Συμπλήρωμα στη νεφρική νόσο ως δυνητικός παράγοντας στην αρτηριακή υπέρταση

Επικοινωνία:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Lisa-Maren Fischer, et al

Αφηρημένη

Σκοπός:Η εναπόθεση συμπληρώματος είναι διαδεδομένη σε βιοψίες νεφρού ασθενών με αρτηριακή υπέρταση και υπερτασική νεφροπάθεια, αλλά μέχρι σήμερα δεν έχει αποδειχθεί συσχέτιση υπέρτασης και εναπόθεσης συμπληρώματος ή συμμετοχή του συμπληρώματος στην παθογένεση της υπερτασικής νεφροπάθειας.

Μέθοδοι:Σε αυτή τη μελέτη, αναλύσαμε την εναπόθεση συμπληρώματος C1q και C3c σε ένα μοντέλο υπερφόρτωσης και υπέρτασης αρουραίου με υποολική νεφρεκτομή (SNX) και σε αρχειακές βιοψίες νεφρού ανθρώπου από 217 ασθενείς με γνωστή υπέρταση και 91 ασθενείς ελέγχου χωρίς ιστορικό υπέρτασης χρησιμοποιώντας ημιποσοτική βαθμολόγηση C1q και C3c ανοσοϊστοχημεία και συσχέτιση με παραμέτρους νεφρικής λειτουργίας. Για να αντιμετωπιστεί εάν το συμπλήρωμα κατατέθηκε μόνο παθητικά ή εκφραζόταν ενεργά από νεφρικά κύτταρα, αναλύθηκε επιπρόσθετα η έκφραση mRNA C1q και C3.

Αποτελέσματα:Η σπειραματική εναπόθεση συμπληρώματος C1q και C3c ήταν σημαντικά υψηλότερη στους νεφρούς υπερτασικών αρουραίων SNX και υπερτασικών σε σύγκριση με μη υπερτασικούς ασθενείς. Η μέση αρτηριακή πίεση του αίματος (BP) σε αρουραίους SNX συσχετίστηκε καλά με την ποσότητα της σπειραματικής εναπόθεσης C1q και C3c και με το βάρος της αριστερής κοιλίας, ως έμμεση παράμετρος της υψηλής ΑΠ. Η ποσοτική ανάλυση mRNA έδειξε ότι το C3 όχι μόνο κατατέθηκε αλλά επίσης παρήχθη ενεργά από σπειραματικά κύτταρα υπερτασικών αρουραίων SNX και σε βιοψίες νεφρού ανθρώπου. Αξίζει να σημειωθεί ότι σε ασθενείς το στάδιο ΚΝΠ συσχετίστηκε σημαντικά με την ένταση της σπειραματικής χρώσης C3c, αλλά όχι με εκείνη του C1q.

Συμπέρασμα: Η εναπόθεση νεφρικού συμπληρώματος συσχετίζεται με πειραματική υπέρταση καθώς και με την παρουσία υπέρτασης σε μια ποικιλίανεφρώνασθένειες. Για να απαντηθεί το ερώτημα εάν και πώς ακριβώς το νεφρικό συμπλήρωμα είναι αίτιο για την παθογένεση της αρτηριακής υπέρτασης στους άνδρες, απαιτούνται περαιτέρω μελέτες.

Λέξεις-κλειδιά:Νεφρός, Εναπόθεση συμπληρώματος, Υπέρταση,Νεφρώννόσος

Το Cistanche μπορεί να θεραπεύσεινεφρώννόσος

Εισαγωγή

The complement system and its regulatory proteins are components of the innate immune system consisting of >20 διαλυτοί παράγοντες, που παίζουν σημαντικό ρόλο στην (i) οψωνοποίηση, (ii) διέγερση διαφορετικών φλεγμονωδών οδών και (iii) ωσμωτική λύση παθογόνων και κατεστραμμένων κυττάρων σε πολλές ασθένειες, ιδιαίτερα φλεγμονώδειςνεφρόνόσος[1]. Το σύστημα συμπληρώματος αποτελείται από 3 μονοπάτια: (i) το κλασικό μονοπάτι, που ενεργοποιείται από οποιαδήποτε δομή που αναγνωρίζεται από το C1q [2], (ii) το μονοπάτι της λεκτίνης, που ενεργοποιείται όταν τα πρότυπα σακχαριτών αναγνωρίζονται από σύμπλοκα αναγνώρισης προτύπων [3], και (iii) η εναλλακτική οδός, που ενεργοποιείται μέσω της αυθόρμητης υδρόλυσης του C3 [4].

Τις τελευταίες 2 δεκαετίες ενίσχυσαν τις γνώσεις μας για το σύστημα συμπληρώματος και τον ρόλο του στην παθογένεση διαφορετικών συστηματικών καινεφρώνασθένειεςόπως η μεταλοιμώδης σπειραματονεφρίτιδα (GN), η IgA νεφροπάθεια (IgAN), η νεφρίτιδα του λύκου (LN), το μεμβρανοπολλαπλασιαστικό GN και οι σπειραματοπάθειες C3 [1, 5]. Ένας σημαντικός ρόλος του συστήματος του συμπληρώματος και της δυσλειτουργίας του είναι επίσης γνωστός στην παθογένεση των θρομβωτικών μικροαγγειοπαθειών, συμπεριλαμβανομένου του άτυπου αιμολυτικού ουραιμικού συνδρόμου [6], της αγγειίτιδας IgA (πρώην πορφύρα Henoch-Schönlein) [7] και της κακοήθους υπέρτασης [8]. Ενώ οι παθομηχανισμοί της θρομβωτικής μικροαγγειοπάθειας είναι ήδη γνωστοί [6, 7], η γνώση μας για τη σημασία του συστήματος του συμπληρώματος σε σχέση με την υπέρταση εξακολουθεί να είναι σχετικά ασαφής. Η πλειοψηφία των ασθενών με ΧΝΝ παρουσιάζουν αυξημένη αρτηριακή πίεση (ΑΠ) [9], αλλά η ακριβής παθογένεση της υπέρτασης είναι άγνωστη. Είναι διαθέσιμες αρκετές μελέτες που περιγράφουν μια συσχέτιση μεταξύ C3 του πλάσματος και υπέρτασης [10, 11], ενώ μια άλλη μελέτη δεν μπόρεσε να επιβεβαιώσει αυτές τις παρατηρήσεις [12]. Στο μοντέλο υπέρτασης με άλατα DOCA επίμυος, η σπειραματική εναπόθεση C3 αυξήθηκε σε αρουραίους με άλας DOCA και μειώθηκε με αντιυπερτασική θεραπεία, δηλαδή με σπιρονολακτόνη και τριπλή θεραπεία με υδροχλωροθειαζίδη, ρεζερπίνη και υδραλαζίνη [13]. Πρόσφατες μελέτες που χρησιμοποιούν προκλινικά μοντέλα υπέρτασης πρότειναν έναν ρόλο συμπληρώματος στην παθογένεση της υπέρτασης [14] που μεσολαβείται από διαφορετικά κύτταρα του ανοσοποιητικού όπως τα μακροφάγα και τα ρυθμιστικά Τ-κύτταρα (Tregs) [15-17] και την ενεργοποίηση του συστήματος ρενίνης-αγγειοτενσίνης που οδηγεί σε φαινοτυπικές αλλαγές στα αγγειακά λεία μυϊκά κύτταρα [18]. Ο λεπτομερής ρόλος της εναπόθεσης νεφρικού συμπληρώματος στην ανάπτυξη αυξημένης ΑΠ είναι ακόμα ασαφής. Επομένως, σε αυτή τη μελέτη, διερευνήσαμε το C1q, ως προϊόν διάσπασης του κλασικού, και το C3c ως κοινό δείκτη και των 3 οδών ενεργοποίησης του συμπληρώματος σε βιοψίες νεφρών από υπερτασικούς και νορμοτασικούς ασθενείς καθώς και σε ένα καθιερωμένο μοντέλο υπερφόρτωσης και επακόλουθων αρουραίων υπέρταση με υποολική νεφρεκτομή (SNX).

Μέθοδοι

Ζωικό μοντέλο

Για τη διερεύνηση της εναπόθεσης νεφρικού συμπληρώματος, της νεφρικής βλάβης και των καρδιακών αλλαγών σε υπερτασικά ζώα, χρησιμοποιήσαμε το μοντέλο αρουραίου, το οποίο χαρακτηρίζεται από σπειραματική υπερδιήθηση και υπερφόρτωση λόγω μείωσης νεφρώνων, εστιακής τμηματικής και ολικής σπειραματοσκλήρωσης, σωληναριακής διάμεσης ουλής και προοδευτικής ΧΝΝ με σημαντικά αυξημένη ΑΠ. Οι αρουραίοι διατηρήθηκαν σε μια συγκεκριμένη εγκατάσταση απαλλαγμένη από παθογόνα σε περιβάλλον ελεγχόμενο από τη θερμοκρασία και το φως και είχαν ad libitum πρόσβαση σε τυπική τροφή (sniff Spezialdiäten GmbH, Soest, Γερμανία) και νερό. Οι αρουραίοι διατηρήθηκαν σε κλασική ξύλινη κλινοσκεπάσματα (sniff Spezialdiäten GmbH, Soest, Γερμανία) σε κλουβιά makrolon τύπου IV (Tecniplast Deutschland GmbH, Hohenpeißenberg, Γερμανία) με μέγιστο πληθυσμό 3. Για επαγωγή μοντέλου, 12 αρσενικά Dark Agouti (DA/ HanRj, Janvier, Le Genest-Saint-Isle, Γαλλία) αρουραίοι ηλικίας 12-14 εβδομάδων ήταν SNX σε ένα πρωτόκολλο 2 βημάτων ξεκινώντας με μη εμπνευσμένη τομή ακολουθούμενη από τυποποιημένη εκτομή βάρους του άνω και του κάτω πόλου από τον υπόλοιπο νεφρό 1 εβδομάδα αργότερα. Για το σκοπό αυτό, στα ζώα χορηγήθηκε Buprenovet (Bayer, Leverkusen, Γερμανία) σε δόση 0.05 mg/kg σωματικού βάρους υποδορίως πριν από την επέμβαση. Μετά από αναισθησία με ισοφλουράνιο, το δεξιό λαγόνι ξυρίστηκε, απολυμάνθηκε με βάμμα KO-DAN (Schülke & Mayr GmbH, Norderstedt, Γερμανία), το πλευρό ανοίχτηκε με τομή 1,5 cm και ο νεφρός ανασηκώθηκε προσεκτικά και στερεώθηκε με 2 στείρα επιχρίσματα ακολουθούμενα από απολίνωση της νεφρικής παροχής αίματος και του ουρητήρα και αφαίρεση του νεφρού. Η κοιλιακή τομή έκλεισε με απορροφήσιμο ράμμα και συνεχή ραφή καθώς και το δέρμα έκλεισε με ραφές ενός κουμπιού. Μια εβδομάδα αργότερα, ο αριστερός νεφρός ανυψώθηκε ακριβώς όπως περιγράφεται για τον δεξιό νεφρό. Στη συνέχεια η νεφρική αρτηρία συσφίχθηκε με ένα ατραυματικό κλιπ και ο άνω και κάτω πόλος του νεφρού εκτομήθηκε με νυστέρι και η επιφάνεια κοπής κλείστηκε με ένα σφουγγάρι κολλαγόνου (Resorba medical GmbH, Nürnberg, Γερμανία). Τέλος, ο υπόλοιπος νεφρός επέστρεψε στην αρχική του θέση και η κοιλιακή τομή έκλεισε όπως περιγράφηκε παραπάνω. Η μετεγχειρητική δραστηριότητα, η πρόσληψη υγρών, το βάρος, η υφή του τριχώματος και η συμπεριφορά των ζώων αξιολογήθηκαν αλλά δεν έδειξαν σημάδια μετεγχειρητικού πόνου. Ωστόσο, η αναλγησία διατηρήθηκε τουλάχιστον για 3 ημέρες μετά την επέμβαση. Οι μάρτυρες υποβλήθηκαν σε ψευδή χειρουργική επέμβαση (ψευδής, n=11). Στο τέλος του πειράματος, τα ζώα στεγάστηκαν για 24 ώρες σε μεταβολικούς κλωβούς για τη συλλογή ούρων για τη μέτρηση της πρωτεϊνουρίας χρησιμοποιώντας μια δοκιμασία πρωτεΐνης Bio-Rad (Bio-Rad Laboratories GmbH, Μόναχο, Γερμανία). Η προσρόφηση μετρήθηκε σε δείγματα ούρων αραιωμένα με PBS στα 595 nm σε συσκευή ανάγνωσης μικροπλάκας και η πρωτεϊνουρία υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας μια τυπική καμπύλη από πρότυπα αλβουμίνης ορού βοοειδών που κυμαίνονταν από 0,15 έως 2 mg (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA). Μετά από 12 εβδομάδες, οι αρουραίοι υποβλήθηκαν σε ευθανασία μετά από ενδοαρτηριακή μέτρηση της ΑΠ για 30 λεπτά μέσω εισαγωγής καθετήρα στο A. carotid χρησιμοποιώντας σύστημα εργαστηρίου ισχύος οργάνων AD (ADInstruments Ltd., Oxford, UK). Τέλος, τα νεφρά και οι καρδιές συλλέχθηκαν και χωρίστηκαν σε 2 μέρη, το ένα καταψύχθηκε για ανάλυση RNA και το δεύτερο μέρος υποβλήθηκε σε επεξεργασία για ανοσοϊστοχημεία. Συλλέχτηκε αίμα για ανίχνευση κρεατινίνης ορού χρησιμοποιώντας έναν αυτόματο αναλυτή (Beck man Instruments, Brea, CA, USA).

Το Cistanche μπορεί να θεραπεύσεινεφρών νόσος

Ποσοτική Ανάλυση mRNA

Ολικό RNA από νεφρούς αρουραίου απομονώθηκε χρησιμοποιώντας στήλες RNeasy Mini (Qiagen, Hilden, Γερμανία). Οι αντιδράσεις αντίστροφης μεταγραφής και η PCR πραγματικού χρόνου πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας Power SYBR Green σε σύστημα 7500 Fast Real-Time PCR (και οι δύο Applied Biosystems, Weiterstadt, Γερμανία) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα δεδομένα PCR σε πραγματικό χρόνο αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό SDS v1.3 (Applied Biosystems) και η σχετική έκφραση των επιπέδων mRNA του γονιδίου στόχου υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τη συγκριτική μέθοδο δέλτα Ct [19]. Η κανονικοποίηση διεξήχθη έναντι των ενδογενών επιπέδων 18S rRNA που εφαρμόζονται στις προκύπτουσες σχετικές αλλαγές πτυχής. Χρησιμοποιήθηκαν οι ακόλουθοι εκκινητές: 18 s (fw 5'TTGATTAAGTCCCTGC-CCTTTGT3'; rev 5'CGATCCGAGGGCCTCACTA3'); C3 (fw 5′ TGCGGCTGGAGAGTGAAG3′; rev 5′ TTACTGGCTGGAATC-TTGATGG3′) [20]; και C1qB (fw 5'TCATAGAACACGAGGAT TCCATACA3'; rev 5'GACCCAGTACAGCTGCTTTGG3') [20].

Ανοσοϊστοχημεία

Για βιοψίες νεφρού ανοσοϊστοχημείας ή SNX και ψευδή νεφρό αρουραίου, τα δείγματα στερεώθηκαν σε φορμαλίνη, ενσωματώθηκαν σε παραφίνη και κόπηκαν σε τμήματα 1 μm και χρωματίστηκαν σε χρωματιστή Ventana Benchmark (Roche Diagnostics Deutschland GmbH, Mannheim, Γερμανία) χρησιμοποιώντας το ακόλουθο πρωτόκολλο : Η ανάκτηση αντιγόνου έγινε με πέψη με προνάση Ε για 40 λεπτά στους 37 βαθμούς. Μετά τον αποκλεισμό με Avidin-Biotin Block (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA), οι τομές κανονικού ορού κατσίκας και blotto (1:5) επωάστηκαν για 1 ώρα στους 37 βαθμούς χρησιμοποιώντας τα ακόλουθα αντισώματα αραιωμένα 1 τοις εκατό BSA σε 50 mM Tris pH 7.4: C1q, ένα πολυκλωνικό αντίσωμα κουνελιού κατά του ανθρώπινου C1q (A0126; DAKO Deutschland, Αμβούργο, Γερμανία) και; C3c, ένα πολυκλωνικό αντίσωμα κουνελιού κατά του ανθρώπινου C3c (A0062; DAKO Deutschland). Μετά από πλύση με 50 mM Tris ρΗ 7,4, ανιχνεύθηκαν δεσμευμένα πρωτογενή αντισώματα χρησιμοποιώντας το "ultra view Universal DAB Detection Kit" (Roche Diagnostics Deutschland GmbH, Mannheim, Γερμανία). Οι αρνητικοί έλεγχοι περιελάμβαναν είτε διαγραφή είτε υποκατάσταση του πρωτογενούς αντισώματος με ισοδύναμες συγκεντρώσεις άσχετου μονοκλωνικού αντισώματος ποντικού ή προάνοσης IgG κουνελιού.

Δείγματα ανθρώπινου νεφρικού ιστού

Σε ένα πρώτο βήμα, μια μη επιλεγμένη ομάδα 308 διαδοχικών αρχειακών βιοψιών νεφρού ενσωματωμένων σε παραφίνη (Department of Nephropathology, Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg [FAU]) αναλύθηκε για περιπτώσεις εναπόθεσης νεφρικού συμπληρώματος με χρήση ανοσολογικού συμπληρώματος ή απουσία αρτηριακής υπέρτασης σύμφωνα με τα κλινικά αρχεία, ανεξάρτητα από την πρωτοπαθήνεφρώννόσος. Συμπεριλήφθηκαν μόνο βιοψίες από υπερτασικούς και μη υπερτασικούς ασθενείς με κλινικά καλά τεκμηριωμένη ΑΠ. Επιπλέον, 46 μηδενικές βιοψίες από αλλομοσχεύματα νεφρού μεταμόσχευσης που δόθηκαν από μη υπερτασικούς ζώντες δότες χρησίμευσαν ως έλεγχοι.

Σε ένα δεύτερο βήμα, εστιάσαμε στη σύγκριση επιλεγμένων κοινών ομάδων τουνεφρώνασθένειες, συγκεκριμένα μάρτυρες (μηδενικές βιοψίες; n=46), IgAN (n=65), μεμβρανώδης GN (MGN, n=18), LN (n=10), εστιακός τμηματική σπειραματοσκλήρωση (FSGS, n=17) και διαβητική νεφροπάθεια (DN, n=28) με αποτέλεσμα μια αντιπροσωπευτική υποομάδα 184 βιοψιών. Σε αυτή την υποομάδα, αναλύθηκε λεπτομερέστερα η σχέση της αρτηριακής υπέρτασης και της εναπόθεσης συμπληρώματος στο πλαίσιο διαφορετικών κοινών νεφροπαθειών. Τα βασικά χαρακτηριστικά των ασθενών περιγράφονται στον Πίνακα 1.

Ιστοπαθολογική Αξιολόγηση

Η διάγνωση νεφρικής βιοψίας πραγματοποιήθηκε από 3 πολύ έμπειρους, εξειδικευμένους νευροπαθολόγους κατά τη διάρκεια εργασιών ρουτίνας με συναινετική συζήτηση όλων των διφορούμενων περιπτώσεων (συμπεριλαμβανομένων των MBH και KA). Η αξιολόγηση της λεπτομερούς μορφολογίας των βιοψιών νεφρού ανθρώπου έγινε από έναν πολύ έμπειρο επιστήμονα (CD) χρησιμοποιώντας καλά τεκμηριωμένη βαθμολογία ημιποσοτικής σπειραματοσκλήρωσης, βαθμολογία σωληναριακής βλάβης και βαθμολογία αγγειακής βλάβης (VSI) σε τομές παραφίνης βαμμένες με PAS όπως περιγράφηκε προηγουμένως [21]. Η διάμεση ίνωση/σωληναριακή ατροφία (IF/TA) βαθμολογήθηκε σύμφωνα με την ταξινόμηση BANFF για βιοψίες νεφρικού μοσχεύματος [22]

Αξιολόγηση Αναδρομικών

Κλινικά δεδομένα Συλλέχθηκαν κλινικές παράμετροι που ήταν διαθέσιμες στο χρονικό σημείο της βιοψίας νεφρού. Οι ακόλουθες παράμετροι συμπεριλήφθηκαν για ανάλυση συσχέτισης με τις βαθμολογίες C1q- και C3c, τον εντοπισμό συμπληρώματος και τις βαθμολογίες τραυματισμού χρησιμοποιώντας το λογισμικό SPSS: ηλικία ασθενούς, παρουσία ή απουσία υπέρτασης και διαβήτη, πρωτεϊνουρία, κρεατινίνη ορού, ουρία ορού, χοληστερόλη ορού, πρωτεΐνη ορού και παράγοντες συμπληρώματος C3 και C4 ορού. Δυστυχώς, πληροφορίες για τη διάρκεια τουνεφρώννόσοςand current medication was not consistently available and could therefore not be systematically analyzed. In renal patients, BP is measured regularly and particularly before performing a kidney biopsy. BP measurements and grading was done according to the KDIGO guidelines for renal patients [23]. Proteinuria was measured by analysis of a 24 h urine collection and significant proteinuria was defined as urinary protein excretion >300 mg/ημέρα. Στα 2/3 όλων των περιπτώσεων, η πρωτεϊνουρία χορηγήθηκε ως g/24 h ούρα. Μόνο ορισμένοι ασθενείς είχαν πρωτεϊνουρία που τεκμηριώθηκε με μετρήσεις ούρων κηλίδων, και για πολύ λίγους ασθενείς, δεν υπήρχαν διαθέσιμα δεδομένα για πρωτεϊνουρία. Δεδομένου ότι οι τιμές πρωτεϊνουρίας 24 ωρών και κηλίδας δεν μπορούν να συγκριθούν, συμπεριλάβαμε μόνο ασθενείς με συλλογή ούρων 24 ωρών για συσχέτιση της πρωτεϊνουρίας με την εναπόθεση συμπληρώματος. Προκειμένου να τυποποιήσουμε περαιτέρω τα ευρήματά μας, υποδιαιρέσαμε επίσης τους ασθενείς σύμφωνα με διαφορετικές κατηγορίες ΧΝΝ χρησιμοποιώντας τον τύπο CKD-EPI για τον υπολογισμό του GFR [24] και τις κατηγορίες ΧΝΝ σύμφωνα με την ταξινόμηση KDIGO 2012 [25].

Το Cistanche μπορεί να θεραπεύσεινεφρών νόσος

Ημιποσοτική αξιολόγηση της εναπόθεσης συμπληρώματος σε βιοψίες νεφρού

Η χρώση του συμπληρώματος με ανοσοϊστοχημεία σε βιοψίες νεφρού βαθμολογήθηκε χωριστά στα σπειράματα και στο διάμεσο σωληνάριο. Οι ημιποσοτικές βαθμολογίες {{0}}–4 περιγράφουν την ένταση του παρατηρήσιμου C3c ή C1q σε βιοψίες νεφρού σε μεγέθυνση ×200. Η βαθμολογία 0 υποδεικνύει ότι δεν υπάρχουν εναποθέσεις, βαθμολογία 1: ασθενής χρώση που επηρεάζει έως και το 25 τοις εκατό του υπό έρευνα διαμερίσματος. Βαθμολογία 2: μέτρια χρώση που επηρεάζει έως και 50 τοις εκατό ή έντονη χρώση<25% of="" the="" compartment.="" score="" 3:="" substantial="" staining="" affecting="" up="" to="" 75%="" of="" the="" investigated="" compartment.="" score="" 4:="" highest="" staining="" intensity="" affecting="">75 τοις εκατό του διαμερίσματος που ερευνήθηκε.

C1q και C3 mRNA σε βιοψίες νεφρού ανθρώπου

Τα δεδομένα για το C1q και το C3 σε σπειράματα και σωληναρίσιο βιοψιών νεφρού ανθρώπου με διαφορετικές ασθένειες αξιολογήθηκαν από τη βάση δεδομένων Nephroseq χρησιμοποιώντας το σύνολο δεδομένων Ju CKD [26].

Στατιστικές αναλύσεις

Μετά από δοκιμή για κανονική κατανομή τιμών χρησιμοποιώντας τη δοκιμή Kolmogorov-Smirnov, τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας τη δοκιμή Mann-Whitney για σύγκριση 2 ομάδων και τη δοκιμή Kruskal-Wallis με τη δοκιμή πολλαπλής σύγκρισης Dunn ως δοκιμασία post hoc για σύγκριση πολλαπλών ομάδων. Σε όλες τις δοκιμές, το p < 0.05="" έγινε="" αποδεκτό="" ως="" στατιστικά="" σημαντικό.="" το="" τεστ="" spearman="" χρησιμοποιήθηκε="" για="" να="" ελεγχθεί="" η="" συσχέτιση="" της="" εναπόθεσης="" συμπληρώματος="" με="" τις="" βαθμολογίες="" νεφρικής="" βλάβης="" και="" τα="" κλινικά="" δεδομένα.="" οι="" στατιστικές="" αναλύσεις="" πραγματοποιήθηκαν="" χρησιμοποιώντας="" λογισμικό="" spss="" για="" windows="" (έκδοση="" 19.0="" spss,="" ibm,="" μόναχο,="" γερμανία)="" ή="" graphpad="" prism="" 8="" για="" λογισμικό="" windows="" (έκδοση="" 8.3,="" graphpad="" software="" inc.,="" san="" diego,="" ca,="">

Αποτελέσματα

Η εναπόθεση του νεφρικού συμπληρώματος C3c και C1q είναι παρούσα σε ένα μοντέλο υπερτασικού αρουραίου σταθερής ΧΝΝ και συσχετίζεται με νεφρικές και καρδιακές αλλαγές

Η εναπόθεση συμπληρώματος διερευνήθηκε σε ένα μοντέλο υπερτασικού αρουραίου με ΧΝΝ, δηλαδή σε αρουραίους Dark Agouti με υποολική νεφρεκτομή (SNX), στους οποίους η μέση αρτηριακή ΑΠ 12 εβδομάδες μετά την επαγωγή του μοντέλου ήταν σημαντικά (p < 0.0="" 01)="" αυξήθηκε="" (175,7="" ±="" 21,0="" mm="" hg)="" σε="" σύγκριση="" με="" μάρτυρες="" που="" χειρουργήθηκαν="" εικονικά="" (135,8="" ±="" 2,8="" mm="" hg)="" (εικ.="" 1α).="" η="" πρωτεϊνουρία="" ήταν="" επίσης="" σημαντικά="" υψηλότερη="" στο="" snx="" σε="" σύγκριση="" με="" τους="" μάρτυρες="" που="" χειρουργήθηκαν="" εικονικά="" (78,5="" ±="" 16,6="" έναντι="" 8,9="" ±="" 0,8="" mg/24="" ώρες).="" αυτό="" το="" μοντέλο="" υπερφόρτωσης="" αρουραίου="" υπέρτασης="" και="" προοδευτικής="" νεφρικής="" ανεπάρκειας="" φάνηκε="" κατάλληλο="" για="" να="" εξετάσει="" τις="" αλλαγές="" που="" σχετίζονται="" με="" την="" υπέρταση="" στην="" εναπόθεση="" και="" έκφραση="" του="" νεφρικού="" συμπληρώματος.="" η="" σπειραματική="" εναπόθεση="" c3c="" και="" c1q="" απουσίαζε="" σε="" νορμοτασικούς,="" ψευδοχειρουργημένους="" αρουραίους="" ελέγχου="" (εικ.="" 1β,="" c)="" και="" αυξήθηκε="" σημαντικά="" στους="" υπερτασικούς="" αρουραίους="" snx="" (εικ.="" 1d,="" e,="" g,="" h).="" σε="" αρουραίους="" snx,="" ο="" παράγοντας="" συμπληρώματος="" c3c="" όχι="" μόνο="" κατατέθηκε="" στον="" νεφρικό="" ιστό="" αλλά="" επίσης="" ρυθμίστηκε="" σημαντικά="" προς="" τα="" πάνω="" στο="" επίπεδο="" mrna="" (εικ.="" 1f).="" η="" νεφρική="" έκφραση="" c1q="" mrna="" έδειξε="" μια="" τάση="" σε="" υψηλότερα="" επίπεδα="" στους="" αρουραίους="" snx="" από="" τους="" ελέγχους,="" αλλά="" αυτή="" η="" διαφορά="" δεν="" έφτασε="" σε="" σημαντικό="" βαθμό="" (εικ.="" 1ι).="" είναι="" ενδιαφέρον="" ότι="" σε="" αρουραίους="" τόσο="" η="" σπειραματική="" εναπόθεση="" c3c="" όσο="" και="" η="" εναπόθεση="" c1q="" συσχετίστηκαν="" σε="" μεγάλο="" βαθμό="" με="" τη="" μέση="" αρτηριακή="" απ="" (εικ.="" 2α,="" d)="" και="" την="" καρδιακή="" υπερτροφία="" όπως="" αξιολογήθηκε="" με="" το="" βάρος="" της="" lv="" (εικ.="" 2β,="" ε).="" επιπλέον,="" στο="" μοντέλο="" snx,="" η="" εναπόθεση="" νεφρικού="" συμπληρώματος="" συσχετίζεται="" με="" νεφρική="" βλάβη="" καθώς="" και="" με="" τη="" νεφρική="" λειτουργία.="" το="" σπειραματικό="" c3c,="" καθώς="" και="" η="" εναπόθεση="" c1q,="" έδειξαν="" ισχυρή="" συσχέτιση="" με="" την="" κρεατινίνη="" ορού="" (εικ.="" 2c,="" f)="" και="" την="" πρωτεϊνουρία="" (εικ.="" 2g,="" h).="" η="" συσχέτιση="" τόσο="" της="" κρεατινίνης="" ορού="" όσο="" και="" της="" πρωτεϊνουρίας="" με="" το="" συμπλήρωμα="" δεν="" ήταν="" εκπληκτική="" αφού="" και="" οι="" δύο="" παράμετροι="" έδειξαν="" επίσης="" ισχυρή="" συσχέτιση="" μεταξύ="" τους="" σε="" αυτό="" το="" μοντέλο="" αρουραίου="" (εικ.="" 2i).="" έτσι,="" τα="" δεδομένα="" μας="" σε="" ένα="" μοντέλο="" αρουραίου="" με="" υπερτασική="" χνν="" λόγω="" μείωσης="" της="" μάζας="" των="" νεφρών="" και="" υπερφόρτωσης="" υποδηλώνουν="" συσχέτιση="" εναπόθεσης="" νεφρικού="" συμπληρώματος="" και="" υπέρτασης.="" ως="" εκ="" τούτου,="" στόχος="" μας="" ήταν="" να="" επιβεβαιώσουμε="" αυτά="" τα="" ευρήματα="" σε="" μια="" ανθρώπινη="" κοόρτη="" υπερτασικών="" έναντι="" φυσιολογικών="" ασθενών,="" στους="" οποίους="" πραγματοποιήθηκε="" βιοψία="" νεφρού="" για="" διάφορους="">

Η εναπόθεση του συμπληρώματος είναι ανεξάρτητη από την υποκείμενη νεφρική νόσο

Εδώ, χρησιμοποιήσαμε μια προσέγγιση 2 βημάτων: πρώτον, συμπεριλάβαμε όλους τους ασθενείς με αναφερόμενη τιμή ΑΠ ανεξάρτητα από την υποκείμενηνεφρόνόσος(n=308, ανατρέξτε στον Πίνακα 1 για λεπτομέρειες). Αξίζει να σημειωθεί ότι 217 από τους 308 ασθενείς (70,5 τοις εκατό) αναφέρθηκε ότι είχαν υπέρταση. Δεύτερον, για περαιτέρω ανάλυση, επικεντρωθήκαμε σε υποομάδες των πιο διαδεδομένων μορφών GN, δηλαδή IgAN, MGN και LN, και 2 με τη μεσολάβηση μη ανοσολογικού συμπλέγματοςνεφρώνασθένειεςδηλαδή DN και εστιακή τμηματική σπειραματοσκλήρωση (FSGS). 46 μηδενικές βιοψίες από αλλομοσχεύματα νεφρού μεταμοσχεύματος που δόθηκαν από ζώντες δότες με φυσιολογική πίεση χρησίμευσαν ως ομάδα ελέγχου (βλ. Πίνακα 1).

Για τη διερεύνηση μιας πιθανής σχέσης μεταξύ της υπέρτασης και του νεφρικού συμπληρώματος, η εναπόθεση C1q και C3c στο σπειραματικό και σωληναριακό διάμεσο διαμέρισμα αναλύθηκε με ημιποσοτική βαθμολόγηση των ανοσοϊστολογικών χρωματισμών. Η ποσότητα και η ένταση της χρώσης C1q και C3c διέφερε πολύ στις βιοψίες που διερευνήθηκαν (για λεπτομέρειες βλέπε Εικ. 3). Στο διάμεσο σωληνάριο, το C3c αποτέθηκε κατά μήκος των σωληνοειδών βασικών μεμβρανών και εντός της διάμεσης μήτρας (Εικ. 3G), ενώ η χρώση C1q ήταν συνήθως αδύναμη και περιοριζόταν στο διάμεσο τμήμα (Εικ. 3Η).

Η σπειραματική εναπόθεση C3c αυξήθηκε σε πολλούςνεφρώνασθένειες, συμπεριλαμβανομένων των IgAN, MGN, LN και FSGS, σε σύγκριση με μηδενικές βιοψίες με φυσιολογική τάση (Εικ. 4Α). Συνολικά, η σπειραματική εναπόθεση C1q ήταν πιο αμυδρή από τη σπειραματική C3c. Αυξήθηκε σημαντικά σε IgAN, MGN, LN και DN, αλλά όχι στο FSGS σε σύγκριση με τους μάρτυρες μηδενικής βιοψίας (Εικ. 4Β). Είναι ενδιαφέρον ότι το συμπλήρωμα C3 και C1q όχι μόνο κατατέθηκαν σε ασθενείς νεφρούς αλλά η τοπική νεφρική έκφραση mRNA αυξήθηκε επίσης. Τα δεδομένα Nephroseq έδειξαν ότι και η έκφραση του mRNA του C3 και του C1q ήταν σημαντικά αυξημένη ρύθμιση στα IgAN, LN, DN και FSGS σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, δηλαδή τους υγιείς δότες (Εικ. 4C, D). Η έκφραση C1q mRNA ήταν χαμηλότερη από την έκφραση C3. Η σωληναρισιακή εναπόθεση C3c ήταν επίσης αυξημένη σε σύγκριση με τις μηδενικές βιοψίες στις περισσότερεςνεφρώνασθένειες(Εικ. 4Ε), ενώ το C1q δεν ήταν σημαντικά διαφορετικό από τους ελέγχους μηδενικής βιοψίας (τα δεδομένα δεν φαίνονται). Συνοπτικά, η έντονη εναπόθεση νεφρικού συμπληρώματος είναι ένα κοινό εύρημα σε διάφορανεφρόασθένειες. Στη συνέχεια, διερευνήσαμε την πιθανή σχέση της υψηλής ΑΠ με ​​την εναπόθεση νεφρικού συμπληρώματος.

Εικ. 3. Εναπόθεση C3c και C1q σε βιοψίες νεφρού. Ανθρώπινες νεφρικές βιοψίες χρωματίστηκαν για C3c (A, C, E, G) και C1q (B, D, F, H) χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία (καφέ χρώση). Αντιπροσωπευτικές εικόνες της σπειραματικής και της σωληναριακής εναπόθεσης των C3c και C1q δείχνουν παραδείγματα διαφορετικών βαθμολογιών εναπόθεσης συμπληρώματος. Χωρίς χρώση για C3c σε μηδενικές βιοψίες (Α) και C1q σε οξεία σωληναριακή νέκρωση (Β). Παραδείγματα για σπειραματική εναπόθεση C3c σε υπερτασικό/ισχαιμικό NP, βαθμολογία 1 (C) και εναπόθεση C1q στην κατηγορία II LN, βαθμολογία 2 (D). Πιο εμφανής εναπόθεση C3c σε IgAN, βαθμολογία 4 (E) και εναπόθεση C1q, βαθμολογία 4, σε άλλη περίπτωση κατηγορίας II LN (F). Εναπόθεση στο διάμεσο σωληνάριο του C3c σε διάμεση νεφρίτιδα, βαθμολογία 4 (G) και εναπόθεση C1q, βαθμολογία 4 (Η) σε περίπτωση μεταμολυσματικού GN. Οι ράβδοι κλίμακας αντιπροσωπεύουν 100 μm. LN, νεφρίτιδα λύκου; ΓΝ, σπειραματονεφρίτιδα.

Εικ. 4. Εναπόθεση και έκφραση νεφρικού συμπληρώματος σε διαφορετικάνεφρόασθένειες. Ημιποσοτική ανάλυση της σπειραματικής χρώσης C3c (A) και C1q (Β) σε επιλεγμένανεφρώνασθένειες. Τα IgAN, MGN, LN, DN, FSGS και βιοψίες από αλλομοσχεύματα νεφρού μεταμόσχευσης που δωρήθηκαν από μη υπερτασικούς δότες (0-βιοψία) χρησίμευσαν ως έλεγχοι. Τα δεδομένα από τη βάση δεδομένων Nephroseq έδειξαν σπειραματική έκφραση mRNA C3c (C) και C1q (D) σε διαφορετικάνεφρώνασθένειεςκαι την αντίστοιχη ομάδα ελέγχου, δηλαδή HLD. Στο διάμεσο σωληνάριο, ανιχνεύθηκε κυρίως C3c (E) σε βιοψίες νεφρών από ασθενείς με διάφορες ασθένειες. Οι σημαντικές διαφορές σημειώνονται με αστερίσκους: *p < 0.05;="" **p="">< 0.01="" και="" ***p=""><0.001 υποδεικνύουν="" σημαντικές="" διαφορές="" έναντι="" μηδενικών="" βιοψιών.="" gn,="" σπειραματονεφρίτιδα;="" mgn,="" μεμβρανώδες="" gn;="" ln,="" νεφρίτιδα="" λύκου;="" fsgs,="" εστιακή="" τμηματική="" σπειραματοσκλήρωση;="" dn,="" διαβητική="" νεφροπάθεια;="" hld,="" δότης="" υγιούς="" διαβίωσης.="" igan,="" iga="">

Η νεφρική εναπόθεση C3c και C1q είναι σημαντικά αυξημένη στους υπερτασικούς ασθενείς σε σύγκριση με τους νορμοτασικούς ασθενείς

Για να διερευνήσουμε εάν η παρουσία υψηλής ΑΠ σε ασθενείς σχετίζεται με εναπόθεση νεφρικού συμπληρώματος, αναλύσαμε βιοψίες από φυσιολογικά και υπερτασικούς ασθενείς με διάφορα υποκείμενανεφρόασθένειεςκαι τα συνέκρινε με την εναπόθεση συμπληρώματος σε μηδενικές βιοψίες από αλλομοσχεύματα νεφρού μοσχευμάτων που δόθηκαν από μη υπερτασικούς δότες (μηδενικές βιοψίες). Στο IgAN, το πιο διαδεδομένο GN στην περιοχή μας [27], μόνο οι βιοψίες από ασθενείς με υπέρταση είχαν σημαντικά υψηλότερη σπειραματική (Εικ. 5Α) και σωληναριακή ενδιάμεση C3c (Εικ. 5C), καθώς και σπειραματική εναπόθεση C1q (Εικ. 5Ε). σε σύγκριση με μηδενικές βιοψίες. Όταν συγκρίναμε την εναπόθεση C3c (Εικ. 5B, D) και C1q (Εικ. 5F) σε βιοψίες νεφρών της συνολικής κοόρτης, τόσο τα νορμοτασικά όσο και τα υπερτασικά δείγματα έδειξαν σημαντικά αυξημένη αντιδραστικότητα σε σύγκριση με τους μάρτυρες. Επιπλέον, σε βιοψίες υπερτασικών ασθενών με σπειραματικές και σωληναριακές ενδιάμεσες, η C3c ήταν σημαντικά υψηλότερη από τους ασθενείς με φυσιολογική πίεση (Εικ. 5Β, Δ). Δεδομένου ότι η σωληναριακή εναπόθεση C1q ήταν χαμηλή σε όλες τις βιοψίες που διερευνήθηκαν, δεν παρατηρήσαμε διαφορές μεταξύ των ομάδων ούτε στο IgAN (Εικ. 5G) ούτε στην ανάλυση όλων των περιπτώσεων που διερευνήθηκαν (Εικ. 5Η). Ως εκ τούτου, τα δεδομένα μας υποδηλώνουν ότι συγκεκριμένα η εναπόθεση C3c φαίνεται να είναι σχετική στους υπερτασικούςνεφρώνασθένειες.

Εικ. 5. Εναπόθεση νεφρικού συμπληρώματος σε βιοψίες νεφρού από υπερτασικούς και νορμοτασικούς ασθενείς. Η εναπόθεση C3c αναλύθηκε σε βιοψίες ασθενών με IgAN (A, C) και σε όλες τις βιοψίες που διερευνήθηκαν μενεφρώνασθένειες(B, D) που διαχωρίστηκε σε ασθενείς με φυσιολογική ΑΠ και υψηλή ΑΠ σε σύγκριση με βιοψίες από αλλομοσχεύματα νεφρού μεταμοσχεύματος που δωρήθηκαν από μη υπερτασικούς δότες (μηδενικές βιοψίες) ως μάρτυρες στο σπειραματικό (A, B) και στο σωληναριακό διάμεσο (C, D) διαμέρισμα. Ομοίως, η εναπόθεση C1q αναλύθηκε επίσης σε βιοψίες από ασθενείς με IgAN (E, G) και σε όλες τις βιοψίες που διερευνήθηκαν μενεφρόασθένειες(F, H) στο σπειραματικό (E, F) και το σωληνοειδές διάμεσο διαμέρισμα (G, H). Οι σημαντικές διαφορές σημειώνονται με αστερίσκους: *p < {{0}}.05;="" **p="">< 0,01="" και="" ***p="">< 0,001="" δείχνουν="" σημαντικές="" διαφορές.="" απ,="" αρτηριακή="">

Η εναπόθεση του νεφρικού συμπληρώματος σχετίζεται με τον τραυματισμό και τη λειτουργία των νεφρών

Η αξιολόγηση των ιστοπαθολογικών αλλαγών, όπως αξιολογήθηκε με σπειραματοσκλήρωση (Εικ. 6Α), βαθμολογία σωληναριακής διάμεσης βλάβης (Εικ. 6Β) και VSI (Εικ. 6C), έδειξε σημαντική υψηλότερη νεφρική βλάβη σε βιοψίες από ασθενείς με τεκμηριωμένη υπέρταση σε σχέση με ασθενείς με φυσιολογική πίεση. Η έκταση της σπειραματικής εναπόθεσης C3c συσχετίστηκε θετικά με τη σπειραματοσκλήρωση (Εικ. 6D) και τη σωληναρισμοδιάμεσο C3c με σωληνοειδή διάμεσο τραυματισμό (Εικ. 6Ε) και VSI (Εικ. 6F), υποδεικνύοντας ότι η εναπόθεση συμπληρώματος σχετίζεται με χρόνια νεφρική βλάβη. Επιπλέον, η διάμεση ίνωση/σωληναριακή ατροφία (IF/TA) ήταν σημαντικά υψηλότερη σε νεφρικές βιοψίες υπερτασικών ασθενών (Εικ. 6G) και συσχετίστηκε καλά με την έκταση της σωληναριακής εναπόθεσης C3c (Εικ. 6J). Η νεφρική λειτουργία, όπως αξιολογήθηκε από την κρεατινίνη ορού, ήταν επίσης σημαντικά χαμηλότερη στους υπερτασικούς ασθενείς (Εικ. 6Η) και συσχετίστηκε με την σπειραματική εναπόθεση C3c (Εικ. 6Κ). Δεν ανιχνεύθηκε σημαντική διαφορά μεταξύ φυσιολογικών και υπερτασικών ασθενών σε σχέση με την πρωτεϊνουρία (Εικ. 6I). Ωστόσο, υπήρχε ασθενής συσχέτιση μεταξύ της πρωτεϊνουρίας και του σπειραματικού C3c (r=0.238; p=0.008; Εικ. 6L). Αυτά τα αποτελέσματα επιβεβαίωσαν μια συσχέτιση νεφρικής βλάβης, λειτουργίας, εναπόθεσης συμπληρώματος και υπέρτασης.

Τέλος, διερευνήσαμε τον βαθμό στον οποίο η εναπόθεση συμπληρώματος εξαρτιόταν από το στάδιο της ΧΝΝ. Όπως αναμενόταν, η μέση ηλικία των ασθενών αυξήθηκε με υψηλότερο στάδιο ΧΝΝ (Εικ. 7Α). Αντίθετα, το ποσοστό των ασθενών με υπέρταση ήταν ανεξάρτητο από το στάδιο ΧΝΝ (Εικ. 7Β) επιβεβαιώνοντας τα παραπάνω ευρήματά μας. Το σπειραματικό (Εικ. 7C) και το σωληναριακό C3c (Εικ. 7D) ήταν σημαντικά χαμηλότερα στα στάδια ΧΝΝ 1 και 2 από τα υψηλότερα στάδια ΧΝΝ, ενώ δεν παρατηρήθηκε τέτοια συσχέτιση για το C1q (Εικ. 7Ε, ΣΤ).

Εικ. 6. Η εναπόθεση νεφρικού συμπληρώματος σε ανθρώπινες βιοψίες συσχετίζεται με νεφρική βλάβη και λειτουργία. Η νεφρική βλάβη όπως εκτιμήθηκε από το GSI (A), TSI (B) και VSI (C) ήταν σημαντικά αυξημένη σε ασθενείς με υψηλή ΑΠ και GSI που συσχετίστηκε με σπειραματική εναπόθεση C3c (D), TSI συσχετισμένη με σωληναρισιακή C3c (E) και VSI συσχετίζεται με το σωληνοειδές διάμεσο C3c (F). Η IF/TA (G) και η κρεατινίνη ορού (H) ήταν αυξημένες σε υπερτασικούς ασθενείς, ενώ η πρωτεϊνουρία ήταν παρόμοια και στις δύο ομάδες (Ι). Η σωληναριακή C3c συσχετίστηκε με IF/TA (J) και η σπειραματική C3c με την κρεατινίνη ορού (K) και σε ασθενέστερο βαθμό η σπειραματική C3c με την πρωτεϊνουρία (L). Οι σημαντικές διαφορές σημειώνονται με αστερίσκους: **p < 0.01="" και="" ***p=""><0,001 υποδεικνύουν="" σημαντικές="" διαφορές="" μεταξύ="" ασθενών="" με="" φυσιολογική="" απ="" και="" υψηλή="" απ="" ή="" σημαντικές="" συσχετίσεις.="" απ,="" αρτηριακή="" πίεση;="" gsi,="" σπειραματοσκλήρωση;="" tsi,="" σωληνοειδής="" διάμεσος="" τραυματισμός;="" vsi,="" αγγειακή="" βλάβη;="" if/ta,="" διάμεση="" ίνωση/σωληναριακή="">

Εικ. 7. Η νεφρική εναπόθεση C3 σε ανθρώπινες βιοψίες, αλλά όχι η υπέρταση συσχετίζεται με το στάδιο της ΧΝΝ. Η μέση ηλικία των ασθενών με ΧΝΝ αυξήθηκε με την αύξηση του σταδίου ΧΝΝ (Α), ενώ το ποσοστό των υπερτασικών ασθενών δεν σχετιζόταν με το στάδιο ΧΝΝ (Β). Το C3c (C, D) αλλά όχι το C1q (E, F) συσχετίστηκε όμορφα με διαφορετικά στάδια ΧΝΝ. Glomeru lar C3c (C), σωληνοειδές C3c (D), σπειραματικό C1q (E) και σωληνοειδές C1q (F). Οι σημαντικές διαφορές σημειώνονται με αστερίσκους: *p < 0.{{10}}5;="" **p="">< 0,01;="" και="" ***p="">< 0,001="" υποδηλώνουν="" σημαντικές="" διαφορές="" μεταξύ="" των="" ομάδων="" που="" συνδέονται="" με="">

Συζήτηση

Πρόοδος τουνεφρώννόσος, ειδικά η σωληναρισιακή βλάβη, αποδείχθηκε ότι προκαλείται, τουλάχιστον εν μέρει, από την ενεργοποίηση του συμπληρώματος [28], αλλά ο ρόλος της εναπόθεσης συμπληρώματος στην υπέρταση και τη νεφρική βλάβη είναι ακόμα ασαφής. Στη μελέτη μας, βρήκαμε αυξημένη νεφρική εναπόθεση παραγόντων συμπληρώματος, ιδιαίτερα της C3c, η οποία συσχετίστηκε ισχυρά με αυξημένη νεφρική βλάβη και κατώτερη νεφρική λειτουργία. Επιπλέον, πολύ συχνάνεφρόνόσοςσχετίζεται με την εμφάνιση υπέρτασης, η οποία από μόνη της συνδέεται με αυξημένο κίνδυνο καρδιαγγειακής νόσου και εξέλιξη της ΧΝΝ [9]. Εδώ, δείξαμε υψηλότερη νεφρική εναπόθεση προϊόντων διάσπασης συμπληρώματος C1q, ως δείκτη της κλασικής οδού ενεργοποίησης, και C3c, στοιχείο και των 3 οδών ενεργοποίησης, σε νεφρούς από υπερτασικούς ασθενείς με διαφορετικέςνεφρώνασθένειεςαπό τους ασθενείς με φυσιολογική αρτηριακή πίεση. Υπάρχουν κάποιες ενδείξεις ότι το συμπλήρωμα παίζει σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη και επιδείνωση της υπέρτασης, αλλά ο ρόλος της εναπόθεσης νεφρικού συμπληρώματος σε αυτή τη διαδικασία είναι άγνωστος. Σε βιοψίες ανθρώπινου νεφρού και στο μοντέλο υπερτασικής υπερφόρτωσης αρουραίου, έχει γίνει προφανές ότι η C3c είναι πιο συχνά ανιχνεύσιμη από την C1q, υποδηλώνοντας ότι η κλασική οδός δεν είναι αποκλειστικά υπεύθυνη για την ενεργοποίηση του συμπληρώματος στονεφρών νόσος. Παρόλα αυτά, το C1q βρέθηκε ότι εμπλέκεται κρίσιμα στην υπερτασική αρτηριακή αναδιαμόρφωση μέσω της ενεργοποίησης της σηματοδότησης -κατενίνης [29]. Το ερώτημα εάν το συμπλήρωμα προκαλεί υπέρταση ή η υπέρταση ενεργοποιεί το συμπλήρωμα παραμένει μέχρι σήμερα ασαφές. Σε αυτή τη μελέτη, παρατηρήσαμε μια ισχυρή συσχέτιση της εναπόθεσης νεφρικού συμπληρώματος, ιδιαίτερα του παράγοντα C3c, με τον βαθμό της νεφρικής βλάβης και της λειτουργίας. Πιθανότατα η υπέρταση οδηγεί σε περαιτέρω ενεργοποίηση του συστήματος του συμπληρώματος, αλλά υπάρχουν ορισμένες αναφορές που υποστηρίζουν την υπόθεση ότι το συμπλήρωμα δεν είναι μόνο δευτερογενές αλλά και αιτιολογικό για την υπέρταση. Σε μια διαχρονική μελέτη με παρακολούθηση 15 ετών, η επίπτωση της υπέρτασης ήταν σημαντικά υψηλότερη σε ασθενείς με αυξημένα επίπεδα C3 του συμπληρώματος πλάσματος κατά την έναρξη, υποδηλώνοντας έναν ρόλο για το C3 στο πλάσμα στην παθογένεση της υπέρτασης [10]. Επιπλέον, οι ασθενείς με ανθεκτική στη θεραπεία αρτηριακή υπέρταση είχαν σημαντικά υψηλότερα επίπεδα C3 στο πλάσμα σε σύγκριση με ασθενείς με ελεγχόμενη υπέρταση [11]. Αντίθετα, σε μια πληθυσμιακή μελέτη κοόρτης, η αυξημένη C3 στο πλάσμα συσχετίστηκε με αυξημένη επίπτωση της πρώτης νοσηλείας λόγω ΧΝΝ αλλά ανεξάρτητα από την ΑΠ [12]. Ωστόσο, η τελευταία μελέτη περιορίστηκε στη διερεύνηση των επιπέδων C3 στο πλάσμα, ενώ η τοπική έκφραση των παραγόντων του συμπληρώματος και η ενεργοποίηση του συμπληρώματος δεν διερευνήθηκαν. Τα προϊόντα διάσπασης C3, δηλαδή το C3c, δεν κατατέθηκαν μόνο παθητικά, αλλά το C3 mRNA εκφράστηκε επίσης τοπικά σε ασθενείς νεφρούς από υπερτασικούς ασθενείς και αρουραίους SNX. Ωστόσο, δεν προσδιορίσαμε την πηγή του νεφρικού C3, αλλά υπάρχουν αναφορές ότι εκτός από το ήπαρ, η πλειονότητα του mRNA του C3 εκφράζεται σε μονοκύτταρα και μακροφάγα [30]. Επιπλέον, οι ινοβλάστες, τα επιθηλιακά και τα ενδοθηλιακά κύτταρα έχουν επίσης αναφερθεί ότι είναι πιθανές εξωηπατικές C3-πηγές [31]. Η ενεργοποίηση του συμπληρώματος παρατηρήθηκε επίσης σε ένα μοντέλο υπέρτασης που προκαλείται από αγγειοτενσίνη II σε ποντικούς. Σε αυθόρμητα υπερτασικούς αρουραίους, η ανεπάρκεια C3 θα μπορούσε να καταργήσει την ευαίσθητη στο αλάτι υπέρταση [18], υποδεικνύοντας ότι η C3 εμπλέκεται σε κρίσιμο βαθμό σε μονοπάτια που προκαλούν υπέρταση. Ωστόσο, αυτές οι επιδράσεις μπορούν επίσης να διαμεσολαβηθούν περαιτέρω κατάντη στον καταρράκτη του συμπληρώματος. Χρησιμοποιώντας ποντίκια με έλλειψη υποδοχέα C5a (C5aR) οι Zhang et al. [32] απέδειξε ότι η σηματοδότηση C5aR παίζει παθολογικό ρόλο στην καρδιακή φλεγμονή και την αναδιαμόρφωση. Αν και η αναστολή του C5aR δεν επηρέασε την αυξημένη ΑΠ που προκαλείται από την αγγειοτενσίνη II, η καρδιακή βλάβη, όπως εκτιμάται από την καρδιακή υπερτροφία, τη φλεγμονή και την περιαγγειακή ίνωση, θα μπορούσε να μειωθεί [33]. Στο μοντέλο υπέρτασης αρουραίων SNX, επιβεβαιώσαμε ότι η εναπόθεση νεφρικού συμπληρώματος συσχετίστηκε καλά με τη νεφρική βλάβη αλλά και με την καρδιακή υπερτροφία και την ΑΠ. Η επαγόμενη από το συμπλήρωμα υπέρταση μεσολάβησε μέσω υποδοχέων συμπληρώματος για C3a και C5a. Το ρυθμιστικό Tregs μπορεί να αναστείλει την ενεργοποίηση των δραστικών Tregs και ασκεί αντιφλεγμονώδη δράση. Στο μοντέλο υπέρτασης που προκαλείται από την αγγειοτενσίνη ΙΙ, το Tregs έχει αποδειχθεί ότι είναι ένας σημαντικός ρυθμιστής της ΑΠ και πρόληψη της βλάβης των τελικών οργάνων [15, 34]. Η θεραπεία με αγγειοτενσίνη ΙΙ διέγειρε την έκφραση των υποδοχέων C3a και C5a σε Tregs οδηγώντας σε μειωμένο αριθμό Tregs σε ποντίκια άγριου τύπου, αλλά όχι σε ποντίκια διπλού νοκ-άουτ υποδοχέα C3a και C5a [35]. Επιπλέον, αυτά τα διπλά νοκ-άουτ ποντίκια ανέπτυξαν αμβλύτερη υπέρταση και λιγότερη νεφρική ίνωση και σπειραματική βλάβη [35]. Μια συσχέτιση της ενεργοποίησης του συμπληρώματος και της σπειραματικής βλάβης και της νεφρικής ίνωσης, όπως αξιολογήθηκε από τη σπειραματοσκλήρωση και το IF/TA, επιβεβαιώθηκε επίσης στη μελέτη βιοψίας μας. Μηχανιστικά, η αύξηση της ΑΠ προκλήθηκε από C{53}}ενεργοποίηση του συστήματος ρενίνης-αγγειοτενσίνης σε αγγειακά λεία μυϊκά κύτταρα με κατάντη μόρια όπως το TGF-ß/PDGF-A και με την αλλαγή του φαινοτύπου των μεσεγχυματικών κυττάρων και την επαγωγή του επιθηλίου -μεσεγχυματική μετάβαση [31]. Η σηματοδότηση του συμπληρώματος στοχεύτηκε και σε άλλες υπερτασικές ασθένειες. Στη φυσιολογική εγκυμοσύνη, η ενεργοποίηση του συμπληρώματος είναι παρούσα αλλά είναι υπερβολική σε υπερτασικές διαταραχές της εγκυμοσύνης και οι γενετικοί πολυμορφισμοί των πρωτεϊνών του συμπληρώματος φαίνεται να προδιαθέτουν σε προεκλαμψία [36]. Η αναστολή της σηματοδότησης του συμπληρώματος με θεραπεία με διαλυτό υποδοχέα συμπληρώματος 1 οδήγησε σε εξασθενημένη υπέρταση σε ένα μοντέλο ισχαιμίας του πλακούντα προεκλαμψίας [37].

Περιορισμοί της Μελέτης

Αν και προσπαθήσαμε να ενισχύσουμε τα ευρήματά μας σε βιοψίες νεφρού ανθρώπου διαφόρωννεφρώνασθένειεςμε και χωρίς αρτηριακή υπέρταση με την ενσωμάτωση ενός κατάλληλου ζωικού μοντέλου για να αποδειχθεί η συσχέτιση μεταξύ της εναπόθεσης συμπληρώματος στον νεφρικό ιστό και της υπέρτασης, πρέπει να αναγνωρίσουμε αρκετούς περιορισμούς και προκαταλήψεις επιλογής. Στην ανθρώπινη μελέτη, αντιμετωπίζουμε τον περιορισμό μιας μεταβλητής κοόρτης με πολλούς διαφορετικούς συγχυτικούς παράγοντες που δεν μπορούν να εντοπιστούν ή να αποκλειστούν με σαφήνεια. Προκειμένου να αντιμετωπιστεί αυτή η πτυχή και να εναρμονιστεί η ομάδα μελέτης, αναλύσαμε επίσης τη συσχέτιση του συμπληρώματος με τη νεφρική ίνωση (IF/TA) ως υποκατάστατο δείκτη απώλειας νεφρώνων και εξέλιξης του υποκείμενουνεφρώννόσοςκαθώς και με στάδια ΧΝΝ όπου θα μπορούσαμε να δείξουμε παρόμοια ευρήματα. Επιπλέον, δεδομένα για τη διάρκεια των αντίστοιχων ασθενειών ή την τρέχουσα ιατρική θεραπεία δεν ήταν συστηματικά διαθέσιμα, αφήνοντας αυτές τις πτυχές ως έναν άλλο πιθανό παράγοντα σύγχυσης που πρέπει να αναφέρουμε. Εφόσον αποκλείσαμε επίσημα αυτούς τους λίγους ασθενείς χωρίς κλινικά καλά τεκμηριωμένη ΑΠ, είναι πιθανό ότι αυτοί οι ασθενείς μπορεί είτε να μην έχουν υπέρταση είτε να έχουν ελεγχόμενη υπέρταση σε σημείο που μπορεί να φτάσουν σε τακτική παρακολούθηση που θα μπορούσε ενδεχομένως να προκαλέσει μεροληψία επιλογής. Σε αντίθεση με το πείραμα με ζώα στην ανθρώπινη κοόρτη μας, η πρωτεϊνουρία κατά τη στιγμή της νεφρικής βιοψίας δεν αναφέρθηκε με συνέπεια για όλους τους ασθενείς, επομένως μπορούσαμε να συμπεριλάβουμε μόνο τα 2/3 όλων των ασθενών για τις αντίστοιχες αναλύσεις που μπορεί να επηρεάσουν ορισμένα από τα αποτελέσματα. Αξίζει να σημειωθεί ότι η πρωτεϊνουρία δεν ήταν σημαντικά υψηλότερη σε νεφρικούς ασθενείς με και χωρίς υψηλή ΑΠ, καθιστώντας απίθανη μια σημαντική μεροληψία πρωτεϊνουρίας.

συμπέρασμα

Συνολικά, η μελέτη μας υπογραμμίζει μια ισχυρή συσχέτιση της εναπόθεσης συμπληρώματος με την υπέρταση αλλά και τη νεφρική βλάβη σε ανθρώπους και πειραματισμούςνεφρώννόσος. Αν και δεν μπορούσαμε να απαντήσουμε στο ερώτημα εάν η εναπόθεση συμπληρώματος είναι αιτία της ανάπτυξης υπέρτασης, τα δεδομένα υποστηρίζουν τη συμμετοχή της ενεργοποίησης του συμπληρώματος στην παθογένεση ή την εξέλιξη της υπέρτασης σε διάφορεςνεφρό ασθένειες, υποδηλώνοντας έναν πιθανό ρόλο για στρατηγικές αναστολής του συμπληρώματος για τη μελλοντική διαχείριση των ανθεκτικών στη θεραπεία περιπτώσεων υπέρτασης καινεφρώννόσος. Ωστόσο, απαιτούνται πρόσθετες μελέτες για την αντιμετώπιση του ακριβούς ρόλου του συμπληρώματος στην παθογένεση των υπερτασικών νοσημάτων.

Το Cistanche μπορεί να θεραπεύσεινεφρική νόσο

Από: «Συμπλήρωμα μέσαΝεφρώνΝόσοςως δυνητικός συντελεστής στην αρτηριακή υπέρταση» απόLisa-Maren Fischer, et al

---Kidney Blood Press Res 2021; 46:362-376

βιβλιογραφικές αναφορές

1 Couser WG. Βασικές και μεταφραστικές έννοιες των ανοσο-μεσολαβούμενων σπειραματικών παθήσεων. J Am Soc Nephrol. 2012 Μαρ, 23(3):381–99.

2 Kojouharova M, Reid K, Gadjeva M. New insights into the molecular engines of classical complement activation. ΜοΙ Immunol. 2010 Aug;47(13):2154–60.

3 Dobo J, Pal G, Cervenak L, Gal P. Οι αναδυόμενοι ρόλοι των πρωτεασών σερίνης που σχετίζονται με τη μαννόζη που συνδέονται με τη λεκτίνη (MASP) στην οδό λεκτίνης του συμπληρώματος και πέρα ​​από αυτό. Immunol Rev. 2016 Νοε. 274(1):98–111.

4 Pangburn MK, Schreiber RD, Muller-Eber hard HJ. Σχηματισμός της αρχικής κονβερτάσης C3 της εναλλακτικής οδού συμπληρώματος. Απόκτηση δράσεων που μοιάζουν με C3b με αυθόρμητη υδρόλυση του υποτιθέμενου θειοεστέρα στο φυσικό C3. J Εχρ Med. 1981 Sep 1;154(3):856–67.

5 Ricklin D, Hajishengallis G, Yang K, Lambris JD. Συμπλήρωμα: ένα βασικό σύστημα για την επιτήρηση του ανοσοποιητικού και την ομοιόσταση. Nat Immunol. 2010 Sep;11(9):785–97.

6 Nozal P, Lopez-Trascasa M. Αυτοαντισώματα έναντι πρωτεϊνών εναλλακτικής οδού συμπληρώματος σε παθολογίες των νεφρών. Νεφρολογία. 2016 Σεπ-Οκτώβριο;36(5):489–95. 7 Lau KK, Suzuki H, Novak J, Wyatt RJ. Patho genesis of Henoch-Schönlein purpura ne phritis. Pediatr Nephrol. 2010 Ιαν. 25(1):19–26.

8 Wenzel U, Turner JE, Krebs C, Kurts C, Har rison DG, Ehmke H. Ανοσολογικοί μηχανισμοί στην αρτηριακή υπέρταση. J Am Soc Nephrol. 2016 Mar;27(3):677–86.

9 Drawz PE, Beddhu S, Kramer HJ, Rakotz M, Rocco MV, Whelton PK. Μέτρηση αρτηριακής πίεσης: μια προοπτική KDOQI. Am J Kidney Dis. Μάρτιος 2020, 75(3):426–34.

10 Engstrom G, Hedblad B, Berglund G, Janzon L, Lindgarde F. Τα επίπεδα του συμπληρώματος C3 στο πλάσμα σχετίζονται με την ανάπτυξη υπέρτασης: μια μελέτη διαμήκους κοόρτης. J Hum Hypertens. 2007 Απρ; 21(4):276–82.

11 Magen Ε, Mishal J, Paskin J, Glick Z, Yosefy C, Kidon Μ, et al. Η ανθεκτική αρτηριακή υπέρταση σχετίζεται με υψηλότερα επίπεδα συμπληρώματος C3 και C-αντιδρώσας πρωτεΐνης στο αίμα. J Clin Hypertens. 2008 Sep;10(9):677–83.

12 Bao X, Borne Y, Muhammad IF, Schulz CA, Persson Μ, Orho-Melander Μ, et al. Συμπλήρωμα C3 και περιστατικό νοσηλείας λόγω χρόνιαςνεφρόνόσος: μια μελέτη κοόρτης με βάση τον πληθυσμό. BMC Nephrol. 21 Φεβρουαρίου 2019; 20(1):61.

13 Klanke B, Cordasic N, Hartner A, Schmieder RE, Veelken R, Hilgers KF. Η αρτηριακή πίεση έναντι των άμεσων μεταλλοκορτικοειδών επιδράσεων στη φλεγμονή των νεφρών και την ίνωση στην υπέρταση με άλατα DOCA. Μεταμόσχευση Nephrol Dial. 2008 Nov; 23(11):3456–63.

14 Chen L, Fukuda Ν, Shimizu S, Kobayashi Η, Tanaka S, Nakamura Υ, et αϊ. Ο ρόλος του συμπληρώματος 3 στη δημιουργία ρενίνης κατά τη διαφοροποίηση των μεσεγχυματικών βλαστοκυττάρων σε κύτταρα λείου μυός. Am J Physiol Cell Physiol. 2020 1 Μαΐου 318(5): C981–C990.

15 Kvakan Η, Kleinewietfeld Μ, Qadri F, Park JK, Fischer R, Schwarz I, et al. Τα ρυθμιστικά Τ-λεμφοκύτταρα βελτιώνουν τη διαγνωστική βλάβη του αυτοκινήτου που προκαλείται από την αγγειοτενσίνη II. Κυκλοφορία. 2009 Jun 9;119(22): 2904–12.

16 Ruan CC, Ge Q, Li Y, Li XD, Chen DR, Ji KD, et al. Η πόλωση των μακροφάγων με τη μεσολάβηση του συμπληρώματος στον περιαγγειακό λιπώδη ιστό συμβάλλει στην αγγειακή βλάβη σε ποντίκια οξικής δεοξυκορτικοστερόνης-άλατος. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2015 Mar;35(3):598–606.

17 Carney EF. Υπέρταση: ο ρόλος των C3aR και C5aR στα κύτταρα Treg. Nat Rev Nephrol. 2018 Απρ. 14(4):214.

18 Negishi Ε, Fukuda Ν, Otsuki Τ, Katakawa Μ, Komatsu Κ, Chen L, et αϊ. Συμμετοχή του συμπληρώματος 3 στην ευαίσθητη στο άλας υπέρταση με ενεργοποίηση του συστήματος νεφρικής ρενίνης-αγγειοτενσίνης σε αυθόρμητα υπερτασικούς αρουραίους. Am J Physiol Renal Physiol. 1 Δεκεμβρίου 2018; 315(6):F1747–F1758.

19 Dimmler Α, Haas CS, Cho S, Hattler Μ, Forster C, Peters Η, et al. Μικροτομή σύλληψης με λέιζερ και PCR σε πραγματικό χρόνο για ανάλυση της σπειραματικής έκφρασης γονιδίου ενδοθηλίνης-1 στη μεσαγγειόλυση αρουραίου anti-Thy 1.1 και σπειραματονεφρίτιδας από δηλητήριο φιδιού Habu ποντικού. Diagn Mol Pathol. 2003 Jun;12(2):108–17.

20 Diez Μ, Abdelmagid Ν, Harnesk Κ, Strom Μ, Lidman Ο, Swanberg Μ, et αϊ. Προσδιορισμός περιοχών γονιδίου που ρυθμίζουν τη φλεγμονώδη μικρογλοιακή απόκριση στο ΚΝΣ αρουραίου μετά από τραυματισμό νεύρων. J Neuroimmunol. 2009 25 Ιουλίου 212(1– 2):82–92.

21 Hainz N, Thomas S, Neubert K, Meister S, Benz K, Rauh Μ, et al. Ο αναστολέας πρωτεασώματος βορτεζομίμπη αποτρέπει τη νεφρίτιδα του λύκου στο μοντέλο ποντικού NZB/W F1 με τη διατήρηση της σπειραματικής και της σωληναριακής διάμεσης αρχιτεκτονικής. Nephron Exp Nephrol. 2012; 120(2):e47–58.

22 Solez K, Racusen LC. Επανεξετάστηκε η ταξινόμηση Banff. Kidney Int. 2013 Feb;83(2):201–6.

23 Οδηγία κλινικής πρακτικής KDIGO για τη διαχείριση της αρτηριακής πίεσης σε χρόνιανεφρόνόσος. Kidney Int Suppl. Δεκέμβριος 2012; 2(5):343.

24 Levey AS, Stevens LA, Schmid CH, Zhang YL, Castro AF 3rd, Feldman HI, et al. Μια νέα εξίσωση για την εκτίμηση του ρυθμού σπειραματικής διήθησης. Ann Intern Med. 2009 5 Μαΐου 150(9):604–12.

25 Ομάδα KCW. KDIGO 2012 Οδηγία κλινικής πρακτικής για την αξιολόγηση και τη διαχείριση της χρόνιαςνεφρόνόσος. Kidney Int Suppl. 2013; 3:1–150.

26 Ju W, Greene CS, Eichinger F, Nair V, Hodgin JB, Bitzer Μ, et αϊ. Καθορισμός της ειδικότητας κυτταρικού τύπου σε μεταγραφικό επίπεδο σε ανθρώπινες ασθένειες. Genome Res. 2013 Nov;23(11):1862–73.

27 Barratt J, Feehally J, Smith AC. Παθογένεση της IgA νεφροπάθειας. Semin Nephrol. 2004 Μάιος· 24(3):197–217.

28 Hsu SI, Couser WG. Χρόνια εξέλιξη της σωληναριδικής βλάβης στο πρωτεϊνουρικόνεφρώννόσοςδιαμεσολαβείται από την ενεργοποίηση του συμπληρώματος: ένας θεραπευτικός ρόλος για τους αναστολείς του συμπληρώματος; J Am Soc Nephrol. 2003 Jul;14(7 Suppl 2): ​​S186–91.

29 Sumida T, Naito AT, Nomura S, Nakagawa Α, Higo T, Hashimoto Α, et al. Η επαγόμενη από το συμπλήρωμα C1q ενεργοποίηση της σηματοδότησης -κατενίνης προκαλεί υπερτασική αρτηριακή αναδιαμόρφωση. Nat Commun. 2015; 6:6241.

30 de Bruijn MH, Fey GH. Συστατικό C3 ανθρώπινου συμπληρώματος: κωδικοποιητική αλληλουχία cDNA και παραγόμενη πρωτογενής δομή. Proc Natl Acad Sci US A. 1985 Feb;82(3):708–12.

31 Chen L, Fukuda N, Matsumoto T, Abe M. Role of complement 3 in the pathogenesis of hypertension. Hypertens Res. 2020 Απρ. 43(4):255–62.

32 Zhang C, Li Y, Wang C, Wu Y, Cui W, Miwa T, et al. Ο υποδοχέας του συμπληρώματος 5α μεσολαβεί στην καρδιακή φλεγμονή και αναδιαμόρφωση που προκαλείται από την αγγειοτενσίνη II. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2014 Jun;34(6):1240–8.

33 Zhang C, Li Y, Wang C, Wu Y, Du J. Ο ανταγωνιστής του C5aR αποτρέπει την καρδιακή αναδιαμόρφωση στην υπέρταση που προκαλείται από την αγγειοτενσίνη II. Am J Hypertens. 2014 Jun; 27(6):857–64.

34 Barhoumi T, Kasal DA, Li MW, Shbat L, Lau rant P, Neves MF, et al. Τα ρυθμιστικά λεμφοκύτταρα Τ προλαμβάνουν την επαγόμενη από την αγγειοτενσίνη ΙΙ υπέρταση και αγγειακή βλάβη. Υπέρταση. 2011 Mar;57(3):469–76.

35 Chen XH, Ruan CC, Ge Q, Ma Y, Xu JZ, Zhang ZB, et al. Η ανεπάρκεια των υποδοχέων του συμπληρώματος C3a και C5a αποτρέπει την επαγόμενη από την αγγειοτενσίνη ΙΙ υπέρταση μέσω των ρυθμιστικών Τ κυττάρων. Circ Res. 2018 30 Μαρτίου 122(7):970–83.

36 Regal JF, Burwick RM, Fleming SD. Το σύστημα του συμπληρώματος και η προεκλαμψία. Curr Hypertens Rep. 2017 Οκτ. 18; 19(11):87.

37 Regal JF, Lund JM, Wing CR, Root KM, Mc Cutcheon L, Bemis LT, et al. Αλληλεπιδράσεις μεταξύ του συμπληρώματος και του συστήματος ενδοθηλίνης σε φυσιολογική εγκυμοσύνη και μετά από ισχαιμία του πλακούντα. ΜοΙ Immunol. 2019 Οκτ;114: 10–8.