Επικοινωνία:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Κάντε κλικ εδώ για πληροφορίες σχετικά με το Μέρος I (Εισαγωγή, υλικά και μέθοδοι ) αυτού του άρθρου.

Πώς τα κινέζικα φάρμακα που τονώνουν το νεφρό αναστέλλουν την απόπτωση των ντοπαμινεργικών νευρώνων;

Shaogang Lin, 1 Shuifen Ye, 2 Jinmu Huang, 1 Yun Tian, ​​3 Yihui Xu, 2 Mengqi Wu, 2 Jingxia Wang, 2 Songying Wu, 4 και Jing Cai, MD, Ph.D.2

ΥΛΙΚΑ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΙ

Σχέδιο

In vitro συγκριτική παρατήρηση φαρμακολογίας ορού.

Χρόνος και ρύθμιση

Τα πειράματα διεξήχθησαν στο Εργαστήριο Κυτταροβιολογίας του Πανεπιστημίου Fujian της Παραδοσιακής Κινεζικής Ιατρικής, Κίνα από το 2010 έως το 2011.

Υλικά

Των ζώων

Συνολικά 60 αρσενικοί αρουραίοι Wistar, ηλικίας 8 εβδομάδων, βάρους 200–220 g, αγοράστηκαν από την SLAC Laboratory Animal Co., Ltd., Σαγκάη, Κίνα (αριθμός άδειας SCXK (Hu) {{4} }). Στεγάστηκαν στο Εργαστηριακό Κέντρο Ζώων του Πανεπιστημίου Fujian της Παραδοσιακής Κινέζικης Ιατρικής στην Κίνα στους 20–22 βαθμούς με υγρασία 40–60 τοις εκατό και φωτισμό από τις 7:00 π.μ. έως τις 7:00 μ.μ. το Εργαστηριακό Κέντρο Ζώων του Πανεπιστημίου Fujian της Παραδοσιακής Κινεζικής Ιατρικής. Όλες οι πειραματικές διαδικασίες ήταν σύμφωνα με τις Κατευθυντήριες οδηγίες για τη φροντίδα και τη χρήση των εργαστηριακών ζώων, που διατυπώθηκαν από το Υπουργείο Επιστήμης και Τεχνολογίας της Κίνας[33].

Cstanche για τη βελτίωση της νεφρικής λειτουργίας

Φάρμακα

Το Herba Epimedii, το εναέριο τμήμα του Epimedium sagittatum Maxim ήταν από την επαρχία Σιτσουάν της Κίνας. Το Semen Cuscutae, ο ξηρός ώριμος σπόρος του Cuscuta Chinensis Lam., ήταν από την επαρχία Shandong της Κίνας. και το Herba Cistanches, το χυλόκοκκο φύλλο της κλίμακας του Cistanche deserticola YCMa, ήταν από την Αυτόνομη Περιφέρεια του Σιντζιάνγκ Ουιγούρ. Όλα τα φάρμακα παρέχονται από τη Fujian Pharmaceutical Co., Ltd., στην επαρχία Fujian, στην Κίνα. Τα Herba Epimedii, Semen Cuscutae και Herba Cistanches, 97,2 g το καθένα, βυθίστηκαν σε δοχείο αφεψήματος που περιείχε 1 500 mL απεσταγμένο νερό, θερμάνθηκαν γρήγορα, βράστηκαν, διατηρήθηκαν στον 100 βαθμό έως αφήστε τα δραστικά συστατικά των φαρμάκων να διαλυθούν και να συμπυκνωθούν στα 540 mL. Η ακατέργαστη ποσότητα του φαρμάκου στο διάλυμα φαρμάκου ήταν 0,180 g/mL. Το διάλυμα διηθήθηκε, τοποθετήθηκε σε φιάλη, σφραγίστηκε, αποστειρώθηκε και αποθηκεύτηκε στους 4 βαθμούς. Η σελεγιλίνη, 5 mg × 10 δισκία ανά κιτ, αγοράστηκε από την Nanjing Sike Pharmaceutical Co., Ltd. (Επαρχία Jiangsu, Κίνα). Σελεγιλίνη, 21,6 mg, διαλύθηκε σε διπλά απεσταγμένο νερό για να παρασκευαστεί ένα υδατικό διάλυμα 540 mL. Η συγκέντρωση του διαλύματος φαρμάκου ήταν 0,04 mg/mL. Το διάλυμα φαρμάκου τοποθετήθηκε σε φιάλη, σφραγίστηκε, αποστειρώθηκε και αποθηκεύτηκε στους 4 βαθμούς.

Μέθοδοι

Παρασκευή ορού που περιέχει φάρμακο

Οι ομάδες Herba Epimedii, Semen Cuscutae, Herba Cistanches και σελεγιλίνης εγχύθηκαν ενδογαστρικά με ορό που περιέχει φάρμακο που περιείχε 0.180 g/mL Herba Epimedii, Semen Cuscutae ή Herba Cistanches, ή {{ 5}}.04 mg/mL σελεγιλίνης, δύο φορές την ημέρα, σε δόση 0,1 mL/kg, για 14 συνεχόμενες ημέρες. Στην τυφλή ομάδα ορού χορηγήθηκε ίσος όγκος απεσταγμένου νερού. Τα ζώα στερήθηκαν τροφής και νερού για 12 ώρες μετά την τελική χορήγηση. Οι αρουραίοι αναισθητοποιήθηκαν με ενδοπεριτοναϊκή ένεση με 0,3 mL/100 g υδροχλωρικής κεταμίνης. Συλλέχτηκε αίμα από την κοιλιακή αορτή και φυγοκεντρήθηκε με 1 000 r/min για 15 λεπτά. Το υπερκείμενο συλλέχτηκε, απενεργοποιήθηκε σε λουτρό νερού στους 56 βαθμούς για 30 λεπτά, διηθήθηκε μέσω μικροπορώδους μεμβράνης 0,22 μm και αποθηκεύτηκε στους -20 βαθμούς.

Παρασκευή διαλύματος 50×Sato

Ένα μείγμα από 60 mL DMEM/F12 (Gibco, Carlsbad, CA, USA), 15 mg βόειας ινσουλίνης (Sigma, St. Louis, MO, ΗΠΑ), 15 mg τρανσφερίνης (Sigma), 145,8 mg πυροσταφυλικού νατρίου (Biosharp, Κορέα), 12 mg πουτρεσκίνη (Solarbio, Πεκίνο, Κίνα), 25 μL σεληνίτη νατρίου (1 mg/mL, 100 mg/100 mL H2O, Sigma) και 100 μL προγεστερόνης (0,315 mg /mL, 15,75 mg/50 mL, Biosharp) υποβλήθηκε σε υπερήχους σε λουτρό πάγου για 1,5 ώρα, διηθήθηκε μέσω φίλτρου 0,22 μm, μοιράστηκε σε δείγματα και αποθηκεύτηκε στους -20 βαθμούς.

Cistanche για τη θεραπεία της νεφρικής λειτουργίας

Κυτταρικής καλλιέργειας

Τα κύτταρα σπάρθηκαν σε DMEM/F12 συμπληρωμένο με 5 τοις εκατό (v/v) εμβρυϊκό βόειο ορό (Gibco), 1 τοις εκατό (v/v) γλουταμίνη (Sigma), 2 τοις εκατό (v/v) 50×Sato's διάλυμα και 2 τοις εκατό (ο/ο) πενικιλίνη/στρεπτομυκίνη. Τα κύτταρα στη συνέχεια επωάστηκαν σε 5 τοις εκατό (ο/ο) CO2 και διατηρήθηκαν σε κορεσμένη υγρασία στους 37 βαθμούς. Τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε θρυψίνη με 0,25 τοις εκατό (β/ο) θρυψίνη και ανακαλύφθηκαν. Τα κύτταρα στη λογαριθμική φάση συλλέχθηκαν για επόμενα πειράματα.

Επίδραση του H2O2 στην ανάπτυξη των κυττάρων MES23.5

Τα κύτταρα σπάρθηκαν σε 96-πλάκες καλλιέργειας φρεατίων (5 × 105 κύτταρα/φρεάτιο), επωάστηκαν με διάλυμα καλλιέργειας 50, 100, 150, 200, 300 και 400 μmol/L H2O2 (Shanghai Shiyi Chemicals Reagent Co., Ltd ., Σαγκάη, Κίνα) μετά από 24 ώρες για 1, 3, 6, 9, 12, 24 ώρες, ακολουθούμενο από MTT (Sigma) για 4 ώρες. Το διάλυμα στα φρεάτια απορρίφθηκε και προστέθηκαν 150 μL διμεθυλοσουλφοξειδίου (Sigma). Η πλάκα καλλιέργειας αναταράχθηκε για 10 λεπτά και η απορρόφηση των δειγμάτων στα 570 nm προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας μια αυτόματη συσκευή ανάγνωσης μικροπλακών (EXL800, Biotek, Winooski, VT, USA). Ως αρνητικός έλεγχος χρησιμοποιήθηκε πρόσφατα παρασκευασμένο διάλυμα καλλιέργειας DMEM/F12. Δύο παράλληλα φρεάτια τοποθετήθηκαν σε κάθε χρονικό σημείο. Τα πειράματα διεξήχθησαν εις τριπλούν.

Επίδραση του ορού που περιέχει φάρμακο σε διαφορετικές συγκεντρώσεις στην ανάπτυξη των κυττάρων MES23.5 που έχουν υποστεί αγωγή με H2O2-

Τα κύτταρα σπάρθηκαν και εκτέθηκαν σε ορό που περιείχε φάρμακο που περιείχε 5, 10, 15, 20, 25 και 30 τοις εκατό (ο/ο) Herba Epimedii, Semen Cuscutae, Herba Cistanches και σελεγιλίνη ή τυφλό ορό για 24 ώρες. Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν περαιτέρω με διάλυμα καλλιέργειας που περιείχε 100 μmol/L H2O2 για 3 ώρες, ακολουθούμενο από ΜΤΤ για 4 ώρες. Σε κάθε ομάδα τοποθετήθηκαν τρία παράλληλα φρεάτια. Ως αρνητικός έλεγχος χρησιμοποιήθηκε πρόσφατα παρασκευασμένο διάλυμα καλλιέργειας DMEM/F12. Κύτταρα που καλλιεργήθηκαν σε διάλυμα καλλιέργειας που περιείχε 100 μmol/L H2O2 και τυφλό ορό χρησίμευσαν ως η ομάδα μοντέλου και κύτταρα που καλλιεργήθηκαν μόνο σε τυφλό ορό χρησίμευσαν ως τυφλή ομάδα ορού. Τα πειράματα διεξήχθησαν εις τριπλούν. Η μέση τιμή απορρόφησης κάθε ομάδας υπολογίστηκε ως ο ρυθμός επιβίωσης των κυττάρων.

Κυτταρομετρία ροής για έκφραση FasL, Fas, κασπάσης-3 και Bcl-2 σε κύτταρα MES23.5

Τα κύτταρα σπάρθηκαν και υποβλήθηκαν σε επεξεργασία όπως πριν. Κύτταρα που καλλιεργήθηκαν μόνο σε 100 μmol/L H2O2 θεωρήθηκαν ως η ομάδα μοντέλου. Το επισημασμένο με φυκοερυθρίνη αντίσωμα FasL και ο έλεγχος ισοτύπου FasL (5 μL το καθένα), προστέθηκαν σε δύο σωλήνες (BD, San Jose, CA, USA), αναμείχθηκαν ομοιόμορφα με κύτταρα, αποθηκεύτηκαν σε θερμοκρασία δωματίου στο σκοτάδι για 15 λεπτά, φυγοκεντρήθηκαν σε 1 000 r/min για 5 λεπτά μετά την προσθήκη 2 mL PBS. Το υπερκείμενο απορρίφθηκε και τα κύτταρα επαναιωρήθηκαν χρησιμοποιώντας 500 μL PBS. Το μήκος κύματος της συσκευής λέιζερ για κυτταρομετρία ροής (Facscalibur, BD) ήταν 488 nm. Ο ρυθμός έκφρασης των FasL-θετικών κυττάρων αναλύθηκε και υπολογίστηκε με λογισμικό Cell Quest (BD). Ο ρυθμός έκφρασης των θετικών κυττάρων Fas-, κασπάσης-3- και Bcl-2-ανιχνεύθηκε χρησιμοποιώντας την ίδια μέθοδο.

ELISA για την περιεκτικότητα του νευρικού αυξητικού παράγοντα, του νευροτροφικού παράγοντα που προέρχεται από τον εγκέφαλο και του νευροτροφικού παράγοντα που προέρχεται από τη γραμμή νευρογλοιακών κυττάρων στα κύτταρα

Τα κύτταρα σπάρθηκαν και υποβλήθηκαν σε επεξεργασία όπως περιγράφηκε προηγουμένως. Το υπερκείμενο συλλέχτηκε και μετρήθηκε ο αυξητικός παράγοντας νεύρων, ο νευροτροφικός παράγοντας που προέρχεται από τον εγκέφαλο και το περιεχόμενο νευροτροφικού παράγοντα που προέρχεται από τη γραμμή νευρογλοιακών κυττάρων σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (BD). Η απορρόφηση μετρήθηκε στα 450 nm χρησιμοποιώντας μια αυτόματη συσκευή ανάγνωσης μικροπλακών (EXL800, Biotek, Winooski, VT, USA).

Στατιστική ανάλυση

Τα αποτελέσματα εκφράστηκαν ως μέσος όρος ± SD. Τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας λογισμικό SPSS 18.{1}} (SPSS, Chicago, IL, USA). Διεξήχθη μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης ακολουθούμενη από πολλαπλές συγκριτικές δοκιμές ελάχιστης σημαντικής διαφοράς. Μια τιμή P < 0,05="" θεωρήθηκε="" στατιστικά="">

Cistanche για τη λειτουργία των νεφρών

Ευχαριστίες

Ευχαριστούμε τον Chen B, το Εργαστήριο Νευροβιολογίας, Capital Medical University, για την ευγενική προσφορά του MES23.5ντοπαμινεργικόνευρικά κύτταρα.

Υποσημειώσεις

Χρηματοδότηση: Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από το Αναπτυξιακό Ταμείο της Chen Keji Integrative Medicine, No. CKJ2010025 και το Key Foundation of Society Development in Province Fujian, No. 2013Y0059.

Σύγκρουση συμφερόντων: Καμία δήλωση.

Ηθική έγκριση: Αυτή η μελέτη έλαβε άδεια από την Επιτροπή Δεοντολογίας των Ζώων του Πανεπιστημίου Fujian της Παραδοσιακής Κινεζικής Ιατρικής, Κίνα.

(Κριτική από Diwakarla S, Norman C, Cheng HY, Wang JM)

(Επεξεργασία από τους Wang LM, Su LL, Li CH, Song LP, Liu WJ, Zhao M)

ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΑΝΑΦΟΡΕΣ

[1] Zhang ZX, Roman GC, Hong Z, et al. Νόσος του Πάρκινσον στην Κίνα: επιπολασμός στο Πεκίνο, το Xian και τη Σαγκάη. Νυστέρι. 2005;365(9459):595–597. [PubMed] [Google Scholar]

[2] He JC, Wang WW. Επίδραση του Tianma Gauteng Yin σεαπόπτωσητουντοπαμινεργικόνευρώνες σε αρουραίους μοντέλου της νόσου του Πάρκινσον. Zhongyi Zazhi. 2010, 51 (11): 1024–1027. [Μελετητής Google]

[3] Perier C, Bové J, Vila M. Mitochondria και προγραμματισμένος κυτταρικός θάνατος στη νόσο του Πάρκινσον:απόπτωσηκαι πέρα. Σήμα αντιοξειδωτικής οξειδοαναγωγής. 2012; 16(9):883–895. [PubMed] [Google Scholar]

[4] Gallagher DA, Schapira AH. Αιιοπαθογένεση και θεραπεία της νόσου του Πάρκινσον. Curr Top Med Chem. 2009;9(10):860–868. [PubMed] [Google Scholar]

[5] Rangasamy SB, Soderstrom K, Bakay RA, et al. Θεραπεία νευροτροφικών παραγόντων για τη νόσο του Πάρκινσον. Prog Brain Res. 2010; 184:237-264. [PubMed] [Google Scholar]

[6] Zuccato C, Cattaneo E. Νευροτροφικός παράγοντας που προέρχεται από τον εγκέφαλο σε νευροεκφυλιστικές ασθένειες. Nat Rev Neurol. 2009; 5 (6): 311-322. [PubMed] [Google Scholar]

[7] Cai DF, Chen XQ, Gao Y. Επίδραση της συνταγής γιανγκμπάν με θάμνους στη λειτουργία της μέλαινας ραβδίου σε παρκινσονικούς αρουραίους μετά από μακροχρόνια θεραπεία με λεβοντόπα. Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 2002; 22 (1): 43–46. [PubMed] [Google Scholar]

[8] Yang MH, Wang HM, Liu Y. Επίδραση του αφέψημα Bushen Huoxue στον ορφανό υποδοχέα και την υδροξυλάση τυροσίνης στον εγκέφαλο αρουραίων με νόσο του Πάρκινσον. Chin J Integr Med. 2011; 17 (1): 43–47. [PubMed] [Google Scholar]

[9] Li SD, Liu Y, Yang MH. Επιδράσεις των θάμνων Huo Xue yin στην περιεκτικότητα του εγκεφάλου NF-kB και NO στο ποντίκι μοντέλου της νόσου του Πάρκινσον. J Tradit Chin Med. 2012; 32 (1): 67–70. [PubMed] [Google Scholar]

[10] Tian Y, Cai J, Chen XZ, et al. Προστατευτικά αποτελέσματα της κινέζικης θρέψηςνεφρόβότανα σε νευρώνες ραβδωτών νευρώνων σε ποντίκι μοντέλου της νόσου του Πάρκινσον. Zhongguo Laonian Xue Zazhi. 2011; 31 (3): 440-443. [Μελετητής Google]

[11] Yu H, Li YH, Feng XL, et al. Αναγνώριση και δοκιμασία δραστικότητας της υδροξυλάσης τυροσίνης σε κύτταρα MES23.5. Zhongguo Shengwu Huaxue yu Fenzi Shengwu Xuebao. 2004; 20 (1): 95–100. [Μελετητής Google]

[12] Wang XR. Πεκίνο: People's Medical Publishing House; 2007. Τοξικολογία Πειραματικές Μέθοδοι και Τεχνολογία. [Μελετητής Google]

[13] Lv SJ. Πεκίνο: China Medical Science Press; 2010. Τεστ Κλινικής Ανοσολογίας. [Μελετητής Google]

[14] Eriksen JL, Wszolek Z, Petrucelli L. Molecular pathogenesis of Parkinson's disease. Arch Neurol. 2005; 62 (3): 353-357. [PubMed] [Google Scholar]

[15] Christen Y. Οξειδωτικό στρες και νόσος Alzheimer. Am J Clin Nutr. 2000;71(2):621S–629S. [PubMed] [Google Scholar]

[16] Blandini F, Armenteros MT, Fancelu R, et al. Νευροπροστατευτική δράση της ρασαγιλίνης σε μοντέλο τρωκτικών της νόσου του Πάρκινσον. Exp Neurol. 2004;187(2):455–459. [PubMed] [Google Scholar]

[17] Zhang XN, Wang HH, Wang ZQ, et al. Προστατευτική δράση της ικαριίνης σεαπόπτωσηπρωτίστως καλλιεργημένων νευρώνων αρουραίου που επάγονται από το πεπτίδιο Αα25-35. Zhejiang Daxue Xuebao: Yixue Ban. 2007;36(3):224–228. [PubMed] [Google Scholar]

[18] Wang LH, Bu PC, Bao YM. Νευροπροστατευτική δράση των εκχυλισμάτων Cuscuta Chinensis Lam στη βλάβη των νευρωνικών διαφοροποιημένων κυττάρων PC12 που προκαλείται από αντιδραστικά είδη οξυγόνου. Xibao Shengwu Xue Zazhi. 2005; 27:69-72. [Μελετητής Google]

[19] Sun SL, Wang B, Peng HS. Αναστολή εκχυλισμάτων Dodder στα καρδιακά μυοκύτταρααπόπτωσησε γερασμένα ποντίκια. Zhongguo Laonian Xue Zazhi. 2011; 31:642-644. [Μελετητής Google]

[20] Yang JH, Hu JP, Rena K, et al. Σχέσεις δομής-δραστικότητας φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών σε φυτά Cistanche salsa στην αντιοξειδωτική δράση. Ζονγκ Γιάο Κάι. 2009; 32(7):1067–1069. [PubMed] [Google Scholar]

[21] Wu Y, Li L, Wen T, et al. Προστατευτικές επιδράσεις της εχινακοσίδης στην επαγόμενη από τετραχλωράνθρακα ηπατοτοξικότητα σε αρουραίους. Τοξικολογία. 2007;232(1-2):50–56. [PubMed] [Google Scholar]

[22] Cheng SD. Πεκίνο: People's Medical Publishing House; 2006. Νόσος Πάρκινσον. [Μελετητής Google]

[23] Yang T. Beijing: People's Medical Publishing House; 2010. Κυτταρική Βιολογία. [Μελετητής Google]

[24] Baba N, Koji T, Itoh M, et al. Αμοιβαίες αλλαγές στην έκφραση του Bcl-2 και του Bax στον υπογλώσσιο πυρήνα μετά από αξονοτομή σε ενήλικους αρουραίους: πιθανή συμμετοχή στην πρόκληση θανάτου νευρωνικών κυττάρων. Brain Res. 1999;827(1-2):122–129. [PubMed] [Google Scholar]

[25] Zuccato C, Cattaneo E. Νευροτροφικός παράγοντας που προέρχεται από τον εγκέφαλο σε νευροεκφυλιστικές ασθένειες. Nat Rev Neurol. 2009; 5 (6): 311-322. [PubMed] [Google Scholar]

[26] Peterziel H, Unsicker K, Krieglstein K. Το TGFbeta επάγει την ανταπόκριση του GDNF στους νευρώνες με τη στρατολόγηση του GFRalpha1 στην πλασματική μεμβράνη. J Cell ΒίοΙ. 2002, 159(1):157–167. [Δωρεάν άρθρο PMC] [PubMed] [Google Scholar]

[27] Hong M, Mukhida K, Mendez I. Θεραπεία GDNF για τη νόσο του Πάρκινσον. Expert Rev Neurother. 2008;8(7):1125–1139. [PubMed] [Google Scholar]

[28] Chaturvedi RK, Shukla S, Seth K, et al. Ο αυξητικός παράγοντας νεύρων αυξάνει την επιβίωση τουντοπαμινεργικόμοσχεύματος, διασώζει τους ντοπαμινεργικούς νευρώνες και αποκαθιστά λειτουργικά ελλείμματα σε μοντέλο αρουραίου της νόσου του Πάρκινσον. Neurosci Lett. 2006;398(1-2):44–49. [PubMed] [Google Scholar]

[29] Kavanagh ET, Loughlin JP, Herbert KR, et al. Λειτουργικότητα των κυττάρων PC12 που προστατεύονται από NGF μετά από έκθεση σε 6-υδροξυντοπαμίνη. Biochem Biophys Res Commun. 2006;351(4):890–895. [PubMed] [Google Scholar]

[30] Baquet ZC, Bickford PC, Jones KR. Ο νευροτροφικός παράγοντας που προέρχεται από τον εγκέφαλο απαιτείται για τον καθορισμό του σωστού αριθμούντοπαμινεργικόνευρώνες στη μέλαινα ουσία pars compacta. J Neurosci. 2005;25(26):6251–6259. [Δωρεάν άρθρο PMC] [PubMed] [Google Scholar]

[31] Hung SY, Liou HC, Fu WM. Ο μηχανισμός της δράσης της οξυγενάσης της αίμης-1 εμπλέκεται στην ενίσχυση της έκφρασης του νευροτροφικού παράγοντα. Νευροφαρμακολογία. 2010; 58 (2): 321-329. [PubMed] [Google Scholar]

[32] Duarte EP, Curcio M, Canzoniero LM, et al. Νευροπροστασία από GDNF στον ισχαιμικό εγκέφαλο. Παράγοντες Ανάπτυξης. 2012; 30 (4): 242–257. [PubMed] [Google Scholar]

[33] Το Υπουργείο Επιστήμης και Τεχνολογίας της Λαϊκής Δημοκρατίας της Κίνας. Προτάσεις καθοδήγησης για τη φροντίδα και τη χρήση των εργαστηριακών ζώων. 30 Σεπτεμβρίου 2006; [Μελετητής Google]