Οι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες Cistanche Tubulosa προκαλούν απόπτωση σε κύτταρα ηπατοκυτταρικού καρκινώματος H22 μέσω τόσο των εξωγενών όσο και των εγγενών οδών σηματοδότησης
Mar 15, 2022
Για περισσότερες πληροφορίες:ali.ma@wecistanche.com
Πενγκφέι Γιουάν1 et al
Αφηρημένη
Ιστορικό: Cistanche tubulosa(Schenk) Το R. Wight είναι ένα παραδοσιακό κινέζικο φάρμακο που παρασιτοποιεί τις ρίζες του φυτού Tamarix και έχει χρησιμοποιηθεί για τη θεραπεία της ανδρικής ανικανότητας, της στειρότητας, της αδυναμίας του σώματος και ως τονωτικό. Ωστόσο, η αντικαρκινική του δράση στο ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα είναι ακόμα άγνωστη. Εδώ, διερευνήσαμε την αντικαρκινική επίδραση τουCistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες(CTPG) σε κύτταρα Η22 ηπατοκυτταρικού καρκινώματος τόσο in vitro όσο και in vivo και οι μηχανισμοί του.
Μέθοδοι:Η μορφολογία, η βιωσιμότητα,απόπτωση, ο κυτταρικός κύκλος και το δυναμικό μιτοχονδριακής μεμβράνης (Δψm) των κυττάρων Η22 αναλύθηκαν με ανεστραμμένη μικροσκοπία, δοκιμασία ΜΤΤ και κυτταρομετρία ροής, αντίστοιχα. Η έκφραση και η ενεργοποίηση των πρωτεϊνών στοαπόπτωσημονοπάτι εντοπίστηκαν με Western blot. Το in vivo αντικαρκινικό αποτέλεσμα αξιολογήθηκε σε ένα μοντέλο ποντικού όγκου που δημιουργήθηκε χρησιμοποιώντας αρσενικά ποντίκια Kunming.
Αποτελέσματα:Η θεραπεία με CTPG κατέστειλε σημαντικά την ανάπτυξη των κυττάρων H22 με τρόπο δοσοεξαρτώμενο και χρονοεξαρτώμενο, ο οποίος συσχετίστηκε με την αυξημένηαπόπτωσηκαι διακοπή του κυτταρικού κύκλου στις φάσεις G0/G1 και G2/M. Επιπλέον, παρατηρήθηκε χρωμοσωμική συμπύκνωση σε κύτταρα Η22 που υπέστησαν αγωγή με CTPG. Η θεραπεία με CTPG αύξησε σημαντικά την αναλογία Bax/Bcl-2, μείωσε το Δψm και ενίσχυσε την απελευθέρωση του κυτοχρώματος c. Τα επίπεδα της διασπασμένης κασπάσης-8 και της κασπάσης-9 τόσο στις εξωτερικές όσο και στις εγγενείς οδούς σηματοδότησης αυξήθηκαν σημαντικά σε σχέση με τη διαδοχικά ενεργοποιημένη κασπάση{-7 και-3 για τη διάσπαση του PARP. Τέλος, το CTPG ανέστειλε την ανάπτυξη των κυττάρων Η22 σε ποντίκια και βελτίωσε το ποσοστό επιβίωσης των ποντικών με όγκο.
συμπεράσματα: Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η CTPG κατέστειλε την ανάπτυξη των κυττάρων H22 τόσο μέσω εξωγενούς όσο και ενδογενούςαπόπτωσημονοπάτια.
Λέξεις-κλειδιά: Cistanche tubulosa, Φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες, Απόπτωση, Μονοπάτι σηματοδότησης, μοντέλο ποντικού όγκου
Κάντε κλικ σε οργανικούς φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες Cistanche tubulosa
Ιστορικό
Ο καρκίνος του ήπατος κατέλαβε την έκτη θέση για τη συχνότητα εμφάνισης καρκίνου και την τέταρτη θέση για τους θανάτους από καρκίνο παγκοσμίως. Επιπλέον, κατέλαβε την τέταρτη θέση για τη συχνότητα εμφάνισης καρκίνου και την πρώτη για τη θνησιμότητα από καρκίνο σε χώρες με χαμηλό κοινωνικοδημογραφικό δείκτη [1]. Στην Κίνα, ο καρκίνος του ήπατος είναι η τρίτη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο το 2015 [2]. Περισσότερο από το 90 τοις εκατό των πρωτοπαθών καρκίνων του ήπατος είναι ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα (HCC) στον κόσμο [3]. Επί του παρόντος, η ηπατική εκτομή είναι η κύρια επιλογή για τη θεραπεία του HCC. Ωστόσο, λιγότερο από το 30 τοις εκατό των ασθενών με HCC πληρούσαν τα κριτήρια της θεραπευτικής ηπατικής εκτομής και το συνολικό ποσοστό 5-ετής επιβίωσης εξακολουθεί να είναι τόσο χαμηλό όσο 35-50 τοις εκατό λόγω του υψηλού ποσοστού υποτροπών [4, 5] . Η διαθεσιμότητα θεραπευτικών επιλογών για ασθενείς με ενδιάμεσο έως προχωρημένο HCC είναι πολύ περιορισμένη. Το Sorafenib, ένα μοριακά στοχευμένο φάρμακο, έχει εγκριθεί από τον FDA ως θεραπεία πρώτης γραμμής για προχωρημένο HCC. Ωστόσο, το sorafenib παρατείνει μόνο περίπου 3 μήνες επιβίωσης και το ποσοστό ανταπόκρισης είναι μικρότερο από 4 τοις εκατό [6, 7]. Είναι επείγον να αναπτυχθούν νέα φάρμακα ή στρατηγικές κατά του HCC.
Η παραδοσιακή κινεζική ιατρική (TCM) μόνη της ή σε συνδυασμό με άλλες στρατηγικές έχει χρησιμοποιηθεί για τη θεραπεία του HCC και έχει δείξει τα κλινικά οφέλη που περιλαμβάνουν παρατεταμένο χρόνο επιβίωσης, βελτιωμένη ποιότητα ζωής, μειωμένες ανεπιθύμητες ενέργειες και ούτω καθεξής [8, 9]. Το Cistanche, ένα είδος TCM, έχει διάφορες βιολογικές λειτουργίες, όπως αντιοξειδωτική, αντιφλεγμονώδη, αντιγήρανση και νευροπροστασία [10, 11].Φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδεςέχουν θεωρηθεί τα κύρια ενεργά συστατικά του Cistanche, τα οποία έχουν ποικίλες δραστηριότητες, όπως αντιοξειδωτικά, αντιφλεγμονώδη, ηπατοπροστασία και νευροπροστασία [12-15]. Το έχει αναφέρει η ομάδα μαςCistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες(CTPG) θα μπορούσε να προκαλέσειαπόπτωσησε κύτταρα μελανώματος B16-F10 και αναστέλλουν την ανάπτυξη όγκων σε ποντίκια [16]. Σε αυτή τη μελέτη, μετρήσαμε την αντικαρκινική επίδραση του CTPG σε κύτταρα HCC H22 τόσο in vitro όσο και in vivo και διερευνήσαμε τους μηχανισμούς του. Βρήκαμε ότι το CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)που προκαλείταιαπόπτωσησε κύτταρα Η22 μέσω τόσο των εξωγενών όσο και των εγγενών μονοπατιών σηματοδότησης και κατέστειλε την ανάπτυξη όγκων Η22 σε ποντικούς.
Μέθοδοι
Κυτταρική γραμμή
Τα κύτταρα H22 ηπατοκυτταρικού καρκινώματος ποντικού ελήφθησαν από το Xinjiang Key Laboratory of Biological Resources and Genetic Engineering, Πανεπιστήμιο Xinjiang (Urumqi, Xinjiang, Κίνα) και καλλιεργήθηκαν σε μέσο RPMI 1640 (Gibco) συμπληρωμένο με 100 U/ml πενικιλίνης και 10 στρεπτομυκίνη και 10 τοις εκατό εμβρυϊκός βόειος ορός απενεργοποιημένου με θερμότητα (Gibco) στους 37 βαθμούς σε υγρή ατμόσφαιρα 5 τοις εκατό CO2.
Δοκιμασία ΜΤΤ
CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)αγοράστηκε από την Hetian Dichen Biotech Co., Ltd. (Hetian, Xinjiang, Κίνα) και τις κύριες ενώσεις του CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)πιστοποιήθηκαν και ποσοτικοποιήθηκαν με υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης [16]. Η βιωσιμότητα των κυττάρων αξιολογήθηκε με 3-(4, 5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ)-2, βρωμιούχο διφαινυλτετραζόλιο (MTT) (Sigma, St. Louis, MO , USA) δοκιμασία. Κύτταρα Η22 εμβολιάστηκαν σε 96-τρυβλία φρεατίων με πυκνότητα 2 × 104 κύτταρα σε 100 μΙ μέσο ανά φρεάτιο και καλλιεργήθηκαν στους 37 βαθμούς. Μετά από 24 ώρες, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διαφορετικές συγκεντρώσεις CTPG (0.100, 200, 300 και 400 ug/ml) ή 0,3 τοις εκατό DMSO (ίσο με αυτό σε 400 ug/ml CTPG) για 24, 48 και 72 ώρες, αντίστοιχα. Μετά από φυγοκέντρηση στις 1000 rpm για 7 λεπτά, το υπερκείμενο απορρίφθηκε και 100 μΙ διαλύματος ΜΤΤ (5 mg/ml σε PBS) προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο. Οι πλάκες επωάστηκαν στους 37 βαθμούς για 4 ώρες και προστέθηκαν 100 μΙ DMSO για να διαλυθούν οι σχηματισμένοι κρύσταλλοι φορμαζάνης. Οι τιμές OD490 ανιχνεύθηκαν από 96-αναγνώστη μικροπλακών φρεατίου (Bio-Rad Laboratories, CA, USA). Η βιωσιμότητα του κυττάρου υπολογίστηκε σύμφωνα με τον τύπο: Κυτταρική βιωσιμότητα ( ποσοστό )=(επεξεργασμένο με OD/δεν έχει υποστεί επεξεργασία) x 100 τοις εκατό .
Φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες Cistanche tubulosa
Ανίχνευση απόπτωσης
Τα κύτταρα Η22 υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διαφορετικές συγκεντρώσεις CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)({{0}}, 100, 200, 300 και 400 ug/ml) ή 0,3 τοις εκατό DMSO για 24 ώρες και στη συνέχεια χρώση με Annexin VFITC/ιωδιούχο προπίδιο (PI)ΑπόπτωσηΚιτ ανίχνευσης (YEASEN, Κίνα) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα δείγματα αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής (BD FACSCalibur, ΗΠΑ).
Ανίχνευση δυναμικού μιτοχονδριακής μεμβράνης
Τα κύτταρα Η22 υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διαφορετικές συγκεντρώσεις CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)(0, 200 και 400 ug/ml) για 24 ώρες και στη συνέχεια χρώση με τη διαπερατή από τη μεμβράνη βαφή JC-1 (Beyotime, Κίνα) για 20 λεπτά στους 37 βαθμούς . Μετά από δύο φορές πλύση με ρυθμιστικό διάλυμα JC-1, τα δείγματα επαναιωρήθηκαν με 300 ul ρυθμιστικού διαλύματος JC-1 και αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής (BD FACSCalibur, ΗΠΑ).
Ανάλυση κυτταρικού κύκλου
Τα κύτταρα H22 εμβολιάστηκαν σε δίσκους καλλιέργειας 60 mm και υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διαφορετικές συγκεντρώσεις CTPG (0, 100,200, 300 και 400 ug/ml) ή 0,3 τοις εκατό DMSO για 24 ώρες . Όλα τα κύτταρα συλλέχθηκαν και πλύθηκαν δύο φορές με PBS. Τα κύτταρα σταθεροποιήθηκαν σε 70 τοις εκατό παγωμένη αιθανόλη στους -20 βαθμούς για 2 ώρες και πλύθηκαν δύο φορές με PBS, και στη συνέχεια επαναιωρήθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα χρώσης ιωδιούχου προπιδίου/RNase 300 ul (BD Biosciences). Μετά από 10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου, συλλέχθηκαν δείγματα με κυτταρομετρία ροής (BD FACSCalibur, ΗΠΑ) και η κατανομή του κυτταρικού κύκλου αναλύθηκε με το λογισμικό ModFit LT 3.0.
φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδεςσεCistanche tubulosa
Χρώση Hoechst 33,258
Οι μορφολογικές αλλαγές των πυρήνων των κυττάρων Η22 αναλύθηκαν με χρώση με διαπερατή από μεμβράνη συνδετική με DNA χρωστική Hoechst 33,258. Τα κύτταρα Η22 σπάρθηκαν σε μια πλάκα 6-φρεατίου σε συγκέντρωση 1 χ 105 κύτταρα/φρεάτιο σε ένα μέσο των 2 ml. Μετά από 60 τοις εκατό ~ 70 τοις εκατό συρροή, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)(0, 100, 200, 300 και 400 ug/ml) για 24 ώρες. Τα κύτταρα συλλέχθηκαν και σταθεροποιήθηκαν με 4 τοις εκατό παγωμένη παραφορμαλδεΰδη στους 4 βαθμούς για 10 λεπτά. Μετά από πλύση με PBS, τα κύτταρα χρωματίστηκαν με Hoechst 33.258 (Beyotime, China) στους 4 βαθμούς για 10 λεπτά. Τα δείγματα παρατηρήθηκαν με ένα ανεστραμμένο μικροσκόπιο φθορισμού (Nikon Eclipse Ti-E, Ιαπωνία).
Western blot
Anti-caspase-3, anti-cleaved caspase-3, Anti-Bcl-2 και anti-Bax αγοράστηκαν από την Beyotime Biotech Co., Ltd. (Σαγκάη, Κίνα). Anti-caspase-7, anti-cleaved-caspase-7,anti-caspase-8, anti-cleaved-caspase-8, anti-caspase-9, anti-caspase σχισμένη-κασπάση-9, αντι-PARP, αντι-διασπασμένη PARP, IgG-HRP αντιποντικού και IgG-HRP αντι-κουνελιού αγοράστηκαν από την Cell Signaling Technology. Η αντι{26}}ακτίνη αγοράστηκε από την Beijing ComWin Biotech Co., Ltd. (Πεκίνο, Κίνα).
Τα κύτταρα Η22 υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διαφορετικές συγκεντρώσεις CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)({{0}}, 100, 200, 300 και 400 ug/ml) ή 0,3 τοις εκατό DMSO για 24 ώρες. Τα κύτταρα συλλέχθηκαν και λύθηκαν με το διάλυμα λύσεως κυττάρων RIPA (Beijing ComWin Biotech Co., Ltd) για 30 λεπτά σε πάγο. Τα δείγματα περιδινήθηκαν (12,000 g για 15 λεπτά στους 4 βαθμούς ) για τη συλλογή των υπερκειμένων και οι συγκεντρώσεις πρωτεΐνης μετρήθηκαν με κιτ BCA (Thermo Fisher Scientific, ΗΠΑ). Μια ίση ποσότητα πρωτεΐνης σε κάθε δείγμα απομονώθηκε με 12 τοις εκατό SDS-PAGE και μεταφέρθηκε σε μεμβράνες PVDF (Biosharp, China). Μετά τον αποκλεισμό με ρυθμιστικό TBST που περιείχε 5 τοις εκατό μη λιπαρό γάλα, οι μεμβράνες επωάστηκαν με αντίστοιχα πρωτογενή αντισώματα και δευτερεύοντα αντισώματα συζευγμένα με υπεροξειδάση αγριοραπανιού (HRP), αντίστοιχα. Μετά από πλύση με TBST, οι πρωτεΐνες στόχοι ανιχνεύθηκαν με κιτ δοκιμασίας ECL (Beyotime, Κίνα).
Δήλωση για ζώα και ηθική
Αρσενικά ποντίκια Kunming ηλικίας 6-8 εβδομάδων αγοράστηκαν από το Animal Laboratory Center του Ιατρικού Πανεπιστημίου Xinjiang (Urumqi, Xinjiang, Κίνα). Τα ποντίκια διατηρήθηκαν σε μια τυπική ελεγχόμενη με θερμοκρασία, ζωική εγκατάσταση με κύκλο φωτός του Πανεπιστημίου Xinjiang. Όλες οι μελέτες σε ζώα διεξήχθησαν σύμφωνα με τις οδηγίες της Επιτροπής Φροντίδας και Χρήσης Ζώων του Πανεπιστημίου Xinjiang. Το πρωτόκολλο εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας των Πειραμάτων σε Ζώα του Βασικού Εργαστηρίου Βιολογικών Πόρων και Γενετικής Μηχανικής Xinjiang (BRGE-AE001), Πανεπιστήμιο Xinjiang.
Μελέτη ποντικού όγκου
Για επαγωγή μοντέλου ποντικού όγκου, αρσενικά ποντίκια Kunming εγχύθηκαν υποδόρια με 1 × 106 κύτταρα Η22 σε 100 μΙ PBS στο δεξιό πλευρό. Μετά από 3 ημέρες, τα ποντίκια χωρίστηκαν τυχαία σε 3 ομάδες (7 ποντίκια/ομάδα). Η ομάδα ελέγχου εγχύθηκε με 0,1 ml DMSO υποδορίως γύρω από τον όγκο. Οι ομάδες CTPG-200 και CTPG-400 ενέθηκαν υποδόρια με 200 ή 400 mg/kg CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)σε 0.1 ml DMSO γύρω από τον όγκο. Τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε θεραπεία κάθε 2 ημέρες για έως και 21 ημέρες. Τα μεγέθη των όγκων μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας παχύμετρα έως και 25 ημέρες και ο όγκος του όγκου υπολογίστηκε σύμφωνα με τον τύπο: όγκος όγκου (mm3)=(μήκος×πλάτος2)/2. Μετά από 25 ημέρες, η επιβίωση των ποντικών με όγκο παρακολουθούνταν κάθε μέρα μέχρι το τέλος αυτής της μελέτης.
Στατιστική ανάλυση
Η στατιστική σημασία υπολογίστηκε με μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης μεταξύ των ομάδων θεραπείας και ελέγχου. Όλα τα δεδομένα εκφράστηκαν ως η μέση ± τυπική απόκλιση (SD). p < 0.05="" θεωρήθηκε="" στατιστικά="">
Αποτελέσματα
CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)μείωσε τη βιωσιμότητα των κυττάρων Η22 in vitro
Προκειμένου να διερευνηθεί η αντικαρκινική επίδραση του CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)σε HCC, κύτταρα Η22 υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διαφορετικές συγκεντρώσεις CTPG (0, 100, 200, 300 και 400 ug/ml) in vitro. Μετά από 24 ώρες, η μορφολογία των κυττάρων Η22 παρατηρήθηκε χρησιμοποιώντας ένα ανεστραμμένο μικροσκόπιο. Βρήκαμε ότι η μορφολογία των κυττάρων Η22 άλλαξε δραματικά με τη θεραπεία CTPG. Με την αύξηση της συγκέντρωσης CTPG, τα κύτταρα έγιναν μικρά και στρογγυλά και ο αριθμός των κυττάρων μειώθηκε επίσης πολύ (Εικ. 1α). Η δοκιμασία ΜΤΤ χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση της βιωσιμότητας των κυττάρων Η22 μετά από θεραπεία CTPG για 24, 48 και 72 ώρες, αντίστοιχα. CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)μείωσε σημαντικά τη βιωσιμότητα των κυττάρων Η22 με δοσοεξαρτώμενο και χρονοεξαρτώμενο τρόπο (Εικ. 1β). CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)στα 300 ug/ml έφτασε στον καλύτερο ανασταλτικό ρυθμό (Εικ. 1γ). Οι τιμές του IC50 του CTPG για τα κύτταρα Η22 είναι 236 ug/ml στις 24 ώρες και 169,8 ug/ml στις 48 ώρες.
CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)επαγόμενη απόπτωση σε κύτταρα Η22
Για να διερευνηθεί εάν η μειωμένη βιωσιμότητα των κυττάρων Η22 προκαλείται από την επαγωγή τουαπόπτωση, κύτταρα Η22 υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με διαφορετικές συγκεντρώσεις CTPG (0, 100, 200, 300 και 400 ug/ml) για 24 ώρες και χρωματίστηκαν με PI και αννεξίνη V. Τα αποτελέσματα της κυτταρομετρίας ροής έδειξαν ότι το CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)προκλήθηκε σημαντικάαπόπτωσηκυττάρων Η22 (συμπεριλαμβανομένων πρώιμων και όψιμωναπόπτωση) με δοσοεξαρτώμενο τρόπο (Εικ. 2α). Αν και η υψηλή δόση CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)επίσης σημαντικά αυξημένη νέκρωση των κυττάρων Η22, η νέκρωση παίζει μικρό ρόλο στην αναστολή της ανάπτυξης των κυττάρων Η22 λόγω της χαμηλότερης αναλογίας της (8,3 τοις εκατό) σε σύγκριση με αυτή των κυττάρωναπόπτωση(52,6 τοις εκατό). Περαιτέρω, ολικές πρωτεΐνες των κυττάρων Η22 απομονώθηκαν μετά από CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)θεραπεία και οι εκφράσεις του αντι-αποπτωτικού λεμφώματος Β κυττάρων 2 (Bcl-2) και της προαποπτωτικής πρωτεΐνης Χ που σχετίζεται με το BCL-2- (Bax) ανιχνεύθηκαν με στύπωμα Western. Τα δεδομένα σάρωσης σε κλίμακα του γκρι έδειξαν ότι τα επίπεδα έκφρασης του Bax και του Bcl-2 ήταν αυξημένα και μειωμένα, αντίστοιχα. Η αναλογία Bax/Bcl-2 αυξήθηκε σημαντικά (Εικ. 2β). Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι το CTPG επάγειαπόπτωσησε κύτταρα Η22.
CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)προκαλεί χρωμοσωμική συμπύκνωση και διακοπή του κυτταρικού κύκλου στα κύτταρα Η22
Έχει αναφερθεί ότι η βλάβη του DNA και η διακοπή του κυτταρικού κύκλου που προκαλούνται από φάρμακα μπορεί να αναστείλουν την ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων και να προκαλέσουναπόπτωσησε κύτταρα όγκου [17, 18]. Για την ανίχνευση της μορφολογίας των πυρήνων σε κύτταρα Η22 μετά από CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)κατεργασία για 24 ώρες, τα κύτταρα Η22 χρωματίστηκαν με Hoechst 33,342 και παρατηρήθηκαν χρησιμοποιώντας ανεστραμμένη μικροσκοπία φθορισμού. CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)Τα κύτταρα που υποβλήθηκαν σε αγωγή εμφάνισαν μια δοσοεξαρτώμενη αύξηση της έντονα συμπυκνωμένης χρωματίνης των πυρήνων, ενώ τα κύτταρα που δεν υποβλήθηκαν σε αγωγή έδειξαν ομοιογενώς χρωματισμένους πυρήνες (Εικ. 3a). Η κατανομή του κυτταρικού κύκλου σε κύτταρα Η22 αναλύθηκε περαιτέρω με χρώση ΡΙ μετά από επεξεργασία CTPG για 24 ώρες. Όπως φαίνεται στο Σχ. 3β, CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)η θεραπεία αύξησε σημαντικά την αναλογία των κυττάρων G0/G1- και G2/M-φάσης και μείωσε σημαντικά την αναλογία των κυττάρων S-φάσης, υποδηλώνοντας ότι το CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)προκάλεσε διακοπή φάσης G0/G1 και G2/M σε κύτταρα Η22. Η υψηλή δόση CTPG αύξησε επίσης σημαντικά την αναλογία των υπό G1 κυττάρων.
CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)μειωμένο δυναμικό μιτοχονδριακής μεμβράνης και αύξηση της απελευθέρωσης του κυτοχρώματος c
Η εξαρτώμενη από τα μιτοχόνδρια μονοπάτι παίζει σημαντικό ρόλο στην επαγωγή τηςαπόπτωση[19, 20]. Οι αλλαγές στο δυναμικό της μιτοχονδριακής μεμβράνης (Δψm) μπορεί να είναι
που παρακολουθείται με χρώση JC-1 λόγω του συσσωματώματος JC-1 (κόκκινος φθορισμός) μπορεί να αποσυντεθεί σε μονομερές (πράσινος φθορισμός) με τη μείωση του Δψm [21]. Μετά το CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)επεξεργασία για 24 ώρες, τα κύτταρα Η22 χρωματίστηκαν με χρωστική JC-1. Τα δεδομένα κυτταρομετρίας ροής έδειξαν ότι ο κόκκινος φθορισμός στο κανάλι FL-2 και ο πράσινος φθορισμός στο κανάλι FL-1 μειώθηκαν σημαντικά και αυξήθηκαν κατά την CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)θεραπευτική αγωγή. Η αναλογία των κυττάρων PE−FITC plus αυξήθηκε σημαντικά (Εικ. 4α), υποδηλώνοντας ότι το CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)μείωσε το Δψm στα κύτταρα Η22. Αυτό είναι σύμφωνο με την αυξημένη αναλογία Bax/Bcl-2. Κατά συνέπεια, παρατηρήσαμε ότι η απελευθέρωση του κυτοχρώματος c αυξήθηκε σημαντικά κατά την CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)θεραπεία (Εικ. 4β). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το CTPG μπορεί να επάγει μερικώςαπόπτωσησε κύτταρα Η22 μέσω μιας εξαρτώμενης από μιτοχόνδρια (εγγενής) οδού.
Το CTPG ενεργοποίησε την οδό κασπάσης και εμπόδισε την επιδιόρθωση του DNA
Στη συνέχεια, η ενεργοποίηση της κασπάσης που προκαλείται από CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)αναλύθηκε μέσω τόσο της εξωτερικής όσο και της εσωτερικής οδού σηματοδότησης. Μετά το CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)θεραπεία για 24 ώρες, οι ολικές πρωτεΐνες απομονώθηκαν από κύτταρα Η22 και τα επίπεδα προ-και διασπασμένων-κασπασών ανιχνεύθηκαν με στύπωμα Western. Σε σύγκριση με τον μη επεξεργασμένο ή τον έλεγχο DMSO, CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)Η θεραπεία ρύθμισε σημαντικά προς τα πάνω όχι μόνο το επίπεδο της διασπασμένης κασπάσης-8 (εξωτερική οδός) αλλά και το επίπεδο της διασπασμένης κασπάσης-9 (εσωτερική οδός) (Εικ. 5). Διαδοχικά, η ενεργοποιημένη κασπάση-8 και η -9 διέκοψαν την κατάντη προ-κασπάση-3 και -7 που παρατηρήθηκαν στο Σχ. 5. Η ενεργοποιημένη κασπάση-3 διέκοψε το DNA επισκευαστικό ένζυμο πολυμεράσης πολυ (ADP-ριβόζης) (PARP) για την πρόληψη της επιδιόρθωσης του DNA και της συσσώρευσης βλάβης του DNA όπως παρατηρείται στο Σχ. 3α. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)που προκαλείταιαπόπτωσησε κύτταρα Η22 μέσω τόσο των εξωγενών όσο και των ενδογενών οδών σηματοδότησης.
CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)καταστέλλει την ανάπτυξη του H22 HCC in vivo και βελτιώνει το ποσοστό επιβίωσης των καρκινικών ποντικών
Τέλος, η αντικαρκινική δράση του CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)σε HCC αξιολογήθηκε σε μοντέλο ποντικού όγκου, το οποίο καθορίστηκε με υποδόρια ένεση κυττάρων Η22. Μετά από 3 ημέρες ένεσης κυττάρων Η22, ποντίκια όγκου υποβλήθηκαν σε αγωγή με CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)8 φορές. Το σωματικό βάρος των ποντικών και τα μεγέθη των όγκων παρακολουθήθηκαν σε υποδεικνυόμενα χρονικά σημεία. Όπως φαίνεται στο Σχ. 6α, το σωματικό βάρος των ποντικών σε κάθε ομάδα δεν έχει σημαντική διαφορά, γεγονός που υποδηλώνει ότι οι επιλεγμένες δόσεις CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)δεν έχουν εμφανείς παρενέργειες. Είναι ενδιαφέρον ότι η ανάπτυξη του όγκου σε ποντικούς που έλαβαν θεραπεία με 200 mg/kg και 400 mg/kg CTPG ανεστάλη σημαντικά (Εικ. 6b). Επιπλέον, οι δύο δόσεις CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)Η θεραπεία βελτίωσε σημαντικά την επιβίωση των ποντικών με όγκο (3/7, 3/7) σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (0/7) στο τέλος του πειράματος (Εικ. 6β). Βρήκαμε επίσης ότι το CTPG ενίσχυσε σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των σπληνοκυττάρων που απομονώθηκαν από αρσενικά ποντίκια Kunming με δοσοεξαρτώμενο τρόπο (Εικ. 6c), υποδηλώνοντας ότι το CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)έχει ανοσοδιεγερτικό αποτέλεσμα.
Συζήτηση
Το TCM έχει χρησιμοποιηθεί για τη θεραπεία διαφόρων ασθενειών συμπεριλαμβανομένων των καρκίνων για μακρά ιστορία. Έχει αναφερθεί ότι η TCM μπορεί να προκαλέσειαπόπτωσησε διαφορετικούς τύπους καρκινικών κυττάρων μέσω τόσο εξωγενών (με τη μεσολάβηση υποδοχέα θανάτου) όσο και ενδογενών (εξαρτώμενων από μιτοχόνδρια) οδών σηματοδότησης για την άσκηση αντικαρκινικών επιδράσεων [22-25]. Τα δύο μονοπάτια μπορούν να ενεργοποιήσουν την κασπάση-8 και το -9, αντίστοιχα [24, 26]. Εδώ, βρήκαμε ότι το CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)κατέστειλε σημαντικά την ανάπτυξη των κυττάρων Η22 μέσω επαγωγής απόπτωσης και διακοπής του κυτταρικού κύκλου. Τα επίπεδα της διασπασμένης κασπάσης-8 και -9 ρυθμίστηκαν σημαντικά προς τα πάνω από το CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)θεραπεία, υποδηλώνοντας ότι τόσο τα εξωτερικά όσο και τα ενδογενή μονοπάτια σηματοδότησης εμπλέκονται στην πρόκλησηαπόπτωση. Η προηγούμενη μελέτη μας έδειξε ότι το CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)προκάλεσε απόπτωση σε κύτταρα μελανώματος B16-F10 μέσω μιας εξαρτώμενης από μιτοχόνδρια οδού που αύξησε το επίπεδο της σχισμένης κασπάσης-9 αλλά όχι της κασπάσης-8 [16]. CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)μπορεί να ενεργοποιήσει διακριτές οδούς σηματοδότησης σε διαφορετικούς τύπους καρκινικών κυττάρων.
Η ακεραιότητα της μιτοχονδριακής μεμβράνης ρυθμίζεται στενά από τα μέλη της οικογένειας πρωτεϊνών BCL-2 συμπεριλαμβανομένων των Bax και Bcl-2 [27, 28]. Η αναλογία Bax προς Bcl-2 παίζει κρίσιμο ρόλο στην εξαρτώμενη από τα μιτοχόνδριααπόπτωσημονοπάτι [29]. Σε κύτταρα Η22 που υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες), ο λόγος Bax/Bcl-2 ρυθμίστηκε σημαντικά προς τα πάνω, γεγονός που μπορεί να προκαλέσει τη μείωση του Δψm και την απελευθέρωση του κυτοχρώματος c που παρατηρήθηκε σε αυτήν τη μελέτη. Κατά συνέπεια, η προκασπάση-9 διασπάστηκε και ενεργοποιήθηκε. Τέλος, οι εκκινητές της ενεργής κασπάσης-8 και -9 ενεργοποίησαν τον δήμιο της κασπάσης-3 για να διασπάσουν το PARP για να αποτρέψουν την επιδιόρθωση του DNA. Συνολικά, αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η CTPG προκαλείταιαπόπτωσησε κύτταρα Η22 μέσω τόσο των εξωγενών όσο και των ενδογενών οδών σηματοδότησης. Σε ένα μοντέλο ποντικού όγκου, το CTPG κατέστειλε σημαντικά την ανάπτυξη του H22 HCC και βελτίωσε σημαντικά την επιβίωση των ποντικών με όγκο. Είναι ενδιαφέρον, το CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)δοσοεξαρτώμενα προώθησαν τον πολλαπλασιασμό των σπληνοκυττάρων από ποντικούς Kunming, κάτι που είναι σύμφωνο με την προηγούμενη μελέτη μας [16]. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι το CTPG μπορεί να καταστέλλει την ανάπτυξη του H22 HCC σε ποντίκια τόσο μέσω της άμεσης αντικαρκινικής δράσης όσο και της έμμεσης ανοσολογικής ενίσχυσης.
Cistanche tululosaπροϊόντα
συμπεράσματα
CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)κατέστειλε την ανάπτυξη των κυττάρων Η22 τόσο in vitro όσο και in vivo και προκάλεσεαπόπτωσησε κύτταρα Η22 μέσω τόσο των εξωγενών όσο και των ενδογενών οδών σηματοδότησης. Αυτά τα δεδομένα έδειξαν ότι το CTPG(Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες)μπορεί να είναι πιθανός υποψήφιος για τη θεραπεία του HCC.
Συντομογραφίες
Bax: BCL-2-συσχετισμένη πρωτεΐνη Χ. Bcl-2: Β-κυτταρικό λέμφωμα 2; CTPG:Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες; HCC: ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα; HRP: υπεροξειδάση χρένου; ΜΤΤ: 3-(4, 5-διμεθυλθειαζολ-2-υλ)-2, βρωμιούχο 5-διφαινυλτετραζόλιο. PARP: Ένζυμο επιδιόρθωσης DNA πολυμεράσης πολυ (ADP-ριβόζης). TCM: παραδοσιακή κινεζική ιατρική. Δψm: δυναμικό μιτοχονδριακής μεμβράνης
Χρηματοδότηση
Αυτή η εργασία υποστηρίχθηκε από το High-Level Talent Introduction Project of Xinjiang Uygur Autonomous Region to JL, το Κινεζικό Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών Grant (31460241) στον JL και το Διδακτορικό Ταμείο Εκκίνησης του Πανεπιστημίου Xinjiang (BS160261 έως XW και BS150236 έως YL).
Διαθεσιμότητα δεδομένων και υλικών
Τα ανεπεξέργαστα δεδομένα για αυτήν τη μελέτη είναι διαθέσιμα κατόπιν εύλογου αιτήματος στον αντίστοιχο συγγραφέα.
Συνεισφορές συγγραφέων
Οι JL και JL σχεδίασαν τα πειράματα. Οι PY, JL, AA και YY πραγματοποίησαν τα πειράματα. Οι LX, XW και YL ανέλυσαν τα δεδομένα. Οι PY, JL και JL έγραψαν το χειρόγραφο. Όλοι οι συγγραφείς συνεισέφεραν και ενέκριναν το τελικό χειρόγραφο.
Έγκριση δεοντολογίας
Η μελέτη σε ζώα εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας των Πειραμάτων σε Ζώα του Βασικού Εργαστηρίου Βιολογικών Πόρων και Γενετικής Μηχανικής Xinjiang, Πανεπιστήμιο Xinjiang
Ανταγωνιστικά συμφέροντα
Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν έχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα.
Σημείωση εκδότη
Το Springer Nature παραμένει ουδέτερο όσον αφορά τις διεκδικήσεις δικαιοδοσίας σε δημοσιευμένους χάρτες και θεσμικές σχέσεις.
Στοιχεία συγγραφέα
1Xinjiang Key Laboratory of Biological Resources and Genetic Engineering, College of Life Science and Technology, Xinjiang University, 666 Shengli Road, Urumqi, Xinjiang 830046, China.2College of Life Science, Xinjiang Normal University, 102 Xinyi Road, Urumqi 830054, Xinjiang, Κίνα.3Affiliated Tumor Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, Κίνα.
Cistanche tululosaπροϊόντα
Από: 'Cistanche tubulosa φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδεςπροκαλέσειαπόπτωσησε κύτταρα Η22 ηπατοκυτταρικού καρκινώματος μέσω τόσο εξωγενών όσο και ενδογενών μονοπατιών σηματοδότησης» από Pengfei Yuan1 et al
---Yuan et al. BMC Complementary and Alternative Medicine (2018) 18:275 https://doi.org/10.1186/s12906-018-2201-1
βιβλιογραφικές αναφορές
1. Global Burden of Disease Cancer Collaboration, Fitzmaurice C, Allen C, Barber RM, Barregard L, Bhutta ZA, Brenner H, Dicker DJ, Chimed-Orchir O, Dandona R, et al. Παγκόσμια, περιφερειακή και εθνική συχνότητα εμφάνισης καρκίνου, θνησιμότητα, χρόνια ζωής που χάθηκαν, χρόνια ζωής με αναπηρία και προσαρμοσμένα στην αναπηρία έτη ζωής για 32 ομάδες καρκίνου, 1990 έως 2015: μια συστηματική ανάλυση για τη μελέτη του παγκόσμιου βάρους της νόσου. JAMA Oncol. 2017; 3:524–48.
2. Chen W, Zheng R, Baade PD, Zhang S, Zeng H, Bray F, Jemal A, Yu XQ, He J.Cancer στατιστικά στην Κίνα, 2015. CA Cancer J Clin. 2016; 66:115–32.3. European Association For The Study Of The Liver, Ευρωπαϊκός Οργανισμός Έρευνας και Θεραπείας του Καρκίνου. Οδηγίες κλινικής πρακτικής EASL-EORTC: διαχείριση ηπατοκυτταρικού καρκινώματος. JHepatol. 2012; 56:908–43.
4. Roayaie S, Obeidat K, Sposito C, Mariani L, Bhoori S, Pellegrinelli A, Labow D, Llovet JM, Schwartz M, Mazzaferro V. Εκτομή του ηπατοκυτταρικού καρκίνου Λιγότερο ή ίσο με 2 cm: αποτελέσματα από δύο δυτικά κέντρα. Ηπατολογία. 2013; 57:1426–35.
5. Ting CT, Cheng YY, Tsai TH. Αλληλεπίδραση βοτάνου-φαρμάκου μεταξύ του παραδοσιακού ηπατοπροστατευτικού σκευάσματος και του Sorafenib για την ηπατοτοξικότητα, την ιστοπαθολογία και τη φαρμακοκινητική σε αρουραίους. Μόρια. 2017; 22: E1034.
6. Llovet JM, Ricci S, Mazzaferro V, Hilgard P, Gane E, Blanc JF, de Oliveira AC, Santoro A, Raoul JL, Forner A, et al. Το Sorafenib σε προχωρημένο ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα. N Engl J Med. 2008; 359:378–90.
7. Cheng AL, Kang YK, Chen Z, Tsao CJ, Qin S, Kim JS, Luo R, Feng J, Ye S, Yang TS, et al. Αποτελεσματικότητα και ασφάλεια του sorafenib σε ασθενείς στην περιοχή Ασίας-Ειρηνικού με προχωρημένο ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα: μια τυχαιοποιημένη, διπλή-τυφλή, ελεγχόμενη με εικονικό φάρμακο δοκιμή φάσης ΙΙΙ. Lancet Oncol. 2009; 10:25–34.
8. Shi Z, Song T, Wan Y, Xie J, Yan Y, Shi K, Du Y, Shang L. Μια συστηματική ανασκόπηση και μετα-ανάλυση των παραδοσιακών κινεζικών φαρμάκων από έντομα συνδυασμένη χημειοθεραπεία για μη χειρουργική θεραπεία ηπατοκυτταρικού καρκινώματος. Sci Rep.2017; 7:4355.
9. Yang Z, Liao X, Lu Y, Xu Q, Tang B, Chen X, Yu Y. Η πρόσθετη θεραπεία με παραδοσιακή κινεζική ιατρική βελτιώνει τα αποτελέσματα και μειώνει τις ανεπιθύμητες ενέργειες στο ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα: μια μετα-ανάλυση τυχαιοποιημένων ελεγχόμενων δοκιμών. Evid Based Complement Alternat Med. 2017;2017:3428253.
10. Lin LW, Hsieh MT, Tsai FH, Wang WH, Wu CR. Αντιερεθιστική και αντιφλεγμονώδης δράση που προκαλείται από το Cistanche deserticola σε τρωκτικά. J Ethnopharmacol. 2002; 83:177-82.
11. Wu CR, Lin HC, Su MH. Αναστροφή με υδατικά εκχυλίσματα απόCistanche tubulosaαπό ελλείμματα συμπεριφοράς στο μοντέλο αρουραίου που μοιάζει με τη νόσο του Αλτσχάιμερ: συνάφεια με την εναπόθεση αμυλοειδούς και τη λειτουργία του κεντρικού νευροδιαβιβαστή. BMC Complement Altern Med. 2014; 14:202.
12. Jiang Y, Tu PF. Ανάλυση χημικών συστατικών στα είδη Cistanche. JChromatogr A. 2009;1216:1970–9.
13. Morikawa T, Pan Y, Ninomiya K, Imura K, Matsuda H, Yoshikawa M, Yuan D, Muraoka O. Ακυλιωμένες φαινυλαιθανοειδείς ολιγογλυκοσίδες με ηπατοπροστατευτική δράση από το φυτό της ερήμουCistanche tubulosa.Bioorg Med Chem. 2010; 18:1882–90.
14. Nan ZD, Zeng KW, Shi SP, Zhao MB, Jiang Y, Tu PF.Φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδεςμε αντιφλεγμονώδεις δράσεις από τους μίσχους Cistanche deserticola που καλλιεργήθηκαν στην έρημο Tarim. Fitoterapia.2013;89:167–74.
15. Deng M, Zhao J, Tu P, Jiang Y, Li Z, Wang Y. Η εχινακοσίδη επαναφέρει τα νευρωνικά κύτταρα SHSY5Y από τα επαγόμενα από TNFαπόπτωση. Eur J Pharmacol. 2004; 505:11-8.
16. Li J, Li J, Aipire A, Gao L, Huo S, Luo J, Zhang F.Φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδεςαπόCistanche tubulosaαναστέλλει την ανάπτυξη των κυττάρων B16-F10 τόσο in vitro όσο και in vivo μέσω επαγωγήςαπόπτωσημέσω μιας οδού που εξαρτάται από τα μιτοχόνδρια. J Καρκίνος. 2016; 7:1877–87.
17. Shang HS, Chang CH, Chou YR, Yeh MY, Au MK, Lu HF, Chu YL, Chou HM, Chou HC, Shih YL, et al. Η κουρκουμίνη προκαλεί βλάβη στο DNA και επηρεάζει την έκφραση της πρωτεΐνης στα ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα του τραχήλου της μήτρας HeLa. Oncol Rep. 2016; 36:2207–15.
18. Wang R, Zhang Q, Peng X, Zhou C, Zhong Y, Chen X, Qiu Y, Jin M, Gong M, Kong D. Ο Stellettin B προκαλεί σύλληψη G1,απόπτωσηκαι αυτοφαγία σε ανθρώπινα μη μικροκυτταρικά κύτταρα καρκίνου του πνεύμονα Α549 μέσω αποκλεισμού της οδού PI3K/Akt/mTOR. Sci Rep. 2016; 6:27071.
19. Sinha Κ, Das J, Pal PB, Sil PC. Οξειδωτικό στρες: τα μιτοχόνδρια-εξαρτώμενα και μιτοχόνδρια-ανεξάρτητα μονοπάτια τουαπόπτωση. Arch Toxicol. 2013; 87:1157–80.
20. Zhang YS, Shen Q, Li J. Παραδοσιακή κινεζική ιατρική που στοχεύει αποπτωτικούς μηχανισμούς για θεραπεία καρκίνου του οισοφάγου. Acta Pharmacol Sin. 2016; 37:295–302.
21. Chong ZZ, Lin SH, Li F, Maiese K. Ο αναστολέας της sirtuin nicotinamide ενισχύει την επιβίωση των νευρωνικών κυττάρων κατά την οξεία ανοξική βλάβη μέσω AKT, BAD, PARP και μιτοχονδριακών σχετιζόμενων «αντι-αποπτωτικών» οδών. Curr Neurovasc Res. 2005; 2:271-85.
22. Hu B, Wang SS, Du Q. Παραδοσιακή κινεζική ιατρική για την πρόληψη και τη θεραπεία του ηπατοκαρκινώματος: από τον πάγκο μέχρι το κρεβάτι. World J Hepatol. 2015; 7:1209–32.
23. Hu B, An HM, Wang SS, Chen JJ, Xu L. Προληπτικά και θεραπευτικά αποτελέσματα κινεζικών φυτικών ενώσεων κατά του ηπατοκυτταρικού καρκινώματος. Μόρια. 2016; 21:142.
24. Xu H, Zhao X, Liu X, Xu P, Zhang K, Lin X. Αντικαρκινικές επιδράσεις της παραδοσιακής κινεζικής ιατρικής που στοχεύουν στην κυτταρική αποπτωτική οδό. Drug Des Devel Ther. 2015; 9:2735–44.
25. Li-Weber M. Στόχευσηαπόπτωσημονοπάτια στον καρκίνο από την κινεζική ιατρική. Cancer Lett. 2013; 332:304–12.
26. Xu G, Shi Y.Απόπτωσημονοπάτια σηματοδότησης και ομοιόσταση λεμφοκυττάρων. Cell Res. 2007; 17:759-71.
27. Tait SW, Green DR. Μιτοχόνδρια και κυτταρικός θάνατος: διαπερατότητα εξωτερικής μεμβράνης και πέρα. Nat Rev ΜοΙ Cell Biol. 2010; 11:621-32.
28. Galluzzi L, Kepp O, Kroemer G. Mitochondria: master regulators of danger signaling. Nat Rev ΜοΙ Cell Biol. 2012; 13:780–8.
29. Martinou JC, Youle RJ. Μιτοχόνδρια σεαπόπτωση: Bcl-2 μέλη της οικογένειας και μιτοχονδριακή δυναμική. Dev Cell. 2011; 21:92-101.
