Ανάλυση συστατικών αρώματος και διαφορικών μεταβολιτών στο Cistanche Musalais με βάση το GC–MS και τη μεταβολομική

 

Περίληψη:Αυτή η μελέτη προετοίμασε το Cistanche Musalais χρησιμοποιώντας παραδοσιακές τεχνικές με κόκκινα σταφύλια Xinjiang Hetian και διάφορες προσθήκες Cistanche. Οι βέλτιστες συνθήκες επεξεργασίας προσδιορίστηκαν με μονόδρομη ANOVA. Το GC-MS και η μη στοχευμένη μεταβολομική χρησιμοποιήθηκαν για την ανάλυση των αρωματικών συστατικών και των διαφορικών μεταβολιτών και ποσοτικοποιήθηκαν τα ενεργά συστατικά όπως τα συνολικά φλαβονοειδή και οι ολικές πολυφαινόλες. Οι βέλτιστες συνθήκες ήταν: αρχική περιεκτικότητα σε ζάχαρη 32 βαθμών Βχ, θερμοκρασία ζύμωσης 25 βαθμών και προσθήκη 7% Cistanche deserticola. Υπό αυτές τις συνθήκες, η περιεκτικότητα σε αλκοόλη, η ολική οξύτητα, τα ολικά φλαβονοειδή και οι ολικές πολυφαινόλες έφτασαν (12,6 ± 0,6)% vol, (3,82 ± 0,19) g/L, (0,80 ± 0,01) g/L και (0,60 ± 0,00) g/L, αντίστοιχα, αντίστοιχα. Το GC-MS ανίχνευσε 38 αρωματικές ενώσεις, με τους εστέρες να είναι η πιο άφθονη κατηγορία (24 ενώσεις), ακολουθούμενες από 6 αλκοόλες, 2 κετόνες και 2 αλδεΰδες. Σε σύγκριση με το Musalais που παρασκευάζεται αποκλειστικά από χυμό σταφυλιού, το Cistanche deserticola Musalais εμφάνισε σημαντικά υψηλότερα επίπεδα βασικών εστέρων, συμπεριλαμβανομένου του οξικού αιθυλεστέρα (6,42% έναντι. 2.42%) και του παλμιτικού αιθυλεστέρα (3,75% έναντι. 1.18%), ενώ οι υψηλότερες αλκοόλες όπως η ισοβουτανόλη μείωσαν το 11%. έναντι. 3.98%). Η Metabolomics εντόπισε 230 διαφορικούς μεταβολίτες (VIP Μεγαλύτερο ή ίσο με 1, P < 0,05), εμπλουτισμένοι σε μονοπάτια που σχετίζονται με τους μεταφορείς ABC και τη βιοσύνθεση αμινοξέων. Συστατικά όπως η τριγωνελίνη και η κροκίνη ήταν σημαντικά αυξημένα. Ο μεταβολισμός των αμινοξέων συνέβαλε στο σχηματισμό του χαρακτηριστικού προφίλ γεύσης. Αυτή η μελέτη παρέχει μια θεωρητική και τεχνική βάση για την ανάπτυξη και τη βελτίωση της ποιότητας του Cistanche Musalais. Η μελλοντική έρευνα θα πρέπει να ενσωματώσει μοριακές αισθητηριακές τεχνικές, όπως το GC–O, για τον καλύτερο εντοπισμό των βασικών ενεργών ενώσεων που είναι υπεύθυνες για το συνολικό προφίλ γεύσης.

Λέξεις-κλειδιά: Cistanche;Μουσαλάις; GC–MS; μεταβολομική

CistancheΜουσαλάις

 

 

 

Στοιχεία καταχώρισης Cistanche Musalais

 

 

 

Musalais (Msalais)είναι ένα παραδοσιακό ποτό που έχει υποστεί ζύμωση, μοναδικό στο Xinjiang, που παράγεται από κόκκινα σταφύλια Awati ή κόκκινα σταφύλια Hetian (Hotan). Παρασκευάζεται με χυμό, συμπύκνωση και αυθόρμητη ζύμωση και χαρακτηρίζεται ως πρωτόγονο, φυσικό και πράσινο. Ως μοναδικό κινέζικο αλκοολούχο ποτό που έχει υποστεί φυσική ζύμωση, το Musalais παρουσιάζει ξεχωριστά τοπικά χαρακτηριστικά σε αισθητηριακά χαρακτηριστικά, θρεπτική αξία και λειτουργικές δραστηριότητες. Οι αλκοόλες, οι εστέρες, οι αλδεΰδες, τα οξέα, οι φαινολικές ενώσεις και τα τερπένια που παράγονται κατά τη ζύμωση όχι μόνο προσδίδουν μοναδική γεύση, αλλά συνδέονται και με οφέλη όπως η προώθηση της κυκλοφορίας του αίματος, η μείωση των λιπιδίων του αίματος, η τόνωση των νεφρών και η ενίσχυση του σώματος, η ρύθμιση της χοληστερόλης και η διατήρηση της κατάλληλης για καρδιαγγειακή και εγκεφαλική υγεία.

Τα τελευταία χρόνια, με την αυξανόμενη ζήτηση των καταναλωτών για υγιεινά ποτά, η αγορά λειτουργικών αλκοολούχων ποτών έχει επεκταθεί ραγδαία. Με βάση την παραδοσιακή ζυθοποιία, τα λειτουργικά λικέρ ενσωματώνουν συγκεκριμένα λειτουργικά συστατικά για την κάλυψη των αναγκών για ευεξία, συντήρηση υγείας ή ειδική φυσιολογική ρύθμιση. Η ποιότητά τους επηρεάζεται από τις πρώτες ύλες, τις διαδικασίες, τις μικροβιακές κοινότητες και τη σταθερότητα των λειτουργικών συστατικών [2]. Στη λαϊκή πρακτική της νότιας Σιντζιάνγκ, τοπικά πρόσθετα όπως γκότζι μπέρι, καρθάκος, σιτανσέ και κρόκος προστίθενται συχνά κατά την προετοιμασία του Musalais για να ενισχύσουν τα οφέλη για την υγεία και να εμπλουτίσουν τη γευστική ποικιλομορφία [3]. Μεταξύ αυτών, το Cistanche πλούσιο σε πολυσακχαρίτες, αμινοξέα, φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες, ιριδοειδή γλυκοσίδες και αλκαλοειδή - έχει τονωτικές επιδράσεις στο νεφρικό yang, ρυθμίζει τη νευροενδοκρινική λειτουργία και καταπολεμά την κόπωση, κερδίζοντας το όνομα "ginseng της ερήμου" [4-5].

Ωστόσο, η εκβιομηχάνιση του Cistanche Musalais αντιμετωπίζει επί του παρόντος προκλήσεις, όπως η έλλειψη προτύπων παραγωγής, η ελλιπής τεχνολογία επεξεργασίας και η ανεπαρκής έρευνα για τις αρωματικές ουσίες, που περιορίζουν την προώθηση στην αγορά και τη βελτίωση της ποιότητας. Σε αυτή τη μελέτη, το Cistanche χρησιμοποιήθηκε ως συμπλήρωμα για τη βελτιστοποίηση της διαδικασίας ζύμωσης Musalais. Το GC-MS και η μη στοχευμένη μεταβολομική χρησιμοποιήθηκαν για τη συστηματική επίλυση των συστατικών αρώματος και των διαφορικών μεταβολιτών, με στόχο την παροχή θεωρητικής βάσης και τεχνικής υποστήριξης για τυποποιημένη παραγωγή, διαμόρφωση γεύσης και λειτουργική ενίσχυση του Cistanche Musalais, προωθώντας έτσι τον εκσυγχρονισμό και την ανάπτυξη αξίας αυτού του παραδοσιακού ροφήματος.

1 Υλικά και μέθοδοι

 

1.1 Υλικά και αντιδραστήρια

 

Cistanche tubulosa (σωληνωτό Cistanche): εμπορικά δείγματα πρώτης κατηγορίας που προέρχονται από το Hetian (Hotan), Xinjiang, με παχιά υφή και απαλλαγμένα από μούχλα και ακαθαρσίες.

Ερυθρά σταφύλια Hetian: φρούτα του εμπορίου με ανέπαφη εμφάνιση και έντονο άρωμα, που προέρχονται από το Hetian, Xinjiang.

Μεθανόλη και ακετονιτρίλιο: Thermo Fisher Scientific (China) Co., Ltd.

Μυρμηκικό οξύ: TCI (Shanghai) Development Co., Ltd.

L-2-χλωροφαινυλαλανίνη: Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.

 

1.2 Όργανα και εξοπλισμός

 

Μαγνητικός αναδευτήρας σταθερής θερμοκρασίας 08-2T, Shanghai Meiyingpu Instrument Co., Ltd.

Συσκευή 57330-U SPME και 57348-U 50/30 μm DVB/CAR/PDMS SPME ίνα, Sigma-Aldrich (Shanghai) Trading Co., Ltd.

6890N-5973 GC–MS system, Agilent Technologies (China) Co., Ltd.

5430R φυγόκεντρος ψύξης, Eppendorf (Shanghai) International Trading Co., Ltd.

TL-48R μύλος χαρτιού υψηλής απόδοσης, Shanghai Jingxin Industrial Development Co., Ltd.

Συγκεντρωτής κενού SCIENTZ-1LS, Ningbo Scientz Biotechnology Co., Ltd.

Vanquish Flex UHPLC, Thermo Fisher Scientific (China) Co., Ltd.

SDAJ-0.5 Γραμμή παραγωγής κρασιού κινεζικού τύπου, Shandong Anji Bio-Fermentation Equipment Technology Co., Ltd.

1.3 Πειραματικές μέθοδοι

 

1.3.1 Ροή διαδικασίας

Το Cistanche μαγειρεύτηκε στον ατμό για μεταγενέστερη χρήση. Τα κόκκινα σταφύλια Hetian πλύθηκαν και επιλέχθηκαν, αποσπάστηκαν και θρυμματίστηκαν. Ο χυμός σταφυλιού εκχυλίστηκε με πρέσα, στη συνέχεια θερμάνθηκε και συμπυκνώθηκε για να ρυθμιστούν οι δείκτες συγκέντρωσης χυμού. Τέλος, το προϊόν Cistanche στον ατμό αναμίχθηκε με συμπυκνωμένο χυμό σταφυλιού και ζυμώθηκε κάτω από ελεγχόμενες παραμέτρους θερμοκρασίας και χρόνου. Μετά τη ζύμωση, το προϊόν διαυγάστηκε για να ληφθεί Cistanche Musalais.

 

1.3.2 Παρασκευή Cistanche

Με μικρές τροποποιήσεις στους Gong et al. [6], υψηλής ποιότητας, μη αλλοιωμένο αποξηραμένο Cistanche ξεφλουδίστηκε, κόπηκε σε φέτες, τυλίχθηκε σε γάζα και μαγειρεύτηκε στον ατμό για 20 λεπτά για μεταγενέστερη χρήση.

 

1.3.3 Παρασκευή χυμού σταφυλιού

Χρησιμοποιήθηκαν ερυθρά σταφύλια Hetian με αρχικά διαλυτά στερεά (σάκχαρο) 18 βαθμούς Bx. Τα σάπια, φθαρμένα και ανομοιόμορφα ωριμασμένα σταφύλια αφαιρέθηκαν. Μετά το πλύσιμο και το ξεφλούδισμα, τα σταφύλια πατήθηκαν. Ο χυμός έβρασε (συμπυκνώθηκε) σε υψηλή θερμοκρασία και η συμπύκνωση σταμάτησε όταν η ζάχαρη έφτασε στους 26, 29 ή 32 βαθμούς Βχ. Ο χυμός ψύχθηκε σε θερμοκρασία δωματίου για μεταγενέστερη χρήση.

 

1.3.4 Διαδικασία ζύμωσης του Cistanche Musalais

Προστέθηκε στον ατμό Cistanche σε καθορισμένες αναλογίες (3%, 5%, 7%) σε 600 mL συμπυκνωμένου χυμού σταφυλιού σε έναν ζυμωτήρα. Το υπολειμματικό σάκχαρο μετρήθηκε κάθε 24 ώρες κατά τη διάρκεια της ζύμωσης για παρακολούθηση της προόδου. Όταν το υπολειμματικό σάκχαρο έπεσε στα 4 g/L, η ζύμωση τερματίστηκε. Το υπερκείμενο συλλέχθηκε και παστεριώθηκε στους 85 βαθμούς για 30 λεπτά για να ληφθεί Cistanche Musalais.

1.3.5 Πειραματικός σχεδιασμός ενός παράγοντα για το Cistanche Musalais

Διερευνήθηκαν οι επιδράσεις της προσθήκης Cistanche (3%, 5%, 7%), της αρχικής περιεκτικότητας σε σάκχαρα (26, 29, 32 βαθμοί Βχ) και της θερμοκρασίας ζύμωσης (22, 25, 28 βαθμοί ) στις φυσικοχημικές ιδιότητες και τη βιοδραστικότητα.

 

1.3.6 Αναλύσεις και μετρήσεις

 

Περιεκτικότητα σε αλκοόλ, διαλυτά στερεά και ολική οξύτητα: προσδιορίζεται σύμφωνα με το GB/T 15038-2006 «Γενικές αναλυτικές μέθοδοι για κρασί και οίνο φρούτων».

Ολικά φλαβονοειδή: προσδιορίστηκε με αναφορά στους Xu et al. [7]. Ετοιμάστηκε μια καμπύλη βαθμονόμησης με συγκέντρωση ρουτίνης (Χ) ως τετμημένη και απορρόφηση (Υ) στα 510 nm ως τεταγμένη, αποδίδοντας Y=0.8043X - 0,0278, R2=0.9999, υποδεικνύοντας καλή γραμμικότητα.

Ολικές πολυφαινόλες: προσδιορίζονται με τη μέθοδο Folin–Ciocalteu [8]. Παρασκευάστηκε μια καμπύλη βαθμονόμησης με περιεκτικότητα σε γαλλικό οξύ (Χ) ως τετμημένη και απορρόφηση (Υ) στα 760 nm ως τεταγμένη, αποδίδοντας Y=0.4177X + 0.1048, R2=0.9975, υποδεικνύοντας καλή γραμμικότητα.

 

1.3.7 Ανάλυση GC–MS

Δείγματα από δύο ομάδες - πειραματικές (32 βαθμοί Bx, 25 βαθμοί, 7% Cistanche) και έλεγχος χωρίς Cistanche - υποβλήθηκαν σε GC-MS.

Προεπεξεργασία δείγματος: Το δείγμα τοποθετήθηκε σε φιαλίδιο εκχύλισης 20 mL. 100 μL 50 ug/mL φαινυλοξικού ισοαμυλεστέρα προστέθηκαν ως εσωτερικό πρότυπο. Το φιαλίδιο σφραγίστηκε και εξισορροπήθηκε σε λουτρό νερού 60 μοιρών με μαγνητική ανάδευση στα 250 r/min για 20 λεπτά. Η ίνα SPME στη συνέχεια εισήχθη για 30 λεπτά εκχύλιση. Πριν από τη χρήση, η ίνα SPME ρυθμίστηκε στην είσοδο GC στους 250 βαθμούς για 20 λεπτά.

Συνθήκες GC–MS: Στήλη HP-INNOWax (60 m × 250 μm × 0,25 μm). είσοδος 250 μοίρες ; γραμμή μεταφοράς 250 μοιρών ; Ροή φέροντος αερίου 1,5 mL/min; διαίρεση 4:1. Πρόγραμμα φούρνου: 40 μοίρες (5 λεπτά), ράμπα 5 μοίρες / λεπτό έως 250 μοίρες, κρατήστε 10 λεπτά. Πηγή ιόντων 230 μοίρες ; τετράπολος 150 μοίρες ; EI 70 eV; πλήρης σάρωση 35–550 Da.

 

1.3.8 Μη στοχευμένη μεταβολομική

 

1.3.8.1 Προετοιμασία δείγματος

Δοκιμάστηκαν δύο ομάδες: πειραματικές (32 βαθμοί Bx, 25 βαθμοί, 7% Cistanche) και έλεγχος χωρίς Cistanche. n=3 βιολογικά αντίγραφα ανά ομάδα, συνολικά 6 δείγματα. Μετά την απόψυξη και τον στροβιλισμό, 300 μL από κάθε δείγμα μεταφέρθηκαν σε σωληνάριο 1,5 mL και φυγοκεντρήθηκαν με ταχύτητα 12.000 r/min, στους 4 βαθμούς για 15 λεπτά. Στη συνέχεια, 100 μL υπερκειμένου μεταφέρθηκαν σε σωληνάριο 2 mL, καταψύχθηκαν γρήγορα σε υγρό άζωτο και λυοφιλήθηκαν. Προσθέστε 1 mL προψυγμένης μεθανόλης:ακετονιτριλίου (1:1, ν/ν), αναδεύστε 30 δευτ. παγώστε στους -20 βαθμούς για 30 λεπτά. φυγοκέντρηση σε 12.000 r/min, 4 μοίρες για 10 λεπτά. Συλλέξτε 850 μL υπερκειμένου και στεγνώστε με κενό μέχρι την πληρότητα. ανασύσταση σε 150 μL μεθανόλης 50% (με 5 ppm 2-χλωροφαινυλαλανίνη), vortex 30 s; φυγοκέντρηση 12.000 r/min, 4 μοίρες για 10 λεπτά. διηθήστε μέσω μεμβράνης 0,22 μm και μεταφέρετε το διήθημα σε φιαλίδια. Συνδυάστε 10–20 μL από κάθε δείγμα για να δημιουργήσετε ένα δείγμα QC για να αξιολογήσετε τη σταθερότητα του οργάνου και την αξιοπιστία των δεδομένων. Το QC παραλείπεται εάν περιλαμβάνονται λιγότερα από 5 δείγματα.

 

1.3.8.2 Αναλυτικές συνθήκες

Χρωματογραφία: Στήλη ACQUITY UPLC HSS T3 (100 Å, 1,8 μm, 2,1 mm × 100 mm); ροή 0,4 mL/min; στήλη 40 μοίρες ; autosampler 8 μοιρών ; ένεση 2 μL. Κινητή φάση Α: νερό με 0,1% (v/v) μυρμηκικό οξύ. κινητή φάση Β: ακετονιτρίλιο με 0,1% (ν/ν) μυρμηκικό οξύ.
Φασματομετρία μάζας: τάση ψεκασμού +3.5 kV/−3,0 kV; αέριο θήκης 40 arb; βοηθητικό αέριο 10 arb; τριχοειδές 320 μοίρες ; Θερμοκρασία βοηθητικού αερίου 300 μοίρες. Ανάλυση MS1 60.000; εύρος σάρωσης m/z 70–1.000; AGC Target Standard; Μέγιστο IT 100 ms. MS/MS που εξαρτώνται από δεδομένα στα κορυφαία 4 ιόντα με δυναμική εξαίρεση 4 δευτ. Ανάλυση MS2 15.000; Ενέργεια σύγκρουσης HCD 30%.

 

1.3.8.3 Αναγνώριση μεταβολίτη

Η αναγνώριση του μεταβολίτη βασίστηκε στη βάση δεδομένων PSNGM (PerSonalbio Next-Generation Metabolomics Database), που περιλαμβάνει μια εσωτερική βιβλιοθήκη προτύπων, mzCloud (https://www.mzcloud.org/), LIPID MAPS (https://www.lipidmaps.org/), HMDB (https://hmdb). (https://mona.fiehnlab.ucdavis.edu/), NIST_2020_MSMS και μια φασματική βιβλιοθήκη MS/MS προβλεπόμενη από AI.

Σημείωση για τις εξωτερικές βάσεις δεδομένων που χρησιμοποιούνται στον σχολιασμό:

HMDB: Μια ολοκληρωμένη βάση δεδομένων ανθρώπινου μεταβολισμού (Έκδοση 5.0) που περιέχει λεπτομερείς χημικές, κλινικές και βιοχημικές πληροφορίες για 220.945 μεταβολίτες, με εκτενείς διασυνδέσεις με τα KEGG, PubChem, MetaCyc, ChEBI, PDB, UniProt και GenBank και υποστηρίζει προηγμένες αναζητήσεις/αναζήτηση κειμένων/μέτρων/αναθεώρησης MSN.M. Επίσης σχετίζεται με DrugBank, T3DB, SMPDB και FooDB.

LIPID MAPS: An open-access lipidomics resource providing databases (e.g., LMSD with >50.000 επιμελημένες δομές λιπιδίων), φάσματα, μονοπάτια, εργαλεία για ανάλυση MS, σχεδίαση δομών και πόροι ονοματολογίας/ταξινόμησης.

mzCloud: Μια προηγμένη φασματική βιβλιοθήκη μάζας που υποστηρίζει αναζητήσεις που βασίζονται σε φάσμα, δομή, υποδομή, δέντρο και m/z, με 32.330 ενώσεις, 51.002 φασματικά δέντρα και 16.531.567 φάσματα (με σημαντικές προσθήκες το 2024), βελτιστοποιημένη πρόσβαση στην επιφάνεια εργασίας Firefox/Chrom.

 

1.3.8.4 Πολυμεταβλητή στατιστική ανάλυση

Πολυμεταβλητές αναλύσεις εφαρμόστηκαν σε δεδομένα μεταβολιτών από τα 6 δείγματα για την εκτέλεση PCA, διευκρινίζοντας τις μεταβολικές διαφορές μεταξύ Cistanche Musalais και Musalais. Οι διαφορικοί μεταβολίτες μεταξύ των ομάδων εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας μεταβλητή σημασία OPLS-DA στην προβολή (VIP), αλλαγή αναδίπλωσης και τιμές P (όριο VIP και σημασία όπως παραπάνω), ακολουθούμενη από βιολογική ερμηνεία συμπεριλαμβανομένου του εμπλουτισμού της οδού KEGG [9].

 

Αναφορές

[1] Zhu LX, Wang LL, Song HZ, et al. Ποιοτική ανάλυση των κύριων αρωματικών ενώσεων που σχετίζονται με την παραδοσιακή επεξεργασία Musalais στο Xinjiang της Κίνας. Journal of the Institute of Brewing. 2012;118(2):236–242.
[2] Zhao B, Li DD, Yuan Y, et al. Πρόοδος της σύγχρονης έρευνας για το λειτουργικό υγρό που έχει υποστεί ζύμωση. Παρασκευή ποτών. 2025;52(2):43–49.
[3] Zhu LX, Hou XJ, Xu Q. Συζήτηση για τις στρατηγικές ανάπτυξης του κρασιού σταφυλιού Xinjiang Msalais. Επιστήμη και τεχνολογία παρασκευής ποτών. 2008(7):111–113.
[4] Song ZH, Lei L, Tu PF. Πρόοδοι στην έρευνα της φαρμακολογικής δραστηριότητας στα φυτά του Cistanche Hoffing. et Σύνδεσμος. Κινεζικά παραδοσιακά και φυτικά φάρμακα. 2003;34(9):U018.
[5] Shi TT, Ge WH. Η ερευνητική ανάπτυξη του Cistanche Hoffmg. Et Link. Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy. 2009;18(9):7–9.
[6] Gong X, Zhong T, Zhou JY, et al. Μελέτη για την τεχνολογία ενός νέου κρασιού Cistanche που έχει υποστεί ζύμωση. Μοντέρνο φαγητό. 2019(5):64–68;79.
[7] Xu HT, Li H, Zhao YZ, et al. Αντιοξειδωτική και αντιβακτηριδιακή δράση ολικών φλαβονοειδών από την Nervilia fordii. Βόρεια Οπωροκηπευτικά. 2017(16):161–165.
[8] Yu H, Xu X, Hao JX, et al. Μικτή ζύμωση πυρηνίσκου φλοιού εσπεριδοειδών με Trichoderma koningii, Aspergillus oryzae και Lactobacillus casei: βελτιστοποίηση διαδικασίας, αντιοξειδωτικές δραστηριότητες και μη στοχευμένη μεταβολομική ανάλυση. Food Bioscience. 2025;66:106180.
[9] Zhou JN, Hou DH, Zou WQ, et al. Σύγκριση ευρέως στοχευμένης μεταβολομικής και μη στοχευμένης μεταβολομικής του άγριου Ophiocordyceps sinensis. Molecules. 2022;27(11):3645.
[10] Li XH. Έρευνα για την τεχνολογία του Rosa kwangsiensis var. sterilis ζυμωμένο κρασί [Μεταπτυχιακή εργασία]. Chongqing: Southwest University; 2017.
[11] Li ZJ, Zhang XD, Long BX, et al. Έρευνα για την ανάπτυξη προϊόντων και τη βελτιστοποίηση της επιφάνειας απόκρισης του αχλαδιού Msalais. Επεξεργασία γεωργικών προϊόντων. 2025;3:1–10.
[12] Zhang L, Jiang XF. Επαλήθευση σχετικά με την προσαρμοστικότητα της μεθόδου προσδιορισμού του χαλκού στη μέθοδο γενικής ανάλυσης GB/T15038-2006 κρασιού και οίνου φρούτων. Παρασκευή ποτών. 2020;47(5):104–107.
[13] Zhong DL, Yang H, Wang Z, et al. Επίδραση της θερμοκρασίας μηλογαλακτικής ζύμωσης στην ποιότητα του κρασιού Cabernet Sauvignon. Zhejiang Agricultural Sciences. 2025;66(7):1724–1732.