Αξιολόγηση των αντιοξειδωτικών, λευκαντικών και αντιγηραντικών ιδιοτήτων των υδρολυμάτων πρωτεΐνης ρυζιού

Επικοινωνία:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Hui-Ju Chen 1,2, Fan-Jhen Dai 2, Cheng-You Chen 3, Siao-Ling Fan 2, Ji-Hong Zheng 4, Yu-Chun Huang 2, Chi-Fai Chau 1, Yung-Sheng Lin 3, 4,5,* και Chin-Shuh Chen 1,*

Αφηρημένη:Τα υδρολύματα πρωτεϊνών φυτικής προέλευσης έχουν πιθανές εφαρμογές στη διατροφή. Τα πρωτεϊνικά υδρολύματα ρυζιού (RPHs), μια εξαιρετική πηγή πρωτεϊνών, έχουν προσελκύσει την προσοχή για την ανάπτυξη καλλυντικών. Ωστόσο, λίγες μελέτες έχουν αναφέρει την πιθανή εφαρμογή της ανάλυσης RPH, και αυτή η μελέτη εξέτασε τη δυνατότητα εφαρμογής τουςαντιοξειδωτικόδραστηριότητες και τις ανασταλτικές δραστηριότητες των ενζύμων δερματικής απολέπισης. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι οι συνολικές συγκεντρώσεις φαινολικών και φλαβονοειδών ήταν 2.06 ± 0.13 mg ισοδύναμο γαλλικού οξέος/g RPH και 25,96 ± 0,52 μg ισοδύναμο κερκετίνης/g RPH, αντίστοιχα. Τα RPH έδειξαν δοσοεξαρτώμενη δραστηριότητα για τον καθαρισμό ελεύθερων ριζών από 1,1-διφαινυλ-2-πικρυυλυδραζύλιο [μισή-μέγιστη ανασταλτική συγκέντρωση (IC50)=42.58 ± 2,1 mg/g RPHs] και 2 ,20-αζινο-δις (3-αιθυλβενζοθειαζολίνη-6-σουλφονικό οξύ) (IC50=2.11 ± 0,88 mg/g RPHs), δοσοεξαρτώμενη ικανότητα μείωσης (6,95 ± 1,40 mg ισοδύναμου βιταμίνης C/g RPHs) και ικανότητα απορρόφησης ριζών οξυγόνου (473 μmol ισοδύναμο Trolox/g RPHs). Οι συγκεντρώσεις του διαλύματος RPH που απαιτούνται για την επίτευξη 50 τοις εκατό αναστολής της υαλουρονιδάσης καιτυροσινάσηΟι δραστηριότητες προσδιορίστηκαν να είναι 8,91 και 107,6 mg/mL, αντίστοιχα. Αυτή η μελέτη έδειξε ότι οι RPH έχουναντιοξειδωτικόδράσεις αντιυαλουρονιδάσης και αντιτυροσινάσης για μελλοντικές καλλυντικές εφαρμογές.

Λέξεις-κλειδιά:Υδρολύμα πρωτεΐνης ρυζιού?αντιοξειδωτικό; Υαλουρονιδάση;τυροσινάση; καλλυντικό

κιστανάκιλεύκανσηαποτέλεσμαστο δέρμα νααντιοξείδωση

1. Εισαγωγή

Η έκθεση στην υπεριώδη ακτινοβολία είναι υπεύθυνη για τη φωτογήρανση (ή την εξωτερική γήρανση). Σε αντίθεση, τα αντιδραστικά είδη οξυγόνου που παράγονται στον κυτταρικό μεταβολισμό και η επιδείνωση των βιολογικών λειτουργιών είναι υπεύθυνα για την εγγενή γήρανση [1,2]. Τα επεξεργασμένα τρόφιμα συχνά περιέχουν φυσικάαντιοξειδωτικάόπως κατεχίνες, ασκορβικό οξύ, τοκοφερόλες, ροσμαρινικό οξύ και φαινολικά εκχυλίσματα από διάφορα φυτά. Η έρευνα που διεξήχθη για τα φυσικά αντιοξειδωτικά θεωρεί πλέον μη παραδοσιακές προελεύσεις. Φυσική πηγήαντιοξειδωτικάείναι πιο επιθυμητά από τα χημικάαντιοξειδωτικάδεδομένου ότι ορισμένα συνθετικά αντιοξειδωτικά έχουν αναφερθεί ότι είναι καρκινογόνα [3]. Το ρύζι (Oryza sativa) είναι μια σημαντική διατροφική βάση για τους ανθρώπους σε όλο τον κόσμο, ιδιαίτερα αυτούς που ζουν στην Ασία. Η ετήσια παραγωγή ρυζιού του πλανήτη είναι περίπου 741 εκατομμύρια τόνοι [4]. Στις ασιατικές χώρες, το ρύζι φέρεται να είναι η πηγή του 75 τοις εκατό της ενεργειακής πρόσληψης περισσότερων από 2 δισεκατομμυρίων ανθρώπων [5]. Η εκτεταμένη παραγωγή ρυζιού έχει ως αποτέλεσμα την αντίστοιχη ποσότητα παραγωγής υποπροϊόντων. Το υπολειμματικό προϊόν από τη διαδικασία παραγωγής ρυζιού περιέχει την πλειονότητα της πρωτεΐνης του κόκκου (~60-85 τοις εκατό ) αλλά πετιέται ή χρησιμοποιείται για τη διατροφή των ζώων [6-8]. Πεπτίδια που λαμβάνονται από διάφορα προϊόντα υδρόλυσης πρωτεϊνών, σύμφωνα με πληροφορίες, δρουν ως δυναμικάαντιοξειδωτικά[9]. Ως εκ τούτου, φυσικά και μη τοξικά αντιοξειδωτικά μπορούν δυνητικά να εξαχθούν από προϊόντα υδρόλυσης πρωτεϊνών τροφίμων. Πολλοί μελετητές έχουν χρησιμοποιήσει μοντέλα πλούσια σε λιπίδια και έχουν αναφέρει προϊόντα υδρόλυσης πρωτεϊνών, καθώς και πεπτίδια πρωτεΐνης γάλακτος, ζεΐνης και σόγιας που έχουν κρίσιμα αντιοξειδωτικά χαρακτηριστικά, συμπεριλαμβανομένης της απομάκρυνσης των ελεύθερων ριζών, της αναστολής της τροφής και της υπεροξείδωσης των λιπιδίων in vitro και της χηλίωσης των μετάλλων μετάπτωσης [10- 12].

Το υαλουρονικό οξύ (ΗΑ) βοηθά στην αναζωογόνηση του δέρματος επειδή αυξάνει το ιξώδες, περιέχει υγρασία και κάνει τα εξωκυτταρικά υγρά λιγότερο διαπερατά. Λόγω της εξαιρετικής ικανότητας συγκράτησης του νερού, το HA αυξάνει τη νεανικότητα, την ενυδάτωση και την απαλότητα του δέρματος και μειώνει τον βαθμό των ρυτίδων [13,14]. Δυστυχώς, το επίπεδο HA στο δέρμα μειώνεται φυσικά με την ηλικία. Η υαλουρονιδάση είναι ένα ένζυμο που καταστρέφει το HA, προκαλώντας απώλεια της αντοχής, της ελαστικότητας και της υγρασίας του δέρματος, που με τη σειρά του οδηγεί στη γήρανση του δέρματος. Ως εκ τούτου, οι ρυτίδες μπορούν να αντιμετωπιστούν αναστέλλοντας την υαλουρονιδάση και διατηρώντας την περιεκτικότητα σε HA του δέρματος [15,16]. Το ένζυμο που παράγει μελανίνητυροσινάσησυμβάλλει ζωτικά στο στάδιο περιορισμού του ρυθμού της διαδικασίας μέσω της οποίας παράγεται η μελανίνη. Ως εκ τούτου, οι διαταραχές της μελάγχρωσης αντιμετωπίζονται συνήθως και η λάμψη του δέρματος επιτυγχάνεται με την αναστολή ή τη μείωσητυροσινάσηδραστηριότητα [17,18].

Σε αρκετές μελέτες, τα προϊόντα υδρόλυσης πρωτεϊνών δημητριακών και τα πεπτίδια που μπορούν να ληφθούν από αυτά έχουν ανακαλυφθεί ότι έχουν αντιοξειδωτική, αντιυπερτασική και αντικαρκινική δράση [19,20]. Η θετική συμβολή στην ανθρώπινη υγεία των πεπτιδίων και των πρωτεϊνών που προέρχονται από τρόφιμα αναγνωρίζονται σταδιακά [21]. Οι καταναλωτές απαιτούν όλο και περισσότερο να χρησιμοποιούν οι βιομηχανίες καλλυντικών και υγειονομικής περίθαλψης φυσικές βιοδραστικές ενώσεις. Τα προϊόντα υδρολύσεως πρωτεϊνών ρυζιού (RPHs) έχουν προσελκύσει την προσοχή ως εξαιρετική πηγή πρωτεϊνών. Ωστόσο, λίγες μελέτες έχουν αναφέρει τον χαρακτηρισμό και τη λειτουργική ανάλυση των RPH. Ως εκ τούτου, αυτή η μελέτη αξιολόγησε την αντιοξειδωτική δράση και την υαλουρονιδάση καιτυροσινάση-ανασταλτικές δραστηριότητες των RPHs.

2. Αποτελέσματα και Συζήτηση

2.1. Ολική φαινολική συγκέντρωση (TPC) και ολική περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή (TFC)

Το πρότυπο στη δοκιμασία TPC ήταν γαλλικό οξύ πολλών συγκεντρώσεων. Η υψηλή απορρόφηση έδειξε υψηλότερο TPC. Η TPC των δειγμάτων RPH ελήφθη εισάγοντας τις τιμές οπτικής απορρόφησης των δειγμάτων RPH στην καμπύλη βαθμονόμησης του γαλλικού οξέος. Σχεδιάζοντας τη συγκέντρωση RPH έναντι της συγκέντρωσης φαινολών (Εικόνα 1a), λήφθηκε μια μέση TPC 2.06 ± 0,13 mg GAE/g RPHs. Λήφθηκε TFC 25,96 ± 0,52 μg QE/gRPHs ακολουθώντας παρόμοια διαδικασία (Σχήμα 1β). Το Σχήμα 1c σχετίζεται περαιτέρω με το TPC και το TFC των δειγμάτων RPH. Αποκαλύπτει ότι η σχέση μεταξύ του TPC και του TFC μπορεί να εκφραστεί ως y=0.0121x συν 0,0659, όπου x και y είναι το TPC και το TFC, αντίστοιχα.

Η TPC των RPHs περιελάμβανε τις συγκεντρώσεις των φαινολικών αμινοξέων και των φαινολικών ενώσεων των πεπτιδίων. Η αλληλεπίδραση πρωτεΐνης-φαινολικής ένωσης γενικά περιλαμβάνει ομοιοπολικό και μη ομοιοπολικό δεσμό. Οι φαινολικές ενώσεις απελευθερώνονται κατά την ενζυματική υδρόλυση. Συγκεκριμένα ένζυμα μπορεί να είναι πιο ικανά να καταστρέψουν σύμπλοκα πρωτεΐνης-πολυφαινόλης· αυτό έχει ως αποτέλεσμα την απελευθέρωση μεγαλύτερου αριθμού φαινολικών ενώσεων και πεπτιδίων με φαινολικές ομάδες, όπως η τυροσίνη [22]. Έχει αναφερθεί ισχυρή συσχέτιση μεταξύ της συνολικής περιεκτικότητας σε πολυφαινόλες των κόκκων και της βιολογικής τους δράσης. Οι πολυφαινόλες είναι ευρέως γνωστό ότι έχουν ισχυρές αντιοξειδωτικές δράσεις [23]. Αν και βρίσκονται σε μικρότερη ποσότητα, τα τερπένια [24] ή τα σεσκιτερπένια [25] στο ρύζι θα μπορούσαν επίσης να συμβάλουν σε αντιοξειδωτικές δραστηριότητες.

2.2. Δραστηριότητα Αντιοξειδωτικών

2.2.1. Δραστηριότητα καθαρισμού ριζών των ελεύθερων ριζών DPPH

Το Σχήμα 2 απεικονίζει τη δραστηριότητα σάρωσης ελεύθερων ριζών DPPH στο διάλυμα RPH. Ανακαλύφθηκε ότι η υψηλότερη συγκέντρωση του διαλύματος οδηγεί σε υψηλότερη δραστικότητα. Η μισή-μέγιστη ανασταλτική συγκέντρωση (IC50), η οποία είναι η συγκέντρωση εκχυλίσματος για την οποία μπορούν να καθαριστούν οι μισές από όλες τις ελεύθερες ρίζες DPPH, ήταν 42,58 ± 2,1 mg/mL πεπτιδίων ρυζιού.

2.2.2. Δραστηριότητα σάρωσης ελεύθερων ριζών ABTS

Η δραστηριότητα δέσμευσης ελεύθερων ριζών ABTS των RPHs, που απεικονίζεται στο Σχήμα 3, ήταν υψηλότερη όταν χρησιμοποιήθηκε μεγαλύτερη συγκέντρωση εκχυλίσματος. Το IC50 ήταν 2,11 ± 0,88 mg/mL πεπτιδίων ρυζιού. Αυτό το αποτέλεσμα έδειξε ότι τα RPH είχαν ισχυρή δραστηριότητα δέσμευσης ελεύθερων ριζών ABTS. Τα αμινοξέα που περιέχουν θείο, συμπεριλαμβανομένων των Met και Cys, και τα υδρόφοβα αμινοξέα, συμπεριλαμβανομένων των Ala, Val, Ile, Leu, Met, Cys, Tyr, Phe, Try και Pro, μπορεί να είναι σημαντικοί παράγοντες όσον αφορά την ελεύθερη ρίζα ABTS δραστηριότητα καθαρισμού.

Σε αυτή τη μελέτη, η τιμή IC50 της δραστηριότητας σάρωσης ελεύθερων ριζών ABTS ήταν χαμηλότερη από τη δραστηριότητα σάρωσης ελεύθερων ριζών DPPH, συμφωνώντας με τα αποτελέσματα του κελύφους και του πυρήνα του σπόρου Jatropha curcas L. [28] και του πολτού σπόρων και φλοιών από τζιτζιφιές [29]. Αυτό το εύρημα αντιστοιχεί επίσης στην αναφορά υδρολυμάτων πρωτεΐνης πίτουρου ρυζιού με 43,98-66,25 μmoL ισοδύναμου Trolox/g δείγματος και 403,28-430,12 μmoL ισοδύναμου Trolox/g δείγματος για δραστικότητα σάρωσης ελεύθερων ριζών DPPH και δραστηριότητα δέσμευσης ελεύθερων ριζών ABTS [2, αντίστοιχα.

Ένας πιθανός λόγος είναι η διαφορά στη διαλυτότητα μεταξύ της ελεύθερης ρίζας DPPH (διαλυτή σε λάδι) και της ελεύθερας ρίζας ABTS (διαλυτή σε λάδι/νεροδιαλυτή) [30,31]. Το αντιοξειδωτικό δυναμικό των υδρολυμάτων πρωτεΐνης πίτουρου ρυζιού επηρεάστηκε από το προφίλ του μοριακού βάρους, τη σύνθεση αμινοξέων και την υδροφοβικότητα του [32].

2.2.3. Αναγωγική ικανότητα

Τα ευρήματα της ανάλυσης ικανότητας μείωσης για RPHs παρουσιάζονται στο Σχήμα 4. Η ικανότητα μείωσης αυξήθηκε με τη συγκέντρωση των RPH. Η ικανότητα μείωσης ήταν 6,95 ± 1,40 mg VCE/g RPH, υποδεικνύοντας ότι τα RPH είναι ένα αποτελεσματικό αντιοξειδωτικό.

2.2.4. Ικανότητα απορρόφησης ριζών οξυγόνου (ORAC)

Ο προσδιορισμός ORAC έχει πλεονεκτήματα σε σχέση με άλλες προσεγγίσεις για τον προσδιορισμό της αντιοξειδωτικής δράσης, συμπεριλαμβανομένων των αντιδρώντων που χρησιμοποιούνται είναι υπεροξυ ρίζες με παρόμοιο μηχανισμό αντίδρασης και δυναμικό οξειδοαναγωγής με τα φυσιολογικά οξειδωτικά. το συνολικό φορτίο και η πρωτονιακή κατάσταση με την οποία τοαντιοξειδωτικάαντιδρούν μοιάζουν με αυτές στο ανθρώπινο σώμα [33]. Η μέθοδος ORAC έχει επίσης βιολογική σχέση με την αποτελεσματικότητα των αντιοξειδωτικών στο ανθρώπινο σώμα. Το σχήμα 5 απεικονίζει τα αποτελέσματα της ανάλυσης ORAC των RPH και του προτύπου Trolox σε διάφορες συγκεντρώσεις. Το ORAC προήλθε από την εξίσωση παλινδρόμησης της καμπύλης βαθμονόμησης που συσχετίζει την καθαρή AUC με τη συγκέντρωση Trolox. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το RPH είχε ORAC 473 μmol TE/g RPH.

Αντιοξειδωτικά πεπτίδια ή αμινοξέα μπορούν να ληφθούν με ενζυματική υδρόλυση πρωτεϊνών, με αποτέλεσμα να είναι εξαιρετικά δραστικά έναντι των οξειδωτικών [34]. Η χηλίωση μεταλλικών ιόντων, η αναστολή της υπεροξείδωσης των λιπιδίων και ο καθαρισμός των ελεύθερων ριζών των βιολογικά ενεργών πεπτιδίων είναι υπεύθυνες για την αντιοξειδωτική τους δράση. Οι ελεύθερες ρίζες μπορούν να σβήσουν και η έκφραση πρωτεϊνών και ενζύμων που μειώνουν το οξειδωτικό στρες να ρυθμιστεί προς τα πάνω από τα αντιοξειδωτικά πεπτίδια. Η αντιοξειδωτική αποτελεσματικότητα των πρωτεϊνικών υδρολύσεων και των πεπτιδίων φέρεται να εξαρτάται από την αλληλουχία αμινοξέων και το μέγεθος του πεπτιδίου, τα οποία επηρεάζονται από τις συνθήκες υδρόλυσης, την πηγή πρωτεΐνης και τον τύπο της πρωτεάσης [35]. Σύμφωνα με τους Adebiyi et al. [36], η μεγαλύτερη εύπεπτη πρωτεΐνη πίτουρου ρυζιού μπορεί να σπάσει σε μικρότερα κομμάτια από τη σουμπτιλισίνη, με αποτέλεσμα μεγαλύτερη απόδοση και περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη. Η TPC και η αντιοξειδωτική δράση ενός προϊόντος υδρόλυσης ενδέχεται να επηρεάζονται από την ειδικότητα των ενζύμων. Ως εκ τούτου, η αντιοξειδωτική δράση μιας πεπτιδαμίτιδας επηρεάζεται από τα χαρακτηριστικά της πηγής πρωτεΐνης, την ειδικότητα του ενζύμου και το επίπεδο υδρόλυσης [37].

Υπάρχουν πολλές αναφορές που χρησιμοποιούν πρωτεάσες (όπως Alcalase, μια εμπορική ονομασία της asubtilisin A από το είδος Bacillus) για την υδρόλυση πρωτεϊνών φυτικής προέλευσης για τη λήψη αντιοξειδωτικών πεπτιδίων. Από αυτή την άποψη, η πρωτεΐνη σόγιας είναι μία από τις πιο αναφερόμενες πρωτεΐνες [38]. Επιπλέον, βρίσκεται επίσης υδρόλυση αλκαλάσης πρωτεΐνης πίτουρου ρυζιού. Κάτω από βέλτιστες συνθήκες, η υδρόλυση αλκαλάσης κολλώδους πίτουρου ρυζιού παρήγαγε προϊόντα υδρόλυσης πρωτεΐνης με την τιμή IC50 να είναι 0,87 ± 0,02 mg/mL σε σάρωση ελεύθερων ριζών DPPH [39]. Στη μελέτη μας, η τιμή IC50 των RPHs ήταν 42,58 ± 2,1 mg/mL. Αν και η τιμή IC50 στη σάρωση ελεύθερων ριζών DPPH σε αυτή τη μελέτη δεν ήταν τόσο αποτελεσματική όσο αυτή από την πρωτεΐνη πίτουρου ρυζιού, η σάρωση ελεύθερων ριζών ABTS (IC50=2.11 mg/mL) ήταν πιο αποτελεσματική από τα υδρολύματα πρωτεΐνης σόγιας που ελήφθησαν με υδρόλυση αλκαλάσης ( IC50=2.93 mg/mL) [40].

2.3. Ανασταλτική Δραστηριότητα Υαλουρονιδάσης

Ένα πρωτεολυτικό ένζυμο, η υαλουρονιδάση, βρίσκεται στο χόριο και καταλύει την αποικοδόμηση του ΗΑ στην εξωκυτταρική μήτρα [41]. Αυτή η μελέτη χρησιμοποίησε ταννικό οξύ ως θετικό μάρτυρα για σκοπούς σύγκρισης. Το Σχήμα 6 αποκαλύπτει ότι το ταννικό οξύ είχε υψηλότερη αναστολή της δραστηριότητας της υαλουρονιδάσης. το IC50 ήταν 0.14 mg/mL, παρόμοια με την τιμή που ελήφθη από τους Nishida et al. (0,121 mg/mL, 71,1 mM) [42]. Αντίθετα, υπολογίστηκε IC50 8,91 mg/mL για το διάλυμα RPH. Αυτό το αποτέλεσμα του διαλύματος RPH αντιστοιχούσε στην προηγούμενη τιμή μας IC50, 7,61 mg/mL [43]. Πρωτεΐνες, πολυσακχαρίτες και φυτικής προέλευσης και συνθετικές ενώσεις συγκαταλέγονται στο φάσμα των ενώσεων στις οποίες υπάρχουν αναστολείς της υαλουρονιδάσης. Αυτοί οι αναστολείς βοηθούν στη διατήρηση της ισορροπίας σύνθεσης-αποδόμησης ΗΑ [44]. Η χαμηλή συγκέντρωση HA στο δέρμα έχει ως αποτέλεσμα ξηρότητα και ρυτίδες. Επομένως, η αναστολή της δραστηριότητας της υαλουρονιδάσης είναι μια οδός μέσω της οποίας μπορεί να βελτιωθεί η μορφολογία του δέρματος και να καθυστερήσει η γήρανση του.

2.4. Ανασταλτική Δραστηριότητα Τυροσινάσης

Τα υδρολύματα πρωτεϊνών από φυσικές πηγές έχουν τη δυνατότητα να αναστέλλουνδραστηριότητα τυροσινάσης. Η in vitro δοκιμή αναστολής τυροσινάσης χρησιμοποιείται συνήθως για να αξιολογηθεί πώς οι λευκαντικοί παράγοντες του δέρματος επηρεάζουν άμεσα τη δραστηριότητα της τυροσινάσης [45]. Συμμετέχοντας στο στάδιο περιορισμού του ρυθμού σύνθεσης μελανίνης, η τυροσινάση καταλύει την υδροξυλίωση της L-τυροσίνης σε L-DOPA και στη συνέχεια την οξείδωση της τελευταίας σε ο-ντοπακινόνη. Όταν είναι επιθυμητό να αποτραπεί η βιοσύνθεση της μελανίνης, η αναστολή της δραστηριότητας της L-τυροσινάσης μπορεί να είναι κρίσιμη. Εδώ,τυροσινάσηχρησιμοποιήθηκε για τη μέτρηση της δράσης αντιτυροσινάσης RPH. Όπως απεικονίζεται στο Σχήμα 7, η συγκέντρωση 107,6 mg/mL πέτυχε 50 τοις εκατό αναστολή της δραστηριότητας της τυροσινάσης. Το ασκορβικό οξύ παρουσίασε υψηλή ανασταλτική δράση της τυροσινάσης (IC50=0,098 mg/mL), η οποία ήταν παρόμοια με τα 0,102 mg/mLthat Seo et al. αναφέρθηκε [46].

Τα υδρολύματα πρωτεΐνης πίτουρου ρυζιού παρουσίασαν σημαντικά υψηλά επίπεδατυροσινάση-ανασταλτική δραστηριότητα [47,48]. Η ανασταλτική δράση της τυροσινάσης του διαλύματος RPH μπορεί να προκύπτει από τα προφίλ των πεπτιδίων των αμινοξέων. Οι Schurink et al. περιέγραψε ότι αποτελεσματικότυροσινάση-τα ανασταλτικά πεπτίδια αποτελούνται από υπολείμματα αργινίνης και φαινυλαλανίνη [49]. Η ανασταλτική δραστηριότητα της τυροσινάσης μπορεί να βελτιωθεί από υδρόφοβα υπολείμματα αμινοξέων (π.χ. αλανίνη) και η παραγωγή μελανίνης μπορεί να διαταραχθεί από την αλανίνη [50]. Εξάλλου, οι Zhang et al. ανέφερε επίσης ότι η υδρόλυση πρωτεΐνης ρυζιού θα μπορούσε να μειώσει την περιεκτικότητα σε μελανίνη και τη δραστηριότητα τυροσινάσης στο μοντέλο κυττάρων που προκαλείται από την UVB [51].

cistanche bodybuilding

2.5. Προφίλ αμινοξέων και MW RPH

Η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη του ρυζιού μετά την απομάκρυνση του αμύλου στην παρούσα μελέτη ήταν 23,56 τοις εκατό κατά βάρος και ο βαθμός υδρόλυσης του δείγματος που υδρολύθηκε από πρωτεάση ήταν 9,36 τοις εκατό. Ο Πίνακας 1 περιγράφει λεπτομερώς τη σύνθεση των αμινοξέων στα RPH. Στο δείγμα, κάθε 100 g περιείχε 5,18 g αμινοξέων. Όσον αφορά τα συστατικά αμινοξέων, τα RPH ήταν η αλανίνη, η λευκίνη, η αργινίνη, το γλουταμινικό οξύ και το ασπαρτικό οξύ. Κάθε 100 g του δείγματος περιείχε συνολικά 1,73 g υδρόφοβων αμινοξέων (αλανίνη, βαλίνη, λευκίνη, ισολευκίνη, προλίνη, φαινυλαλανίνη και κυστεΐνη). Αυτό το αποτέλεσμα ήταν εντελώς διαφορετικό από την προηγούμενη έκθεσή μας [43] στο διάλυμα αμυλάσης και τη θερμοκρασία επεξεργασίας του για την απομάκρυνση του αμύλου. Η περιεκτικότητα σε υδρόφοβα αμινοξέα ήταν 1,90 φορές υψηλότερη από την προηγούμενη έκθεσή μας. Η χαμηλότερη θερμοκρασία επεξεργασίας (60 ◦C) σε αυτή τη μελέτη μπορεί να αποτρέψει τη μετουσίωση πρωτεϊνών σε μεγάλες ποσότητες, έτσι ώστε η δραστηριότητα των αμινοξέων να μπορεί να διατηρηθεί καλύτερα. Επιπλέον, ένα παρόμοιο συμπέρασμα προκύπτει επίσης από άλλες μυκητιακές αμυλάση και γλυκοαμυλάση για να σακχαροποιήσει το άμυλο σε πίτουρο λευκού ρυζιού [52].

Η έρευνα έχει βρει ότι τα υδρόφοβα αμινοξέα μοιάζουναντιοξειδωτικάαυξάνοντας τη διαλυτότητα με βάση τα λιπίδια σε πρωτεϊνικά υδρολύματα και πεπτίδια από διάφορες πηγές πρωτεϊνών, προωθώντας έτσι την αλληλεπίδραση με τις ελεύθερες ρίζες [38,53]. Ορισμένα αμινοξέα αναφέρθηκαν από τους Chen et al. [54] να είναι γενικάαντιοξειδωτικά; Τα οξέα που αναφέρθηκαν περιελάμβαναν τρυπτοφάνη, κυστεΐνη, μεθειονίνη, τυροσίνη και ιστιδίνη. Στην παρούσα μελέτη, τα αρωματικά αμινοξέα (φαινυλαλανίνη, τυροσίνη και τρυπτοφάνη) περιείχαν 0,53 g/100 g RPH. Επομένως, αυτά τα αμινοξέα που προέρχονται από πεπτίδια ήταν πιθανώς υπεύθυνα για την αντιοξειδωτική δράση των RPH.

Επιπλέον, οι πρωτεΐνες που υδρολύονται σε βραχύτερα πεπτίδια έχουν διαφορετική κατανομή MW και ορισμένες υδρόφοβες ομάδες αναδιπλωμένες στο εσωτερικό των πλήρων μορίων φυσικής πρωτεΐνης συνήθως εκτίθενται στην υδατική φάση. Αυτό σχετίζεται με τα μόρια πρωτεΐνης που αναδιατάσσονται δομικά και επομένως με τις λειτουργικές ιδιότητες της πρωτεΐνης [55,56]. Τα δεδομένα tricine-SDS-PAGE έδειξαν ότι το MW των RPH ήταν στην περιοχή 5–35 kDa (Εικόνα 8α).

Το Σχήμα 8β απεικονίζει το σχετικό περιεχόμενο διαφόρων MW σε RPH. Συνολικά, το 45,24 τοις εκατό του συνόλου της πρωτεΐνης ήταν στην κύρια ζώνη (MW ≈ 2,4 kDa). Παρόμοια αποτελέσματα λήφθηκαν σχετικά με το πεπτίδιο των υδρολυμάτων πρωτεΐνης πίτουρου ρυζιού. Η υψηλότερη αντιοξειδωτική δράση αποκτήθηκε από τους Thamnarathip et al. [37] ήταν αυτό για πεπτίδια MW=6–50 kDa. Επιπλέον, υπάρχουν σχέσεις μεταξύ της λειτουργίας των πρωτεϊνικών υδρολυμάτων και της κατανομής MW και της σύνθεσης των αμινοξέων [57]. Αυτό εξηγεί την αντιοξειδωτική δράση των RPH που παρατηρείται στην παρούσα μελέτη.

2.6. Δοκιμή κυτταρικής τοξικότητας

Απαιτείται χαμηλή κυτταρική τοξικότητα για μελλοντικές εφαρμογές. Για την αξιολόγηση της κυτταροτοξικότητας και της βιοσυμβατότητας των RPH, μετρήθηκε η κυτταρική βιωσιμότητα των ακατέργαστων κυττάρων 264,7 σε διάλυμα RPH με τη μέθοδο MTT. Όπως αποδεικνύεται στο Σχήμα 9, η βιωσιμότητα των κυττάρων ήταν πάνω από 100 τοις εκατό όταν υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 25–2000 μg/mL RPH για 24 ώρες και 48 ώρες. Τα αποτελέσματα υποδεικνύουν την αξιοσημείωτα χαμηλή κυτταροτοξικότητα των RPH. Ως εκ τούτου, τα RPH μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως καλλυντικές εφαρμογές με πολύ χαμηλή κυτταροτοξικότητα.

3. Υλικά και Μέθοδοι

3.1. Αντιδραστήρια

Χλωριούχος σίδηρος(III), 2,20-αζινο-δις(3-αιθυλβενζοθειαζολίνη-6-σουλφονικό οξύ) (ABTS), Trolox(6-υδροξυ-2,5 ,7,8-τετραμεθυλοχρωμάνιο-2-καρβοξυλικό οξύ), l-3,4-διυδροξυφαινυλαλανίνη (L-DOPA), 1,1-διφαινυλ-2- Το πικρυυλυδραζύλιο (DPPH) και το τριχλωροξικό οξύ αποκτήθηκαν από την Alfa Aesar (Tewksbury, ΜΑ, ΗΠΑ). 2,20-azobis(2-methylpropionamidine) dihydrochloride (AAPH), αντιδραστήριο φαινόλης Folin–Ciocalteu, γαλλικό οξύ, ασκορβικό οξύ, μανιτάριτυροσινάσηκαι η νατριούχος φλουορεσκεΐνη αποκτήθηκε από τη Sigma-Aldrich (St. Louis, ΜΟ, ΗΠΑ). Το ανθρακικό νάτριο ελήφθη από την Riedel-de Haën (Seelze, Γερμανία). Τέλος, σιδηροκυανιούχο κάλιο, όξινο φωσφορικό νάτριο και δισόξινο φωσφορικό νάτριο ελήφθησαν από την Showa Chemical (Τόκιο, Ιαπωνία).

3.2. Προετοιμασία RPH

Τα RPH παρασκευάστηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως, εκτός από το ότι η μυκητιακή αμυλάση υιοθετήθηκε για να σακχαροποιήσει το άμυλο στο ρυζάλευρο, αποφεύγοντας τη βλάβη στα αμινοξέα που προκαλείται από την υδρόλυση της βακτηριακής αμυλάσης σε υψηλές θερμοκρασίες [43,58]. Εκατό γραμμάρια ρυζάλευρο μουλιάστηκαν σε 1000 mL απεσταγμένου νερού που περιείχε 0,5 τοις εκατό μυκητιακή αμυλάση (Genencor, NY, ΗΠΑ)· το μείγμα στη συνέχεια θερμάνθηκε για 24 ώρες στους 60 ◦C ( pH 4,2), μετά το οποίο αφέθηκε να ψυχθεί σε θερμοκρασία δωματίου. Πραγματοποιήθηκε φυγοκέντρηση για 10 λεπτά στα 1968 x g για να αφαιρεθεί το υπόλοιπο υπερκείμενο. Αφού 20-διπλώθηκε νερό και 2 mL υδρολυτικής πρωτεάσης 0,1 τοις εκατό (Healthmate, Changhua, Taiwan) στο αδιάλυτο τμήμα, το διάλυμα ανακινήθηκε και επωάστηκε για 4 ώρες στους 55 ◦C. Χρησιμοποιήθηκε η μέθοδος pH-stat για να διατηρηθεί το pH του διαλύματος στο βέλτιστο επίπεδο και στη συνέχεια πραγματοποιήθηκε θέρμανση στους 85 ◦C για 10 λεπτά αδρανοποίησης του ενζύμου. Το υπόλοιπο αδιάλυτο κλάσμα απομακρύνθηκε με φυγοκέντρηση για 15 λεπτά στα 3075 x g. Πραγματοποιήθηκε λυοφίληση στο υπερκείμενο υγρό, το οποίο στη συνέχεια αποθηκεύτηκε στους -20 ◦C πριν από τη χρήση.

3.3. Αντιοξειδωτικές Δραστηριότητες των RPHs

3.3.1. Ολική Φαινολική Συγκέντρωση (TPC)

Χρησιμοποιήθηκε η μέθοδος Folin–Ciocalteu για την ανακάλυψη του TPC των RPHs [59]. Αρχικά, 200 μL αντιδραστηρίου φαινόλης Folin–Ciocalteu (0,3M) αναμίχθηκαν ομοιόμορφα μέσω5-λεπτής ανακίνησης με 200 μL διαλύματος RPH, και σε αυτό το μείγμα, προστέθηκαν 400 μL απιονισμένου (DI) νερού και 200 ​​μL διαλύματος ανθρακικού νατρίου 10 τοις εκατό (β/ο). Το μικτό διάλυμα υποβλήθηκε σε επώαση 60 λεπτών στο σκοτάδι σε θερμοκρασία δωματίου. Στη συνέχεια φυγοκεντρήθηκε για 15 λεπτά στις 3000 rpm. Η μέτρηση χρησιμοποίησε 100 μL υπερκειμένου. Για τον προσδιορισμό της TPC (μονάδα: mg) του ισοδυνάμου γαλλικού οξέος (GAE) ανά γραμμάριο ξηρού δείγματος RPH (μονάδα: mg GAE/g RPHs), τα δεδομένα οπτικής απορρόφησης εισήχθησαν σε μια τυπική καμπύλη που αντιπροσωπεύει το γαλλικό οξύ. Η απορρόφηση ελήφθη στα 700 nm με χρήση φασματοφωτόμετρου EpochMicroplate (BioTek, VT, USA).

3.3.2. Ολική περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή (TFC)

Το TFC λήφθηκε σύμφωνα με την προσέγγιση των Wathoni et al. με μικρές τροποποιήσεις [60]. Αρχικά, αναμίχθηκαν 500 μL από το κάθε δείγμα και 2 τοις εκατό (w/v) διάλυμα χλωριούχου αργιλίου. Το διάλυμα της αντίδρασης αναμίχθηκε επιμελώς και αφέθηκε για 10 λεπτά, και αξιολογήθηκε η απορρόφηση στα 415 nm. Το αποτέλεσμα αναφέρεται σε μικρογραμμάρια ισοδύναμου κερκετίνης (QE) ανά γραμμάριο ξηρού δείγματος RPH (μg QE/g RPHs).

cistanche bodybuilding

3.3.3. Δραστηριότητα σάρωσης ελεύθερων ριζών DPPH

Πρώτα, αναμίχθηκαν 198 μΜ διάλυμα αιθανόλης DPPH (50 μL) και το διάλυμα RPH ή νερό DI (0,5 μL· το δείγμα και ο έλεγχος, αντίστοιχα) και στη συνέχεια αφέθηκαν να ηρεμήσουν για 30 λεπτά στο σκοτάδι σε θερμοκρασία δωματίου. Η απορρόφηση του διαλύματος στα 517 nm ελήφθη στη συνέχεια. Η σχετική δραστηριότητα καθαρισμού υπολογίστηκε με τον προσδιορισμό της διαφοράς απορρόφησης μεταξύ του δείγματος και του ελέγχου. Η υψηλή δραστικότητα σάρωσης ελεύθερων ριζών DPPH αντανακλάται από τη χαμηλή οπτική απορρόφηση. Στην αξιολόγηση της δραστικότητας σάρωσης ελεύθερων ριζών DPPH του διαλύματος RPH, το πρότυπο που χρησιμοποιήθηκε ήταν η βιταμίνη C [61-63].

3.3.4. Δραστηριότητα σάρωσης ελεύθερων ριζών ABTS

Η προσέγγιση που αναφέρεται από τους Wu et al. χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση της αντιοξειδωτικής δράσης του διαλύματος RPH [64]. Αρχικά, μητρικό διάλυμα ABTS 7 mM (250 μL) αντέδρασε με 2,45 mM υπερθειικό κάλιο (250 μL) για να δώσει το κατιόν της ελεύθερης ρίζας ABTS (ABTS• συν), με το μείγμα να διατηρείται για 16 ώρες στους 4 ◦C στο σκοτάδι πριν χρησιμοποιηθεί. Μετά την εξισορρόπηση στο σκοτάδι σε θερμοκρασία δωματίου, χρησιμοποιήθηκε αλατούχο διάλυμα ρυθμισμένου με φωσφορικά 0,1 Μ (PBS, pH 7,4) για την αραίωση του διαλύματος σε απορρόφηση 0,70 ± 0,02 στα 734 nm. Στη συνέχεια, σε 180 μL αραιωμένου διαλύματος ABTS, προστέθηκαν 20 μL Trolox (θετικός έλεγχος) ή του διαλύματος RPH (δείγμα). Το μίγμα στη συνέχεια υποβλήθηκε σε 10 λεπτά επώασης σε θερμοκρασία δωματίου. Αυτή η μελέτη προσδιόρισε την οπτική απορρόφηση στα 734 nm. Η χαμηλότερη απορρόφηση αντιστοιχούσε σε υψηλότερη δραστηριότητα δέσμευσης ελεύθερων ριζών ABTS. Το πρότυπο που χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση της δράσης δέσμευσης ελεύθερων ριζών ABTS του διαλύματος RPH ήταν το αντιοξειδωτικό Trolox.

3.3.5. Αναγωγική ικανότητα

Η δοκιμασία αντιοξειδωτικής ισχύος που μειώνει τον σίδηρο χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό της συνολικής αντιοξειδωτικής δράσης του διαλύματος RPH. Όπως αναφέρουν οι Lin et al. [29], το διάλυμα RPH (200 μL) αναμίχθηκε ομοιόμορφα με 1 τοις εκατό (w/v) K3Fe(CN)6 και 0,2 M ρυθμιστικό διάλυμα PBS (pH 6,6, 100 μL το καθένα) Για 20 λεπτά, χρησιμοποιήθηκε υδατόλουτρο 50 ◦C για να θερμανθεί το μίγμα. μετά την απομάκρυνση του μίγματος από το λουτρό, ψύχθηκε γρήγορα για 3 λεπτά. Στη συνέχεια, πραγματοποιήθηκε προσθήκη 10 τοις εκατό (β/ο) τριχλωροξικού οξέος (100 μL) και 10-λεπτή φυγοκέντρηση στις 3000 rpm. Ακολούθησε εκχύλιση του υπερκειμένου (400 μL) και ομοιόμορφη ανάμειξή του με 0. 1 τοις εκατό (β/ο) FeCl3 (100 μL) και DI νερό (400 μL). Το Fe4[Fe(CN)6]3 ελήφθη μέσω10-λεπτής αντίδρασης αυτού του μίγματος στο σκοτάδι. Στη συνέχεια, μια υψηλότερη οπτική απορρόφηση (μετρημένη στα 700 nm) έδειξε υψηλότερη ικανότητα μείωσης. Η τυπική βιταμίνη C χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό της περιεκτικότητας σε ισοδύναμο βιταμίνης C (VCE) ανά γραμμάριο RPH.

3.3.6. Ικανότητα απορρόφησης ριζών οξυγόνου (ORAC)

Αυτή η μελέτη έλαβε το ORAC τροποποιώντας μια μέθοδο που αναφέρθηκε προηγουμένως [65]. Μετά τη διάλυση του δείγματος RPH σε απεσταγμένο νερό, το διάλυμα RPH (50 μL) αναμίχθηκε με φλουορεσκεΐνη (10 μΜ) σε ένα τρυβλίο μικροτιτλοδότησης 96-πηγαδιού. Το διάλυμα υποβλήθηκε σε {{4}λεπτή επώαση στους 37 ◦C ακολουθούμενη από την προσθήκη 50 μL AAPH (500 mM). Κάθε 5 λεπτά και για ένα σύνολο 120 λεπτών, καταγραφόταν ο φθορισμός (λex και λem=485 και 528 nm, αντίστοιχα). Η αντιοξειδωτική ικανότητα των RPH ανακαλύφθηκε από την κινητική διάσπασης του φθορισμού υπολογίζοντας την περιοχή κάτω από την καμπύλη (AUC ). Κατά τον υπολογισμό του RPH ORAC, το πρότυπο ήταν 15–250 μM Trolox. Το ORAC αναφέρεται ως μικρογραμμομόρια ισοδύναμου Trolox (TE) ανά γραμμάριο ξηρού δείγματος RPH (μmol TE/g RPHs).

3.4. Ανασταλτική Δραστηριότητα Υαλουρονιδάσης

Η δοκιμή αναστολής της υαλουρονιδάσης πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας μια μικροπλάκα {{0}}πηγαδιού και μια μέθοδο που αναφέρθηκε προηγουμένως με μικρές τροποποιήσεις [40]. Η Ν-ακετυλογλυκοζαμίνη απελευθερώθηκε με αντίδραση υαλουρονιδάσης με το υπόστρωμα ΗΑ. Παρουσία οποιουδήποτε αναστολέα, η απελευθέρωση της Ν-ακετυλογλυκοζαμίνης μειώθηκε, με αυτήν την απελευθέρωση να ανιχνεύεται λαμβάνοντας την απορρόφηση 600-nm. Το ΗΑ καταβυθίστηκε με όξινο διάλυμα αλβουμίνης αποτελούμενο από ρυθμιστικό διάλυμα οξικού άλατος 1 Μ (ρΗ 3,9) και αλβουμίνη βόειου ορού (1 mg/mL). Το διάλυμα δείγματος και 5 mg/mL υαλουρονιδάσης υποβλήθηκαν σε επώαση 20-λεπτών στους 37 ◦C. Στο μίγμα επώασης, ακολούθως προστέθηκε ΗΑ (1{{2{0}}0 μL, 5,0 mg/mL σε ρυθμιστικό διάλυμα οξικού άλατος 0,1 Μ). Πραγματοποιήθηκε περαιτέρω επώαση στους 37 ◦C για 40 λεπτά. Προστέθηκε 0,1 mL 0,4 Μ αλκαλικού βορικού διαλύματος για να σταματήσει η ενζυματική αντίδραση.

3.5. Ανασταλτική Δραστηριότητα Τυροσινάσης

Η παρούσα μελέτη αξιολόγησε τη δράση αντιτυροσινάσης των RPH χρησιμοποιώντας ένα πρωτόκολλο που αναφέρθηκε προηγουμένως με τροποποιήσεις [66]. Ένα διάλυμα ενζύμου (135 U/mL) παρασκευάστηκε με διάλυση τυροσινάσης σε ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών 20 mM (ρΗ 6,8). Επιπροσθέτως, χρησιμοποιήθηκε DI νερό για την παρασκευή διαλύματος L-DOPA 1,25 mM. Στη συνέχεια, 40 μL διαφόρων συγκεντρώσεων διαλυμάτων δείγματος RPH αναμίχθηκαν με 40 μL διαλύματος τυροσινάσης και 120 μL διαλύματος L-DOPA. Για 30 λεπτά, αυτό το μείγμα διατηρήθηκε στους 37 ◦C στη δοκιμή της αναστολής των RPHsτυροσινάσηδραστηριότητα. Χρησιμοποιήθηκε ένα φασματοφωτόμετρο (FLUOstar Omega MicroplateReader, BMG Labtech GmbH, Γερμανία) για να ληφθεί η απορρόφηση 475-nm. Όλες οι μετρήσεις πραγματοποιήθηκαν τρεις φορές. Η απορρόφηση της αντίστοιχης ομάδας όταντυροσινάσηδεν ήταν παρών αφαιρέθηκε. Ο ρυθμός αναστολής του ενζύμου προσδιορίστηκε ως

3.6. Χαρακτηρισμός RPH

3.6.1. Προφίλ αμινοξέων

Αυτή η μελέτη ανακάλυψε τη σύνθεση αμινοξέων των RPH. Πρώτον, για 24 ώρες και στους 115 ◦C, χρησιμοποιήθηκε 4 Μ μεθανοσουλφονικό οξύ για την υδρόλυση των δειγμάτων σε εκκενωμένα σφραγισμένα σωληνάρια. Δύο συστήματα παροχής διαλυτών Waters 510 και ένας αναλυτής αμινοξέων (L 8900· Hitachi, Τόκιο, Ιαπωνία) χρησιμοποιήθηκαν για τον διαχωρισμό παραγώγων αμινοξέων σε στήλη aSpherisorb ODS2 μέτρησης 25 m × 64,6 χλστ. Αυτή η μελέτη χρησιμοποίησε τους ακόλουθους διαλύτες: (α) οξικό νάτριο (0,14 Μ) και τριαιθυλαμίνη (850 μL/L, ρΗ 5,6) και (β) 60 τοις εκατό ακετονιτρίλιο, για το οποίο η βαθμίδωση ήταν 0 τοις εκατό για 2 λεπτά. 0–42 τοις εκατό για 15,5 λεπτά (κυρτή καμπύλη) και 100 τοις εκατό για 4 λεπτά. Λήφθηκαν διπλά δείγματα για τη μέτρηση των προφίλ αμινοξέων στα 254 nm [67,68].

3.6.2. Μοριακό Βάρος (MW) Πρωτεΐνης

Σύμφωνα με τη μέθοδο του Schägger [69] και υπό αναγωγικές συνθήκες, αυτή η μελέτη έλαβε την κατανομή MW μέσω ηλεκτροφόρησης τρικίνης-δωδεκυλοθειικού νατρίου (SDS)-πολυακρυλαμιδικής γέλης (PAGE) με μικρές τροποποιήσεις. Ρυθμιστικό διάλυμα δείγματος (30 g/L SDS, 0.375 MTris-HCl, 0.125 g/L Coomassie Brilliant Blue G-250 και 75 g/ Χρησιμοποιήθηκε L γλυκερόλη, ρΗ 7) για τη διασπορά του λυοφιλοποιημένου δείγματος, με φυγοκέντρηση στη συνέχεια πριν από τη φόρτωση. Συνολικά 20 μL 2-μερκαπτοαιθανόλης προστέθηκαν σε 1 mL του δείγματος tricine-SDS-PAGE. Το δείγμα θερμάνθηκε στους 100 ◦C για 90 δευτερόλεπτα. Ένα φρεάτιο δείγματος φορτώθηκε με κάθε δείγμα και Unstained Protein Standard Broad Range (Bio-Rad Laboratories, Γερμανία) χρησιμοποιώντας μια μικροσύριγγα. Έπειτα διεξήχθη ηλεκτροφόρηση—πρώτα σε σταθερά 30 mV έως ότου ολόκληρο το δείγμα περιέχεται στη γέλη στοίβαξης και στη συνέχεια μέχρι να ολοκληρωθεί σε σταθερά 100 mV. Στη συνέχεια, εφαρμόστηκε διάλυμα 0,02 τοις εκατό Coomassie Brilliant Blue R-250 για χρώση γέλης. Ο απόλυτος χρωματισμός υποβάθρου των πηκτών πραγματοποιήθηκε με ανακίνηση των πηκτών σε 10 τοις εκατό οξικό οξύ όλη τη νύχτα. Τέλος, η εικόνα γέλης αναλύθηκε για να ταυτοποιηθούν οι ζώνες πρωτεΐνης στις λωρίδες. Αυτή η ανάλυση πραγματοποιήθηκε στο ImageJ (USNational Institutes of Health, Bethesda, MD, ΗΠΑ). Χρησιμοποιήθηκαν τυπικοί δείκτες για να ληφθεί μια καμπύλη βαθμονόμησης από την οποία υπολογίστηκε το MW. Εν συντομία, το πρώτο βήμα ήταν ο προσδιορισμός του μήκους μετανάστευσης κάθε ζώνης (Rf) από την κορυφή της διαχωριστικής γέλης. Αυτό το δεύτερο βήμα ήταν ο υπολογισμός της καμπύλης βαθμονόμησης με τη χρήση Rf και log (MW) για τυπικό δείκτη με δεδομένο MW. Ο προσδιορισμός MW πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας τις ζώνες πρωτεΐνης Rf σε RPH.

3.7. Δοκιμασία Κυτταροτοξικότητας

Τα ακατέργαστα κύτταρα 264,7 καλλιεργήθηκαν σε Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) με υψηλή περιεκτικότητα σε γλυκόζη που περιείχε 10 τοις εκατό εμβρυϊκό βόειο ορό (FBS), 4,5 g/L γλυκόζη, 1 τοις εκατό διάλυμα αντιβιοτικού (100 μονάδες/ mL πενικιλίνης και 100 μg/mL Στρεπτομυκίνης), 4 mM L-Γλουταμίνης και 1,5 g/διττανθρακικό νάτριο στους 37 ◦C και 5 τοις εκατό CO2. Η κυτταρική τοξικότητα των ακατέργαστων κυττάρων 264,7 για RPHs μετρήθηκε με μια μέθοδο προσδιορισμού πολλαπλασιασμού 3-(4,5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ)-2,5 βρωμιούχου διφαινυλ-τετραζολίου (MTT) . Περίπου 1 × 104 κύτταρα ανά φρεάτιο επιστρώθηκαν σε 96-πλάκες φρεατίου. Μετά από 24 ώρες, διάφορες συγκεντρώσεις RPHs (0–2000 μg/mL) προστέθηκαν στα κύτταρα. Μετά από 24 και 48 ώρες επώασης, προστέθηκαν 100 μL διαλύματος ΜΤΤ (0,5 mg/mL). Παρατηρήθηκαν μπλε φορμαζανοκρύσταλλοι όταν ελέγχθηκαν με μικροσκόπιο. Το DMEM αφαιρέθηκε και προστέθηκαν 100 μL διμεθυλοσουλφοξειδίου (DMSO) ανά φρεάτιο. Η απορρόφηση μετρήθηκε με συσκευή ανάγνωσης πλακών μικροτιτλοδότησης. Η βιωσιμότητα των κυττάρων ( ποσοστό ) υπολογίστηκε στη συνέχεια ως [A570 (επεξεργασμένα κύτταρα) − A570 (φόντο)] / [A570 (κύτταρα χωρίς θεραπεία) − A570 (υπόβαθρο)] × 100 τοις εκατό [70].

3.8. Στατιστική ανάλυση

Η αναφορά για κάθε δείγμα υδρολύματος ήταν η μέση τιμή από τρία ανεξάρτητα επαναλαμβανόμενα πειράματα και προσδιορισμούς. Τα αποτελέσματα που εκφράζονται σε μέση ± τυπική απόκλιση (SD) αναλύθηκαν με μονόδρομη ANOVA και Duncan's post hoc τεστ χρησιμοποιώντας το StatisticalAnalysis System (έκδοση 20.0· SPSS, Armonk, NY, ΗΠΑ). Οι τιμές του p < 0,05="" θεωρήθηκαν="" στατιστικά="">

4. Συμπεράσματα

Αυτή η μελέτη εξέτασε τις λειτουργίες των RPH. Τα πειραματικά αποτελέσματα αποκάλυψαν ότι τα RPHs περιείχαν φαινολικές ενώσεις και φλαβονοειδή και εμφάνισαν μια σειρά από αντιοξειδωτικές δραστικότητες, όπως δραστηριότητες σάρωσης DPPH και ABTS, ικανότητα μείωσης και ORAC. Επιπλέον, οι RPH ανέστειλαν αποτελεσματικάτυροσινάσηκαι δραστηριότητες υαλουρονιδάσης. Η πρωτεάση ήταν ένας κρίσιμος παράγοντας που επηρέαζε τα πρότυπα MW των RPH. Η ανάλυση των RPH δείχνει τη δυνατότητα χρήσης τους ως συστατικό σε καλλυντικά.

cistanche bodybuilding

βιβλιογραφικές αναφορές

1. Ichihashi, Μ.; Ando, ​​Η.; Yoshida, Μ.; Νίκη, Υ.; Matsui, M. Φωτογήρανση του δέρματος. Anti-Aging Med. 2009, 6, 46–59. [CrossRef]

2. Kim, J.-S.; Kim, D.; Kim, H.-J.; Jang, Α. Επίδραση προστασίας των υδρολυμάτων ζελατίνης δερμάτων γαϊδάρου στην επαγόμενη από την UVB φωτογήρανση των ινοβλαστών του ανθρώπινου δέρματος. Επεξεργάζομαι, διαδικασία. Biochem. 2018, 67, 118–126. [CrossRef]

3. Carocho, Μ.; Ferreira, IC Μια ανασκόπηση για τα αντιοξειδωτικά, τα προοξειδωτικά και τη σχετική διαμάχη: Φυσικές και συνθετικές ενώσεις, μεθοδολογίες διαλογής και ανάλυσης και μελλοντικές προοπτικές. Food Chem. Toxicol. 2013, 51, 15–25. [CrossRef]

4. Guo, Χ.; Zhang, J.; Ενδέχεται.; Tian, ​​S. Βελτιστοποίηση περιορισμένης υδρόλυσης πρωτεϊνών σε υπολείμματα ρυζιού και χαρακτηρισμός των λειτουργικών ιδιοτήτων των προϊόντων. J. Food Proc. Διατήρηση. 2013, 37, 245–253. [CrossRef]

5. Park, H.-Y.; Lee, K.-W.; Choi, H.-D. Συστατικά πίτουρου ρυζιού: Ανοσοτροποποιητικές και θεραπευτικές δραστηριότητες. Λειτουργία Τροφίμων. 2017, 8.935–943. [CrossRef] [PubMed]

6. Zhou, Κ.; Canning, C.; Sun, S. Επιδράσεις υδρολυμάτων πρωτεΐνης ρυζιού που παρασκευάζονται από μικροβιακές πρωτεάσες και υπερδιήθηση σε ελεύθερες ρίζες και οξείδωση λιπιδίων κρέατος. LWT 2013, 50, 331–335. [CrossRef]

7. Piu', LD; Tassoni, Α.; Serrazanetti, DI; Ferri, Μ.; Μπαμπίνη, Ε.; Tagliazucchi, D.; Gianotti, A. Εκμετάλλευση υγρού υποπροϊόντος της βιομηχανίας αμύλου για την παραγωγή βιοδραστικών πεπτιδίων από υδρολυμένες πρωτεΐνες ρυζιού. Food Chem. 2014, 155, 199–206. [CrossRef]

8. Ferri, Μ.; Graen-Heedfeld, J.; Bretz, Κ.; Guillon, F.; Michelini, Ε.; Calabreta, MM; Lamborghini, Μ.; Gruarin, Ν.; Roda, A.;Kraft, A.; et al. Τα πεπτιδικά κλάσματα που λαμβάνονται από υποπροϊόντα ρυζιού μέσω μιας διαδικασίας φιλικής προς το περιβάλλον Εμφανίζουν βιοδραστηριότητες που σχετίζονται με την υγεία In Vitro. PLOS ONE 2017, 12, e0170954. [CrossRef]

9. Wen, C.; Zhang, J.; Zhang, Η.; Duan, Υ.; Ma, H. Αντιοξειδωτικά πεπτίδια που προέρχονται από φυτικές πρωτεΐνες: Απομόνωση, ταυτοποίηση, μηχανισμός δράσης και εφαρμογή σε συστήματα τροφίμων: Ανασκόπηση. Trends Food Sci. Τεχνολ. 2020, 105, 308–322. [CrossRef]

10. Phelan, Μ.; Aherne, Α.; FitzGerald, RJ; O'Brien, NM Βιοενεργά πεπτίδια που προέρχονται από καζεΐνη: Βιολογικές επιδράσεις, βιομηχανικές χρήσεις, πτυχές ασφάλειας και ρυθμιστικό καθεστώς. Int. Dairy J. 2009, 19, 643–654. [CrossRef]

11. Udenigwe, CC; Aluko, RE Βιοενεργά πεπτίδια που προέρχονται από πρωτεΐνες τροφίμων: Παραγωγή, επεξεργασία και πιθανά οφέλη για την υγεία. J. Food Sci. 2012, 77, 11–24. [CrossRef] [PubMed]

12. Fardet, Α.; Rock, E. In vitro και in vivo αντιοξειδωτικό δυναμικό γάλακτος, γιαουρτιού, γάλακτος που έχει υποστεί ζύμωση και τυριών: Μια αφηγηματική ανασκόπηση αποδεικτικών στοιχείων. Nutr. Res. Αναθ. 2018, 31, 52–70. [CrossRef]

13. Leach, JB; Kathryn, AB; Charles, WPJ; Christine, ES Photocrosslinked hydrogels hyaluronic acid: Natural, biodegradable tissue engineering scaffolds. Biotechnol. Bioeng. 2003, 82, 578-589. [CrossRef]

14. Jegasothy, SM; Zabolotniaia, V.; Bielfeldt, S. Efficacy of a New Topical Nano-hyaluronic Acid in Humans. J. Clin. Aesthet.Dermatol. 2014, 7, 27–29.

15. Ndlovu, G.; Fouche, G.; Tselanyane, Μ.; Cordier, W.; Steenkamp, ​​V. In vitro προσδιορισμός του δυναμικού αντιγήρανσης των φαρμακευτικών φυτών της τεσσάρων νότιας Αφρικής. Συμπλήρωμα BMC. Εναλλακτική. Med. 2013, 13, 304. [CrossRef]

16. Jiratchayamaethasakul, C.; Ding, Υ.; Hwang, Ο.; Im, S.-T.; Jang, Υ.; Myung, S.-W.; Lee, JM; Kim, H.-S.; Ko, S.-C.; Lee, S.-H. In vitro διαλογή ελαστάσης, κολλαγενάσης, υαλουρονιδάσης και τυροσινάσης ανασταλτικές και αντιοξειδωτικές δράσεις 22 εκχυλισμάτων αλόφυτων φυτών για νέα καλλυντικά. Ψάρι. Aquat. Sci. 2020, 23, 1–9. [CrossRef]

17. Kang, Μ.; Park, S.-H.; Ω, ΝΔ; Lee, SE; Yoo, JA; Nho, YH; Lee, S.; Han, BS; Cho, JY; Lee, J. Τα αντι-μελανογονικά αποτελέσματα της ρεζορκινόλης προκαλούνται από την καταστολή της σηματοδότησης cAMP και την ενεργοποίηση της σηματοδότησης της ρ38 MAPK. Biosci. Biotechnol. Biochem.2018, 82, 1188–1196. [CrossRef]

18. Chatatikun, Μ.; Yamauchi, Τ.; Yamasaki, Κ.; Aiba, S.; Chiabchalard, Α. Αντιμελανογόνο επίδραση φύλλων Croton roxburghii και Crotonsublyratus σε κύτταρα B16F10 που διεγείρονται από -MSH. J. Tradit. Συμπλήρωμα. Med. 2019, 9, 66–72. [CrossRef] [PubMed]

19. Rizzello, CG; Nionelli, L.; Coda, R.; Gobbetti, M. Synthesis of the Cancer Preventive Peptide Lunasin by Lactic Acid BacteriaDuring Sourdough Fermentation. Nutr. Cancer 2012, 64, 111–120. [CrossRef] [PubMed]

20. Rizzello, CG; Tagliazucchi, D.; Μπαμπίνη, Ε.; Rutella, GS; Saa, DLT; Gianotti, A. Βιοενεργά πεπτίδια από μήτρες φυτικών τροφίμων: Τάσεις έρευνας και νέες βιοτεχνολογίες για σύνθεση και ανάκτηση. J. Λειτουργία. Foods 2016, 27, 549–569. [CrossRef]

21. Coscueta, ER; Campos, DA; Osório, Η.; Nerli, ΒΒ; Pintado, M. Ενζυματική υδρόλυση πρωτεΐνης σόγιας: Ένα εργαλείο για βιολειτουργική παραγωγή συστατικών τροφίμων. Food Chem. X 2019, 1, 100006. [CrossRef]

22. Aydemir, LY; Yemenicioglu, A. Είναι τα συνδεδεμένα με πρωτεΐνες φαινολικά αντιοξειδωτικά σε όσπρια που δεν φαίνονται μέρος του παγόβουνου; J. Plant. Biochem.Physiol. 2013, 1, 1–3. [CrossRef]

23. Huang, SH; Ng, LT Ποσοτικοποίηση πολυφαινολικής περιεκτικότητας και βιοδραστικών συστατικών ορισμένων εμπορικών ποικιλιών ρυζιού στην Ταϊβάν. J. Food Compos. Πρωκτικός. 2012, 26, 122-127. [CrossRef]

24. Yoshitomi, Κ.; Taniguchi, S.; Tanaka, Κ.; Uji, Υ.; Akimitsu, Κ.; Gomi, K. Τερπενική συνθάση ρυζιού 24 (OsTPS24) κωδικοποιεί μια ανταποκρινόμενη στο ιασμονικό συνθάση μονοτερπενίου που παράγει ένα αντιβακτηριακό -τερπινένιο έναντι του παθογόνου του ρυζιού. J. Plant. Physiol. 2016, 191.120–126. [CrossRef]

25. Kamolsukyeunyong, W.; Sukhaket, W.; Pitija, Κ.; Thorngkham, Ρ.; Mahatheeranont, S.; Toojinda, Τ.; Vanavichit, A. Rice Το σεσκιτερπένιο παίζει σημαντικούς ρόλους στην αντιξένωση κατά του Brown Planthopper στο Ρύζι. Plants 2021, 10, 1049. [CrossRef][PubMed]

26. Liu, Υ.; Wang, Ζ.; Li, Η.; Liang, Μ.; Yang, L. In vitro αντιοξειδωτική δράση της πρωτεΐνης ρυζιού που επηρεάζεται από τον αλκαλικό βαθμό και την πέψη της γαστρεντερικής πρωτεάσης. J. Sci. Τροφίμων Αγρ. 2016, 96, 4940–4950. [CrossRef] [PubMed]

27. Phongthai, S.; D'Amico, S.; Schoenlechner, R.; Homthawornchoo, W.; Rawdkuen, S. Κλασματοποίηση και αντιοξειδωτικές ιδιότητες υδρολύσεων πρωτεΐνης πίτουρου ρυζιού που διεγείρονται από in vitro γαστρεντερική πέψη. Food Chem. 2018, 240, 156–164. [CrossRef][PubMed]

28. Huang, S.-L.; Wang, W.-H.; Zhong, X.-Y.; Lin, C.-T.; Lin, W.-S.; Chang, Μ.-Υ.; Lin, Y.-S. Αντιοξειδωτικές ιδιότητες του Jatropha curcas L.Seed Shell and Kernel Extracts. Appl. Sci. 2020, 10, 3279. [CrossRef]

29. Lin, Y.-S.; Lin, W.-S.; Tung, J.-W.; Cheng, Y.-C.; Chang, Μ.-Υ.; Chen, C.-Y.; Huang, S.-L. Αντιοξειδωτικές Ικανότητες Σπόρους Φρούτων Τζιτζιφιές και Πούλπα φλούδας. Appl. Sci. 2020, 10, 6007. [CrossRef]

30. Shahi, Ζ.; Sayyed-Alangi, SZ; Najafian, L. Επιδράσεις του τύπου ενζύμου και του χρόνου διεργασίας στον βαθμό υδρόλυσης, τις ζώνες ηλεκτροφόρησης και τις αντιοξειδωτικές ιδιότητες υδρολυμένων πρωτεϊνών που προέρχονται από απολιπασμένο Bunium persicum Bioss. πιέστε τούρτα. Heliyon 2020, 6, e03365. [CrossRef] [PubMed]

31. Xie, Η.; Huang, J.; Woo, MW; Hu, J.; Xiong, Η.; Zhao, Q. Επίδραση της απενεργοποίησης ενζύμου ψυχρού και θερμού στις δομικές και λειτουργικές ιδιότητες των υδρολυμάτων πρωτεΐνης κατακάθι ρυζιού. Food Chem. 2021, 345, 128784. [CrossRef]

32. Rani, S.; Pooja, Κ.; Pal, GK Εξερεύνηση προϊόντων υδρόλυσης και πεπτιδίων πρωτεΐνης ρυζιού με ειδική αναφορά στο αντιοξειδωτικό δυναμικό: Υπολογιστικές προσεγγίσεις για τον προσδιορισμό της βιοδραστικότητας. Trends Food Sci. Τεχνολ. 2018, 80, 61–70. [CrossRef]

33. Bisby, RH; Brooke, R.; Navaratnam, S. Επίδραση του δυναμικού αντιοξειδωτικής οξείδωσης στον προσδιορισμό ικανότητας απορρόφησης ριζών οξυγόνου (ORAC). Food Chem. 2008, 108, 1002–1007. [CrossRef]

34. Ηλίας, RJ; Kellerby, SS; Decker, E. Antioxidant Activity of Proteins and Peptides. Κριτ. Rev. Food Sci. Nutr. 2008, 48, 430–441.[CrossRef] [PubMed]

35. Mine, Y.; Li-Chan, Ε.; Jiang, Β. (Επιμ.) Bioactive Proteins and Peptides as Functional Foods and Nutraceuticals; Wiley-Blackwell:Hoboken, NJ, ΗΠΑ, 2010; σελ. 29–42.

36. Adebiyi, AP; Adebiyi, AO; Yamashita, J.; Ogawa, Τ.; Muramoto, K. Καθαρισμός και χαρακτηρισμός αντιοξειδωτικών πεπτιδίων που προέρχονται από υδρολύματα πρωτεΐνης πίτουρου ρυζιού. Ευρώ. Food Res. Τεχνολ. 2008, 228, 553–563. [CrossRef]

37. Θαμναράθιπ, Ρ.; Jangchud, Κ.; Nitisinprasert, S.; Vardhanabhuti, B. Προσδιορισμός μοριακού βάρους πεπτιδίου από υδρόλυση πίτουρου ρυζιού με υψηλή αντιοξειδωτική δράση. J. Cereal Sci. 2016, 69, 329–335. [CrossRef]

38. Tacias-Pascacio, VG; Morellon-Sterling, R.; Siar, Ε.-Η.; Tavano, Ο.; Berenguer-Murcia, Á.; Fernandez-Lafuente, R. Χρήση της Αλκαλασίνης στην παραγωγή βιοδραστικών πεπτιδίων: Ανασκόπηση. Int. J. Biol. Macromol. 2020, 165, 2143–2196. [CrossRef] [PubMed]

39. Sarringkarin, W.; Laokuldilok, T. Βελτιστοποίηση των συνθηκών παραγωγής κολλώδους υδρόλυσης πρωτεΐνης πίτουρου ρυζιού με αντιοξειδωτικές ιδιότητες. CMU J. Nat. Sci. 2017, 16, 1–18. [CrossRef]

40. Zhang, Q.; Tong, Χ.; Qi, Β.; Wang, Ζ.; Li, Υ.; Sui, Χ.; Jiang, L. Αλλαγές στην αντιοξειδωτική δράση του υδρολύματος σόγιας υδρολυμένου με αλκαλάση υπό προσομοίωση γαστρεντερικής πέψης και διαεπιθηλιακής μεταφοράς. J. Λειτουργία. Τρόφιμα 2018, 42, 298–305. [CrossRef]

41. Tu, PTB; Tawata, S. Αντιοξειδωτικές, αντιγηραντικές και αντιμελανογόνες ιδιότητες των αιθέριων ελαίων από δύο ποικιλίες του Alpinia zerumbet. Molecules 2015, 20, 16723–16740. [CrossRef]

42. Nishida, Υ.; Sugahara, S.; Wada, Κ.; Toyohisa, D.; Tanaka, Τ.; Ono, Μ.; Yasuda, S. Ανασταλτικές επιδράσεις του εκχυλίσματος οξικού αιθυλεστέρα από βολβούς Scilla scilloides στις δραστηριότητες λιποξυγενάσης και υαλουρονιδάσης. Pharm. Biol. 2014, 52, 1351–1357. [CrossRef]

43. Chen, Η.-J.; Dai, F.-J.; Fan, S.-L.; Huang, Y.-C.; Chau, C.-F.; Lin, Y.-S.; Chen, C.-S. Kinetics of Hyaluronidase Inhibition by Rice (Oryza sativa L.) Protein Hydrolysate. Appl. Sci. 2020, 10, 9087. [CrossRef]

44. Girish, Κ.; Kemparaju, K. Η μαγική κόλλα υαλουρονάνη και η γόμα της υαλουρονιδάση: Μια βιολογική επισκόπηση. Life Sci. 2007, 80,1921–1943. [CrossRef] [PubMed]

45. Zolghadri, S.; Bahrami, Α.; Khan, MTH; Munoz-Munoz, J.; Garcia-Molina, F.; Garcia-Canovas, F.; Saboury, AA Μια ολοκληρωμένη επισκόπηση των αναστολέων τυροσινάσης. J. Enzym. Inhib. Med. Chem. 2019, 34, 279–309. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Seo, EJ; Hong, ES; Choi, ΜΗ; Kim, KS; Lee, SJ Αντιοξειδωτικές και λευκαντικές επιδράσεις του δέρματος των εκχυλισμάτων Rhamnus yoshinoi. Κορεάτικα J. Food Sci. Τεχνολ. 2010, 42, 750-754.

47. Ochiai, Α.; Tanaka, S.; Tanaka, Τ.; Taniguchi, Μ. Πρωτεΐνη από πίτουρο ρυζιού ως ισχυρή πηγή αντιμελανογόνων πεπτιδίων με ανασταλτική δράση της τυροσινάσης. J. Nat. Κέντρο. 2016, 79, 2545–2551. [CrossRef] [PubMed]

48. Kubglomsong, S.; Theerakulkait, C.; Reed, RL; Yang, L.; Maier, CS; Stevens, JF Isolation and Identification of Tyrosinase Inhibitory and Copper-Chelating Peptides from Hydrolyzed Rice-Bran-Derived Albumin. J. Agric. Food Chem. 2018, 66, 8346–8354.[CrossRef]

49. Schurink, Μ.; van Berkel, WJ; Wichers, Η.; Boeriu, CG Νέα πεπτίδια με ανασταλτική δράση τυροσινάσης. Peptides 2007, 28,485-495. [CrossRef]

50. Ishikawa, Μ.; Kawase, Ι.; Ishii, F. Ο συνδυασμός αμινοξέων μειώνει τη χρώση στα κύτταρα μελανώματος B16F0. Biol. Pharm.Bull. 2007, 30, 677-681. [CrossRef] [PubMed]

51. Zhang, R.; Wei, Υ.; Li, Μ.; Cai, Μ.; Gu, R.; Ενδέχεται.; Chen, L.; Wang, J. Επιδράσεις Melanogenesis του προϊόντος υδρόλυσης πρωτεΐνης ρυζιού και των χαρακτηριστικών του πεπτιδίων Leu-Leu-Lys, Leu-Pro-Lys και pyroGlu-Lys σε ανθρώπινα επιδερμικά μελανοκύτταρα που προκαλούνται από UVB. FoodFunct. 2020, 11, 8757–8767. [CrossRef]

52. Wang, Υ.; Cai, D.; Αυτός, Μ.; Wang, Ζ.; Qin, Ρ.; Tan, T. Ανοιχτή ζυμωτική παραγωγή 1-γαλακτικού οξέος χρησιμοποιώντας πίτουρο λευκού ρυζιού με ταυτόχρονη σακχαροποίηση και ζύμωση. Bioresour. Τεχνολ. 2015, 198, 664–672. [CrossRef] [PubMed]

53. Pan, Μ.; Jiang, TS; Pan, JL Antioxidant Activities of Rapeseed Protein Hydrolysates. Food Bioprocess. Τεχνολ. 2009, 4, 1144–1152.[CrossRef]

54. Chen, HM; Μουραμότο, Κ.; Yamauchi, F.; Nokihara, K. Αντιοξειδωτική δράση σχεδιασμένων πεπτιδίων που βασίζονται στο αντιοξειδωτικό πεπτίδιο που απομονώνεται από πέψη πρωτεΐνης σόγιας. J. Agric. Food Chem. 1996, 44, 2619–2623. [CrossRef]

55. Liu, Q.; Kong, Β.; Xiong, YL; Xia, X. Αντιοξειδωτική δράση και λειτουργικές ιδιότητες υδρόλυσης πρωτεΐνης πλάσματος χοίρου όπως επηρεάζεται από το βαθμό υδρόλυσης. Food Chem. 2010, 118, 403–410. [CrossRef]

56. Lemes, Α.; Sala, L.; Ores, JDC; Braga, ARC; Egea, MB; Fernandes, KF Μια ανασκόπηση των τελευταίων εξελίξεων στα κρυπτογραφημένα βιοενεργά πεπτίδια από απόβλητα πλούσια σε πρωτεΐνες. Int. J. ΜοΙ. Sci. 2016, 17, 950. [CrossRef] [PubMed]

57. Wang, J.-S.; Zhao, Μ.-Μ.; Zhao, Q.-Z.; Jiang, Υ.-Μ. Αντιοξειδωτικές ιδιότητες υδρολύσεων παπαΐνης γλουτένης σίτου σε συστήματα διαφορετικής οξείδωσης. Food Chem. 2007, 101, 1658–1663. [CrossRef]

58. Gao, Μ.-Τ.; Kaneko, Μ.; Hirata, Μ.; Toorisaka, Ε.; Hano, T. Χρήση πίτουρου ρυζιού ως πηγή θρεπτικών συστατικών για ζυμωτική παραγωγή γαλακτικού οξέος. Bioresour. Τεχνολ. 2008, 99, 3659–3664. [CrossRef] [PubMed]

59. Huang, WY; Lin, YR; Ho, RF; Liu, HY; Lin, YS Επιδράσεις υδατικών διαλυμάτων στην εξαγωγή φύλλων πράσινου τσαγιού. Sci. World J. 2013,2013, 368350. [CrossRef]

60. Wathoni, N.; Shan, CY; Shan, WY; Rostinawati, Τ.; Indradi, RB; Pratiwi, R.; Muchtaridi, M. Χαρακτηρισμός και αντιοξειδωτική δράση πηκτίνης από φλοιό ινδονησιακής μαγγοστίνας (Garcinia mangostana L.). Heliyon 2019, 5, e02299. [CrossRef]

61. Tsai, C.-C.; Chan, C.-F.; Huang, W.-Y.; Lin, J.-S.; Chan, Ρ.; Liu, Η.-Υ.; Lin, Y.-S. Εφαρμογές του Lactobacillus rhamnosus SpentCulture Supernatant σε εφαρμογές καλλυντικών αντιοξειδωτικών, λεύκανσης και κατακράτησης υγρασίας. Molecules 2013, 18, 14161–14171.[CrossRef]

62. Huang, W.-Y.; Lee, P.-C.; Hsu, J.-C.; Lin, Y.-R.; Chen, Η.-J.; Lin, Y.-S. Επιδράσεις της ποιότητας του νερού στη διάλυση των σκονών εκχυλίσματος Yerba Mate. Sci. World J. 2014, 2014, 1–6. [CrossRef] [PubMed]

63. Chan, C.-F.; Wu, C.-T.; Huang, W.-Y.; Lin, W.-S.; Wu, H.-W.; Huang, Τ.-Κ.; Chang, Μ.-Υ.; Lin, Y.-S. Αντιοξείδωση και Μελανογένεση Αναστολή Διάφορων Εκχυλισμάτων Dendrobium tosaense. Molecules 2018, 23, 1810. [CrossRef] [PubMed]64. Wu, C.-T.; Agrawal, DC; Huang, W.-Y.; Hsu, H.-C.; Yang, S.-J.; Huang, S.-L.; Lin, Y.-S. Ανάλυση λειτουργικότητας των εκχυλισμάτων αλεσμένου καφέ που λαμβάνονται με την υδροθερμική μέθοδο. J. Chem. 2019, 2019, 1–8. [CrossRef]

65. Dorta, Ε.; Rodríguez-Rodríguez, EM; Jiménez-Quezada, Α.; Fuentes-Lemus, Ε.; Speisky, Η.; Lissi, Ε.; López-Alarcón, C. Χρήση της ανάλυσης ικανότητας απορρόφησης ριζών οξυγόνου (ORAC) για την πρόβλεψη της ικανότητας παραπροϊόντων μάνγκο (Mangifera indica L.) να αναστέλλουν την οξείδωση πρωτεϊνών κρέατος. Food Anal. Methods 2016, 10, 330–338. [CrossRef]

66. Lin, Y.-S.; Chen, Η.-J.; Huang, J.-P.; Lee, P.-C.; Tsai, C.-R.; Hsu, T.-F.; Huang, W.-Y. Κινητική της ανασταλτικής δραστηριότητας της τυροσινάσης με χρήση εκχυλισμάτων φύλλων Vitis vinifera. BioMed Res. Int. 2017, 2017, 5232680. [CrossRef] [PubMed]

67. Bidlingmeyer, BA; Cohen, SA; Tarvin, TL Ταχεία ανάλυση αμινοξέων χρησιμοποιώντας παραγοντοποίηση πριν από τη στήλη. J. Chromatogr. BBiomed. Sci. Appl. 1984, 336, 93-104. [CrossRef]

68. Asai, TT; Oikawa, F.; Yoshikawa, Κ.; Inoue, Ν.; Sato, K. Πεπτίδια κολλαγόνου που προέρχονται από τρόφιμα, προλυλ-υδροξυπρολίνη (Pro-Hyp), και υδροξυπρολυλ-γλυκίνη (Hyp-Gly) Ενισχύουν την ανάπτυξη του πρωτογενούς καλλιεργημένου ινοβλάστη δέρματος ποντικού χρησιμοποιώντας ορό εμβρύου βοοειδούς απαλλαγμένο από υδροξυπρολύλ. Int. J. ΜοΙ. Sci. 2019, 21, 229. [CrossRef]

69. Schägger, H. Tricine–SDS–PAGE. Nat. Πρωτοκ. 2006, 1, 16–22. [CrossRef]

70. Diao, J.; Chi, Ζ.; Guo, Ζ.; Zhang, L. Η υδρόλυση πρωτεΐνης φασολιών Mung ρυθμίζει την ανοσοαπόκριση μέσω της οδού NF-kB μακροφάγων RAW 264.7 διεγερμένων από λιποπολυσακχαρίτη. J. Food Sci. 2019, 84, 2652–2657.[CrossRef]