Ενίσχυση Top-Down Proteomics του εγκεφαλικού ιστού με FAIMS Μέρος 1

Περίληψη

Οι πρωτεομικές έρευνες της νόσου του Αλτσχάιμερ και του Πάρκινσον έχουν παράσχει πολύτιμες γνώσεις για τις νευροεκφυλιστικές διαταραχές. Μέχρι στιγμής, αυτές οι έρευνες ήταν σε μεγάλο βαθμό περιορισμένες προσεγγίσεις από κάτω προς τα πάνω, εμποδίζοντας τον βαθμό στον οποίο μπορεί κανείς να χαρακτηρίσει την «άθικτη» κατάσταση μιας πρωτεΐνης.

Η νόσος Αλτσχάιμερ είναι μια νευροεκφυλιστική ασθένεια που έχει μη αναστρέψιμες επιπτώσεις στη μνήμη και τις γνωστικές ικανότητες του ατόμου. Αν και οι άνθρωποι δεν μπορούν να θεραπεύσουν πλήρως την ασθένεια, μέσω προσεκτικής θεραπείας και πρόληψης, η εξέλιξη της νόσου μπορεί να επιβραδυνθεί όσο το δυνατόν περισσότερο και να διατηρηθεί η σωματική και ψυχική υγεία του ασθενούς.

Η μνήμη είναι μια από τις πιο εμφανείς πτυχές που επηρεάζονται από ασθενείς με Αλτσχάιμερ. Συχνά μπορεί να ξεχνούν σημαντικές πληροφορίες, όπως το όνομά τους, τα ονόματα των αγαπημένων τους, σημαντικές ημερομηνίες κ.λπ. Επιπλέον, κάποιο προηγμένο λεξιλόγιο αυτομάθησης, όπως αφηρημένες έννοιες και συνώνυμα, μπορεί επίσης να ξεχαστεί. Ωστόσο, με κάποια γνωστική εκπαίδευση και θεραπεία, οι ασθενείς με Αλτσχάιμερ μπορούν ακόμα να διατηρήσουν τη μνήμη τους σε ορισμένες πτυχές.

Αν και η νόσος του Αλτσχάιμερ μπορεί να επιφέρει αρνητικά αποτελέσματα, θα πρέπει να το δούμε θετικά. Πρώτον, αυξάνοντας την ευαισθητοποίηση και την κατανόηση της νόσου, μπορούμε να την προλάβουμε και να την αντιμετωπίσουμε καλύτερα. Δεύτερον, οι φροντιστές και τα μέλη της οικογένειας των ασθενών με Αλτσχάιμερ μπορούν επίσης να μάθουν πώς να επικοινωνούν και να αλληλεπιδρούν αποτελεσματικά μαζί τους για να βοηθήσουν τους ασθενείς να διατηρήσουν την αξιοπρέπεια του εαυτού τους και να ζουν όσο το δυνατόν περισσότερο ευτυχισμένοι.

Γενικά, αν και η νόσος του Αλτσχάιμερ μπορεί να προκαλέσει μη αναστρέψιμες επιπτώσεις στη μνήμη και τις γνωστικές ικανότητες, θα πρέπει να διατηρήσουμε μια αισιόδοξη στάση και να προσπαθήσουμε να επιβραδύνουμε την εξέλιξη της νόσου μέσω θεραπευτικών και προληπτικών μέτρων. Ταυτόχρονα, θα πρέπει επίσης να παρέχουμε περισσότερη βοήθεια και υποστήριξη σε όσους φροντίζουν ασθενείς με νόσο Αλτσχάιμερ και από κοινού να δημιουργήσουμε μια πιο ζεστή και διαδραστική κοινότητα. Μπορεί να φανεί ότι πρέπει να βελτιώσουμε τη μνήμη. Το Cistanche μπορεί να βελτιώσει σημαντικά τη μνήμη επειδή είναι ένα παραδοσιακό κινέζικο φαρμακευτικό υλικό με πολλά μοναδικά αποτελέσματα, ένα από τα οποία είναι η βελτίωση της μνήμης. Η επίδραση του Cistanche προέρχεται από τα διάφορα ενεργά συστατικά που περιέχει, όπως ταννικό οξύ, πολυσακχαρίτες, φλαβονοειδή γλυκοσίδες κ.λπ. Αυτά τα συστατικά μπορούν να προάγουν την υγεία του εγκεφάλου με πολλούς τρόπους.

Κάντε κλικ στο Μάθετε 10 τρόπους για να βελτιώσετε τη μνήμη

Το Top-down Proteomics (TDP) ξεπερνά αυτόν τον περιορισμό. Ωστόσο, τυπικά περιορίζεται στην παρατήρηση μόνο των πιο άφθονων πρωτεομορφών σχετικά μικρού μεγέθους.

Ως εκ τούτου, οι τεχνικές κλασματοποίησης χρησιμοποιούνται συνήθως για τη μείωση της πολυπλοκότητας του δείγματος. Εδώ, διερευνούμε την κλασμάτωση φάσης αερίου μέσω φασματοσκοπίας ασύμμετρης κυματομορφής ιόντων κινητικότητας υψηλού πεδίου (FAIMS) εντός TDP.

Χρησιμοποιώντας ένα δείγμα υψηλής πολυπλοκότητας που προέρχεται από τον εγκεφαλικό ιστό της νόσου του Alzheimer (AD), περιγράφουμε πώς η προσθήκη FAIMS στο TDP μπορεί να βελτιώσει δραστικά το βάθος της κάλυψης πρωτεώματος.

Για παράδειγμα, η εφαρμογή του FAIMS με τάση εξωτερικής αντιστάθμισης (CV) στα −50, −40 και −30 CV θα μπορούσε να υπερδιπλασιάσει τον μέσο αριθμό μη περιττών πρωτεομορφών, γονιδίων και κάλυψης αλληλουχίας πρωτεώματος σε σύγκριση με χωρίςFAIMS.

Βρήκαμε επίσης ότι το FAIMS μπορεί να επηρεάσει τη μετάδοση των πρωτεομορφών και των φακέλων φορτίσεώς τους με βάση το μέγεθός τους. Είναι σημαντικό ότι το FAIMS επέτρεψε την ταυτοποίηση ανέπαφων πρωτεομορφών αμυλοειδούς βήτα (A ), συμπεριλαμβανομένης της επιρρεπούς σε συσσωμάτωση παραλλαγής A 1–42 η οποία συνδέεται στενά με την AD.

Τα ανεπεξέργαστα δεδομένα και τα σχετικά αρχεία έχουν κατατεθεί στην Κοινοπραξία ProteomeXchange μέσω του αποθετηρίου δεδομένων MassIVE με αναγνωριστικό συνόλου δεδομένων PXD023607.

ΕΙΣΑΓΩΓΗ

Τις τελευταίες 2 δεκαετίες, η συχνότητα των νευροεκφυλιστικών ασθενειών έχει υπερδιπλασιαστεί παγκοσμίως, με τη νόσο του Αλτσχάιμερ (AD) ως την πιο διαδεδομένη μορφή. 2-5 συνδέονται στενά με την AD.

Ως εκ τούτου, ο λεπτομερής πρωτεοχαρακτηρισμός της AD έχει ιδιαίτερη σημασία.6,7 Η φασματομετρία μάζας έχει παίξει κεντρικό ρόλο σε αυτές τις έρευνες,8 κυρίως με προσεγγίσεις από κάτω προς τα πάνω.9–16

Ωστόσο, η πέψη πρωτεάσης που απαιτείται για τις αναλύσεις από κάτω προς τα πάνω εμποδίζει τη σύλληψη της πλήρους κατάστασης μιας πρωτεΐνης, η οποία μπορεί να ποικίλλει λόγω γενετικών αλληλόμορφων, εναλλακτικών ματιών, πρωτεολυτικής επεξεργασίας και μετα-μεταφραστικών τροποποιήσεων (αναφέρονται ως «πρωτεομορφές»).17– 20

Εφόσον οι πρωτεομικές προσεγγίσεις top-down (TDP) αναλύουν πρωτεΐνες σε άθικτη κατάσταση, η πιθανότητα σύλληψης πρωτεομορφών που σχετίζονται με ορισμένες παθολογίες είναι μεγαλύτερη και επιτρέπει μια ισχυρότερη, πιο άμεση σύνδεση μεταξύ γονότυπου και φαινοτύπου.20–22

Για παράδειγμα, το TDP είναι ιδιαίτερα κατάλληλο για τη σύλληψη ενδογενών πρωτεολυτικών θραυσμάτων που προέρχονται από πρωτεΐνες όπως το tau, οι οποίες έχουν συνδεθεί με την παθολογία του Alzheimer.23–26 Αρκετές προηγούμενες εφαρμογές TDP έχουν δείξει πολλά υποσχόμενα στην αποκάλυψη περιφερειακής ετερογένειας πρωτεολυτικού εγκεφάλου και νευρωνικών αλλαγών σε απόκριση σε διάφορα ερεθίσματα .27–30

Ωστόσο, η TDP σύνθετων δειγμάτων απαιτεί τυπικά τεχνικές κλασμάτωσης εκτός σύνδεσης για τη μείωση της πολυπλοκότητας του δείγματος, καθώς το ανθρώπινο πρωτέωμα εκτείνεται σε αρκετές τάξεις μεγέθους σε μέγεθος και αφθονία, και οι πρωτεΐνες γενικά δεν αναλύονται καλά με υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης αντίστροφης φάσης (LC).31

Αυτή η κλασμάτωση εκτός σύνδεσης μπορεί να επιτευχθεί με ηλεκτροφόρηση παγίδευσης υγρού κλάσματος εκλουσμένου με γέλη, χρωματογραφία αποκλεισμού μεγέθους, χρωματογραφία ανταλλαγής ιόντων ή καθαρισμό συγγένειας, για να αναφέρουμε μερικά.22,32-35

Δυστυχώς, η κλασμάτωση εκτός σύνδεσης τυπικά μειώνει την απόδοση και την απόδοση απαιτώντας εκτεταμένο χειρισμό δείγματος.36 Ο διαχωρισμός κινητικότητας ιόντων αέριας φάσης είναι μια ελκυστική εναλλακτική κλασματοποίησης που μπορεί να εισαχθεί μεταξύ των διαστάσεων LC και MS χωρίς να απαιτούνται πρόσθετα βήματα χειρισμού δείγματος.

Η φασματομετρία κινητικότητας ιόντων ασύμμετρης κυματομορφής υψηλού πεδίου (FAIMS) είναι ιδιαίτερα κατάλληλη για αυτήν την εργασία με την πρόσφατη εισαγωγή της συσκευής FAIMS Pro, της οποίας ο αρθρωτός σχεδιασμός επιτρέπει την εύκολη ενσωμάτωση της κινητικότητας ιόντων σε πολλά τρέχοντα όργανα Orbitrap.37

Το FAIMS, που αναφέρεται επίσης ως φασματομετρία διαφορικής κινητικότητας, διαχωρίζει ιόντα σε ένα φέρον αέριο με βάση συνδυασμούς παραγόντων όπως το μέγεθος, το φορτίο ή το σχήμα μέσω της εισαγωγής μιας ασύμμετρης κυματομορφής με υψηλά και χαμηλά ηλεκτρικά πεδία.38 Για να αποτρέψει τη σύγκρουση των ιόντων με το ηλεκτρόδιο, μια απόκλιση στη διαδρομή του ιόντος εισάγεται μέσω της εφαρμογής μιας τάσης αντιστάθμισης DC (CV),39 που επιτρέπει την επιλεκτική μετάδοση αυτού του ιόντος.38

Η εφαρμογή του FAIMS στην ανάλυση ανέπαφων πρωτεϊνών έχει περιοριστεί σε μεγάλο βαθμό στον διαχωρισμό διαμορφωτών μεμονωμένων πρωτεϊνών ή μικρών συνδυασμών πρωτεϊνών·40–45

Ωστόσο, το FAIMS έχει πρόσφατα εφαρμοστεί σε άθικτες και φυσικές αναλύσεις πρωτεϊνών χρησιμοποιώντας ανάλυση επιφάνειας υγρής εκχύλισης.46–50Εδώ, εφαρμόζουμε την ανάλυση FAIMS-TDP σε ένα δείγμα ολόκληρου ιστού από τον έσω μετωπιαίο φλοιό (MFC) ενός ασθενούς με Alzheimer.

Η σάρωση σε ένα εύρος CV από -50 έως -20 CV με εξωτερικό βήμα μας επέτρεψε να προσδιορίσουμε πώς η διαμόρφωση του FAIMS CV επηρεάζει τα χαρακτηριστικά των ιόντων που μεταδίδονται μέσω της κυλινδρικής μονάδας FAIMS και πώς αυτή η σχέση μπορεί να αξιοποιηθεί για τη στόχευση πρωτεομορφών με βάση το μέγεθος.

Το FAIMS-TDP υπερδιπλασίασε τις ταυτοποιήσεις πρωτεομορφών σε ένα μόνο βιογραφικό σημείωμα σε σύγκριση με χωρίς FAIMS και επέτρεψε τη βαθύτερη εξέταση πρωτεομορφών που σχετίζονται με νευροεκφυλιστικές ασθένειες, συμπεριλαμβανομένων των -, -, και -συνουκλεϊνών, PARK7, ισομορφών ματίσματος ταυ και πολλών ανέπαφων πρωτεομορφών Α.

Συνολικά, αυτή η εργασία περιγράφει πώς μπορούν να επιτευχθούν μεγαλύτερες ταυτοποιήσεις πρωτεομορφών και πρωτεοκάλυψης αναπαραγώγιμα μέσω κλασματοποίησης αέριας φάσης με FAIMS σε TDP.

ΜΕΘΟΔΟΙ

Προετοιμασία δείγματος

Το δείγμα MFC ελήφθη από το Κέντρο Νόσων Alzheimer του Πανεπιστημίου Rush. Οι συμμετέχοντες ήταν ηλικιωμένα άτομα με βάση την κλινική που εγγράφηκαν με παράπονα μνήμης και/και άνοια από το 1992 έως το 2005.

Αξιολογήθηκαν στο Rush Memory Clinic για πιθανή άνοια και συμφώνησαν στη δωρεά εγκεφάλου ως μέρος του κλινικού πυρήνα του Κέντρου για τη νόσο του Rush Alzheimer. Η μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Θεσμικής Αναθεώρησης του Ιατρικού Κέντρου του Πανεπιστημίου TheRush.

Μετά τον θάνατο, ο πλησιέστερος συγγενής παρείχε τη συγκατάθεσή του για αυτοψία. Η συνολική γνωστική διαγνωστική κατηγορία του ασθενούς ήταν η άνοια Alzheimer χωρίς άλλες αιτίες γνωστικής εξασθένησης,51 ενώ το διάστημα μετά το θάνατο ήταν 230 λεπτά.

Όλα τα βήματα χειρισμού δείγματος πραγματοποιήθηκαν με προφυλάξεις BSL{{{0}}. 33 mg ιστού MFC που αποθηκεύτηκε στους -80 βαθμούς μεταφέρθηκαν σε σωλήνες LoBind Eppendorf 1,5 mL (Eppendorf, Cat# 022431081) με την προσθήκη 0,5 mL ρυθμιστικού διαλύματος ομογενοποίησης που αποτελείται από 8 Μ ουρία, 10 mL διττανθρακικό μαμώνιο (ABCM), και διττανθρακικό μαμώνιο (ABCM), τρις(2-καρβοξυαιθυλ)φωσφίνη (TCEP) σε ρΗ 7,5.

Η ομογενοποίηση επιτεύχθηκε μέσω φυσικής διαταραχής με την εφαρμογή γουδοχέρι σφαιριδίων χειρός με κινητήρα για 30 δευτερόλεπτα (BioVortexer with SpiralPestle; Biospec 1083 και 1017), πριν από την προσθήκη 0,5 mL ρυθμιστικού διαλύματος ομογενοποίησης σε θερμοκρασία δωματίου.

Το δείγμα στη συνέχεια επωάστηκε στους 37 βαθμούς για 60 λεπτά στις 1200 rpm χρησιμοποιώντας ένα ThermoMixer για να επιτραπεί η εκχύλιση και η μετουσίωση των κυτταρικών πρωτεϊνών. Η σφαιροποίηση του αδιάλυτου στην ουρία υλικού επιτεύχθηκε με φυγοκέντρηση στους 18,000g για 20 λεπτά στους 22 βαθμούς και το προκύπτον υπερκείμενο προστέθηκε στη συνέχεια σε 3 mL ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης (WB, 8 Μ ουρία, 10 mM ABC, pH7 .5) μέσα σε ένα φίλτρο αποκοπής μοριακού βάρους (MWCO) 4 mL 100 kDa για την αφαίρεση μεγάλων ειδών MW.

Μετά από 1 ώρα φυγοκέντρησης στους 22 βαθμούς και 5000 g, ο όγκος του κατακρατήματος ήταν 200 μL και ο όγκος του διηθήματος ήταν 3,8 mL. 3,8 mL του διηθήματος μεταφέρθηκαν σε ένα φίλτρο MWCO 3 kDa για την απομάκρυνση μικρομοριακών μολυντών και πεπτιδίων χαμηλού MW.

Το φίλτρο MWCO 3 kDa φυγοκεντρήθηκε στους 22 βαθμούς και 7300 g για 1 ώρα, δίνοντας όγκο συγκρατήσεως 200 μL. 200μL κατακράτημα από το φίλτρο MWCO 100 kDa πλύθηκαν για άλλη μια φορά αραιώνοντάς το στα 4 mL με WB και φιλτράροντάς το ξανά μέσω του ίδιου φίλτρου.

Αυτό το flow-through προστέθηκε στο ίδιο φίλτρο MWCO 3 kDa όπως αναφέρθηκε παραπάνω και συμπυκνώθηκε άλλη μια φορά.

Το τελικό 200 μL κατακρατήματος από την πλύση φίλτρου 3 kDa MWCO μεταφέρθηκε σε σωληνάριο LoBindEppendorf 1,5 mL. Για να οξινιστεί το δείγμα, προστέθηκαν 10 μL μυρμηκικού οξέος 10% (FA), με αποτέλεσμα συγκέντρωση FA στο τελικό δείγμα 0,5%.

Το δείγμα φυγοκεντρήθηκε στα 18,000g για 15 λεπτά για να απομακρυνθεί το κατακρημνισμένο υλικό πριν μετρηθεί η συγκέντρωση πρωτεΐνης χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία δικινχονικού οξέος (BCA).

Πρότυπα αλβουμίνης ορού βοοειδών παρασκευάστηκαν σε 8 Μ ουρία, 10 mM ABC και0,5% FA για να ληφθούν υπόψη τυχόν πιθανές συνεισφορές ρυθμιστικού διαλύματος στον προσδιορισμό BCA. Η συγκέντρωση πρωτεΐνης με τη δοκιμασία BCA προσδιορίστηκε ότι είναι 1,1 mg/mL, που αντιστοιχεί στην τελική απόδοση 0.22 mg ολικής ανακτημένης πρωτεΐνης στο δείγμα ~200 μL. Το δείγμα ήταν αραιώθηκε σε 0,5 mg/mL με WB που περιέχει 0,5% FA και αποθηκεύτηκε στους -80 βαθμούς μέχρι την ανάλυση LC-MS.

Θα πρέπει να σημειώσουμε ότι τα αρχικά πειράματα (δεδομένα μη δημοσιευμένα) χρησιμοποιώντας ένα παραδοσιακό κοκτέιλ αναστολέα πρωτεάσης/φωσφατάσης εντός του ρυθμιστικού διαλύματος ομογενοποίησης οδήγησαν σε παραπλανητικά αποτελέσματα BCAassay και LC-MS λόγω της διατήρησης πολλών συστατικών κοκτέιλ από το φίλτρο 3KMWCO.

Επιπλέον, πολλοί από τους αναστολείς φωσφατάσης και πρωτεάσης που χρησιμοποιούνται συνήθως είναι χημικά ασυμβίβαστοι με αναγωγικούς παράγοντες όπως το TCEP. Λαμβάνοντας υπόψη αυτές τις ασυμβατότητες και ότι οι έντονα μετουσιωτικές συνθήκες των 8 M ουρίας με 10 mM TCEP αναμένεται να αδρανοποιήσουν τις περισσότερες πρωτεάσες, πιστεύαμε ότι η πρωτεολυτική αποικοδόμηση θα εξακολουθούσε να ελαχιστοποιείται υπό αυτές τις συνθήκες.

Αναλύσεις LC-MS/MS και ρυθμίσεις FAIMS

Τα δείγματα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας σύστημα Waters NanoACQUITY UPLC με κινητές φάσεις που αποτελούνται από {{0}},2% FA σε H2O (κινητή φάση Α) και 0,2% FA σε ACN (κινητή φάση Β).

Τόσο η προκολόνα παγίδευσης (100 μm id, μήκος 5 cm) όσο και η αναλυτική στήλη (75 μm id, μήκος 50 cm) ήταν ιλύς συσκευασμένοι με το υλικό συσκευασίας C2 (5 και 3 μm για παγίδα/αναλυτική, αντίστοιχα, 300 Å, τεχνολογία μεθόδων διαχωρισμού) . Τα δείγματα φορτώθηκαν σε 5 μLloop, που αντιστοιχεί σε 2,5 ug της ποσότητας του φορτωμένου υλικού, και εγχύθηκαν στη στήλη παγίδευσης με ισοκρατική ροή 5% b στα 3 μL/min για 20 λεπτά.

Ο διαχωρισμός πραγματοποιήθηκε με κλίση 5-50% b σε 180 λεπτά στα 300 nL/min. Για την ανάλυση πρωτεϊνών MS/MS, το σύστημα NanoACQUITY συζεύχθηκε με ένα φασματόμετρο μάζας Thermo Scientific Orbitrap Fusion LumosTribrid εξοπλισμένο με τη διεπαφή FAIMS Pro.

Οι παράμετροι πηγής περιελάμβαναν μια τάση ηλεκτροψεκασμού 2,2 kV, μια θερμοκρασία τριχοειδούς μεταφοράς 275 μοιρών και ένα πλάτος ραδιοσυχνότητας χοάνης ιόντων 60%. Το FAIMS ορίστηκε σε τυπική ανάλυση χωρίς συμπληρωματική ελεγχόμενη από τον χρήστη ροή φέροντος αερίου και τάση διασποράς −5 kV (ισοδύναμη με πεδίο διασποράς −33,3 kV/cm), 50 ενώ το CV ποικίλλει ανάλογα με το πείραμα (αναφέρεται ως "εξωτερικό βήμα ").

Το Fusion Lumos τέθηκε στη λειτουργία εφαρμογής "άθικτης πρωτεΐνης", η οποία μειώνει την πίεση του κυττάρου N2 με διαχωρισμό παγίδας C (HCD) υψηλότερης ενέργειας στα 2 mTorr και τα δεδομένα συλλέχθηκαν ως πλήρες προφίλ. Τα δεδομένα MS1 και MS2 αποκτήθηκαν σε ανάλυση 120k και 60k, μικροσαρώσεις 3 και 2, σε εύρος 500–2,{12}} m/z και 400–2,000 m/z και με Στόχοι AGC 5 × 106 και 5 × 105, αντίστοιχα.

Τα MS1 και MS2 αποκτήθηκαν επίσης με μέγιστο χρόνο ένεσης 400 ms. Οι ρυθμίσεις που εξαρτώνται από δεδομένα περιελάμβαναν μια επιλογή από τα κορυφαία 6 πιο έντονα ιόντα, εξαίρεση ιόντων χαμηλότερης από την κατάσταση φόρτισης5+, συμπερίληψη απροσδιόριστων καταστάσεων φόρτισης και δυναμική εξαίρεση μετά από μία παρατήρηση για 30 δευτερόλεπτα.

Τα ιόντα που επιλέχθηκαν για το MS2 απομονώθηκαν σε παράθυρο ±1,5 m/z και κατακερματίστηκαν μέσω διάστασης επαγόμενης από σύγκρουση (CID) με ενέργεια σύγκρουσης 35%. Χρησιμοποιήσαμε CID αντί για HCD λόγω της χαμηλότερης εξάρτησης της κανονικοποιημένης ενέργειας σύγκρουσης για την επίτευξη ερμηνεύσιμων φασμάτων πρωτεϊνικού κατακερματισμού, δίνοντας έτσι προτεραιότητα στο εύρος των παρατηρήσεών μας πρωτεομορφών έναντι της κάλυψης αλληλουχίας.52

Τα σύνολα δεδομένων για κάθε βιογραφικό σημείωμα της FAIMS συγκεντρώθηκαν εις τριπλούν. Όλα τα ακατέργαστα αρχεία έχουν κατατεθεί στο αποθετήριο δεδομένων MassIVE και μπορούν να προσπελαστούν μέσω της πρόσβασης MSV000086696 ή με το PXD023607 στο ProteomeXchange.

For more information:1950477648nn@gmail.com