Το Gomisin N αναστέλλει τη μελανογένεση μέσω της ρύθμισης των οδών σηματοδότησης PI3K/Akt και MAPK/ERK στα μελανοκύτταρα

Επικοινωνία:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Αφηρημένη: Γκομισίν Ν, μία από τις ενώσεις λιγνάνης που βρέθηκαν στο Schisandra Chinensis έχει αποδειχθεί ότι έχει αντιοξειδωτική, αντι-ογκογόνο και αντιφλεγμονώδη δράση σε διάφορες μελέτες.Εδώ αναφέρουμε, για πρώτη φορά, την αντιμελανογονική αποτελεσματικότητα του Gomisin N σε θηλαστικά κύτταρα καθώς και σε έμβρυα ζέβρα. Το Gomisin N μείωσε σημαντικά την περιεκτικότητα σε μελανίνη χωρίς κυτταρική τοξικότητα. Αν και δεν ήταν ικανό να ρυθμίσει την καταλυτική δραστηριότητα του μανιταριούτυροσινάσηin vitro,Γκομισίν Νμείωσε τα επίπεδα έκφρασης των βασικών πρωτεϊνών που λειτουργούν σεμελανογένεση. Υποδοχέας μελανοκορτίνης 1 (MC1R), αδενυλυλοκυκλάση 2, σχετιζόμενος με τη μικροφθαλμία μεταγραφικός παράγοντας (MITF), τυροσινάση,τυροσινάση-σχετική πρωτεΐνη-1(TRP-1) και πρωτεΐνη που σχετίζεται με τυροσινάση-2 (TRP-2). Επιπλέον, τα κύτταρα Melan-A που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με Gomisin εμφάνισαν αυξημένα επίπεδα p-Akt και p-ERK, πράγμα που σημαίνει ότι η ενεργοποίηση των οδών PI3K/Akt και MAPK/ERK μπορεί να λειτουργήσει ως αναστολήμελανογένεση. Επικυρώσαμε επίσης ότι το Gomisin N μείωσε την παραγωγή μελανίνης καταστέλλοντας την έκφραση του MITF,τυροσινάση, TRP-1 και TRP-2σε κύτταρα ποντικού και ανθρώπου καθώς και σε αναπτυσσόμενα έμβρυα ψαριού ζέβρα. Συλλογικά, συμπεραίνουμε ότιΓκομισίν Ναναστέλλει τη σύνθεση μελανίνης καταστέλλοντας την έκφραση του MITF και των μελανογόνου ενζύμων, πιθανώς μέσω της τροποποίησης των οδών PI3K/Akt και MAPK/ERK.

Λέξεις-κλειδιά:Schisandra Chinensis;Γκομισίν Ν; λιγνάνη;μελανογένεση; λεύκανση δέρματος

το cistanche έχει λειτουργία λεύκανσης δέρματος

1. Εισαγωγή

Η μελανίνη είναι μια χρωστική ουσία που βρίσκεται στα περισσότερα όργανα των ζώων, όπως το δέρμα, τα μαλλιά, τα μάτια, το εσωτερικό αυτί, τα οστά, η καρδιά και ο εγκέφαλος [1,2].Μελανογένεσηείναι μια πολύπλοκη διαδικασία όπου εμπλέκονται πολλαπλές οδοί σηματοδότησης. Ο υποδοχέας μελανοκορτίνης 1 (MC1R) είναι βασικός ρυθμιστήςμελανογένεση, σηματοδοτώντας μέσω των προσδεμάτων του όπως η μελανοκυτταροτρόπος ορμόνη (MSH) και η αδρενοκορτικοτροπική ορμόνη (ACTH) [3]. Η μελανίνη του δέρματος βιοσυντίθεται από τα μελανοκύτταρα στην επιδερμίδα και στη συνέχεια μεταφέρεται στα κερατινοκύτταρα, όπου παίζουν σημαντικό ρόλο στην προστασία του δέρματος απορροφώντας την υπεριώδη ακτινοβολία από το φως του ήλιου και καθαρίζοντας τις δραστικές ελεύθερες ρίζες [4,5]. Η σύνθεση και η μεταφορά της μελανίνης στο δέρμα και στα τριχοθυλάκια ρυθμίζεται από τη διαθεσιμότητα των προδρόμων ουσιών της [6]. Η L-τυροσίνη και η L-διυδροξυφαινυλαλανίνη (L-DOPA), τα κύρια υποστρώματα των μελανογόνων ενζύμων, λειτουργούν επίσης ως ορμονοειδείς ρυθμιστές στη μελανογένεση [7]. Από την άλλη πλευρά, η υπερπαραγωγή μελανίνης οδηγεί σε ανεπιθύμητες δερματικές ανησυχίες, όπως πανάδες και μέλασμα [8,9]. Η μελανογένεση μπορεί να επηρεάσει τη συμπεριφορά των φυσιολογικών και κακοήθων μελανοκυττάρων ρυθμίζοντας τις ελαστικές ιδιότητες των κυττάρων [10]. Αν και οι υποδοχείς της σεροτονίνης και της μελατονίνης που εκφράζονται στα δερματικά κύτταρα διαδραματίζουν βασικό ρόλο στη διατήρηση της κυτταρικής ομοιόστασης, η υπερβολική παραγωγή μελανίνης μέσω ανεξέλεγκτων ορμονικών αλλαγών μπορεί να προκαλέσει παθολογικές καταστάσεις στο δέρμα [11].

Έτσι, έχουν γίνει εκτεταμένες προσπάθειες για την αποσαφήνιση των μοριακών μηχανισμών που ελέγχουν τη μελανογένεση ως το πρωταρχικό βήμα για τη θεραπεία των υπερμελάγχρωσης δερματικών διαταραχών. Επιπλέον, διάφοροι τύποιλεύκανση δέρματοςΟι παράγοντες που αναστέλλουν τη σύνθεση μελανίνης έχουν εντοπιστεί από φυτικά και μη φυτικά εκχυλίσματα και χρησιμοποιούνται εμπορικά σε καλλυντικά [12,13]. Οι πιο ευρέως χρησιμοποιούμενοι λευκαντικοί παράγοντες περιλαμβάνουν την υδροκινόνη, τη μεκινόλη, την αρβουτίνη, το Kojic οξύ, το ασκορβικό οξύ και το ρετινοϊκό οξύ [12,14]. Ωστόσο, υπάρχουν διάφοροι περιορισμοί στη χρήση τους στη θεραπεία οξέων ή χρόνιων συμπτωμάτων υπερμελάγχρωσης στον άνθρωπο. Για παράδειγμα, η υδροκινόνη, αν και χρησιμοποιείται από καιρό για την αποχρωματισμό από τη δεκαετία του 1960, μπορεί να προκαλέσει ερεθισμό του δέρματος και δερματίτιδα εξ επαφής [15,16]. Οδηγεί επίσης σε βλάβη του DNA αυξάνοντας την παραγωγή ενεργών ειδών οξυγόνου και την ανάπτυξη εξωγενούς ωχρόνωσης σε κύτταρα θηλαστικών [17,18]. Άλλα γνωστάτυροσινάσηΟι αναστολείς όπως το Κοτζικό οξύ και το ασκορβικό οξύ όχι μόνο έχουν κακή διείσδυση στο δέρμα, σταθερότητα και λεύκανση, αλλά μπορούν επίσης να προκαλέσουν κυτταροτοξικότητα, δερματίτιδα και ερύθημα από μακροχρόνια χρήση [19,20]. Από αυτή την άποψη, υπάρχει μια αυξανόμενη ανάγκη για την ανάπτυξη ασφαλέστερων και αποτελεσματικότερων λευκαντικών παραγόντων για τη θεραπεία της υπερμελάγχρωσης του ανθρώπινου δέρματος. Τα φυσικά βότανα που χρησιμοποιούνται στην παραδοσιακή ιατρική μπορεί να παρέχουν εναλλακτικές πηγές για τον εντοπισμό νέων λευκαντικών παραγόντων που ελέγχουν τα βασικά βήματαμελανογένεσημε λιγότερες ή καθόλου παρενέργειες [21].

Το Schisandra chinensis, επίσης γνωστό ως βόρειο μούρο με ωραία γεύση, βρίσκεται φυσικά στη βορειοανατολική Κίνα, την άπω-ανατολική Ρωσία, την Ιαπωνία και την Κορέα [22]. Αυτό το φυτό έχει χρησιμοποιηθεί από καιρό για τη θεραπεία της νυχτερινής τύφλωσης, του δερματικού εγκαύματος, της άσηπτης φλεγμονής και των ηπατικών ασθενειών στην παραδοσιακή ανατολίτικη ιατρική [23,24]. Το εκχύλισμα φρούτων S. chinensis και οι ενώσεις λιγνάνης του έχει αποδειχθεί ότι έχουν διάφορες φαρμακολογικές επιδράσεις σε κυτταρικές σειρές ποντικού. Για παράδειγμα, τα Schisandra A και C έχουν αντιοξειδωτική δράση, ενώ η Schisandra B έχει αντι-ινωτική, αντιφλεγμονώδη, αντιοξειδωτική και αντι-αποπτωτική δράση [25]. Μια άλλη ένωση λιγνάνηςΓκομισίν Ν(Εικόνα 1Α) έχει αναφερθεί ότι καταστέλλει την απόπτωση που προκαλείται από το οξειδωτικό στρες αναστέλλοντας την απελευθέρωση του κυτοχρώματος C από τα μιτοχόνδρια στο κυτταρόπλασμα, τη διάσπαση της κασπάσης 3 και της PARP και τη μετάβαση της μιτοχονδριακής διαπερατότητας που προκαλείται από Ca2 συν σε καρδιομυόκοκκους H9c2 [7,8]. Είναι ενδιαφέρον ότι αρκετές μελέτες που χρησιμοποιούν μοντέλα ποντικών και κυτταρικές σειρές ανθρώπινου δέρματος έχουν αποκαλύψει τις θεραπευτικές δυνατότητες του S. chinensis για τη θεραπεία δερματικών διαταραχών. Lee et al. ανέφερε ότι το εκχύλισμα μεθανόλης του καρπού S. chinensis ανακούφισε τα συμπτώματα της δερματίτιδας εξ επαφής μειώνοντας την παραγωγή προφλεγμονωδών κυτοκινών όπως TNF- και IFN- όταν χορηγείται τοπικά [8,24]. Οι Kang et al. έδειξε ότι το υδατικό εκχύλισμα Schisandra Fructus ανέστειλε την ενεργοποίηση του IκB, καταστέλλοντας έτσι την παραγωγή TNF-, IL-6 και GM-CSF στην ανθρώπινη ιστιοκυτταρική σειρά HMC-1 [26]. Αυτά τα ευρήματα μας οδήγησαν να υποθέσουμε ότι το S. chinensis lignans μπορεί να επηρεάσει τις λειτουργίες των κυττάρων του δέρματος ευρύτερα. Σε αυτή τη μελέτη, επιδιώξαμε να διερευνήσουμε τους πιθανούς ρόλους τουΓκομισίν Ν, μία από τις κύριες λιγνανικές ενώσεις στο S. Chinensis, στη ρύθμισημελανογένεση, αξιολογώντας έτσι την πιθανή χρήση του ως αισθητικός παράγοντας. Εδώ, το αναφέρουμεΓκομισίν Ναναστέλλει τη βιοσύνθεση μελανίνης χωρίς κυτταρική τοξικότητα σε κύτταρα ανθρώπου και ποντικού, καθώς και σε έμβρυα ψαριού ζέβρα.

2. Αποτελέσματα

2.1. Επιδράσεις του Gomisin N στον σχηματισμό μελανίνης και τη βιωσιμότητα των κυττάρων

Για την επαλήθευση των επιδράσεων του Gomisin N στομελανογένεση, αντιμετωπίσαμε μελανοκύτταρα ποντικού με διαφορετικές συγκεντρώσειςΓκομισίν Νγια 72 ώρες και στη συνέχεια αξιολόγησε τις αλλαγές στο περιεχόμενο μελανίνης. Η θεραπεία με Gomisin μείωσε την περιεκτικότητα σε μελανίνη τόσο στην φυσιολογική κυτταρική σειρά μελανοκυττάρων Melan-A όσο και στα κύτταρα μελανώματος B16F10 με δοσοεξαρτώμενο τρόπο χωρίς κυτταρική τοξικότητα (Εικόνα 1Β, Γ). Παρατηρήσαμε ότι η Gomisin N ανέστειλε την επαγόμενη από -MSH παραγωγή μελανίνης στα κύτταρα B16F10, η οποία ήταν συγκρίσιμη με τα αποτελέσματα που λήφθηκαν από τη θεραπεία με PTU [27] (Εικόνα 1C). Για να αξιολογηθεί εάν η μείωση της μελανίνης κατάΓκομισίν ΝΗ θεραπεία οφείλεται στη μειωμένη δραστηριότητα της τυροσινάσης, πραγματοποιήσαμε μια δοκιμασία χρώσης L-DOPA σε φυσιολογικά ανθρώπινα επιδερμικά μελανοκύτταρα (NHEM). Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1Ε, τα NHEMκύτταρα που υποβλήθηκαν σε αγωγή με Gomisin N εμφάνισαν μειωμένα επίπεδα L-DOPA σε σύγκριση με κύτταρα που δεν υποβλήθηκαν σε αγωγή. Ωστόσο, η ανασταλτική επίδραση της Gomisin N στην παραγωγή μελανίνης δεν ήταν σημαντική στα κύτταρα MNT{3}} ανθρώπινου μελανώματος (Εικόνα 1D) .

2.2. Επιδράσεις του Gomisin N στη δραστηριότητα της τυροσινάσης

Για να εξεταστεί ανΓκομισίν Ναναστέλλειτυροσινάσηδραστηριότητα in vitro, χρησιμοποιήσαμε τυροσινάση μανιταριού και προϊόντα λύσης κυττάρων μελανώματος Β16. Ως θετικός μάρτυρας χρησιμοποιήθηκε το Kojic acid, ένας πολύ γνωστός αναστολέας της τυροσινάσης. Όταν υποβλήθηκε σε θεραπεία με τυροσινάση μανιταριού, ενώ το Kojic οξύ μείωσε σημαντικά την ενζυματική δράση, το Gomisin N δεν προκάλεσε καμία αλλαγή στη μετατροπή του L-DOPA σε ντόπαχρωμα (Εικόνα 2Α). Ωστόσο, όταν υποβλήθηκε σε θεραπεία σε κύτταρα μελανώματος Β16, το Gomisin N οδήγησε σε μείωση σετυροσινάσηδραστηριότητα του κυτταρολύματος με δοσοεξαρτώμενο τρόπο (Εικόνα 2Β). Επιπλέον, όταν συν-θεραπεύεται με -MSH inB16 κύτταρα,Γκομισίν Νανέστρεψε την αύξηση του σχηματισμού ντοπαχρώματος που διεγείρεται από -MSH (Εικόνα 3C). Σημειωτέον, το Gomisin N φάνηκε να είναι πιο αποτελεσματικό από το Kojic acid για την αναστολή της κυτταρικήςδραστηριότητα τυροσινάσηςκυττάρων Β16 σε ερέθισμα -MSH. Αυτά τα ευρήματα υποδηλώνουν ότι η ανασταλτική επίδραση του GomisinN στην παραγωγή μελανίνης που παρατηρείται σε κύτταρα ποντικού και ανθρώπου (Εικόνα 1) δεν οφείλεται στη λειτουργία του να αναστέλλει άμεσα την καταλυτική δραστηριότητα της τυροσινάσης. Ωστόσο, είναι ακόμα πιθανό ότι το Gomisin N ρυθμίζει την έκφραση της τυροσινάσης ή άλλων πρωτεϊνών που παίζουν βασικούς ρόλους στηνμελανογένεση.

2.3. Επιδράσεις του Gomisin N στην Απενεργοποίηση της οδού σηματοδότησης MC1R

Επιδιώξαμε να αποσαφηνίσουμε τον υποκείμενο μηχανισμό που είναι υπεύθυνος για την ανασταλτική επίδραση του GomisinN στην παραγωγή μελανίνης. Το αιτιολογήσαμεΓκομισίν Νμπορεί να ρυθμίσει τις πρωτεΐνες σηματοδότησης που εμπλέκονται σεμελανογένεσηκαι έτσι αναστέλλουν τη σύνθεση μελανίνης. Ο υποδοχέας μελανοκορτίνης 1 (MC1R) είναι ένας συζευγμένος με αμελανοκυτταρική πρωτεΐνη G υποδοχέας που λειτουργεί ως βασικός ρυθμιστής στη σύνθεση μελανίνης. Η ενεργοποίηση του MC1R από τον συνδέτη του -MSH ή την αδρενοκορτικοτροπική ορμόνη (ACTH) οδηγεί σε αύξηση της αδενυλυλοκυκλάσης, η οποία με τη σειρά της ρυθμίζει προς τα πάνω τα ενδοκυτταρικά επίπεδα cAMP [2,3]. Κατά συνέπεια, το μεταγραφικό επίπεδο του MITF αυξάνεται μέσω της οδού πρωτεϊνικής κινάσης-C (PKA)/αποκρουστικής πρωτεΐνης δέσμευσης στοιχείων (CREB) [2,28]. Για να αξιολογήσουμε τη ρυθμιστική επίδραση του Gomisin N στο μονοπάτι σηματοδότησης MC1R, ελέγξαμε τα επίπεδα έκφρασης του MC1R και των κατάντη μορίων σηματοδοσίας του μετά την επεξεργασία των κυττάρων Melan-A με Gomisin N. Παρατηρήσαμε ότι το Gomisin N μείωσε σημαντικά τα επίπεδα πρωτεΐνης τόσο του MC1R όσο και της αδενυλυλοκυκλάσης 2 με δοσοεξαρτώμενο τρόπο (Εικόνα 3A–C). Όπως αναμενόταν,Γκομισίν ΝΤα κύτταρα που έλαβαν θεραπεία εμφάνισαν επίσης μειωμένα επίπεδα πρωτεΐνης του MITF και των γνωστών στόχων του τυροσινάση, TRP-1 και TRP-2 (Εικόνα 3A, D–G). Αυτά τα ευρήματα υποδηλώνουν ότι το Gomisin N αναστέλλει τα ένζυμα που παράγουν μελανίνη αδρανοποιώντας το MITF μέσω της οδού σηματοδότησης MC1R.

2.4. Επιδράσεις του Gomisin N στη Φωσφορυλίωση του Akt και του ERK1/2 σε κύτταρα Melan-A

Τα μονοπάτια PI3K/Akt και MAPK/ERK είναι γνωστό ότι εμπλέκονται στη μελανογένεση μεταγραφικά ή μετα-μεταγραφικά ρυθμίζοντας το MITF [29,30]. Για να αξιολογήσουμε εάν το GomisinN επηρεάζει αυτές τις οδούς σηματοδότησης, αξιολογήσαμε την κατάσταση φωσφορυλίωσης του Akt και του ERK1/2 με ανάλυση στυπώματος Western. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3H–J, θεραπεία υψηλής δόσης (30 μΜ) τουΓκομισίν Νενίσχυσε σημαντικά τη φωσφορυλίωση τόσο του Akt όσο και του ERK. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι η ανασταλτική επίδραση της Gomisin N σεμελανογένεσηείναι πιθανό να σχετίζεται με τις οδούς P13K/Akt και MAPK/ERK.

2.5. Το Gomisin N ανέστειλε τη μελανογένεση σε έμβρυα Zebrafish

Στη συνέχεια στοχεύσαμε να εξετάσουμε εάν το Gomisin N είναι αποτελεσματικό στην αναστολήμελανογένεσηin vivo. Για το σκοπό αυτό, αντιμετωπίσαμε έμβρυα ζέβρα με Gomisin N για 72 ώρες σε συγκεντρώσεις 1, 10, 20 και 30 μΜ και στη συνέχεια μετρήσαμε τα επίπεδα έκφρασης των μελανογόνων πρωτεϊνών. Παρατηρήσαμε ότι η θεραπεία με Gomisin N ανέστειλε το σχηματισμό μελανίνης στα αναπτυσσόμενα έμβρυα ψαριών ζέβρα.Γκομισίν Ν-τα έμβρυα που υποβλήθηκαν σε αγωγή εμφάνισαν μείωση των περιεχομένων μελανίνης με τρόπο εξαρτώμενο από τη συγκέντρωση σε σύγκριση με τον μάρτυρα που δεν υποβλήθηκε σε θεραπεία (Εικόνα 4). Βρήκαμε επίσης ότι τα επίπεδα πρωτεΐνης τουτυροσινάση, MITF, TRP-1 και TRP-2 μειώθηκαν από τη θεραπεία με Gomisin N (Εικόνα 5). Αυτά τα αποτελέσματα καταδεικνύουν ότι το Gomisin N αναστέλλει τη μελανογένεση in vivo ρυθμίζοντας τον μεταγραφικό παράγοντα MITF και τους στόχους τουτυροσινάση, TRP-1 και TRP-2.

2.6. Το Gomisin N ανέστρεψε την επαγόμενη από τη ραπαμυκίνη μελανογένεση σε ανθρώπινο MNT-1

Αν και το Gomisin N ανέστειλε σημαντικάμελανογένεσησε κύτταρα Melan-A και B16 καθώς και σε έμβρυα inzebrafish, δεν παρατηρήσαμε την επίδρασή του στα ανθρώπινα MNT-1 κύτταρα μελανώματος. Αναμέναμε ότι η επίδραση της Gomisin N μπορεί να είναι ανιχνεύσιμη σε κύτταρα MNT-1 υπό την προϋπόθεση ότι η μελανογένεση ρυθμίζεται προς τα πάνω από ένα κατάλληλο ερέθισμα. Η ραπαμυκίνη έχει αποδειχθεί ότι προκαλεί μελανογένεση αυξάνοντας τη δραστηριότητα της τυροσινάσης και τα πρωτεϊνικά επίπεδα MITF, τυροσινάσης, TRP-1 και TRP-2 [31], εν μέρει μέσω της ενεργοποίησης της αυτοφαγίας [32]. Παρακολουθήσαμε τα επίπεδα τουτυροσινάση, MITF, TRP-1 και TRP-2 σε κύτταρα MNT-1 με ανάλυση Western blot, μετά από συν-θεραπεία με Gomisin N andrapamycin. Η θεραπεία με ραπαμυκίνη προκάλεσε σημαντικά επίπεδα MITF, TRP-1 και TRP{-2 αλλά δεν είχε καμία επίδραση στατυροσινάσηεπίπεδα (Εικόνα 6). Ωστόσο, η θεραπεία με Gomisin N ανέτρεψε σημαντικά τις επιδράσεις της ραπαμυκίνης στο MITF, TRP-1 και TRP-2 με τρόπο εξαρτώμενο από τη συγκέντρωση. Η αντίστροφη επίδραση τουΓκομισίν Νέναντι της ραπαμυκίνης ήταν πιο ελπιδοφόρα σε συγκέντρωση 20 και 30 μΜ από ό, τι 10 μΜ. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι το Gomisin N αναστέλλειμελανογένεσηστα ανθρώπινα MNT-1 κύτταρα μελανώματος ρυθμίζοντας τον μεταγραφικό παράγοντα MITF και τους στόχους του TRP-1 και TRP-2.

3. Συζήτηση

Η κύρια λειτουργία της μελανίνης είναι να προστατεύει τα κύτταρα του δέρματος από την υπεριώδη ακτινοβολία [33-35]. Η υπερμελάγχρωση, το αποτέλεσμα υπερπαραγωγής μελανίνης στο δέρμα, προκαλεί ανεπιθύμητες κοσμητικές ανησυχίες και σχετίζεται με δερματίτιδα και καρκίνο του δέρματος. Αρκετές αναφορές έχουν προτείνειμελανογένεσηως σημαντικός στόχος για τη θεραπεία του μεταστατικού μελανώματος [36,37]. Έτσι, υπάρχει αυξανόμενη ανάγκη για ανάπτυξη αντι-μελανογενετικών παραγόντων που ρυθμίζουν τη μελανογένεση χωρίς κυτταροτοξικότητα [38]. Υπάρχουν πολλά μονοπάτια που εμπλέκονται στη μελανογένεση του δέρματος [39,40]. Κατά τη δέσμευση του συνδέτη, το MC1R ενισχύει τη δραστηριότητα της αδενυλυλοκυκλάσης, η οποία στη συνέχεια αυξάνει τα ενδοκυτταρικά επίπεδα του cAMP [41,42]. Η εξαρτώμενη από το cAMP ενεργοποίηση της οδού PKA/CREB έχει ευρέως αναφερθεί ότι ρυθμίζει προς τα πάνω τα μεταγραφικά επίπεδα του MITF, ενισχύοντας έτσι τη σύνθεση μελανίνης [43]. Το MITF λειτουργεί ως κύριος ρυθμιστής των τριών κύριων μελανογόνων ενζύμων τυροσινάση, TRP-1 και TRP-2στα σπονδυλωτά [3,21,44]. Αυτά τα ένζυμα είναι διαμεμβρανικές πρωτεΐνες που βρίσκονται στη μελανοσωμική μεμβράνη των μελανοκυττάρων. Η τυροσινάση ρυθμίζει το περιοριστικό βήμαμελανογένεσημε μετατροπή της L-τυροσινάσης σε L-DOPA [23]. Το TRP-1 και το TRP-2 παίζουν επίσης σημαντικό ρόλο στη σύνθεση μελανίνης, αν και οι λειτουργίες τους δεν είναι πλήρως κατανοητές.

Σε αυτή τη μελέτη, η Gomisin N, μια ένωση λιγνάνης του S. chinensis έδειξε δράση αποχρωματισμού χωρίς κυτταρική τοξικότητα. Το Gomisin N ανέστειλε τη σύνθεση μελανίνης σε καλλιεργημένες κυτταρικές σειρές θηλαστικών καθώς και σε έμβρυα ζέβρα. Το Gomisin N φάνηκε να είναι πιο αποτελεσματικό από το θετικό PTU ελέγχου που αναστέλλει την παραγωγή μελανίνης σε κύτταρα Melan-A (Εικόνα 1Β). Το Gomisin N μείωσε την περιεκτικότητα σε μελανίνη κατά τρόπο εξαρτώμενο από τη συγκέντρωση. Σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου που δεν υποβλήθηκε σε αγωγή, 10 μΜ απόΓκομισίν Νμείωσε την περιεκτικότητα σε μελανίνη κατά περίπου 40 τοις εκατό, χωρίς κυτταρική τοξικότητα. Η αντι-μελανογόνος δράση του10-μM Gomisin N ήταν συγκρίσιμη με εκείνη του 100-μM PTU σε κύτταρα Melan-A. Ομοίως, το Gomisin φάνηκε να είναι πιο ισχυρό από το PTU στα ενεργοποιημένα με -MSH κύτταρα B16F10, όπου τα αποτελέσματα των 5- και10-μM Gomisin N ήταν συγκρίσιμα με εκείνα των 10- και {{12 }}μM PTU, αντίστοιχα (Εικόνα 1C). Τα κύτταρα NHEM που υποβλήθηκαν σε αγωγή με Gomisin N εμφάνισαν μειωμένα επίπεδα L-DOPA, γεγονός που υποδηλώνει ότι το GomisinN αναστέλλειτυροσινάσηδραστηριότητα σε καλλιεργημένα κύτταρα (Εικόνα 1Ε). Αυτά τα ευρήματα μας οδήγησαν να διερευνήσουμε περαιτέρω τον υποκείμενο μηχανισμό με τον οποίο το Gomisin N αναστέλλει τη μελανογένεση.

Εξετάσαμε ανΓκομισίν Νρυθμίζει άμεσα την καταλυτική δραστηριότητα τουτυροσινάσηin vitro. Σε αντίθεση με το Kojic acid, το Gomisin N δεν έδειξε ανασταλτικές επιδράσεις στη δραστηριότητα της τυροσινάσης μανιταριού (Εικόνα 2Α). Ωστόσο, η κυτταρική δραστηριότητα τυροσινάσης σε προϊόντα λύσης κυττάρων μελανώματος Β16 μειώθηκε σημαντικά από το Gomisin N τόσο με όσο και χωρίς θεραπεία με -MSH (Εικόνα 2B,C). Η αναστολή της δραστικότητας της κυτταρικής τυροσινάσης του ερεθίσματος Gomisin N επί -MSH βρέθηκε να είναι πιο σημαντική από αυτή του θετικού μάρτυρα Kojic acid (Εικόνα 2C).

Υποθέσαμε ότι η αντι-μελανογονική λειτουργία του Gomisin N μπορεί να συμβεί μέσω της μεταγραφικής ή μετα-μεταγραφικής ρύθμισης της τυροσινάσης και των πρωτεϊνών που σχετίζονται με την τυροσινάση (TRPs). ποσότητα και ποιότητα παραγωγής μελανίνης στα μελανοκύτταρα. Αναμενόμενα, παρατηρήσαμε ότι η Gomisin N μείωσε τα επίπεδα του MC1R και των αδενυλυλοκυκλασών 2 στα κύτταρα Melan-A (Εικόνα 3A-C). Επί πλέον,Γκομισίν Νμείωσε την έκφραση του MITF και των πρωτεϊνών-στόχων του, συμπεριλαμβανομένων των τυροσινάσης, TRP-1 και TRP-2 (Εικόνα 3A,D-G). Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι τα μειωμένα επίπεδα περιεχομένων μελανίνης κατά τη θεραπεία με Gomisin N προκύπτουν από την απενεργοποίηση της οδού MC1R.

Από την άλλη πλευρά, τα μονοπάτια PI3K/Akt και MAPK/ERK μπορούν να φωσφορυλιώσουν το MITF και έτσι να ρυθμίσουν μετα-μεταγραφικά τη δραστηριότητά του [45]. Ωστόσο, η συνολική επίδραση της ενεργοποίησης των μονοπατιών PI3K/Akt και MAPK/ERK σεμελανογένεσηείναι αμφιλεγόμενη. Τόσο τα μονοπάτια PI3K/Akt όσο και MAPK/ERK ενεργοποιούνται συστατικά στα ανθρώπινα μελανώματα λόγω συσσωρευμένων μεταλλάξεων [46]. Η αποχρωματισμός που προκαλείται από το κεραμίδιο στα κύτταρα Mel-Ab είναι γνωστό ότι συμβαίνει μέσω της μείωσης των επιπέδων p-Akt [47]. Υπάρχουν αρκετές φυσικές ενώσεις που ενεργοποιούν τη μελανογένεση ρυθμίζοντας προς τα πάνω τα επίπεδα p-ERK στα κύτταρα μελανώματος Β16 [28]. Αντίθετα, υπάρχουν επίσης ενδείξεις ότι τα αυξημένα επίπεδα p-ERK και p-Akt αναστέλλουν τη σύνθεση μελανίνης [28,48]. Η ρύθμιση της πολυπλοκότητας της μελανογένεσης μπορεί να εξηγηθεί εν μέρει από το γεγονός ότι η φωσφορυλίωση ενισχύει τη μεταγραφική δραστηριότητα του MITF, αλλά ταυτόχρονα επάγει την εξαρτώμενη από την ουβικουίτιον-πρωτεόσωμα αποδόμηση του MITF [26,49-51]. Τα δεδομένα μας έδειξαν ότι τόσο τα επίπεδα p-Akt όσο και τα επίπεδα p-ERK ρυθμίστηκαν προς τα πάνω σε κύτταρα Melan-A που είχαν υποστεί αγωγή με Gomisin N (Εικόνα 3H–J). Αυτό σημαίνει ότι τα μονοπάτια PI3K/Akt και MAPK/ERK μπορεί να συμβάλλουν στην αναστολή της παραγωγής μελανίνης.

Επικυρώσαμε περαιτέρω την αντι-μελανογόνο δράση του Gomisin N στο in vivo μοντέλο zebrafish. Τα έμβρυα zebrafish που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με Gomisin N έδειξαν σημαντική μείωση στη μελάγχρωση της μελανίνης (Εικόνα 4). Επιπλέον, το Gomisin N μείωσε σημαντικά τα επίπεδα τουτυροσινάση, MITF, TRP-1 και TRP-2 στην ανάπτυξη εμβρύων ζέβρα. Αυτά τα ευρήματα συλλογικά υποδηλώνουν ότιΓκομισίν Νπροκαλεί αποχρωματισμό με μείωση της έκφρασης του MITF και των μελανογόνων ενζύμων in vivo. Η αντι-μελανογόνος δράση του Gomisin N επιβεβαιώθηκε περαιτέρω σε κύτταρα MNT-1 ανθρώπινου μελανώματος που διεγείρονται από τη ραπαμυκίνη. Παρόλο που η Gomisin N είχε ως αποτέλεσμα μόνο μικρές αλλαγές στην περιεκτικότητα σε μελανίνη σε κύτταρα MNT-1 (Εικόνα 1D), ήταν αποτελεσματική η αναστροφή της επαγόμενης από τη ραπαμυκίνη ανοδική ρύθμιση των MITF, TRP-1 και TRP-2 σε τρόπο που εξαρτάται από τη συγκέντρωση (Εικόνα 6Α, Γ-Ε). Συνολικά, η ρυθμιστική επίδραση τουΓκομισίν Νσχετικά με το MITF και τα μελανογόνα ένζυμα βρέθηκε αναπαραγώγιμα σε κύτταρα ποντικού και ανθρώπου καθώς και σε έμβρυα ζέβρα.

Συνοψίζοντας, αυτό το έργο υποδηλώνει ότι το Gomisin N μπορεί να έχει υψηλές δυνατότητες ως μυθιστόρημαλεύκανση δέρματοςμέσο. Το Gomisin N φαίνεται να αναστέλλειμελανογένεσημε την καταστολή της έκφρασης του MITF μέσω της οδού MC1R, αντί να ρυθμίζει άμεσα την καταλυτική δραστηριότητα τουτυροσινάσηκαι TRP. Αν και οι λεπτομερείς μηχανισμοί απομένουν να διευκρινιστούν, η επαγόμενη από το Gomisin N αποχρωματισμό είναι πιθανό να σχετίζεται με την ενεργοποίηση των οδών PI3K/Akt και MAPK/ERK (Εικόνα 7).

4. Υλικά και Μέθοδοι

4.1. Υλικά

Το RPMI1640 αγοράστηκε από την Gibco-BRL (Gaithersburg, MD, ΗΠΑ). Το τροποποιημένο μέσο Eagle της Dulbecco (DMEM), ο εμβρυϊκός βόειος ορός (FBS) και η πενικιλλίνη-στρεπτομυκίνη (PS) αγοράστηκαν από την Hyclone (Carlsbad, CA, USA). Το μέσο ανάπτυξης μελανοκυττάρων αγοράστηκε από την PromoCell (Heidelberg, Γερμανία). Φθορίδιο φαινυλμεθυλοσουλφονυλίου (PMSF), 12-Ο-τετραδεκανοϋλοφορβόλη-13-οξική (TPA), Κοτζικό οξύ, 1-φαινυλ-2-θειουρία (PTU), τυροσινάση μανιταριού, 3,{{ 9}}διυδροξυ-1-φαινυλαλανίνη (L-DOPA), -MSH, διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO) και παραφορμαλδεΰδη αγοράστηκαν από τη SigmaChemical Co. (St. Louis, ΜΟ, ΗΠΑ).Γκομισίν ΝΗ ένωση παρέχεται από τον Chul Young Kim (Πανεπιστήμιο Hanyang, Ansan, Κορέα). Η ραπαμυκίνη αγοράστηκε από τη Sigma-Aldrich (St. Louis, ΜΟ, ΗΠΑ).

4.2. Κυτταρικής καλλιέργειας

Η κυτταρική σειρά μελανώματος ποντικού B16F10 παρασχέθηκε από την Korean Cell Line Bank (Σεούλ, Κορέα). Τα κύτταρα Melan-A μελανοκυττάρων ποντικού [52] ήταν ένα γενναιόδωρο δώρο από τον Δρ. Byeong Gon Lee (the SkinResearch Institute, Amore Pacific Co., Yongin -si, Κορέα). Τα ανθρώπινα κύτταρα μελανώματος MNT-1 παρασχέθηκαν γενναιόδωρα από τον Aeyeong Lee (Κολάζ Ιατρικής στο Πανεπιστήμιο Dongguk, Goyang-si, Κορέα). Πρωτογενή φυσιολογικά ανθρώπινα επιδερμικά μελανοκύτταρα (NHEM) αγοράστηκαν από την PromoCell (Heidelberg, Γερμανία). Τα κύτταρα Melan-A αναπτύχθηκαν σε μέσο RPMI 1640 (Gibco, Carlsbad, CA, USA) συμπληρωμένο με 10 τοις εκατό FBS, 1 τοις εκατό PS και 200 ​​ηΜ ΤΡΑ. DMEM συμπληρωμένο με 10 τοις εκατό FBS και 1 τοις εκατό PS χρησιμοποιήθηκε για τη διατήρηση των κυττάρων Melan-A και των κυττάρων NHEM. Όλα τα κύτταρα επωάστηκαν στους 37 ◦C σε επωαστήρα 5 τοις εκατό CO2.

4.3. Μέτρηση της περιεκτικότητας σε μελανίνη

Τα κύτταρα Melan-A σπάρθηκαν σε μια πλάκα 24-πηγαδιού (1 × 105 κύτταρα/φρεάτιο), που υποβλήθηκε σε επεξεργασία μεΓκομισίν Νκαι στη συνέχεια επωάστηκε για 72 ώρες. Μετά από 72 ώρες, η περιεκτικότητα σε μελανίνη μετρήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [53]. Εν συντομία, μετά την αφαίρεση του μέσου καλλιέργειας, τα κύτταρα πλύθηκαν τρεις φορές με PBS. Στη συνέχεια, διάλυμα υδροξειδίου του νατρίου (1 mL, 1 Ν) προστέθηκε σε κάθε φρεάτιο για να διαλυθεί η μελανίνη. Η απορρόφηση στα 405 nm μετρήθηκε χρησιμοποιώντας συσκευή ανάγνωσης μικροπλάκας. Αυτή η δοκιμασία επαναλήφθηκε με κύτταρα B16F10 (2 × 104 κύτταρα/φρεάτιο) και κύτταρα MNT{10}} ακολουθώντας την ίδια μέθοδο.

4.4. Ανάλυση Western Blot

Τα κύτταρα Melan-A σπάρθηκαν σε δίσκους 100 mm (1 × 106 κύτταρα/πιάτο) και υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 1, 5 ή 10 μΜΓκομισίν Νγια τρεις ημέρες στους 37 ◦C. Τα κύτταρα πλύθηκαν με PBS και στη συνέχεια συλλέχθηκαν χρησιμοποιώντας έναν ξύστρα. Τα αποκολλημένα κύτταρα τοποθετήθηκαν σε 1 ml PBS και φυγοκεντρήθηκαν στις 7500 rpm για 5 λεπτά. Μετά την αφαίρεση του άνω διαλύματος, τα σφαιρίδια κυττάρων λύθηκαν με ρυθμιστικό λύσης (50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 0,1 τοις εκατό SDS, 150 mM NaCl, 1 τοις εκατό NP-40, 0,02 τοις εκατό αζίδιο του νατρίου, 0,5 τοις εκατό δεοξυχολικό νάτριο, 100 μg/mL PMSF, 1 g/mL απρωτινίνη) για 24 ώρες στους 4 ◦C. Οι συνολικές πρωτεΐνες εκχυλίστηκαν χρησιμοποιώντας υπερφυγόκεντρο στις 12,000 rpm για 30 λεπτά στους 4°C. Η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη μετρήθηκε χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία Bradford. Πρωτεΐνες (30 μg) διαχωρίστηκαν χρησιμοποιώντας γέλη ηλεκτροφόρησης γέλης δωδεκυλοθειικού νατρίου-πολυακρυλαμιδίου 10 τοις εκατό (SDS-PAGE) και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνη ανιτροκυτταρίνης. Η μεμβράνη αποκλείστηκε για 1 ώρα με 5 τοις εκατό αποβουτυρωμένο γάλα σε ρυθμιστικό διάλυμα Tris με Tween-20 (TBST) και στη συνέχεια επωάστηκε για 12 ώρες στους 4 ◦C με πρωτογενή αντισώματα που στοχεύουν την τουμπουλίνη (Santa Cruz, CA, USA ), MITF (Cell Signaling, Danvers, MA, USA), τυροσινάση (Cell Signaling), ERK (Cell Signaling), phospho-ERK (Cell Signaling), AKT (Cell Signaling), phospho-AKT (Cell Signaling), MC1R ( Santa Cruz), αδενυλυλοκυκλάσες 2 (Santa Cruz), TRP-1 (Santa Cruz) και TRP-2 (Santa Cruz). Μετά την αφαίρεση των πρωτογενών αντισωμάτων, οι μεμβράνες πλύθηκαν τρεις φορές με TBST και επωάστηκαν με δευτερεύον αντισώματα (κουνελιού αντι-κατσίκας IgG-HRP, ποντικού αντι-κουνελιού HRP, Santa Cruz) για 1 ώρα. Οι μεμβράνες υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με αντιδραστήριο ενισχυμένης χημειοφωταύγειας χρησιμοποιώντας το σύστημα απεικόνισης ChemiDoc XRS plus (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Πραγματοποιήθηκε πυκνομετρική ανάλυση των ζωνών χρησιμοποιώντας λογισμικό Image MasterTM 2D Elite (έκδοση 3.1, GE Healthcare, Chicago, IL, USA).

4.5. Δοκιμασία δραστηριότητας τυροσινάσης

Για την εκτίμηση της ανασταλτικής δράσης του Gomisin N στα μανιτάριατυροσινάσηδραστηριότητα, η τυροσινάση επωάστηκε με 1, 5 ή 10 μΜΓκομισίν Νή το θετικό μάρτυρα Kojic acid. Κάθε δείγμα διαλύθηκε σε μεθανόλη. Το L-DOPA (8,3 mM) και η τυροσινάση μανιταριού (125 U) αραιώθηκαν σε 80 mM φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα (ρΗ 6,8). 40 μL από κάθε δείγμα και 120 μL L-DOPA αναμίχθηκαν σε 96-πηγαδάκι, ακολουθούμενο από την προσθήκη 40 μL αραιωμένης τυροσινάσης μανιταριού. Οι πλάκες στη συνέχεια επωάστηκαν για 15 λεπτά και η απορρόφηση μετρήθηκε στα 490 nm χρησιμοποιώντας συσκευή ανάγνωσης μικροπλάκας.

ΤυροσινάσηΗ δραστηριότητα σε προϊόντα λύσης κυττάρων μελανώματος Β16 μετρήθηκε με ή χωρίς θεραπεία με -MSH, όπως περιγράφηκε προηγουμένως από τους Ohguchi et al. [54], με μικρές τροποποιήσεις. Το κυτταρόλυμα παρασκευάστηκε όπως περιγράφεται παραπάνω στο τμήμα ανάλυσης Western Blot. Οι συνολικές πρωτεΐνες στο υπερκείμενο μετρήθηκαν με δοκιμασία Bradford χρησιμοποιώντας λευκωματίνη ορού βοοειδών ως πρότυπο [55]. Μια ίση ποσότητα πρωτεϊνών αραιώθηκε και χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό δραστικότητας τυροσινάσης.

αναστέλλουν τη δραστηριότητα της τυροσινάσης

4.6. Χρώση L-DOPA σε κύτταρα NHEM

Τα κύτταρα NHEM σπάρθηκαν σε μια πλάκα {0}}πηγαδιού και επωάστηκαν για 72 ώρες με Gomisin N. Τα κύτταρα σταθεροποιήθηκαν με 4 τοις εκατό παραφορμαλδεΰδη για 40 λεπτά, ακολουθούμενη από επεξεργασία με 0,1 τοις εκατό Triton X{ {6}} για 2 λεπτά. Προστέθηκε L-DOPA (0,1 τοις εκατό) σε κάθε φρεάτιο, ακολουθούμενο από επώαση για 2 ώρες. Μετά την απομάκρυνση του διαλύματος, τα κύτταρα πλύθηκαν δύο φορές με PBS. Οι εικόνες φωτογραφήθηκαν με μικροσκόπιο.

4.7. Πειράματα ζέβρα

Τα έμβρυα Zebrafish ελήφθησαν από την Zebrafish Resource Bank (Daegu, Κορέα). Τα έμβρυα υποβλήθηκαν σε θεραπεία με Gomisin N για 72 ώρες. Η αποχρωματιστική επίδραση τουΓκομισίν Νσε έμβρυα ζέβρα παρατηρήθηκαν κάτω από το στερεομικροσκόπιο. Για ανάλυση στυπώματος Western, έμβρυα που υπέστησαν επεξεργασία με Gomisin Ν λύθηκαν χρησιμοποιώντας ρυθμιστικό διάλυμα λύσης, από το οποίο παρασκευάστηκαν ολικές πρωτεΐνες όπως αναφέρθηκε παραπάνω.

5. Συμπεράσματα

Το αποτέλεσμά μας υποστηρίζει την άποψη ότι το Gomisin N έχει μεγάλες δυνατότητες χρήσης ως λειτουργικό τρόφιμο καιλεύκανση δέρματοςμέσο.Γκομισίν Νείναι μία από τις κύριες ενώσεις λιγνάνης στο S. Chinensis. Στην πραγματικότητα, ο Σ. Το Chinensis είναι ένα φυτικό φάρμακο που χρησιμοποιείται για τη θεραπεία πολλών ανθρώπινων ασθενειών. Ωστόσο, απαιτούνται περαιτέρω επιδημιολογικές μελέτες για να αποδειχθεί η ασφάλεια του Gomisin N στο δέρμα. Κατά συνέπεια, in vivo μελέτες και κλινικές δοκιμές θα είναι σε θέση να αποδείξουν με μεγαλύτερη σαφήνεια την αποτελεσματικότητα του GomisinN. Συμπερασματικά, η παρούσα μελέτη προτείνει ότιΓκομισίν Νμπορεί να είναι ένας πιθανός υπο-χρωστικός παράγοντας και φυσικόςλεύκανση δέρματοςυποψήφιος για τη βιομηχανία καλλυντικών.

το cistanche βελτιώνει τη λεύκανση

βιβλιογραφικές αναφορές

1. Alaluf, S.; Atkins, D.; Barrett, Κ.; Blount, Μ.; Carter, Ν.; Heath, A. Η επίδραση της επιδερμικής μελανίνης στις αντικειμενικές μετρήσεις του χρώματος του ανθρώπινου δέρματος. Pigment Cell Res. 2002, 15, 119–126. [CrossRef] [PubMed]

2. D'Mello, SA; Finlay, GJ; Baguley, BC; Askarian-Amiri, ME Signaling Pathways in Melanogenesis. Int. J.Mol. Sci. 2016, 17, 1144. [CrossRef] [PubMed]

3. Slominski, Α.; Tobin, DJ; Shibahara, S.; Wortsman, J. Μελάγχρωση μελανίνης στο δέρμα θηλαστικών και η ορμονική του ρύθμιση. Physiol. Rev. 2004, 84, 1155–1228. [CrossRef] [PubMed]

4. Herrling, Τ.; Jung, Κ.; Fuchs, J. Ο ρόλος της μελανίνης ως προστάτη έναντι των ελεύθερων ριζών στο δέρμα και ο ρόλος της ως δείκτης ελευθέρων ριζών στα μαλλιά. Spectrochim Acta Α ΜοΙ. Biomol. Spectrosc. 2008, 69, 1429–1435. [CrossRef] [PubMed]

5. Brozyna, ΑΑ; Jozwicki, W.; Roszkowski, Κ.; Filipiak, J.; Slominski, AT Η περιεκτικότητα σε μελανίνη στις μελανομεταστάσεις επηρεάζει την έκβαση της ακτινοθεραπείας. Oncotarget 2016, 7, 17844–17853. [CrossRef] [PubMed]

6. Slominski, Α.; Wortsman, J.; Plonka, PM; Schallreuter, KU; Paus, R.; Tobin, DJ Μελάγχρωση τριχοθυλακίων.J. Ερευνήστε. Dermatol. 2005, 124, 13–21. [CrossRef] [PubMed]

7. Slominski, Α.; Zmijewski, MA; Pawelek, J. L-τυροσίνη και L-διυδροξυφαινυλαλανίνη ως ορμονοειδείς ρυθμιστές των λειτουργιών των μελανοκυττάρων. Pigment Cell Melanoma Res. 2012, 25, 14–27. [CrossRef] [PubMed]

8. Lee, AY Πρόσφατη πρόοδος στην παθογένεση του μελάσματος. Pigment Cell Melanoma Res. 2015, 28, 648–660. [CrossRef][PubMed]9. Speeckaert, R.; van Gele, Μ.; Speeckaert, MM; Lambert, J.; van Geel, N. The biology of hyperpigmentationsyndromes. Pigment Cell Melanoma Res. 2014, 27, 512–524. [CrossRef] [PubMed]

10. Slominski, RM; Zmijewski, MA; Slominski, AT Ο ρόλος της χρωστικής μελανίνης στο μελάνωμα. Exp. Dermatol.2015, 24, 258–259. [CrossRef] [PubMed]11. Slominski, Α.; Wortsman, J.; Tobin, DJ Το δερματικό σεροτονινεργικό/μελατονινεργικό σύστημα: Ασφάλιση κάτω από τον ήλιο. FASEB J. 2005, 19, 176–194. [CrossRef] [PubMed]

12. Sarkar, R.; Arora, Ρ.; Garg, KV Cosmeceuticals για Υπερμελάγχρωση: Τι είναι διαθέσιμο; J. CutaneousAesthet. Surg. 2013, 6, 4–11. [CrossRef] [PubMed]

13. Miyamura, Υ.; Coelho, SG; Wolber, R.; Miller, SA; Wakamatsu, Κ.; Zmudzka, BZ; Ito, S.; Smuda, C.;Passeron, T.; Choi, W.; et al. Ρύθμιση της μελάγχρωσης του ανθρώπινου δέρματος και αποκρίσεις στην υπεριώδη ακτινοβολία. Pigment Cell Res. 2007, 20, 2–13. [CrossRef] [PubMed]

14. Davis, EC; Callender, VD Μεταφλεγμονώδης υπερμελάγχρωση: Ανασκόπηση της επιδημιολογίας, των κλινικών χαρακτηριστικών και των επιλογών θεραπείας στο έγχρωμο δέρμα. J. Clin. Aesthet. Dermatol. 2010, 3, 20–31. [PubMed]

15. Sales-Campos, H.; Souza, PR; Peghini, π.Χ. da Silva, JS; Cardoso, CR Μια επισκόπηση των ρυθμιστικών επιδράσεων του ελαϊκού οξέος στην υγεία και τις ασθένειες. Μίνι. Rev. Med. Chem. 2013, 13, 201–210. [CrossRef] [PubMed]

16. Parvez, S.; Kang, Μ.; Chung, HS; Cho, C.; Hong, MC; Shin, MK; Bae, H. Έρευνα και μηχανισμός παραγόντων αποχρωματισμού και λεύκανσης του δέρματος. Phytother. Res. 2006, 20, 921-934. [CrossRef] [PubMed]

17. Luo, L.; Jiang, L.; Geng, C.; Cao, J.; Zhong, L. Γονοτοξικότητα που προκαλείται από υδροκινόνη και οξειδωτική βλάβη DNA σε κύτταρα HepG2. Chem. Biol. Αλληλεπιδρώ. 2008, 173, 1–8. [CrossRef] [PubMed]

18. Enguita, FJ; Leitao, AL Hydroquinone: Περιβαλλοντική ρύπανση, τοξικότητα και μικροβιακές απαντήσεις. BioMed Res. Int. 2013, 2013, 542168. [CrossRef] [PubMed]

19. Draelos, ZD Παρασκευάσματα λεύκανσης δέρματος και η διαμάχη της υδροκινόνης. Dermatol. Εκεί. 2007, 20.308–313. [CrossRef] [PubMed]

20. Koo, JH; Lee, Ι.; Yun, SK; Kim, HU; Park, BH; Park, JW Saponified έλαιο νυχτολούλουδου μειώνει τη μελανογένεση στα κύτταρα μελανώματος Β16 και μειώνει τη μελάγχρωση του δέρματος που προκαλείται από την υπεριώδη ακτινοβολία στον άνθρωπο. Lipids 2010,45, 401-407. [CrossRef] [PubMed]

21. Cordell, GA; Colvard, MD Φυσικά προϊόντα και παραδοσιακή ιατρική: Ενεργοποίηση ενός παραδείγματος. J. Nat. Prod.2012, 75, 514–525. [CrossRef] [PubMed]

22. Panossian, Α.; Wikman, G. Pharmacology of Schisandra Chinensis Bail: Μια επισκόπηση της ρωσικής έρευνας και χρήσεων στην ιατρική. J. Ethnopharmacol. 2008, 118, 183–212. [CrossRef] [PubMed]

23. Chen, Ρ.; Pang, S.; Yang, Ν.; Meng, Η.; Liu, J.; Zhou, Ν.; Zhang, Μ.; Xu, Ζ.; Gao, W.; Chen, Β.; et al. Ευεργετικές επιδράσεις του Schisandrin B στην καρδιακή λειτουργία σε ποντίκια μοντέλο εμφράγματος του μυοκαρδίου. PLoS ONE 2013, 8, e79418. [CrossRef] [PubMed]

24. Lee, HJ; Jo, S.; Ryu, J.; Jeong, HS; Lee, G.; Ryu, ΜΗ; Jung, ΜΗ; Kim, Η.; Kim, BJ Effects of SchisandraChinensis Turcz. φρούτα σε δερματίτιδα εξ επαφής που προκαλείται από δινιτροφθοροβενζόλιο σε ποντίκια. ΜοΙ. Med. Έκθεση 2015,12, 2135–2139. [CrossRef] [PubMed]

25. Chun, JN; Cho, Μ.; Και 'γώ το ίδιο.; Jeon, JH Οι προστατευτικές επιδράσεις του εκχυλίσματος φρούτων Schisandra Chinensis και των λιγνανών του κατά των καρδιαγγειακών παθήσεων: Ανασκόπηση των μοριακών μηχανισμών. Fitoterapia 2014, 97, 224–233.[CrossRef] [PubMed]

26. Kang, OH; Chae, HS; Choi, JH; Choi, HJ; Park, PS; Cho, SH; Lee, GH; Λοιπόν, HY; Choo, YK;Kweon, OH; et al. Επιδράσεις του υδατικού εκχυλίσματος Schisandra Fructus στην απελευθέρωση κυτοκίνης από μια κυτταρική σειρά ανθρώπινου ιστού. J. Med. Food 2006, 9, 480–486. [CrossRef] [PubMed]

27. Poma, Α.; Bianchini, S.; Miranda, M. Inhibition of L-tyrosine-induced micronuclei production byphenylthiourea in human cell melanoma. Mutat. Res. 1999, 446, 143–148. [CrossRef]

28. Kim, HJ; Kim, IS; Dong, Υ.; Lee, IS; Kim, JS; Kim, JS; Woo, JT; Cha, BY Επίδραση επαγωγής μελανογένεσης της σιρσιμαριτίνης μέσω αυξήσεων στον μεταγραφικό παράγοντα που σχετίζεται με τη μικροφθαλμία και στην έκφραση της τυροσινάσης. Int. J. ΜοΙ. Sci. 2015, 16, 8772–8788. [CrossRef] [PubMed]

29. Busca, R.; Abbe, Ρ.; Mantoux, F.; Aberdam, Ε.; Peyssonnaux, C.; Eychene, Α.; Ortonne, JP; Ballotti, R. Rasmediates the cAMP-εξαρτώμενη ενεργοποίηση των εξωκυτταρικών κινασών που ρυθμίζονται με σήμα (ERKs) σε μελανοκύτταρα.EMBO J. 2000, 19, 2900-2910. [CrossRef] [PubMed]

30. Busca, R.; Ballotti, R. Cyclic AMP ένας βασικός αγγελιοφόρος στη ρύθμιση της μελάγχρωσης του δέρματος. Pigment Cell Res.2000, 13, 60-69. [CrossRef] [PubMed]

31. Χα, ΥΣ; Cho, HY; Lim, TY; Park, DH; Kim, HM; Yoon, J.; Kim, JG; Kim, CY; Yoon, TJ Επαγωγή μελανογένεσης από ραπαμυκίνη σε ανθρώπινα κύτταρα μελανώματος MNT-1. Αννα. Dermatol. 2012, 24, 151–157. [CrossRef][PubMed]

32. Yun, WJ; Kim, EY; Park, JE; Jo, SY; Bang, SH; Chang, EJ; Chang, SE συνδεδεμένη με μικροσωληνίσκο πρωτεϊνική αλυσίδα 3 εμπλέκεται στη μελανογένεση μέσω ρύθμισης της έκφρασης MITF στα μελανοκύτταρα. Sci. Report.2016, 6, 19914. [CrossRef] [PubMed]

33. Spritz, RA; Ακοή, VJ, Jr. Γενετικές διαταραχές της μελάγχρωσης. Adv. Βουητό. Genet. 1994, 22, 1–45. [PubMed]

34. Kadekaro, AL; Chen, J.; Yang, J.; Chen, S.; Jameson, J.; Swope, VB; Cheng, Τ.; Καδάκια, Μ.; Η ορμόνη διέγερσης των μελανοκυττάρων Abdel-Malek, Z. καταστέλλει το οξειδωτικό στρες μέσω της διαμεσολαβούμενης οδού σηματοδότησης στα ανθρώπινα μελανοκύτταρα. ΜοΙ. Cancer Res. 2012, 10, 778–786. [CrossRef] [PubMed]

35. Wasmeier, C.; Hume, AN; Bolasco, G.; Seabra, MC Melanosomes με μια ματιά. J. Cell Sci. 2008, 121.3995–3999. [CrossRef] [PubMed]

36. Brozyna, ΑΑ; Jozwicki, W.; Carlson, JA; Slominski, AT Melanogenesis επηρεάζει τη συνολική επιβίωση και την ελεύθερη νόσου σε ασθενείς με μελάνωμα σταδίου III και IV. Βουητό. Pathol. 2013, 44, 2071–2074. [CrossRef] [PubMed]

37. Slominski, Α.; Kim, TK; Brozyna, ΑΑ; Janjetovic, Ζ.; Brooks, DL; Schwab, LP; Skobowiat, C.; Jozwicki, W.;Seagroves, TN Ο ρόλος της μελανογένεσης στη ρύθμιση της συμπεριφοράς του μελανώματος: Η μελανογένεση οδηγεί στη διέγερση της έκφρασης του HIF-1 και των συνοδών οδών που εξαρτώνται από τον HIF. Αψίδα. Biochem. Biophys. 2014, 563,79–93. [CrossRef] [PubMed]

38. Kim, HJ; Lee, JH; Shin, MK; Hyun Leem, K.; Kim, YJ; Lee, MH Ανασταλτική επίδραση της μελανογένεσης εκχύλισης Gastrodia elata σε κύτταρα μελανώματος HM3KO. J. Cosmet. Sci. 2013, 64, 89–98. [PubMed]

39. Hemesath, TJ; Τιμή, ER; Takemoto, C.; Badalian, Τ.; Η κινάση Fisher, DE MAP συνδέει τον μεταγραφικό παράγοντα Μικροφθαλμία με τη σηματοδότηση του c-Kit στα μελανοκύτταρα. Nature 1998, 391, 298–301. [PubMed]

40. Price, ER; Ding, HF; Badalian, Τ.; Bhattacharya, S.; Takemoto, C.; Yao, TP; Hemesath, TJ; Fisher, DEL-ειδική σηματοδότηση σε μελανοκύτταρα. Η διέγερση του C-kit στρατολογεί το p300/CBP στη μικροφθαλμία.J. Biol. Chem. 1998, 273, 17983–17986. [CrossRef] [PubMed]

41. Bertolotto, C.; Abbe, Ρ.; Hemesath, TJ; Bille, Κ.; Fisher, DE; Ortonne, JP; Ballotti, R. προϊόν Microphthalmiagene ως μετατροπέας σήματος στην επαγόμενη από cAMP διαφοροποίηση μελανοκυττάρων. J. Cell ΒίοΙ. 1998, 142.827–835. [CrossRef] [PubMed]

42. Pogenberg, V.; Ogmundsdottir, MH; Bergsteinsdottir, Κ.; Schepsky, Α.; Phung, Β.; Deineko, V.; Milewski, Μ.; Steingrimsson, Ε.; Wilmanns, M. Περιορισμένος διμερισμός φερμουάρ λευκίνης και ειδικότητα αναγνώρισης DNA του κύριου ρυθμιστή μελανοκυττάρων MITF. Genes Dev. 2012, 26, 2647–2658. [CrossRef] [PubMed]

43. Flaherty, KT; Hodi, FS; Fisher, DE Από τα γονίδια στα φάρμακα: Στοχευμένες στρατηγικές για το μελάνωμα. Nat. Rev. Cancer2012, 12, 349-361. [CrossRef] [PubMed]

44. Lee, TH; Seo, JO; Baek, SH; Kim, SY Ανασταλτικές επιδράσεις της ρεσβερατρόλης στη σύνθεση μελανίνης σε μελάγχρωση που προκαλείται από την υπεριώδη Β σε δέρμα ινδικού χοιριδίου. Biomol. Εκεί. 2014, 22, 35–40. [CrossRef] [PubMed]

45. Su, TR; Lin, JJ; Tsai, CC; Huang, TK; Yang, ZY; Wu, MO; Zheng, YQ; Su, CC; Wu, YJ Αναστολή μελανογένεσης από γαλλικό οξύ: Πιθανή εμπλοκή των οδών σηματοδότησης PI3K/Akt, MEK/ERK και Wnt/-κατενίνης στα κύτταρα B16F10. Int. J. ΜοΙ. Sci. 2013, 14, 20443–20458. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Yajima, Ι.; Kumasaka, MY; Thang, ND; Goto, Υ.; Takeda, Κ.; Yamashita, Ο.; Iida, Μ.; Ohgami, N.;Tamura, H.; Kawamoto, Υ.; et al. RAS/RAF/MEK/ERK και PI3K/PTEN/AKT Σηματοδότηση στην Πρόοδο και Θεραπεία Κακοήθους Μελανώματος. Dermatol. Res. Πρακτική. 2012, 2012, 354191. [CrossRef] [PubMed]

47. Kim, DS; Kim, SY; Moon, SJ; Chung, JH; Kim, KH; Cho, KH; Park, KC Ceramide αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων μέσω της αδρανοποίησης AKT/PKB και μειώνει τη σύνθεση μελανίνης στα κύτταρα Mel-Ab. Pigment Cell Res. 2001, 14, 110–115. [CrossRef] [PubMed]

48. Kim, JH; Baek, SH; Kim, DH; Choi, TY; Yoon, TJ; Hwang, JS; Kim, MR; Kwon, HJ; Lee, CHDownregulation of melanin synthesis by έχοντας το A και η εφαρμογή του σε in vivo μοντέλο κεραυνών. J.Investig. Dermatol. 2008, 128, 1227–1235. [CrossRef] [PubMed]

49. Hartman, ML; Czyz, M. MITF στο μελάνωμα: Μηχανισμοί πίσω από την έκφραση και τη δραστηριότητά του. Cell Mol.Life Sci. 2015, 72, 1249–1260. [CrossRef] [PubMed]

50. Kim, DS; Hwang, ES; Lee, JE; Kim, SY; Kwon, SB; Park, KC Sphingosine-1-φωσφορική μειώνει τη σύνθεση μελανίνης μέσω της παρατεταμένης ενεργοποίησης του ERK και της επακόλουθης αποικοδόμησης του MITF. J. Cell Sci. 2003, 116,1699–1706. [CrossRef] [PubMed]

51. Xu, W.; Gong, L.; Haddad, MM; Bischof, Ο.; Campisi, J.; Ναι, ET; Medrano, EE Ρύθμιση των επιπέδων πρωτεΐνης μεταγραφικού παράγοντα MITF που σχετίζεται με τη μικροφθαλμία μέσω συσχέτισης με το ένζυμο σύζευξης θεουβικιτίνης hUBC9. Exp. Cell Res. 2000, 255, 135–143. [CrossRef] [PubMed]

52. Bennett, DC; Cooper, PJ; Hart, IR Μια σειρά μη ογκογόνων μελανοκυττάρων ποντικού, συγγενή με το μελάνωμα Β16 και που απαιτεί έναν προαγωγέα όγκου για την ανάπτυξη. Int. J. Cancer 1987, 39, 414-418. [CrossRef][PubMed]

53. Meira, WV; Heinrich, TA; Cadena, SM; Martinez, GR Το Melanogenesis αναστέλλει την αναπνοή σε κύτταρα μελανώματος B16-F10 ενώ ενισχύει το περιεχόμενο των μιτοχονδριακών κυττάρων. Exp. Cell Res. 2017, 350, 62–72. [CrossRef][PubMed]

54. Ohguchi, Κ.; Tanaka, Τ.; Iliya, I.; Ito, Τ.; Iinuma, Μ.; Matsumoto, Κ.; Akao, Υ.; Nozawa, Υ. Gnetol ως αναστολέας potenttyrosinase από το γένος Gnetum. Biosci. Biotechnol. Biochem. 2003, 67, 663-665. [CrossRef] [PubMed]

55. Uchida, R.; Ishikawa, S.; Tomoda, H. Αναστολή της δραστηριότητας τυροσινάσης και μελάγχρωσης μελανίνης από2-υδροξυτυροσόλη. Acta Pharm. Sinica B 2014, 4, 141–145. [CrossRef] [PubMed]