Επιγαλλοκατεχίνη-3-Λιποσώματα με γαλάτα ευνοούν την αντιφλεγμονή των μικρογλοιακών κυττάρων και προάγουν τη νευροπροστασία

joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Αφηρημένη

Η νευροφλεγμονή που προκαλείται από μικρογλοία αναγνωρίζεται ότι συμβάλλει κυρίως στην εξέλιξη των νευροεκφυλιστικών ασθενειών. Η επιγαλλοκατεχίνη (EGCG), γνωστή ως φυσικό αντιοξειδωτικό στο πράσινο τσάι, μπορεί να αναστείλει τη φλεγμονή που προκαλείται από μικρογλοία και να προστατεύσει τους νευρώνες, αλλά έχει μειονεκτήματα όπως υψηλή αστάθεια και χαμηλή βιοδιαθεσιμότητα. Αναπτύξαμε ένα λιποσωμικό σκεύασμα EGCG για να βελτιώσουμε τη βιοδιαθεσιμότητά του και αξιολογήσαμε τη νευροπροστατευτική δράση σε μοντέλα νευροφλεγμονής in vitro και in vivo. Τα φορτωμένα με EGCG λιποσώματα έχουν παρασκευαστεί από φωσφατιδυλοχολίνη (PC) ή φωσφατιδυλοσερίνη (PS) επικαλυμμένη με ή χωρίς βιταμίνη Ε (VE) με μέθοδο ενυδάτωσης και εξώθησης μεμβράνης. οαντιφλεγμονώδηΗ επίδραση έχει αξιολογηθεί έναντι της επαγόμενης από λιποπολυσακχαρίτες (LPS) ενεργοποίησης των μικρογλοιακών κυττάρων BV-2 και της φλεγμονής στη μέλαινα ουσία των αρουραίων Sprague Dawley. Στο μοντέλο κυτταρικής φλεγμονής, τα μικρογλοιακά κύτταρα BV-2 ποντικού άλλαξαν τη μορφολογία τους από φυσιολογικό σφαιροειδές σε ενεργοποιημένο σχήμα ατράκτου μετά από 24 ώρες επαγωγής LPS. Στην in vitro δοκιμασία ελεύθερης ρίζας 2,2-διφαινυλ-1-πικρυυλυδραζυλ (DPPH), το EGCG καθάρισε το 80 τοις εκατό της DPPH μέσα σε 3 λεπτά. Τα φορτωμένα με EGCG λιποσώματα θα μπορούσαν να φαγοκυτταρωθούν από κύτταρα BV-2 μετά από 1 ώρα κυτταροκαλλιέργειας από πειράματα κυτταρικής πρόσληψης. Τα φορτωμένα με EGCG λιποσώματα βελτίωσαν την παραγωγή νιτρικού οξειδίου που προέρχεται από μικρογλοία BV-2 και LPS μετά από TNF. Στο in vivo μοντέλο αρουραίου με σύνδρομο Πάρκινσον, η ταυτόχρονη ενδομαίγια έγχυση λιποσωμάτων φορτωμένων με EGCG εξασθένησε τις επαγόμενες από το LPS προφλεγμονώδεις κυτοκίνες και αποκατέστησε την κινητική βλάβη. Δείξαμε ότι τα φορτωμένα με EGCG λιποσώματα ασκούν νευροπροστατευτική δράση ρυθμίζοντας την ενεργοποίηση μικρογλοίας. Το EGCG που εξάγεται από το πράσινο τσάι και τα φορτωμένα λιποσώματα θα μπορούσε να είναι πολύτιμος υποψήφιος για μια θεραπεία τροποποίησης της νόσου γιαΝόσος Πάρκινσον (PD).

Λέξεις-κλειδιά:νευροπροστασία; νευροφλεγμονή; Νόσος Πάρκινσον; κατεχίνη; L- -φωσφατιδυλοχολίνη· φωσφατιδυλοσερίνη

αποτρέψειΠάρκινσοννόσοςεπιδράσεις του Cistanche μεκιστανάκι

Chun-Yuan Cheng 1,2, Lassina Barro 2, Shang-Ting Tsai 2,3, Tai-Wei Feng 2,3, Xiao-Yu Wu 2, Che-Wei Chao 4, Ruei-Siang Yu 2, Ting-Yu Chin 4,* και Μινγκ Φα Χσιέ 2,3,*

1 Τμήμα Νευροχειρουργικής, Τμήμα Χειρουργικής, Changhua Christian Hospital, 135 Nanxiao St., Changhua City, Changhua County 500, Taiwan; 83998@cch.org.tw

2 Τμήμα Βιοϊατρικής Μηχανικής, Chung Yuan Christian University, No. 200, Zhongbei Rd., Zhongli Dist., Taoyuan City 320314, Taiwan;

3 Center for Minimally Invasive Medical Devices and Technologies, Chung Yuan Christian University, No. 200, Zhongbei Rd., Zhongli Dist., Taoyuan City 320314, Taiwan

4 Department of Bioscience Technology, Chung Yuan Christian University, No. 200, Zhongbei Rd., Zhongli Dist., Taoyuan City 320314, Taiwan.

1. Εισαγωγή

Όταν το νευρικό σύστημα είναι κατεστραμμένο ή μολυσμένο, τα κύτταρα μικρογλοίας ενεργοποιούνται και μετασχηματίζονται για να διακλαδωθούν, με αποτέλεσμα την υπερβολική έκφραση μιας μεγάλης ποσότητας προφλεγμονωδών κυτοκινών όπως ο παράγοντας νέκρωσης όγκου- (TNF-), η ιντερλευκίνη-1 ( IL-1), ιντερλευκίνη 6 (IL-6) και φλεγμονώδεις μεσολαβητές όπως το μονοξείδιο του αζώτου (NO) και τα δραστικά είδη οξυγόνου (ROS). Τέλος, τα νευρικά κύτταρα καταστρέφονται, εκφυλίζονται ή πεθαίνουν από αυτούς τους φλεγμονώδεις μεσολαβητές. Διαπιστώθηκε πρόσφατα ότι στον εγκέφαλο ασθενών με νευροεκφυλιστικές ασθένειες όπως η νόσος Parkinson (PD), η νόσος Alzheimer, η νόσος Huntington και η νόσος Creutzfeldt-Jakob , μεγάλες ποσότητες μικρογλοιακών κυττάρων ενεργοποιούνται και υπερεκφράζονται [1-3]. Επιδημιολογικά, η αιτία της PD συνδέεται κυρίως με τη νευροφλεγμονώδη αντίδραση. Οι φλεγμονώδεις μεσολαβητές που προκύπτουν, όπως οι TNF-, IL{-1, IL-6, NO και ROS, βρίσκονται στο ραβδωτό σώμα του εγκεφάλου [1,4-7]. Η αποικοδόμηση των ντοπαμινεργικών νευρώνων μπορεί να ρυθμιστεί από τα μικρογλοιακά κύτταρα [8].

Η διαδικασία νευροφλεγμονής που προκαλεί PD προηγείται από πρωτογενή βλάβη των νευρώνων που προκαλείται από περιβαλλοντικές τοξίνες, συμπεριλαμβανομένης της ροτενόνης [9], του λιποπολυσακχαρίτη (LPS) [5,7] και των επιπτώσεων της μη φυσιολογικής συσσώρευσης πρωτεΐνης [10]. Η βλάβη θα προκαλέσει βλάβες και ακόμη και απόπτωση των ντοπαμινεργικών νευρώνων. Στη συνέχεια, τα μικρογλοιακά κύτταρα ενεργοποιούνται για να απελευθερώσουν κυτοκίνες, με αποτέλεσμα τη φλεγμονή και τον θάνατο των νευρώνων και τελικά να οδηγήσει σε PD.

Όταν τα μικρογλοιακά κύτταρα διεγείρονται από το LPS, το LPS δεσμεύεται στην επιφανειακή θέση δέσμευσης του υποδοχέα CD14 των μικρογλοιακών κυττάρων. Το σύμπλεγμα LPS-CD14 συνδέεται με συνδέτη MD2 μέσω διαμεμβρανικών πρωτεϊνών του υποδοχέα-4 (TLR4) και στη συνέχεια εμπλέκεται σε πολλαπλές οδούς μετάδοσης μηνυμάτων που δημιουργούνται από κινάσες πρωτεΐνης που ενεργοποιούνται από μιτογόνο (MAPK) και ενεργοποιούν μεταγραφικούς παράγοντες (πυρηνικός παράγοντας -κάπα Β, NF-κB). Μετά τη γονιδιακή μεταγραφή [5,11,12], τα μικρογλοιακά κύτταρα απελευθερώνουν κυτοκίνες όπως TNF- και IL-1 ή εκφράζουν γονίδια επαγώγιμης συνθάσης μονοξειδίου του αζώτου (iNOS) και κυκλο-οξυγενάσης-2 (COX{ {17}}), με αποτέλεσμα την απελευθέρωση προσταγλανδινών ή ΝΟ. Επιπλέον, δημιουργούνται καταστρεπτικές ελεύθερες ρίζες ONOO συνδυάζοντας ανιόντα υπεροξειδίου που παράγονται από οξειδάση νικοτιναμιδικής αδενίνης δινουκλεοτιδικής φωσφορικής (NADPH) με ΝΟ που παράγεται από το iNOS, οδηγώντας στο θάνατο των ντοπαμινεργικών νευρώνων [13]. Ως εκ τούτου, σε αυτή τη μελέτη, το LPS χρησιμοποιήθηκε για την πρόκληση νευροφλεγμονής των μικρογλοιακών κυττάρων ως in vitro μοντέλο της PD.

Οι κατεχίνες είναι φυσικά αντιοξειδωτικά που μπορούν να αποτρέψουν την κυτταρική βλάβη και παρέχουν πολλά φαρμακολογικά οφέλη, όπως κατά του όγκου, αντικαρκινική, αντιγηραντική, αντιφαρμακολογική ακτινοβολία και σάρωση ελεύθερων ριζών [14]. Το πράσινο τσάι περιέχει περίπου 10 τοις εκατό πολυφαινόλες κατά βάρος, συμπεριλαμβανομένων μεγάλων ποσοτήτων μιας κατεχίνης που ονομάζεται γαλλική επιγαλλοκατεχίνη (EGCG). Το EGCG έχει την υψηλότερη αντιοξειδωτική δράση και ικανότητα σάρωσης ελεύθερων ριζών σε όλες τις κατεχίνες του πράσινου τσαγιού και μπορεί να συλλάβει ROS για να προστατεύσει τα κύτταρα από τη βλάβη του οξειδωτικού στρες [15]. Το EGCG έχει επίσης υψηλή αντιφλεγμονώδη αποτελεσματικότητα, η οποία μπορεί να αναστείλει αποτελεσματικά την έκκριση κυτοκινών (TNF-, IL-2 και IL{-8) από τα μακροφάγα [16], τη φωσφορυλίωση των πρωτεϊνών σηματοδότησης Akt και των πρωτεϊνών IκB σε φλεγμονώδεις οδούς για τη μείωση της έκφρασης NF-κΒ ή της μεταγραφής AP-1 αναστέλλοντας τη φωσφορυλίωση των πρωτεϊνών MAPK προς τα πάνω για να εξισορροπηθεί η έκφραση COX{14}} και να μειωθεί η παραγωγή προφλεγμονωδών κυτοκινών [17].

Πρόσφατα, το EGCG αναφέρθηκε ότι είναι δυνητικά θεραπευτικό ή προφυλακτικό για την PD λόγω της καταστολής των ενεργών ολιγομερών της -συνουκλεΐνης (S) [18]. Το EGCG αποτρέπει επίσης τη συσσώρευση S in vitro [19-21] και η συσσώρευση του κυτταροπλασματικού S σε ντοπαμινεργικούς νευρώνες είναι μια πιθανή παθογένεση της PD που οδηγεί σε βλάβη των ντοπαμινεργικών νευρώνων στη μέλαινα ουσία [22]. Επιπλέον, το EGCG μπορεί να ανακτήσει νευροχημική ή λειτουργική βλάβη που προκαλείται από 1-μεθυλ-4-φαινυλ-1,2,3,6-τετραϋδροπυριδίνη (MPTP) και να ρυθμίσει τη φερροπορτίνη στη μέλαινα ουσία και να μειώσει οξειδωτικό στρες [23]. Το EGCG έχει επίσης νευροπροστατευτικά και ανοσοπροστατευτικά αποτελέσματα σε ποντίκια που έλαβαν MPTP και μπορεί να ρυθμίσει τη νευροφλεγμονή και να προστατεύσει την απώλεια ντοπαμινεργικών νευρώνων σε PD που προκαλείται από MPTP [24].

Διερευνήθηκαν τα αντιφλεγμονώδη αποτελέσματα του EGCG. Το EGCG κατέστειλε το LPS που προκάλεσε την παραγωγή ΝΟ και την έκφραση του iNOS σε BV-2 μικρογλοιακά κύτταρα. Το EGCG μπορεί να αναστείλει αποτελεσματικά τις εκφράσεις των προφλεγμονωδών κυτοκινών όπως ο TNF- και η IL-1 σε κύτταρα BV-2 [25]. Η προεπεξεργασία με EGCG ανθρώπινων μακροφάγων ανέστειλε σημαντικά την επαγόμενη από LPS έκφραση προφλεγμονωδών κυτοκινών όπως TNF-, IL-1 και IL{10}} [26]. Επιπλέον, η μετά τη θεραπεία με EGCG σε ποντίκια που είχαν τραυματιστεί από LPS μείωσε την παραγωγή μιας προφλεγμονώδους κυτοκίνης μέσω της τροποποίησης της οδού TLR4-NF-κB [27]. Επιπλέον, μικροσφαίρες πολυ(λακτιδίου-συν-γλυκολιδίου) (PLGA) φορτωμένες με EGCG και βελτιστοποιημένες με την προσθήκη -κυκλοδεξτρίνης (-CD) θα μπορούσαν να καταστέλλουν αποτελεσματικά την παραγωγή ΝΟ από BV-2 κύτταρα στο in vitro μοντέλο του BV ποντικού -2 μικρογλοιακά κύτταρα που διεγείρονται από LPS, υποδεικνύοντας ότι οι μικροσφαίρες μπορούν να καταστείλουν τη φλεγμονή των ενεργοποιημένων μικρογλοιακών κυττάρων [28].

Αν και το πράσινο τσάι είναι καθημερινό ρόφημα, η αποτελεσματικότητα των κατεχινών είναι αναποτελεσματική λόγω της χαμηλής βιοδιαθεσιμότητας από το στόμα. Συνεπώς, απαιτούνται αποτελεσματικές φαρμακευτικές μορφές δοσολογίας. Ο νανοφορέας φαρμάκων έχει τα πλεονεκτήματα της αποφυγής του πρόωρου μεταβολισμού, της παράτασης του χρόνου δράσης του φαρμάκου και της στόχευσης της χορήγησης φαρμάκου. Ως εκ τούτου, αυτή η μελέτη σκοπεύει να αναπτύξει λιποσώματα που περιέχουν φωσφατιδυλοχολίνη (PC) και φωσφατιδυλοσερίνη (PS), παρόμοια συστατικά με την κυτταρική μεμβράνη, ως αντιφλεγμονώδεις δοσολογικές μορφές. Το EGCG που εκχυλίστηκε από φύλλα πράσινου τσαγιού φορτώθηκε σε λιποσώματα για να επιβραδύνει τις φλεγμονώδεις αντιδράσεις σε κύτταρα μικρογλοίας που προκαλούνται από LPS. Αξιολογήθηκε επίσης η θεραπευτική επίδραση των λιποσωμάτων με EGCG στο in vivo μοντέλο της PD για νευροπροστασία.

2. Αποτελέσματα

2.1. Εκχύλιση EGCG

2.1.1. Εκχύλισμα EGCG

Τα δεδομένα χαρακτηρισμού της επιγαλλοκατεχίνης{{0}}βρίσκονται στο Συμπληρωματικό Αρχείο (Εικόνες S1 και S2). 2.1.2. Διάφορα σκευάσματα EGCG Στον Πίνακα 1, οι μέσες διάμετροι σωματιδίων των λιποσωμάτων εικονικού φαρμάκου PS-, PS-EGCE- και PS-EGCG-VE ήταν μικρότερες από αυτές του εικονικού φαρμάκου PC-, PC-EGCE- και PC-EGCG-VE- λιποσώματα, αντίστοιχα. Επειδή το PC είναι ουδέτερο και το PS είναι αρνητικά φορτισμένο [29], αυτό δείχνει ότι το δυναμικό της επιφάνειας του πρόσθετου επηρέασε το μέγεθος των σωματιδίων. Ο δείκτης πολυδιασποράς (PDI) όλων των λιποσωμάτων ήταν μικρότερος από 0,22, υποδεικνύοντας ότι η δομή των λιποσωμάτων στο διάλυμα είναι σταθερή. Τα αρνητικά φορτία του PS οδήγησαν σε μια απωστική δύναμη στο δυναμικό της επιφάνειας μεταξύ των PS-λιποσωμάτων, αποφεύγοντας τη συσσωμάτωση και μειώνοντας το μέγεθος των PS-λιποσωμάτων.

Η αποτελεσματικότητα/μέγεθος ενθυλάκωσης των λιποσωμάτων που περιέχουν PS που περιγράφεται στον Πίνακα 1 ήταν μεγαλύτερη/μικρότερη από εκείνη των αντίστοιχων λιποσωμάτων που περιέχουν PC [30]. Η αποτελεσματικότητα ενθυλάκωσης των λιποσωμάτων PC-EGCG-VE και των λιποσωμάτων PS-EGCG-VE ήταν πιο εκτεταμένη από αυτή των λιποσωμάτων PC-EGCG και των λιποσωμάτων PS-EGCG, αντίστοιχα. Αυτό συμβαίνει επειδή η βιταμίνη Ε είναι λιποδιαλυτή, ενσωματωμένη σε μια μεμβράνη διπλής στοιβάδας φωσφολιπιδίων και παρέχει ένα αντιοξειδωτικό προστατευτικό για το EGCG.

2.2. In vitro κυτταρική ανάλυση

2.2.1. Βιωσιμότητα κυττάρων

Η κυτταρική βιωσιμότητα των κυττάρων που υποβλήθηκαν σε αγωγή με EGCG από 50 έως 400 μΜ μειώθηκε σημαντικά σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (Εικόνα 1Α). Αντίθετα, η βιωσιμότητα των κυττάρων που λαμβάνουν 5 έως 25 μΜ είναι παρόμοια με τη βιωσιμότητα των κυττάρων της ομάδας ελέγχου. Η συγκέντρωση του EGCG που χρησιμοποιήθηκε σε αυτή τη μελέτη προσδιορίστηκε ότι είναι 25 μΜ. Παρομοίως, η συγκέντρωση του LPS που χρησιμοποιήθηκε για την επαγωγή κυτταρικής φλεγμονής προσδιορίστηκε ότι είναι 50 ng/mL σύμφωνα με το Σχήμα 1Β. Στο Σχήμα 1C, η κυτταρική βιωσιμότητα των κυττάρων που συγκαλλιεργήθηκαν με λιποσώματα εικονικού φαρμάκου όλων των συγκεντρώσεων δεν ήταν στατιστικά σημαντική σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Επομένως, τα λιποσώματα εικονικού φαρμάκου δεν είναι κυτταροτοξικά για τα μικρογλοιακά κύτταρα.

2.2.2. Μορφολογία Κυττάρου

Η μορφολογία των κυττάρων της ομάδας ελέγχου (Εικόνα 2Α) και η μορφολογία των κυττάρων που υποβλήθηκαν σε αγωγή με 25 μM EGCG (Σχήμα 2Β) ήταν σφαιρικές, ενώ η μορφολογία των κυττάρων που υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 50 ng/mL LPS (Εικόνα 2C) είχε σχήμα ατράκτου. Ωστόσο, η μορφολογία των κυττάρων που υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 25 μΜ EGCG και ενεργοποιήθηκαν με LPS (Εικόνα 2D) ήταν σφαιρική. Αυτό σήμαινε ότι το EGCG μπορεί να αναστείλει την ενεργοποίηση που προκαλείται από το LPS. Επομένως, η προεπεξεργασία του EGCG έχει ανασταλτική επίδραση στη νευροφλεγμονή, προστατεύοντας τα μικρογλοιακά κύτταρα από την ενεργοποίηση.

2.2.3. ΟΧΙ Απελευθέρωση

Στο Σχήμα 3Α, η απελευθέρωση ΝΟ από κύτταρα BV-2 που προκλήθηκε με 5-1000 ng/mL LPS κατά τη διάρκεια επώασης 24 ωρών ήταν στατιστικά σημαντική σε σύγκριση με την απελευθέρωση ΝΟ από την ομάδα ελέγχου. Η συγκέντρωση του LPS που χρησιμοποιήθηκε για την ενεργοποίηση της κυτταρικής φλεγμονής προσδιορίστηκε ότι είναι 50 ng/mL.

Η απελευθέρωση ΝΟ από κύτταρα BV-2 που υποβλήθηκαν σε αγωγή με 25 μΜ EGCG δεν ήταν στατιστικά σημαντική σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, όπως φαίνεται στο Σχήμα 3Β. Ωστόσο, η κυτταρική φλεγμονή που προκλήθηκε με LPS για 24 ώρες έδειξε σημαντική αύξηση σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Αυτά τα κύτταρα που υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 25-200 μM EGCG για 1 ώρα και στη συνέχεια ενεργοποιήθηκαν με LPS παρουσίασαν στατιστικά σημαντική μείωση σε σύγκριση με την ομάδα κυττάρων που ενεργοποιήθηκαν μόνο με LPS. Η απελευθέρωση ΝΟ δεν μειώθηκε όταν το EGCG αυξήθηκε από 50–200 μΜ αφού η βιωσιμότητα των κυττάρων μειώθηκε όταν το EGCG είχε αυξηθεί από 50–200 μΜ, σύμφωνα με το Σχήμα 1Α.

Η παραγωγή ΝΟ των κυττάρων που υποβλήθηκαν σε αγωγή με 25 μΜ EGCG ακολουθούμενη από τη φλεγμονή που προκλήθηκε με 50 ng/mL LPS δεν ήταν στατιστικά σημαντική σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (Εικόνα 3C). Ωστόσο, το ΝΟ που απελευθερώθηκε στην ομάδα των κυττάρων που υποβλήθηκαν σε αγωγή με PC-EGCG-λιποσώματα ή PC-EGCG-VE-λιποσώματα ακολουθούμενη από ενεργοποίηση LPS με 50 ng/mL παρουσίασε σημαντική μείωση σε σύγκριση με την ομάδα κυττάρων που υποβλήθηκαν σε αγωγή μόνο με LPS. Η απελευθέρωση ΝΟ από κύτταρα που υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία με PC-EGCG-λιποσώματα ή PC-EGCG-VE-λιποσώματα ήταν υψηλότερη από την απελευθέρωση ΝΟ από την ομάδα των κυττάρων που είχαν υποστεί προεπεξεργασία με EGCG, κάτι που θα πρέπει να εξηγηθεί από την αργή απελευθέρωση EGCG από τα λιποσώματα.

2.2.4. Ανάλυση Κυτοκίνης

Στο Σχήμα 4Α, η συγκέντρωση TNF- κυττάρων που υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με LPS μετά από 24 ώρες έδειξε στατιστικά σημαντική αύξηση σε σύγκριση με εκείνη της ομάδας ελέγχου ή του μέσου κυτταροκαλλιέργειας (DMEM). Τα λιποσώματα PC με εικονικό φάρμακο ήταν κοντά σε αυτά των κυττάρων που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με LPS. Ωστόσο, η συγκέντρωση TNF- στην ομάδα των κυττάρων που υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία με λιποσώματα PS-EGCG ή λιποσώματα PS-EGCG-VE που ακολουθήθηκε από την ενεργοποίηση LPS έδειξε στατιστικά σημαντική μείωση σε σύγκριση με εκείνη των κυττάρων που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με LPS. Αυτή η φθίνουσα συγκέντρωση του TNF- υποδεικνύει ότι τα φορτωμένα με EGCG λιποσώματα μπορούν να μειώσουν την ενεργοποίηση των μικρογλοιακών κυττάρων που προκαλούνται από το LPS. Η ανασταλτική δράση των λιποσωμάτων PS-EGCG-VE ήταν καλύτερη από αυτή των λιποσωμάτων PS-EGCG.

Τα φωσφολιπίδια στην κυτταρική μεμβράνη μπορούν να υδρολυθούν από την κυτοσολική φωσφολιπάση Α2 (cPLA2) για την παραγωγή αραχιδονικού οξέος. Η κυκλοοξυγενάση (COX) είναι ένα βασικό ένζυμο που μετατρέπει το αραχιδονικό οξύ σε προσταγλανδίνη. Το COX-2 και το cPLA2 συχνά δημιουργούνται από φλεγμονή ή κακοήθη νόσο [31-34]. Στο Σχήμα 4Β, η φλεγμονή προκλήθηκε από LPS 5-50 ng/mL για 24 ώρες και η έκφραση του cPLA2 αυξήθηκε όταν η συγκέντρωση του LPS αυξήθηκε. Το Σχήμα 4Γ έδειξε τις αυξημένες δραστηριότητες της COX-2, που προκαλείται από LPS (5–50 ng/mL) για 24 ώρες. Η έκφραση της COX-2 αυξήθηκε από 5–25 ng/mL LPS, ενώ μειώθηκε στα 50 ng/mL. Στο Σχήμα 4D, η έκφραση cPLA2 μειώθηκε όταν τα κύτταρα BV-2 υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία με EGCG και προκλήθηκαν από LPS. Η έκφραση της COX-2 όταν το LPS ενεργοποιούσε τα BV-2 κύτταρα αυξήθηκε σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (Εικόνα 4Ε). Υπήρξε σημαντική μείωση της COX-2 στην ομάδα των κυττάρων που υποβλήθηκαν σε προηγούμενη αγωγή με EGCG, εικονικό φάρμακο PS-λιποσώματα, PS-EGCG-λιποσώματα και PS-EGCG-VE-λιποσώματα, ακολουθούμενη από φλεγμονώδη επαγωγή LPS. Ειδικά, η έκφραση της COX-2 των κυττάρων που υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία με εικονικό φάρμακο PS-λιποσώματα είχε μια στατιστικά σημαντική διαφορά από εκείνη των κυττάρων που επάγονται από LPS.

2.3. In Vivo Animal Test

2.3.1. Συμπεριφορά Ζώων

Δοκιμή Ο αριθμός των κύκλων που ολοκληρώθηκαν από τους αρουραίους Πάρκινσον μετά τη χορήγηση αμφεταμίνης (που φαίνεται στο Σχήμα 5Α) αυξήθηκε σημαντικά σε σύγκριση με τον αριθμό των κύκλων που ολοκληρώθηκαν από τους αρουραίους της ομάδας ελέγχου. Η συμπεριφορά των αρουραίων με παρκινσονία0 που έλαβαν θεραπεία με τα διάφορα σκεύασμα του EGCG ήταν παρόμοια με αυτή των αρουραίων της ομάδας ελέγχου. Αυτά τα δεδομένα έδειξαν ότι το EGCG εξασθένησε τις μονόπλευρες βλάβες του μέλαινα ραβδωτού συστήματος που προκαλούνται από το LPS. 2.3.2. Ανάλυση φλεγμονωδών δεικτών Η αναλογία TNF-/GAPDH στην ομάδα που υποβλήθηκε σε θεραπεία ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε σύγκριση με την αναλογία που βρέθηκε σε συνδρομικούς αρουραίους. Η τάση IL-1 ήταν παρόμοια με την τάση TNF. Τα in vivo αποτελέσματα είναι σύμφωνα με τα αποτελέσματα των μελετών in vitro. Η έκφραση του προερχόμενου από τον εγκέφαλο νευροτροφικού παράγοντα (BDNF) στην ομάδα που υποβλήθηκε σε αγωγή ήταν παρόμοια με την επαγόμενη από LPS ομάδα (Εικόνα 5D). Ωστόσο, αυτό το αποτέλεσμα θα μπορούσε να υποδεικνύει ότι η βελτίωση του συντονισμού των άκρων σε αρουραίους με σύνδρομο Πάρκινσον από λιποσώματα φορτωμένα με PC-EGCG προκαλείται από τη μείωση της απόκρισης νευροφλεγμονής, αλλά όχι από την αύξηση της έκφρασης του BDNF.

Ταιριάζει επίσης σε προηγούμενες αναφορές ότι η μείωση της παραγωγής TNF- και NO με προαγωγή σε αρουραίους με EGCG (10 mg/kg) για 24 ώρες και επαγωγή με LPS μετά από 7 ημέρες μειώθηκε σε σύγκριση με αυτή των αρουραίων που έλαβαν LPS και κατέληξε στο συμπέρασμα ότι το EGCG έχει ένα πιθανό θεραπευτικό αποτέλεσμα για νευροτοξικότητα που προκαλείται από LPS λόγω μείωσης της απελευθέρωσης TNF- και ΝΟ.

3. Συζήτηση

Σε αυτή τη μελέτη, η καθαρότητα του EGCG που εκχυλίστηκε από το πράσινο τσάι ανιχνεύθηκε ότι είναι 90,5 τοις εκατό και η δραστηριότητα δέσμευσης ελεύθερων ριζών του EGCG ήταν πιο εκτεταμένη από 80 τοις εκατό μέσα σε 3 λεπτά. Αυξήθηκε με υψηλότερη συγκέντρωση EGCG ή μεγαλύτερο χρόνο αντίδρασης. Το μέγεθος σωματιδίων των λιποσωμάτων PC-EGCG-VE- και PS-EGCG-VE ήταν 161,5 και 142,9 nm, τα οποία ήταν μικρότερα από αυτό του EGCG που φορτώθηκε σε μικροσφαίρες PLGA [28] με επιπλέον -κυκλοδεξτρίνη (που κυμαίνονται από 1-14 μm). . Η αποτελεσματικότητα ενθυλάκωσης των λιποσωμάτων PC-EGCG-VE- και PS-EGCG-VE ήταν 60,2 τοις εκατό και 76,8 τοις εκατό, αντίστοιχα. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα λιποσώματα που περιέχουν PS ήταν μικρότερα, πιο σταθερά και είχαν υψηλότερη απόδοση ενθυλάκωσης λόγω του φορτίου στο PS και είχαν ως αποτέλεσμα μια απωστική δύναμη μεταξύ των λιποσωμάτων για να αποφευχθεί η συσσώρευση.

Η έκφραση του TNF- σε κύτταρα που υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία με λιποσώματα PS-EGCG- και PS-EGCG-VE και στη συνέχεια προκλήθηκαν από LPS είχε στατιστικά σημαντικές διαφορές σε σύγκριση με εκείνη των κυττάρων που επάγονται με LPS και παρόμοια αποτελέσματα παρατηρήθηκαν στην προεπεξεργασία EGCG σε LPS -προκάλεσε έκφραση TNF- σε κύτταρα BV-2 [25] και ανθρώπινα μακροφάγα [26]. Συνοπτικά, η μορφολογία των κυττάρων και η έκφραση του TNF- της ομάδας που υποβλήθηκε σε αγωγή με EGCG έδειξαν ένα ανασταλτικό αποτέλεσμα της φλεγμονής που προκαλείται από το LPS.

Στην παρούσα μελέτη, η προεπεξεργασία EGCG μπορεί να μειώσει την απελευθέρωση ΝΟ. Η καταστολή της παραγωγής ΝΟ από τα επαγόμενα από LPS κύτταρα BV-2 με προεπεξεργασία μικροσφαιρών PLGA φορτωμένων με EGCG διερευνήθηκε επίσης στην προηγούμενη μελέτη μας [28].

Στην παρούσα μελέτη, το σύνδρομο Πάρκινσον σε αρουραίους δημιουργείται από τη βλάβη στη μονόπλευρη περιοχή της μέλαινας ουσίας που προκαλείται από το LPS. Ένα άλλο σημαντικό εύρημα είναι ότι, μέσω στατιστικής ποσοτικής ανάλυσης, τα φορτωμένα με EGCG λιποσώματα μπορούν να ανακουφίσουν το σύνδρομο λόγω βλάβης στη μονόπλευρη περιοχή νιγροσίνης του μεσεγκεφάλου του εγκεφάλου του αρουραίου που προκαλείται από LPS στην περιστροφική δοκιμασία και την παραγωγή νευροφλεγμονωδών παραγόντων TNF- στην ουσία Η περιοχή μέλαινας του εγκεφάλου του αρουραίου μπορεί επίσης να μειωθεί από λιποσώματα φορτωμένα με EGCG. Αυτή η μελέτη δείχνει ότι η βελτίωση του συντονισμού των άκρων και η μείωση της φλεγμονής των νευρώνων στο σύνδρομο Parkinson που προκαλείται από LPS προκαλείται από την τοπική χορήγηση λιποσωμάτων με EGCG αλλά όχι από την αύξηση της έκφρασης του BDNF. Ωστόσο, τα αποτελέσματα κατά της νευροφλεγμονής είναι απαραίτητα για ένα νευροπροστατευτικό αποτέλεσμα [35]. Η ενεργοποίηση του BV-2 απελευθερώνει προφλεγμονώδεις παράγοντες, οι οποίοι είναι νευροτοξικοί και οδηγούν σε κυτταρική βλάβη. Αποτρέποντας την ενεργοποίηση του BV{10}}, το EGCG παρέχει νευροπροστατευτικό αποτέλεσμα. Κάποια μετα-θεραπεία του EGCG για τη βελτίωση του πολλαπλασιασμού, του ποσοστού επιβίωσης και της νευρωνικής διαφοροποίησης των ενήλικων νευρικών βλαστοκυττάρων στην οδοντωτή έλικα που προκαλείται από το LPS υποδεικνύει ότι το EGCG μπορεί να είναι ένας πιθανός θεραπευτικός παράγοντας για νευροφλεγμονώδεις νόσους [27].

Προηγούμενες φαρμακοκινητικές μελέτες έδειξαν ότι το εξωγενές PS μπορεί να διασχίσει τον αιματοεγκεφαλικό φραγμό (BBB), στον οποίο φαίνεται να έχει συγγένεια με τον υποθάλαμο [6] και η από του στόματος χορήγηση έχει ως αποτέλεσμα τα μέγιστα επίπεδα σε 1-4 ώρες. Επιπλέον, βρέθηκε ότι τα λιποσώματα που περιέχουν PS μιμούνται τα αποπτωτικά κύτταρα για να προάγουν την έκκριση αντιφλεγμονωδών μεσολαβητών, όπως ο αυξητικός παράγοντας μετασχηματισμού- 1 (TGF- 1) (για τη μείωση του ΝΟ που παράγεται από τα μακροφάγα) [36] και προσταγλανδίνη Ε2 (PGE2) από μακροφάγα και μικρογλοιακά κύτταρα in vitro [6,37], και επίσης προάγουν την ανακούφιση της φλεγμονής in vivo [38]. Αντίστοιχα, τα λιποσώματα με EGCG που περιέχουν PS που αποδείχθηκε σε αυτή τη μελέτη έχουν το πλεονέκτημα του μικρότερου μεγέθους σωματιδίων, της υψηλότερης αποτελεσματικότητας ενθυλάκωσης και της αναστολής της ενεργοποίησης του συνδρόμου Πάρκινσον τόσο σε κύτταρα μικρογλοίας όσο και στο μοντέλο αρουραίου Vivo, παρουσιάζοντας βελτιωμένη αντιφλεγμονώδη λειτουργία και νευροπροστασία.

Ο περιορισμός είναι ότι η μελέτη μας διεξήχθη με κάποιες αναλύσεις που λείπουν, όπως στην περίπτωση του νευροπροστατευτικού αποτελέσματος, και η χρώση NeuN δεν διερευνήθηκε. Αναλύσαμε επίσης μόνο το BDNF ως νευροτροφικό παράγοντα. Οι FGF2 και IGF2 είναι επίσης νευροτροφικοί παράγοντες που πρέπει να ληφθούν υπόψη [39].

5. Συμπεράσματα

Για τη βελτίωση της χαμηλής από του στόματος βιοδιαθεσιμότητας των κατεχινών, το EGCG φορτώθηκε σε λιποσώματα σε αυτή τη μελέτη. Βρέθηκε ότι τα λιποσώματα που περιείχαν PS ήταν μικρότερα και πιο σταθερά. Έχει υψηλότερη απόδοση ενθυλάκωσης και η προσθήκη βιταμίνης Ε μπορεί να προστατεύσει το EGCG από την οξείδωση και να βελτιώσει την αποτελεσματικότητα της ενθυλάκωσης. Στη μελέτη in vitro, οι εκφράσεις της παραγωγής TNF- και ΝΟ από κύτταρα BV-2 μειώθηκαν όλες μετά από προεπεξεργασία λιποσωμάτων φορτωμένων με EGCG σε κύτταρα BV-2 που προκαλούνται από LPS. Επομένως, τα φορτωμένα με EGCG λιποσώματα έχουν παίξει ουσιαστικό ρόλο στη νευροφλεγμονώδη απόκριση ως αναστολέας. Τα ευεργετικά αποτελέσματα ήταν η πρόληψη της απόπτωσης των κυττάρων στις νευροφλεγμονώδεις αντιδράσεις.

Σε in vivo μελέτη, το σύνδρομο Πάρκινσον σε αρουραίους που προκαλείται από LPS στη μονόπλευρη περιοχή της μέλαινας ουσίας του μεσεγκεφάλου έχει βελτιωθεί. Ο μηχανισμός νευρο-φλεγμονής, συμπεριλαμβανομένης της έκκρισης TNF-, έχει ανασταλεί από τη μετα-θεραπεία λιποσωμάτων φορτωμένων με EGCG. Δείξαμε ότι το EGCG θα ήταν ένας πιο πολύτιμος υποψήφιος για τη θεραπεία νευροεκφυλιστικών ασθενειών ανακουφίζοντας τη φλεγμονή στον εγκέφαλο. Η επακόλουθη διερεύνηση θα πρέπει να επικεντρωθεί στις φλεγμονώδεις οδούς χρησιμοποιώντας έναν ιχνηλάτη λυσοσώματος για την παρακολούθηση της εισόδου του λιποσώματος στο κύτταρο και την απελευθέρωση του EGCG από το λιπόσωμα.

βιβλιογραφικές αναφορές

1 Lull, ME; Αποκλεισμός, ML Μικρογλοιακή ενεργοποίηση και χρόνιος νευροεκφυλισμός. Neurotherapeutics 2010, 7, 354-365. [CrossRef]

2. Ekdahl, C.; Κοκαία, Ζ.; Lindvall, O. Φλεγμονή του εγκεφάλου και νευρογένεση ενηλίκων: Ο διπλός ρόλος της μικρογλοίας. Neuroscience 2009, 158, 1021-1029. [CrossRef] [PubMed]

3. Weissleder, R.; Nahrendorf, Μ.; Pittet, MJ Απεικόνιση μακροφάγων με νανοσωματίδια. Nat. Μητήρ. 2014, 13, 125–138. [CrossRef]

4. Παπαγεωργίου, Ι.Ε. Φετάνη, AF; Lewen, Α.; Heinemann, U.; Kann, Ο. Η ευρεία ενεργοποίηση μικρογλοιακών κυττάρων στον ιππόκαμπο χρόνιων επιληπτικών αρουραίων συσχετίζεται μόνο εν μέρει με τον νευροεκφυλισμό. Εγκεφαλική Δομή. Λειτουργία. 2015, 220, 2423–2439. [CrossRef] [PubMed]

5. Dutta, G.; Zhang, Ρ.; Liu, B. Ζώο μοντέλο λιποπολυσακχαρίτη νόσου του Πάρκινσον: Μηχανιστικές μελέτες και ανακάλυψη φαρμάκων. Fundam. Clin. Pharmacol. 2008, 22, 453-464. [CrossRef] [PubMed]

6. Otsuka, Μ.; Tsuchiya, S.; Aramaki, Y. Συμμετοχή της ERK, μιας ΜΑΡ κινάσης, στην παραγωγή TGF- από μακροφάγα που υποβάλλονται σε επεξεργασία με λιποσώματα που αποτελούνται από φωσφατιδυλοσερίνη. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2004, 324, 1400–1405. [CrossRef]

7. Li, R.; Huang, Y.-G.; Fang, D.; Le, W.-D. Η (-)-γαλλική επιγαλλοκατεχίνη αναστέλλει την επαγόμενη από λιποπολυσακχαρίτες μικρογλοιακή ενεργοποίηση και προστατεύει από τη μεσολάβηση της φλεγμονής ντοπαμινεργική νευρωνική βλάβη. J. Neurosci. Res. 2004, 78, 723-731. [CrossRef]

8. Liu, J.; Hong, Ζ.; Ding, J.; Liu, J.; Zhang, J.; Chen, S. Κυρίαρχη απελευθέρωση λυσοσωμικών ενζύμων από μικρογλοία νεογέννητων αρουραίων μετά από θεραπεία LPS που αποκαλύφθηκε από πρωτεομικές μελέτες. J. Proteome Res. 2008, 7, 2033–2049. [CrossRef]

9. Cho, H.-S.; Kim, S.; Lee, S.-Y.; Park, JA; Kim, S.-J.; Chun, HS Προστατευτική επίδραση του συστατικού πράσινου τσαγιού, L-theanine στον θάνατο των νευρωνικών κυττάρων που προκαλείται από περιβαλλοντικές τοξίνες. Neurotoxicology 2008, 29, 656-662. [CrossRef]

10. Mariani, MM; Kielian, T. Microglia σε λοιμώδεις νόσους του κεντρικού νευρικού συστήματος. J. Neuroimmune Pharmacol. 2009, 4, 448–461. [CrossRef]

11. Σαντιάγο, RM; Barbieiro, J.; Λίμα, ΜΜ; Dombrowski, PA; Andreatini, R.; Οι ζωτικές, καταθλιπτικές αλλοιώσεις της ΜΑ που προκαλούνται από τα μοντέλα ενδονευρικής MPTP, 6-OHDA, LPS και ροτενόνης της νόσου του Πάρκινσον σχετίζονται κυρίως με τη σεροτονίνη και την ντοπαμίνη. Επαιτώ. Neuro-Psychopharmacol. Biol. Psychiatry 2010, 34, 1104–1114. [CrossRef] [PubMed]

12. Liu, Μ.; Bing, G. Lipopolysaccharide ζωικά μοντέλα για τη νόσο του Πάρκινσον. Η νόσος του Πάρκινσον. 2011, 2011, 327089. [CrossRef] [PubMed]

13. Wu, D.-C.; Teismann, Ρ.; Tieu, Κ.; Vila, Μ.; Jackson-Lewis, V.; Ισχιρόπουλος, Η.; Przedborski, S. NADPH οξειδάση μεσολαβεί στο οξειδωτικό στρες στο μοντέλο 1-μεθυλ-4-φαινυλ-1, 2, 3, 6-τετραϋδροπυριδίνης της νόσου του Πάρκινσον. Proc. Natl. Ακαδ. Sci. ΗΠΑ 2003, 100, 6145–6150. [CrossRef]

14. Rahman, Ι.; Biswas, SK; Kirkham, PA Ρύθμιση της φλεγμονής και της οξειδοαναγωγικής σηματοδότησης από τις διατροφικές πολυφαινόλες. Biochem. Pharmacol. 2006, 72, 1439–1452. [CrossRef] [PubMed]

15. Valko, Μ.; Rhodes, C.; Moncol, J.; Izakovic, Μ.; Mazur, M. Ελεύθερες ρίζες, μέταλλα και αντιοξειδωτικά στον καρκίνο που προκαλείται από το οξειδωτικό στρες. Chem. Biol. Αλληλεπιδρώ. 2006, 160, 1–40. [CrossRef]

16. Sure, Y.-J.; Chun, K.-S.; Cha, Η.-Η.; Han, SS; Keum, Y.-S.; Park, K.-K.; Lee, SS Μοριακοί μηχανισμοί που διέπουν τις χημειοπροληπτικές δραστηριότητες των αντιφλεγμονωδών φυτοχημικών ουσιών: Υπορρύθμιση της COX-2 και του iNOS μέσω της καταστολής της ενεργοποίησης του NF-κB. Mutat. Res. Fundam. ΜοΙ. Μηχ. Mutagenesis 2001, 480, 243-268. [CrossRef]

17. Renaud, J.; Nabavi, SF; Daglia, Μ.; Nabavi, SM; Μαρτινόλη, Μ.-Γ. Επιγαλλοκατεχίνη-3-, ένα πολλά υποσχόμενο μόριο για τη νόσο του Πάρκινσον; Rejuvenation Res. 2015, 18, 257–269. [CrossRef]

18. Yang, JE; Rho, KY; Lee, S.; Lee, JT; Park, JH; Bhak, G.; Paik, SR EGCG Προστασία της διαταραχής της μεμβράνης και της κυτταροτοξικότητας που προκαλείται από το «ενεργό ολιγομερές» της συνουκλεΐνης. Sci. Απ. 2017, 7, 1–10. [CrossRef]

19. Bieschke, J.; Russ, J.; Friedrich, RP; Ehrnhoefer, DE; Wobst, Η.; Neugebauer, Κ.; Το Wanker, EE EGCG αναδιαμορφώνει τα ώριμα -συνουκλεΐνη και αμυλοειδές- ινίδια και μειώνει την κυτταρική τοξικότητα. Proc. Natl. Ακαδ. Sci. ΗΠΑ 2010, 107, 7710–7715. [CrossRef]

20. Yoshida, W.; Kobayashi, Ν.; Sasaki, Υ.; Ikebukuro, Κ.; Sode, Κ. Μερικό πεπτίδιο της -συνουκλεΐνης τροποποιημένο με αναστολείς μικρού μορίου αναστέλλει ειδικά την αμυλοειδική μαρμαρυγή της -συνουκλεΐνης. Int. J. ΜοΙ. Sci. 2013, 14, 2590–2600. [CrossRef] [PubMed]

21. Xu, Υ.; Zhang, Υ.; Quan, Ζ.; Wong, W.; Guo, J.; Zhang, R.; Yang, Q.; Dai, R.; McGeer, PL; Qing, H. Η γαλλική επιγαλλοκατεχίνη (EGCG) αναστέλλει τη συσσώρευση άλφα-συνουκλεΐνης: Ένας πιθανός παράγοντας για τη νόσο του Πάρκινσον. Neurochem. Res. 2016, 41, 2788–2796. [CrossRef] [PubMed]

22. Li, Υ.; Chen, Ζ.; Lu, Ζ.; Yang, Q.; Liu, L.; Jiang, Ζ.; Zhang, L.; Zhang, Χ.; Qing, H. «Εθιστικό σε κύτταρα» ανιχνεύσιμο νανοφάρμακο διπλού στόχου για τη θεραπεία της νόσου του Πάρκινσον μέσω της οδού flotillins. Theranostics 2018, 8, 5469. [CrossRef]

23. Xu, Q.; Langley, Μ.; Kanthasamy, AG; Ο Reddy, MB Epigallocatechin gallate έχει ένα νευροδιάσωσης σε ένα μοντέλο ποντικού της νόσου του Πάρκινσον. J. Nutr. 2017, 147, 1926–1931. [CrossRef] [PubMed]

24. Zhou, Τ.; Zhu, Μ.; Liang, Z. (-)-Επιγαλλοκατεχίνη-3-ρυθμίζει την περιφερική ανοσία στο μοντέλο ποντικού της νόσου του Πάρκινσον που προκαλείται από MPTP. ΜοΙ. Med. Απ. 2018, 17, 4883–4888. [CrossRef]

25. Park, Ε.; Chun, HS Πολυφαινόλη πράσινου τσαγιού Γαλική επιγαλλοκατεχίνη (EGCG) εμπόδισε την επαγόμενη από LPS ενεργοποίηση μικρογλοιακών κυττάρων BV-2. J. Life Sci. 2016, 26, 640–645. [CrossRef]

26. Liu, J.-B.; Zhou, L.; Wang, Υ.-Ζ.; Wang, X.; Zhou, Υ.; Ho, W.-Z.; Li, J.-L. Νευροπροστατευτική δράση της ()-επιγαλλοκατεχίνης γαλλικής κατά της κυτταροτοξικότητας που προκαλείται από λιποπολυσακχαρίτες. J. Immunol. Res. 2016, 2016, 4962351. [CrossRef] [PubMed]

27. Seong, K.-J.; Lee, H.-G.; Kook, MS; Ko, Η.-Μ.; Jung, J.-Y.; Kim, W.-J. Η επιγαλλοκατεχίνη-3-διασώζει τη νευρογένεση του ιππόκαμπου ενηλίκου με μειωμένη LPS καταστέλλοντας τη οδό σηματοδότησης TLR4-NF-κB σε ποντίκια. Κορεάτης J. Physiol. Pharmacol. 2016, 20, 41. [CrossRef] [PubMed]

28. Cheng, C.-Y.; Pho, Q.-H.; Wu, Χ.-Υ.; Chin, T.-Y.; Chen, C.-M.; Fang, Ρ.-Η.; Lin, Y.-C.; Hsieh, M.-F. Μικροσφαίρες PLGA φορτωμένες με σύμπλοκα -κυκλοδεξτρίνης επιγαλλοκατεχίνης-3-γαλακτώνουν για τις αντιφλεγμονώδεις ιδιότητες σε ενεργοποιημένα μικρογλοιακά κύτταρα. Polymers 2018, 10, 519. [CrossRef]

29. Buszello, Κ.; Harnisch, S.; Müller, R.; Müller, B. Η επίδραση των αλκαλικών λιπαρών οξέων στις ιδιότητες και τη σταθερότητα των παρεντερικών γαλακτωμάτων O/W τροποποιημένων με Solutol HS 15®. Ευρώ. J. Pharm. Biopharm. 2000, 49, 143-149. [CrossRef]

30. Shashi, Κ.; Satinder, Κ.; Bharat, P. Μια πλήρης ανασκόπηση σχετικά με: Λιποσώματα. Int. Res. J. Pharm. 2012, 3, 10–16.

31. Wang, W.-Y.; Tan, Μ.-S.; Yu, J.-T.; Tan, L. Ο ρόλος των προφλεγμονωδών κυτοκινών που απελευθερώνονται από μικρογλοία στη νόσο του Alzheimer. Αννα. Μετάφρ. Med. 2015, 3. [CrossRef]

32. Smith, JA; Das, Α.; Ray, SK; Banik, NL Ο ρόλος των προφλεγμονωδών κυτοκινών που απελευθερώνονται από μικρογλοία σε νευροεκφυλιστικές ασθένειες. Brain Res. Ταύρος. 2012, 87, 10–20. [CrossRef] [PubMed]

33. Hu, Η.; Li, Ζ.; Zhu, Χ.; Lin, R.; Ο Chen, L. Salidroside μειώνει την κινητικότητα των κυττάρων μέσω της σηματοδότησης NF-κB και MAPK σε μικρογλοιακά κύτταρα BV2 που προκαλούνται από LPS. Evid. Βασισμένο συμπληρωματικό εναλλακτικό. Med. 2014, 2014, 383821. [CrossRef]

34. Tambuyzer, BR; Ponsaerts, Ρ.; Nouwen, EJ Microglia: Gatekeepers της ανοσολογίας του κεντρικού νευρικού συστήματος. J. Leukoc. Biol. 2009, 85, 352–370. [CrossRef] [PubMed]

35. Lee, D.-S.; Jeong, G.-S. Η βουτεΐνη παρέχει νευροπροστατευτικά και αντινευροφλεγμονώδη αποτελέσματα μέσω της εξαρτώμενης από το Nrf2/ARE έκφρασης της οξυγενάσης αιμίας 1 ενεργοποιώντας την οδό PI3K/Akt. Br. J. Pharmacol. 2016, 173, 2894–2909. [CrossRef]

36. Matsuno, R.; Αραμάκη, Υ.; Tsuchiya, S. Συμμετοχή του TGF- σε ανασταλτικές επιδράσεις αρνητικά φορτισμένων λιποσωμάτων στην παραγωγή μονοξειδίου του αζώτου από μακροφάγα που διεγείρονται με LPS. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2001, 281, 614–620. [CrossRef] [PubMed]

37. Zhang, J.; Fujii, S.; Wu, Ζ.; Hashioka, S.; Tanaka, Υ.; Shiratsuchi, Α.; Nakanishi, Υ.; Nakanishi, H. Συμμετοχή της COX-1 και των προς τα πάνω ρυθμιζόμενων συνθασών προσταγλανδίνης Ε στην παραγωγή προσταγλανδίνης Ε2 που προκαλείται από φωσφατιδυλοσερίνη από μικρογλοία. J. Neuroimmunol. 2006, 172, 112–120. [CrossRef]

38. Ramos, GC; Fernandes, D.; Charro, CT; Souza, ΓΔ; Teixeira, MM; Assreuy, J. Αποπτωτική μίμηση: Τα λιποσώματα της φωσφατιδυλοσερίνης μειώνουν τη φλεγμονή μέσω της ενεργοποίησης των υποδοχέων που ενεργοποιούνται από τον πολλαπλασιαστή υπεροξισώματος (PPARs) in vivo. Br. J. Pharmacol. 2007, 151, 844–850. [CrossRef]

39. Abe, Ν.; Nishihara, Τ.; Yorozuya, Τ.; Tanaka, J. Microglia and Macrophages in the Pathological Central and Peripheral Nervous Systems. Cells 2020, 9, 2132. [CrossRef] [PubMed]

40. Chen, C.-H.; Hsieh, M.-F.; Ho, Υ.-Ν.; Huang, C.-M.; Lee, J.-S.; Yang, C.-Y.; Chang, Y. Ενίσχυση της διείσδυσης κατεχίνης στο δέρμα μέσω μιας πρόσφατα κατασκευασμένης μεμβράνης μοσχεύματος MPEG-PCL-2-υδροξυκυτταρίνης. J. Μέλος. Sci. 2011, 371, 134–140. [CrossRef]

41. Parthasarathy, S.; Bin Azizi, J.; Ramanathan, S.; Ismail, S.; Sasidharan, S.; Είπε, MIM; Mansor, SM Αξιολόγηση αντιοξειδωτικών και αντιβακτηριακών δράσεων υδατικών, μεθανολικών και αλκαλοειδών εκχυλισμάτων από φύλλα Mitragyna speciosa (οικογένεια Rubiaceae). Molecules 2009, 14, 3964-3974. [CrossRef] [PubMed]

42. Herrera, D.; Μολίνα, Α.; Buhlin, Κ.; Klinge, B. Περιοδοντικές παθήσεις και συσχέτιση με αθηροσκληρωτική νόσο. Περιοδοντολογία 2000 2020, 83, 66–89. [CrossRef] [PubMed]

43. Μπατίστα, CRA; Gomes, GF; Candelario-Jalil, Ε.; Fiebich, BL; de Oliveira, Νευροφλεγμονή που προκαλείται από λιποπολυσακχαρίτες ACP ως γέφυρα για την κατανόηση του νευροεκφυλισμού. Int. J. ΜοΙ. Sci. 2019, 20, 2293. [CrossRef]

44. Creese, Ι.; Burt, DR; Snyder, SH Η ενίσχυση της δέσμευσης του υποδοχέα ντοπαμίνης συνοδεύει την υπερευαισθησία συμπεριφοράς που προκαλείται από βλάβες. Science 1977, 197, 596–598. [CrossRef] [PubMed]