Σύγκριση μεμονωμένης και επαναλαμβανόμενης δόσης αντιφλεγμονωδών μεσεγχυματικών στρωματικών κυττάρων ανθρώπινου ομφάλιου λώρου σε μοντέλο ποντικού πολυμικροβιακής σήψης

Περίληψη

Τα μεσεγχυματικά στρωματικά κύτταρα (MSCs) βελτιώνουν την προκλινική σήψη και την οξεία νεφρική βλάβη που σχετίζεται με τη σήψη (SAAKI), αλλά οι κλινικές δοκιμές των MSCs μιας δόσης δεν έχουν δείξει ισχυρή αποτελεσματικότητα. Αυτή η μελέτη διερεύνησε τις ανοσοτροποποιητικές επιδράσεις ενός νέου προϊόντος MSC (CD{3}}επιλεγμένα από τον ανθρώπινο ομφάλιο λώρο MSCs [hUC-MSCs]) σε μοντέλα ενδοτοξιναιμίας και πολυμικροβιακής σήψης ποντικού. Αρχικά, τα ποντίκια έλαβαν ενδοπεριτοναϊκό (ip) λιποπολυσακχαρίτη (LPS) ακολουθούμενη από εφάπαξ ενδοπεριτοναϊκές δόσεις hUC-MSCs ή φορέα. Στη συνέχεια, τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε απολίνωση και παρακέντηση του τυφλού (CLP) ακολουθούμενη από ενδοφλέβια (iv) δόσεις hUC-MSC στις 4 ώρες ή 4 και 28 ώρες. Οι αναλύσεις περιελάμβαναν αναλύσεις ορού/πλάσματος βιοχημικών δεικτών, φλεγμονωδών μεσολαβητών και του βιοδείκτη AKI NGAL. πολύχρωμη κυτταρομετρία ροής περιτοναϊκών μακροφάγων (LPS) και ενδονεφρικών υποπληθυσμών ανοσοκυττάρων (CLP) και ιστολογία/ανοσοϊστοχημεία νεφρού (CLP). Στις 72 ώρες μετά τις ενέσεις LPS, τα hUC-MSC μείωσαν τους φλεγμονώδεις μεσολαβητές ορού και την αναλογία M1/M2 των περιτοναϊκών μακροφάγων. Επαναλαμβανόμενες, αλλά όχι μεμονωμένες, δόσεις hUC-MSC που χορηγήθηκαν 48 ώρες μετά το CLP είχαν ως αποτέλεσμα χαμηλότερες συγκεντρώσεις φλεγμονωδών μεσολαβητών στον ορό, χαμηλότερο NGAL στο πλάσμα και αναστροφή της σχετιζόμενης με τη σήψη εξάντλησης των ενδονεφρικών Τ κυττάρων και των υποπληθυσμών μυελοειδών κυττάρων. Η ιεραρχική ανάλυση ομαδοποίησης όλων των 48-h αναλυτών ορού/πλάσματος έδειξε μερική συνομαδοποίηση ζώων επαναλαμβανόμενων δόσεων hUC-MSC CLP με μια ομάδα Sham, αλλά δεν αποκάλυψε μια ξεχωριστή υπογραφή ανταπόκρισης στη θεραπεία. Συνήχθη το συμπέρασμα ότι απαιτούνται επαναλαμβανόμενες δόσεις επιλεγμένων από CD362-hUC-MSCs για τη ρύθμιση συστηματικών και τοπικών ανοσολογικών/φλεγμονωδών συμβάντων σε πολυμικροβιακή σήψη και SA-AKI. Η μεταβλητότητα μεταξύ των ατόμων και η έλλειψη επίδρασης της χορήγησης MSC μιας δόσης στο μοντέλο CLP συνάδουν με τις μέχρι σήμερα παρατηρήσεις από κλινικές δοκιμές πρώιμης φάσης.

Λέξεις-κλειδιά

Οξεία νεφρική βλάβη · Μεσεγχυματικά στρωματικά κύτταρα · Αναγεννητική ιατρική · Σήψη · Φλεγμονή · Κυτταρική θεραπεία

Κάντε κλικ εδώ για να αγοράσετε το συμπλήρωμα Cistanche

Εισαγωγή

Η σήψη χαρακτηρίζεται από επικίνδυνη για τη ζωή δυσλειτουργία οργάνου λόγω μιας απορρυθμισμένης απόκρισης του ξενιστή στη μόλυνση που προκαλείται από βακτηριακά, μυκητιακά, ιικά και παρασιτικά παθογόνα [1]. Κάθε χρόνο, η σήψη επηρεάζει σχεδόν 50 εκατομμύρια ανθρώπους παγκοσμίως, οδηγώντας συχνά σε σοβαρές συστηματικές συνέπειες και τραυματισμούς οργάνων, συμπεριλαμβανομένης της οξείας νεφρικής βλάβης (ΑΚΙ), με αποτέλεσμα περίπου 11 εκατομμύρια θανάτους [2, 3]. Τα μεσεγχυματικά στρωματικά κύτταρα (MSC) είναι πολυδύναμα κύτταρα με εκτεταμένες ανοσοτροποποιητικές ιδιότητες που μπορούν να απομονωθούν από διάφορους ιστούς [4]. Είναι πλέον ευρέως αναγνωρισμένο ότι το MSC προσφέρει μια πιθανή θεραπεία ρύθμισης της νόσου για τη σήψη και το AKI που σχετίζεται με τη σήψη (SA-AKI) [5, 6]. Αρκετές πρόσφατες μελέτες που χρησιμοποιούν μοντέλα απολίνωσης και παρακέντησης τυφλού ποντικού και αρουραίου (CLP), λιποπολυσακχαρίτη (LPS) ή περιτονίτιδας κοπράνων έχουν δείξει ότι η συστηματική χορήγηση MSC έχει τη δυνατότητα να μειώσει τη φλεγμονή, να εξουδετερώσει τη βακτηριακή λοίμωξη και να βελτιώσει την αποκατάσταση του τραυματισμένου ιστού στο σήψη [7-11], συμπεριλαμβανομένου του SA-AKI, [10, 12-15] ρυθμίζοντας την ισορροπία μεταξύ προφλεγμονωδών και αντιφλεγμονωδών καταστάσεων.

Μια πρόσφατη δοκιμή σε υγιείς ενήλικες επιβεβαίωσε ότι η προληπτική ενδοφλέβια (iv) θεραπεία με 4 × 106 MSC/kg παράγει πρώιμα ανοσοτροποποιητικά αποτελέσματα στην απόκριση του ξενιστή στο LPS [16]. Επιπλέον, η χορήγηση αλλογενούς MSC σε ασθενείς με σηπτικό σοκ (NCT01849237, NCT02421484 και NCT02328612) και σύνδρομο οξείας αναπνευστικής δυσχέρειας που σχετίζεται με τη σήψη (NCT01775774) έδειξε καλή ασφάλεια και ανεκτότητα στην τριμερή φάση [6]1119. Παρά αυτά τα ενθαρρυντικά αποτελέσματα, οι Galstyan et al. ανέφερε επίσης ότι μια εφάπαξ δόση iv MSC δεν απέτρεψε το θάνατο από δυσλειτουργία οργάνων που σχετίζεται με τη σήψη, αυξάνοντας την πιθανότητα να απαιτούνται πρόσθετες δόσεις για να αποκομιστεί σημαντικό κλινικό όφελος [17]. Μια πρόσφατη δοκιμή φάσης 2 χωρίς σηψαιμία (NCT01602328) στην οποία χορηγήθηκαν μεμονωμένες δόσεις αλλογενούς MSC σε ασθενείς με στείρα AKI μετά από χειρουργική επέμβαση καρδιοπνευμονικής παράκαμψης, επίσης, απέτυχε να αποδείξει ευεργετική επίδραση στη δυσλειτουργία οργάνων και στην επιβίωση των ασθενών παρά το υποσχόμενο προκλινικά αποτελέσματα και δοκιμές φάσης 1 [20]. Το εάν η επαναλαμβανόμενη δόση κατά την πρώιμη πορεία της σήψης και άλλων οξέων φλεγμονωδών συνδρόμων θα μπορούσε να αυξήσει ή να επεκτείνει τις ρυθμιστικές επιδράσεις της νόσου του MSC παραμένει σχετικά υποδιερευνημένο σε προκλινικά και μεταφραστικά επίπεδα. Επιπλέον, η ελλιπής γνώση του μηχανισμού δράσης, της ανταπόκρισης στη δόση και των βέλτιστων κλινικών δεικτών για τη χορήγηση MSC στη σήψη περιορίζει τη δυνατότητα σχεδιασμού επιτυχημένων δοκιμών [5, 21, 22].

Στην τρέχουσα μελέτη, πραγματοποιήσαμε μια προκλινική διερεύνηση των αντιφλεγμονωδών επιδράσεων του επιλεγμένου από CD{2}}MSC προερχόμενου από ανθρώπινο ομφάλιο λώρο (hUC-MSC) σε μοντέλα σήψης σε ποντίκια. Αυτό το επιλεγμένο με επιφανειακό δείκτη hUC-MSC είναι ένα νέο θεραπευτικό προϊόν που έχει αποδείξει την αποτελεσματικότητα σε μοντέλα αρουραίων βακτηριακής πνευμονίας και σήψης όταν χορηγείται νωρίς μετά την έναρξη της νόσου [23, 24]. Ως κλινικού βαθμού ερευνητικό φαρμακευτικό προϊόν (IMP), το hUC-MSC βρίσκεται επί του παρόντος σε δοκιμή φάσης Ι/ΙΙ σε ασθενείς με μέτρια έως σοβαρή οξεία αναπνευστική δυσχέρεια (ARDS) λόγω COVID-19 (NCT03042143) και σε πολλαπλές αυτοάνοσα φλεγμονώδη νοσήματα (POLARISE). Στόχος μας ήταν να δείξουμε το αντιφλεγμονώδες δυναμικό των μεμονωμένων δόσεων hUC-MSC σε μοντέλα ποντικών ενδοτοξαιμίας/πολυμικροβιακής σήψης που προκαλείται από LPS και CLP [25, 26] και, στην τελευταία, να καθορίσουμε εάν μια δεύτερη χορήγηση hUC-MSC κατά τη διάρκεια η πρώιμη πορεία της νόσου οδήγησε σε μεγαλύτερες ή πιο συχνές ευεργετικές επιδράσεις στη συστηματική φλεγμονή και σε συγκεκριμένο όργανο τραυματισμό, όπως παραδειγματίζεται από το SA-AKI.

Cistanche tubulosa

Υλικά & Μέθοδοι

1. Κύτταρα

Anti-CD362 plus-επιλεγμένα hUC-MSC καλλιεργήθηκαν από ηθικής προέλευσης ανθρώπινο ιστό ομφάλιου λώρου που ελήφθη από την Tissue Solutions Ltd. (Glasgow, UK). Οι πρωτογενείς καλλιέργειες απομόνωσης και επέκτασης του CD362 συν hUC-MSC πραγματοποιήθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [19, 23, 27]. Κρυοσυντηρημένα φιαλίδια (1×107 σε 1 mL) αντι-CD362 συν-επιλεγμένο hUC-MSC αποψύχθηκαν και μεταφέρθηκαν σε 9 mL αλατούχου διαλύματος ρυθμισμένου με φωσφορικά (PBS). Μετά από ανάλυση ζωντανών/νεκρών είτε μέσω βαφής μπλε τρυπανίου είτε μέσω αυτοματοποιημένου μετρητή κυττάρων (NucleoCounter® NC-200™, Chemometec A/S, Δανία), ο απαιτούμενος αριθμός κυττάρων σφαιροποιήθηκαν μέσω φυγοκέντρησης στα 400×g για 5 λεπτά και Τα κύτταρα επαναιωρήθηκαν σε 100 μΙ αποστειρωμένου φυσιολογικού ορού για ενδοπεριτοναϊκή (IP) ή ενδοφλέβια ένεση.

2. Διαδικασίες ζώων

Όλες οι διαδικασίες σε ζώα διεξήχθησαν με άδεια (αρ. 255/17) από την Animal Experimentation Ethical Committee, University of Barcelona, ​​και κατόπιν εξουσιοδότησης (AE19125/P082 και AE19125/P066) από τη Ρυθμιστική Αρχή Προϊόντων Υγείας, Ιρλανδία, και εγκεκριμένη από την Επιτροπή Δεοντολογίας της Ερευνητικής Φροντίδας Ζώων NUI Galway. Όλες οι διαδικασίες πραγματοποιήθηκαν σε αδειοδοτημένες εγκαταστάσεις ζώων στο NUI Galway και στο Πανεπιστήμιο της Βαρκελώνης.

Για το μοντέλο LPS της ενδοτοξαιμίας, χρησιμοποιήθηκαν 10-12 αρσενικά ποντίκια C57BL/6 εβδομάδων από την Charles River Ltd., Kent, UK. Τα ποντίκια ενέθηκαν ενδοπεριτοναϊκά με 5 μg/g LPS (LPS 0111:B4, αρ. καταλόγου L2630, Sigma Aldrich, UK) σε 100 μΙ στείρου αλατούχου ορού. Τα ποντίκια στεγάστηκαν σε ομάδες των 3-5 ποντικών/κλουβί κατά τη διάρκεια της μελέτης σε ξεχωριστά αεριζόμενα κλουβιά. Χορηγήθηκαν απλές ενδοπεριτοναϊκές ενέσεις 2,5× 105 hUC-MSC ή ίσων όγκων φορέα (αποστειρωμένος ορός) 4 ώρες μετά τις ενέσεις LPS. Τα ζώα παρακολουθούνταν κάθε 4 ώρες μέχρι το τέλος της μελέτης χρησιμοποιώντας ένα φύλλο βαθμολογίας κινδύνου και μέτρα υποστήριξης σύμφωνα με ένα προκαθορισμένο πρωτόκολλο. Η ανθρώπινη ευθανασία διενεργήθηκε στο καθορισμένο πειραματικό τελικό σημείο ή νωρίτερα εάν τα ζώα υπερέβαιναν το προκαθορισμένο όριο βαθμολογίας σοβαρότητας. Κατά τη στιγμή της ευθανασίας, συλλέχθηκαν περιτοναϊκά εξιδρώματα για ανάλυση κυτταρομετρίας ροής ψαρεύοντας προσεκτικά 5 mL στείρου PBS μέσα και έξω από την περιτοναϊκή κοιλότητα.

Η απολίνωση και η παρακέντηση του τυφλού (CLP) πραγματοποιήθηκε σε {{0}} εβδομάδων, αρσενικά ποντίκια C57BL/6 (Charles River Ltd., UK). Τα ποντίκια έλαβαν βουπρενορφίνη {{1{{20}}}}.1 mg/kg (Richter Pharma AG, Αυστρία) υποδορίως 25-30 λεπτά πριν από τη διαδικασία και αναισθητοποιήθηκαν με 1.{{8 }} τοις εκατό ισοφλουράνιο (με ροή O2 0,5 L/min) στο NUI Galway ή με Anesketin (100 mg/mL, Dechra Veterinary Products SLU, Ισπανία) και Rampun (20 mg/mL, Bayer, Γερμανία) στο Πανεπιστήμιο της Βαρκελώνης. Το κάτω μισό της κοιλιάς ξυρίστηκε και καθαρίστηκε με 4 τοις εκατό χλωρεξιδίνη ή ποβιδόνη-ιώδιο και χαράχθηκε 1 cm κατακόρυφα κατά μήκος της μέσης γραμμής. Το τυφλό έντερο εξωτερικεύτηκε και το περιφερικό 50 τοις εκατό απολινώθηκε χρησιμοποιώντας 4.{19}}.0 M ράμματα. Το υλικό του τυφλού απελευθερώθηκε με παρακέντηση «διαμέσου και διαμέσου» με μια 21-βελόνα μετρητή και μια σταγόνα κοπράνων εξιδρύθηκε πριν επανέλθει το τυφλό στην περιτοναϊκή κοιλότητα και συρραφεί ο μυς και το δέρμα κλειστά. Τα ποντίκια που χειρουργήθηκαν ψευδώς υποβλήθηκαν σε πανομοιότυπη διαδικασία, συμπεριλαμβανομένου του ανοίγματος του περιτοναίου και της έκθεσης του εντέρου, αλλά χωρίς απολίνωση και διάτρηση του τυφλού εντέρου. Τα ποντίκια έλαβαν 0,5 mL Γελοφουσίνης (Braun Melsungen AG, Γερμανία) με ενδοπεριτοναϊκή ενστάλαξη πριν από το κλείσιμο του τραύματος. Μετεγχειρητική υποστήριξη αποτελούνταν από βουπρενορφίνη αραιωμένη χορηγούμενη υποδόρια (sc) κάθε 8-12 h μέχρι τα προκαθορισμένα τελικά σημεία (48 ή 72 ώρες για μεμονωμένα πειράματα). Η χορήγηση 1 × 106 hUC-MSC ή ισοδύναμων όγκων φορέα (αποστειρωμένο αλατούχο διάλυμα) διεξήχθη ενδοφλεβίως μέσω της φλέβας της ουράς στις 4 ώρες ή 4 και 28 ώρες μετά την CLP. Η συχνή παρακολούθηση και υποστήριξη πραγματοποιήθηκαν σύμφωνα με ένα δεοντολογικά εγκεκριμένο πρωτόκολλο. Η ανθρώπινη ευθανασία πραγματοποιήθηκε στο καθορισμένο πειραματικό τελικό σημείο ή νωρίτερα εάν τα ζώα υπερέβαιναν ένα προκαθορισμένο όριο βαθμολογίας σοβαρότητας.

Οι δόσεις κυττάρων για τα δύο ζωικά μοντέλα που χρησιμοποιήθηκαν για τη μελέτη επιλέχθηκαν με βάση προηγούμενες αναφορές αντιφλεγμονωδών επιδράσεων σε ανθρώπινο MSC σε παρόμοια μοντέλα [9, 13, 14, 28, 29]. Τα μεγέθη των ομάδων για τη μελέτη LPS επιλέχθηκαν εμπειρικά με βάση σχετικές προηγούμενες αναφορές για αυτό το μοντέλο [30, 31]. Τα μεγέθη των ομάδων για τη μελέτη CLP προσδιορίστηκαν για μια πρωτογενή έκβαση της NGAL στο πλάσμα στις 24 ώρες μετά την επέμβαση. Χρησιμοποιώντας δεδομένα από ένα πιλοτικό πείραμα, ένα μέγεθος δείγματος 9 ζώων ανά ομάδα υπολογίστηκε για να παρέχει 90 τοις εκατό ισχύ υποθέτοντας ένα επίπεδο σημαντικότητας 5 τοις εκατό και μια δοκιμή διπλής όψης (http://www.3rs-reduction.co.uk/html /6__power_και_sample_size.html). Εφαρμόστηκε ένα αναμενόμενο ποσοστό φθοράς 10 τοις εκατό για την επιλογή του τελικού μεγέθους ομάδας n=10.

Εκχύλισμα Cistanche

3. Αιμοληψία και Προμήθεια Ιστών

Δείγματα φλεβικού αίματος σε μέγιστο όγκο 20 μL λήφθηκαν κατά διαστήματα από τις φλέβες της ουράς και του προσώπου με άσηπτη τεχνική χρησιμοποιώντας βελόνες μετρητή 25-21 και συλλέχθηκαν σε σωλήνες που περιείχαν ηπαρίνη (VWR International, Δουβλίνο, Ιρλανδία). Ένα τελικό δείγμα αίματος λήφθηκε με καρδιακή παρακέντηση τη στιγμή της ευθανασίας. Ο ορός συλλέχθηκε σε μικροσωλήνες με γέλη ορού και ενεργοποιητή πήξης (Sarstedt, Wexford, Ιρλανδία). Δείγματα πλάσματος και ορού παρασκευάστηκαν με φυγοκέντρηση στα 10,000×g για 10 λεπτά. Τα δείγματα ορού αποθηκεύτηκαν στους -80 βαθμούς και στη συνέχεια αναλύθηκαν για βιοχημικές παραμέτρους από τα NationWide Laboratories (Lancashire, UK). Ο σπλήνας, οι πνεύμονες, τα νεφρά και το συκώτι ανατέμθηκαν αμέσως μετά την ευθανασία.

4. Ανοσοδοκιμασίες

Η συγκέντρωση λιποκαλίνης που σχετίζεται με ζελατινάση ουδετερόφιλων πλάσματος (NGAL) ποσοτικοποιήθηκε με το κιτ ανάπτυξης Lipocalin-2/NGAL Duo-Set ELISA (R&D Systems, Minneapolis, MI, ΗΠΑ) σύμφωνα με το πρωτόκολλο που προτείνει ο κατασκευαστής (λεπτομέρειες στη συμπληρωματική μέθοδο ). Για τον πολλαπλό ποσοτικό προσδιορισμό κυτοκινών και χημειοκινών στον ορό, χρησιμοποιήθηκε η τυπική 23-δοκιμασία plex κυτοκινών ποντικού Bio-Plex Pro (Bio-Rad, Accuscience) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα δείγματα αναλύθηκαν σε σύστημα Bioplex 200 multiplex ELISA (BioRad, Accuscience).

5. Ημιποσοτική βαθμολόγηση τμημάτων νεφρικού ιστού

Οι χρωματισμένες τομές του νεφρού αναλύθηκαν με τυφλό τρόπο με μικροσκόπιο φωτός σε μεγέθυνση 40Χ χρησιμοποιώντας μικροσκόπιο φωτεινού πεδίου Olympus BX43 (Olympus, Center Valley, PA) και με λογισμικό IS TCapture (Tucsen Photonics Co., Fujian, China). Για κάθε νεφρό, καταγράφηκαν είκοσι μη επικαλυπτόμενα πεδία μιας χρωματισμένης τομής και η θετικά χρωματισμένη περιοχή βαθμολογήθηκε από έναν τυφλό παρατηρητή για (Α) σωληναριακή διάταση, γύψο και νέκρωση (PAS) και (Β) έκφραση NGAL [32] Η βαθμολόγηση πραγματοποιήθηκε σε μια ημιποσοτική κλίμακα βαθμολόγησης 0-4 (λεπτομέρειες στις Συμπληρωματικές Μέθοδοι). Οι μέσες βαθμολογίες υπολογίστηκαν για κάθε νεφρό και τα τελικά αποτελέσματα εκφράστηκαν ως μέσοι όροι ομάδας ± SD.

Σκόνη κιστάνς

Συζήτηση

Η σήψη και η συχνή επιπλοκή της SA-AKI αποτελούν σημαντικές προκλήσεις για τη δημόσια υγεία λόγω της συνεχιζόμενης έλλειψης αποτελεσματικών θεραπειών και των απογοητευτικών αποτελεσμάτων από κλινικές δοκιμές σε τελευταίο στάδιο [2, 3]. Αρκετές πρόσφατες προκλινικές μελέτες έχουν αναφέρει αποτελέσματα που υποδεικνύουν ότι τα MSC διαφόρων πηγών και τα προϊόντα τους έχουν θετικά αποτελέσματα στη σοβαρότητα της νόσου και στην επιβίωση σε μοντέλα σήψης και AKI [7, 8, 11-15]. Ωστόσο, τα κλινικά οφέλη του MSC στη σήψη και το SA-AKI παραμένουν αναπόδεικτα με περιορισμένα μόνο δεδομένα διαθέσιμα από ανθρώπους ασθενείς [5]. Μέχρι σήμερα, κλινικές δοκιμές έχουν τεκμηριώσει ότι η ενδοφλέβια έγχυση MSC μίας δόσης στο πλαίσιο χορήγησης LPS, σήψης και ARDS είναι ασφαλής και εφικτή, [16-19] αλλά δεν μειώνει εμφανώς τον θάνατο από ανεπάρκεια οργάνων που σχετίζεται με τη σήψη [17] . Σε αυτή τη μελέτη, συγκρίναμε τα αποτελέσματα της ενδοφλέβιας χορήγησης μίας και διπλής δόσης ενός διακριτού ανθρώπινου MSC θεραπευτικού προϊόντος (CD{18}} επιλεγμένο hUC-MSC) στο μοντέλο CLP ποντικού της πολυμικροβιακής σήψης. Αρχικά, σύμφωνα με τα πρόσφατα αναφερθέντα αποτελέσματα για αυτό το ίδιο προϊόν MSC σε μοντέλα αρουραίων βακτηριακής πνευμονίας και σήψης [23, 24], επιβεβαιώσαμε τη δυνατότητα πρώιμης χορήγησης hUC-MSC για τη ρύθμιση της επαγόμενης από LPS συστημικής φλεγμονής σε ποντίκια. Σε ένα μοντέλο πολυμικροβιακής σήψης CLP ποντικού, ωστόσο, τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι οι εφάπαξ δόσεις hUC-MSC που χορηγήθηκαν ενδοφλεβίως 4 ώρες μετά την πρόκληση περιτονίτιδας στα κόπρανα δεν άσκησαν σαφή ευεργετική επίδραση στη συστηματική φλεγμονή ή στον ειδικό για όργανο (νεφρικό) τραυματισμό ιστού. Αντίθετα, η χορήγηση δεύτερης ενδοφλέβιας δόσης hUC-MSC 24 ώρες αργότερα οδήγησε σε πολλαπλά σήματα βελτιωμένης φλεγμονής και νεφρικής βλάβης κατά 48 ώρες μετά την έναρξη της σήψης. Παρόλα αυτά, δεν αποδείχθηκε όφελος επιβίωσης για το σχήμα διπλής δόσης. Τα αποτελέσματά μας υπογραμμίζουν τη σημασία της διεξαγωγής in vivo μελετών θεραπευτικών προϊόντων MSC σε πολλαπλά μοντέλα και της αναφοράς θετικών και αρνητικών προκλινικών αποτελεσμάτων για καλύτερη ενημέρωση της κλινικής μετάφρασης και του σχεδιασμού των δοκιμών. Συνολικά, τα αποτελέσματά μας παρέχουν επίσης ενδείξεις ότι το περιορισμένο ή ανύπαρκτο όφελος των πρώιμων σχημάτων μιας δόσης αντιφλεγμονωδών MSC προϊόντων σε δοκιμές σήψης μπορεί τουλάχιστον εν μέρει να ξεπεραστεί με επαναλαμβανόμενες δόσεις.

Στο μοντέλο LPS ποντικού, μια απλή, πρώιμη δόση hUCMSC ρυθμίζει τα συστημικά επίπεδα τόσο των έμφυτων όσο και των προσαρμοστικών φλεγμονωδών μεσολαβητών για τουλάχιστον 72 ώρες, αν και χωρίς εμφανή επίδραση στις βαθμολογίες σοβαρότητας και στην επιβίωση. Η φαινοτυπική ανάλυση των περιτοναϊκών μακροφάγων παρείχε στοιχεία ότι η χορήγηση hUC-MSC συσχετίστηκε με μια προβλεπόμενη τοπική ανοσοτροποποιητική επίδραση - λοξή των μακροφάγων προς την πόλωση του Μ2, η οποία έχει συνδεθεί με την επίλυση του φλεγμονώδους τραυματισμού και την προώθηση της αποκατάστασης των ιστών [29, 35] και είναι πιθανό να διαμεσολαβείται από διασταυρούμενη ομιλία MSC με μόνιμα μυελοειδή κύτταρα [36]. Πράγματι, πρόσφατες μελέτες έχουν αναφέρει ότι η θεραπευτική ανοσοτροποποίηση από MSC στο πλαίσιο της σήψης μπορεί να εξαρτάται από τη φαγοκυττάρωσή τους από μυελοειδή κύτταρα (μονοπύρηνα φαγοκύτταρα) τα οποία στη συνέχεια υφίστανται εναλλακτική ενεργοποίηση με αποτέλεσμα την παραγωγή IL-10 και άλλων παρακρινών αντι- φλεγμονώδεις μεσολαβητές [7, 27, 37]. Αν και θα ήταν ενδιαφέρον να προσδιοριστεί εάν τα οφέλη μιας τέτοιας ανοσοτροποποίησης ενισχύονται από επαναλαμβανόμενες δόσεις hUC-MSC μετά από χορήγηση LPS, σκεφτήκαμε ότι ένα πειραματικό μοντέλο που αντικατοπτρίζει καλύτερα την εξελισσόμενη σήψη θα είχε μεγαλύτερη κλινική συνάφεια. Έτσι, έχοντας επιβεβαιώσει τη βιολογική δραστηριότητα του hUC-MSC σε ποντικούς με χρήση LPS, το μοντέλο CLP ποντικού χρησιμοποιήθηκε για τον χαρακτηρισμό των αντιφλεγμονωδών επιδράσεων που σχετίζονται με την επαναλαμβανόμενη δόση και τον ποσοτικό προσδιορισμό των ειδικών για τους νεφρούς επιδράσεων του hUC-MSC στο πλαίσιο της πολυμικροβιακής σήψης και ΣΑ-ΑΚΗ. Στα χέρια μας, αυτό το μοντέλο συσχετίστηκε με μέτρια σοβαρή σήψη (περίπου 70 τοις εκατό, 50 τοις εκατό και 40 τοις εκατό επιβίωση στις 48, 96 και 168 ώρες αντίστοιχα σε ζώα χωρίς θεραπεία) χωρίς εμφανή ηπατική και νεφρική ανεπάρκεια. Οι παρατηρήσεις μας για το μοντέλο, συμπεριλαμβανομένων των ποσοστών θνησιμότητας και των τάσεων στις παραμέτρους του ήπατος ορού και της λευκωματίνης, συμβαδίζουν με το πολύ ολοκληρωμένο προφίλ του CLP ποντικού που αναφέρθηκε από τους Li et al. [38], το οποίο επίσης τεκμηριώνει μειωμένη θερμοκρασία σώματος, αρτηριακή πίεση και καρδιακό ρυθμό κατά τις πρώτες 48 ώρες μετά το CLP. Είναι ενδιαφέρον ότι ενώ οι Li et al. τεκμηρίωσαν αυξημένη κρεατινίνη ορού και άζωτο ουρίας αίματος στις 8 και 16 ώρες μετά το CLP, τα αποτελέσματά τους υποδεικνύουν ότι αυτοί οι νεφρικοί λειτουργικοί βιοδείκτες είχαν πέσει σε φυσιολογικά (ή κάτω από τα φυσιολογικά) επίπεδα κατά 48 ώρες – ίσως αντανακλώντας τις εξελισσόμενες επιδράσεις του αλλοιωμένου μεταβολισμού/μυϊκής μάζας σε αυτούς τους βιοδείκτες καθώς το μοντέλο εξελίσσεται [38]. Σύμφωνα με αυτό, η ανάλυση του ιστού ορού/πλάσματος και νεφρού στις 48 ώρες έδειξε σημαντική συστηματική φλεγμονή και απόκριση νεφρικής βλάβης χωρίς εμφανή ένδειξη ισχαιμικής βλάβης/νέκρωσης. Αυτές οι τελευταίες αναλύσεις παρείχαν τα σαφέστερα στοιχεία για μια ρυθμιστική επίδραση του σχήματος διπλής δόσης hUCMSC στη σοβαρότητα της πολυμικροβιακής σήψης σε σύγκριση με τη χορήγηση εφάπαξ δόσης, η οποία, σε αντίθεση με τα αποτελέσματα που αναφέρθηκαν πρόσφατα σε ένα μοντέλο CLP επίμυος [24], ήταν δυσδιάκριτη από την ομάδα CLP που υποβλήθηκε σε αγωγή με αλατούχο διάλυμα σε όλους τους δείκτες που εξετάστηκαν. Συγκεκριμένα, ο κλινικά σχετικός βιοδείκτης AKI, NGAL, αποδείχθηκε πολύτιμος παράγοντας διάκρισης της σοβαρότητας της σήψης και της επίδρασης της θεραπείας σε αυτό το μοντέλο και μπορεί να είναι ένας σημαντικός βιοδείκτης για μελλοντικές κλινικές δοκιμές κυτταρικών θεραπειών στη σήψη και SA-AKI [33, 39 ].

Τα αποτελέσματά μας για την επίδραση του iv MSC στην επιβίωση σε μικρά ζωικά μοντέλα σήψης είναι σε αντίθεση με ορισμένες άλλες αναφορές [28, 40] αλλά, κυρίως, συμβαδίζουν με τις παρατηρούμενες επιδράσεις των αλλογενών MSCs σε κλινικές δοκιμές σε ανθρώπους [5, 16- 18, 41]. Από αυτή την άποψη, θα υπογραμμίσουμε τον πιθανό ρόλο της μεροληψίας δημοσίευσης - συγκεκριμένα, η επιλεκτική δημοσίευση αποτελεσμάτων που αντικατοπτρίζουν θετικά αποτελέσματα - ως σημαντική κινητήρια δύναμη μη ρεαλιστικών προσδοκιών για την αποτελεσματικότητα των σχημάτων MSC μιας δόσης και άλλων προηγμένων θεραπειών στα πρώτα στάδια της κλινικής μετάφραση [42]. Πράγματι, οι Sun et al., σε μια πρόσφατη μετα-ανάλυση 29 μελετών σε ζώα σχετικά με την αποτελεσματικότητα των θεραπειών MSC στη σήψη, εντόπισαν σημαντική μεροληψία δημοσίευσης και έλλειψη σαφήνειας σχετικά με τη βέλτιστη δόση κυττάρων μεταξύ αυτών των προκλινικών αναφορών [43]. Ωστόσο, αναφέρουμε επίσης διακριτά θετικά ευρήματα που μπορεί να βοηθήσουν στην προώθηση μεταφραστικών στόχων για UC-MSCs στη σήψη ή σε άλλες συστηματικές και ειδικές για τα όργανα φλεγμονώδεις ασθένειες, όπως AKI, ηπατικές ή αναπνευστικές ασθένειες. Και στα δύο μοντέλα, αυτές οι μοριακές αλλαγές υποδεικνύουν πολύπλοκες αλληλεπιδράσεις του hUC-MSC με την ανοσοαπόκριση Th1 και Th2. Τέτοιες επιδράσεις στην ενεργοποίηση των Τ-ενεργών κυττάρων και στην ισορροπία του φαινοτύπου Τ βοηθού μπορεί να διαδραματίσουν βασικό ρόλο στη ρύθμιση της οξείας φάσης της σήψης, καθώς η αδιάκριτη, απορυθμισμένη ενεργοποίηση των ανοσολογικών τελεστών που οδηγεί σε υψηλά επίπεδα κυκλοφορούντων κυτοκινών συμβάλλει στην πολυοργανική ανεπάρκεια [44] και, στην περίπτωση των Τ-κυττάρων, μπορεί να ακολουθείται από εκτεταμένη απόπτωση και επακόλουθες ανοσοανεπάρκειες [45]. Έχει επίσης αποδειχθεί ότι η χορήγηση MSC μπορεί να μειώσει την εντοπισμένη φλεγμονή των ιστών ρυθμίζοντας την ομοιόσταση των κυτοκινών και μειώνοντας την κυκλοφορία των κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος στα όργανα [44]. Σύμφωνα με αυτό, η ποσοτική μας ανάλυση ενός εύρους πληθυσμών ενδονεφρικών ανοσοκυττάρων 48 ώρες μετά τη σήψη που προκαλείται από CLP αποκάλυψε ανεπάρκειες που προκαλούνται από σήψη που επηρεάζουν τόσο τους έμφυτους όσο και τους προσαρμοστικούς τελεστές, συμπεριλαμβανομένης της απώλειας διπλά αρνητικών Τ κυττάρων που έχουν αναφερθεί πρόσφατα να είναι πρώιμα ανταποκρινόμενα στο AKI [46]. Ιδιαίτερα, για ζώα που υποβλήθηκαν σε αγωγή με διπλή αλλά όχι εφάπαξ δόση hUC-MSC, υπήρχαν ενδείξεις αναστροφής της ενδονεφρικής εξάντλησης των ανοσοκυττάρων. Καθώς παρόμοιες τάσεις παρατηρήθηκαν επίσης στους πνεύμονες και τον σπλήνα, τα αποτελέσματά μας υποδεικνύουν τη δυνατότητα επαναλαμβανόμενης ενδοφλέβιας δόσης MSC να βελτιώσει ευρέως την εξάντληση των ανοσοκυττάρων από μη λεμφοειδή και λεμφοειδή όργανα - μια πτυχή της σήψης που έχει συνδεθεί με επακόλουθη θνησιμότητα λόγω δευτερογενής λοίμωξη [47, 48]. Με βάση την πρόσθετη παρατήρηση αυξημένου κυτταρικού θανάτου μεταξύ των ενδονεφρικών κυττάρων CD45 συν σε ζώα CLP χωρίς θεραπεία, είναι εύλογο ότι αυτό αντανακλά τις άμεσες ή έμμεσες επιδράσεις του hUC-MSC στη μείωση της μιτοχονδριακής δυσλειτουργίας και της προ-αποπτωτικής σηματοδότησης [49-51]. Ωστόσο, θα απαιτηθούν πιο εστιασμένα πειράματα για να διαλευκανθούν πλήρως οι μηχανισμοί με τους οποίους η συστηματική χορήγηση MSC διατηρεί τους αριθμούς μυελοειδών και/ή λεμφοειδών κυττάρων στη σήψη και για να καθοριστεί εάν μπορούν να αξιοποιηθούν θεραπευτικά.

Κάψουλες Cistanche

Δεδομένης της εγγενούς μεταβλητότητας, παρατηρούμε εμείς και άλλοι με μεμονωμένα αποτελέσματα για το μοντέλο CLP ποντικιού, υποθέσαμε ότι η ιεραρχική ανάλυση ομαδοποίησης των ποσοτικών ενδείξεων για μια σειρά κυκλοφορούντων μεσολαβητών που σχετίζονται με τη φλεγμονή στις 48 ώρες θα βοηθούσε στον καλύτερο ορισμό μιας διακριτής "υπογραφής απόκρισης". μεταξύ ζώων που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με MSC. Αν και το 60 τοις εκατό της ομάδας διπλής δόσης συγκεντρώθηκε σε ένα μοτίβο που τους χώριζε από την πλειονότητα των ομάδων με μονή δόση και χωρίς θεραπεία και ήταν πιο κοντά στην ψευδή ομάδα, δεν μπορούσε να εντοπιστεί πολύ σαφές προφίλ πολλαπλών αναλυτών της τροποποίησης της νόσου. Μια προσέγγιση ανάλυσης κύριου συστατικού (PCA) έδωσε παρόμοιο συμπέρασμα (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Θα πρέπει να αναγνωριστεί ότι δεν ήταν δυνατό να ληφθούν δεδομένα από ζώα που απέτυχαν να επιβιώσουν έως τις 48 ώρες και είναι πιθανό ότι οι αναλύσεις σε ένα ή περισσότερα προηγούμενα χρονικά σημεία θα μπορούσαν να παρέχουν έναν πιο διακριτικό διαχωρισμό ανταποκρινόμενου/μη ανταποκρινόμενου. Παρόλα αυτά, αυτή η ανάλυση υπογραμμίζει την πολυπλοκότητα της ποικιλίας μεταξύ των ατόμων που είναι εγγενής στα ζωικά μοντέλα σήψης και κυτταρικές θεραπείες, ακόμη και με ιδιαίτερη προσοχή στις αρχές του καλού πειραματικού σχεδιασμού [52, 53], και που αντικατοπτρίζει παρόμοιες προκλήσεις που αντιμετωπίζονται στην κλινική εφαρμογή νέες θεραπείες για τη σήψη [18, 20, 41, 54, 55].

Θα πρέπει να αναγνωριστούν ορισμένοι περιορισμοί της μελέτης. Αρχικά, έχουμε επικεντρωθεί στη διερεύνηση των in vivo επιδράσεων του επιλεγμένου hUC-MSC από CD362-καθώς αυτό το κυτταρικό προϊόν υποβάλλεται σε κλινικές δοκιμές για άλλες ασθένειες που οφείλονται στη φλεγμονή, συμπεριλαμβανομένου του ARDS που σχετίζεται με τον COVID-19-. Αυτός ο σχεδιασμός της μελέτης απέκλεισε την απόκτηση περαιτέρω γνώσης σχετικά με τα συγκριτικά αποτελέσματα, στη σήψη και το SA-AKI, του κυτταρικού προϊόντος που δοκιμάστηκε με αυτά μη επιλεγμένου hUC-MSC ή με MSC που προέρχεται από μυελό των οστών ή άλλους ιστούς. Δεύτερον, καθώς οι δόσεις κυττάρων που χρησιμοποιήθηκαν επιλέχθηκαν με βάση προηγούμενες μελέτες των ανθρώπινων MSC αντιφλεγμονωδών επιδράσεων σε ποντίκια, δεν είναι δυνατό να προσδιοριστεί εάν πολλαπλές χορηγήσεις υψηλότερου ή χαμηλότερου αριθμού κυττάρων παρέχουν μεγαλύτερο όφελος. Τέλος, καθώς τα μεγέθη των ομάδων για τα πειράματα του μοντέλου CLP είχαν τη δυνατότητα να αντιμετωπίσουν τις επιδράσεις του hUC-MSC σε έναν συστημικό φλεγμονώδη βιοδείκτη σηψαιμίας/ σοβαρότητας SA-AKI, είναι πιθανό τα μεγαλύτερα μεγέθη ομάδων να είχαν ορίσει με μεγαλύτερη σαφήνεια τις επιδράσεις των επαναλαμβανόμενων δόσεων σε επιβίωση. Ενώ αυτά τα ζητήματα υπογραμμίζουν περαιτέρω την ανάγκη για διαδοχικά προκλινικά πειράματα που τηρούν όσο το δυνατόν περισσότερο τις βασικές παραμέτρους που απαιτούνται για τον βέλτιστο σχεδιασμό κλινικών δοκιμών, τα αποτελέσματα που παρουσιάζουμε εδώ υποστηρίζουν τη συνεχή εστίαση σε σχήματα πολλαπλών δόσεων αντιφλεγμονώδους MSC στη σήψη και ΣΑ-ΑΚΗ.

βιβλιογραφικές αναφορές

1. Singer, M., Deutschman, CS, Seymour, CW, Shankar-Hari, M., Annane, D., Bauer, M., Bellomo, R., Bernard, GR, Chiche, JD, Coopersmith, CM, Hotchkiss , RS, Levy, MM, Marshall, JC, Martin, GS, Opal, SM, Rubenfeld, GD, van der Poll, T., Vincent, JL, & Angus, DC (2016). Ο τρίτος διεθνής συναινετικός ορισμός για τη σήψη και το σηπτικό σοκ (σήψη-3). The Journal of the American Medical Association, 315(8), 801–810. https://doi.org/10.1001/jama.2016.0287

2. Hoste, EA, Bagshaw, SM, Bellomo, R., Cely, CM, Colman, R., Cruz, DN, Edipidis, K., Forni, LG, Gomersall, CD, Govil, D., Honore, PM, Joannes-Boyau, O., Joannidis, M., Korhonen, AM, Lavrentieva, A., Mehta, RL, Palevsky, P., Roessler, E., Ronco, C., et al. (2015). Επιδημιολογία οξείας νεφρικής βλάβης σε βαρέως πάσχοντες ασθενείς: Η πολυεθνική μελέτη AKI-EPI. Intensive Care Medicine, 41(8), 1411–1423. https://doi.org/ 10.1007/s00134-015-3934-7

3. Rudd, KE, Johnson, SC, Agesa, KM, Shackelford, KA, Tsoi, D., Kievlan, DR, Colombara, DV, Ikuta, KS, Kissoon, N., Finfer, S., Fleischmann-Struzek, C ., Machado, FR, Reinhart, KK, Rowan, K., Seymour, CW, Watson, RS, West, TE, Marinho, F., Hay, SI, et al. (2020). Παγκόσμια, περιφερειακή και εθνική επίπτωση και θνησιμότητα σήψης, 1990-2017: Ανάλυση για το παγκόσμιο βάρος της μελέτης της νόσου. Lancet, 395 (10219), 200–211. https://doi. org/10.1016/S0140-6736(19)32989-7

4. Arutyunyan, I., Elchaninov, A., Makarov, A., & Fatkhudinov, T. (2016). Ο ομφάλιος λώρος ως προοπτική πηγή θεραπείας με βάση τα μεσεγχυματικά βλαστοκύτταρα. Stem Cells International, 2016, 6901286. https://doi.org/10.1155/2016/6901286

5. Fazekas, B., & Grifn, MD (2020). Θεραπείες που βασίζονται σε μεσεγχυματικά στρωματικά κύτταρα για οξεία νεφρική βλάβη: Πρόοδος την τελευταία δεκαετία. Kidney International, 97(6), 1130–1140. https://doi.org/10. 1016/j.kint.2019.12.019

6. Hickson, LJ, Herrmann, SM, McNicholas, BA, & Grifn, MD (2021). Πρόοδος προς την κλινική εφαρμογή μεσεγχυματικών στρωματικών κυττάρων και άλλων αναγεννητικών θεραπειών που ρυθμίζουν την ασθένεια: Παραδείγματα από τον τομέα της νεφρολογίας. Kidney360, 2(3), 542–557. https://doi.org/10.34067/kid.0005692020

7. Weiss, ARR, Lee, O., Eggenhofer, E., Geissler, E., Korevaar, SS, Soeder, Y., Schlitt, HJ, Geissler, EK, Hoogduijn, MJ, & Dahlke, MH (2020). Διαφορικές επιδράσεις του αδρανοποιημένου με θερμότητα, του MSc με έλλειψη έκκρισης και του μεταβολικά ενεργού msc στη σήψη και την αλλογενή μεταμόσχευση καρδιάς. Stem Cells, 38(6), 797-807. https://doi.org/10.1002/stem.3165

8. Jerkic, M., Gagnon, S., Rabani, R., Ward-Able, T., Masterson, C., Otulakowski, G., Curley, GF, Marshall, J., Kavanagh, BP, & Lafey, JG (2020). Τα μεσεγχυματικά στρωματικά κύτταρα του ανθρώπινου ομφάλιου λώρου εξασθενούν εν μέρει τη συστηματική σήψη ενισχύοντας τη βακτηριακή θανάτωση των περιτοναϊκών μακροφάγων μέσω της επαγωγής της οξυγενάσης της αίμης-1 σε αρουραίους. Anesthesiology, 132(1), 140–154. https://doi.org/10.1097/ ALN.0000000000003018

9. Wu, KH, Wu, HP, Chao, WR, Lo, WY, Tseng, PC, Lee, CJ, Peng, CT, Lee, MS, & Chao, YH (2016). Έκφραση χρονολογικής σειράς σηματοδότησης υποδοχέα 4 σε σηπτικά ποντίκια που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με μεσεγχυματικά βλαστοκύτταρα. Σοκ, 45(6), 634–640. https://doi. org/10.1097/SHK.00000000000000546

10. Chang, CL, Leu, S., Sung, HC, Zhen, YY, Cho, CL, Chen, A., Tsai, TH, Chung, SY, Chai, HT, Sun, CK, Yen, CH και Yip , HK (2012). Επίδραση των μεσεγχυματικών βλαστοκυττάρων που προέρχονται από αποπτωτικό λίπος στην εξασθένηση της βλάβης των οργάνων και στη μείωση της θνησιμότητας στο σύνδρομο σήψης αρουραίου που προκαλείται από παρακέντηση του τυφλού και απολίνωση. Journal of Translational Medicine, 10, 244. https://doi. org/10.1186/1479-5876-10-244

11. Hall, SR, Tsoyi, K., Ith, B., Padera Jr., RF, Lederer, JA, Wang, Z., Liu, X., & Perrella, MA (2013). Τα μεσεγχυματικά στρωματικά κύτταρα βελτιώνουν την επιβίωση κατά τη σήψη απουσία οξυγενάσης αίμης-1: Η σημασία των ουδετερόφιλων. Stem Cells, 31(2), 397-407. https://doi.org/10.1002/stem.1270

12. Zhang, G., Zou, X., Huang, Y., Wang, F., Miao, S., Liu, G., Chen, M., & Zhu, Y. (2016). Τα εξωκυτταρικά κυστίδια που προέρχονται από μεσεγχυματικά στρωματικά κύτταρα προστατεύουν από την οξεία νεφρική βλάβη μέσω της αντιοξείδωσης ενισχύοντας την ενεργοποίηση nrf2/are σε αρουραίους. Kidney and Blood Pressure Research, 41(2), 119-128. https://doi.org/10. 1159/000443413

13. Luo, CJ, Zhang, FJ, Zhang, L., Geng, YQ, Li, QG, Hong, Q., Fu, B., Zhu, F., Cui, SY, Feng, Z., Sun, XF , & Chen, XM (2014). Τα μεσεγχυματικά βλαστοκύτταρα βελτιώνουν την οξεία νεφρική βλάβη που σχετίζεται με τη σήψη σε ποντίκια. Σοκ, 41(2), 123–129. https://doi. org/10.1097/SHK.0000000000000080

14. Condor, JM, Rodrigues, CE, Sousa Moreira, R., Canale, D., Volpini, RA, Shimizu, MH, Camara, NO, Noronha Ide, L., & Andrade, L. (2016). Η θεραπεία με μεσεγχυματικά βλαστοκύτταρα που προέρχονται από ζελέ Wharton εξασθενεί νεφρική βλάβη που προκαλείται από σηψαιμία, ηπατική βλάβη και ενδοθηλιακή δυσλειτουργία. Stem Cells Translational Medicine, 5(8), 1048-1057. https://doi.org/10.5966/sctm. 2015-0138

15. Zullo, JA, Nadel, EP, Rabadi, MM, Baskind, MJ, Rajdev, MA, Demaree, CM, Vasko, R., Chugh, SS, Lamba, R., Goligorsky, MS, & Ratliff, BB (2015 ). Το έκκριμα των ενσωματωμένων σε υδρογέλη ενδοθηλιακών προγονικών κυττάρων και των μεσεγχυματικών βλαστοκυττάρων καθοδηγεί την πόλωση των μακροφάγων στην ενδοτοξαιμία. Stem Cells Translational Medicine, 4(7), 852–861. https://doi.org/10. 5966/sctm.2014-0111

16. Perlee, D., van Vught, LA, Scicluna, BP, Maag, A., Lutter, R., Kemper, EM, van 't Veer, C., Punchard, MA, Gonzalez, J., Richard, MP , Dalemans, W., Lombardo, E., de Vos, AF, & van der Poll, T. (2018). Η ενδοφλέβια έγχυση ανθρώπινων λιπωδών μεσεγχυματικών βλαστοκυττάρων τροποποιεί την απόκριση του ξενιστή στον λιποπολυσακχαρίτη στον άνθρωπο: Μια τυχαιοποιημένη, απλή-τυφλή, παράλληλης ομάδας, ελεγχόμενη με εικονικό φάρμακο δοκιμή. Stem Cells, 36(11), 1778–1788. https:// doi.org/10.1002/stem.2891

17. Gennadiy Galstyan, PM, Parovichnikova, E., Kuzmina, L., Troitskaya, V., Gemdzhian, E., & Savchenko, V. (2018). Τα αποτελέσματα της τυχαιοποιημένης ρωσικής κλινικής δοκιμής μεσεγχυματικών στρωματικών κυττάρων σε βαριά ουδετεροπενικούς ασθενείς με σηπτικό σοκ (RUMCESS) της πιλότου ενός κέντρου. International Journal Blood Research and Disorders, 5(1), 33. https://doi.org/10.23937/2469-5696/1410033

18. McIntyre, LA, Stewart, DJ, Mei, SHJ, Courtman, D., Watpool, I., Granton, J., Marshall, J., Dos Santos, C., Walley, KR, Winston, BW, Schlosser, K., Fergusson, DA, & Canadian Critical Care Trials Group, & Canadian Critical Care Translational Biology Group. (2018). Κυτταρική ανοσοθεραπεία για σηπτικό σοκ. Κλινική δοκιμή φάσης Ι. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine, 197(3), 337-347. https://doi.org/10. 1164/rccm.201705-1006OC

19. Matthay, MA, Calfee, CS, Zhuo, H., Thompson, BT, Wilson, JG, Levitt, JE, Rogers, AJ, Gotts, JE, Wiener-Kronish, JP, Bajwa, EK, Donahoe, MP, McVerry , BJ, Ortiz, LA, Exline, Μ., Christman, JW, Abbott, J., Delucchi, KL, Caballero, L., McMillan, Μ., et al. (2019). Θεραπεία με αλλογενή μεσεγχυματικά στρωματικά κύτταρα για μέτρια έως σοβαρή οξεία αναπνευστική δυσχέρεια (μελέτη START): Μια τυχαιοποιημένη δοκιμή ασφάλειας φάσης 2α. The Lancet Respiratory Medicine, 7(2), 154–162. https://doi.org/10. 1016/S2213-2600(18)30418-1

20. Swaminathan, M., Staford-Smith, M., Chertow, GM, Warnock, DG, Paragamian, V., Brenner, RM, Lellouche, F., FoxRobichaud, A., Atta, MG, Melby, S., Mehta, RL, Wald, R., Verma, S., Mazer, CD, & ερευνητές, A.-A. (2018). Αλλογενή μεσεγχυματικά βλαστοκύτταρα για τη θεραπεία της ΑΚΙ μετά από καρδιοχειρουργική επέμβαση. Journal of the American Society of Nephrology, 29(1), 260–267. https://doi.org/10.1681/ASN.2016101150

21. Gotts, JE, & Matthay, MA (2018). Κυτταρική θεραπεία στη σήψη. Ένα βήμα πιο κοντά. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine, 197(3), 280-281. https://doi.org/10.1164/rccm. 201710-2068ΕΔ

22. Griffin, MD, & Swaminathan, S. (2020). Έκδοση: Καινοτόμα βιολογικά και φάρμακα για τη στόχευση της νεφρικής φλεγμονής. Frontiers in Pharmacology, 11, 38. https://doi.org/10.3389/fphar.2020.00038

23. Horie, S., Masterson, C., Brady, J., Loftus, P., Horan, E., O'Flynn, L., Elliman, S., Barry, F., O'Brien, T. , Lafey, JG, & O'Toole, D. (2020). Μεσεγχυματικά στρωματικά κύτταρα CD362(συν) προερχόμενα από τον ομφάλιο λώρο για π.χ. coli pneumonia: Επίδραση του δοσολογικού σχήματος, της διέλευσης, της κρυοσυντήρησης και της αντιβιοτικής θεραπείας. Stem Cell Research & Therapy, 11(1), 116. https://doi.org/10.1186/s13287-020-01624-8

24. Gonzalez, H., Keane, C., Masterson, CH, Horie, S., Elliman, SJ, Higgins, BD, Scully, M., Lafey, JG, & O'Toole, D. (2020). Τα μεσεγχυματικά στρωματικά κύτταρα CD362(συν) που προέρχονται από τον ομφάλιο λώρο εξασθενούν την πολυμικροβιακή σήψη που προκαλείται από την απολίνωση και την παρακέντηση του τυφλού. International Journal of Molecular Sciences, 21(21). https://doi.org/10.3390/ijms21218270

25. Lewis, AJ, Seymour, CW, & Rosengart, MR (2016). Τρέχοντα μοντέλα σήψης ποντικού. Surgical Infections, 17(4), 385-393. https://doi.org/10.1089/sur.2016.021

26. Remick, DG, & Ward, PA (2005). Αξιολόγηση μοντέλων ενδοτοξινών για τη μελέτη της σήψης. Shock, 24(Suppl 1), 7–11. https:// doi.org/10.1097/01.shk.0000191384.34066.85

27. de Witte, SFH, Luk, F., Sierra Parraga, JM, Gargesha, M., Merino, A., Korevaar, SS, Shankar, AS, O'Flynn, L., Elliman, SJ, Roy, D. , Betjes, MGH, Newsome, PN, Baan, CC, & Hoogduijn, MJ (2018). Η ανοσορύθμιση από θεραπευτικά μεσεγχυματικά στρωματικά κύτταρα (MSC) πυροδοτείται μέσω φαγοκυττάρωσης του MSc από μονοκυτταρικά κύτταρα. Stem Cells, 36(4), 602-615. https:// doi.org/10.1002/stem.2779

28. Zhao, X., Liu, D., Gong, W., Zhao, G., Liu, L., Yang, L., & Hou, Y. (2014). Οι συνδέτες του υποδοχέα 3 τύπου toll, poly(I: C), βελτιώνουν την ανοσοκατασταλτική λειτουργία και τη θεραπευτική επίδραση των μεσεγχυματικών βλαστοκυττάρων στη σήψη μέσω της αναστολής του mir-143. Stem Cells, 32(2), 521-533. https://doi.org/10.1002/stem.1543

29. Nemeth, K., Leelahavanichkul, A., Yuen, PS, Mayer, B., Parmelee, A., Doi, K., Robey, PG, Leelahavanichkul, K., Koller, BH, Brown, JM, Hu, X., Jelinek, I., Star, RA, & Mezey, E. (2009). Τα στρωματικά κύτταρα του μυελού των οστών εξασθενούν τη σήψη μέσω επαναπρογραμματισμού των μακροφάγων ξενιστών που εξαρτάται από την προσταγλανδίνη Ε(2) για να αυξήσουν την παραγωγή ιντερλευκίνης-10 τους. Nature Medicine, 15(1), 42–49. https://doi.org/10.1038/nm.1905

30. Fletcher, AL, Elman, JS, Astarita, J., Murray, R., Saeidi, N., D'Rozario, J., Knoblich, K., Brown, FD, Schildberg, FA, Nieves, JM, Heng , TS, Boyd, RL, Turley, SJ, & Parekkadan, B. (2014). Οι μεταμοσχεύσεις δικτυωτών κυττάρων ινοβλαστικών λεμφαδένων δείχνουν ισχυρή θεραπευτική αποτελεσματικότητα στη σήψη ποντικού υψηλής θνησιμότητας. Science Translational Medicine, 6(249), 249ra109. https:// doi.org/10.1126/scitranslmed.3009377

31. Gonzalez-Rey, E., Anderson, P., Gonzalez, MA, Rico, L., Buscher, D., & Delgado, M. (2009). Τα ανθρώπινα ενήλικα βλαστοκύτταρα που προέρχονται από λιπώδη ιστό προστατεύουν από την πειραματική κολίτιδα και τη σήψη. Gut, 58(7), 929–939. https://doi.org/10.1136/gut.2008. 168534

32. Kaucsar, T., Godo, M., Revesz, C., Kovacs, M., Mocsai, A., Kiss, N., Albert, M., Krenacs, T., Szenasi, G., & Hamar, Π. (2016). Η αναλογία λιποκαλίνης που σχετίζεται με τα ουδετερόφιλα ζελατινάση ούρων/πλάσματος είναι ένας ευαίσθητος και ειδικός δείκτης υποκλινικής οξείας νεφρικής βλάβης σε ποντίκια. PLoS One, 11(1), e0148043. https://doi.org/10.1371/journ al.pone.0148043

33. Park, HK, Kim, S., Lee, S.-S., Kim, H.-J., Ahn, H.-S., Song, JY, Um, T.-H., Cho, C .-R., Jung, H., Koo, H.-K., Sim, YS, Song, J.-U., & Park, J.-H. (2015). Βοηθά το NGAL του πλάσματος για την πρόβλεψη οξείας νεφρικής βλάβης σε ασθενείς με σήψη;: Συστηματική ανασκόπηση και μετα-ανάλυση. European Respiratory Journal, 46 (suppl 59), PA2148. https://doi.org/10.1183/13993003.congr ess-2015.PA2148

34. Koeze, J., van der Horst, ICC, Keus, F., Wiersema, R., Dieperink, W., Kootstra-Ros, JE, Zijlstra, JG, & van Meurs, M. (2020). Λιποκαλίνη που σχετίζεται με ουδετερόφιλα ζελατινάση πλάσματος κατά την εισαγωγή στη μονάδα εντατικής θεραπείας ως προγνωστικός παράγοντας εξέλιξης οξείας νεφρικής βλάβης. Clinical Kidney Journal, 13(6), 994-1002. https://doi. org/10.1093/ckj/sfaa002

35. Lee, KY (2019). Πόλωση Μ1 και Μ2 μακροφάγων: Μια μίνι ανασκόπηση. Ιατρική Βιολογική Επιστήμη και Μηχανική, 2(1), 1–5. https://doi.org/10.30579/mbse.2019.2.1.1

36. Eggenhofer, E., Luk, F., Dahlke, MH, & Hoogduijn, MJ (2014). Η ζωή και η μοίρα των μεσεγχυματικών βλαστοκυττάρων. Frontiers in Immunology, 5, 148. https://doi.org/10.3389/fmmu.2014.00148

37. Luk, F., de Witte, SF, Korevaar, SS, Roemeling-van Rhijn, M., Franquesa, M., Strini, T., van den Engel, S., Gargesha, M., Roy, D. , Dor, FJ, Horwitz, EM, de Bruin, RW, Betjes, MG, Baan, CC, & Hoogduijn, MJ (2016). Τα αδρανοποιημένα μεσεγχυματικά βλαστοκύτταρα διατηρούν την ανοσοτροποποιητική ικανότητα. Stem Cells and Development, 25(18), 1342–1354. https://doi.org/10.1089/scd. 2016.0068

38. Li, JL, Li, G., Jing, XZ, Li, YF, Ye, QY, Jia, HH, Liu, SH, Li, XJ, Li, H., Huang, R., Zhang, Y., & Wang, H. (2018). Αξιολόγηση βιοδεικτών που σχετίζονται με κλινική σήψη σε μοντέλο σηπτικού ποντικού. Journal of International Medical Research, 46(6), 2410–2422. https://doi.org/10.1177/0300060518764717

39. Cai, L., Rubin, J., Han, W., Venge, P., & Xu, S. (2010). Η προέλευση πολλαπλών μοριακών μορφών στα ούρα του HNL/NGAL. Clinical Journal of the American Society of Nephrology, 5(12), 2229– 2235. https://doi.org/10.2215/CJN.00980110

40. Capcha, JMC, Rodrigues, CE, Moreira, RS, Silveira, MD, Dourado, P., Dos Santos, F., Irigoyen, MC, Jensen, L., Garnica, MR, Noronha, IL, Andrade, L. , & Gomes, SA (2020).

41. Schlosser, K., Wang, JP, Dos Santos, C., Walley, KR, Marshall, J., Fergusson, DA, Winston, BW, Granton, J., Watpool, I., Stewart, DJ, McIntyre, LA, Mei, SHJ, & Canadian Critical Care Trials, G., & the Canadian Critical Care Translational Biology, G. (2019). Επιδράσεις της θεραπείας με μεσεγχυματικά βλαστοκύτταρα στα επίπεδα συστηματικών κυτοκινών σε μια δοκιμή ασφαλείας κλιμάκωσης δόσης φάσης 1 σε ασθενείς με σηπτικό σοκ. Critical Care Medicine, 47(7), 918– 925. https://doi.org/10.1097/CCM.0000000000003657

42. van Rhijn-Brouwer, FCC, Gremmels, H., Fledderus, JO, & Verhaar, MC (2018). Χαρακτηριστικά μεσεγχυματικών στρωματικών κυττάρων και αναγεννητικό δυναμικό σε καρδιαγγειακές παθήσεις: Επιπτώσεις για κυτταρική θεραπεία. Cell Transplantation, 27(5), 765-785. https:// doi.org/10.1177/0963689717738257

43. Sun, XY, Ding, XF, Liang, HY, Zhang, XJ, Liu, SH, Bing, H., Duan, XG, & Sun, TW (2020). Αποτελεσματικότητα της θεραπείας με μεσεγχυματικά βλαστοκύτταρα για σήψη: Μια μετα-ανάλυση προκλινικών μελετών. Stem Cell Research & Therapy, 11(1), 214. https://doi.org/ 10.1186/s13287-020-01730-7

44. Laroye, C., Gibot, S., Reppel, L., & Bensoussan, D. (2017). Συνοπτική ανασκόπηση: Μεσεγχυματικά στρωματικά/βλαστικά κύτταρα: Μια νέα θεραπεία για τη σήψη και το σηπτικό σοκ; Stem Cells, 35(12), 2331-2339. https:// doi.org/10.1002/stem.2695

45. Brady, J., Horie, S., & Lafey, JG (2020). Ο ρόλος της προσαρμοστικής ανοσοαπόκρισης στη σήψη. Intensive Care Medicine Experimental, 8(Suppl 1), 20. https://doi.org/10.1186/s40635-020-00309-z

46. ​​Martina, MN, Noel, S., Saxena, A., Bandapalle, S., Majithia, R., Jie, C., Arend, LJ, Allaf, ME, Rabb, H., & Hamad, AR (2016 ). Τα διπλά αρνητικά άλφα-βήτα Τ κύτταρα είναι πρώιμα ανταποκρινόμενα στο Aki και βρίσκονται στους ανθρώπινους νεφρούς. Journal of the American Society of Nephrology, 27(4), 1113–1123. https://doi.org/10.1681/ ASN.2014121214

47. Hotchkiss, RS, Tinsley, KW, Swanson, PE, Schmieg Jr., RE, Hui, JJ, Chang, KC, Osborne, DF, Freeman, BD, Cobb, JP, Buchman, TG, & Karl, IE (2001 ). Η απόπτωση που προκαλείται από σήψη προκαλεί προοδευτική βαθιά εξάντληση των λεμφοκυττάρων Β και CD4 συν Τ στους ανθρώπους. The Journal of Immunology, 166(11), 6952-6963. https://doi.org/10.4049/jimmunol.166.11.6952

48. Condotta, SA, Cabrera-Perez, J., Badovinac, VP, & Grifth, TS (2013). Ανοσία που προκαλείται από Τ-κύτταρα και ο ρόλος του TRAIL στην επαγόμενη από σήψη ανοσοκαταστολή. Critical Reviews in Immunology, 33(1), 23–40. https://doi.org/10.1615/critrevimmunol.{12}}

49. Khosrojerdi, A., Soudi, S., Hosseini, AZ, Eshghi, F., Shafee, A., & Hashemi, SM (2021). Ανοσοτροποποιητικές και θεραπευτικές επιδράσεις μεσεγχυματικών βλαστοκυττάρων στη δυσλειτουργία οργάνων στη σήψη. Σοκ, 55(4), 423–440. https://doi.org/10.1097/SHK.0000000000 001644

50. Nie, P., Bai, X., Lou, Y., Zhu, Y., Jiang, S., Zhang, L., Tian, ​​N., Luo, P., & Li, B. (2021) . Τα μεσεγχυματικά βλαστοκύτταρα του ανθρώπινου ομφάλιου λώρου μειώνουν την οξειδωτική βλάβη και την απόπτωση στη διαβητική νεφροπάθεια ενεργοποιώντας το Nrf2. Stem Cell Research & Therapy, 12(1), 450. https://doi.org/10.1186/s13287-021-02447-x

51. dos Santos, CC, Murthy, S., Hu, P., Shan, Y., Haitsma, JJ, Mei, SH, Stewart, DJ, & Liles, WC (2012). Ανάλυση δικτύου των μεταγραφικών αποκρίσεων που προκαλούνται από τη θεραπεία με μεσεγχυματικά βλαστοκύτταρα πειραματικής σήψης. American Journal of Pathology, 181(5), 1681–1692. https://doi.org/10.1016/j.ajpath.2012.08.009

52. von Kortzfeisch, VT, Karp, NA, Palme, R., Kaiser, S., Sachser, N., & Richter, SH (2020). Βελτίωση της αναπαραγωγιμότητας στην έρευνα σε ζώα με διαίρεση του πληθυσμού της μελέτης σε πολλά «μίνι-πειράματα». Scientifc Reports, 10(1), 16579. https://doi.org/10. 1038/s41598-020-73503-4

53. Tanavde, V., Vaz, C., Rao, MS, Vemuri, MC, & Pochampally, RR (2015). Έρευνα που χρησιμοποιεί μεσεγχυματικά βλαστοκύτταρα/στρωματικά κύτταρα: Μετρική ποιότητας για την ανάπτυξη υλικού αναφοράς. Cytotherapy, 17(9), 1169–1177. https://doi.org/10.1016/j.jcyt.2015. 07.008

54. Pickkers, P., Heemskerk, S., Schouten, J., Laterre, PF, Vincent, JL, Beishuizen, A., Jorens, PG, Spapen, H., Bulitta, M., Peters, WH, & van der Hoeven, JG (2012). Αλκαλική φωσφατάση για τη θεραπεία οξείας νεφρικής βλάβης που προκαλείται από σήψη: Μια προοπτική τυχαιοποιημένη διπλή-τυφλή ελεγχόμενη με εικονικό φάρμακο δοκιμή. Critical Care, 16(1), R14. https://doi.org/10.1186/cc11159

55. Pickkers, P., Mehta, RL, Murray, PT, Joannidis, M., Molitoris, BA, Kellum, JA, Bachler, M., Hoste, EAJ, Hoiting, O., Krell, K., Ostermann, M ., Rozendaal, W., Valkonen, Μ., Brealey, D., Beishuizen, Α., Meziani, F., Murugan, R., de Geus, Η., Payen, D., et al. (2018). Επίδραση της ανθρώπινης ανασυνδυασμένης αλκαλικής φωσφατάσης στην κάθαρση κρεατινίνης 7-της ημέρας σε ασθενείς με οξεία νεφρική βλάβη που σχετίζεται με σήψη: Μια τυχαιοποιημένη κλινική δοκιμή. The Journal of the American Medical Association, 320(19), 1998– 2009. https://doi.org/10.1001/jama.2018.14283

Barbara Fazekas1 · Senthilkumar Alagesan2 · Luke Watson2 · Olivia Ng1,2 · Callum M. Conroy1,2 · Cristina Català3 · Maria Velascode Andres3 · Neema Negi1 · Jared Q. Gerlach4 · Sean O. Hynes5,6 · Francisco Lozano3, Stephen J. Elliman2 · Matthew D. Grifn1,9,10

1 Ινστιτούτο Αναγεννητικής Ιατρικής στο CÚRAM Center for Research in Medical Devices, School of Medicine, National University of Ireland Galway, Galway, Ιρλανδία

2 Orbsen Therapeutics Ltd., Galway, Ιρλανδία

3 Institut d'Investigacions Biomèdiques August Pi i Sunyer, Βαρκελώνη, Ισπανία

4 Ομάδα Glycoscience, Εθνικό Κέντρο Επιστήμης Βιοϊατρικής Μηχανικής, Εθνικό Πανεπιστήμιο της Ιρλανδίας Galway, Galway, Ιρλανδία

5 Πειθαρχία Παθολογίας, Ιατρική Σχολή, Εθνικό Πανεπιστήμιο της Ιρλανδίας Galway, Galway, Ιρλανδία

6 Τμήμα Ιστοπαθολογίας, Πανεπιστημιακά Νοσοκομεία Galway, Galway, Ιρλανδία

7 Servei d'Immunologia, Hospital Clínic de Barcelona, ​​Βαρκελώνη, Ισπανία

8 Department de Biomedicina, Universitat de Barcelona, ​​Βαρκελώνη, Ισπανία

9 Τμήμα Νεφρολογίας, Ομάδα Πανεπιστημιακής Υγείας Saolta, Πανεπιστημιακά Νοσοκομεία Galway, Galway, Ιρλανδία

10 Εθνικό Πανεπιστήμιο της Ιρλανδίας Galway, REMEDI, Βιοϊατρικές Επιστήμες, Corrib Village, Dangan, Galway H91 TK33, Ιρλανδία