Το κυκλικό RNA CircDVL1 αναστέλλει την εξέλιξη του καρκινώματος των νεφρικών κυττάρων διαυγών κυττάρων μέσω του άξονα MiR-412-3p/PCDH7

Αφηρημένη

Το διαυγές νεφρικό καρκίνωμα (ccRCC) είναι ένας πρωτοπαθής καρκίνος του νεφρού με υψηλό επιθετικό φαινότυπο και εξαιρετικά κακή πρόγνωση. Τα συσσωρευμένα στοιχεία υποδηλώνουν ότι τα κυκλικά RNA (circRNAs) παίζουν καθοριστικό ρόλο στην εμφάνιση και την ανάπτυξη διαφόρων καρκίνων στον άνθρωπο. Ωστόσο, η έκφραση, η κλινική σημασία και ο ρυθμιστικός ρόλος των circRNA στο ccRCC παραμένουν σε μεγάλο βαθμό ασαφείς. Εδώ αναφέρουμε ότι το circDVL1 μειώνεται στους ορούς και τους ιστούς των ασθενών με ccRCC και συσχετίζεται αρνητικά με τα κακοήθη χαρακτηριστικά του ccRCC. Η υπερέκφραση του circDVL1 αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό, επάγει τη διακοπή του G1/S, πυροδοτεί την απόπτωση και μειώνει τη μετανάστευση και την εισβολή σε διαφορετικά κύτταρα ccRCC in vitro. Αντίστοιχα, η υπερέκφραση circDVL1 καταστέλλει την ογκογένεση του ccRCC σε ένα μοντέλο ξενομοσχεύματος ποντικού. Μηχανιστικά, το circDVL1 χρησιμεύει ως σφουγγάρι για το ογκογόνο miR-412-3p, αποτρέποντας έτσι την καταστολή που προκαλείται από το miR-412-3p της στοχευόμενης πρωτοκαντερίνης 7 (PCDH7) στα κύτταρα ccRCC. Συλλογικά, τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι το circDVL1 ασκεί κατασταλτική λειτουργία όγκου κατά την εξέλιξη του ccRCC μέσω του άξονα circDVL1/miR-412-3p/PCDH7 και προτείνουν ότι το circDVL1 θα μπορούσε να είναι ένας νέος διαγνωστικός και προγνωστικός δείκτης και θεραπευτικός στόχος για το ccRCC.

Λέξεις-κλειδιά

circDVL1; Νεφροκυτταρικό καρκίνωμα; miR-412-3p; PCDH7; βιοδείκτη

Κάντε κλικ εδώ για να δείτε ποια είναι τα οφέλη του Cistanche

Εισαγωγή

Το νεφρικό καρκίνωμα (RCC) είναι ένα εξαιρετικά θανατηφόρο κακοήθη καρκίνωμα του ουρολογικού συστήματος και επηρεάζει σοβαρά την ανθρώπινη υγεία [1]. Η συχνότητα εμφάνισης RCC έχει αυξηθεί τις τελευταίες δεκαετίες, με 73.750 νέες περιπτώσεις να έχουν διαγνωστεί στις Ηνωμένες Πολιτείες το 2020 [2, 3]. Clear cell RCC (ccRCC), ο πιο κοινός και επιθετικός υποτύπος RCC, αντιπροσωπεύει το 70-75 τοις εκατό των περιπτώσεων RCC [4]. Είναι σημαντικό ότι περισσότερο από το 30 τοις εκατό των ασθενών με ccRCC σχετίζονται με μετάσταση κατά την αρχική διάγνωση. Επιπλέον, αν και η ριζική χειρουργική επέμβαση είναι η κύρια θεραπευτική επιλογή για την πρωτοπαθή ccRCC, ακόμα περίπου το 40 τοις εκατό των ασθενών παρουσίασαν υποτροπή και μεταστάσεις με 5-ετή συνολική επιβίωση μικρότερη από 10 τοις εκατό [5, 6]. Αυτά τα διλήμματα υπογραμμίζουν την επείγουσα ανάγκη διερεύνησης των μοριακών μηχανισμών που διέπουν την ανάπτυξη του ccRCC, τόσο ως διαγνωστικοί και προγνωστικοί βιοδείκτες όσο και ως πιθανοί θεραπευτικοί στόχοι.

Τα κυκλικά RNA (circRNA) είναι μη κωδικοποιητικά RNA με δομές κλειστού βρόχου μονής αλυσίδας που τα καθιστούν εξαιρετικά σταθερά [7, 8]. Πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει ότι τα circRNA είναι άφθονα στο αίμα [9, 10], στο σάλιο [11] και στα εξωσώματα [12], υποδεικνύοντας ότι θα μπορούσαν να χρησιμεύσουν ως νέοι διαγνωστικοί βιοδείκτες [13]. Δεδομένου ότι η υγρή βιοψία είναι λιγότερο επεμβατική από την παραδοσιακή βιοψία ιστού [14], τα circRNA έχουν θεωρηθεί πολύτιμα προγνωστικά εργαλεία για την ιατρική ακριβείας [15-17]. Συγκεκριμένα, αρκετά circRNA, όπως τα cricNOX4, circEGLN3 και circPRRC2A, μπορεί να λειτουργήσουν ως πιθανοί βιοδείκτες για τη διάγνωση και/ή την πρόγνωση RCC, οι οποίοι συνοψίστηκαν στην πρόσφατη ανασκόπησή μας [18]. Επιπλέον, η τρέχουσα έρευνα επικεντρώνεται κυρίως στην εναλλαγή της έκφρασης circRNA σε ιστούς ccRCC [19, 20], ωστόσο, τα επίπεδά τους στην υγρή βιοψία παραμένουν σε μεγάλο βαθμό άγνωστα, γεγονός που εμποδίζει την εξερεύνηση πιθανών βιοδεικτών. Επιπλέον, αν και αρκετά circRNAs, συμπεριλαμβανομένων των circHIAT1 [21], circ-AKT3 [22] και cRAPGEF5 [23], έχει αποδειχθεί ότι παίζουν σημαντικό ρόλο στην έναρξη και την εξέλιξη του ccRCC [18], η συστηματική διερεύνηση των circRNA που εμπλέκονται στο ccRCC Η ανάπτυξη, καθώς και οι υποκείμενοι μοριακοί μηχανισμοί τους, εξακολουθούν να λείπουν.

Εδώ, προσδιορίσαμε πρώτα την έκφραση των circRNA σε δείγματα ορού από ασθενείς με ccRCC και υγιείς μάρτυρες χρησιμοποιώντας μια μικροσυστοιχία circRNA. Είναι σημαντικό ότι εντοπίσαμε ένα νέο circRNA circDVL1 που σχετίζεται με ccRCC (αναγνωριστικό σφαγίου: hsa_circ_ 0009267), το οποίο κωδικοποιείται στο γονίδιο DVL1. Το CircDVL1 μειώνεται σημαντικά στον ορό από ασθενείς με ccRCC και η έκφρασή του συσχετίζεται αντιστρόφως με τη βαθμολόγηση ccRCC Fuhrman, υποδηλώνοντας τη δυνατότητα ως βιοδείκτη. Επιπλέον, το CircDVL1 μειώνεται σε ιστούς όγκου ccRCC. Αντίστοιχα, το circDVL1 μπορεί να αναστείλει τον πολλαπλασιασμό, να προκαλέσει διακοπή του κυτταρικού κύκλου, να προκαλέσει απόπτωση και να μειώσει τη μετανάστευση και την εισβολή των κυττάρων ccRCC. Μηχανιστικά, το circDVL1 λειτουργεί ως σφουγγάρι miR-412-3p για να ρυθμίζει προς τα πάνω την έκφραση του PCDH7. Συλλογικά, αυτά τα ευρήματα προσδιορίζουν το circDVL1 ως κατασταλτικό όγκου για το ccRCC και υποδηλώνουν τις δυνατότητές του τόσο ως διαγνωστικού βιοδείκτη όσο και ως θεραπευτικού στόχου.

Συμπλήρωμα Cistanche

Υλικά και μέθοδοι

1. Κλινικά δείγματα

Αυτή η μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας του First Affiliated Hospital of Zhejiang University (2021-104). Δεκαοκτώ ταιριαστά δείγματα ccRCC και παρακείμενων μη καρκινικών ιστών συλλέχθηκαν από ασθενείς με ccRCC. Τα δείγματα διατηρήθηκαν γρήγορα σε υγρό άζωτο μετά την επέμβαση και στη συνέχεια αποθηκεύτηκαν σε -80 βαθμό μέχρι περαιτέρω χρήση. Συλλέχθηκαν δείγματα ορού από 60 ασθενείς με ccRCC και 66 υγιείς μάρτυρες. Στη συνέχεια, τα δείγματα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία χρησιμοποιώντας κατάλληλες μεθόδους και ο ορός που λήφθηκε αποθηκεύτηκε σε -80 βαθμό μέχρι περαιτέρω χρήση.

2. Κυτταρικές σειρές και κυτταρική καλλιέργεια

Όλες οι κυτταρικές σειρές αγοράστηκαν από την National Collection of Authenticated Cell Cultures (Κίνα). Κύτταρα 786-Ο και Caki-1 καλλιεργήθηκαν σε RPMI 1640 (HyClone), κύτταρα ACHN καλλιεργήθηκαν σε ΜΕΜ (HyClone) και 293Τ κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε μέσο DMEM (Gibco). Όλα τα μέσα κυτταροκαλλιέργειας συμπληρώθηκαν με 10 τοις εκατό εμβρυϊκό βόειο ορό (Gibco) και 1 τοις εκατό μίγμα πενικιλίνης και στρεπτομυκίνης (Gibco). Οι κυτταρικές καλλιέργειες διατηρήθηκαν σε υγροποιημένο επωαστήρα στους 37 βαθμούς και 5 τοις εκατό CO₂.

3. Ανάλυση μικροσυστοιχίας CircRNA

Το προφίλ μικροσυστοιχίας CircRNA σε δείγματα ορού πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας Arraystar ανθρώπινο CircRNA Array V2 (Capital Biotechnology, China). Το λογισμικό GeneSpring V13.0 (Agilent Technologies) χρησιμοποιήθηκε για τη σύνοψη δεδομένων, την κανονικοποίηση και τον ποιοτικό έλεγχο μικροσυστοιχιών. Τα CircRNA με κατώφλι αλλαγής πτυχής Μεγαλύτερο ή ίσο με 2 και Μικρότερο ή ίσο με -2 και τιμή P < 0.05 θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικά. Η ιεραρχική ανάλυση συστάδων πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας τυποποιημένη Ευκλείδεια απόσταση με πλήρη σύνδεση.

4. Αλληλουχία RNA (RNA-seq) και ανάλυση δεδομένων

Η επόμενη γενιά RNA-seq πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [24, 25]. Για τον προσδιορισμό της αλληλουχίας RNA χρησιμοποιήθηκαν κύτταρα miR-412-3p και 786-0 επιμολυσμένα με μίμηση ελέγχου. Η κατασκευή βιβλιοθήκης και οι αναλύσεις βιοπληροφορικής των ακατέργαστων δεδομένων διεξήχθησαν από τη Novogene Co., Ltd. (Πεκίνο, Κίνα). Τα δεδομένα RNA-seq κατατέθηκαν σε Gene Expression Omnibus (GEO) με αριθμό πρόσβασης GSE175492.

5. Εκχύλιση RNA και ποσοτική RT-PCR σε πραγματικό χρόνο (RT-qPCR)

Η RT-qPCR πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [26, 27]. Ολικό RNA απομονώθηκε από ορό, κύτταρα και ιστούς όγκου χρησιμοποιώντας AG RNAex Pro Reagent (AG, Hunan, China). Για ανίχνευση circRNA, 1 ug ολικού RNA υποβλήθηκε σε πέψη με RNase R (3 U/ug, Epicenter Technologies, Madison, USA, Cat#RNR07250) στους 37 βαθμούς για 10 λεπτά και δημιουργήθηκε συμπληρωματικό DNA (cDNA) χρησιμοποιώντας το HiScript II 1st Κιτ σύνθεσης cDNA κλώνου (Vazyme). Τα επίπεδα έκφρασης CircRNA και mRNA κανονικοποιήθηκαν σε -ακτίνη. Για τον προσδιορισμό της έκφρασης miRNA, πραγματοποιήθηκε αντίστροφη μεταγραφή με κιτ σύνθεσης πρώτης έλικος miRNA miR-XTM (Takara Bio USA, CA, USA, Cat. #638313) με έκφραση U6 (Rnu6-1) ως ενδογενές έλεγχο. Το σχετικό επίπεδο έκφρασης RNA προσδιορίστηκε με τη μέθοδο 2-ΔΔCt. Όλες οι αλληλουχίες εκκινητών ανάλυσης qRT-PCR παρουσιάζονται στον Πίνακα S2.

6. Κατασκευή πλασμιδίου και σταθερή επιμόλυνση

Για να κατασκευαστεί ο φορέας υπερέκφρασης circDVL1 και circDVL1-MUT, η circDVL1 και η μεταλλαγμένη ακολουθία circDVL1 κλωνοποιήθηκαν στον φορέα pcDNA 3.1 (συν ) Laccase 2 MCS Exon, ο οποίος παραγγέλθηκε από την Addgene (#69893). Κύτταρα ACHN και 786-Ο επιμολύνθηκαν με circRNA και φορείς αρνητικού ελέγχου χρησιμοποιώντας Lipofectamine 3000 (Invitrogen, Carlsbad, CA). Μετά από 48 ώρες, επιλέχθηκαν σταθερά επιμολυσμένα κύτταρα που εκφράζουν circDVL1 με την προσθήκη 800 μg/mL G418 στο μέσο καλλιέργειας.

7. Βιωσιμότητα των κυττάρων

Η δοκιμασία βιωσιμότητας κυττάρων προσδιορίστηκε με το κιτ CCK8 (Dojindo Laboratories, Kumamoto, Japan, Cat# CK04), όπως περιγράφηκε προηγουμένως [29]. 786-Ο και ACHN circDVL1 υπερέκφραση και τα κύτταρα ελέγχου σπάρθηκαν σε 96-πλάκες φρεατίου. Προστέθηκε διάλυμα CCK8 (10 μL) στον υποδεικνυόμενο χρόνο και επωάστηκε στους 37 βαθμούς για 2 ώρες και η απορρόφηση μετρήθηκε χρησιμοποιώντας φασματοφωτόμετρο.

Herba Cistanche

8. Σχηματισμός αποικίας

Οι δοκιμασίες σχηματισμού αποικιών διεξήχθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [24]. ACHN (800 κύτταρα/φρεάτιο) και 786-Ο κύτταρα (400 κύτταρα/φρεάτιο) καλλιεργήθηκαν για 10 ημέρες και στη συνέχεια σταθεροποιήθηκαν με 4 τοις εκατό παραφορμαλδεΰδη για περίπου 30 λεπτά, ακολουθούμενη από χρώση με 0,1 τοις εκατό διάλυμα κρυσταλλικής βιολέτας για περίπου 15 λεπτά. Οι κλώνοι που περιείχαν περισσότερα από 50 κύτταρα μετρήθηκαν ως μία μόνο αποικία.

9. Ανάλυση κυτταρικού κύκλου

Τα κύτταρα συγχρονίστηκαν σε μέσο RPMI 1640 χωρίς FBS όλη τη νύχτα και άλλαξαν σε μέσο με 10 τοις εκατό FBS για τις επόμενες 48 ώρες. Τα κύτταρα πλύθηκαν, επαναιωρήθηκαν σε 70 τοις εκατό αιθανόλη σε PBS και αποθηκεύτηκαν στους -20 βαθμούς όλη τη νύχτα. Στη συνέχεια, τα κύτταρα χρωματίστηκαν με διάλυμα ιωδιούχου προπιδίου (ΡΙ) που περιέχει RNase Α για ανάλυση κυτταρικού κύκλου.

10. Ανάλυση απόπτωσης

Η ανάλυση απόπτωσης ACHN και 786-Ο κυτταρικής απόπτωσης διεξήχθη με κιτ ανίχνευσης απόπτωσης Annexin V-FITC/PI (Beijing Biosea Biotechnology, Κίνα) ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή.

11. Δοκιμασίες κυτταρικής μετανάστευσης και εισβολής

In vitro, η ικανότητα μετανάστευσης κυττάρων αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας θαλάμους transwell με πολυανθρακικές μεμβράνες πόρων 8 μm (Milipore, MA, USA). Πραγματοποιήθηκαν δοκιμές κυτταρικής εισβολής με τους θαλάμους transwell επικαλυμμένους με 100 μL Matrigel (BD Biosciences, ΗΠΑ). 786-Ο κύτταρα (2×104) ή κύτταρα ACHN (4×104) εναιωρήθηκαν σε 200 μL RPMI 1640 χωρίς ορό και εμβολιάστηκαν στους άνω θαλάμους διαβάθμισης και στη συνέχεια προστέθηκαν 600 μL μέσου που περιείχε 20 τοις εκατό FBS στους κάτω θαλάμους. Στη συνέχεια, τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν για 24 ώρες για να μετρηθεί η μετανάστευση και για 48 ώρες για να αξιολογηθεί η εισβολή. Τα κύτταρα στον άνω θάλαμο ξύστηκαν προσεκτικά και τα κύτταρα στο κάτω διαμέρισμα στερεώθηκαν με 4 τοις εκατό παραφορμαλδεΰδη και χρωματίστηκαν με κρυσταλλικό ιώδες. Ελήφθησαν εικόνες και τα κύτταρα μετρήθηκαν με μικροσκόπιο.

12. Western blot

Η ολική πρωτεΐνη εκχυλίστηκε, ποσοτικοποιήθηκε και διαχωρίστηκε σε πηκτές SDS-PAGE 10 τοις εκατό και στη συνέχεια μεταφέρθηκε σε μεμβράνες διφθοριούχου πολυβινυλιδενίου (Milipore, MA, USA), οι οποίες επωάστηκαν με πρωτογενή αντι-γλυκεραλδεϋδη 3-φωσφορική αφυδρογονάση (GAPDH) Πρωτεύοντα αντισώματα (Proteinch, 60004-1-Ig), anti-PCDH7 (Abcam, ab139274) στους 4 βαθμούς κατά τη διάρκεια της νύχτας.

13. Χρώση ανοσοφθορισμού

Τα κύτταρα σπάρθηκαν σε καλυπτρίδες για 24 ώρες και σταθεροποιήθηκαν με 4 τοις εκατό παραφορμαλδεΰδη, διαπερατήθηκαν με 0.2 τοις εκατό Triton X-100 για 20 λεπτά και επωάστηκαν με 5 τοις εκατό αλβουμίνη ορού βοοειδών. Στη συνέχεια, τα κύτταρα επωάστηκαν με ένα πρωτεύον αντίσωμα ειδικό για το Ki67 (1:400, ab48027, Abcam) στους 4 βαθμούς όλη τη νύχτα και στη συνέχεια επωάστηκαν με 488-συζευγμένο IgG κατσίκας αντι-κουνελιού (1:150, D110088, Sangon ) στους 37 βαθμούς για 1 ώρα. Τα κύτταρα χρωματίστηκαν με 4',6-διαμιδινο-2-φαινυλινδόλη (DAPI) και ελήφθησαν εικόνες με μικροσκόπιο φθορισμού Leica (DM4000).

14. Σχηματισμός όγκου in vivo και χρώση Ki67

Αρσενικά γυμνά ποντίκια BALB/c ηλικίας έξι εβδομάδων (που αγοράστηκαν από τη Shanghai SLAC) χωρίστηκαν σε 2 ομάδες (n=5 για κάθε ομάδα). Τα ποντίκια εμβολιάστηκαν με περίπου 3×106 κύτταρα ελέγχου ή κύτταρα ACHN που υπερεκφράζουν circDVL1 με υποδόρια ένεση. Το μέγεθος του όγκου μετρήθηκε με συρόμενο παχύμετρο κάθε 3 ημέρες, ξεκινώντας την ημέρα 6 μετά την ένεση. Ο όγκος του όγκου υπολογίστηκε ως μήκος × πλάτος × ύψος/2. Όλα τα πειράματα διεξήχθησαν σύμφωνα με τις Οδηγίες για τη φροντίδα και τη χρήση των εργαστηριακών ζώων (δημοσίευση NIH 80-23, αναθεωρημένη το 1996) και εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Φροντίδας Ζώων του Πανεπιστημίου Zhejiang, Hangzhou, Κίνα.

Κάψουλες Cistanche

15. Fluorescence in situ hybridization (FISH)

Συντέθηκε ένας ανιχνευτής circDVL1 διπλής διγοξιγενίνης (DIG)-υπεροξειδάσης χρένου (HRP) (Exon Biotechnology, Guangzhou, Κίνα). Κύτταρα ελέγχου και ACHN που υπερεκφράζουν το circDVL1 καλλιεργήθηκαν σε καλυπτρίδες και επωάστηκαν με τον επισημασμένο ανιχνευτή στους 37 βαθμούς για 24 ώρες. Μετά το πλύσιμο, οι αντικειμενοφόρες πλάκες επωάστηκαν σε δευτερεύον αντίσωμα αντι-DIG στους 37 βαθμούς για 1 ώρα. Μια μέθοδος ενίσχυσης σήματος τυραμίνης χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση σημάτων circDVL1 και τα κύτταρα αντιχρωματίστηκαν με DAPI. Για το co-FISH, οι διαφάνειες κάλυψης επωάστηκαν με DIGlabeled circDVL1 και σημασμένο με βιοτίνη miR-412-3p.

16. Δοκιμασία ανοσοκαθίζησης RNA (RIP).

Οι αναλύσεις RIP πραγματοποιήθηκαν με το κιτ ανοσοκατακρήμνισης πρωτεΐνης δέσμευσης RNA Magna RIP™ (Millipore, ΜΑ, ΗΠΑ). 786-Ο κύτταρα λύθηκαν σε πλήρες ρυθμιστικό διάλυμα λύσης RIP και στη συνέχεια επωάστηκαν με ρυθμιστικό ανοσοκατακρήμνισης που περιείχε μαγνητικά σφαιρίδια τα οποία συζεύχθηκαν με σύμπλοκο αντισωμάτων AGO2 (Abcam, ΜΑ, ΗΠΑ) ή IgG στους 4 βαθμούς όλη τη νύχτα. Στη συνέχεια, τα ανοσοκαταβυθισμένα RNA δοκιμάστηκαν με RT-qPCR.

17. Δοκιμασία αναφοράς διπλής λουσιφεράσης

Οι αλληλουχίες CircDVL1, PPM1H-3'UTR, και PCDH7-3'UTR, οι οποίες περιείχαν μεταλλαγμένες θέσεις δέσμευσης miR-412-3p και τις αντίστοιχες μεταλλαγμένες αλληλουχίες τους, συντέθηκαν και στη συνέχεια υποκλωνοποιήθηκαν στον ανταποκριτή λουσιφεράσης vector psiCHECK-2 (Promega) για την παραγωγή του circDVL1-WT, circDVL1-Mut1, circDVL1-Mut2, PPM1H-3'UTR-WT, PCDH{ {14}}'UTRWT, PCDH7-3'UTR-Mut1 και PCDH7-3'UTR-Mut2 διανύσματα. Οι διαφορετικές αλληλουχίες 3'UTR των PPM1H και PCDH7 περιέχουν το θραύσμα των 500 bp που περιέχει πιθανές θέσεις δέσμευσης miR-412-3p (πλαγιομετωπισμένα κατά 250 bp). Η σχετική δραστικότητα λουσιφεράσης αξιολογήθηκε με μια δοκιμασία αναφοράς διπλής λουσιφεράσης (Promega, ΗΠΑ). Όλες οι δοκιμασίες πραγματοποιήθηκαν σε τρία ανεξάρτητα αντίγραφα.

18. Στατιστική ανάλυση

Διεξήχθησαν στατιστικές αναλύσεις με GraphPad Prism 7.0 (GraphPad Software, La Jolla, CA). Οι διαφορές μεταξύ των ομάδων αξιολογήθηκαν με Student's t-test ή μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης (ANOVA). Οι διαφορές μεταξύ των ομάδων θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικές όταν οι τιμές P ήταν < 0.05.

Συζήτηση

Διάφοροι τύποι βιοδεικτών ccRCC έχουν προταθεί και αξιολογηθεί πειραματικά, συμπεριλαμβανομένων των mRNAs [32], miRNAs [33], lncRNA [34] και circRNA [35]. Ωστόσο, κανένας από αυτούς δεν έχει επιβεβαιωθεί ως ακριβείς διαγνωστικοί βιοδείκτες για κλινική χρήση ρουτίνας σε ασθενείς με ccRCC. Εδώ, η μελέτη μας απέδειξε ότι το circDVL1 παίζει σημαντικό ρόλο στην εξέλιξη του ccRCC. Αρχικά, εξετάσαμε τον ορό από ασθενείς με ccRCC και υγιείς μάρτυρες για να αναγνωρίσουμε διαφορικά εκφραζόμενα circRNA χρησιμοποιώντας μια μικροσυστοιχία circRNA. Τα δεδομένα RT-qPCR αποκάλυψαν ότι το circDVL1 μειώθηκε δραματικά σε δείγματα ccRCC. Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι τα circRNAs θα μπορούσαν να χρησιμεύσουν ως λανθάνοντες βιοδείκτες ορού σε διαφορετικούς καρκίνους [36, 37]. Για παράδειγμα, οι Bei et al. έδειξε ότι το εξωσωματικό έχει-κύκλωμα-0004771 αυξήθηκε στον ορό που συλλέχθηκε από ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου [38]. Ωστόσο, η έρευνα σχετικά με τον ειδικό ρόλο του circRNA ως μη επεμβατικού βιοδείκτη στο ccRCC είναι ακόμα περιορισμένη. Η μελέτη μας αποκάλυψε ότι το circDVL1 είχε μειωθεί σημαντικά στον ορό από ασθενείς με ccRCC και ότι η μειωμένη έκφραση του circDVL1 ορού μπορεί να προέρχεται από όγκο. Επιπλέον, το επίπεδο circDVL1 στον ορό είχε σημαντική διαγνωστική αξία στη διάκριση μεταξύ ασθενών με όγκους βαθμού Fuhrman I-II και Fuhrman βαθμού III-IV. Επομένως, το circDVL1 ορού θα μπορούσε να είναι ένας πολλά υποσχόμενος διαγνωστικός δείκτης για ccRCC. Ωστόσο, αρκετοί υγιείς ασθενείς εμφάνισαν χαμηλά επίπεδα circDVL1 στον ορό τους, υποδεικνύοντας ότι η παρακολούθηση των ασθενών που βασίζεται αποκλειστικά στην ανάλυση αυτού του κυκλοφορούντος RNA θα μπορούσε να οδηγήσει σε ψευδώς θετικά αποτελέσματα. Ως εκ τούτου, η τιμή του circDVL1 ως μεμονωμένου διαγνωστικού δείκτη είναι κάπως περιορισμένη και ένας συνδυασμός διαφορετικών κυκλοφορούντων RNA μπορεί να χρειαστεί να αναλυθεί για να ληφθεί μια αξιόπιστη πρόβλεψη για την ανάπτυξη όγκου και τη μετάσταση.

Ως πρόσφατα ταυτοποιημένο circRNA, ο βιολογικός και παθολογικός ρόλος του circDVL1 δεν είχε διερευνηθεί. Σε αυτή τη μελέτη, αξιολογήσαμε τον ρόλο και τον ρυθμιστικό μηχανισμό του circDVL1 στο ccRCC. Λειτουργικές δοκιμασίες έδειξαν ότι το υπερεκφρασμένο circDVL1 θα μπορούσε να μειώσει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων ccRCC, την ικανότητα σχηματισμού αποικιών και το δυναμικό ογκογένεσης, πιθανόν λόγω της αυξημένης κυτταρικής απόπτωσης in vitro και της καταστολής της ανάπτυξης όγκου in vivo. Τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι το circDVL1 θα μπορούσε να έχει ογκοκατασταλτική λειτουργία στο ccRCC.

Τα CircRNA μπορούν να προάγουν την έναρξη και την εξέλιξη του όγκου δρώντας ως σπόγγοι miRNA. Ως εκ τούτου, εξετάσαμε εάν το circDVL1 θα μπορούσε να ρυθμίσει τη βιογένεση του miRNA κατά τη διάρκεια της καρκινογένεσης ccRCC. Χρησιμοποιώντας το λογισμικό miRanda και miRWalk, διαπιστώσαμε ότι το circDVL1 είχε μια πιθανή θέση δέσμευσης για το miR-412-3p. Οι αναλύσεις αναφοράς Luciferase κατέδειξαν μια άμεση σχέση μεταξύ circDVL1 και miR-412-3p. Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι το miR-412-3p συμμετείχε στην παθογένεση διαφορετικών καρκίνων μέσω διαφόρων μοριακών μηχανισμών [31, 39, 40]. Για παράδειγμα, το miR-412-3p είχε ογκογόνο ρόλο στον καρκίνο του παχέος εντέρου, προάγοντας τη μετανάστευση, την εισβολή και τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό των καρκινικών βλαστικών κυττάρων [31]. Επιπλέον, η έκφραση του miR{11}}p ρυθμίστηκε προς τα πάνω σε εξωκυτταρικά κυστίδια από ασθενείς με καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων του στόματος (OSCC) [39]. Ομοίως, τα αποτελέσματά μας πρότειναν ότι το miR-412-3p ήταν ένας σημαντικός προαγωγέας όγκου στο ccRCC.

Σκόνη κιστάνς

Επιπλέον, εντοπίστηκε και ο στόχος circDVL1/miR-412-3p. Οι πρωτοκαντερίνες (PCDHs) είναι διαμεμβρανικές πρωτεΐνες που ανήκουν στην υπεροικογένεια των καντερινών, οι οποίες παίζουν σημαντικό ρόλο στην κυτταρική προσκόλληση και στα μονοπάτια σηματοδότησης. Το PCDH7 είναι μέλος της οικογένειας PCDH και έχει καθιερωμένους ρόλους στην αναγνώριση κυττάρων και την κυτταρική προσκόλληση [41]. Είναι γενικά γνωστό ότι η απώλεια της προσκόλλησης είναι ένα πρώιμο βήμα στην εισβολή και τη μετάσταση στα καρκινικά κύτταρα. Τα αναδυόμενα στοιχεία υποδηλώνουν ότι το PCDH7 εκφράζεται ανώμαλα σε διάφορους τύπους όγκων. Για παράδειγμα, στον ανθρώπινο μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα, το PCDH7 υπερεκφραζόταν συχνά και λειτουργούσε ως ογκογονίδιο για να επάγει τον κυτταρικό μετασχηματισμό και να προάγει την ογκογένεση του πνεύμονα ενισχύοντας τη σηματοδότηση MAPK [42]. Αντίθετα, το PCDH7 ανέστειλε τη μετανάστευση και την εισβολή των καρκινικών κυττάρων του στομάχου μέσω της Ε-καντερίνης [43]. Επιπλέον, μειωμένη έκφραση PCDH7 έχει βρεθεί σε καρκίνους του παχέος εντέρου [44] και της ουροδόχου κύστης [45]. Αυτά τα δεδομένα έδειξαν ότι το PCDH7 είχε διάφορες λειτουργίες σε διαφορετικούς τύπους όγκων. Σε αυτή τη μελέτη, δείξαμε ότι τα επίπεδα PCDH7 μειώθηκαν σε δείγματα όγκων ccRCC. Είναι ενδιαφέρον ότι τα πειράματα λειτουργικής διάσωσης αποκάλυψαν ότι οι ογκοκατασταλτικές ιδιότητες του circDVL1 οφείλονται εν μέρει στην επίδρασή του στο PCDH7. Η μελέτη μας υποδηλώνει έντονα τη σημασία του ρυθμιστικού άξονα circDVL1/miR-412-3p/ PCDH7 στην εξέλιξη του ccRCC.

Αυτή η μελέτη έχει αρκετούς περιορισμούς. Δοκιμάσαμε τρία συγκεκριμένα siRNA για ενδογενή circDVL1, αλλά δυστυχώς, όλα αυτά τα siRNA απέτυχαν να καταρρίψουν το circDVL1 πιθανώς λόγω της μοναδικής δομής αυτού του circRNA, καθώς και της χαμηλής βασικής του έκφρασης σε κύτταρα ccRCC. Επιπλέον, τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι το circDVL1 θα μπορούσε να είναι ένας θεραπευτικός στόχος σε ασθενείς με ccRCC, απαιτούνται κλινικές μελέτες με μεγάλες ομάδες ασθενών για να αποδειχθεί περαιτέρω η κλινική σημασία του. Στη μελέτη μας, δεν διερευνήσαμε την αιτία της προς τα κάτω ρύθμισης του circDVL1 σε βλάβες ccRCC. Έχει αναφερθεί ότι οι πρωτεΐνες που δεσμεύουν RNA (RBPs), συμπεριλαμβανομένου του quaking (QKI), της ρυθμιστικής πρωτεΐνης 1 του επιθηλίου (ESRP1) και του συντηγμένου σαρκώματος (FUS) εμπλέκονται στον μεταμεταγραφικό σχηματισμό circRNA [{{10 }}]. Επιπλέον, ορισμένοι μεταγραφικοί παράγοντες (π.χ. ZEB1, c-Myb και c-Jun) εμπλέκονται επίσης στη βιογένεση συγκεκριμένων circRNA [49-52]. Επίσης, μελέτες έχουν δείξει ότι η τροποποίηση του m6A μεσολαβεί στην αποικοδόμηση του circRNA. Park et al. ανέφερε ότι τα circRNA τροποποιημένα με m6A υπορυθμίστηκαν επίσης μέσω ενός άξονα YTHDF2- HRSP12-RNase P/MRP [53]. Το εάν αυτοί οι RBPs, οι παράγοντες μεταγραφής και η μεθυλίωση του m6A εμπλέκονται στην καθοδική ρύθμιση του circDVL1 παραμένει αβέβαιο. Στη μελλοντική μας έρευνα, θα προσπαθήσουμε να διερευνήσουμε τον ανάντη ρυθμιστικό μηχανισμό του circDVL1 στην ανάπτυξη ccRCC και στην ογκογένεση.

Συνοπτικά, δείξαμε ότι το επίπεδο circDVL1 μειώθηκε στον ορό από ασθενείς με ccRCC. Συγκεκριμένα, διερευνήσαμε περαιτέρω τους ρυθμιστικούς μηχανισμούς του circDVL1 και δείξαμε ότι το circDVL1 κατέστειλε την ογκογένεση του ccRCC προάγοντας την έκφραση PCDH7 με σπόγγο miR-412-3p. Ως εκ τούτου, η μελέτη μας έδειξε ότι το circDVL1 μπορεί να είναι ένας πιθανός θεραπευτικός στόχος για μελλοντικές θεραπείες ccRCC.

βιβλιογραφικές αναφορές

1.Cheng SK, Chuah KL. Μεταστατικό νεφρικό καρκίνωμα στο πάγκρεας: μια ανασκόπηση. Αρχεία Παθολογίας & Εργαστηριακής Ιατρικής. 2016; 140: 598-602.

2. Jonasch E, Walker CL, Rathmell WK. Οντογένεση του διαυγούς νεφρικού καρκινώματος και μηχανισμοί θνησιμότητας. Nat Rev Nephrol. 2021; 17: 245-61.

3. Siegel RL, Miller KD, Jemal A. Cancer statistics, 2020. CA Cancer J Clin. 2020; 70.

4. Shuch B, Amin A, Armstrong AJ, Eble JN, Ficarra V, Lopez-Beltran Α, et αϊ. Κατανόηση των παθολογικών παραλλαγών του καρκινώματος των νεφρικών κυττάρων: απόσταξη θεραπευτικών ευκαιριών από τη βιολογική πολυπλοκότητα. Ευρωπαϊκή ουρολογία. 2015; 67: 85-97.

5. Koul Η, Huh JS, Rove ΚΟ, Crompton L, Koul S, Meacham RB, et αϊ. Μοριακές πτυχές του καρκινώματος νεφρικών κυττάρων: μια ανασκόπηση. Am J Cancer Res. 2011; 1: 240-54.

6. Sanchez-Gastaldo A, Kempf E, Gonzalez Del Alba A, Duran I. Συστηματική θεραπεία του καρκίνου των νεφρικών κυττάρων: Μια ολοκληρωμένη ανασκόπηση. Cancer Treat Rev. 2017; 60: 77-89.

7. Kristensen LS, Andersen MS, Stagsted LVW, Ebbesen KK, Hansen TB, Kjems J. The biogenesis, biology, and χαρακτηρισμός των κυκλικών RNAs. Nature Reviews Genetics. 2019; 20: 675-91.

8. Patop IL, Wüst S, Kadener S. Παρελθόν, παρόν και μέλλον των circRNAs. Το περιοδικό EMBO. 2019; 38: e100836.

9. Perez de Acha O, Rossi M, Gorospe M. Circular RNAs in Blood Malignancies. Εμπρός Mol Biosci. 2020; 7: 109.

10. Zhang SJ, Chen X, Li CP, Li XM, Liu C, Liu BH, et αϊ. Προσδιορισμός και Χαρακτηρισμός Κυκλικών RNA ως νέας κατηγορίας υποτιθέμενων βιοδεικτών στη διαβητική αμφιβληστροειδοπάθεια. Ερευνητική οφθαλμολογία και οπτική επιστήμη. 2017; 58: 6500-9.

11. Bahn JH, Zhang Q, Li F, Chan ΤΜ, Lin Χ, Kim Υ, et αϊ. Το τοπίο του microRNA, του RNA που αλληλεπιδρά με το Piwi και του κυκλικού RNA στο ανθρώπινο σάλιο. Κλινική χημεία. 2015; 61: 221-30.

12. Li Y, Zheng Q, Bao C, Li S, Guo W, Zhao J, et αϊ. Το κυκλικό RNA είναι εμπλουτισμένο και σταθερό σε εξωσώματα: ένας πολλά υποσχόμενος βιοδείκτης για τη διάγνωση του καρκίνου. Έρευνα κυττάρων. 2015; 25: 981-4.

13. Li S, Han L. Τα κυκλικά RNA ως υποσχόμενοι βιοδείκτες στον καρκίνο: ανίχνευση, λειτουργία και πέρα. Ιατρική του γονιδιώματος. 2019; 11:15.

14. Ye Q, Ling S, Zheng S, Xu X. Υγρή βιοψία σε ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα: κυκλοφορούν κύτταρα όγκου και κυκλοφορούν DNA όγκου. Μολ Καρκίνος. 2019; 18: 114.

15. Wen G, Zhou T, Gu W. Η δυνατότητα χρήσης κυκλικού RNA αίματος ως βιοδείκτη υγρής βιοψίας για ανθρώπινες ασθένειες. Πρωτεϊνικό Κύτταρο. 2020.

16. Zhang Z, Yang T, Xiao J. Circular RNAs: Promising Biomarkers for Human Diseases. EBioMedicine. 2018; 34: 267-74.

17. Wang S, Zhang K, Tan S, Xin J, Yuan Q, Xu Η, et al. Κυκλικά RNA σε σωματικά υγρά ως βιοδείκτες καρκίνου: το νέο σύνορο των υγρών βιοψιών. Μολ Καρκίνος. 2021; 20: 13.

18. Wang Y, Zhang Y, Wang P, Fu X, Lin W. Κυκλικά RNA στο καρκίνωμα νεφρικών κυττάρων: επιπτώσεις για την ογκογένεση, τη διάγνωση και τη θεραπεία. Μολ Καρκίνος. 2020; 19: 149.

19. Chen D, Chen W, Xu Y, Zhu Μ, Xiao Y, Shen Y, et αϊ. Αυξημένο ανοσοποιητικό σημείο ελέγχου HHLA2 σε καρκίνωμα νεφρικών κυττάρων διαυγών κυττάρων: ένας νέος προγνωστικός βιοδείκτης και πιθανός θεραπευτικός στόχος. J Med Genet. 2019; 56: 43-9.

20. Lv Q, Wang G, Zhang Y, Shen Α, Tang J, Sun Υ, et αϊ. Το CircAGAP1 προάγει την εξέλιξη του όγκου με σπόγγους miR-15-5p σε διαυγές κυτταρικό καρκίνωμα νεφρικών κυττάρων. J Exp Clin Cancer Res. 2021; 40: 76.

21. Wang K, Sun Y, Tao W, Fei X, Chang C. Ο υποδοχέας ανδρογόνου (AR) προάγει τη μετανάστευση και την εισβολή του καθαρού κυτταρικού καρκινώματος των νεφρών (ccRCC) μέσω της αλλαγής του circHIAT1/miR-195-5p/29a{{ 4}}p/29c-3σήματα p/CDC42. Γράμματα για τον καρκίνο. 2017; 394: 1-12.

22. Xue D, Wang Η, Chen Y, Shen D, Lu J, Wang Μ, et αϊ. Το Circ-AKT3 αναστέλλει τη μετάσταση του καρκινώματος των νεφρικών κυττάρων με διαυγή κύτταρα μέσω της αλλαγής των σημάτων miR-296-3p/E-cadherin. Μοριακός καρκίνος. 2019; 18: 151.

23. Chen Q, Liu Τ, Bao Y, Zhao T, Wang J, Wang Η, et αϊ. Το CircRNA cRAPGEF5 αναστέλλει την ανάπτυξη και τη μετάσταση του καρκινώματος των νεφρικών κυττάρων μέσω της οδού miR-27a-3p/TXNIP. Γράμματα για τον καρκίνο. 2019; 469: 68-77.

24. Guo X, Lin W, Wen W, Huyghe J, Bien S, Cai Q, et αϊ. Προσδιορισμός νέων γονιδίων ευαισθησίας για τον κίνδυνο καρκίνου του παχέος εντέρου από μια μελέτη συσχέτισης ευρείας μεταγραφής σε 125.478 άτομα. Γαστρεντερολογία. 2021; 160.

25. Wang J, Nie W, Xie X, Bai M, Ma Y, Jin L, et al. MicroRNA-874-3p/ADAM (A Disintegrin and Metalloprotease) 19 Μεσολαβεί στην ενεργοποίηση των μακροφάγων και στη νεφρική ίνωση μετά από οξεία νεφρική βλάβη. Υπέρταση. 2021; 77: 1613-26.

26. Kun-Peng Z, Chun-Lin Z, Jian-Ping H, Lei Z. Ένα νέο κυκλοφοριακό hsa_circ_0081001 ενεργεί ως πιθανός βιοδείκτης για τη διάγνωση και την πρόγνωση του οστεοσαρκώματος. Int J Biol Sci. 2018; 14: 1513-20.

27. Yuan Y, Bao J, Chen Z, Villanueva AD, Wen W, Wang F, et αϊ. Ανάλυση Multi-omics για τον εντοπισμό γονιδίων ευαισθησίας για καρκίνο του παχέος εντέρου. Hum Mol Genet. 2021.

28. Kramer MC, Liang D, Tatomer DC, Gold Β, March ZM, Cherry S, et αϊ. Συνδυαστικός έλεγχος της έκφρασης κυκλικού RNA της Drosophila με ιντρονικές επαναλήψεις, hnRNPs και πρωτεΐνες SR. Genes Dev. 2015; 29: 2168-82.

29. Guo X, Lin W, Bao J, Cai Q, Pan X, Bai M, et αϊ. Μια ολοκληρωμένη ανάλυση cis-eQTL αποκάλυψε γονίδια-στόχους στους τόπους ευαισθησίας στον καρκίνο του μαστού που προσδιορίστηκαν σε μελέτες συσχέτισης σε όλο το γονιδίωμα. Am J Hum Genet. 2018; 102: 890-903.

30. Zhong S, Wang J, Zhang Q, Xu H, Feng J. CircPrimer: ένα λογισμικό για τον σχολιασμό των circRNAs και τον προσδιορισμό της ειδικότητας των εκκινητών circRNA. BMC Bioinformatics. 2018; 19: 292.

31. Zhu K, Wang Y, Liu L, Li S, Yu W. Long non-coding RNA MBNL1-AS1 ρυθμίζει τον πολλαπλασιασμό, τη μετανάστευση και την εισβολή καρκινικών βλαστοκυττάρων στον καρκίνο του παχέος εντέρου αλληλεπιδρώντας με το MYL9 μέσω σπογγώδους microRNA -412-3σελ. Κλινικές και έρευνα στην ηπατολογία και τη γαστρεντερολογία. 2020; 44: 101-14.

32. Schrödter S, Braun Μ, Syring Ι, Klümper Ν, Deng Μ, Schmidt D, et αϊ. Προσδιορισμός του μεταφορέα ντοπαμίνης SLC6A3 ως βιοδείκτη για ασθενείς με νεφρικό καρκίνωμα. Μοριακός καρκίνος. 2016; 15:10.

33. Ran L, Liang J, Deng X, Wu J. miRNAs in Prediction of Prognosis in Clear Cell Renal Cell Carcinoma. Biomed Res Int. 2017; 2017: 4832931.

34. Li JK, Chen C, Liu JY, Shi JZ, Liu SP, Liu Β, et αϊ. Το μακροχρόνιο μη κωδικοποιητικό RNA MRCCAT1 προάγει τη μετάσταση του καρκινώματος των νεφρικών κυττάρων διαυγών κυττάρων μέσω της αναστολής του NPR3 και της ενεργοποίησης της σηματοδότησης p38-MAPK. Μοριακός καρκίνος. 2017; 16: 111.

35. Sheng JQ, Liu L, Wang MR, Li PY. Κυκλικά RNA στον καρκίνο του πεπτικού συστήματος: πιθανοί βιοδείκτες και θεραπευτικοί στόχοι. Am J Cancer Res. 2018; 8: 1142-56.

36. Vea A, Llorente-Cortes V, de Gonzalo-Calvo D. Circular RNAs in Blood. Adv Exp Med Biol. 2018; 1087: 119-30.

37. Vo JN, Cieslik Μ, Zhang Υ, Shukla S, Xiao L, Zhang Υ, et αϊ. Το τοπίο του κυκλικού RNA στον καρκίνο. Κύτταρο. 2019; 176.

38. Pan B, Qin J, Liu X, He B, Wang X, Pan Y, et αϊ. Προσδιορισμός του Exosomal has-circ-0004771 του ορού ως νέου διαγνωστικού βιοδείκτη του καρκίνου του παχέος εντέρου. Μπροστινό Genet. 2019; 10: 1096.

39. Gai C, Camussi F, Broccoletti R, Gambino Α, Cabras Μ, Molinaro L, et al. Τα miRNA που σχετίζονται με εξωκυτταρικά κυστίδια του σάλιου ως πιθανοί βιοδείκτες στο στοματικό πλακώδες καρκίνωμα. Καρκίνος BMC. 2018; 18: 439.

40. Lenherr SM, Tsai S, Silva Neto B, Sullivan TB, Cimmino CB, Logvinenko T, et al. Το προφίλ έκφρασης MicroRNA Προσδιορίζει Υψηλού Βαθμού, Μη Μυοδιηθητικούς Όγκους της ουροδόχου κύστης με αυξημένο κίνδυνο εξέλιξης σε επεμβατικό φαινότυπο. Γονίδια (Βασιλεία). 2017; 8.

41. Yoshida K. Το σχήμα και η προσκόλληση των κυττάρων των ινοβλαστών in vitro αλλοιώνονται από την υπερέκφραση των ισομορφών 7a και 7b της πρωτοκαντερίνης 7, αλλά όχι της ισομορφής 7c. Cell ΜοΙ Biol Lett. 2003; 8: 735-41.

42. Zhou X, Updegraff BL, Guo Y, Peyton Μ, Girard L, Larsen JE, et αϊ. Η PROTOCADHERIN 7 Δρα μέσω του SET και του PP2A για να ενισχύσει τη σηματοδότηση MAPK από EGFR και KRAS κατά τη διάρκεια της ογκογένεσης του πνεύμονα. Cancer Res. 2017; 77: 187-97.

43. Chen HF, Ma RR, He JY, Zhang Η, Liu XL, Guo XY, et al. Η πρωτοκαντερίνη 7 αναστέλλει τη μετανάστευση και την εισβολή των κυττάρων μέσω της Ε-καντερίνης στον καρκίνο του στομάχου. Tumor Biol. 2017; 39: 1010428317697551.

44. Bujko M, Kober P, Mikula M, Ligaj M, Ostrowski J, Siedlecki JA. Αλλαγές έκφρασης γονιδίων που σχετίζονται με προσκόλληση κυττάρου σε όγκους του παχέος εντέρου. Όνκολ Λετ. 2015; 9: 2463-70.

45. Lin YL, Wang YL, Fu XL, Li WP, Wang YH, Ma JG. Η χαμηλή έκφραση της πρωτοκαντερίνης7 (PCDH7) είναι ένας πιθανός προγνωστικός βιοδείκτης για τον πρωτοπαθή μη διηθητικό καρκίνο της ουροδόχου κύστης. Oncotarget. 2016; 7: 28384-92.

46. ​​Conn SJ, Pillman KA, Toubia J, Conn VM, Salmanidis M, Phillips CA, et al. Το τρεμόπαιγμα της πρωτεΐνης που δεσμεύει το RNA ρυθμίζει το σχηματισμό των circRNAs. Κύτταρο. 2015; 160: 1125-34.

47. Errichelli L, Dini Modigliani S, Laneve Ρ, Colantoni Α, Legnini I, Capauto D, et al. Το FUS επηρεάζει την κυκλική έκφραση RNA σε κινητικούς νευρώνες που προέρχονται από εμβρυϊκά βλαστοκύτταρα ποντικού. Nat Commun. 2017; 8: 14741.

48. Yu CY, Li TC, Wu YY, Yeh CH, Chiang W, Chuang CY, et al. Το κυκλικό RNA circBIRC6 συμμετέχει στο μοριακό κύκλωμα που ελέγχει την ανθρώπινη πολυδυναμία. Nat Commun. 2017; 8: 1149.

49. Lee YH, Kim HS, Kim JS, Yu MK, Cho SD, Jeon JG, et αϊ. Το C-my Ρυθμίζει την Αυτοφαγία για τη ζωτικότητα του πολτού στο οξειδωτικό στρες της γλυκόζης. J Dent Res. 2016; 95: 430-8.

50. Li Q, Wang Y, Wu S, Zhou Z, Ding X, Shi R, et al. Το CircACC1 Ρυθμίζει τη συναρμολόγηση και την ενεργοποίηση του συμπλέγματος AMPK υπό μεταβολικό στρες. Cell Metab. 2019; 30.

51. Ren C, Zhang Z, Wang S, Zhu W, Zheng P, Wang W. Το κυκλικό RNA hsa_circ_0001178 διευκολύνει την εισβολή και τη μετάσταση του καρκίνου του παχέος εντέρου μέσω της ανοδικής ρύθμισης του ZEB1 μέσω σπογγώδους πολλαπλών miRNAs. Biol Chem. 2020; 401: 487-96.

52. Zeng Κ, Chen Χ, Xu Μ, Liu X, Hu X, Xu Τ, et αϊ. Το CircHIPK3 προάγει την ανάπτυξη και τη μετάσταση του καρκίνου του παχέος εντέρου με σπόγγο miR-7. Cell Death Dis. 2018; 9: 417.

53. Park OH, Ha H, Lee Y, Boo SH, Kwon DH, Song HK, et al. Ενδοριβονουκλεολυτική διάσπαση RNA που περιέχουν mA από σύμπλοκο RNase P/MRP. ΜοΙ Cell. 2019; 74.

Ying Wang1,2, Yunjing Zhang1,2, Xinwan Su3, Qiongzi Qiu4, Yuan Yuan2, Chunhua Weng2, Sailan Zou5, Yan Tian5, Weidong Han6, Pengyuan Liu4, Xingyi Guo7, Jianhua Mao8, Xianghui Fu5, Πινγκ Γουάνγκ

1. The Fourth Affiliated Hospital, and International Institutes of Medicine, Zhejiang University School of Medicine, Jinhua 322000, Zhejiang, Κίνα.

2. Κέντρο Νεφροπαθών, το Πρώτο Συνεργαζόμενο Νοσοκομείο και Ινστιτούτο Μεταφραστικής Ιατρικής, Ιατρική Σχολή του Πανεπιστημίου Zhejiang, Hangzhou 310003, Zhejiang, Κίνα.

3. Τμήμα Ουρολογίας, το Πρώτο Συνεργαζόμενο Νοσοκομείο, Ιατρική Σχολή του Πανεπιστημίου Zhejiang, Hangzhou 310003, Zhejiang, Κίνα.

4. Τμήμα Αναπνευστικής Ιατρικής, Sir Run Run Shaw Hospital και Institute of Translational Medicine, Zhejiang University School of Medicine, Hangzhou 310016, Zhejiang, Κίνα.

5. Division of Endocrinology and Metabolism, State Key Laboratory of Biotherapy and Cancer Center, West China Hospital, Sichuan University and Collaborative Innovation Center of Biotherapy, Chengdu 610041, Sichuan, China.

6. Τμήμα Ιατρικής Ογκολογίας, Νοσοκομείο Sir Run Run Shaw, Ιατρική Σχολή του Πανεπιστημίου Zhejiang, Hangzhou 310016, Zhejiang, Κίνα.

7. Division of Epidemiology, Department of Medicine, Vanderbilt Epidemiology Center, and Vanderbilt-Ingram Cancer Center, Vanderbilt University School of Medicine, Nashville 37203, TN, USA.

8. Τμήμα Νεφρολογίας, Εθνικό Κέντρο Κλινικής Έρευνας για την Παιδική Υγεία, Νοσοκομείο Παίδων, Ιατρική Σχολή του Πανεπιστημίου Zhejiang, Hangzhou 310003, Zhejiang, Κίνα.