Περίληψη

Για την επίτευξη υψηλής αξίας αξιοποίησης πολυσακχαριτών απόCistanche deserticolaυπολείμματα, αυτή η μελέτη χρησιμοποίησε το υπόλειμμα που απομένει μετά την εκχύλιση φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών (μια βιομηχανική διαδικασία που βασίζεται στην κατοχυρωμένη με δίπλωμα ευρεσιτεχνίας τεχνολογία διαχωρισμού μεμβράνης,Patent No. ZL200710102756.7, held by Hotan Dichen Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd., https://www.xjcistanche.com/about-us) as the raw material. We systematically investigated the differences in chemical structural characteristics and antioxidant activities among various polysaccharide fractions obtained through membrane separation. The results indicated significant variations in chemical composition and activity among polysaccharide fractions with different molecular weights. Utilising ultrafiltration membranes of varying molecular weight cutoffs (300 kDa, 50 kDa, 10 kDa) combined with alcohol precipitation, four distinct polysaccharide fractions were successfully prepared: >300 kDa (ονομάζεται CTP 1), 50–300 kDa (CTP 2), 10–50 kDa (CTP 3) και<10 kDa (CTP 4). Monosaccharide composition analysis indicated that all four fractions primarily contained mannose, rhamnose, galacturonic acid, glucose, galactose, and arabinose, but their proportional ratios differed. Fourier-transform infrared spectroscopy confirmed that all fractions exhibited typical characteristic polysaccharide absorption peaks. Scanning electron microscopy results demonstrated that ultrafiltration membranes with different pore sizes significantly altered the aggregation state and surface roughness of the polysaccharides by retaining components of varying molecular weights. This morphological difference may be related to intermolecular interactions and the sieving effect during ultrafiltration. In antioxidant activity assays, CTP 1 showed the optimal performance, achieving DPPH radical scavenging rates exceeding 61% and ABTS⁺ radical scavenging rates surpassing 95% at 8 mg/mL. All four fractions demonstrated appreciable antioxidant activity. This study confirms that membrane separation technology can effectively fractionate polysaccharides from Cistanche deserticolaυπόλειμμα. Η έρευνα παρέχει μια θεωρητική βάση και δεδομένα που υποστηρίζουν την ανακύκλωση των πόρων των υπολειμμάτων φυτικών φαρμάκων και την ανάπτυξη υψηλής αξίας συστατικών πολυσακχαρίτη.

Λέξεις-κλειδιά: Cistanche deserticola; πολυσακχαρίτες; αντιοξειδωτική δράση? τεχνολογία διαχωρισμού μεμβράνης. δομική ανάλυση

 

Κατοχή διπλώματος ευρεσιτεχνίας τεχνολογίας διαχωρισμού μεμβράνης από τα κεντρικά γραφεία της Wecistanche

 

 

 

 

 

 

Εισαγωγή

Cistanches Herba(Cistanche), το αποξηραμένο σαρκώδες στέλεχος με λέπια φύλλα τουCistanche deserticolaYC Ma (έρημο cistanche) ήCistanche tubulosa(Schenk) Wight (CTP), ηχογραφήθηκε για πρώτη φορά στοShennong Bencao Jing (Το Classic of Materia Medica του Shennong). Ως τυπικός εκπρόσωπος των παραδοσιακών τονωτικών κινεζικών φαρμάκων στην Κίνα και ως ομόλογη ουσία τροφίμων-φαρμάκων, παράγεται κυρίως σε βορειοδυτικές περιοχές της ερήμου και της ερήμου όπως το Xinjiang και η Εσωτερική Μογγολία, κερδίζοντας τη φήμη του "Desert Ginseng". Έχει τα αποτελέσματα του τονωτικού γιανγκ των νεφρών, θρέφοντας το γιν των νεφρών, ωφελεί την ουσία και το αίμα και ενυδατώνει τα έντερα για την ανακούφιση από τη δυσκοιλιότητα [2-3]. Οι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες που περιέχονται σε αυτό έχουν σημαντικές βιολογικές δραστηριότητες και είναι οι κύριες ουσίες που εξάγονται στην τρέχουσα βιομηχανική παραγωγή. Ωστόσο, μια μεγάλη ποσότητα χρησιμοποιήσιμων ουσιών παραμένει στο υπόλειμμα μετά την εκχύλιση, το οποίο απορρίπτεται ως απόβλητο, προκαλώντας όχι μόνο σπατάλη πόρων αλλά και δυνητικά επιβάλλοντας περιβαλλοντική επιβάρυνση. Ως εκ τούτου, η επίτευξη υψηλής αξίας ανακύκλωσης των υπολειμμάτων έχει μεγάλη σημασία για την αποτελεσματική ανάπτυξη των κινεζικών φαρμακευτικών πόρων και την φιλική προς το περιβάλλον ανάπτυξη.

Πολυσακχαρίτες, ως κύρια δραστικά συστατικά σεCistanche, παρουσιάζουν διάφορες φαρμακολογικές δραστηριότητες όπως αντιοξειδωτικές, αντιγηραντικές, ηπατοπροστατευτικές, αντιφλεγμονώδεις, ανοσοτροποποιητικές και αντικαρκινικές επιδράσεις [4-7] και μπορούν να χρησιμοποιηθούν ευρέως στην ανάπτυξη φαρμάκων, καθώς και σε τρόφιμα και προϊόντα υγείας. Προηγούμενες μελέτες έχουν βελτιστοποιήσει εκτενώς τη διαδικασία εξόρυξης και διεξήγαγαν προκαταρκτικές αξιολογήσεις δραστηριότηταςCistancheπολυσακχαρίτες, αλλά η συστηματική έρευνα για τους πολυσακχαρίτες στο υπόλειμμα μετά την εκχύλιση με φαινυλαιθανοειδές γλυκοζίτη παραμένει σπάνια, ιδιαίτερα στερείται εις βάθος ανάλυσης αποτελεσματικών τεχνολογιών διαχωρισμού και κλασματοποίησης για υπολειμματικούς πολυσακχαρίτες και διαφορές δραστηριότητας μεταξύ διαφορετικών κλασμάτων, που περιορίζει σημαντικά τη βελτίωση της συνολικής αξίαςCistancheπόροι.

Στον τομέα της έρευνας πολυσακχαριτών, οι μη διαβαθμισμένοι ακατέργαστοι πολυσακχαρίτες έχουν προβλήματα όπως μικτά συστατικά, ασαφείς συνεισφορές δραστηριότητας και διφορούμενους στόχους, καθιστώντας δύσκολη την ακριβή αποκάλυψη της υλικής βάσης για τις αντιοξειδωτικές, ανοσοτροποποιητικές και άλλες λειτουργίες τους. Εν τω μεταξύ, ακαθαρσίες όπως πρωτεΐνες, χρωστικές και ανόργανα άλατα σε ακατέργαστους πολυσακχαρίτες παρεμβαίνουν επίσης στην αξιολόγηση της δραστηριότητάς τους και στην ανάπτυξη εφαρμογής. Οι παραδοσιακές μέθοδοι, όπως η χρωματογραφία στήλης, έχουν υψηλή ανάλυση, αλλά είναι δύσκολο να κλιμακωθούν, ενώ η κλασμάτωση της κατακρήμνισης αλκοόλης είναι σκληρή και έχει περιβαλλοντικούς κινδύνους. Η τεχνολογία διαχωρισμού μεμβράνης, με τα πλεονεκτήματα της υψηλής απόδοσης, της φιλικότητας προς το περιβάλλον και της ακριβούς κλασματοποίησης, δείχνει μεγάλες δυνατότητες στον διαχωρισμό και τον καθαρισμό των πολυσακχαριτών. Επιτρέπει την ακριβή κλασμάτωση των συστατικών πολυσακχαρίτη μέσω μεμβρανών με διαφορετικές αποκοπές μοριακού βάρους, παρέχοντας μια ιδανική τεχνική υποστήριξη για την αποκάλυψη της σχέσης δομής-δραστικότητας «μοριακού βάρους-δραστικότητας» των πολυσακχαριτών [8]. Οι Tang et al. [9] καθάρισε με επιτυχία τρία συστατικά πολυσακχαρίτη απευθείας απόLentinus edodesεκχυλίσματα νερού χρησιμοποιώντας ένα συνδυασμό μεμβρανών υπερδιήθησης 2,5 kDa, 5 kDa και 10 kDa. Συγκεκριμένα, η τεχνολογία διαχωρισμού μεμβράνης που χρησιμοποιείται σε αυτή τη μελέτη προστατεύεται από ένα δίπλωμα ευρεσιτεχνίας (Patent No. ZL200710102756.7) που κατέχει η Hotan Dichen Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd. (https://www.xjcistanche.com/about-us), η οποία εστιάζει στην παραγωγή πρώτων υλών που περιέχουν φαινυλαιθανοειδή γλυκοσίδη απόCistancheχρησιμοποιώντας διαχωρισμό μεμβράνης, παρέχοντας μια ισχυρή βιομηχανική βάση για την έρευνά μας. Τα προϊόντα που αναπτύχθηκαν από την ερευνητική μας ομάδα βασίζονται σε συστηματικές μελέτες φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων απόCistanche tubulosa[10] έχουν εισέλθει στο πιλοτικό στάδιο παραγωγής. Με βάση αυτό, αυτή η μελέτη χρησιμοποιεί το υπόλειμμα τουCistancheΜετά την εκχύλιση με φαινυλαιθανοειδές γλυκοσίδιο ως πρώτη ύλη, χρησιμοποιεί μεμβράνες υπερδιήθησης σε συνδυασμό με καθίζηση αλκοόλης για την κλασματοποίηση και τον καθαρισμό των πολυσακχαριτών στο υπόλειμμα και αναλύει συστηματικά τις διαφορές στα χημικά δομικά χαρακτηριστικά και τις αντιοξειδωτικές δραστηριότητες των κλασμάτων πολυσακχαρίτη με διαφορετικά μοριακά βάρη. Στόχος είναι να ανοίξουν νέοι δρόμοι για την ανακύκλωση των πόρωνCistancheυπολείμματα, βελτιώνουν τη βιομηχανική αλυσίδα και θέτουν θεωρητικές και πειραματικές βάσεις για την ανάπτυξη νέων λειτουργικών τροφίμων ή αντιοξειδωτικών βασισμένων σε φυσικούς πολυσακχαρίτες.

 

50% Echinacoside 10% Acteoside Cistanche Extract συμπληρώματα εξαγόμενα από τεχνολογία διαχωρισμού μεμβράνης

Ελέγξτε την καταχώριση

Υποστήριξη της Wecistanche-Για περισσότερες λεπτομέρειες σχετικά με τη συνεργασία
Διεύθυνση ηλεκτρονικού ταχυδρομείου:wallence.suen@wecistanche.com

 

 

1 Υλικά και Μέθοδοι

1.1 Υλικά και όργανα

Cistanche deserticolaυπολείμματα παρασχέθηκαν απόHotan Dichen Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd. (Χοτάν, Κίνα), που παράγεται από τη βιομηχανική εκχύλιση φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων μέσω της πατενταρισμένης τεχνολογίας διαχωρισμού μεμβράνης (Patent No. ZL200710102756.7; https://www.xjcistanche.com/about-us). Το πρότυπο γλυκόζης αγοράστηκε από το Tianjin Guangfu Fine Chemical Research Institute. m-Hydroxybiphenyl (98%), Coomassie Brilliant Blue G-250, σακούλες αιμοκάθαρσης (MD44), κιτ ανάλυσης ικανότητας καθαρισμού ριζών DPPH, κιτ ανάλυσης ικανότητας σάρωσης ριζών ABTS, κιτ ανάλυσης ικανότητας σάρωσης ανιόντων υπεροξειδίου και ολική ικανότητα αγοράς αντιοξειδωτικής τεχνολογίας Beijio Co., Ltd. Γαλακτουρονικό οξύ (98%), αλβουμίνη βόειου ορού (98%) και ασκορβικό οξύ (Vc) αγοράστηκαν από την Shanghai Yuanye Bio-Technology Co., Ltd. Άλλα χημικά αντιδραστήρια ήταν αναλυτικής ποιότητας.

UV-19001 Φασματοφωτόμετρο UV-Vis (Shimadzu Instruments Co., Ltd.); YP10002 ηλεκτρονικό ισοζύγιο (Shanghai Hengji Scientific Instruments Co., Ltd.); Ηλεκτρονικό ισοζύγιο SQP (Sartorius Scientific Instruments Co., Ltd.); υδατόλουτρο EYELA (SB-1200); CA-1111 συσκευή κυκλοφορίας νερού ψύξης (Shanghai Ailang Instruments Co., Ltd.); Αντλία κενού κυκλοφορίας νερού SHZ-D (Shanghai Jinfu Experimental Instrument Equipment Co., Ltd.); N-1100 περιστροφικός εξατμιστής. XCLD-10FE στεγνωτήριο ψύξης (Shanghai Xingchuang Scientific Instrument Equipment Co., Ltd.); BONA-GM-18C πειραματική μηχανή διαχωρισμού οργανικών μεμβρανών. Μεμβράνες υπερδιήθησης 300 kDa, 50 kDa, 10 kDa (πολυαιθεροσουλφόνη, Jinan Bona Co., Ltd., Shandong); TGL-16A φυγόκεντρος (Changsha Pingfan Instruments); BT25S αναλυτικός ζυγός (Sartorius Scientific Instruments); Υγρός χρωματογράφος Dionex U3000 υψηλής απόδοσης (Thermo Fisher Scientific, ΗΠΑ). LC-DCY-12GK φυσητήρας αζώτου (Shanghai Lichen Bangxi Instrument Technology Co., Ltd.); UPH-I-10T σύστημα υπερκαθαρού νερού (Chengdu Ultra Pure Technology Co., Ltd.); DF-101S φασματόμετρο υπερύθρων (Shimadzu Instruments Co., Ltd.); Ηλεκτρονικό μικροσκόπιο σάρωσης Zeiss Supra55VP (Carl Zeiss (Shanghai) Management Co., Ltd.).

 

Προδιαγραφές Cistanche

1.2 Πειραματικές Μέθοδοι

1.2.1 Εξόρυξη αργούCistancheΠολυσακχαρίτες

Σύμφωνα με τη διαδικασία εκχύλισης που ελήφθη από προκαταρκτικές δοκιμές, 150 γρCistanche deserticolaΤο υπόλειμμα ζυγίστηκε, εκχυλίστηκε στους 100 βαθμούς για 3 ώρες με αναλογία στερεού-υγρού 1:20 g/mL, φυγοκεντρήθηκε στα 4000 r/min για 10 λεπτά και το υπερκείμενο (περιεκτικότητα πολυσακχαρίτη: 4,4 mg/mL) συλλέχθηκε για να ληφθεί το εκχύλισμα πολυσακχαρίτη.

1.2.2 Κλασματοποίηση και διαχωρισμός τουCistancheΠολυσακχαρίτες

Το υδατικό εκχύλισμα τουCistancheΟι πολυσακχαρίτες υποβλήθηκαν σε κλασματοποίηση υπερδιήθησης χρησιμοποιώντας μεμβράνες υπερδιήθησης 300 kDa, 50 kDa και 10 kDa υπό συνθήκες πίεσης 0,18 MPa και θερμοκρασίας 40 μοιρών. Τα συγκρατημένα και τα διηθήματα συλλέχθηκαν χωριστά, συμπυκνώθηκαν με περιστροφική εξάτμιση και προστέθηκε 95% αιθανόλη για να επιτευχθεί τελική συγκέντρωση αιθανόλης 80%. Το μίγμα τοποθετήθηκε στους 4 βαθμούς για 24 ώρες, στη συνέχεια φυγοκεντρήθηκε στις 4000 rpm για 10 λεπτά και το υπερκείμενο απορρίφθηκε για να ληφθεί το ίζημα. Το ίζημα επαναδιαλύθηκε σε νερό, υποβλήθηκε σε διαπίδυση έναντι σάκου αιμοκάθαρσης 3500 Da για 48 ώρες και λυοφιλοποιήθηκε για να ληφθείCistanche polysaccharides. Four fractions were obtained by collecting retentates and permeates: >300 kDa (ονομάζεται CTP 1), 50–300 kDa (CTP 2), 10–50 kDa (CTP 3) και<10 kDa (CTP 4).

1.2.3 Προσδιορισμός χημικών συστατικών πολυσακχαριτών

1.2.3.1 Προσδιορισμός της ολικής περιεκτικότητας σε ζάχαρη

Η μέθοδος φαινόλης-θειικού οξέος χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό της περιεκτικότητας σε πολυσακχαρίτες στα δείγματα [11]. Παρασκευάστηκε μια τυπική καμπύλη χρησιμοποιώντας γλυκόζη, με ένα πρότυπο διάλυμα γλυκόζης 0,1 mg/mL. Ακριβείς όγκοι 0,4 mL, 0,8 mL, 1,2 mL, 1,6 mL και 2,0 mL του τυπικού διαλύματος μεταφέρθηκαν σε πωματισμένους δοκιμαστικούς σωλήνες των 10 mL και προστέθηκε νερό σε συνολικό όγκο 2,0 mL. Στη συνέχεια, προστέθηκε 1,0 mL προσφάτως παρασκευασμένου διαλύματος φαινόλης 6%, αναμίχθηκε καλά και 5,0 mL πυκνού θειικού οξέος προστέθηκαν ταχέως κατά μήκος του τοιχώματος του σωλήνα. Το μίγμα ανακινήθηκε, θερμάνθηκε σε λουτρό νερού 90 μοιρών για 15 λεπτά, στη συνέχεια απομακρύνθηκε και ψύχθηκε σε θερμοκρασία δωματίου. Χρησιμοποιώντας απεσταγμένο νερό ως τυφλό, η απορρόφηση μετρήθηκε στα 490 nm με φασματοφωτόμετρο UV-Vis. Η τυπική καμπύλη που λήφθηκε ήταν y=16.196x+0.0834, με R2=0.999. Παρασκευάστηκε ένα διάλυμα πολυσακχαρίτη 0,1 mg/mL και η απορρόφηση κάθε κλάσματος πολυσακχαρίτη μετρήθηκε χρησιμοποιώντας την ίδια μέθοδο. Η συνολική περιεκτικότητα σε σάκχαρα κάθε κλάσματος υπολογίστηκε με υποκατάσταση στην πρότυπη καμπύλη.

1.2.3.2 Προσδιορισμός της περιεκτικότητας σε πρωτεΐνη

Η μέθοδος Coomassie Brilliant Blue χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό της περιεκτικότητας σε πρωτεΐνη στα δείγματα [12]. Παρασκευάστηκε μια τυπική καμπύλη χρησιμοποιώντας αλβουμίνη βόειου ορού, με ένα πρότυπο διάλυμα πρωτεΐνης 0,1 mg/mL. Το πρότυπο διάλυμα πρωτεΐνης αραιώθηκε σε συγκεντρώσεις 0,02, 0,03, 0,05, 0,07 και 0,09 mg/mL. Στη συνέχεια, 1 mL από κάθε συγκέντρωση του τυπικού διαλύματος πρωτεΐνης προστέθηκε σε δοκιμαστικούς σωλήνες, ακολουθούμενο από 5,0 mL χρωμογόνου αντιδραστηρίου Coomassie Brilliant Blue και αναμίχθηκε με ανακίνηση. Χρησιμοποιώντας απεσταγμένο νερό ως τυφλό, η απορρόφηση μετρήθηκε στα 595 nm μετά από 10 λεπτά αντίδρασης. Η τυπική καμπύλη που λήφθηκε ήταν y=0.0034x+0.7673, με R2=0.996. Η απορρόφηση κάθε κλάσματος πολυσακχαρίτη μετρήθηκε χρησιμοποιώντας την ίδια μέθοδο και η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη κάθε κλάσματος υπολογίστηκε με υποκατάσταση στην τυπική καμπύλη.

1.2.3.3 Προσδιορισμός της περιεκτικότητας σε ουρονικό οξύ

Η μέθοδος m-υδροξυδιφαινυλίου χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό της περιεκτικότητας σε ουρονικό οξύ στα δείγματα [13]. Παρασκευάστηκε μια τυπική καμπύλη χρησιμοποιώντας γαλακτουρονικό οξύ, με ένα πρότυπο διάλυμα γαλακτουρονικού οξέος 0,1 mg/mL. Το πρότυπο διάλυμα αραιώθηκε σε συγκεντρώσεις 0,01, 0,02, 0,03, 0,05 και 0,1 mg/mL. Στη συνέχεια, 1 mL από κάθε συγκέντρωση του τυπικού διαλύματος προστέθηκε σε δοκιμαστικούς σωλήνες και 6 mL διαλύματος τετραβορικού νατρίου-θειικού οξέος προστέθηκαν υπό συνθήκες λουτρού παγωμένου νερού, αναμίχθηκαν με ανάδευση, θερμάνθηκαν σε βραστό νερό για 5 λεπτά, ψύχθηκε σε θερμοκρασία δωματίου και 0,1 mL m-υδροξυδιφαινυλίου αφέθηκε να αναμιχθεί σε θερμοκρασία δωματίου, προστέθηκε σε θερμοκρασία δωματίου. Χρησιμοποιώντας απεσταγμένο νερό ως τυφλό, η απορρόφηση μετρήθηκε στα 525 nm. Η τυπική καμπύλη που λήφθηκε ήταν y=7.5339x+0.0494, με R2=0.995. Παρασκευάστηκε ένα διάλυμα πολυσακχαρίτη 0,1 mg/mL και η απορρόφηση κάθε κλάσματος πολυσακχαρίτη μετρήθηκε χρησιμοποιώντας την ίδια μέθοδο. Η περιεκτικότητα σε ουρονικό οξύ κάθε κλάσματος υπολογίστηκε με υποκατάσταση στην πρότυπη καμπύλη.

 

Κατασκευαστής Wecistanche

1.2.4 Προσδιορισμός της σύστασης μονοσακχαρίτη

Χρωματογραφικές συνθήκες: Σύστημα υγρής χρωματογραφίας Thermo U3000, εξοπλισμένο με στήλη Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18 (4,6 mm × 250 mm, 5 μm). Η κινητή φάση ήταν ρυθμιστικό ακετονιτρίλιο: φωσφορικό (12 g/L δισόξινο φωσφορικό κάλιο, ρΗ ρυθμισμένο στο 6,8 με 2 mol/L NaOH) σε αναλογία όγκου 17:83, με ισοκρατική έκλουση. Ο ρυθμός ροής ήταν 0,8 mL/min, η θερμοκρασία της στήλης ήταν 30 μοίρες, το μήκος κύματος ανίχνευσης ήταν 250 nm και ο όγκος έγχυσης ήταν 10 μL.

Παρασκευή πρότυπου διαλύματος: 5 mg ραμνόζης, αραβινόζης, γαλακτόζης, γλυκόζης, ξυλόζης, μαννόζης, γαλακτουρονικού οξέος, γλυκουρονικού οξέος, υδροχλωρικής γλυκοζαμίνης και υδροχλωρικής γαλακτοζαμίνης το καθένα, και 10 mg φουκόζης ζυγίστηκαν διαδοχικά, διαλύθηκαν σε ένα πρότυπο διάλυμα σε ένα απόθεμα 10 mL και παρασκευάστηκαν σε ένα 10 mL.

Παρασκευή διαλύματος δείγματος: 5 mg καθενός από τα τέσσερα κλάσματα πολυσακχαρίτη ζυγίστηκαν, προστέθηκαν σε 1 mL διαλύματος TFA 2 mol/L και θερμάνθηκαν στους 121 βαθμούς για 2 ώρες. Το άζωτο καθαρίστηκε για να στεγνώσει το διάλυμα. Στη συνέχεια, προστέθηκαν 3 mL μεθανόλης για πλύση και το διάλυμα ξηράνθηκε ξανά. Αυτό το βήμα πλύσης με μεθανόλη επαναλήφθηκε 2-3 φορές. Το υπόλειμμα διαλύθηκε σε 1 mL αποστειρωμένου νερού και μεταφέρθηκε σε χρωματογραφικό φιαλίδιο για δοκιμή. Στη συνέχεια, 0,2 mL του προϊόντος υδρόλυσης πολυσακχαρίτη προστέθηκαν σε πωματισμένο κωνικό σωλήνα φυγοκέντρησης, ακολουθούμενα από 0,2 mL διαλύματος υδροξειδίου του νατρίου 0,5 mol/L και 0,5 mL διαλύματος μεθανόλης 0,5 mol/L PMP. Το μίγμα στροβιλίστηκε και αντέδρασε σε υδατόλουτρο 70 μοιρών για 1 ώρα. Μετά την αντίδραση, προστέθηκαν 0,2 mL υδροχλωρικού οξέος 0,5 mol/L για να εξουδετερωθεί το υδροξείδιο του νατρίου, προστέθηκε 1 mL χλωροφορμίου και το μίγμα στροβιλίστηκε για εκχύλιση τρεις φορές για να απομακρυνθεί η περίσσεια PMP. Η στιβάδα χλωροφορμίου απορρίφθηκε, ελήφθησαν 0,3 mL της υδατικής στιβάδας και προστέθηκε νερό για να συμπληρωθεί το 1 mL. Στη συνέχεια, 0,2 mL καθενός από τα 11 πρότυπα μονοσακχαρίτη παραγωγοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας την ίδια μέθοδο [14-15].

1.2.5 Ανάλυση υπέρυθρης φασματοσκοπίας μετασχηματισμού Fourier (FT-IR)

Μια κατάλληλη ποσότητα καθενός από τα τέσσερα κλάσματα πολυσακχαρίτη τοποθετήθηκε στο στάδιο δείγματος του εξαρτήματος ATR του υπέρυθρου φασματόμετρου και πραγματοποιήθηκαν μετρήσεις FT-IR χρησιμοποιώντας υπέρυθρο φασματοφωτόμετρο μετασχηματισμού Fourier στην περιοχή συχνοτήτων 4000-400 cm-1 [16].

1.2.6 Ανάλυση Ηλεκτρονικής Μικροσκοπίας Σάρωσης (SEM).

Η μορφολογία των τεσσάρων πολυσακχαριδικών κλασμάτων αναλύθηκε χρησιμοποιώντας SEM [17]. Μια μικρή ποσότητα από κάθε κλάσμα πολυσακχαρίτη στερεώθηκε ομοιόμορφα σε μια λεπτή πλάκα χαλκού και μια στρώση σκόνης χρυσού εξατμίστηκε στην επιφάνεια του δείγματος χρησιμοποιώντας έναν ψεκασμό ιόντων. Η μορφολογία της επιφάνειας παρατηρήθηκε στα 5,00 kV.

1.2.7 Προσδιορισμός In Vitro Αντιοξειδωτικής Δραστικότητας

1.2.7.1 Προσδιορισμός DPPH· Radical Scavenging Capacity

Οι συγκεντρώσεις των τεσσάρων κλασμάτων πολυσακχαρίτη ρυθμίστηκαν σε 1, 2, 3, 4 και 8 mg/mL, και η ομάδα θετικού ελέγχου (Vc) ρυθμίστηκε επίσης στις ίδιες συγκεντρώσεις. Ο προσδιορισμός πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με τις οδηγίες του κιτ ανάλυσης ικανότητας σάρωσης ριζών DPPH.

1.2.7.2 Προσδιορισμός της ικανότητας σάρωσης ανιόντων υπεροξειδίου

Οι συγκεντρώσεις των τεσσάρων κλασμάτων πολυσακχαρίτη ρυθμίστηκαν σε 0,5, 1, 2, 4 και 8 mg/mL, και η ομάδα θετικού ελέγχου (Vc) ρυθμίστηκε επίσης στις ίδιες συγκεντρώσεις. Ο προσδιορισμός πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με τις οδηγίες του κιτ προσδιορισμού ικανότητας σάρωσης ανιόντων υπεροξειδίου.

1.2.7.3 Προσδιορισμός Ολικής Αντιοξειδωτικής Ικανότητας

Οι συγκεντρώσεις των τεσσάρων κλασμάτων πολυσακχαρίτη ρυθμίστηκαν σε 0,5, 1, 2, 4 και 8 mg/mL, και η ομάδα θετικού ελέγχου (Vc) ρυθμίστηκε επίσης στις ίδιες συγκεντρώσεις. Ο προσδιορισμός πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με τις οδηγίες του κιτ προσδιορισμού ολικής αντιοξειδωτικής ικανότητας.

1.2.7.4 Προσδιορισμός της ικανότητας καθαρισμού ριζών ABTS⁺

Οι συγκεντρώσεις των τεσσάρων κλασμάτων πολυσακχαρίτη ρυθμίστηκαν σε 0,5, 1, 2, 4 και 8 mg/mL, και η ομάδα θετικού ελέγχου (Vc) ρυθμίστηκε επίσης στις ίδιες συγκεντρώσεις. Ο προσδιορισμός πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με τις οδηγίες του κιτ ανάλυσης ικανότητας δέσμευσης ριζών ABTS.

1.3 Επεξεργασία Δεδομένων

Κάθε πείραμα επαναλήφθηκε τρεις φορές υπό τις ίδιες συνθήκες και τα αποτελέσματα εκφράστηκαν ως μέση ± τυπική απόκλιση. Το λογισμικό SPSS 21.0 χρησιμοποιήθηκε για ανάλυση σημαντικότητας, με μονόδρομη ANOVA για ανάλυση μονού παράγοντα. P < 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντικό. Το Origin 2024 και το GraphPad Prism 10.1.2 χρησιμοποιήθηκαν για τη δημιουργία γραφημάτων.

 

Υψηλής Ποιότητας Πρώτες Ύλες

Αναφορές

[1] Κρατική Επιτροπή Φαρμακοποιίας.Φαρμακοποιία της Λαϊκής Δημοκρατίας της Κίνας, Τόμος Ι[Μ]. Πεκίνο: China Pharmaceutical Technology Press, 2020.

[2] GUO Y, CAO L, ZHAO Q, et al. Προκαταρκτικοί χαρακτηρισμοί, αντιοξειδωτική και ηπατοπροστατευτική δράση πολυσακχαρίτη απόCistanche deserticola [J]. International Journal of Biological Macromolecules, 2016, 93: 678-685.

[3] ZHANG XY, JIANG QW, YANG SH, et al. Η χημειομετρική ανάλυση και η ολοκληρωμένη φαρμακολογική προσέγγιση για την αποκρυπτογράφηση της επίδρασης και του μηχανισμού μεταξύ ακατέργαστου και επεξεργασμένουCistanche tubulosa [J]. Περιοδικό Εθνοφαρμακολογίας, 2024, 328.

[4] CHENG N, WANG H, HAO H, et al. Έρευνα για τα συστατικά πολυσακχαριτώνCistanche deserticolaως πιθανοί φαρμακευτικοί παράγοντες [J].European Journal of Medicinal Chemistry, 2023, 245.

[5] TAO J, ZHONG X, LIN H, et al. Οι δυνατότητες, οι προκλήσεις και οι προοπτικές των πολυσακχαριτών από το γένοςCistancheως θεραπευτικοί παράγοντες για ασθένειες που σχετίζονται με τη γήρανση: Ανασκόπηση [J].International Journal of Biological Macromolecules, 2025, 312.

[6] ZHOU S, FENG D, ZHOU Y, et al. Ανάλυση των δραστικών συστατικών και εφαρμογές υγείας τουCistanche [J]. Σύνορα στη Διατροφή, 2023, 10.

[7] ZHANG X, LIU Z, LI Z, et al. Οδοί φερρόπτωσης: Αποκάλυψη της νευροπροστατευτικής δύναμης τουCistanche deserticolaφαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες [J].Περιοδικό Εθνοφαρμακολογίας, 2024, 333.

[8] CAI M, XING H, TIAN B, et al. Χαρακτηριστικά και αντικαταθλιπτική δράση διαβαθμισμένων πολυσακχαριτών απόGanoderma lucidumδιαχωρίζονται με τεχνολογία μεμβράνης καταρράκτη [J].Πολυμερή υδατανθράκων, 2021, 269: 118329.

[9] TANG W, LIU C, LIU J, et al. Καθαρισμός πολυσακχαρίτη απόLentinus edodesεκχύλισμα νερού με διαχωρισμό μεμβράνης και χημική σύνθεση και χαρακτηρισμός δομής του [J].Υδροκολλοειδή τροφίμων, 2020, 105.

[10] Ainur Memetiturxun, GAO L, HUO SX, et al. Βελτιστοποίηση της διαδικασίας φυγόκεντρης εκχύλισης για βερμπασκοσίδη με χρήση μεθοδολογίας επιφάνειας απόκρισης Box-Behnken [J].Κινεζική Εφημερίδα της Σύγχρονης Εφαρμοσμένης Φαρμακευτικής, 2022, 39(23): 3086-3091.

[11] JIN W, ZHOU H, ZHAO H, et al. Απομόνωση, In vitro Αντιοξειδωτική Ικανότητα, Υπογλυκαιμική Δραστηριότητα και Ανοσοδραστικότητα Αξιολόγηση Πολυσακχαριτών απόCoriandrum sativumL [J/OL].Αντιοξειδωτικά, 2025, 14(2): 149. https://doi.org/10.3390/antiox14020149

[12] SPLITGERBER AG, SOHL J. Μη γραμμικότητα σε προσδιορισμούς πρωτεϊνών με τη μέθοδο δέσμευσης βαφής μπλε Coomassie [J].Αναλυτική Βιοχημεία, 1989, 179(1): 198-201.

[13] CAI M, XING HY, XU J, et al. Διαβαθμισμένος διαχωρισμός τουGanoderma lucidumΑκατέργαστοι πολυσακχαρίτες με χρήση τεχνολογίας μεμβρανών και σύγκριση των αντιοξειδωτικών τους δραστηριοτήτων [J].Επιστήμη και Τεχνολογία Βιομηχανίας Τροφίμων, 2021, 42(10): 29-35.

[14] GUO Y, WANG L, LIU K, et al. Μια ταχεία και ακριβής μέθοδος UHPLC για τον προσδιορισμό των μονοσακχαριτών σε πολυσακχαρίτες διαφορετικών πηγώνRadix Astragaliand Its Immune Activity Analysis [J/OL].Μόρια, 2024, 29(10): 2287. https://doi.org/10.3390/molecules29102287

[15] DU C, LIU X, ALGADI H, et al. Βελτιστοποίηση εκχύλισης πολυσακχαριτών, σύνθεση μονοσακχαριτών και ανάλυση αντιοξειδωτικής δραστηριότητας διαφορετικών ποικιλιώνGastrodia elataBl. εναέρια μέρη [J].Μετατροπή Βιομάζας και Βιοδιυλιστήριο, 2023, 14(23): 29353-29365.[16] HONG T, YIN JY, NIE SP, et al. Εφαρμογές της υπέρυθρης φασματοσκοπίας στη δομική ανάλυση πολυσακχαρίτη: Πρόοδος, πρόκληση και προοπτική [J].Χημεία Τροφίμων: Χ, 2021, 12.[17] ZHOU S, HUANG G. Εκχύλιση, χαρακτηρισμός δομής και βιολογική δραστηριότητα πολυσακχαρίτη από φλούδα καρύδας [J].Χημικές και Βιολογικές Τεχνολογίες στη Γεωργία, 2023, 10(1).