Η γλυκοσίδη Cistanche ρυθμίζει προς τα πάνω το Bmi1 και προάγει τον πολλαπλασιασμό των σπερματογονικών βλαστοκυττάρων ποντικού μέσω της σηματοδοτικής οδού Akt

Σκοπός: Διερεύνηση της προαγωγικής επίδρασης και των σχετικών μηχανισμών των γλυκοσιδίων Cistanche στον πολλαπλασιασμό των σπερματογονικών βλαστοκυττάρων ποντικού. Μέθοδος: Ο προσδιορισμός MTT και ο προσδιορισμός πολλαπλασιασμού κυττάρων EdU χρησιμοποιήθηκαν για την ανίχνευση της επίδρασης του γλυκοσιδίου Cistanche στην ικανότητα πολλαπλασιασμού των σπερματογονικών βλαστοκυττάρων ποντικού. Η μέθοδος Western blot χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση της έκφρασης των πρωτεϊνών Bmi1, p-Akt και Akt από γλυκοζίτη cistanche. Το πείραμα RT-PCR ανίχνευσε τα αποτελέσματα έκφρασης σχετικών γονιδίων και τελικά έδειξε την ανάντη και κατάντη ρυθμιστική σχέση μεταξύ των πρωτεϊνών p-Akt και Bmi1 μέσω αναστολέων και siRNA. Αποτέλεσμα: Σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, 0.5-1 μ M Cistanche γλυκοσίδη προώθησε τον πολλαπλασιασμό των σπερματογονικών βλαστικών κυττάρων ποντικού (Ρ<0.05); Compared with the control group, the expression levels of p-Akt and Bmi1 proteins in the 0.5-1 µ M Cistanche glycoside treated group increased (P<0.05); Akt inhibitors downregulated the levels of p-Akt and Bmi proteins (P<0.05); SiBmi1 had no significant effect on Akt mRNA levels (P>0.05). Συμπέρασμα: Η γλυκοσίδη Cistanche ενεργοποιεί το μονοπάτι σηματοδότησης Akt και ρυθμίζει προς τα πάνω την έκφραση Bmi1, προάγοντας τον πολλαπλασιασμό των σπερματογονικών βλαστικών κυττάρων ποντικού.

Λέξεις-κλειδιά: Γλυκοζίτης Cistanche; Σπερματογονικά βλαστοκύτταρα ποντικού; Bmi1 ; πολλαπλασιασμός κυττάρων

Η υπογονιμότητα έχει γίνει ένα παγκόσμιο πρόβλημα που εμποδίζει την ανάπτυξη της ανθρώπινης κοινωνίας [1-2]. Σύμφωνα με επιδημιολογικές στατιστικές, περίπου το 15 τοις εκατό -20 τοις εκατό των ζευγαριών παγκοσμίως πάσχουν από ασθένειες υπογονιμότητας, με την ανδρική δυσλειτουργία να προκαλεί περισσότερο από το 50 τοις εκατό των συμπτωμάτων υπογονιμότητας [3]. Ως εκ τούτου, η εύρεση αποτελεσματικών μεθόδων θεραπείας για την ανδρική υπογονιμότητα έχει γίνει ένα καυτό ερευνητικό θέμα στον τομέα της αναπαραγωγικής υγείας τόσο εγχώρια όσο και διεθνώς.

Οφέλη ανδρικού Cistanche-Τονωτικό νεφρό

Κάντε κλικ εδώ για να δείτε τα προϊόντα Cistanche για νεφρική νόσο

【Ζητήστε περισσότερα】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Το ανασταλτικό σύμπλεγμα πρωτεΐνης polycomb 1 (PRC1) που αποτελείται από ειδική για Β κύτταρα θέση ενσωμάτωσης ιού λευχαιμίας ποντικού Moroni 1 (Bmi1) μπορεί να αποτρέψει την πρόωρη γήρανση και να διατηρήσει την ικανότητα αυτοανανέωσης των βλαστοκυττάρων [4]. Η πρωτεϊνική κινάση Β (Akt) εμπλέκεται στον πολλαπλασιασμό και τη διαφοροποίηση των κυττάρων [5] και η ενεργοποιημένη Akt εμπλέκεται σε διάφορες σημαντικές βιολογικές δραστηριότητες [6-7].

Ο γλυκοσίδης Cistanche I (C27H30O11, μοριακό βάρος: 530,52) είναι ένα προϊόν υδρόλυσης του γλυκοσιδίου Cistanche που απομονώθηκε από την παραδοσιακή κινεζική ιατρική γλυκοσίδιο Cistanche, το οποίο έχει διάφορες φαρμακολογικές και βιολογικές δραστηριότητες [8-9]. Σύμφωνα με αναφορές, η γλυκοσίδη Cistanche μπορεί να έχει κάποια θεραπευτική επίδραση στην οστεοπόρωση [10]. Ωστόσο, η επίδραση του Cistanche γλυκοσίδη I στην ανδρική αναπαραγωγική λειτουργία δεν είναι ακόμη σαφής. Τα σπερματογόνα βλαστοκύτταρα (SSCs) είναι η πιο πρωτόγονη ομάδα σπερματοζωαρίων με ικανότητα αυτοανανέωσης και διαφοροποίησης, διαδραματίζοντας αναντικατάστατο ρόλο στη διατήρηση της ανδρικής αναπαραγωγικής λειτουργίας. Ως εκ τούτου, αυτή η μελέτη χρησιμοποίησε SSCs ποντικού ως μοντέλο in vitro για να διερευνήσει την επίδραση του γλυκοσιδίου Cistanche στην ικανότητα πολλαπλασιασμού των SSC ποντικών και στον μηχανισμό δράσης τους.

Τζίνσενγκ της ερήμου-Τονωτικό νεφρό

1 Υλικό και Μέθοδοι

1.1 Κυτταρική καλλιέργεια

Σε αυτή τη μελέτη χρησιμοποιήθηκαν σπερματογονικά βλαστοκύτταρα ποντικού (C18-4). Τα κύτταρα προήλθαν από την ερευνητική ομάδα του καθηγητή He Zuping και διαχωρίστηκαν, καθαρίστηκαν και αναγνωρίστηκαν σύμφωνα με τις προδιαγραφές. Στα σπερματογονικά βλαστοκύτταρα του ποντικού προστέθηκαν 10 τοις εκατό εμβρυϊκός βόειος ορός (Gibco) και 1 τοις εκατό πενικιλλίνη/στρεπτομυκίνη σε DMEM/F12 (Gibco) και καλλιεργήθηκαν σε μέσο (37 βαθμοί, 5 τοις εκατό CO2)

1.2 Πείραμα ΜΤΤ

Εμβολιάστε το C18-4 με ποσότητα 5000 κυττάρων ανά φρεάτιο σε μια πλάκα 96-πηγαδιού για να εξασφαλίσετε ομοιόμορφο ενοφθαλμισμό των κυττάρων. Μετά την προσκόλληση των κυττάρων, επιλέξτε τα απαιτούμενα φάρμακα και τις συγκεντρώσεις φαρμάκων για θεραπεία. Μετά από 72 ώρες εθισμού στα ναρκωτικά, 50 μL παρασκευασμένου κυανού της θειαζόλης (MTT) προστέθηκαν στο φρεάτιο όπου εμβολιάστηκαν τα κύτταρα και οι πλάκες των 96 φρεατίων τοποθετήθηκαν σε επωαστήρα κυττάρων για 4-5 ώρες. Μετά την επώαση, απορρίψτε το διάλυμα καλλιέργειας από τις πλάκες των 96 φρεατίων, προσθέστε 150 µL διμεθυλοσουλφοξειδίου (DMSO) σε κάθε φρεάτιο και τελικά μετρήστε την απορρόφηση χρησιμοποιώντας μια συνδεδεμένη με ένζυμο ανοσοπροσροφητική δοκιμασία (Biotek) σε μήκος κύματος 490 nm.

Σκόνη Cistanche-Τονωτικό νεφρό

1.3 Πολλαπλασιασμός κυττάρων EdU

Ομοιόμορφα ενοφθαλμίστε τα κύτταρα σε μια πλάκα {{0}}πηγαδιού (6,0 × 103/φρεάτιο), αφού τα κύτταρα προσκολληθούν στον τοίχο, προσθέστε φάρμακα για 24 ώρες σύμφωνα με τις πειραματικές ανάγκες και στη συνέχεια χρησιμοποιήστε 100 μ LDMEM/ Το F12 περιέχει 20 μL EdU ως υποκατάστατο του αρχικού μέσου καλλιέργειας και στη συνέχεια ελέγχεται το δυναμικό πολλαπλασιασμού των κυττάρων σύμφωνα με τις οδηγίες του κιτ δοκιμής EdU.

1.4 Western blot

Το προαποθηκευμένο δείγμα κυτταρικής πρωτεΐνης διαιρέθηκε με γέλη SDS PAGE και στη συνέχεια μεταφέρθηκε στη μεμβράνη PVDF μετά από ηλεκτροφόρηση. Σφραγίστηκε με 5 τοις εκατό αποβουτυρωμένο γάλα για 1 ώρα. Συνδυάστηκε με ειδικό πρωτογενές αντίσωμα στους 4 βαθμούς κατά τη διάρκεια της νύχτας: αντίσωμα p-Akt ποντικού κουνελιού (1 ∶ 2000) (CST), αντίσωμα Akt (1 ∶ 1000) (CST), GAPDH (1 ∶ 5000) (Abcam), Bmi1 (1 ∶ 5000) (Abcam). Τη δεύτερη ημέρα, δεσμεύστε με δευτερεύον αντίσωμα κουνελιού σε θερμοκρασία δωματίου για 1 ώρα. Οι αντίστοιχες πρωτεΐνες ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας το κιτ Chemiluminescence Liquid (ECL) (Bio-Rad), και τέλος, η αντίδραση αντιγόνου-αντισώματος παρατηρήθηκε χρησιμοποιώντας το σύστημα ChemiDoc (Bio-Rad).

1,5 RT-PCR

Το αντιδραστήριο που χρησιμοποιείται στη διαδικασία εκχύλισης ολικού RNA είναι το αντιδραστήριο TRIZol (Invitrogen) και το cDNA λαμβάνεται σύμφωνα με τις οδηγίες του κιτ αντίστροφης μεταγραφής cDNA πρώτου κλώνου (Vazyme). Η RT PCR πραγματοποιήθηκε με τη χρήση γονιδιακής έκφρασης TaqMan Master Mix (Bio-Rad) σύμφωνα με τις οδηγίες, χρησιμοποιώντας ΔΔ Η μέθοδος Ct υπολογίζει την αλλαγή στα σχετικά πολλαπλάσια της έκφρασης mRNA, με τιμή 2 − ΔΔ Ct. Πίνακας ακολουθίας εκκινητών στον (Πίνακας 1)

1.6 επιμόλυνση siRNA

Το siRNA του Bmi 1 mRNA αγοράστηκε από τη Ribobio και η λίστα αλληλουχιών βρίσκεται στον Πίνακα 2. Χρησιμοποιήθηκε το αντιδραστήριο επιμόλυνσης Lipofectamine 6000 (Invitrogen). Κύτταρα (2,0 χ 105/φρεάτιο) καλλιεργήθηκαν όλη τη νύχτα σε DMEM/F 12 συμπληρωμένο με 10 τοις εκατό εμβρυϊκό βόειο ορό σε μια πλάκα 6-φρεατίου. Σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή, το Lipofectamine 6000 αναμίχθηκε επιμελώς με το siRNA ελέγχου και το Bmi1 siRNA, αντίστοιχα, και επιμολύνθηκε για 5 ώρες σε ένα μέσο καλλιέργειας χωρίς εμβρυϊκό βόειο ορό. Μετά από πλύση με PBS, το αρχικό μέσο καλλιέργειας αντικαταστάθηκε με 10 τοις εκατό εμβρυϊκό βόειο ορό DMEM/F12. Μετά από 24 ώρες, συλλέχθηκαν κύτταρα για να ανιχνευθούν οι αλλαγές έκφρασης διαφόρων αντίστοιχων πρωτεϊνών και γονιδίων.

Πίνακας 1 Αλληλουχίες εκκινητών ενισχυμένων με RT PCR

Πίνακας 2 Αλληλουχία siRNA Bmi1

1.7 Στατιστική Ανάλυση

Όλα τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό SPSS 16.0 και GraphPad Prism 8. Με βάση τις διαφορές στις μέσες τιμές μεταξύ δύο ή περισσότερων ομάδων, επιλέχθηκαν για σύγκριση το Student t-test και το one-way ANOVA test. Μια διαφορά του Π<0.05 was considered statistically significant.

2 Αποτελέσματα

2.1 Επιδράσεις των γλυκοσιδών Cistanche σε σπερματογονικά βλαστοκύτταρα

Προκειμένου να προσδιοριστεί εάν η γλυκοσίδη I του Epimedium έχει πολλαπλασιαστική επίδραση σε σπερματογονικά βλαστοκύτταρα ποντικού, διαπιστώσαμε μέσω πειραμάτων MTT ότι η γλυκοσίδη I της Cistanche μπορεί να προάγει τον πολλαπλασιασμό των σπερματογονικών βλαστικών κυττάρων ποντικού σε συγκεντρώσεις {{0}}.5 και 1 μΜ (Σχήμα 1Α). Στη συνέχεια, προκειμένου να επαληθεύσουμε περαιτέρω το πολλαπλασιαστικό αποτέλεσμα της γλυκοσίδης Cistanche I σε σπερματογονικά βλαστοκύτταρα ποντικού, επιβεβαιώσαμε περαιτέρω μέσω πειραμάτων πολλαπλασιασμού κυττάρων EdU ότι η γλυκοσίδη I της Cistanche μπορεί επίσης να προωθήσει τον πολλαπλασιασμό σπερματογονικών βλαστοκυττάρων ποντικού σε συγκεντρώσεις 0,5 και 1 μΜ (Εικόνα 1Β).

Ερημοζώντανο cistanche-Τονωτικό νεφρό

2.2 Η γλυκοσίδη Cistanche ρυθμίζει προς τα πάνω την έκφραση του Bmi1

Προηγούμενες εργαστηριακές μελέτες έχουν δείξει ότι το Bmi1 εκφράζεται σε μεγάλο βαθμό στον ιστό των όρχεων σε σύγκριση με άλλους ιστούς οργάνων και εκφράζεται κυρίως στον πυρήνα των σπερματογονικών βλαστοκυττάρων ποντικού. Πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει ότι το Bmi1 έχει μεγάλη σημασία στη διατήρηση του πολλαπλασιασμού των σπερματογονικών βλαστοκυττάρων [12]. Επομένως, εικάζουμε ότι η γλυκοσίδη Cistanche I έχει ρυθμιστική επίδραση στο Bmi1, προάγοντας έτσι τον πολλαπλασιασμό των σπερματογονικών βλαστικών κυττάρων ποντικού. Τα αποτελέσματα Western blot έδειξαν ότι η γλυκοσίδη I Cistanche ρύθμισε σημαντικά την έκφραση της πρωτεΐνης Bmi1 (Εικόνα 2).

2.3 Η γλυκοσίδη Cistanche ενεργοποιεί τη σηματοδοτική οδό Akt

Σύμφωνα με αναφορές, το φωσφορυλιωμένο Akt σχετίζεται στενά με τον πολλαπλασιασμό και τη διαφοροποίηση των κυττάρων [13]. Επομένως, διερευνήσαμε την επίδραση της ικαριίνης Ι στη φωσφορυλίωση Akt. Βρήκαμε ότι οι γλυκοσίδες Cistanche ρύθμισαν σημαντικά την έκφραση φωσφορυλίωσης Akt σε συγκεντρώσεις 0,5 και 1 μΜ (Εικόνα 3).

2.4 Αναστολή της μείωσης της Akt του Bmi1

Σύμφωνα με προηγούμενες ερευνητικές αναφορές [14], επιλέξαμε έναν αναστολέα Akt (MK-2206) σε συγκέντρωση 10 (μ M) και βρήκαμε ότι η αναστολή του p-Akt ανέστειλε σημαντικά το Bmi1. Αυτό το αποτέλεσμα υποδεικνύει ότι η έκφραση Bmi1 ρυθμίζεται από το Akt (Εικόνα 4)

Εικόνα 1: Επίδραση της γλυκοσίδης I Cistanche σε σπερματογονικά βλαστοκύτταρα ποντικού

Α. Η δοκιμασία ΜΤΤ χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση της επίδρασης της θεραπείας με γλυκοσίδη Ι Cistanche για 3 ημέρες στη βιωσιμότητα των σπερματογονικών βλαστοκυττάρων ποντικού. Β. Πείραμα πολλαπλασιασμού κυττάρων EdU χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση του πολλαπλασιασμού σπερματογονικών βλαστικών κυττάρων ποντικού μετά από 3 ημέρες θεραπείας με γλυκοσίδες Cistanche, καθώς και το διάγραμμα στατιστικής ανάλυσης. *Π<0.05, * * P<0.01 compared to the control group, n=3.

Εικόνα 2: Επίδραση του γλυκοσιδίου Ι Cistanche στην πρωτεΐνη Bmi1

Η δοκιμασία Western blot χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση της επίδρασης της θεραπείας με Cistanche deserticola γλυκοζίτη Ι στην έκφραση του Bmi1 σε σπερματογονικά βλαστοκύτταρα ποντικού μετά από 24 ώρες και παρουσιάστηκε επίσης ο στατιστικός χάρτης* P<0.05, compared to the control group, n=3.

Σχήμα 3: Επίδραση του γλυκοσιδίου Ι Cistanche στο μονοπάτι σηματοδότησης Akt

Η δοκιμασία Western blot χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση της έκφρασης φωσφορυλίωσης Akt και Akt σε σπερματογονικά βλαστοκύτταρα ποντικού μετά από 24 ώρες θεραπείας με γλυκοσίδη I Cistanche Cistanche και παρουσιάστηκε επίσης ο στατιστικός χάρτης** P<0.01, compared to the control group, n=3.

Εικόνα 4: Η επίδραση του αναστολέα Akt στο Bmi1. Χρησιμοποιήθηκε πείραμα Western blot για την ανίχνευση της έκφρασης φωσφορυλιωμένου Akt και Bmi1 σε σπερματογονικά βλαστοκύτταρα ποντικού μετά από 24 ώρες θεραπείας με αναστολέα Akt και παρουσιάστηκε το στατιστικό διάγραμμα* P<0.05 * * P<0.01, compared to the control group, n=3.

2.5 Η σιωπή του Bmi1 δεν επηρεάζει την έκφραση Akt

Για να επικυρώσουμε περαιτέρω τη σχέση ανάντη προς τα κάτω μεταξύ Bmi1 και Akt, βάλαμε σε σίγαση το Bmi1 και παρατηρήσαμε αλλαγές στην έκφραση Akt κελιών. Πρώτον, τα siRNA διαφορετικών αλληλουχιών του Bmi1 επιμολύνθηκαν σε κύτταρα ποντικού για να διερευνήσουν την αποτελεσματικότητά τους ως προς τη διαμόλυνση. Τα αποτελέσματα του πειράματος RT PCR έδειξαν ότι τα siBmi1-1, siBmi{1-2 και siBmi1-3 μείωσαν σημαντικά την έκφραση του Bmi1, με τα siBmi1-2 και siBmi1-3 έχοντας καλύτερα αποτελέσματα (Εικόνα 5Α). Το Western blot επιβεβαίωσε περαιτέρω ότι τόσο το siBmi1-2 όσο και το siBmi1-3 μπορούν να μειώσουν σημαντικά τα επίπεδα πρωτεΐνης Bmi1 (Εικόνα 5Β), επομένως επιλέξαμε τα siBmi1-2 και siBmi1-3 για μετέπειτα έρευνα. Είναι ενδιαφέρον ότι η RT-PCR έδειξε ότι η σίγαση του Bmi1 δεν επηρέασε την έκφραση Akt (Εικόνα 5C). Τα παραπάνω αποτελέσματα δείχνουν ότι το Akt βρίσκεται ανάντη του Bmi1.

Εικόνα 5: Ο αντίκτυπος της σίγησης του Bmi1 στο Akt

Α. Ανάλυση RT-PCR των επιδράσεων τριών αλληλουχιών σιγής στην έκφραση του γονιδίου Bmi1. Β. Χρησιμοποιήθηκε πείραμα Western blot για την ανίχνευση της επίδρασης τριών διαφορετικών αλληλουχιών siRNA στη σίγαση της πρωτεΐνης Bmi1 σε σύγκριση με το siCtrl, και πραγματοποιήθηκε στατιστική ανάλυση. Γ. Ανάλυση RT-PCR της επίδρασης της σίγησης του Bmi1 στο γονίδιο Akt** P<0.01, * * * P<0.001 compared to the control group, n=3.

3 Συζήτηση

Η υπογονιμότητα εμποδίζει σοβαρά τη βιώσιμη ανάπτυξη της ανθρώπινης κοινωνίας, με την ανδρική υπογονιμότητα να αντιπροσωπεύει το 50 τοις εκατό των ασθενών με υπογονιμότητα. Με τη συνεχή ανάπτυξη της ιατρικής τεχνολογίας, το επίπεδο κλινικής θεραπείας της ανδρικής υπογονιμότητας έχει βελτιωθεί σημαντικά. Ωστόσο, οι υπάρχουσες μέθοδοι χειρουργικής θεραπείας, όπως η τεχνολογία υποβοηθούμενης αναπαραγωγής, έχουν μειονεκτήματα όπως υψηλό κόστος και χαμηλό ποσοστό επιτυχίας και έχουν μικρό εύρος δικαιούχων. Είναι κατάλληλα για ασθενείς που έχουν πλήρη αζωοσπερμία κατά την ανάκτηση μικροσπερματοζωαρίων στους όρχεις, έχουν σαφείς γενετικές ασθένειες και δεν επιθυμούν να λάβουν θεραπεία για διάφορους λόγους [16]. Ως εκ τούτου, τόσο εγχώριες όσο και διεθνείς προσπάθειες έχουν γίνει για την ανάπτυξη ασφαλέστερων και πιο αξιόπιστων μεθόδων θεραπείας για την ανδρική υπογονιμότητα και η φαρμακευτική θεραπεία έχει γίνει ένα hotspot έρευνας στον τομέα της ανδρικής υπογονιμότητας [17]. Η υπάρχουσα κλινική πρακτική έχει δείξει ότι η παραδοσιακή κινεζική ιατρική στην Κίνα έχει καλή αποτελεσματικότητα και ασφάλεια στη θεραπεία της ανδρικής υπογονιμότητας [18].

Cistanche deserticola αποτελεσματικότητα-Τονικός νεφρός

Η γλυκοσίδη Cistanche είναι ένα καυτό θέμα στη θεραπεία της ανδρικής υπογονιμότητας στην παραδοσιακή κινεζική ιατρική τα τελευταία χρόνια. Το κύριο συστατικό του, η γλυκοσίδη Cistanche, έχει διάφορες φαρμακολογικές δραστηριότητες, συμπεριλαμβανομένης της ενίσχυσης της ανοσοποιητικής λειτουργίας [19], της ενίσχυσης της αναπαραγωγικής λειτουργίας των ανδρών [20], των αντιοξειδωτικών [21] και της κατά της οστεοπόρωσης [22]. Για να διευκρινιστεί περαιτέρω ο μηχανισμός δράσης του γλυκοσιδίου Cistanche μετά την είσοδό του στο ανθρώπινο σώμα, αυτή η μελέτη επέλεξε το γλυκοσίδιο Cistanche, ένα υδρόλυμα του γλυκοσιδίου Cistanche, ως ερευνητικό αντικείμενο για να διερευνήσει τον ειδικό μηχανισμό με τον οποίο το υδρόλυμα ασκεί τη φαρμακολογική του δράση. Πρώτον, διαπιστώσαμε ότι η γλυκοσίδη Cistanche I μπορεί να προωθήσει τον πολλαπλασιασμό των σπερματογονικών βλαστοκυττάρων ποντικού. Αξίζει να σημειωθεί ότι η γλυκοσίδη Cistanche I δεν προώθησε τον πολλαπλασιασμό των σπερματογονικών βλαστοκυττάρων ποντικού με τρόπο εξαρτώμενο από τη συγκέντρωση, υποδεικνύοντας ότι η γλυκοσίδη Cistanche I έχει ένα εύρος ασφαλές ως προς τη δόση. Στη συνέχεια, διαπιστώσαμε ότι η γλυκοσίδη I της Cistanche ρύθμισε σημαντικά το επίπεδο έκφρασης της πρωτεΐνης Bmi1 που σχετίζεται στενά με την αναπαραγωγική λειτουργία των ανδρών. Πρόσφατα, οι ερευνητές ανακάλυψαν ότι η απουσία του Bmi1 μπορεί να επηρεάσει σοβαρά την αναπαραγωγική λειτουργία των αρσενικών ποντικών, που εκδηλώνεται κυρίως με ολιγοσπερμία και διόγκωση των όρχεων [23]. Εν τω μεταξύ, μια άλλη μελέτη από την ερευνητική μας ομάδα επιβεβαίωσε επίσης ότι η αναστολή του Bmi1 μπορεί να επηρεάσει σοβαρά την ικανότητα πολλαπλασιασμού των σπερματογονικών βλαστοκυττάρων. Ως εκ τούτου, εικάζουμε ότι η γλυκοσίδη I Cistanche που προάγει τον πολλαπλασιασμό των σπερματογονικών βλαστικών κυττάρων ποντικού μπορεί να σχετίζεται με τη ρύθμιση της έκφρασης Bmi1. Σύμφωνα με αναφορές, το p-Akt σχετίζεται στενά με τον πολλαπλασιασμό και τη διαφοροποίηση των κυττάρων [14]. Επομένως, δοκιμάσαμε τις αλλαγές στην πρωτεΐνη p-Akt που προκαλούνται από τη γλυκοσίδη I Cistanche και βρήκαμε ότι η γλυκοσίδη I της Cistanche ρυθμίζει επίσης προς τα πάνω την p-Akt. Τέλος, διερευνήσαμε τη σχέση ανάντη και κατάντη μεταξύ Akt και Bmi1. Αξίζει να σημειωθεί ότι υπάρχουν διαφορές στα ερευνητικά αποτελέσματα της σχέσης ανάντη και κατάντη μεταξύ Bmi1 και Akt που ελήφθησαν από διαφορετικά εργαστήρια [24-25]. Τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης υποδεικνύουν ότι οι ειδικοί για το Akt αναστολείς ρυθμίζουν προς τα κάτω το Bmi1 ενώ η αποσιώπηση του Bmi1 δεν επηρεάζει τα επίπεδα mRNA του Akt, υποδεικνύοντας ότι το Akt μπορεί να είναι ανάντη του Bmi1, το οποίο ρυθμίζεται από το Akt. Στη μελέτη της επίδρασης της σίγησης του Bmi1 στο Akt, το εξερευνήσαμε μόνο σε επίπεδο mRNA. Καθώς το Bmi1 είναι ένας αναστολέας μεταγραφής, υποθέτουμε ότι μπορεί να υπάρχει αλληλεπίδραση μεταξύ της πρωτεΐνης Bmi1 και της πρωτεΐνης Akt. Ωστόσο, δεν υπάρχουν επί του παρόντος πλήρη στοιχεία που να επιβεβαιώνουν την ανάντη και την κατάντη σχέση μεταξύ Akt και Bmi1. Ως εκ τούτου, θα το συμπληρώσουμε και θα το βελτιώσουμε στο μέλλον.

Επιδράσεις του Cistanche-Tonifying νεφρών

Συνοπτικά, αυτή η μελέτη διαπίστωσε για πρώτη φορά ότι η γλυκοσίδη Cistanche I έχει ως αποτέλεσμα την προώθηση του πολλαπλασιασμού των σπερματογονικών βλαστοκυττάρων, αποκαλύπτοντας έναν νέο μηχανισμό της Cistanche γλυκοσίδης I που προάγει τον πολλαπλασιασμό των σπερματογονικών βλαστοκυττάρων σε κυτταρικό επίπεδο, εμπλουτίζοντας τη θεωρητική βάση για την εφαρμογή του γλυκοσιδίου Cistanche στην κλινική θεραπεία της ανδρικής υπογονιμότητας.

αναφορά

［1］ Dutta S, Biswas A, Sengupta P. Παχυσαρκία, ενδοκρινική διαταραχή και ανδρική υπογονιμότητα (J］). Asian Pac J Reprod, 2019, 8(5): 195.

［2］ Zhang F, Liu M, Gao J. Αλλαγές σε γονίδια κωδικοποίησης συναπτονομικού συμπλέγματος και ανθρώπινη υπογονιμότητα ［J］. Int J Biol Sci, 2022, 18(5): 1933-1943.

［3］ Serrano R, Garcia-Marin LJ, Bragado MJ. Σπέρμα Φωσφοπρωτείωμα: Αποκάλυψη Ανδρικής Υπογονιμότητας (J］). Biology (Βασιλεία), 2022, 11(5): 659.

［4］ Yang D, Liu HQ, Yang Z, et al. ΔΜΣ 1 στην καρδιά: Νέες λειτουργίες πέρα ​​από την ογκογένεση ［J］. EBioMedicine, 2021, 63: 103193.

［5］ Abeyrathna P, Su Y. Ο κρίσιμος ρόλος του Akt στην καρδιαγγειακή λειτουργία ［J］. Vascul Pharmacol, 2015, 74: 38-48.

［6］ Peltier J, O'Neill A, Schaffer DV. Το PI3K/Akt και το CREB ρυθμίζουν τον πολλαπλασιασμό και τη διαφοροποίηση του νευρικού ιππόκαμπου ενηλίκου ［J］. Dev Neurobiol, 2007, 67(10): 1348-1361.

［7］ Rafalski VA, Brunet A. Ενεργειακός μεταβολισμός στη μοίρα των νευρικών βλαστοκυττάρων ενηλίκων ［J］. Prog Neurobiol, 2011, 93: 182–203.

［8］Liu Zichen, Xu Ying, Chen Shizhong Φαρμακοκινητική και κατανομή ιστού του Cistanche glycoside I σε αρουραίους [J] Chinese Journal of Pharmacy, 2008 (11): 848-851

［9］Zi Hui, Li Keqiang, Shang Deyang, et al. Comparison of Metabolism and Tissue Distribution of Cistanche Glycoside in Monomer and Compound Compounds in Osteoporosis Model Rats [J] Chinese Journal of Experimental Prescriptions, 2015, 21 (6): 4}}

［10］Zi Hui, Fan Ying, Jiang Ning, et al Πειραματική μελέτη για την προώθηση της οστεογονικής διαφοροποίησης μεσεγχυματικών βλαστοκυττάρων μυελού των οστών αρουραίου μέσω της οδού σηματοδότησης BMP/Runx2/Osx από Cistanche glycoside I και Cistanche glycoside II [J] Οστεοπόρωση, 2019, 25 (05): 690-695

［11］ Zhou S, Dong J, Xiong Μ, et al. Το UHRF1 αλληλεπιδρά με τα snRNA και ρυθμίζει το εναλλακτικό μάτισμα σε σπερματογονικά βλαστοκύτταρα ποντικού ［J］. Αναφορές Βλαστοκυττάρων, 2022, 17(8): 1859-1873.

［12］ Yu J, Shen C, Lin Μ, et αϊ. Ο BMI1 προάγει τη διατήρηση των σπερματογονικών βλαστοκυττάρων καταστέλλοντας επιγενετικά τη σηματοδότηση Wnt10b/-κατενίνης ［J］. Int J Biol Sci, 2022, 18(7): 2807-2820 .

［13］ Chen Z, Li L, Wu W, et al. Η άσκηση προστατεύει τα πολλαπλασιαστικά δορυφορικά κύτταρα μυών από την εξάντληση μέσω του άξονα Igfbp7-Akt-mTOR ［J］. Theranostics, 2020, 10(14): 6448-6466.

［14］ Ma Y, Sender S, Sekora A, et al. Η ανασταλτική απόκριση στους αναστολείς οδού PI3K/AKT MK-2206 και Buparlisib σχετίζεται με γενετικές διαφορές στις κυτταρικές σειρές του αδενοκαρκίνου του παγκρεατικού πόρου ［J］. Int J Mol Sci, 2022, 23(8): 4295.

［15］ Carson SA, Kallen AN. Διάγνωση και Διαχείριση της Υπογονιμότητας: Μια Ανασκόπηση ［J］. JAMA, 2021, 326(1): 65-76.

［16］ Bosch E, De Vos M, Humaidan P. The Future of Cryopreservation in Assisted Reproductive Technologies ［J］. Front Endocrinol (Λωζάνη), 2020, 11: 67.

［17］ Wang M, Wang Q, Du Y, et al. Βιταμίνες σε συνδυασμό με την παραδοσιακή κινεζική ιατρική για την ανδρική υπογονιμότητα: Μια συστηματική ανασκόπηση και μεταανάλυση ［J］. Andrology, 2020, 8(5): 1038-1050.

［18］ Zhang Z, Yang J, Kong T, et al. Στοιχεία ανδρικής υπογονιμότητας από το σύνδρομο της Παραδοσιακής Κινεζικής Ιατρικής που αποκαλύφθηκαν με ανάλυση λανθάνοντος μοντέλου δέντρου ［J］. J Tradit Chin Med, 2018, 38(6): 926-935.

［19］Ji Xin Πρόοδος της έρευνας σχετικά με την ανοσοτροποποιητική επίδραση των γλυκοζιτών Cistanche [J] Hebei Pharmaceutical, 2016, 38 (05): 753-756

［20］Li Kangmei, Li Mingxing, Chen Minqi, et al Πρόοδος της έρευνας σχετικά με τις επιδράσεις των γλυκοζιτών Cistanche στο αναπαραγωγικό σύστημα [J] Western Traditional Chinese Medicine, 2022, 35 (04): 143-146

［21］Zhang Pan, Shi Juan, Liu Li, et al. Μελέτη σχετικά με την αντιοξειδωτική δράση των γλυκοζιτών Cistanche και των παραγώγων τους [J] China Food Additives, 2016, (02): 85-88

［22］Zhang Hao, Zheng Yuling, Ding Hui Πρόοδος έρευνας σχετικά με τις σχετικές οδούς του cistanche glycoside στη θεραπεία της οστεοπόρωσης [J] Journal of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, 2022, 41 (04): 531-538

［23］ Dai X, Zhang Q, Yu Z, et al. Τα ποντίκια με έλλειψη Bmi1 παρουσιάζουν ανδρική υπογονιμότητα［J］. Int J Biol Sci, 2018, 14(3): 358-368.

［24］ Yang W, Wu Z, Yang K, et al. Ο BMI1 προάγει την καρδιακή ίνωση σε καρδιακή ανεπάρκεια που προκαλείται από ισχαιμία μέσω της οδού σηματοδότησης PTEN-PI3K/Akt-mTOR (J］). Am J Physiol Heart Circ Physiol, 2019, 316(1): H61-H69.

［25］ Su Z, Yang Z, Xu Y, et al. Απόπτωση, αυτοφαγία, νεκρόπτωση και μετάσταση καρκίνου (J］). Mol Cancer, 2015, 14: 48.