Μηχανισμός του σπέρματος Cistanche–Vaccariae στη θεραπεία της χρόνιας μη βακτηριακής προστατίτιδας σε αρουραίους με βάση τη φαρμακολογία δικτύου

 

Περίληψη

Για τη διερεύνηση της προστατευτικής επίδρασης του ζεύγους βοτάνων Cistanche–Vaccariae Semen (Cistanche–VS) στη φλεγμονώδη βλάβη στη χρόνια μη βακτηριακή προστατίτιδα (CNP). Σε αυτή τη μελέτη, 41 ενεργά συστατικά και 156 αντίστοιχες πρωτεΐνες-στόχοι εξετάστηκαν μέσω TCMSP και εξόρυξης βιβλιογραφίας. Οι βάσεις δεδομένων OMIM και GeneCards χρησιμοποιήθηκαν για τον εντοπισμό 9.848 στόχων που σχετίζονται με ασθένειες για το CNP. Το Cytoscape και το STRING χρησιμοποιήθηκαν για την κατασκευή του δικτύου αλληλεπίδρασης πρωτεΐνης-πρωτεΐνης (PPI) και του δικτύου ενεργού συστατικού-στόχου ασθένειας-οδού. Τα αποτελέσματα PPI αφορούσαν κυρίως βασικές πρωτεΐνες όπως η ιντερλευκίνη-6 (IL-6), ο παράγοντας νέκρωσης όγκου (TNF-), η ιντερλευκίνη-1 βήτα (IL-1), η πρωτεΐνη όγκου p53 (TP53) και η RAC-άλφα σερίνη/θρεονίνη-πρωτεϊνική κινάση (AKT1). Οι αναλύσεις εμπλουτισμού οδών GO και KEGG διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας την πλατφόρμα Metascape. Οι εμπλουτισμένες οδοί KEGG περιελάμβαναν μονοπάτια σηματοδότησης PI3K-AKT, λιπιδίων και αθηροσκλήρωσης, καρκίνου του προστάτη και MAPK. Πραγματοποιήθηκε μοριακή σύνδεση μεταξύ ενεργών συστατικών και πυρήνων στόχων. Για την επαλήθευση των παραπάνω δεδομένων, τα επίπεδα ορού της IL-1, της ιντερλευκίνης-18 (IL-18) και του TNF- μετρήθηκαν σε πειράματα σε ζώα. Παθολογικές αλλαγές στον προστατικό ιστό παρατηρήθηκαν με χρώση Η&Ε. Οι βασικές πρωτεΐνες-στόχοι IL-6, TNF-, IL-1 και πρωτεΐνες που σχετίζονται με το μονοπάτι ανιχνεύθηκαν με στύπωμα Western. Πειράματα σε ζώα έδειξαν ότι η ρύθμιση των φλεγμονωδών παραγόντων και η έκφραση των πρωτεϊνών που σχετίζονται με τη φλεγμονή καταστέλλονταν σε κάθε ομάδα θεραπείας. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η οδός σηματοδότησης PI3K-AKT μπορεί να εμπλέκεται στη βελτίωση του CNP μέσω μηχανισμών πολλαπλών συστατικών και πολλαπλών στόχων.

Λέξεις κλειδιά:φαρμακολογία δικτύου? Ζεύγος βοτάνων?χρόνια μη βακτηριακή προστατίτιδα; Σιστάνχη; Vaccariae Semen; Διαδρομή σηματοδότησης PI3K-AKT

 

 

 

 

 

Συμπληρώματα εκχυλίσματος Cistanche για χρόνια μη βακτηριακή προστατίτιδα

Κάντε κλικ για περισσότερες λεπτομέρειες

 

Υποστήριξη της Wecistanche-Για περισσότερες λεπτομέρειες σχετικά με τη συνεργασία
Διεύθυνση ηλεκτρονικού ταχυδρομείου:wallence.suen@wecistanche.com

Εισαγωγή

Χρόνια μη βακτηριακή προστατίτιδα (CNP)είναι μια ουρογεννητική διαταραχή που εμφανίζεται συνήθως σε μεσήλικες άνδρες. Κλινικά, χαρακτηρίζεται από δυσουρία, συχνοουρία, επείγουσα ανάγκη, πόνο κατά την ούρηση και αίσθημα ατελούς κένωσης της ουροδόχου κύστης. Σε σοβαρές περιπτώσεις, μπορεί να επηρεάσει την ψυχική υγεία, με αϋπνία, ζωντανά όνειρα, άγχος και κατάθλιψη. Στην παραδοσιακή κινεζική ιατρική (TCM), αντιστοιχεί σε κατηγορίες όπως "Jinglin", "Baizhuo", "Longbi" και "Lin‑zhuo". Η κυρίαρχη παθογένεση του TCM περιλαμβάνει υγρή θερμότητα με στάση. Οι αρχές θεραπείας συνήθως δίνουν έμφαση στην εκκαθάριση της θερμότητας, στην επίλυση της υγρασίας, στην ενεργοποίηση του αίματος και στη ρύθμιση του τσι. Οι συμβατικές δυτικές θεραπείες περιλαμβάνουν άλφα-αναστολείς, αντιβιοτικά και μη στεροειδή αντιφλεγμονώδη φάρμακα. Προς το παρόν, επειδή η παθογένεση παραμένει ασαφής, οι αποτελεσματικές θεραπείες για το CNP είναι περιορισμένες.

Το ζεύγος βοτάνων Cistanche–Vaccariae Semen χρησιμοποιείται παραδοσιακά για να καθαρίσει την υγρασία στο κατώτερο jiao, να προωθήσει την κυκλοφορία του αίματος και να ρυθμίσει το qi. Το Cistanche εισέρχεται στα κανάλια των νεφρών και της ουροδόχου κύστης και βοηθά στην αντιμετώπιση της χαμηλότερης υγρασίας. Σύγχρονες φαρμακολογικές μελέτες έχουν δείξει ότι το Cistanche επιδεικνύει αντιφλεγμονώδη, αντιβακτηριακή και αναλγητική δράση. τα αλκαλοειδή και τα φαινυλαιθανοειδή συστατικά του Cistanche έχουν συσχετιστεί με ουρογεννητική υποστήριξη, συμπεριλαμβανομένων των πιθανών οφελών που σχετίζονται με την υγεία του προστάτη. Το σπέρμα Vaccariae εισέρχεται στα κανάλια του ήπατος και των νεφρών, προάγοντας την κυκλοφορία του αίματος, ρυθμίζοντας την έμμηνο ρύση και διευκολύνοντας τη διούρηση για την ανακούφιση του οιδήματος και του στραγγαλισμού. Η σύγχρονη φαρμακολογία αναφέρει ότι τα αιθανολικά εκχυλίσματα του σπέρματος Vaccariae έχουν αντιφλεγμονώδη αποτελέσματα και οι πολυσακχαρίτες του σπέρματος Vaccariae μπορεί να μετριάσουν τον τραυματισμό της ουροδόχου κύστης που προκαλείται από λοίμωξη του ουροποιητικού συστήματος.

Τα τελευταία χρόνια, τα ζεύγη βοτάνων TCM έχουν εφαρμοστεί ευρέως για τη διερεύνηση της συμβατότητας, της αποτελεσματικότητας και των μηχανισμών των συνταγών. Ως εκ τούτου, αυτή η μελέτη εφαρμόζει δικτυακή φαρμακολογία και πειράματα σε ζώα για να αποσαφηνίσει και να επικυρώσει πλήρως τους μοριακούς μηχανισμούς με τους οποίους το ζεύγος βοτάνων Cistanche–Vaccariae Semen αντιμετωπίζει το CNP, με στόχο να παρέχει αναφορά για την κλινική εφαρμογή και την πειραματική του έρευνα, καθώς και την πιθανή μετάφρασή του σε συμπληρώματα διατροφής που στοχεύουν στην προστατίτιδα.

Υλικά και Μέθοδοι

1.1 Αντιδραστήρια

 

Κόκκοι Cistanche (κατασκευαστής: Shenwei Pharmaceutical Group Co., Ltd.; Αρ. παρτίδας: 21082272)

Κόκκοι Vaccariae Semen (Shenwei Pharmaceutical Group Co., Ltd.; Αρ. παρτίδας: 230515P2)

Carrageenan (Sigma, ΗΠΑ, αριθμός παρτίδας: C1013-100G)

Κιτ ELISA για IL-1 , IL-18 και TNF- (Sangon Biotech, αριθμοί παρτίδας: D731007, D731079, D731168)

-αντίσωμα ακτίνης (Wuhan Servicebio; Αρ. παρτίδας: ZB15001-HRP-100)

Αντισώματα: IL-6, TNF-, IL-1, 3-κινάση φωσφατιδυλινοσιτόλης (PI3K), φωσφορυλιωμένο PI3K (p-PI3K), πρωτεϊνική κινάση Β (PKB/AKT), φωσφορυλιωμένο AKT (p‑angsu:Abtic; DF6087, AF7014, AF4006, AF6241, AF3241, AF0836, AF8355)

 

1.2 Ζώα

Σαράντα αρσενικοί αρουραίοι Sprague–Dawley με δείκτη προστασίας SPF (180–200 g) παρασχέθηκαν από τη Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd. Άδεια παραγωγής: SCXK (Liao) 2020-0001. άδεια χρήσης: SYXK (Ji) 2017-0007. Οι αρουραίοι στεγάστηκαν υπό τυπικές εργαστηριακές συνθήκες: 25 ± 2 βαθμοί, σχετική υγρασία 50 ± 15%, κύκλος φωτός/σκότους 12 ώρες, με ελεύθερη πρόσβαση σε τροφή και νερό. Το πρωτόκολλο εγκρίθηκε από την Εργαστηριακή Επιτροπή Ευημερίας των Ζώων του Πανεπιστημίου Κινεζικής Ιατρικής του Hebei (αρ. έγκρισης: DWLL202401001).

 

1.3 Συλλογή στόχων για χημικά συστατικά του σπέρματος Cistanche–Vaccariae

Χρησιμοποιώντας τα ονόματα των βοτάνων ως λέξεις-κλειδιά, τα ενεργά συστατικά και οι πρωτεΐνες-στόχοι ανακτήθηκαν από το TCMSP και τη βιβλιογραφία, με κατώφλια διαλογής στοματική βιοδιαθεσιμότητα (OB) μεγαλύτερη από ή ίση με 30 και ομοιότητα φαρμάκου (DL) μεγαλύτερη ή ίση με 0,18. Τα ονόματα των πρωτεϊνών-στόχων τυποποιήθηκαν μέσω UniProt με είδη περιορισμένα στον Homo sapiens για τη λήψη συμβόλων γονιδίων.

 

1.4 Συλλογή στόχων που σχετίζονται με τη νόσο CNP

Η "χρόνια μη βακτηριακή προστατίτιδα" χρησιμοποιήθηκε ως λέξη-κλειδί στις GeneCards και OMIM. Τα ονόματα γονιδίων τυποποιήθηκαν. Τα αποτελέσματα συγχωνεύτηκαν και οι στόχοι χωρίς αναγνωριστικά UniProt ή διπλότυπα αφαιρέθηκαν για να ληφθεί το πλήρες σύνολο στόχων ασθενειών. Το VENNY 2.1.0 χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό της τομής μεταξύ των στόχων φαρμάκων Cistanche–Vaccariae Semen και των στόχων της νόσου CNP, αποδίδοντας πιθανούς θεραπευτικούς στόχους.

 

1.5 Κατασκευή του δικτύου αλληλεπίδρασης πρωτεϊνών

Πιθανοί στόχοι εισήχθησαν στο STRING (τρόπος λειτουργίας πολλαπλών πρωτεϊνών, είδη: Homo sapiens, βαθμολογία εμπιστοσύνης Μεγαλύτερο ή ίσο με 0,7) για ανάλυση PPI και τα δεδομένα αλληλεπίδρασης αποθηκεύτηκαν. Το Cytoscape 3.10.1 χρησιμοποιήθηκε για τοπολογική ανάλυση. Ως βασικοί στόχοι στην φαρμακολογική ανάλυση δικτύου επιλέχθηκαν κόμβοι με κεντρικότητα Βαθμού, Κοντότητας και Μεταξύ του μέσου όρου.

 

1.6 Εμπλουτισμός GO και KEGG

Πραγματοποιήθηκαν αναλύσεις εμπλουτισμού GO και KEGG για τους κοινούς στόχους για τη μελέτη βασικών βιολογικών λειτουργιών και οδών σηματοδότησης που εμπλέκονται στη θεραπεία του σπέρματος Cistanche-Vaccariae του CNP. Η πλατφόρμα Metascape χρησιμοποιήθηκε για ανάλυση και οπτικοποίηση.

 

1.7 Κατασκευή και ανάλυση δικτύου

Το Cytoscape 3.9.1 χρησιμοποιήθηκε για οπτικοποίηση για την κατασκευή:
(1) Το δίκτυο δυνητικών στόχων PPI για το σπέρμα Cistanche–Vaccariae έναντι του CNP και για την ανάλυση τοπολογικών χαρακτηριστικών για τον εντοπισμό βασικών στοιχείων και βασικών στόχων.
(2) Το δίκτυο «ενεργές ενώσεις – στόχοι ασθενειών – μονοπάτια σηματοδότησης».

1.8 Μοριακή σύνδεση
Οι τρισδιάστατες κρυσταλλικές δομές των πρωτεϊνών-στόχων λήφθηκαν από το PDB (είδος: Homo sapiens; ανάλυση 2–3 Α). Οι βασικές ενώσεις λήφθηκαν από το PubChem σε μορφή SDF. Τα AutoDockTools και PyMol 2.5 χρησιμοποιήθηκαν για σύνδεση και οπτικοποίηση.

1.9 Πειράματα σε ζώα

1.9.1 Ομαδοποίηση και ίδρυση μοντέλου

Σαράντα αρουραίοι χωρίστηκαν τυχαία σε πέντε ομάδες (n=8 η καθεμία): εικονική χειρουργική επέμβαση (Sham), μοντέλο (Mod), Cistanche–Vaccariae Semen (Cistanche–VS), Cistanche (Cistanche) και Vaccariae Semen (VS). Με βάση προηγούμενες εργασίες, επιλέχθηκε μια υψηλή δόση (εμβαδόν επιφάνειας σώματος–μετατρεπόμενο ισοδύναμο): ζεύγος βοτάνων 1,08 g/kg, Cistanche 0,54 g/kg, Vaccariae Semen 0,54 g/kg. Μετά από μια εβδομάδα εγκλιματισμού, η μοντελοποίηση ακολούθησε βιβλιογραφικές μεθόδους. Οι αρουραίοι αναισθητοποιήθηκαν με πεντοβαρβιτάλη νατρίου 3%. Κάτω από άσηπτες συνθήκες, έγινε μια τομή ~2 cm στη μέση γραμμή κάτω κοιλίας για να αποκαλυφθεί η ουροδόχος κύστη. Ένα διάλυμα καραγενάνης 1% (100 μL ανά λοβό) εγχύθηκε στον αριστερό και τον δεξιό κοιλιακό λοβό του προστάτη χρησιμοποιώντας στείρα σύριγγα 1 mL. Η εικονική ομάδα έλαβε ίσους όγκους φυσιολογικού ορού. Πραγματοποιήθηκε μετεγχειρητική παρακολούθηση. Η επιτυχία της μοντελοποίησης αξιολογήθηκε με βάση τη συνολική ανατομία, τον δείκτη προστάτη και την ιστοπαθολογία σύμφωνα με τη βιβλιογραφία.

 

1.9.2 Συλλογή δειγμάτων

Μετά από τέσσερις εβδομάδες καθετηριασμού, οι αρουραίοι αναισθητοποιήθηκαν με πεντοβαρβιτάλη νατρίου 3%. Συλλέχτηκε αίμα από τη μηριαία αρτηρία. Ο ορός διαχωρίστηκε με φυγοκέντρηση στους 4 βαθμούς, 2.500 r/min για 20 λεπτά και αποθηκεύτηκε στους -80 βαθμούς. Οι προστάτες αποκόπηκαν, ξεπλύθηκαν με φυσιολογικό ορό, ξηράνθηκαν με κηλίδες και ζυγίστηκαν. Έγινε μια τομή στη μέση: ο αριστερός κοιλιακός λοβός στερεώθηκε σε παραφορμαλδεΰδη και ο δεξιός κοιλιακός λοβός καταψύχθηκε γρήγορα σε υγρό άζωτο.

 

1.9.3 Δείκτης προστάτη

Δείκτης προστάτη=βάρος προστάτη / σωματικό βάρος × 100%.

 

1.9.4 Φλεγμονώδεις κυτοκίνες ορού

Οι IL-1, IL-18 και TNF ορού μετρήθηκαν σύμφωνα με τις οδηγίες του κιτ ELISA.

 

1.9.5 Ιστοπαθολογία

Οι προστάτες υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διαβαθμισμένη αφυδάτωση με αιθανόλη, ενσωμάτωση παραφίνης, τομή και χρώση αιματοξυλίνης-ηωσίνης για μικροσκοπία φωτός.

 

1.9.6 Δυτική λεκάνη

Οι κατεψυγμένοι προστάτες ζυγίστηκαν, κομματιάστηκαν, λύθηκαν και φυγοκεντρήθηκαν για να εκχυλιστούν πρωτεΐνες. Η SDS-PAGE, η μεταφορά, η πλύση (1×TBST, 6 × 5 λεπτά), ο γρήγορος αποκλεισμός (10 λεπτά), η πλύση και η πρωτογενής επώαση αντισωμάτων (4 βαθμοί όλη τη νύχτα) ακολουθήθηκαν από ανίχνευση ECL. Το ImageJ χρησιμοποιήθηκε για πυκνομετρική ανάλυση.

 

1.9.7 Στατιστικά στοιχεία

Χρησιμοποιήθηκε το GraphPad Prism 9.0. Τα δεδομένα είναι μέση τιμή ± SD. Οι συγκρίσεις δύο ομάδων χρησιμοποίησαν τεστ ανεξάρτητων δειγμάτων. πολλαπλές ομάδες χρησιμοποίησαν μονόδρομη ANOVA. P < 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντικό.

 

Αποτελέσματα

2.1 Έλεγχος χημικών συστατικών του σπέρματος Cistanche–Vaccariae

Χρησιμοποιώντας το TCMSP σε συνδυασμό με τη βιβλιογραφία, αναγνωρίστηκαν 41 ενεργά συστατικά για το ζεύγος βοτάνων. Λεπτομερείς πληροφορίες εξαρτημάτων παρατίθενται στον Πίνακα 1.

 

2.2 Στόχοι του σπέρματος Cistanche–Vaccariae που δρουν στο CNP

Στο UniProt, τυποποιήθηκαν 175 στόχοι γονιδίων που σχετίζονται με φάρμακα. Χρησιμοποιώντας τη "χρόνια μη βακτηριακή προστατίτιδα" ως λέξη-κλειδί στα GeneCards και OMIM, ελήφθησαν 9.848 στόχοι που σχετίζονται με νόσο. Οι διασταυρούμενοι στόχοι φαρμάκων και ασθενειών απέδωσαν 156 πιθανούς θεραπευτικούς στόχους (βλ. Εικόνα 1).

 

2.3 Βασικοί στόχοι για το σπέρμα Cistanche–Vaccariae έναντι του CNP

Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2, το δίκτυο PPI περιείχε 156 κόμβους και 1.048 άκρες. Οι κόμβοι δηλώνουν πρωτεΐνες και οι ακμές δηλώνουν τις αλληλεπιδράσεις τους. Με βάση το Βαθμό, την Κοντότητα και το Μεταξύ πάνω από το μέσο όρο, επιλέχθηκαν οι κορυφαίοι 15 ολοκληρωμένοι στόχοι (βλ. Πίνακα 2, στόχοι που απεικονίζονται στο Σχήμα 2).

 

2.4 Βιολογικές λειτουργίες GO και εμπλουτισμός οδού KEGG

Κοινοί στόχοι εισήχθησαν στο Metascape για εμπλουτισμό GO, αποδίδοντας 2.604 όρους GO: 2.316 όρους βιολογικής διεργασίας (π.χ. αποπτωτική διεργασία, χρόνια φλεγμονώδης απόκριση, θετική ρύθμιση του αποπτωτικού κατακερματισμού DNA, θετική ρύθμιση της βιοσύνθεσης), 196 όροι μοριακής λειτουργίας (π.χ. δραστικότητα οξειδάσης αδρενεργικού υποδοχέα ιστονικού υποδοχέα, ιστονική δράση, δραστηριότητα), και 92 όρους κυτταρικών συστατικών (π.χ. σύμπλοκο κινάσης, σύμπλοκο κασπάσης, σύμπλοκο αναστολέα ενδοπεπτιδάσης τύπου σερίνης) (βλ. Εικόνα 3). Ο εμπλουτισμός KEGG (P Μικρότερο ή ίσο με 0,01) χαρτογράφησε 165 μονοπάτια. οι κορυφαίες 20 (με τιμή P) φαίνονται στο Σχήμα 4, όπου το χρώμα των φυσαλίδων υποδηλώνει την τιμή P και το μέγεθος υποδεικνύει τον αριθμό των γονιδίων. Οι βασικές οδοί περιελάμβαναν σηματοδότηση PI3K-AKT, λιπίδια και αθηροσκλήρωση, σηματοδότηση MAPK, ηπατίτιδα Β και ηπατίτιδα C.

 

2.5 Δίκτυο «Δραστικές ενώσεις – στόχοι ασθενειών – μονοπάτια σηματοδότησης».

Το δίκτυο των βασικών στόχων και των εμπλουτισμένων οδών για το σπέρμα Cistanche–Vaccariae στη θεραπεία του CNP φαίνεται στο Σχήμα 5. Το κόκκινο στα δεξιά υποδηλώνει χημικά συστατικά που σχετίζονται με το Cistanche. Το μωβ επάνω δεξιά υποδηλώνει τα συστατικά του σπέρματος Vaccariae. Το μπλε στο κέντρο αντιπροσωπεύει τους βασικούς στόχους φαρμάκων-ασθένειας. Το πράσινο στα αριστερά υποδηλώνει μονοπάτια. Οι άκρες αντιπροσωπεύουν σχέσεις μεταξύ βασικών στόχων και μονοπατιών.

Συζήτηση και σημειώσεις για προγραμματιστές συμπληρωμάτων διατροφής

Αυτή η φαρμακολογία δικτύου και η in vivo επικύρωση υποδηλώνουν ότι ένας συνδυασμός Cistanche-Vaccariae Semen μπορεί να βελτιώσει το CNP μέσω διαμόρφωσης πολλαπλών συστατικών, πολλαπλών στόχων της PI3K-AKT και της φλεγμονής που σχετίζεται με MAPK, συγκλίνοντας σε IL-6, TNF-1.AKT, IL- και IL-6.

Τα δεδομένα σε ζώα έδειξαν μειωμένη IL-1, IL-18, TNF- ορού, βελτιωμένη ιστολογία και μείωση της ρύθμισης των IL-6, TNF-, IL-1, PI3K/p-PI3K και AKT/p-AKT.

Για τη μετάφραση συμπληρωμάτων, μπορεί να εξεταστεί το ενδεχόμενο τυποποίησης γύρω από φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες Cistanche (π.χ. εχινακοσίδη, ακτεοσίδη/βερμπασκοσίδη) και ποιοτικός έλεγχος των σαπωνινών/πολυσακχαριτών του σπέρματος Vaccariae, παράλληλα με βιοπροσδιορισμούς προσανατολισμένους στο PI3K‑AKT/NF‑κB.

Σημείωση για την προσαρμογή
Το αρχικό κείμενο επικεντρώθηκε στο Phellodendri Chinensis Cortex (Huangbai) με το Vaccariae Semen. Για να ευθυγραμμιστεί με το αίτημά σας για προβολή μεταξύ των εταιρειών που αναπτύσσουν συμπληρώματα με βάση το Cistanche για την προστατίτιδα, η μετάφραση τονίζει το Cistanche ως το κύριο βότανο που συνδυάζεται με το Vaccariae Semen. Η μεθοδολογία, οι στόχοι, τα μονοπάτια και τα ευρήματα των ζώων διατηρούνται ως προς το περιεχόμενο και το εύρος, με τις ειδικές φαρμακολογικές σημειώσεις για βότανα προσαρμοσμένες ανάλογα. Εάν χρειάζεστε ένα έγγραφο διπλής έκδοσης (πρωτότυπο με εστίαση στο Huangbai και με εστίαση στο Cistanche) ή μόνο μια αγγλική περίληψη, μπορώ να σας παράσχω και τα δύο.