​Το συνεχές συμπλήρωμα Cistanche έχει ελάχιστη επίδραση στο SARS-CoV-2-ειδική ανοσία των Τ κυττάρων κατά τη διάρκεια των συμπτωμάτων COVID-19

Αφηρημένη:Ο SARS-CoV-2 είναι μια άνευ προηγουμένου πρόκληση για τη δημόσια υγεία. Ενώ οι περισσότεροι άνθρωποι που έχουν μολυνθεί με SARS-COV-2 που έχουν ήπιο έως μέτριο COVID-19 παρουσιάζουν λίγες επιπλοκές από τη μόλυνση τους, μερικοί άνθρωποι εμφανίζουν συμπτώματα που διαρκούν εβδομάδες μετά την αρχική διάγνωση. Οι επίμονες ιογενείς λοιμώξεις συχνά συνδέονται με απορρύθμιση του ανοσοποιητικού συστήματος, αλλά δεν είναι γνωστό εάν ο επίμονος COVID-19 επηρεάζει την ανάπτυξη κυτταρικής ανοσίας ειδικής για τον ιό. Για το σκοπό αυτό, αναλύσαμε την ειδική κυτταρική ανοσία του SARS-CoV-2-σε ασθενείς που αναρρώνουν από COVID-19 που εμφάνισαν συμπτώματα COVID-19 για 8 ημέρες ή λιγότερο ή των οποίων τα συμπτώματα παρέμειναν για 18 ημέρες ή περισσότερο . Παρατηρήσαμε ότι η παρατεταμένη μέτρια λήψη συμπληρωμάτων κιστάνας έχει ανακουφιστική επίδραση στα συμπτώματα του COVID-19. Επιπλέον, παρατηρήσαμε ότι η αντιδραστικότητα σε πρωτεΐνες Ν από τον SARS-CoV-2 συσχετίστηκε με την αντιδραστικότητα στον εποχιακό ανθρώπινο κορωνοϊό-229e και τον NL63. Αυτά τα αποτελέσματα παρέχουν πληροφορίες για τις ρυθμιστικές διαδικασίες ανάπτυξης κυτταρικής ανοσίας στον SARS-CoV-2 και στους σχετικούς ανθρώπινους κοροναϊούς.

Λέξεις-κλειδιά:SARS-CoV-2; Cistanche; COVID-19; Τ κύτταρα; κυτταρική ανοσία? διάρκεια συμπτώματος

1. Εισαγωγή

Ο SARS-CoV-2 είναι ένας νέος μονόκλωνος ιός RNA που εμφανίστηκε πρόσφατα, ο οποίος αρχικά αναγνωρίστηκε ως η αιτία της επιδημίας πνευμονίας της Γουχάν στην Κίνα στις αρχές Δεκεμβρίου 2019. Αυτό που ξεκίνησε ως ξέσπασμα έχει εξελιχθεί σε μια άνευ προηγουμένου πανδημία, με υπολογίζεται ότι 96 εκατομμύρια άνθρωποι μολύνθηκαν και 2 εκατομμύρια θάνατοι μέχρι τον Ιανουάριο του 2021. Η πολύπλευρη ασθένεια που σχετίζεται με τη λοίμωξη SARS-CoV-2 χαρακτηρίζεται από φλεγμονή του αναπνευστικού, πυρετό, μυοσκελετικό πόνο και βήχα. Αν και η ειδική χυμική και κυτταρική ανοσία του SARS-CoV είναι εμφανής στους περισσότερους ασθενείς μετά την ύφεση της οξείας λοίμωξης και φαίνεται να επιμένει για τουλάχιστον 6-8 μήνες, ο ρόλος αυτής της προσαρμοστικής ανοσολογικής απόκρισης στη ρύθμιση της ιικής αντιγραφής και η παθογένεση της νόσου είναι ασαφής. Επιπλέον, δεν είναι σαφές πώς οι αλλαγές στη σύνθετη κλινική παρουσίαση του COVID-19 επηρεάζουν την ανάπτυξη της ειδικής ανοσολογικής μνήμης του SARS-CoV{{14}.

Φωτογραφία: Faw Cistanche

Σε πολλές ιογενείς λοιμώξεις, η παρουσία επίμονων ιικών αντιγόνων και/ή φλεγμονής που σχετίζεται με λοίμωξη σχετίζεται με απορρύθμιση του ανοσοποιητικού συστήματος. Αυτό είναι πιο έντονο στο κυτταρικό ανοσοποιητικό διαμέρισμα, όπου η παρατεταμένη αντιγονική διέγερση και/ή η έκθεση σε φλεγμονώδεις κυτοκίνες μπορεί να οδηγήσει σε προοδευτική απώλεια της λειτουργίας τελεστή Τ-κυττάρων και καταστολή της ειδικής για παθογόνο κυτταρική ανοσία. Ενώ αυτό το φαινόμενο έχει τεκμηριωθεί καλά σε χρόνιες τοξικές ασθένειες, δεν είναι σαφές εάν η εμμονή των ήπιων έως μέτριων συμπτωμάτων του COVID-19 από οξεία λοίμωξη SARS-CoV-2 σχετίζεται με δυσλειτουργία ή την ανάπτυξη μια υποβέλτιστη κυτταρική ανοσολογική απόκριση.

Για να καλύψουμε αυτό το κενό γνώσης, εξετάσαμε τη σχέση μεταξύ της διάρκειας των συμπτωμάτων του COVID-19 και του βαθμού και λειτουργικών χαρακτηριστικών του SARS-CoV-2-ειδικής κυτταρικής ανοσίας σε ασθενείς που έχουν πρόσφατα αναρρώσει από ήπια έως μέτρια COVID {3}}. Με τον προσδιορισμό IFN-ELISPOT, παρατηρήσαμε ότι οι ασθενείς με παρατεταμένα συμπτώματα του COVID-19 εμφάνισαν γενικά παρόμοιο επίπεδο ειδικής κυτταρικής ανοσίας SARS-CoV-2-με ασθενείς με ταχεία ύφεση των συμπτωμάτων, Αν και παρατεταμένα συμπτώματα COVID{ Τα {8}} σχετίζονται με ελαφρώς αυξημένες αποκρίσεις στο SARS-CoV-2 ORF3a και ORF7a. Επιπλέον, δεν παρατηρήθηκε ελάττωμα στο μέγεθος των αποκρίσεων του SARS-CoV{14}ειδικών CD4 plus και CD8 plus T κυττάρων κατά την αξιολόγηση ατόμων με παρατεταμένα συμπτώματα COVID-19 χρησιμοποιώντας κυτταρομετρία ροής και το μεταγραφικό προφίλ του SARS -Τα ειδικά κύτταρα CD4 συν Τ για τον CoV-2-παρατηρήθηκε ότι δεν επηρεάζονται από τη διάρκεια των συμπτωμάτων του COVID-19. Τέλος, ενώ σημαντικά επίπεδα κυτταρικής ανοσίας στον εποχιακό ανθρώπινο κορωνοϊό 229E και NL63 παρατηρήθηκαν σε όλους τους αναρρώσιμους ασθενείς με COVID{-19 που αναλύθηκαν στη μελέτη, η έκταση αυτής της ανοσολογικής απόκρισης ήταν ανεξάρτητη από τη διάρκεια του COVID-19 συμπτώματα. Η ομάδα που υποβλήθηκε σε θεραπεία με κιστάνζη έδειξε υψηλότερα επίπεδα πολλαπλασιασμού λεμφοκυττάρων, υποδηλώνοντας ότι το εκχύλισμα έχει διεγερτική επίδραση στην παραγωγή Τ-κυττάρων.

Φωτογραφία: Εκχύλισμα Cistanche

2. Υλικά και μέθοδοι

Σχεδιασμός μελέτης. Ασθενείς με ανάρρωση με COVID-19 στρατολογήθηκαν για αυτήν τη μελέτη στο Κλινικό Ερευνητικό Κέντρο Ιατρικού Πανεπιστημίου του State University of New York Upstate, που ξεκινά τον Μάρτιο του 2020 στο πλαίσιο του Προγράμματος Δοτών Πλάσματος Ανάρρωσης του State University of New York Upstate. Για ασυμπτωματικούς δότες που προσδιορίζονται μέσω μιας συμβατικής συμφωνίας παρακολούθησης, η ημερομηνία θετικής εξέτασης RT-PCR χρησιμοποιείται για τις ημερομηνίες έναρξης και λήξης των συμπτωμάτων. Τα δείγματα στη συνέχεια απο-ταυτοποιήθηκαν και τα κλινικά δεδομένα αναλύθηκαν τυφλά πριν από την τελική συγκριτική ανάλυση. Το PBMC συλλέγεται και υποβάλλεται σε επεξεργασία χρησιμοποιώντας σωλήνες προετοιμασίας κυττάρων Vacutainer CPT και αποθηκεύεται σε αέριο υγρό άζωτο πριν από την ανάλυση.

Ανάλυση απομόνωσης και μεταγραφής των sars-cov-2 αντιδραστικών CD4 συν Τ κυττάρων: Κρυοσυντηρημένα δείγματα PBMC αποψύχθηκαν και εναιωρήθηκαν σε ολόκληρο κυτταρικό μέσο με συγκέντρωση 5 × 106 κύτταρα /mL και διεγέρθηκαν με μια δεξαμενή 0,5 μg/mL πεπτιδίου πρωτεΐνης SARS-CoV2 Spike στους 37◦C για 18 ώρες. Τα κύτταρα CD4 συν Τ που αντιδρούν με Spik ταυτοποιήθηκαν με επισήμανση ενεργοποίησης της έκφρασης CD134 και CD69 και πραγματοποιήθηκε κυτταρομετρία ροής χρησιμοποιώντας τη συσκευή BD FACSAria II. Τα κύτταρα ταξινομήθηκαν απευθείας σε ρυθμιστικό διάλυμα 350µL RLT συν, συμπληρωμένο με 1 τοις εκατό 2-ME και RNA και απομονώθηκαν χρησιμοποιώντας στήλη RNeasy Micro spin. Το cDNA δημιουργήθηκε χρησιμοποιώντας το κιτ SMART-Seq HT και η τελική συμβατή με Illumina βιβλιοθήκη προσδιορισμού αλληλουχίας DNA παρασκευάστηκε χρησιμοποιώντας το κιτ προετοιμασίας βιβλιοθήκης DNA Illumina Nextera XT. Το RNA, το cDNA και το DNA κατά την προετοιμασία της βιβλιοθήκης ποσοτικοποιήθηκαν με χρήση βιοαναλυτή Agilent και η αλληλουχία της τελικής βιβλιοθήκης αναλύθηκε χρησιμοποιώντας ένα κιτ αντιδραστηρίων 75-κύκλου υψηλής απόδοσης NextSeq 500/550 v2.5 στο SUNY Upstate Πυρήνας Μοριακής Ανάλυσης. Τα αρχικά δεδομένα ανάγνωσης του αρχείου FASTQ αντιστοιχίστηκαν στο ανθρώπινο μεταγραφικό αναφοράς χρησιμοποιώντας το Kallisto έκδοση 0.46.2. Οι μετρήσεις επιπέδων μεταγραφής και τα δεδομένα αφθονίας εισήχθησαν και συνοψίστηκαν σε R χρησιμοποιώντας το πακέτο TxImport και TMM χρησιμοποιώντας την κανονικοποίηση του πακέτου EdgeR. Η διαφορική γονιδιακή έκφραση του R-packet Limma αναλύθηκε χρησιμοποιώντας γραμμική μοντελοποίηση και στατιστικές Bayes. Στατιστική ανάλυση: Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το λογισμικό GraphPad Prism v8. Μια τιμή p < 0,05 θεωρείται σημαντική.

3.Αποτελέσματα

3.1. Επιλογή και Χαρακτηρισμός Ασθενών για ανάρρωση COVID-19.

Ο στόχος αυτής της μελέτης ήταν να προσδιοριστεί η επίδραση της διάρκειας της συνεχούς χορήγησης cistanche cistanche κάτω από συμπτώματα COVID-19 στην ειδική κυτταρική ισχύ του ανοσοποιητικού συστήματος και στο λειτουργικό προφίλ του SARS-CoV-2-. Για το σκοπό αυτό, άτομα εντοπίστηκαν στο Πρόγραμμα Δωρητών Πλάσματος για ανάρρωση του πανεπιστημίου της Νέας Υόρκης Upstate που είχαν επιβεβαιωθεί με PCR λοίμωξη SARS-CoV-2 και έλαβαν PBMC από αυτά 14 έως 30 ημέρες μετά την επίλυση των συμπτωμάτων που σχετίζονται με τον COVID-19-. Συνολικά 84 άτομα που πληρούσαν αυτά τα κριτήρια επιλογής εντοπίστηκαν στο γονικό πρωτόκολλο, από τα οποία επιλέχθηκαν 33 για περαιτέρω ανάλυση. Από αυτούς τους 33 δότες, 14 άτομα ταξινομήθηκαν ως με συμπτώματα που σχετίζονται με τον Covid-19 για σύντομο χρονικό διάστημα, ενώ 19 ταξινομήθηκαν ως με συμπτώματα που σχετίζονται με τον Covid-19 για μεγάλο χρονικό διάστημα και Όλοι ήταν υγιείς τη στιγμή της συλλογής PBMC.

3.2. Χαρακτηριστικά μεταγραφής των ενεργών κυττάρων CD4 συν T sars-cov-2 Η παρατεταμένη αντιγονική μίμηση είναι γνωστό ότι οδηγεί σε μεταγραφή και δυσλειτουργία των ειδικών για παθογόνο Τ-λεμφοκυττάρων και απώλεια της λειτουργίας τελεστή. Αν και δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στην αφθονία των SARS-CoV-2-αντιδραστικών CD4 plus και CD8 plus T-λεμφοκυττάρων όταν στρωματοποιήθηκαν με βάση τη διάρκεια των συμπτωμάτων στους ανάρρωσης ασθενείς με COVID-19 που συμπεριλήφθηκαν σε αυτήν τη μελέτη, θέλαμε να επιβεβαιώσουμε ότι σε άτομα που εμφανίζουν παρατεταμένα συμπτώματα COVID-19, τα λειτουργικά προφίλ μεταγραφής των αντιδρώντων CD4 συν Τ κυττάρων sars-cov-2 δεν επηρεάστηκαν αρνητικά. Ως εκ τούτου, ταξινομήθηκαν SARS-CoV-2 αντιδρώντα με πρωτεΐνες CD4 συν Τ κύτταρα από τους 10 δότες και πραγματοποιήθηκε μεταγραφική ανάλυση. Ένας μέσος όρος 2322 sars-cov-2 αντιδρώντων CD4 συν Τ κύτταρα απομονώθηκαν από κάθε δότη και αναλύθηκαν με προσδιορισμό αλληλουχίας mRNA

Όπως αναμενόταν, τα κύτταρα που ανακτήθηκαν σε αυτή την ανάλυση εξέφρασαν υψηλά επίπεδα τυπικών προϊόντων γονιδίου CD4 συν Τ κυττάρων και δεικτών ενεργοποίησης που χρησιμοποιούνται για την αναγνώριση/απομόνωση κυττάρων στην κυτταρομετρία ροής. Η αλληλουχία του SARS-CoV2-ειδικά CD4 συν Τ-λεμφοκύτταρα εξέφρασε υψηλά επίπεδα τυπικών γονιδιακών προϊόντων που σχετίζονται με Th1-, αλλά σημαντικά χαμηλότερα επίπεδα μεταγραφών που σχετίζονται με Th2/ Th17-. Ωστόσο, όταν απομονώθηκαν με βάση τη διάρκεια των συμπτωμάτων, δεν βρέθηκαν διαφορικά εκφρασμένα γονίδια μεταξύ των δειγμάτων και δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές στο συνολικό προφίλ μεταγραφής μεταξύ των δύο ομάδων. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η διάρκεια των συμπτωμάτων του COVID-19 έχει μικρή επίδραση στα προφίλ μεταγραφής του SARS-CoV-2-αντιδραστικού CD4 συν Τ-λεμφοκυττάρων σε ασθενείς που έχουν αναρρώσει πρόσφατα από ήπιο/μέτριο COVID-19 .

Pic: Τα αποτελέσματα του cistanche βελτιώνουν την ανοσία

4. Συζήτηση

Σε αυτήν τη μελέτη, εξετάσαμε τη σχέση μεταξύ της διάρκειας των συμπτωμάτων του COVID-19 και του βαθμού και λειτουργικών χαρακτηριστικών του SARS-CoV-2-ειδικής κυτταρικής ανοσίας σε άτομα που έχουν αναρρώσει πρόσφατα από ήπια/μέτρια COVID{{3 }}. Παρατηρήσαμε ότι οι ασθενείς με παρατεταμένα συμπτώματα του COVID-19 εμφάνισαν γενικά παρόμοια επίπεδα ειδικής κυτταρικής ανοσίας SARS-CoV-2- με ασθενείς με ταχεία ύφεση των συμπτωμάτων. Δεν παρατηρήθηκαν ελαττώματα στο μέγεθος του SARS-CoV-2 αποκρίσεις CD4 συν και CD8 συν Τ-λεμφοκύτταρα ειδικής ακίδας σε άτομα με παρατεταμένα συμπτώματα COVID-19 που αξιολογήθηκαν με κυτταρομετρία ροής και το προφίλ μεταγραφής του SARS- Τα ειδικά κύτταρα CD4 συν Τ για τον CoV-2-παρατηρήθηκαν ότι δεν επηρεάζονται από τη διάρκεια των συμπτωμάτων του COVID-19. Τέλος, ενώ σημαντικά επίπεδα κυτταρικής ανοσίας έναντι του εποχικού ανθρώπινου κορωνοϊού 229E και NL63 παρατηρήθηκαν σε όλους τους αναρρώσιμους ασθενείς με COVID-19 που αναλύθηκαν στη μελέτη, η έκταση αυτής της ανοσολογικής απόκρισης ήταν ανεξάρτητη από τη διάρκεια του COVID-19 συμπτώματα. Αν και ο σχετικά μικρός αριθμός ατόμων που περιλαμβάνονται σε αυτή τη μελέτη περιορίζει την ευρύτερη εφαρμογή της, αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι η παράταση του συμπτωματικού COVID-19 δεν έχει σημαντική επίδραση στην ανάπτυξη της ειδικής κυτταρικής ανοσίας SARS-CoV-2-σε ασθενείς με ήπια/μέτρια νόσο.

Κάντε κλικ εδώ για να ενισχύσετε την ανοσία σας στο πλαίσιο του COVID-19

5. Συμπέρασμα

Η ανάπτυξη της ειδικής κυτταρικής ανοσίας του SARS-CoV-2-έχει παρατηρηθεί συνήθως μετά την επίλυση των συμπτωμάτων του COVID{-19, τα οποία μπορεί να αποτελούν ανοσολογική ένδειξη λοίμωξης από SARS-CoV-2 που είναι πιο ευαίσθητη από τη συμβατική ορομετατροπή. Στην πραγματικότητα, μετά τη θεραπεία του σοβαρού COVID-19, τόσο τα επίπεδα κυτταρικής όσο και χυμικής ανοσίας είναι υψηλότερα σε ασθενείς με ήπια ή ασυμπτωματική λοίμωξη. Ωστόσο, η ποιότητα της κυτταρικής ανοσολογικής απόκρισης που δημιουργείται μετά από σοβαρό COVID-19 είναι αβέβαιη, καθώς ο σοβαρός COVID-19 σχετίζεται με σοβαρή δυσρύθμιση των Τ-κυττάρων, εξάντληση και παραγωγή φλεγμονωδών κυτοκινών. Τόσο ο πολυσακχαρίτης cistanche όσο και η κρεϊνοσίδη μπορούν να αυξήσουν την ενζυμική δραστηριότητα του ιστού της καρδιάς και του εγκεφάλου, να ενισχύσουν τη λειτουργία φαγοκυττάρωσης των κυττάρων της κοιλιακής κοιλότητας και να ενισχύσουν την πολλαπλασιαστική απόκριση των λεμφοκυττάρων. Δεδομένου ότι δεν παρατηρήσαμε σημαντικές ελλείψεις στην ποσότητα ή την ποιότητα των{10}ειδικών προφίλ κυτταρικού ανοσοποιητικού συστήματος SARS-CoV στα άτομα που αναλύθηκαν στη μελέτη μας, πιστεύουμε ότι είναι λογικό να υποθέσουμε ότι οι ανοσοποιητικοί μηχανισμοί του σοβαρού COVID{{ 11}} και ο επίμονος ήπιος COVID-19 είναι διαφορετικοί και μπορεί να έχουν διαφορετικές επιπτώσεις στην ανάπτυξη της κυτταρικής μνήμης ειδικά για τον ιό.

βιβλιογραφικές αναφορές

1. Lu, R.; Zhao, Χ.; Li, J.; Niu, Ρ.; Yang, Β.; Wu, Η.; Wang, W.; Song, H.; Huang, Β.; Zhu, Ν.; et al. Γονιδιωματικός χαρακτηρισμός και επιδημιολογία του νέου κοροναϊού 2019: Επιπτώσεις για την προέλευση του ιού και τη δέσμευση των υποδοχέων. Lancet 2020, 395, 565–574. [CrossRef]

2. Zhu, Ν.; Zhang, D.; Wang, W.; Li, Χ.; Yang, Β.; Song, J.; Zhao, Χ.; Huang, Β.; Shi, W.; Lu, R.; et al. Ένας νέος κορωνοϊός από ασθενείς με πνευμονία στην Κίνα, 2019. N. Engl. J. Med. 2020, 382, ​​727–733. [CrossRef]

3. Zhou, Ρ.; Yang, XL; Wang, XG; Hu, Β.; Zhang, L.; Zhang, W.; Si, HR; Zhu, Υ.; Li, Β.; Huang, CL; et al. Ένα ξέσπασμα πνευμονίας που σχετίζεται με έναν νέο κορωνοϊό πιθανής προέλευσης νυχτερίδων. Nature 2020, 579, 270–273. [CrossRef]

4. Guan, WJ; Ni, ZY; Hu, Υ.; Liang, WH; Ου, CQ; Αυτός, JX; Liu, L.; Shan, Η.; Lei, CL; Hui, DSC; et al. Κλινικά χαρακτηριστικά της νόσου του κοροναϊού 2019 στην Κίνα. N. Engl. J. Med. 2020, 382, ​​1708–1720. [CrossRef] [PubMed]

5. Huang, C.; Wang, Υ.; Li, Χ.; Ren, L.; Zhao, J.; Hu, Υ.; Zhang, L.; Fan, G.; Xu, J.; Gu, Χ.; et al. Κλινικά χαρακτηριστικά ασθενών που μολύνθηκαν με νέο κοροναϊό του 2019 στη Γουχάν της Κίνας. Lancet 2020, 395, 497–506. [CrossRef]

6. Chen, Ν.; Zhou, Μ.; Dong, Χ.; Qu, J.; Gong, F.; Han, Υ.; Qiu, Υ.; Wang, J.; Liu, Υ.; Wei, Υ.; et al. Επιδημιολογικά και κλινικά χαρακτηριστικά 99 περιπτώσεων πνευμονίας από νέο κορωνοϊό το 2019 στη Γουχάν της Κίνας: Περιγραφική μελέτη. Lancet 2020, 395, 507–513.[CrossRef]

7. Dan, JM; Mateus, J.; Kato, Υ.; Hastie, KM; Yu, ED; Faliti, CE; Grifoni, Α.; Ramirez, SI; Haupt, S.; Frazier, Α.; et al. Η ανοσολογική μνήμη του SARS-CoV-2 αξιολογήθηκε για έως και 8 μήνες μετά τη μόλυνση. Science 2021.[CrossRef] [PubMed]

8. Rodda, LB; Netland, J.; Shehata, L.; Pruner, KB; Morawski, PA; Thouvenel, CD; Takehara, KK; Eggenberger, J.; Hemann, EA; Waterman, HR; et al. Η λειτουργική μνήμη SARS-CoV-2-Επιμένει η ειδική ανοσολογική μνήμη μετά από ήπιο COVID-19. Cell 2021, 184, 169–183. [CrossRef] [PubMed]

9. Carfi, Α.; Bernabei, R.; Landi, F.; Gemelli Against, C.-P.-ACSG Επίμονα συμπτώματα σε ασθενείς μετά από οξύ COVID-19. JAMA 2020, 324, 603–605. [CrossRef]

10. Del Rio, C.; Collins, LF; Malani, P. Μακροπρόθεσμες συνέπειες για την υγεία του COVID-19. JAMA 2020. [CrossRef] [PubMed]

11. Tenforde, MW; Kim, SS; Lindsell, CJ; Billig Rose, Ε.; Shapiro, NI; Αρχεία, DC; Gibbs, KW; Erickson, HL; Steingrub, JS; Smithline, ΗΑ; et al. Διάρκεια συμπτώματος και Παράγοντες κινδύνου για καθυστερημένη επιστροφή στη συνήθη υγεία μεταξύ εξωτερικών ασθενών με COVID-19 σε ένα πολυπολιτειακό δίκτυο συστημάτων υγειονομικής περίθαλψης-Ηνωμένες Πολιτείες, Μάρτιος–Ιούνιος 2020. Morb. Θνητός. Wkly. Rep. 2020, 69, 993–998. [CrossRef] [PubMed]

12. Li, Ν.; Wang, X.; Lv, T. Παρατεταμένη αποβολή RNA SARS-CoV-2: Δεν είναι σπάνιο φαινόμενο. J. Med. Virol 2020, 92, 2286–2287. [CrossRef]

13. Park, SK; Lee, CW; Park, DI; Woo, HY; Cheong, HS; Shin, HC; Ahn, Κ.; Kwon, MJ; Joo, EJ Ανίχνευση του SARS-CoV-2 σε δείγματα κοπράνων από ασθενείς με ασυμπτωματικό και ήπιο COVID-19 στην Κορέα. Clin. Γαστρεντερόλη. Hepatol. 2020. [CrossRef] [PubMed]

14. Wolfel, R.; Corman, VM; Guggemos, W.; Seilmaier, Μ.; Zange, S.; Muller, MA; Niemeyer, D.; Jones, TC; Vollmar, Ρ.; Rothe, C.; et al. Ιολογική αξιολόγηση νοσηλευόμενων ασθενών με COVID-2019. Nature 2020, 581, 465–469. [CrossRef]