Επιδράσεις του Cistanche Deserticola Deserticola και της Kaempferol στην ανάπτυξη των κοκκιωδών κυττάρων σε προσυσσωρευμένα ωοθυλάκια κοτόπουλου

Αφηρημένη:Για τη διερεύνηση των επιδράσεων του Cistanche deserticola και της Kaempferol στην ανάπτυξη των ωοθυλακίων κοτόπουλου, το πείραμα ανέλυσε τις επιδράσεις των διαφορετικών συγκεντρώσεων Cistanche deserticola και Kaempferol στη δραστηριότητα των προ-βαθμολογημένων κυττάρων κοκκιώδους κοτόπουλου με τη μέθοδο MTT και προσδιόρισε τη βέλτιστη συγκέντρωση. Η ποσοτική PCR φθορισμού σε πραγματικό χρόνο χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση των επιδράσεων του Cistanche deserticola και της Kaempferol στο πυρηνικό αντιγόνο των κυττάρων πολλαπλασιασμού (PCNA), στον υποδοχέα ορμόνης διέγερσης του ωοθυλακίου (FSHR) και στον υποδοχέα οιστρογόνου των προ-βαθμολογημένων κοκκιωδών κυττάρων κοτόπουλου (ER) επίδραση της έκφρασης του mRNA. Οι επιδράσεις του Cistanche deserticola και της kaempferol στην ανάπτυξη των ωοθυλακίων αναλύθηκαν με καλλιέργεια in vitro ωοθηκικού ιστού. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τόσο το Cistanche deserticola όσο και το Kaempferol σε συγκέντρωση 1 × Σε 10-4 mol/L , μπορεί να προάγει σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των κοκκιωδών κυττάρων, ενώ προάγει επίσης την έκφραση mRNA PCNA, FSHR και ER στα κοκκιώδη κύτταρα (P<0.01); Cistanche deserticola and Kaempferol significantly increased the number of follicles in ovarian tissue, and granulosa cells proliferated from monolayer to multilayer. Studies have shown that Cistanche deserticola and Kaempferol can promote the proliferation of aggregate granulosa cells, and promote FSHR and ER α MRNA expression promoting the development of pre-grade follicles towards grade follicles.

Λέξεις-κλειδιά: Cistanche deserticola; Kaempferol; Κοτόπουλο; Κοκκώδη κύτταρα πριν από τον βαθμό. Ωοθηκικός ιστός

Κινεζικό βότανο cistanche

Για εκμεταλλεύσεις ωοπαραγωγών ορνίθων μεγάλης κλίμακας, το επίπεδο του ρυθμού παραγωγής αυγών επηρεάζει τα οικονομικά οφέλη και η ανάπτυξη των ωοθυλακίων επηρεάζει άμεσα την παραγωγική απόδοση των ορνίθων ωοπαραγωγής. Τα ωοθυλάκια χωρίζονται σε τρία στάδια ανάλογα με τη λειτουργική τους κατάσταση: πρωτογενή ωοθυλάκια, δευτερογενή ωοθυλάκια και ώριμα ωοθυλάκια [1]. Κάθε μέρα, ένα ωοθυλάκιο επιλέγεται για να αναπτυχθεί μέχρι την ωρίμανση και το ωάριο αποβάλλεται στη σάλπιγγα, περνώντας από τη χοάνη, τη διεύρυνση, τον ισθμό, τη μήτρα και τον κόλπο, σχηματίζοντας μια δομή που μοιάζει με ωάριο [2-3]. Η έναρξη των πρωτόγονων ωοθυλακίων σχετίζεται με την ανάπτυξη θυλακικών κοκκιωδών κυττάρων. Η ωοθυλακιοτρόπος ορμόνη (FSH) συνδέεται με τον υποδοχέα της ωοθυλακιοτρόπου ορμόνης (FSHR) στα κοκκιώδη κύτταρα, προκαλώντας το σχηματισμό υποδοχέα ωχρινοτρόπου ορμόνης (LHR) και διεγείροντας τη σύνθεση στεροειδών ορμονών [4-6]. Η FSH και η ωχρινοτρόπος ορμόνη (LH) δρουν συνεργικά στα κοκκιώδη κύτταρα για την προώθηση της ανάπτυξης και ωρίμανσης των ωοθυλακίων, συμμετέχοντας στην επιλογή των κυρίαρχων ωοθυλακίων. Η έρευνα έχει βρει ότι αν και τα αρχέγονα ωοθυλάκια που δεν έχουν κοκκιώδη κύτταρα έχουν ενεργοποιηθεί, τελικά όλα αναπτύσσουν ατρησία [7]. Κατά την ανάπτυξη των ωοθυλακίων, τα οιστρογόνα μπορούν να προάγουν τον πολλαπλασιασμό των κοκκιωδών κυττάρων των ωοθηκών, ενώ συνεργάζονται με την FSH και την LH για να προωθήσουν τον πολλαπλασιασμό και τη διαφοροποίηση των κοκκιωδών κυττάρων των ωοθηκών. Όταν η περιεκτικότητα των οιστρογόνων στο πλάσμα αυξάνεται, θα τροφοδοτείται αρνητικά στον υποθάλαμο μέσω του περιφερειακού συστήματος κυκλοφορίας, αναστέλλοντας έτσι την έκκριση της ορμόνης απελευθέρωσης γοναδοτροπίνης (GnRH) από τον υποθάλαμο. Η GnRH μπορεί να διεγείρει την αδενοϋπόφυση να συνθέσει και να εκκρίνει FSH και LH για να προωθήσει την ανάπτυξη των ωοθυλακίων. Όταν η έκκριση GnRH είναι χαμηλή, μπορεί να αναστείλει την έκκριση FSH και LH, οδηγώντας τελικά στην αναστολή της ανάπτυξης των ωοθυλακίων [8-9].

Προηγούμενες μελέτες διαπίστωσαν ότι το Cistanche deserticola και το Cuscuta chinensis είχαν καλή επίδραση επιδιόρθωσης σε ατροφικούς ωοθηκούς και κατεστραμμένους ωοθηκούς μετά την ανάρρωση και θα μπορούσαν να βελτιώσουν το ποσοστό ωοπαραγωγής των ορνίθων χαμηλής ωοπαραγωγής [10]. Στην κτηνοτροφική παραγωγή, η εφαρμογή φλαβονοειδών μπορεί να βελτιώσει σημαντικά την απόδοση της ζωικής παραγωγής, να βελτιώσει την αντοχή στις ασθένειες των ζώων και να βελτιώσει τη λειτουργία του ανοσοποιητικού.

Κινεζικά φάρμακα όπως το ginseng, το Cistanche deserticola και το astragalus

Τα συνολικά φλαβονοειδή του Cistanche deserticola μπορούν να προάγουν σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων κοκκιώδους ωοθυλακίου κοτόπουλου in vitro, το επίπεδο μεταγραφής της στεροειδογόνου ταχείας ρυθμιστικής πρωτεΐνης (StAR), του ενζύμου διάσπασης πλευρικής αλυσίδας χοληστερόλης (CYP11A1) mRNA έκκρισης και της προγεστερόνης. Το αντιπροσωπευτικό συστατικό των συνολικών φλαβονοειδών του Cistanche deserticola είναι το Cistanche deserticola. Το μοριακό του βάρος είναι μικρό και έχει το πλεονέκτημα ότι περνά μέσα από τον αιματοεγκεφαλικό φραγμό. Ταυτόχρονα, έχει αντιφλεγμονώδη, αντικαρκινικά και οιστρογόνα αποτελέσματα [11]. Το κύριο χημικό συστατικό του Cuscuta chinensis είναι τα συνολικά φλαβονοειδή του Cuscuta chinensis. Επί του παρόντος, μια ποικιλία φλαβονοειδών έχει απομονωθεί από το Cuscuta chinensis, κυρίως η Κερσετίνη και η Καεμπφερόλη, τα οποία έχουν υψηλή αντιοξειδωτική δράση.

Η εφαρμογή του εκχυλίσματος φλαβονοειδών σπόρων μαύρης σε θηλυκούς αρουραίους παρουσιάζει οιστρογονική δράση, η οποία έχει κάποια επίδραση στην προώθηση της ενίσχυσης της λειτουργίας των υποδοχέων hCG/LH των ωοθηκών. Έχει μια επίδραση γοναδοτροπίνης σε νεαρά ποντίκια και μπορεί να προωθήσει την ανάπτυξη του αναπαραγωγικού τους συστήματος [12-14].

Σε αυτό το πείραμα, επιλέξαμε κύτταρα κοκκιώδους ωοθυλακίου κοτόπουλου και διερευνήσαμε την προαγωγική επίδραση του Cistanche deserticola και της Kaempferol στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων θυλακιώδους κοκκιώδους κοτόπουλου και της σχετικής έκφρασης υποδοχέα μέσω της επίδρασης των Cistanche deserticola και Kaempferol στην ανάπτυξη των ωοθυλακίων κοτόπουλου. να παρέχει μια θεωρητική αναφορά για την έρευνα και την ανάπτυξη ασφαλών, αποτελεσματικών και χωρίς υπολείμματα προσθέτων ζωοτροφών για τη βελτίωση της απόδοσης παραγωγής των στρωμάτων.

Επιδράσεις του Cistanche-Tonifying νεφρών

1 Υλικό και Μέθοδοι

1.1 Υλικά δοκιμής

Το Cistanche deserticola (καθαρότητα μεγαλύτερη ή ίση με 98 τοις εκατό) αγοράστηκε από τη Shanghai Jizhi Biochemical Technology Co., Ltd. Η Kaempferol (καθαρότητα μεγαλύτερη ή ίση με 98 τοις εκατό) αγοράστηκε από τη Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.

1.2 Κύρια αντιδραστήρια και όργανα

Κύρια αντιδραστήρια: Η κολλαγενάση τύπου II και το DMEM αγοράστηκαν από την Thermo Fisher Technology (China) Co., Ltd. Το DMSO αγοράστηκε από την Beijing Solebao Technology Co., Ltd. Το κιτ M5 Super qPCR RT με κιτ αντίστροφης μεταγραφής αφαίρεσης gDNA αγοράστηκε από την Beijing Jumei Biotechnology Co., Ltd. Κύριο όργανο: BCM-1300Ένας πάγκος καθαρισμού που αγοράστηκε από την Shanghai Boxun Industrial Co., Ltd. Medical Equipment Factory. Η φυγόκεντρος κατάψυξης υψηλής ταχύτητας AXTGL20M αγοράστηκε από την Hunan Hexi Instrument Equipment Co., Ltd. Ο θερμοκοιτίδα σταθερής θερμοκρασίας Heracell 150i GP αγοράστηκε από την Bingshan Songyang Biotechnology (Dalian) Co., Ltd. LightCycle ® Το όργανο ποσοτικής PCR φθορισμού τύπου 96 και το όργανο επισήμανσης ενζύμου τύπου DR-200BS αγοράστηκαν και τα δύο από την Bole Life Medical Products (Shanghai) Co., Ltd.

1.3 Απομόνωση και εξαγωγή κοκκιωδών κυττάρων από ωοθυλάκια πριν από την ταξινόμηση κοτόπουλου

Επιλέχθηκαν 30 150-ημέρες υγιείς καφέ ωοτόκες όρνιθες Hailan (που παρέχονται από την Hebei Baoding Dingnong Company), θανατώθηκαν με αιμορραγία της καρωτίδας και οι ωοθήκες τους αφαιρέθηκαν με άσηπτο τρόπο (οι in vivo ερευνητικές δοκιμές σε ζώα ήταν σύμφωνα με τις οδηγίες που εγκρίθηκαν από η Επιτροπή Δεοντολογίας των Ζώων του Γεωπονικού Πανεπιστημίου Hebei). Τα προβαθμισμένα ωοθυλάκια μπορούν να χωριστούν σε μικρά λευκά ωοθυλάκια (SWF,<2 mm), large white follicles (LWF, 3-5 mm), small yellow follicles (SYF, 6-8 mm), and large yellow follicles (LYF, 9-12 mm). Collect granulosa cells from pre-graded follicles with a diameter of 6-8 mm and prior stages. The grading of follicles (see Figure 1). 

Σημείωση: Το SWF αντιπροσωπεύει μικρά λευκά ωοθυλάκια, το LWF αντιπροσωπεύει μεγάλα λευκά ωοθυλάκια, το SYF αντιπροσωπεύει μικρά κίτρινα ωοθυλάκια, το LYF αντιπροσωπεύει μεγάλα κίτρινα ωοθυλάκια και τα F1, F2, F3, F4 και F5 αντιπροσωπεύουν πέντε ώριμα ωοθυλάκια.

Τα συλλεχθέντα ωοθυλάκια πλύθηκαν τρεις φορές με 75 τοις εκατό αλκοόλη και τελικά πλύθηκαν μία φορά με PBS. Η αποστειρωμένη βελόνα χρησιμοποιήθηκε για την απελευθέρωση του υγρού κρόκου στο PBS που περιέχει 3 τοις εκατό πενικιλλίνη και στρεπτομυκίνη, για την αφαίρεση της στιβάδας των κυττάρων μεμβράνης και για τον διαχωρισμό της κοκκώδους κυτταρικής στιβάδας. Ελήφθησαν 15 mL σωλήνα EP για να προστεθεί το κομμένο στρώμα κοκκιώδους κυττάρου των ωοθυλακίων και 4 mL κολλαγενάσης τύπου II 0.1 τοις εκατό προστέθηκαν. Ανακινήθηκε σε σέικερ στους 37 βαθμούς για 3 λεπτά. Αφού ολοκληρωθεί η ταλάντωση, προσθέστε ίση ποσότητα διαλύματος καλλιέργειας που περιέχει 0,5 τοις εκατό FBS για να τερματιστεί η πέψη. Φιλτράρετε με κόσκινο 200 mesh και σήτα 400 mesh, αντίστοιχα. Φυγοκεντρήστε το διήθημα σε θερμοκρασία δωματίου με 1200 r/min για 5 λεπτά και επαναλάβετε τη φυγοκέντρηση δύο φορές. Απορρίψτε το υπερκείμενο, προσθέστε το μέσο καλλιέργειας, φυσήξτε και αναρροφήστε ομοιόμορφα και αραιώστε το κυτταρικό εναιώρημα σε 5 × 106 τεμάχια/mL και προστέθηκε ομοιόμορφα σε τρυβλίο Petri με διάμετρο 100 mm και καλλιεργήθηκε στους 37 βαθμούς και 5 τοις εκατό CO2 .

1.4 Επιδράσεις του Cistanche deserticola και της Kaempferol στη δραστηριότητα των κοκκιωδών κυττάρων

Τα κοκκώδη κύτταρα καλλιεργήθηκαν τακτικά σε ένα μέσο DMEM που περιείχε 10 τοις εκατό εμβρυϊκό βόειο ορό. Τα κύτταρα στη φάση της λογαριθμικής ανάπτυξης ελήφθησαν και υπέστησαν πέψη με 2,5 g/L θρυψίνης. Τα κύτταρα απλώθηκαν ομοιόμορφα σε πλάκες 96 φρεατίων. Κάθε πλάκα χωρίστηκε σε 10 ομάδες με 6 επαναλαμβανόμενες οπές σε κάθε ομάδα. Προσθέστε 200 στις οπές γύρω από την πλάκα καλλιέργειας μ L PBS χρησιμεύει ως ενυδατικός πόρος. Η συγκέντρωση του Cistanche deserticola έχει οριστεί σε 1 × 10-4 mol/L, 1 × 10-5 mol/L, 1 × {10-6 mol/L, 1 × 10-7 mol/ L, 5 × 10-8 mol/L, 1 × 10-8 mol/L, 5 × 10-9 mol/L, 1 × 10-9 mol/L, 1 × {{ 24}} mol/L. Ορίστε μια κενή ομάδα ελέγχου. Μετά από συγκαλλιέργεια κυττάρων με Cistanche deserticola για 24 ώρες, προσθέστε 10 τοις εκατό σε κάθε φρεάτιο μ 5 mg/mL MTT L. Μετά από περαιτέρω καλλιέργεια για 4 ώρες, προσθέστε 150 σε κάθε φρεάτιο μ L DMSO και ταλαντώστε για 3 λεπτά σε αναδευτήρας σταθερής θερμοκρασίας στους 37 βαθμούς. Μετρήστε την απορρόφηση στα 450 nm. Το πείραμα επαναλήφθηκε τρεις φορές και η διαδικασία διαλογής της βέλτιστης ασφαλούς δόσης Kaempferol για κοκκιώδη κύτταρα ήταν η ίδια όπως παραπάνω.

Ερημοζώντανο cistanche-Τονωτικό νεφρό

1.5 Επιδράσεις του Cistanche deserticola και της Kaempferol στον πολλαπλασιασμό του πυρηνικού αντιγόνου των κυττάρων, στον υποδοχέα ορμονικής διέγερσης των ωοθυλακίων και στον υποδοχέα οιστρογόνου στα κοκκιώδη κύτταρα

Η επίδραση της έκφρασης mRNA παρατηρήθηκε σε κοκκιώδη κύτταρα της λογαριθμικής φάσης ανάπτυξης, εμβολιασμένα σε τρία τρυβλία καλλιέργειας με κυτταρική πυκνότητα 5 × 106 τεμάχια/mL. Τα τρυβλία Petri χωρίστηκαν σε κενή ομάδα ελέγχου. Ομάδα Cistanche deserticola, δηλαδή μετά από 24 ώρες κυτταροκαλλιέργειας, προσθέστε 1 × 10-4 mol/L Cistanche deserticola. Στην ομάδα Kaempferol, προσθέστε 1 μετά από 24 ώρες κυτταροκαλλιέργειας × 10-4 mol/L Kaempferol. Ομάδα οιστρογόνου, προσθέστε 5 μετά από 24 ώρες κυτταροκαλλιέργειας × Επεξεργαστείτε με 10 έως 8 mol/L οιστρογόνου. Μετά από 24 ώρες καλλιέργειας, απορρίψτε όλο το μέσο καλλιέργειας, ξεπλύνετε με PBS, προσθέστε 1 mL παγκρεατικού ενζύμου για πέψη και μετά από λίγα λεπτά, προσθέστε ίση ποσότητα μέσου καλλιέργειας για να τερματιστεί η πέψη. Φυγοκεντρήστε το κυτταρικό εναιώρημα με ταχύτητα 1000 r/min για 5 λεπτά, απορρίψτε το υπερκείμενο και προσθέστε το αντιδραστήριο Trizol σε παγοθήκη. Στη συνέχεια, προστέθηκε χλωροφόρμιο και ανακινήθηκε έντονα, τοποθετήθηκε σε παγοθήκη για περίπου 3 λεπτά, και φυγοκεντρήθηκε στους 4 βαθμούς στις 12000 r/min για 10 λεπτά. Μεταφέρετε το RNA σε ένα νέο σωληνάριο EP, προσθέστε ίσο όγκο ισοπροπανόλης, ανακατέψτε απαλά καλά και αφήστε το να σταθεί σε παγοθήκη για 10 λεπτά. Μετά από φυγοκέντρηση στους 4 βαθμούς για 10 λεπτά σε 12 000 r/min, απορρίψτε το υπερκείμενο και πλύνετε το ίζημα με αιθανόλη 80 τοις εκατό. Φυγοκεντρήστε στα 10 000 r/min και στους 4 βαθμούς για 5 λεπτά, απορρίψτε την αιθανόλη, στεγνώστε στον αέρα για 5-10 λεπτά και προσθέστε νερό DEPC για εμφύσηση και αναρρόφηση για να διαλυθεί το ίζημα. Μετρήστε τη συγκέντρωση RNA χρησιμοποιώντας ένα φασματοφωτόμετρο UV.

Χρησιμοποιήστε το κιτ M5 Super plus qPCR RT με κιτ αφαίρεσης gDNA για αντίστροφη μεταγραφή για λήψη cDNA. Ανίχνευση πολλαπλασιαζόμενου πυρηνικού αντιγόνου κυττάρων, υποδοχέα θυλακιοτρόπου ορμόνης και υποδοχέα οιστρογόνου σε κοκκιώδη κύτταρα με σχετικό επίπεδο μεταγραφής φθορισμού ποσοτικού PCR MRNA σε πραγματικό χρόνο. Οι πληροφορίες εκκινητών παρουσιάζονται στον Πίνακα 1 και οι εκκινητές σχεδιάστηκαν και συντέθηκαν από την Shenggong Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd. Εσωτερική ομάδα αναφοράς - Ακτίνη, το σχετικό επίπεδο μεταγραφής του mRNA για κάθε γονίδιο προσδιορίζεται από 2- ΔΔ Υπολογίστηκε με Ct.

Πίνακας 1 Πληροφορίες Primer

1.6 Καλλιέργεια in vitro και μορφολογική παρατήρηση ιστού ωοθηκών

Πάρτε τον ωοθηκικό ιστό 30 40-καστανών ωοπαραγωγών ορνίθων Hailan μιας ημέρας και ξεπλύντε τον τρεις φορές με 75 τοις εκατό αλκοόλ. Κόψτε τον ωοθηκικό ιστό σε μικρά κομμάτια 1-2 mm3 σε ένα εξαιρετικά καθαρό τραπέζι, με ρυθμό 500 ανά φρεάτιο μ L που προστίθεται στο DMEM και το μέσο ITS (10 μ G/mL ινσουλίνη, 5 μ G/mL τρανσφερρίνη και 30 nmol/L σεληνικό νάτριο). Μετά από 72 ώρες καλλιέργειας στη θερμοκοιτίδα, θεραπεύστε ανάλογα με την κατάσταση ομαδοποίησης. Ο ωοθηκικός ιστός χωρίστηκε σε τυφλή ομάδα ελέγχου, ομάδα Cistanche deserticola, ομάδα Kaempferol και ομάδα οιστρογόνων. Μετά από 72 ώρες καλλιέργειας, ο ιστός των ωοθηκών σταθεροποιήθηκε με 4 τοις εκατό φορμαλδεΰδη και τα τμήματα ιστού προετοιμάστηκαν τακτικά για παρατήρηση κάτω από ένα οπτικό μικροσκόπιο.

1.7 Στατιστική και ανάλυση

Τα δεδομένα qPCR αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό Biorad CFX Manager 2.0 και το λογισμικό Microsoft Excel και το λογισμικό SPSS 21.0 χρησιμοποιήθηκε για μονόδρομη ANOVA. Η μέθοδος του Duncan χρησιμοποιήθηκε για πολλαπλές συγκρίσεις. Τα αποτελέσματα αντιπροσωπεύονται ως "μέση ± τυπική απόκλιση" και σχεδιάζονται με τη χρήση του λογισμικού GraphPad Prism 5.0. Π<0.05 indicates significant differences, while P<0.01 indicates extremely significant differences.

2 Αποτελέσματα και Ανάλυση

2.1 Επιδράσεις του Cistanche deserticola και της Kaempferol στον πολλαπλασιασμό των κοκκιωδών κυττάρων

Μπορεί να φανεί από τα Σχήματα 2 και 3 ότι τόσο το Cistanche deserticola όσο και η Kaempferol μπορούν να προάγουν τον πολλαπλασιασμό των κοκκιωδών κυττάρων. Σε 1 × 10-4~1 × Μέσα σε μια διαβάθμιση συγκέντρωσης 10-10 mol/L, σε σύγκριση με την τυφλή ομάδα ελέγχου, η συγκέντρωση είναι 1 × 10-4 mol/L, 1 × {{ 9}} mol/L, 1 × 10-6 mol/L, 1 × Σε 10-7 mol/L, η διαφορά ήταν εξαιρετικά σημαντική (Ρ<0.01), with a concentration of 5 × The difference was significant at 10-8 mol/L (P<0.05).

Σημείωση: Το "* *" υποδεικνύει μια σημαντική διαφορά σε σύγκριση με την κενή ομάδα ελέγχου (Σ<0.01), and "*" indicates a significant difference compared to the blank control group (P<0.05), the same below.

Εικ. 2 Τιμές απορρόφησης κοκκιωδών κυττάρων που εκτέθηκαν σε Cistanche deserticola σε διαφορετικές συγκεντρώσεις για 24 ώρες

Εικ. 3 Τιμές απορρόφησης κοκκιωδών κυττάρων που εκτέθηκαν σε Kaempferol σε διαφορετικές συγκεντρώσεις για 24 ώρες

2.2 Επιδράσεις του Cistanche deserticola και της Kaempferol στο πολλαπλασιαζόμενο πυρηνικό αντιγόνο των κυττάρων, στον υποδοχέα ορμόνης διέγερσης του ωοθυλακίου και στον υποδοχέα οιστρογόνου των προκοκκιωδών κυττάρων κοτόπουλου Η επίδραση του mRNA στα σχετικά επίπεδα μεταγραφής

Μπορεί να φανεί από τον Πίνακα 2 ότι οι ομάδες Cistanche deserticola και Kaempferol έχουν επιδράσεις στον πολλαπλασιασμό του πυρηνικού αντιγόνου των κυττάρων, στον υποδοχέα ορμόνης διέγερσης του ωοθυλακίου και στον υποδοχέα οιστρογόνου των προ-βαθμολογημένων κοκκιωδών κυττάρων κοτόπουλου. Το σχετικό μεταγραφικό επίπεδο του mRNA ήταν σημαντικά υψηλότερο από αυτό του τυφλού ομάδα ελέγχου και ομάδα οιστρογόνων (P<0.05 or P<0.01), and the follicle-stimulating hormone receptor and estrogen receptor of chicken pre aggregate cells in the Kaempferol group α The transcription level of mRNA is the highest (P<0.01).

Πίνακας 2 Επιδράσεις του Cistanche deserticola και της Kaempferol στο πολλαπλασιαζόμενο πυρηνικό αντιγόνο κυττάρων, στον υποδοχέα ορμόνης διέγερσης του ωοθυλακίου και στον υποδοχέα οιστρογόνου των προκοκκιώδους κυττάρων κοτόπουλου Η επίδραση του mRNA στα σχετικά επίπεδα μεταγραφής

2.3 Ιστολογική παρατήρηση ωοθηκών

Μπορεί να φανεί από το Σχήμα 4 ότι σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, ο αριθμός των ωοθυλακίων στον ιστό των ωοθηκών που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με Cistanche deserticola και Kaempferol αυξήθηκε σημαντικά και τα κοκκιώδη κύτταρα πολλαπλασιάστηκαν από μονοστοιβάδα σε πολυστιβάδα. Σε σύγκριση με την ομάδα των οιστρογόνων, η ομάδα Cistanche deserticola και η ομάδα Kaempferol έχουν πιο εμφανή ικανότητα να προάγουν την ωρίμανση και ανάπτυξη ιστού των ωοθηκών και η ομάδα Cistanche deserticola και η ομάδα Kaempferol έχουν πιο εμφανή επίδραση από την ομάδα Kaempferol.

3 Συζήτηση

3.1 Επίδραση του Cistanche deserticola και της Kaempferol

Η όλη διαδικασία της ανάπτυξης των ωοθυλακίων συνοδεύεται από τον πολλαπλασιασμό των κοκκιωδών κυττάρων, τα οποία έχουν μεγάλη σημασία για την ανάπτυξη των ωοθυλακίων. Ξεκινούν την ανάπτυξη των πρωτόγονων ωοθυλακίων κατασκευάζοντας ευνοϊκά μοριακά μικροπεριβάλλοντα. Κατά την ανάπτυξη των ωοθυλακίων, η απόπτωση των κοκκιωδών κυττάρων παίζει σημαντικό ρόλο στη ρύθμιση της ανάπτυξης των ωοθυλακίων, της ωρίμανσης των ωαρίων και της έκκρισης οιστρογόνων [15-16]. Το Cistanche deserticola, ένα κινέζικο φυτικό φάρμακο, έχει μια επίδραση που μοιάζει με ορμόνη φύλου, η οποία μπορεί να προωθήσει την ανάπτυξη των ζωικών ωοθυλακίων και την παραγωγή σπέρματος, να προάγει την κανονική άφιξη του οίστρου, να βελτιώσει τη λειτουργία και τη δραστηριότητα των ωοθηκών και να βελτιώσει την αναπαραγωγική λειτουργία. Το Cuscuta chinensis, ως παραδοσιακό κινέζικο φάρμακο που τονώνει τα νεφρά, έχει αντιοξειδωτικές, αναπαραγωγικές και αντιγηραντικές επιδράσεις ως αποτελεσματικά συστατικά φλαβονοειδή. Μελέτες έχουν δείξει ότι μια ορισμένη δόση φλαβονοειδών από το Cuscuta chinensis έχει πολλαπλασιαστική επίδραση στα διάμεση κύτταρα των όρχεων ποντικού [17-18]. Σε αυτό το πείραμα, το Cistanche deserticola και το Kaempferol, ως τα κύρια συστατικά των κινεζικών παραδοσιακών φαρμάκων Cistanche deserticola και dodder, επιλέχθηκαν για να μελετήσουν τις επιδράσεις τους στην ικανότητα έκφρασης των κυττάρων θυλακιοειδούς κοκκιώδους κοτόπουλου και των σχετικών υποδοχέων τους και του ιστού των ωοθηκών, για να επιβεβαιώσουν τα αποτελέσματα Cistanche deserticola και Kaempferol για την ανάπτυξη του αναπαραγωγικού συστήματος των πουλερικών.

Επιδράσεις του Cistanche-Tonifying νεφρών

Κάντε κλικ εδώ για να δείτε τα προϊόντα Cistanche για νεφρική νόσο

【Ζητήστε περισσότερα】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

3.2 Πυρηνικό αντιγόνο πολλαπλασιαζόμενου κυττάρου, υποδοχέας ωοθυλακιοτρόπου ορμόνης και υποδοχέας οιστρογόνων Ο ρόλος του

Το PCNA είναι ένα πυρηνικό αντιγόνο πολλαπλασιαζόμενου κυττάρου, το οποίο παίζει σημαντικό ρόλο στην έναρξη του κυτταρικού πολλαπλασιασμού και είναι ένας καλός δείκτης του κυτταρικού πολλαπλασιασμού. Επομένως, η αύξηση του PCNA στα αποτελέσματα των δοκιμών επιβεβαίωσε ότι το Cistanche deserticola και η Kaempferol προάγουν τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό όταν δρουν στα κοκκιώδη κύτταρα. Η FSH είναι η κύρια ορμόνη που προάγει την ανάπτυξη των ωοθυλακίων [19] και η θέση έκφρασης του υποδοχέα της ωοθυλακιοτρόπου ορμόνης (FSHR) συγκεντρώνεται κυρίως στις ωοθήκες και στα ωοθυλάκια. Ο κύριος τρόπος με τον οποίο η FSH συμμετέχει στις αναπαραγωγικές δραστηριότητες των ορνίθων είναι η ρύθμιση της ανάπτυξης των ωοθυλακίων. Όταν η έκκριση της FSH αυξάνεται, μπορεί να προάγει την αύξηση της FSHR στα κοκκιώδη κύτταρα και ο συνδυασμός των δύο μπορεί να προκαλέσει τη σύνθεση της LHR ενεργοποιώντας την αρωματάση. Το κοτόπουλο μπορεί να προκαλέσει ωορρηξία υπό τη συνεργιστική επίδραση της FSH και της LH [20-22]. Πριν από την επιλογή του ωοθυλακίου, τα κοκκιώδη κύτταρα εκφράζουν μόνο βασικά επίπεδα FSHR, τα οποία χρησιμοποιούνται για τη λήψη σημάτων FSH και παράγουν χαμηλά επίπεδα κυκλικής φωσφορικής αδενοσίνης για τη διατήρηση της κυτταρικής δραστηριότητας. Όταν η έκφραση της FSHR ρυθμίζεται σημαντικά προς τα πάνω στα κοκκιώδη κύτταρα ενός ωοθυλακίου προ-βαθμού, υποδηλώνει ότι το ωοθυλάκιο θα επιλεγεί για να γίνει ωοθυλάκιο βαθμού [23-24]. Σε αυτή τη μελέτη, σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, η έκφραση του mRNA του FSHR στις ομάδες Cistanche deserticola και Kaempferol αυξήθηκε σημαντικά, υποδεικνύοντας ότι το Cistanche deserticola και το Kaempferol μπορούν να προάγουν τη μεταγραφή του mRNA του FSHR, να αυξήσουν την έκκριση του FSH και να προάγουν την επιλογή των ωοθυλακίων ως ωοθυλακίων βαθμού. Το Ε2 είναι ένα είδος στεροειδούς ορμόνης που εκκρίνεται από τα κύτταρα θήκα. Η λειτουργία του είναι να προάγει τη Σεξουαλική ωριμότητα των θηλυκών ζώων και να δείχνει το δεύτερο σεξουαλικό χαρακτηριστικό. Υπό τη δράση της FSH, η αρωματάση που παράγεται από τα κοκκιώδη κύτταρα των ωοθηκών μετατρέπει το ανδρογόνο σε Ε2, το οποίο ρυθμίζεται από δύο υποδοχείς οιστρογόνων (ER και ER) Έχει επιδράσεις σε διάφορα όργανα θηλυκών ζώων και παίζει σημαντικό ρόλο στην αναπαραγωγή των ζώων, ιδιαίτερα στη φυσιολογική δραστηριότητες όπως η ανάπτυξη των ωοθυλακίων Κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης των ωοθυλακίων, τα οιστρογόνα είναι ένα βασικό ενδοκυτταρικό ρυθμιστικό μόριο που επιταχύνει τον πολλαπλασιασμό των κοκκιωδών κυττάρων και ενισχύει τις επιδράσεις της FSH και της LH στον πολλαπλασιασμό και τη διαφοροποίηση των κυττάρων των ωοθηκών. ER Η κύρια προσαρμογή είναι η αρνητική ανάδραση, ER Η ανάπτυξη των ωοθυλακίων ρυθμίζεται τόσο μέσω εσωτερικών όσο και εξωτερικών οδών της ωοθήκης [26]. ER Εκφράζεται κυρίως σε ιστούς και όργανα όπως ο μαστικός αδένας, η μήτρα και ο κόλπος των ζώων, ενώ το ER Εκφράζεται κυρίως στους όρχεις , ωοθήκες, προστάτης και υποθάλαμος [27].

Σε αυτή τη μελέτη, ER Τα επίπεδα έκφρασης των Cistanche deserticola και Kaempferol ρυθμίστηκαν σημαντικά προς τα πάνω στις ομάδες Cistanche deserticola και Kaempferol, υποδηλώνοντας ότι η cistanche και η kaempferol έχουν θετικά αποτελέσματα στην ανάπτυξη, την ωρίμανση και την ωορρηξία των ωοθηκών κοτόπουλου. Τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης διαπίστωσαν ότι μετρήθηκε το ER Το επίπεδο έκφρασης είναι σχετικά χαμηλό. Αυτό είναι σύμφωνο με τα ερευνητικά ευρήματα του Guo Miao [28] ότι στην εμβρυϊκή ανάπτυξη των κοτόπουλων, οι ωοθήκες των πρώιμων κοτόπουλων έχουν συγκεκριμένες θέσεις δέσμευσης για το ER. Στα λευκά ωοθυλάκια, τα κίτρινα ωοθυλάκια και τα κοκκιώδη κύτταρα των κοτόπουλων, ER Η έκφραση είναι σημαντικά υψηλότερη από ER . Τα φλαβονοειδή της σόγιας, ως οιστρογόνο φυτικής προέλευσης, μπορούν να αυξήσουν τον ρυθμό παραγωγής αυγών των ωοπαραγωγών ορνίθων όταν προστίθενται στη διατροφή [29], υποδεικνύοντας μια άμεση σχέση μεταξύ των επιπέδων της ορμόνης των οιστρογόνων και του ρυθμού παραγωγής αυγών.

Εικόνα 4 Ωοθηκικός ιστός μετά από χρώση HE (10 ×）

3.3 Επιδράσεις του Cistanche deserticola και της Kaempferol στον ιστό των ωοθηκών

Σε αυτό το πείραμα, με τη συγκαλλιέργεια Cistanche deserticola και Kaempferol με ωοθηκικό ιστό αντίστοιχα, βρέθηκε ότι ο αριθμός των ωοθυλακίων στον ωοθηκικό ιστό που επηρεάστηκαν από Cistanche deserticola και Kaempferol αυξήθηκε σημαντικά και τα κύτταρα κοκκιώδους πολλαπλασιάστηκαν από μονοστοιβάδα σε πολυστιβάδα. Αυτό αποδεικνύει περαιτέρω ότι το Cistanche deserticola και η Kaempferol μπορούν να προάγουν την ανάπτυξη των ωοθηκών από ιστολογική άποψη. Το αντιγόνο πολλαπλασιαζόμενου κυττάρου, ο υποδοχέας ωοθυλακιοτρόπου ορμόνης και ο υποδοχέας οιστρογόνου που μετρήθηκαν στα αποτελέσματα αυτού του πειράματος Οι αλλαγές στους δείκτες επιβεβαίωσαν ότι το Cistanche deserticola και το Kaempferol έχουν αποτελέσματα παρόμοια με οιστρογόνα, γεγονός που παρέχει μια πειραματική βάση για την εξερεύνηση του στόχου των κύριων συστατικών του Cistanche deserticola και του dodder.

4. Συμπέρασμα

Αυτή η μελέτη επιβεβαίωσε ότι το Cistanche deserticola και η Kaempferol μπορούν να προάγουν τον πολλαπλασιασμό των κοκκιωδών κυττάρων που έχουν προβαθμιστεί από κοτόπουλο και να αυξάνουν τα PCNA, FSHR και ER Το επίπεδο μεταγραφής του mRNA μπορεί να προάγει σημαντικά την ανάπτυξη ωοθυλακίων.

Αναφορά:

［1］Yang Pengyun, Song Beibei, Ma Jinrui, et al. Ο ρόλος των κοκκιωδών κυττάρων στον σχηματισμό ωαρίων [J] Poultry Science, 2021 (11): 50-54

［2½ HUO SY, LI YR, GUO Y, et al. Βελτιωτικές επιδράσεις των φλαβονοειδών Epimedi⁃ um στα επιλεγμένα αναπαραγωγικά χαρακτηριστικά σε όρνιθες στοιβάδας μετά από αναγκαστική τήξη［J］. Πουλερική επιστήμη, 2020,99 (5): 2757-2765.

［3¼ HUO SY, LI YR, ZHANG S, κ.ά. Λειτουργίες του Epimedium σε παλινδρόμηση ωοθυλακίων και ωοθυλακίων όρνιθες λίπους με δύναμη ［J］. Journal of World's Poultry Research, 2020,10(2):326- 335.

［4］ RAJU GR, CHAVAN R, DEENADAYAL M, et al. Συνέργεια ωχρινοτρόπου ορμόνης και ωοθυλακιοτρόπου ορμόνης: ανασκόπηση του ρόλου στην ελεγχόμενη υπερδιέγερση των ωοθηκών (J］). Journal of hu⁃ man reproductive ences,2013,6(4):227-234.

［5］ SCHMIDT D. Ο μεταγραφικός παράγοντας με πτερύγια έλικας ποντικού Foxl2 απαιτείται για τη διαφοροποίηση των κοκκιωδών κυττάρων και τη συντήρηση των ωοθηκών［J］. Ανάπτυξη, 2004,131(4):933-942.

［6］ SULLIVAN MW, STEWART-AKERS A, KRASNOW JS, et al. Αποκρίσεις των ωοθηκών στις γυναίκες στην ανασυνδυασμένη ωοθυλακιοτρόπο ορμόνη και την ωχρινοτρόπο ορμόνη (LH): ένας ρόλος για την LH στα τελικά στάδια της ωρίμανσης των ωοθυλακίων (J］). Journal of clini⁃ cal endocrinology & metabolism,1999,84(1):228-232.

［7］ GUO Y,LI YR, ZHANG S, et al. Η επίδραση των ολικών φλαβονοειδών του επιμέδιου στην ανάπτυξη των κοκκιωδών κυττάρων σε όρνιθες ωοπαραγωγής ［J］. Επιστήμη των πουλερικών,2020,99(9):4598-4606.

［8］ ZHANG WD,LI N,DU ZR, et al. Ο υποδοχέας IGF-1 εμπλέκεται στις ρυθμιστικές επιδράσεις της ικαριίνης και της ικαριτίνης στα αστροκύτταρα κάτω από βασικές συνθήκες και μετά από μια φλεγμονώδη πρόκληση (J］). European Journal of Pharmacology, 2021,906(5):174269- 174278.

［9］ FREDERIQUE RZ,MIGUEL F,GE Y, et al. Ρυθμιστική αρχιτεκτονική⁃ του κυττάρου γοναδοτρόπου L T2 που βρίσκεται κάτω από την απόκριση στην ορμόνη απελευθέρωσης γοναδοτροπίνης (J］). Σύνορα στην ενδοκρινόλη⁃ ogy,2018,9:34.

［10］ Huo Shuying, Kang Jingmin, Li Yurong, et al. Η επίδραση του "Yimu Powder" στην επισκευή των σαλπίγγων και την απόδοση ωοπαραγωγής σε όρνιθες ωοπαραγωγής [J] Chinese Poultry, 2018, 40 (19): 4

［11］ WANG S, WANG Q, WANG H, et al. Η επαγωγή γήρανσης που εξαρτάται από τη βλάβη του ROS και του DNA από την ικαριτίνη συμβάλλει στην αντικαρκινική δράση της σε κύτταρα ηπατοκυτταρικού καρκινώματος (J］). Φαρμακευτική βιολογία, 2019,57(1):424-431.

［12］ Wang Jianhong, Wang Minzhang, Wu Qinghua, et al The effect of flavonoids from Cuscuta chinensis on ovarian endocrine function in stressed rats [J] Chinese herbal medicine, 2002 (12): {{3}

［13］Miao Jiangxia Πρόοδος στην έρευνα σχετικά με τα ενεργά συστατικά και τον μηχανισμό δράσης του σπόρου μούρου στη ρύθμιση της αναπαραγωγής//Πρακτικά ακαδημαϊκού συνεδρίου για τη φαρμακευτική φυτοχημεία και τη βιώσιμη ανάπτυξη των πόρων της παραδοσιακής κινεζικής ιατρικής (I), 2009: {{2}

［14］ TAO CC, WU Y, GAO X, et al. Οι αντικαρκινικές επιδράσεις του κασσίτερου Icari⁃ κατά του καρκίνου του μαστού σχετίζονται με τους υποδοχείς οιστρογόνων (J］). Τρέχουσα μοριακή ιατρική, 2020,21(1):73-85.

15½ MONNIAUX, DANIELLE. Οδήγηση της ωοθυλακιογένεσης μέσω του διαλόγου oo⁃ κυττάρου-σωματικού κυττάρου: μαθήματα από γενετικά μοντέλα［J］. The⁃ riogenology,2016,86(1):41-53.

［16］TAKASHI SHIMIZU A, NAOMICHI KOSAKA A, CHIAKIMU⁃ RAYAMA A, et al. Έκφραση υποδοχέα απελίνης και APJ σε κοκκιώδη και θήκα κύτταρα κατά τη διάρκεια διαφορετικών σταδίων ανάπτυξης ωοθυλακίων στην ωοθήκη των βοοειδών: εμπλοκή απόπτωσης και ορμονικής ρύθμισης - Sciencedirect［J］. Animal Reproduction Science, 2009,116(1-2):28-37.

［17］ Lin Siwen, Chen Shaobo, Yin Changchang, et al. Οιστρογονική επίδραση των συνολικών φλαβονοειδών του Cistanche deserticola deserticola στην προώθηση της οστεογονικής διαφοροποίησης ［ J ］ Research and Development of Natural product, 2020, 32 (3): {{4}

［18］ Tao Jinliang, Wang Xiao, Wei Yuanyuan, et al. Η προστατευτική επίδραση των φλαβονοειδών από το Cuscuta chinensis στην ανώμαλη έκκριση αρσενικών ορμονών που προκαλεί η BPA σε διάμεση κύτταρα όρχεων ποντικών [J] Πρόοδος στην Ιατρική των Ζώων 2019, {4 (2019), {4}}

［19］ Wang Peng, Hou Deyu, Shi Liguang, et al Danzhou Chicken FSH Μελέτη για τον πολυμορφισμό ενός νουκλεοτιδίου του γονιδίου ［ J］ Heilongjiang Animal Husbandry and Veterinary Medicine, 2018, 10 (19}): {{5}:

［20¼ ZHANG M, SHI H, SEGALOFF DL, κ.ά. Έκφραση και lo⁃ καλοποίηση του υποδοχέα της ωχρινοτρόπου ορμόνης στην αναπαραγωγική οδό του θηλυκού ποντικού (J］). Biology of reproduction,2001,64(1): 179-187.

［21］ Li Qin, Wang Qigui TGF- Πρόοδος έρευνας και προοπτικές των μελών της οικογένειας που ρυθμίζουν την ανάπτυξη των ωοθυλακίων στα πουλερικά ［ J ］ Chinese Poultry, 2019, 41 (19): 1-5

［22］Guan Hongbin, Li Qingzhang Πρόοδος της έρευνας σχετικά με την ορμόνη διέγερσης των ωοθυλακίων [J] Journal of Northeast Agricultural University, 2002, 8 (3): 306-311

［23］ Wu Xinpei, Wang Shuying Ανοσοϊστοχημικός εντοπισμός FSHR και LHR στις ωοθήκες του Laiwu Black Goat ［ J ］ Life Science Research, 2006, 25 (4): 367-371

［24］ TISCHKAU SA, HOWELL RE, HICKOK JR, et al. Η έκρηξη της λου⁃ τεϊνοποιητικής ορμόνης ρυθμίζει την έκφραση του γονιδίου του κιρκάδιου ρολογιού στην ωοθήκη του κοτόπουλου (J］). Chronobiology international, 2011,28(1):10-20.

［25］Tang Haifei, Wang Zhiwen, Zheng Xuesong, et al. Πρόοδος στην έρευνα για τη λειτουργία των οιστρογόνων [J] Reproduction and Contraception, 2019, 39 (4): 334-340

［26］ Liu Lingbin Επίδραση του μονοχρωματικού φωτός ακτινοβολίας στον υποδοχέα οιστρογόνου (ER, ER), Η επίδραση της έκφρασης του υποδοχέα προγεστερόνης (PR-A, PR-B) στον ιστό των ωοθηκών Ya'an: Sichuan Agricultural University, 2013

［27］ COUSE JF, LINDZEY J, GRANDIEN K, et al. Κατανομή ιστού⁃ και ποσοτική ανάλυση του υποδοχέα οιστρογόνου-άλφα (ERal3) και του υποδοχέα οιστρογόνου-βήτα (ERbeta) του αγγελιοφόρου ριβοπυρήνα⁃ και το ποντίκι ERalpha-knockout［J］. En⁃ docrinology,1997,138(11):4613-4621.

［28］Guo Miao ER σε ωοθηκικό ιστό ωοπαραγωγών ορνίθων Προφανής ρύθμιση των δυναμικών αλλαγών και έλεγχος του γονιδίου ρυθμιστή Tai'an: Shandong Agricultural University, 2017. [ Zhao Biqian Έρευνα για την εφαρμογή της daidzein στην παραγωγή ωοπαραγωγών ορνίθων [J ] Guangdong Feed, 2017, 26 (8): 31-33