Η διαγραφή του MiR-29b2/c οδηγεί σε επιταχυνόμενη γήρανση και νευροπροστασία σε ποντίκια με νόσο του Πάρκινσον που προκαλείται από MPTP

Αφηρημένη

Μελέτες αποκαλύπτουν μια σύνδεση μεταξύ των miR-29 στη γήρανση και της νόσου του Πάρκινσον (PD). Εδώ δείχνουμε ότι τα επίπεδα στον ορό των miR-29s σε 1-μεθυλ-4-φαινυλ-1,2,3,6-τετραϋδροπυριδίνη (MPTP) επαγόμενη από PD Τα ποντίκια παρουσίασαν δυναμικές αλλαγές. Ο ρόλος του miR-29b2/c στη γήρανση και την PD μελετήθηκε χρησιμοποιώντας ποντίκια νοκ-άουτ γονιδίου miR-29b2/c (miR-29b2/c KO). Τα ποντίκια miR-29b2/c KO χαρακτηρίστηκαν από σημαντικά ελαφρύτερο βάρος, κύφωση, μυϊκή αδυναμία και μη φυσιολογικό βάδισμα σε σύγκριση με ποντίκια άγριου τύπου (WT). Το WT ανέπτυξε επίσης εμφανή πάχυνση του δέρματος και μείωση του λιπώδους ιστού. Ωστόσο, η ανεπάρκεια του miR-29b2/c μείωσε τις βλάβες που προκαλούνται από MPTP στο ντοπαμινεργικό σύστημα και την ενεργοποίηση των γλοιακών αγγείων στη μέλαινα ραβδωτό οδό και κατά συνέπεια βελτίωσε την κινητική λειτουργία των ποντικών KO που έλαβαν MPTP. Το νοκ-άουτ του miR-29b2/c ανέστειλε την έκφραση φλεγμονωδών παραγόντων σε πρωτογενείς καλλιέργειες μικτών γλοίων, πρωτογενών αστροκυττάρων ή υποβληθέντων σε θεραπεία με LPS επεξεργασμένες με 1-μεθυλ-4-φαινυλοπυριδίνιο (MPP plus ) πρωτοπαθή μικρογλοία. Επιπλέον, η ανεπάρκεια miR-29b2/c ενίσχυσε τη δραστηριότητα του AMPK αλλά κατέστειλε τη σηματοδότηση του NF-κB p65 στα νευρογλοιακά κύτταρα. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι τα ποντίκια miR-29b2/c KO εμφανίζουν τον φαινότυπο που μοιάζει με προγηρία. Τα λιγότερο ενεργοποιημένα νευρογλοιακά κύτταρα και η καταπιεσμένη νευροφλεγμονή μπορεί να προκαλέσουν ντοπαμινεργική νευροπροστασία σε miR- 29b2/c KO ποντίκια. Συμπερασματικά, το miR-29b2/c εμπλέκεται στη ρύθμιση της γήρανσης και διαδραματίζει επιζήμιο ρόλο στη νόσο του Πάρκινσον.

Λέξεις-κλειδιά

MiR-29b2/c; νευροπροστασία? Νόσος Πάρκινσον που προκαλείται από MPTP.Οφέλη Cistanche.

Κάντε κλικ εδώ για να λάβετεποιες είναι οι επιπτώσεις του Cistanche

Εισαγωγή

Η νόσος του Πάρκινσον (PD) είναι η δεύτερη πιο συχνή νευροεκφυλιστική νόσος, που χαρακτηρίζεται από την προοδευτική απώλεια ντοπαμινεργικών νευρώνων στη μέλαινα par compacta ουσία (SNpc) του μεσεγκεφάλου και αυξημένη νευρογλοιακή ενεργοποίηση και νευροφλεγμονή [1-3]. Τα MicroRNA είναι σύντομα μη κωδικοποιητικά μόρια RNA που ρυθμίζουν την έκφραση γονιδίων στο μετα-μεταγραφικό επίπεδο [4, 5]. Τα MicroRNA εμπλέκονται στη ρύθμιση της ανάπτυξης του νευρικού συστήματος, της πλαστικότητας των νευρώνων και των νευροεκφυλιστικών ασθενειών. Η οικογένεια MicroRNA29 (miR- 29s) αποτελείται από δύο συστάδες γονιδίων: miR-29a/b1 και miR-29b2/c, τα οποία βρίσκονται στο χρωμόσωμα 6 και στο χρωμόσωμα 1, αντίστοιχα, το γονιδίωμα του ποντικού. Τα miR-29a και miR-29c έχουν μόνο μία διαφορά νουκλεοτιδίων, ενώ τα miR-29b1 και miR-29b2 είναι πανομοιότυπα σε αλληλουχία [6]. Τα miR-29 εμπλέκονται σε πολλαπλές βιολογικές διεργασίες. Πολλά γονίδια-στόχοι miR-29 έχουν επαληθευτεί πειραματικά, συμπεριλαμβανομένων των γονιδίων επιβίωσης Procell Bcl-2, Mcl-1, Cdc42 και p85- . προαποπτωτικά γονίδια Puma, Bim, Bak και Bmf. και προφλεγμονώδεις κυτοκίνες IFN- και IL-12. Στο περιφερικό σύστημα, μελέτες έχουν δείξει ότι τα miR-29 εμπλέκονται στην ίνωση των ιστών [7-9], στον μεταβολισμό και στη ρύθμιση του ανοσοποιητικού [10-13].

Τα miR-29 εκφράζονται ευρέως στο κεντρικό νευρικό σύστημα και οι μεταγραφές τους υπάρχουν τόσο στους νευρώνες όσο και στα νευρογλοιακά κύτταρα [14, 15]. Η συσχέτιση μεταξύ των miR-29s και των νευρολογικών παθήσεων φαίνεται όλο και περισσότερο. Τα miR-29s εμπλέκονται στη ρύθμιση της παραγωγής αμυλοειδούς και ρυθμίζονται προς τα κάτω στον εγκέφαλο ασθενών με AD [16, 17]. Τα επίπεδα miR μειώνονται επίσης σε ασθενείς με νόσο του Huntington (HD) και ποντίκια μοντέλου HD [18, 19], ενώ αυξάνονται σε ασθενείς με αμυοτροφική πλευρική σκλήρυνση (ALS) και μοντέλα ποντικών ALS [16, 20]. Τόσο τα ποντίκια με έλλειψη miR-29a/b-1-και τα ποντίκια με μειωμένη ρύθμιση miR-29 εμφανίζουν έναν φαινότυπο που μοιάζει με Αταξία [6, 21]. Όσον αφορά τις επιδράσεις της έκφρασης του miR στη νευροπροστασία και την προώθηση του νευρωνικού θανάτου σε μοντέλα ισχαιμικών τρωκτικών αναφέρθηκαν αντίθετα αποτελέσματα [22, 23]. Σε προηγούμενες μελέτες, παρατηρήσαμε ότι τα επίπεδα miR ήταν σημαντικά μειωμένα στον ορό ασθενών με PD με πτωτική τάση που σχετίζεται με πιο σοβαρό παρκινσονισμό [24]. Επιπλέον, τα επίπεδα miR συσχετίστηκαν με την απόδοση μνήμης σε ασθενείς με PD [25]. Καταλήξαμε στο συμπέρασμα ότι το miR-29b2/c συνδέεται στενά με την PD, αλλά οι φυσιολογικές λειτουργίες και οι παθολογικοί μηχανισμοί που εμπλέκονται στην PD είναι σε μεγάλο βαθμό άγνωστοι.

Σε αυτή τη μελέτη, τα επίπεδα miR{0}}s στον ορό ποντικιών σε απόκριση στη χορήγηση MPTP μετρήθηκαν έως και 120 ημέρες μετά την ένεση. Οι επιδράσεις των ελλείψεων miR-29b2/c στους περιφερειακούς ιστούς μελετήθηκαν χρησιμοποιώντας ποντίκια miR-29b2/c KO. Η ντοπαμινεργική νευροτοξίνη MPTP χρησιμοποιήθηκε περαιτέρω για την επαγωγή ενός μοντέλου PD σε ποντίκια. Στη συνέχεια διερευνήθηκαν οι τραυματισμοί του ντοπαμινεργικού συστήματος του μαυροραβδωτού συστήματος, η συμπεριφορά συμπεριφοράς και οι πιθανοί μηχανισμοί. Παρατηρήσαμε ότι τα επίπεδα miR-29 στον ορό του ποντικιού εμφάνιζαν δυναμικές αλλαγές μετά τη χορήγηση MPTP. Τα ποντίκια miR- 29b2/c KO εμφάνισαν επιταχυνόμενη γήρανση, που υποδεικνύεται από το ελαφρύτερο σωματικό βάρος, τη μείωση του λιπώδους ιστού, την κύφωση, την πάχυνση του δέρματος, τη μυϊκή αδυναμία και την ανωμαλία στη βάδιση. Ωστόσο, η ανεπάρκεια του miR-29b2/c οδήγησε στην ανακούφιση της ντοπαμινεργικής βλάβης και της νευρογλοιακής ενεργοποίησης και, κατά συνέπεια, στη βελτίωση της συμπεριφοράς σε ένα ζωικό μοντέλο παρόμοιο με PD.

Χάπια Cistanche

Αποτέλεσμα

1. Ο φαινότυπος που μοιάζει με προγηρία σε ποντίκια miR-29b2/c KO

Τα ποντίκια miR-29b2/c νοκ-άουτ (miR-29b2/c KO) δημιουργήθηκαν χρησιμοποιώντας την τεχνική CRISPR-Cas9. Η στρατηγική της γονιδιακής στόχευσης και του μεταλλαγμένου γονότυπου ποντικού παρουσιάστηκαν στο Συμπληρωματικό Σχήμα 1. Τα ποντίκια miR-29b2/c KO ηλικίας τεσσάρων και 16- μηνών είχαν μειωμένο σωματικό βάρος (Εικόνα 1Α). Σε ηλικία τριών μηνών, τα χαρακτηριστικά των ποντικών miR-29b2/c KO παρέμειναν αναλλοίωτα, όπως αποδείχθηκε από μια σάρωση με ακτίνες Χ μικροϋπολογιστική τομογραφία (micro-CT) (Συμπληρωματικό Σχήμα 2Α). Δεν υπήρχαν διαφορές στην οστική πυκνότητα (BMD), στη μέση BMD των δοκίδων, στον διαχωρισμό των δοκίδων, στο πάχος της δοκιδωτής και στο δείκτη δομικού μοντέλου (SMI) μεταξύ των ποντικών miR-29b2/c KO και του αντίστοιχου WT σε ηλικία 13 μηνών ( Συμπληρωματικό Σχήμα 2Β). Με χρώση με αιματοξυλίνη και ηωσίνη (H&E), βρήκαμε ότι τα ποντίκια {{23}μηνών miR-29b2/c KO εμφάνισαν παχύρρευστο χόριο με αυξημένες και βαθιές ρυτίδες (Εικόνα 1Β, 1Γ). Και η κύφωση ήταν εμφανής σε ποντίκια 16-μηνών miR-29b2/c KO (Εικόνα 1Γ). Τα ποντίκια miR-29b2/c KO σε νεαρή ηλικία (ηλικίας 3 μηνών) είχαν φυσιολογικό λιπώδη ιστό (Συμπληρωματικό Σχήμα 2C, 2D). Ωστόσο, ο κοιλιακός λιπώδης ιστός (υποδόριο λίπος και σπλαχνικό λίπος σε συνδυασμό) και ο καφές λιπώδης ιστός μειώθηκαν δραματικά στα ποντίκια miR-29b2/c KO σε σύγκριση με τα ποντίκια WT στην ηλικία των 16 μηνών (Εικόνα 1Δ). Περαιτέρω, αναλύθηκαν τα μεταγραφικά επίπεδα των δεικτών γήρανσης p21 και p53 στον εγκέφαλο. Αυξήθηκαν σημαντικά στον ιππόκαμπο, αλλά όχι στον φλοιό των ποντικών miR-29b2/c KO στην ηλικία των έξι μηνών. Τα επίπεδα πρωτεΐνης p53 και p16 στον ιππόκαμπο με έλλειψη miR-29b2/c δεν διέφεραν από τους ελέγχους WT. Επιπλέον, η δραστηριότητα της -γαλακτοσιδάσης, ένα γνωστό χαρακτηριστικό της κυτταρικής γήρανσης, δεν διέφερε μεταξύ των εγκεφάλων τριών μηνών ποντικών WT και miR-29b2/c KO.

Μυϊκή αδυναμία και ανωμαλία βάδισης σε ποντίκια miR- 29b2/c KO

Αξιολογήθηκαν οι συμπεριφορές ποντικών με έλλειψη miR-29b2/c. Η μυϊκή δύναμη μετρήθηκε με τα τεστ Wire hanging και Grid hanging. Τα ποντίκια miR-29b2/c KO σημείωσαν χαμηλότερη βαθμολογία από τα ποντίκια ελέγχου στη δοκιμή ανάρτησης σύρματος (Εικόνα 2Α). Και η καθυστέρηση της πτώσης ήταν δραματικά μικρότερη σε ποντίκια miR-29b2/c KO σε σύγκριση με αντίστοιχους άγριου τύπου στη δοκιμή ανάρτησης Grid (Εικόνα 2Β), αλλά η απόδοση δοκιμής Rotarod των WT και miR{{10} Τα ποντίκια ΚΟ b2/c δεν διέφεραν σημαντικά (Εικόνα 2Γ). Το βάδισμα των ζώων ανιχνεύθηκε από το σύστημα ανάλυσης Catwalk XT. Παραδόξως, τόσο η ταχύτητα όσο και το μήκος διασκελισμού των ποντικιών miR-29b2/c KO ήταν υψηλότερα από εκείνα των αντίστοιχων ποντικιών, ενώ ο κύκλος βημάτων, ο χρόνος στάσης και ο χρόνος ταλάντευσης ήταν μικρότεροι και ο κύκλος λειτουργίας μειώθηκε σε miR{ {15}} ποντίκια με έλλειψη b2/c (Εικόνα 2Δ).

Αλλαγές των miR-29s στον ορό ποντικού PD που προκαλείται από MPTP

Τα επίπεδα miR μειώθηκαν στον ορό ασθενών με PD σε σύγκριση με υγιείς μάρτυρες [24]. Σε αυτή τη μελέτη, τα επίπεδα miR-29s στον ορό ποντικών με PD ποσοτικοποιήθηκαν στις 3, 30 και 120 ημέρες μετά τη χορήγηση ενός υποξείου σχήματος MPTP. Τα επίπεδα miR-29a και miR-29b μειώθηκαν στις 3 ημέρες μετά την ένεση και επανήλθαν στις βασικές τιμές στις 30 ημέρες και μειώθηκαν ξανά στις 120 ημέρες. Ωστόσο, το επίπεδο miR{11}}c δεν άλλαξε σημαντικά (Συμπληρωματικό Σχήμα 5).

Συμπληρώματα Cistanche

Η ανεπάρκεια miR-29b2/c μετριάζει τους νιγοραβδωτούς τραυματισμούς που προκαλούνται από MPTP και τα κινητικά ελλείμματα σε ποντίκια

Τα ποντίκια miR-29b2/c νοκ-άουτ και οι συντρόφους του WT εγχύθηκαν με MPTP για να προκληθεί το μοντέλο PD. Τα επίπεδα έκφρασης των p21, p53 και Pai1 στο ραβδωτό σώμα τόσο των ποντικών miR-29b2/c KO και των μαρτύρων WT δεν άλλαξαν μετά τη χορήγηση MPTP. Η έκθεση σε MPTP προκάλεσε σημαντικές μειώσεις των TH-θετικών ντοπαμινεργικών νευρώνων στο SNpc [F(1, 20)=5.441, P=0.0302] και στα TH-θετικά νευρικά άκρα, πρωτεΐνες TH [F(1, 20)=10.5, P=0.0041] και τα επίπεδα ντοπαμίνης, DOPAC και HVA στο ραβδωτό σώμα (Εικόνα 3A–3D). Ωστόσο, οι μαυροραβδωτικοί τραυματισμοί σε ποντίκια miR-29b2/c KO που έλαβαν θεραπεία με MPTP ανακουφίστηκαν δραματικά σε σύγκριση με τους ελέγχους WT που έλαβαν θεραπεία με MPTP, καθώς ο αριθμός των ντοπαμινεργικών νευρώνων, οι πυκνότητες των ντοπαμινεργικών νευρικών απολήξεων και τα επίπεδα πρωτεΐνης TH ραβδωτού σώματος και Η συγκέντρωση της ντοπαμίνης ήταν σημαντικά υψηλότερη. Επιπλέον, οι αλλαγές στις αναλογίες DOPAC προς DA και HVA προς DA [F(1, 19)=12.64, P=0.0021] μετριάστηκαν σημαντικά (Εικόνα 3A–3D). Σε κανονικά ποντίκια miR-29b2/c KO με ένεση φυσιολογικού ορού, οι συγκεντρώσεις του ραβδωτού σώματος του 5-HT και του μεταβολίτη του 5-HIAA αυξήθηκαν σε σύγκριση με τους αντίστοιχους WT και οι συγκεντρώσεις NE ήταν κοντά μεταξύ των ποντίκια άγριου τύπου και miR-29b2/c KO (Εικόνα 3D). Οι δοκιμές Rearing και Pole χρησιμοποιήθηκαν για την αξιολόγηση της αυθόρμητης κατακόρυφης δραστηριότητας [26, 27] και της κινητικής δραστηριότητας των ποντικών [28], αντίστοιχα. Δύο ημέρες μετά την τελευταία ένεση MPTP, η συχνότητα εκτροφής μειώθηκε στα ποντίκια WT κατά τη διάρκεια των τελευταίων 2 λεπτών σε σύγκριση με τους μάρτυρες WT που έλαβαν φυσιολογικό ορό. Παρόμοια πειράματα δεν αποκάλυψαν επίδραση της ανεπάρκειας miR- 29b2/c στις αλλαγές που προκαλούνται από το MPTP στη συχνότητα εκτροφής (Εικόνα 3Ε). Ομοίως, ο συνολικός χρόνος που δαπανήθηκε για το στρίψιμο και το κατέβασμα αυξήθηκε σε ποντίκια WT μετά τη χορήγηση MPTP στη δοκιμή Pole, ενώ ο συνολικός χρόνος ήταν κοντά μεταξύ των ποντικών miR-29b2/c KO που έλαβαν κανονικό ορό και MPTP (Εικόνα 3F) .

Η ανεπάρκεια miR-29b2/c εξασθενεί την επαγόμενη από MPTP ενεργοποίηση γλοίων σε ποντίκια

Η ενεργοποίηση των νευρογλοιακών κυττάρων και η νευροφλεγμονή που προκαλείται από τα νευρογλοιακά κύτταρα εμπλέκονται στην παθολογία της PD [29]. Τα αστροκύτταρα αυξήθηκαν αξιοσημείωτα στη μελανοκύτταρα των ποντικών WT, ενώ το GFAP συν αστροκύτταρα αυξήθηκαν στο ραβδωτό σώμα αλλά όχι στο SNpc [F(1, 8)=5.412, P=0.0484] του miR -29b2/c KO ποντίκια τρεις ημέρες μετά την ένεση MPTP. Σημειωτέον, οι αστροκυτταρικές πυκνότητες δεν διέφεραν στις δύο περιοχές των ποντικών WT και miR-29b2/c KO που έλαβαν θεραπεία με MPTP (Εικόνα 4Α, 4Β). Το Iba 1 συν μικρογλοία αυξήθηκε στη μέλαινα ουσία των ποντικών WT και στο ραβδωτό σώμα [F(1, 8)=12.74, P=0.0073] τόσο του WT όσο και του miR{{21} }b2/c KO ποντίκια μετά από χορήγηση MPTP. Επιπλέον, σε miR-29b2/c KO ποντίκια η ένεση MPTP μείωσε σημαντικά τις μικρογλοιακές πυκνότητες (Εικόνα 4C, 4D).

2. Οι επιπτώσεις της ανεπάρκειας miR-29b2/c σε πρωτογενή καλλιεργημένα αστροκύτταρα

Χρησιμοποιήθηκε μια δοκιμασία γρατσουνίσματος για να ελεγχθεί εάν μια ανεπάρκεια miR-29b2/c επηρέασε τον πολλαπλασιασμό και τη μετανάστευση των αστροκυττάρων. Τα πρωτογενή αστροκύτταρα miR-29b2/c KO δεν έδειξαν διαφορά στην ικανότητα πολλαπλασιασμού και μετανάστευσης. Η κυτταρική βιωσιμότητα των πρωτογενών αστροκυττάρων WT και miR-29b2/c KO δεν εμφάνισε καμία διαφορά κατά την έναρξη. Μετά τη δηλητηρίαση με MPP συν, η κυτταρική βιωσιμότητα των αστροκυττάρων WT ήταν υψηλότερη σε σύγκριση με τους μάρτυρες, ενώ η βιωσιμότητα των μεταλλαγμένων αστροκυττάρων δεν άλλαξε [F(1, 18)=5.727, P=0.0278 ]. Ενισχυμένο προϊόν ROS και πρόσληψη γλυκόζης παρατηρήθηκαν σε αστροκύτταρα WT και miR-29b2/c KO που υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με MPP plus.

Cistanche tubulosa

Μετρήθηκαν τα επίπεδα έκφρασης νευροτροφικών παραγόντων, μορίων που σχετίζονται με φλεγμονή, γονιδίων δεικτών αστροκυττάρου τύπου Α1 και τύπου Α2 σε αστροκύτταρα που υποβλήθηκαν σε αγωγή με MPP συν. Στις 12 ώρες μετά την πρόκληση, η έκφραση του BDNF ήταν αυξημένη στα αστροκύτταρα WT και miR-29b2/c KO (Εικόνα 5Α). Το επίπεδο έκφρασης του TGF- 1 ρυθμίστηκε σημαντικά προς τα πάνω στα αστροκύτταρα WT μετά την έκθεση σε MPP plus, ενώ μειωνόταν στα αστροκύτταρα miR- 29b2/c KO σε σύγκριση με αστροκύτταρα άγριου τύπου τόσο κατά την έναρξη όσο και μετά η μέθη (Εικόνα 5Β). Το βασικό επίπεδο της μεταγραφής TNF ήταν χαμηλότερο στα αστροκύτταρα miR-29b2/c KO σε σύγκριση με τα αστροκύτταρα WT. Μετά από θεραπεία 12 ωρών, τα επίπεδα έκφρασης της IL-1, της IL{-6 και της COX-2 αυξήθηκαν σημαντικά στα αστροκύτταρα WT και miR-29b2/c, ενώ η μεταγραφή TNF ήταν αυξημένο μόνο στα αστροκύτταρα WT και οι μεταγραφές IL-1, TNF και COX{-2 μειώθηκαν στα αστροκυτταρικά κύτταρα miR{-29b2/c KO σε σύγκριση με αντίστοιχα άγριου τύπου (Εικόνα 5Γ) . Ο δείκτης Α1 H2-Τ23 και ο δείκτης Α2 CD14 ήταν σημαντικά χαμηλότεροι στα αστροκύτταρα miR- 29b2/c KO που υποβλήθηκαν σε αγωγή με PBS σε σύγκριση με μάρτυρες WT. Μετά από θεραπεία 12 ωρών, οι δείκτες Α1 H2-D1, Ggta1 και C3 και οι δείκτες Α2 Clcf1 και S{45}} ρυθμίστηκαν προς τα πάνω τόσο στα αστροκύτταρα WT όσο και στα miR-29b2/c KO. Το H{48}}T23 αυξήθηκε μόνο στα WT αστροκύτταρα. Τα Gbp2 και CD14 δεν άλλαξαν στους δύο γονότυπους των αστροκυττάρων. Επιπλέον, οι μεταγραφές των H2-T23, H2-D1 και CD14 μειώθηκαν στα αστροκύτταρα miR-29b2/c KO σε σύγκριση με τους ελέγχους WT (Εικόνα 5D, 5E). 12 ώρες και 24 ώρες μετά τη θεραπεία, τα επίπεδα των πρωτεϊνών AMPK και των φωσφορυλιωμένων πρωτεϊνών AMPK δεν άλλαξαν στα αστροκύτταρα WT, ενώ, στις 24 ώρες μετά την πρόκληση MPP plus, το επίπεδο πρωτεΐνης AMPK μειώθηκε σε miR-29b2/ c Αστροκύτταρα KO και η αναλογία p-AMPK προς AMPK σε μεταλλαγμένα αστροκύτταρα αυξήθηκε σε σύγκριση με τα αστροκύτταρα WT και τα μεταλλαγμένα αστροκύτταρα που υποβλήθηκαν σε αγωγή με PBS (Εικόνα 5F). Επιπλέον, το ρυθμισμένο μέσο από κύτταρα BV2 που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με PBS ή LPS (με συντομία CM και LCM) χρησιμοποιήθηκε για τη διέγερση πρωτογενών αστροκυττάρων ποντικών WT και miR-29b2/c KO. Αν και η έκφραση της πρωτεΐνης p-AMPK δεν άλλαξε μετά από 12 ώρες θεραπείας με LCM, ήταν σημαντικά υψηλότερη στα αστροκύτταρα miR-29b2/c KO σε σύγκριση με τα αστροκύτταρα WT. Παρατηρήσαμε ότι οι πρωτεΐνες pAMPK αυξήθηκαν και στους δύο γονότυπους των αστροκυττάρων μετά από 24 θεραπείες LCM. Η διέγερση LCM αύξησε σημαντικά την έκφραση των πρωτεϊνών COX{- 2 [F(2, 18)=10.29, P=0.0010], ωστόσο, το επίπεδο πρωτεΐνης COX{-2 στα αστροκύτταρα miR-29b2/c KO μειώθηκαν σε σύγκριση με τα αστροκύτταρα WT (Εικόνα 5G). Η συγκέντρωση νιτρωδών αλάτων σε αστροκύτταρα miR-29b2/c KO ήταν επίσης σημαντικά χαμηλότερη σε σύγκριση με τα αστροκύτταρα WT που υποβλήθηκαν σε αγωγή με LCM [F(2, 30)=17, P<0.0001] (Figure 5H). Further, the expression of senescence marker genes was evaluated. 12 h-treatment of MPP+ increased p53 transcript levels in both WT and miR- 29b2/c KO astrocytes. p19 and Pai1 transcripts were elevated only in WT astrocytes, and Pai1 expression levels in miR-29b2/c KO astrocytes were decreased compared to WT astrocytes after the treatment. Moreover, Bcl-2, Bax protein levels, and the ratio of Bcl-2 to Bax did not change in WT and miR-29b2/c KO astrocytes.

3. Οι επιπτώσεις της ανεπάρκειας miR-29b2/c σε πρωτογενή καλλιεργημένη μικρογλοία

Για τη μέτρηση της απόκρισης της μικρογλοίας με έλλειψη miR-29b2/c σε φλεγμονώδη ερεθίσματα, χρησιμοποιήθηκε LPS. Το επίπεδο έκφρασης του BDNF ήταν χαμηλότερο σε miR-29b2/c KO μικρογλοία κατά την έναρξη. Τέσσερις και οκτώ ώρες μετά τη θεραπεία με LPS, η ποσότητα των μεταγραφών IL-1, IL-6, TNF και COX{-2 αυξήθηκε, ενώ η έκφραση IGF-1 μειώθηκε στο WT και miR-29b2/c KO μικρογλοιακά κύτταρα, η έκφραση του BDNF μειώθηκε μόνο στη μικρογλοία WT [F(2, 27)=41.5, P<0.0001]. IL-10 transcript increased in WT and miR-29b2/c KO microglia [F(2, 27) = 3.753, P=0.0365], and TGF-β1 transcript decreased in WT microglia at eight hours after the LPS challenge. BDNF and TGF-β1 transcripts were not changed in miR-29b2/c KO microglia. In addition, IL-6 transcripts were significantly reduced in miR-29b2/c KO microglia after the challenge compared to WT controls, IGF-1 and IL-10 transcripts were markedly higher in miR-29b2/c KO microglia after four and eight hours of intoxication, respectively (Figure 6A–6C). At baseline, the p-AMPK protein level and pAMPK to AMPK ratio were dramatically elevated in miR-29b2/c KO microglia when compared with WT microglia. 24 h after the treatment of LPS, p-AMPK level [F(1, 17) = 5.066, P=0.0379] and the ratio [F(1, 17) = 5.537, P=0.0309] were elevated only in WT microglia (Figure 6D). At one hour after the treatment, the phosphorylated-NF-κB p65 (p-p65) proteins and pp65 to p65 ratio, but not p65 proteins, increased in wildtype and miR-29b2/c KO microglial cells, yet the ratio decreased modestly in miR-29b2/c KO microglial cells when compared with WT microglia (p=0.071) (Figure 6E). The expression of COX-2 was enhanced in the two genotypes of microglial cells; whereas, the level of COX-2 in mutant microglia decreased when compared with WT controls after 24 h-treatment of LPS [F(1, 17) = 5.33, P=0.0338] (Figure 6D). Nitrite product was induced by the treatment of LPS in both genotypes of microglia, however, it was dramatically lower in miR- 29b2/c KO microglia at baseline and after the treatment of LPS [F(1, 20) = 14.03, P=0.0013] (Figure 6F).

Συζήτηση

Η έκφραση των μελών της οικογένειας miR-29 ρυθμίζεται προς τα πάνω σε πολλούς ιστούς όταν τα άτομα μεγαλώνουν [30-32]. Έργα από το εργαστήριό μας και άλλα έχουν δείξει μια σύνδεση μεταξύ του miR-29 και της νόσου του Πάρκινσον [33]. Στην παρούσα μελέτη, μελετήθηκαν οι ρόλοι του miR- 29b2/c στη γήρανση και τη νόσο του Πάρκινσον. Τα miR-29 ασκούν προ- και αντιγηραντικές επιδράσεις ανάλογα με τους ιστούς, τα είδη και τα στάδια ανάπτυξης. Βρήκαμε ότι τα 3-miR μηνών-29b2/c KO ποντίκια είχαν κανονικό σκελετό και λιπώδη ιστό και τα 4-miR μηνών- 29b2/c KO ποντίκια εμφάνισαν ελαφρύτερο σωματικό βάρος σε σύγκριση με το αντίστοιχο WT, κάτι που συμφωνεί με άλλες μελέτες [11, 34]. Μυϊκή αδυναμία και ασταθές βάδισμα ανιχνεύθηκαν σε 3-μήνους miR- 29b2/c KO ποντίκια. Τα ποντίκια miR-29b2/c KO δεκατριών μηνών εμφάνισαν πάχυνση του δέρματος. Ωστόσο, είχαν τη φυσιολογική λεπτή δομή του μηριαίου οστού. Η μείωση του σωματικού βάρους σημειώθηκε σε 16-μήνους miR-29b2/c KO ποντίκια. Σε αυτήν την ηλικία, τα ποντίκια miR-29b2/c KO είχαν λιγότερο κοιλιακό λίπος και καφέ λίπος και εμφάνισαν εμφανή κύφωση. Τα miR-29 εμπλέκονται στη διακοπή του κυτταρικού κύκλου με τη μεσολάβηση p{35} [35, 36] και στην κυτταρική γήρανση που προκαλείται από το p16/Rb [37]. Ωστόσο, η κυτταρική γήρανση δεν ήταν εμφανής στον εγκέφαλο ποντικιού miR-29b2/c KO. Επομένως, αν και το miR-29b2/c συμβάλλει στη ρύθμιση της γήρανσης, οι ρόλοι του στους περιφερικούς ιστούς και στον εγκέφαλο μπορεί να είναι διαφορετικοί.

Τα επίπεδα των miR{0}}s στον ορό ήταν μειωμένα σε ασθενείς με PD σε σύγκριση με υγιείς μάρτυρες [24]. Εδώ, βρήκαμε ότι η έκφραση του miR-29 στον ορό ποντικού PD κυμάνθηκε από 3 έως 120 ημέρες μετά τη χορήγηση MPTP. Τα miR-29 είναι άφθονα στον εγκέφαλο [6, 30]. Μέσω του προφίλ GEO, η έκφραση miR-29c βρέθηκε να ρυθμίζεται προς τα πάνω στη μέλαινα ουσία ασθενών με PD (p=0.0059, από τη δοκιμή Mann-Whitney), επιπλέον, miR{{12 }}c έκφραση στην άνω μετωπιαία έλικα δεν διέφερε (p=0.47, από Student-T-test), σε σύγκριση με τα άτομα ελέγχου (Συμπληρωματικό Σχήμα 10). Εδώ, τα ποντίκια miR-29b2/c KO προκλήθηκαν με MPTP για να προκαλέσουν τραυματισμούς που μοιάζουν με PD. Τα μεταλλαγμένα ποντίκια εμφάνισαν λιγότερο σοβαρούς τραυματισμούς στο ντοπαμινεργικό σύστημα του μέλαινα ραβδωτού σώματος και ηπιότερη ενεργοποίηση των γλοιακών αγγείων και στη συνέχεια αντίσταση συμπεριφοράς σε κάποιο βαθμό. Έτσι, το miR-29b2/c έχει επιζήμιο ρόλο στην παθολογία της PD. Παρατηρήσαμε ότι στο μοντέλο PD ποντικού που προκαλείται από MPTP, τα ραβδωτά επίπεδα των μεταγραφών p21, p53 και Pai1 δεν άλλαξαν, υποδηλώνοντας ότι μπορεί να μην εμφανιστεί κυτταρική γήρανση. Η γήρανση θεωρείται παράγοντας υψηλού κινδύνου για την ανάπτυξη της PD [38], ωστόσο, οι αλλαγές που σχετίζονται με τη γήρανση στον εγκέφαλο, ειδικά το ντοπαμινεργικό σύστημα μπορεί να είναι πιο σχετικός παράγοντας.

Πρωτογενή γλοία από ποντίκια WT και miR-29b2/c KO καλλιεργήθηκαν για τη διερεύνηση των υποκείμενων μηχανισμών. Η θεραπεία με MPP συν αύξησε την έκφραση του GDNF και μείωσε την έκφραση της IL-1 στα μικτά γλοία με έλλειψη miR-29b2/c. Το MPP plus αύξησε επίσης την έκφραση των προφλεγμονωδών γονιδίων σε αστροκύτταρα WT αλλά όχι σε αστροκύτταρα με έλλειψη miR- 29b2/c. Ομοίως, τα μεταλλαγμένα αστροκύτταρα παρήγαγαν λιγότερο ΝΟ σε σύγκριση με τα αστροκύτταρα WT αφού εκτέθηκαν στο ρυθμισμένο μέσο κυττάρων BV2 που υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με LPS. Στην πρωτογενή καλλιέργεια μικρογλοίας, σε σύγκριση με τους μάρτυρες WT που έλαβαν θεραπεία με LPS, οι μεταγραφές της αντιφλεγμονώδους κυτοκίνης IL-10 και του νευροτροφικού παράγοντα IGF-1 ήταν σημαντικά υψηλότερες και οι μεταγραφές της προφλεγμονώδους κυτοκίνης IL{ {15}} μειώθηκε σε μικρογλοία miR-29b2/c KO με LPS. Τα επίπεδα ΝΟ μειώθηκαν σε miR-29b2/c KO μικρογλοία κατά την έναρξη και μετά τη δηλητηρίαση με LPS. Μελέτες έχουν δείξει ότι τα miR-29 και πολλά προβλεπόμενα γονίδια-στόχοι εμπλέκονται στις μεταβολικές διεργασίες [34, 39-41]. Ως βασικός ρυθμιστής, η AMPK έχει αποδειχθεί ότι είναι προστατευτική στην PD όταν ενεργοποιείται [42]. Η ενεργοποίηση της AMPK διεγείρει το Sirtuin 1 και αναστέλλει την ενεργοποίηση του NF-κB και τα κατάντη φλεγμονώδη γονίδια-στόχους έμμεσα [43]. Παρατηρήσαμε ότι το επίπεδο πρωτεΐνης φωσφορυλιωμένης-AMPK και η αναλογία p-AMPK προς AMPK ρυθμίστηκαν προς τα πάνω σε αστροκύτταρα miR- 29b2/c KO που έλαβαν LCM και MPP συν αγωγή αντίστοιχα. Το επίπεδο πρωτεΐνης COX-2 μειώθηκε σε μεταλλαγμένα αστροκύτταρα που υποβλήθηκαν σε αγωγή με LCM σε σύγκριση με τα αστροκύτταρα WT. Κατά την έναρξη, η δραστηριότητα AMPK ήταν αυξημένη σε miR-29b2/c KO μικρογλοία. Η ποσότητα της πρωτεΐνης COX-2 μειώθηκε σημαντικά σε miR-29b2/c KO μικρογλοία σε σύγκριση με μάρτυρες WT μετά τη θεραπεία με LPS. Υπό τη θεραπεία LPS, η αναλογία p-p65 και p65 μειώθηκε ελαφρώς στη μεταλλαγμένη μικρογλοία, υποδηλώνοντας ένα μετριασμένο μονοπάτι σηματοδότησης NF-κB. Τα αποτελέσματά μας υποδεικνύουν ότι η ενισχυμένη δραστηριότητα AMPK και η μειωμένη φλεγμονώδης απόκριση στη γλοία προστατεύουν τη μέλαινα ραβδωτά οδό σε ποντικούς miR-29b2/c KO (Εικόνα 6G). Συμπερασματικά, το miR-29b2/c παίζει σημαντικό ρόλο στη γήρανση και τις βλάβες στο ντοπαμινεργικό σύστημα του μέλαινα ραβδωτού σώματος.

βιβλιογραφικές αναφορές

1. Braak H, Del Tredici K. Προσκεκλημένο άρθρο: Παθολογία νευρικού συστήματος στη σποραδική νόσο του Πάρκινσον. Νευρολογία. 2008; 70:1916–25.

2. Wang Q, Liu Y, Zhou J. Νευροφλεγμονή στη νόσο του Πάρκινσον και το δυναμικό της ως θεραπευτικός στόχος. Transl Neurodegener. 2015; 4:19.

3. Wang Z, Dong Η, Wang J, Huang Y, Zhang X, Tang Y, Li Q, Liu Z, Ma Y, Tong J, Huang L, Fei J, Yu M, et al. Προεπιβίωση και αντιφλεγμονώδεις ρόλοι του NF-κB c-Rel στα μοντέλα της νόσου του Πάρκινσον. Redox Biol. 2020; 30:101427.

4. Zhu S, Wu H, Wu F, Nie D, Sheng S, Mo YY. Το MicroRNA- 21 στοχεύει τα ογκοκατασταλτικά γονίδια σε εισβολή και μετάσταση. Cell Res. 2008; 18:350–59.

5. Qiu L, Zhang W, Tan EK, Zeng L. Αποκρυπτογράφηση της λειτουργίας και της ρύθμισης των microRNAs στη νόσο του Alzheimer και στη νόσο του Πάρκινσον. ACS Chem Neurosci. 2014; 5:884–94.

6. Papadopoulou AS, Serneels L, Achsel T, Mandemakers W, Callaerts-Vegh Z, Dooley J, Lau P, Ayoubi T, Radaelli E, Spinazzi M, Neumann M, Hébert SS, Silahtaroglu A, et al. Η ανεπάρκεια του συμπλέγματος miR-29a/b-1 οδηγεί σε αταξικά χαρακτηριστικά και παρεγκεφαλιδικές αλλοιώσεις σε ποντίκια. Neurobiol Dis. 2015; 73:275–88.

7. Hyun J, Choi SS, Diehl AM, Jung Y. Πιθανός ρόλος της σηματοδότησης Hedgehog και του microRNA-29 στην ηπατική ίνωση ποντικού με έλλειψη IKK. J ΜοΙ Histol. 2014; 45:103–12.

8. Qin W, Chung AC, Huang XR, Meng XM, Hui DS, Yu CM, Sung JJ, Lan HY. Η σηματοδότηση TGF-/Smad3 προάγει τη νεφρική ίνωση αναστέλλοντας το miR-29. J Am Soc Nephrol. 2011; 22:1462–74.

9. Xiao J, Meng XM, Huang XR, Chung AC, Feng YL, Hui DS, Yu CM, Sung JJ, Lan HY. Το miR-29 αναστέλλει την επαγόμενη από τη βλεομυκίνη πνευμονική ίνωση σε ποντίκια. Mol Ther. 2012; 20:1251–60.

10. Steiner DF, Thomas MF, Hu JK, Yang Z, Babiarz JE, Allen CD, Matloubian M, Blelloch R, Ansel KM. Το MicroRNA-29 ρυθμίζει τους μεταγραφικούς παράγοντες T-box και την παραγωγή ιντερφερόνης σε βοηθητικά Τ κύτταρα. Ασυλία, ανοσία. 2011; 35: 169–81.

11. Dooley J, Garcia-Perez JE, Sreenivasan J, Schlenner SM, Vangoitsenhoven R, Παπαδοπούλου AS, Tian L, Schonefeldt S, Serneels L, Deroose C, Staats KA, Van der Schueren B, De Strooper B, et al. Η οικογένεια microRNA-29 υπαγορεύει την ισορροπία μεταξύ ομοιοστατικού και παθολογικού χειρισμού γλυκόζης στον διαβήτη και την παχυσαρκία. Διαβήτης. 2016; 65:53–61.

12. Adoro S, Cubillos-Ruiz JR, Chen X, Deruaz M, Vrbanac VD, Song M, Park S, Murooka TT, Dudek TE, Luster AD, Tager AM, Streeck H, Bowman B, et al. Η IL-21 επάγει αντιιικό microRNA-29 σε CD4 Τ κύτταρα για να περιορίσει τη μόλυνση από τον HIV-1. Nat Commun. 2015; 6:7562.

13. Ma F, Xu S, Liu X, Zhang Q, Xu X, Liu M, Hua M, Li N, Yao H, Cao X. Το microRNA miR-29 ελέγχει τις εγγενείς και προσαρμοστικές ανοσολογικές αποκρίσεις σε ενδοκυτταρική βακτηριακή μόλυνση στοχεύοντας την ιντερφερόνη- . Nat Immunol. 2011; 12:861–69.

14. Jovičić A, Roshan R, Moisoi N, Pradervand S, Moser R, Pillai B, Luthi-Carter R. Ολοκληρωμένες αναλύσεις έκφρασης των εξειδικευμένων για τον τύπο νευρικών κυττάρων miRNAs προσδιορίζουν νέους καθοριστικούς παράγοντες της προδιαγραφής και της διατήρησης των νευρωνικών φαινοτύπων. J Neurosci. 2013; 33:5127-37.

15. Ouyang YB, Xu L, Lu Y, Sun X, Yue S, Xiong XX, Giffard RG. Το εμπλουτισμένο με αστροκύτταρα miR-29a στοχεύει το PUMA και μειώνει την ευπάθεια των νευρώνων στην ισχαιμία του πρόσθιου εγκεφάλου. Γκλιά. 2013; 61:1784–94.

16. Shioya M, Obayashi S, Tabunoki H, Arima K, Saito Y, Ishida T, Satoh J. Ανώμαλη έκφραση microRNA στους εγκεφάλους νευροεκφυλιστικών ασθενειών: miR-29α μειωμένο στους εγκεφάλους της νόσου Alzheimer στοχεύει τον νευρώνα πλοηγό 3. Neuropathol Appl Neurobiol. 2010; 36:320–30.

17. Hébert SS, Horré K, Nicolaï L, Papadopoulou AS, Mandemakers W, Silahtaroglu AN, Kauppinen S, Delacourte A, De Strooper B. Απώλεια του συμπλέγματος microRNA miR-29a/b-1 σε σποραδικά Η νόσος Alzheimer συσχετίζεται με αυξημένη έκφραση BACE1/βήτα-σεκρετάσης. Proc Natl Acad Sci ΗΠΑ. 2008; 105:6415-20.

18. Johnson R, Zuccato C, Belyaev ND, Guest DJ, Cattaneo E, Buckley NJ. Ένα μονοπάτι γονιδιακής δυσρύθμισης που βασίζεται σε microRNA στη νόσο του Huntington. Neurobiol Dis. 2008; 29:438–45.

19. Packer AN, Xing Y, Harper SQ, Jones L, Davidson BL. Το διλειτουργικό microRNA miR-9/miR-9* ρυθμίζει το REST και το CoREST και ρυθμίζεται προς τα κάτω στη νόσο του Huntington. J Neurosci. 2008; 28:14341–46.

20. Nolan K, Mitchem MR, Jimenez-Mateos EM, Henshall DC, Concannon CG, Prehn JH. Αυξημένη έκφραση του microRNA-29a σε ποντικούς ALS: λειτουργική ανάλυση της αναστολής του. J Mol Neurosci. 2014; 53:231–41.

21. Roshan R, Shridhar S, Sarangdhar MA, Banik A, Chawla M, Garg M, Singh VP, Pillai B. Η ειδική για τον εγκέφαλο αναστολή του miR-29 οδηγεί σε θάνατο νευρωνικών κυττάρων και αταξία σε ποντίκια. RNA. 2014; 20:1287–97.

22. Khanna S, Rink C, Ghoorkhanian R, Gnyawali S, Heigel M, Wijesinghe DS, Chalfant CE, Chan YC, Banerjee J, Huang Y, Roy S, Sen CK. Η απώλεια του miR-29b μετά από οξύ ισχαιμικό εγκεφαλικό συμβάλλει στον θάνατο των νευρικών κυττάρων και στο μέγεθος του εμφράγματος. J Cereb Blood Flow Metab. 2013; 33:1197-206.

23. Shi G, Liu Y, Liu T, Yan W, Liu X, Wang Y, Shi J, Jia L. Το αυξημένο miR-29b προάγει τον θάνατο των νευρωνικών κυττάρων αναστέλλοντας το Bcl2L2 μετά από ισχαιμική εγκεφαλική βλάβη. Exp Brain Res. 2012; 216:225–30.

24. Bai X, Tang Y, Yu M, Wu L, Liu F, Ni J, Wang Z, Wang J, Fei J, Wang W, Huang F, Wang J. Downregulation of ορού αίματος microRNA οικογένειας 29 σε ασθενείς με νόσο του Parkinson . Sci Rep. 2017; 7:5411.

25. Han L, Tang Y, Bai X, Liang X, Fan Y, Shen Y, Huang F, Wang J. Συσχέτιση της οικογένειας microRNA-29 ορού με γνωστική εξασθένηση στη νόσο του Πάρκινσον. Aging (Albany NY). 2020; 12:13518–28.

26. Chinta SJ, Woods G, Demaria M, Rane A, Zou Y, McQuade A, Rajagopalan S, Limbad C, Madden DT, Campisi J, Andersen JK. Η κυτταρική γήρανση προκαλείται από την περιβαλλοντική νευροτοξίνη Paraquat και συμβάλλει στη νευροπαθολογία που συνδέεται με τη νόσο του Πάρκινσον. Cell Rep. 2018; 22:930–40.

27. Willard AM, Bouchard RS, Gittis AH. Διαφορική υποβάθμιση των κινητικών ελλειμμάτων κατά τη σταδιακή μείωση της ντοπαμίνης με 6-υδροξυντοπαμίνη σε ποντίκια. Νευροεπιστήμη. 2015; 301:254-67.

28. Kam TI, Mao X, Park H, Chou SC, Karuppagounder SS, Umanah GE, Yun SP, Brahmachari S, Panicker N, Chen R, Andrabi SA, Qi C, Poirier GG, et al. Η πολυ(ADP-ριβόζη) οδηγεί τον νευροεκφυλισμό της παθολογικής συνουκλεΐνης στη νόσο του Πάρκινσον. Επιστήμη. 2018; 362:eaat8407.

29. Huang D, Xu J, Wang J, Tong J, Bai X, Li H, Wang Z, Huang Y, Wu Y, Yu M, Huang F. Dynamic Changes in the Nigrostriatal Pathway in the MPTP Mouse Model of Parkinson's Disease. Η νόσος του Πάρκινσον. 2017; 2017:9349487.

30. Ugalde AP, Ramsay AJ, de la Rosa J, Varela I, Mariño G, Cadiñanos J, Lu J, Freije JM, López-Otín C. Η γήρανση και η απόκριση χρόνιας βλάβης στο DNA ενεργοποιούν μια ρυθμιστική οδό που περιλαμβάνει το miR{{2} } και p53. EMBO J. 2011; 30:2219–32.

31. Hu Z, Klein JD, Mitch WE, Zhang L, Martinez I, Wang XH. Το MicroRNA-29 προκαλεί κυτταρική γήρανση στον γερασμένο μυ μέσω πολλαπλών οδών σηματοδότησης. Aging (Albany NY). 2014; 6:160–75.

32. Fenn AM, Smith KM, Lovett-Racke AE, Guerau-deArellano M, Whitacre CC, Godbout JP. Το αυξημένο microRNA 29b στον ηλικιωμένο εγκέφαλο συσχετίζεται με τη μείωση του αυξητικού παράγοντα που μοιάζει με ινσουλίνη-1 και του συνδέτη φρακταλκίνης. Neurobiol Aging. 2013; 34:2748-58.

33. Wang R, Yang Y, Wang H, He Y, Li C. Το MiR-29c προστατεύει από τη φλεγμονή και την απόπτωση στο μοντέλο της νόσου του Πάρκινσον in vivo και in vitro στοχεύοντας το SP1. Clin Exp Pharmacol Physiol. 2020; 47:372–82.

34. Caravia XM, Fanjul V, Oliver E, Roiz-Valle D, Morán- Álvarez A, Desdín-Micó G, Mittelbrunn M, Cabo R, Vega JA, Rodríguez F, Fueyo A, Gómez M, LoboGonzález M, Ο ρυθμιστικός άξονας microRNA-29/PGC1 είναι κρίσιμος για τον μεταβολικό έλεγχο της καρδιακής λειτουργίας. PLoS Biol. 2018; 16:e2006247.

35. Varela I, Cadiñanos J, Pendás AM, Gutiérrez-Fernández A, Folgueras AR, Sánchez LM, Zhou Z, Rodríguez FJ, Stewart CL, Vega JA, Tryggvason K, Freije JM, López Accounted2. Η πρωτεάση συνδέεται με την ενεργοποίηση σηματοδότησης p53. Φύση. 2005; 437:564–68.

36. Park SY, Lee JH, Ha M, Nam JW, Kim VN. Τα miR-29 miRNA ενεργοποιούν το p53 στοχεύοντας τα p85 alpha και CDC42. Nat Struct ΜοΙ Biol. 2009; 16:23–29.

37. Οι Martinez I, Cazalla D, Almstead LL, Steitz JA, DiMaio D. miR-29 και miR-30 ρυθμίζουν την έκφραση B-Myb κατά τη διάρκεια της κυτταρικής γήρανσης. Proc Natl Acad Sci ΗΠΑ. 2011; 108:522-27.

38. Collier TJ, Kanaan NM, Kordower JH. Γήρανση και νόσος του Πάρκινσον: Διαφορετικές όψεις του ίδιου νομίσματος; Mov Disord. 2017; 32:983–90.

39. Massart J, Sjögren RJ, Lundell LS, Mudry JM, Franck N, O'Gorman DJ, Egan B, Zierath JR, Krook A. Αλλαγή miR- 29 Έκφραση στον διαβήτη τύπου 2 επηρεάζει τη γλυκόζη και τον μεταβολισμό των λιπιδίων στον σκελετικό Μυς. Διαβήτης. 2017; 66:1807–18.

40. Dooley J, Lagou V, Garcia-Perez JE, Himmelreich U, Liston A. miR-29α-ανεπάρκεια δεν τροποποιεί την πορεία του καρκινώματος του παγκρέατος ποντικού. Oncotarget. 2017; 8:26911-17.

41. Kwon JJ, Factora TD, Dey S, Kota J. A Systematic Review of miR-29 in Cancer. Mol Ther Oncolytics. 2018; 12:173–94.

42. Lu M, Su C, Qiao C, Bian Y, Ding J, Hu G. Η μετφορμίνη αποτρέπει τον θάνατο του ντοπαμινεργικού νευρώνα σε μοντέλο ποντικιού που προκαλείται από MPTP/PI της νόσου του Πάρκινσον μέσω αυτοφαγίας και μιτοχονδριακής εκκαθάρισης ROS. Int J Neuropsychopharmacol. 2016; 19:pyw047.

43. Salminen A, Hyttinen JM, Kaarniranta K. Η ενεργοποιημένη με AMP πρωτεϊνική κινάση αναστέλλει τη σηματοδότηση και τη φλεγμονή του NF-κB: επιπτώσεις στη διάρκεια της υγείας και στη διάρκεια ζωής. J Mol Med (Berl). 2011; 89:667-76.

Xiaochen Bai 1,2, Xiaoshuang Zhang 1, Rong Fang 1, Jinghui Wang 1, Yuanyuan Ma 1, Zhaolin Liu 1, Hongtian Dong 1, Qing Li 1, Jingyu Ge 1, Mei Yu 1, Jian Fei 3,4, Ruilin Sun 4, Fang Huang 1

1. Department of Translational Neuroscience, Jing'an District Centre Hospital of Shanghai, State Key Laboratory of Medical Neurobiology and MOE Frontiers Center for Brain Science, Institutes of Brain Science, Fudan University, Shanghai 200032, China

2. Department of Rehabilitation Medicine, Shanghai Jiao Tong University Affiliated Sixth People's Hospital, Shanghai 200233, China

3. School of Life Science and Technology, Tongji University, Shanghai 200092, China

4. Shanghai Engineering Research Center for Model Organisms, Shanghai Model Organisms Center, INC, Shanghai 201203, Κίνα