Διερεύνηση των επιδράσεων των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών του Cistanche στη μη αλκοολική λιπώδη νόσο του ήπατος με βάση τη φαρμακολογία δικτύου και τα κυτταρικά πειράματα

 

Περίληψη

Σκοπός: Για τη διερεύνηση των βελτιωτικών επιδράσεων των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών Cistanche στη μη αλκοολική λιπώδη νόσο του ήπατος (NAFLD).

Μέθοδοι: Η φαρμακολογία δικτύου χρησιμοποιήθηκε για την πρόβλεψη των πιθανών μηχανισμών των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών Cistanche έναντι της NAFLD. Ένα in vitro μοντέλο NAFLD καθιερώθηκε με την επαγωγή κυττάρων HepG2 με ελεύθερα λιπαρά οξέα (FFA). Η βιωσιμότητα των κυττάρων αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας την ανάλυση CCK-8. Χρησιμοποιήθηκε χρώση Oil Red O για την παρατήρηση της συσσώρευσης λιπιδίων. Τα επίπεδα τριγλυκεριδίων (TG) και ολικής χοληστερόλης (TC) μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας κιτ προσδιορισμού. Η χρώση JC-1 χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση του δυναμικού της μιτοχονδριακής μεμβράνης. Τα ενδοκυτταρικά επίπεδα ROS αξιολογήθηκαν με φθορίζοντα ανιχνευτή DCFH-DA. ανιχνεύθηκε απόπτωση χρησιμοποιώντας χρώση Hoechst 33342. και η έκφραση των πρωτεϊνών TNF-, PI3K, Akt και Bax μετρήθηκε με στύπωμα Western.

Αποτελέσματα: Εντοπίστηκαν δέκα δραστικές ενώσεις και 77 πιθανοί στόχοι που σχετίζονται με επιδράσεις κατά του NAFLD, με βασικούς στόχους συμπεριλαμβανομένων των TNF, NFKB1 και TLR4. Οι ενώσεις έδειξαν καλή συγγένεια δέσμευσης με τους στόχους, ιδιαίτερα τον TNF. Σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου, οι γλυκοσίδες φαινυλαιθανοειδών Cistanche μείωσαν σημαντικά την επαγόμενη από FFA συσσώρευση λιπιδίων στα κύτταρα HepG2 (P <0,01), μείωσαν τα ενδοκυτταρικά επίπεδα TG, TC και ROS (P <0,01), αποκατέστησαν τη μιτοχονδριακή μεμβράνη, μείωσαν το δυναμικό της βλαβερής μιτοχονδριακής μεμβράνης, μείωσαν τη χαμηλότερη αποκωδικοποίηση της μιτοχόνδρωσης. 0,05) και μείωσε την έκφραση της πρωτεΐνης TNF-, PI3K και Akt (Ρ < 0,05, Ρ < 0,01).

Σύναψη: Οι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες του Cistanche ασκούν αντι-NAFLD αποτελέσματα βελτιώνοντας τη συσσώρευση λιπιδίων που προκαλείται από FFA, τη μιτοχονδριακή δυσλειτουργία, το οξειδωτικό στρες και την απόπτωση στα κύτταρα HepG2. Αυτά τα εφέ μπορεί να σχετίζονται με τη οδό σηματοδότησης TNF/PI3K/Akt.

Λέξεις-κλειδιά: Γλυκοζίτες φαινυλαιθανοειδών Cistanche; μη αλκοολική λιπώδης ηπατική νόσος (NAFLD). μεταβολισμός λιπιδίων; οξειδωτικό στρες?απόπτωση; TNF/PI3K/Akt μονοπάτι σηματοδότησης; φαρμακολογία δικτύου? κυτταρικό πείραμα

 

Γλυκοζίτες φαινυλαιθανοειδών Cistanche

 

 

 

Εκχύλισμα Cistanche υψηλής περιεκτικότητας προς πώληση

Επικοινωνήστε μαζί μας αγοράστε τώρα

 

 

1. Εισαγωγή

Η μη αλκοολική λιπώδης νόσος του ήπατος (NAFLD) είναι μια χρόνια ηπατική νόσος που χαρακτηρίζεται από ηπατική στεάτωση χωρίς υπερβολική κατανάλωση αλκοόλ. Ο επιπολασμός στην Κίνα έχει φτάσει το 32,9%. Η παθογένειά του περιλαμβάνει πολλαπλούς μηχανισμούς, συμπεριλαμβανομένης της αντίστασης στην ινσουλίνη, του οξειδωτικού στρες και της ανισορροπίας της μικροχλωρίδας του εντέρου. Τα κλινικά συμπτώματα περιλαμβάνουν κόπωση, δυσφορία στην περιοχή του ήπατος και κοιλιακό άλγος και σε σοβαρές περιπτώσεις μπορεί να εξελιχθεί σε μη αλκοολική στεατοηπατίτιδα (NASH).

Επί του παρόντος, οι παρεμβάσεις στον τρόπο ζωής είναι η κύρια θεραπεία για τη NAFLD. Αν και ο FDA ενέκρινε το πρώτο φάρμακο για το NAFLD, το Resmetirom (Rezdiffra), το 2024, έχει πιθανές δυσμενείς επιπτώσεις όπως ηπατική βλάβη και καρδιαγγειακούς κινδύνους. Επομένως, υπάρχει επείγουσα ανάγκη να βρεθούν ασφαλείς και αποτελεσματικές θεραπείες για τη NAFLD.

Η παραδοσιακή κινεζική ιατρική (TCM), με τα χαρακτηριστικά πολλαπλών συστατικών, πολλαπλών στόχων και πολλαπλών οδών, ευθυγραμμίζεται καλά με την περίπλοκη παθογένεση της NAFLD και προσφέρει μοναδικά πλεονεκτήματα στη θεραπεία της.

Cistanche deserticolaκαιCistanche tubulosaείναι φαρμακευτικά φυτά από την οικογένεια Orobanchaceae, που αναφέρονται στοShennong Bencao Jing. Οι σαρκώδεις μίσχοι τους, πλούσιοι σε λέπια, χρησιμοποιούνται παραδοσιακά για να τονώσουν το συκώτι και τα νεφρά, να αναπληρώσουν την ουσία και το αίμα και να υγράνουν τα έντερα. Τα κύρια δραστικά συστατικά-φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες-έχουν αντιφλεγμονώδεις, μειωτικές των λιπιδίων και ηπατοπροστατευτικές ιδιότητες. Ωστόσο, εξακολουθούν να λείπουν συστηματικές μελέτες για τις επιδράσεις τους κατά της NAFLD.

Αυτή η μελέτη στοχεύει να αναλύσει τη φαρμακολογική βάση και τους πιθανούς μηχανισμούς των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων Cistanche στη θεραπεία της NAFLD χρησιμοποιώντας δικτυακή φαρμακολογία και να διερευνήσει περαιτέρω τους μηχανισμούς τους μέσω κυτταρικών πειραμάτων, παρέχοντας μια θεωρητική βάση για την ανάπτυξη νέων φαρμάκων.

 

2. Υλικά

2.1 Εργαλεία Φαρμακολογίας Δικτύου

TCMSP: https://tcmspw.com/tcmsp.php

CNKI: https://www.cnki.net/

PubMed: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/

PubChem: https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/

SwissTargetPrediction: http://www.swisstargetprediction.ch/

NetInfer: http://lmmd.ecust.edu.cn/netinfer/

SuperPred: https://prediction.charite.de/subpages/target_prediction.php

GeneCards: https://www.genecards.org/

DisGeNET: http://www.disgenet.org/

STRING: https://string-db.org/

Βιοπληροφορική: https://www.bioinformatics.com.cn/

UniProt: https://www.uniprot.org/

ΠΣΠ RCSB: https://www.rcsb.org/

Cytoscape 3.9.1: https://cytoscape.org/

R 4.3.3: https://www.r-project.org/

AutoDock Vina 1.5.7: https://vina.scripps.edu/

2.2 Κυτταρική γραμμή

Ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα ήπατος HepG2, αγορασμένα από την Wuhan Procell Life Science & Technology Co., Ltd.

2.3 Αντιδραστήρια και φάρμακα

Γλυκοζίτες φαινυλαιθανοειδών Cistanche (Αριθμός παρτίδας. 201610, καθαρότητα μεγαλύτερη από ή ίση με 80%, που περιέχει 44,5% εχινακοσίδη και 16,1% βερμπασκοσίδη), αγορασμένα από την Hotan Dechen Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd. Διαθέσιμο διάλυμα παρασκευασμένο σε 6,40 mg/mL, φιλτραρισμένο και αποθηκευμένο σε 6,40 mg/mL.

Τα πρόσθετα αντιδραστήρια περιλαμβάνουν:

Ορός εμβρύου βοοειδούς (FBS), μέσο DMEM, πενικιλλίνη-στρεπτομυκίνη, κιτ χρώσης Oil Red O, κιτ BCA, κιτ ανίχνευσης ROS, Hoechst 33342, BSA-V, ελαϊκό νάτριο, παλμιτικό νάτριο, κιτ δοκιμασίας TG και TC, CCK-8 δυναμική αντιστοίχιση μεμβράνης, για TNF-, PI3K p85, Akt, Bax, -ακτίνη και δευτερογενή συζευγμένα με HRP αντισώματα.

2.4 Όργανα

Επωαστήρας CO₂ (Forma 371)

Ντουλάπι βιοασφάλειας (HERASAFE KS18)

Αναγνώστης μικροπλακών (Multiskan GO)

Αντεστραμμένο μικροσκόπιο (Nikon TS2-S-SM)

Υδατόλουτρο, φυγόκεντρος (H1750R), αναλυτικός ζυγός, σύστημα απεικόνισης χημειοφωταύγειας (Azure 600), μικροσκόπιο φθορισμού (Leica DMi8)