Am J Kidney Dis. 1996; 27:765-775.

2. Remuzzi G. Νεφροπαθητική φύση της πρωτεϊνουρίας. Curr Opin Nephrol Hypertens. 1999; 8:655-663.
3. Praga Μ, Hernandez Ε, Montoyo C, et αϊ. Μακροχρόνιες ευεργετικές επιδράσεις της αναστολής του μετατρεπτικού ενζύμου της αγγειοτενσίνης σε ασθενείς με νεφρωτική πρωτεϊνουρία. Am J Kidney Dis. 1992; 20:240-248.
4. Williams PS, Fass G, Bone JM. Η νεφρική παθολογία και η πρωτεϊνουρία καθορίζουν την εξέλιξη σε ήπια/μέτρια χρόνια νεφρική ανεπάρκεια χωρίς θεραπεία. QJ Med. 1988, 67:343-354.
5. Jacob F, Polzin DJ, Osborne CA, et al. Αξιολόγηση της συσχέτισης μεταξύ αρχικής πρωτεϊνουρίας και ποσοστού νοσηρότητας ή θανάτου σε σκύλους με φυσική χρόνια νεφρική ανεπάρκεια. J Am Vet Med Assoc. 2005; 226:393-400.
6. Viberti GC, Hill RD, Jarrett RJ, et αϊ. Η μικρολευκωματινουρία ως προγνωστικός παράγοντας της κλινικής νεφροπάθειας στον ινσουλινοεξαρτώμενο σακχαρώδη διαβήτη. Νυστέρι. 1982, 1: 1430–1432.

7. Mogensens CE, Christensen CK. Πρόβλεψη διαβητικής νεφροπάθειας σε ινσουλινοεξαρτώμενους ασθενείς. N Engl J Med. 1984; 311:89-93.

8. Lees GE, Jensen WA, Simpson DF, et al. Η επίμονη λευκωματουρία προηγείται της εμφάνισης εμφανούς πρωτεϊνουρίας σε αρσενικούς σκύλους με κληρονομική νεφροπάθεια συνδεδεμένη με Χ. J Vet Intern Med. 2002; 16:353.
9. Grauer GF, Oberhauser EB, Basaraba RJ, et al. Ανάπτυξη μικρολευκωματινουρίας σε σκύλους με διροφιλαρίωση. J Vet Intern Med. 2002; 16:352.
10. Vaden SL, Jensen WA, Longhofer SL, et al. Διαχρονική μελέτη της μικρολευκωματινουρίας σε τεριέ σίτου με μαλακή επίστρωση. J Vet Intern Med. 2001; 15:300.
11. Ortega ΤΜ, Feldman EC, Nelson RW, et al. Συστηματική αρτηριακή αρτηριακή πίεση και αναλογία πρωτεΐνης/κρεατινίνης ούρων σε σκύλους με υπεραδρενοκορτιτισμό. J Am Vet Med Assoc. 1996, 209:1724–1729.
12. Cavalcante CZ, Kogika MM, Simo˜es DMN, et al. Μικρολευκωματινουρία σε σκύλους με υπεραδρενοκορτιτισμό και σχέση με την αρτηριακή πίεση. J Vet Intern Med. 2007; 21:647.
13. Cavalcante CZ, Kogika MM, Santoro ML, et al. Αξιολόγηση ηλεκτροφόρησης πρωτεϊνών ούρων και λευκωματουρίας σε σκύλους με υπεραδρενοκορτιτισμό και σχέση με τη συστηματική αρτηριακή πίεση. J Vet Intern Med. 2008; 22:798–799.
14. Struble AL, Feldman EC, Nelson RW, et al. Συστηματική υπέρταση και πρωτεϊνουρία σε σκύλους με σακχαρώδη διαβήτη. J Am Vet Med Assoc. 1998, 213: 822-825.
15. Kogika MM, Cavalcante CZ, Simo˜es DMN, et al. Μικρολευκωματινουρία σε σκύλους με σακχαρώδη διαβήτη. J Vet Intern Med. 2007; 21:647.
16. Whittemore JC, Miyoshi Z, Jensen WA, et αϊ. Συσχέτιση της μικρολευκωματινουρίας και της αναλογίας λευκωματίνης ούρων προς κρεατινίνη με συστηματική νόσο σε γάτες. J Am Vet Med Assoc. 2007, 230: 1165–1169.
17. Brown SA, Walton CL, Crawford P, Bakris GL. Μακροχρόνιες επιδράσεις των αντιυπερτασικών σχημάτων στη νεφρική αιμοδυναμική και την πρωτεϊνουρία. Kidney Int. 1993;43:1210-1218.
18. Brown SA, Finco DR, Brown CA. Αξιολόγηση των αποτελεσμάτων της αναστολής του μετατρεπτικού ενζύμου της αγγειοτενσίνης με εναλαπρίλη σε σκύλους με επαγόμενη χρόνια νεφρική ανεπάρκεια. Am J Vet Res. 2003; 64:321-327.
19. Grauer GF, Greco DS, Getzy DM, et αϊ. Επιδράσεις της εναλαπρίλης έναντι του εικονικού φαρμάκου ως θεραπεία για την ιδιοπαθή σπειραματονεφρίτιδα σκύλου. J Vet Intern Med. 2000; 14:526-533.

20. Ross LA. Παθοφυσιολογία και διαχείριση της συστηματικής υπέρτασης που σχετίζεται μενεφρική δυσλειτουργία. Στο: Osborne CA, Finco DR, eds. Νεφρολογία και Ουρολογία σκύλων και αιλουροειδών. Βαλτιμόρη, MD: Lippincott Williams & Wilkins; 1995:392–399

21. Bartges JW, Willis AM, Polzin DJ. Υπέρταση καινεφρική νόσο. Vet Clin North Am Small Anim Pract. 1996; 26:1331-1345.
22. Bakker AJ. Ανίχνευση μικρολευκωματινουρίας. Η ανάλυση της χαρακτηριστικής καμπύλης λειτουργίας του δέκτη ευνοεί την αναλογία λευκωματίνης προς κρεατινίνη έναντι της συγκέντρωσης λευκωματίνης. Φροντίδα Διαβήτη. 1999; 22:307-313.
23. Harvey JN, Hood Κ, Platts JK, et αϊ. Πρόβλεψη του ρυθμού απέκκρισης λευκωματίνης από την αναλογία λευκωματίνης προς κρεατινίνη. Φροντίδα Διαβήτη. 1999; 22:1597-1598.
24. Weir GC, Nathan DM, Singer DE. Πρότυπα φροντίδας για τον διαβήτη. Φροντίδα Διαβήτη. 1994, 17:1514–1522.
25. Sabharwal RK, Singh P, Arora MM, Somani BL, Ambade V. Επίπτωση μικρολευκωματινουρίας σε υπερτασικούς ασθενείς. Ινδική J Clin Biochem. 2008; 23:71–75.
26. Polzin DJ, Osborne CA, Ross S. Χρόνια νεφρική νόσο. Στο: Ettinger SJ, Feldman E, eds. Εγχειρίδιο Κτηνιατρικής Παθολογίας. 6η έκδ. Φιλαδέλφεια, PA: Saunders; 2005:1767–1785.
27. Brown S, Atkins C, Bagley R, et αϊ. Οδηγίες για την αναγνώριση, αξιολόγηση και διαχείριση της συστηματικής υπέρτασης σε σκύλους και γάτες. J Vet Intern Med. 2007; 21:542-558.
28. Mckinney MM, Parkinson Α. Μια απλή, μη χρωματογραφική διαδικασία για τον καθαρισμό των ανοσοσφαιρινών από τον ορό και το υγρό ασκίτη. J Immunol Methods. 1987; 96:271-278.
29. Harlow Ε, Lane D. Antibodies: Α Laboratory Manual. Νέα Υόρκη, Νέα Υόρκη: Cold Spring Harbor Laboratory; 1988: 471–510.
30. Laemli ΗΒ. Διάσπαση δομικών πρωτεϊνών κατά τη συναρμολόγηση της κεφαλής του βακτηριοφάγου Τ4. Φύση. 1970; 227:80-685.
31. Pukac LA, Carter JE, Morrisonn KS, et al. Ενίσχυση του χρωματομετρικού σήματος διαμινοβενζιδίνης στην ανοσοστύπωση. Βιοτεχνικές. 1997; 23:385-388.
32. Olovsson Μ, Larsson Α. Επισήμανση αντισωμάτων κοτόπουλου με βιοτίνη και η μετέπειτα χρήση τους σε ELISA και ανοσοϊστοχημεία. Comp Immunol Microbiol Infect Dis. 1993; 16:145-152.
33. Santoro ML, Barbaro KC, Flores da Rocha TR, et al. Ταυτόχρονη απομόνωση του παράγοντα 4 αιμοπεταλίων και του συμπλόκου γλυκοπρωτεΐνης IIb-IIIa από αιμοπετάλια κουνελιού και χαρακτηρισμός ειδικών αντισωμάτων κοτόπουλου για τον προσδιορισμό τους. J Immunol Methods. 2004; 284:55-72.

34. Μπράντφορντ ΜΜ. Μια γρήγορη και ευαίσθητη μέθοδος για τον ποσοτικό προσδιορισμό ποσοτήτων μικρογραμμαρίων πρωτεΐνης χρησιμοποιώντας την αρχή της δέσμευσης πρωτεΐνης-χρωστικής. Anal Biochem. 1976;72:248-254.

35. Lustgarden JA, Wenk RE. Απλή, γρήγορη, κινητική μέθοδος μέτρησης κρεατινίνης ορού. Clin Chem. 1972; 8:1419-1422.
36. Lima CSP, Bottini PV, Garlipp CR, et al. Ακρίβεια της αναλογίας λευκωματίνης ούρων προς κρεατινίνη ως προγνωστικός παράγοντας λευκωματουρίας σε ενήλικες με δρεπανοκυτταρική αναιμία. J Clin Pathol. 2002; 55:973-975.
37. Jefferson SA, Greene MA, Smith RF, et al. Αναλογία λευκωματίνης ούρων προς κρεατινίνη-απόκριση στην άσκηση στον διαβήτη. Arch Dis Child. 1985; 60:305-310.
38. Syme HM, Markwell PJ, Pfeiffer D, et al. Επιβίωση γατών με χρόνια χρόνιαΝΕΦΡΙΚΗ ΑΝΕΠΑΡΚΕΙΑσχετίζεται με τη σοβαρότητα της πρωτεϊνουρίας. J Vet Intern Med. 2006; 20:528-535.
39. Jacob F, Polzin DJ, Osborne CA, et al. Συσχέτιση μεταξύ της αρχικής συστολικής αρτηριακής πίεσης και του κινδύνου εμφάνισης ουραιμικής κρίσης ή θανάτου σε σκύλους με χρόνια νεφρική ανεπάρκεια. J Am Vet Med Assoc. 2003, 222: 322–329.
40. Cowgil L, Kallet A. Συστηματική υπέρταση. Στο: Kirk R, ed. Τρέχουσα Κτηνιατρική Θεραπεία IX. Φιλαδέλφεια, PA: WB Saunders; 1986:360–364.
41. Ruilope LM, Rodicio JL. Κλινική σημασία της πρωτεϊνουρίας και της μικρολευκωματινουρίας. Curr Opin Nephrol Hypertens. 1993; 2:962-967.
42. Ritchie CM, Mcknight JA, Hadden DR, et al. Επιπολασμός υπέρτασης και λευκωματουρίας σε κλινική διαβήτη σε εκπαιδευτικό νοσοκομείο. Diabetes Res Clin Pract. 1995; 27:69-76.
43. Campos-Pastor MM, Escobar-Jimenez F, Mezquita P, et al. Παράγοντες που σχετίζονται με τη μικρολευκωματινουρία στον σακχαρώδη διαβήτη τύπου 1: μια συγχρονική μελέτη. Diabetes Res Clin Pract. 2000; 48:43-49.
44. Hermans MP, Birchard SM, Colin I, et al. Μακροχρόνια μείωση της μικρολευκωματινουρίας μετά από 3 χρόνια αναστολής του μετατρεπτικού ενζύμου της αγγειοτενσίνης από την περινδοπρίλη σε υπερτασικούς διαβητικούς ασθενείς που έλαβαν ινσουλίνη. Am J Med. 1992;92(Suppl 4B):102S–107S.
45. Mathiesen ER, Hommel Ε, Giese J, et αϊ. Αποτελεσματικότητα της καπτοπρίλης στην αναβολή της νεφροπάθειας σε φυσιολογικά ινσουλινοεξαρτώμενους διαβητικούς ασθενείς με μικρολευκωματινουρία. BMJ. 1993; 303:81-87.
46. ​​Marre Μ, Chatelier G, Leblanc Ι, et αϊ. Πρόληψη της διαβητικής νεφροπάθειας με εναλαπρίλη σε νορμοτασικούς διαβητικούς ασθενείς με μικρολευκωματινουρία. BMJ. 1999; 302:210-216.
47. Anderson S, Rennke HG, Brenner BM. Θεραπευτικό πλεονέκτημα της μετατροπής των αναστολέων ενζύμου στη διακοπή της προοδευτικήςνεφρική νόσοσχετίζεται με συστηματική υπέρταση στον αρουραίο. J Clin Invest. 1986;77:1993–2000.