Κινεζική ιατρική Cistanche Χημική σύνθεση και ανάλυση των συστατικών στο σώμα Ⅲ

Κεφάλαιο 2 Ποιοτική μελέτη για τη χημική σύσταση του Cistanche deserticola

Το Cistanche είναι το ξηρό φολιδωτό σαρκώδες στέλεχος τουCistanche deserticola YC.Maκαι Cistanche tubulosa (Schenk) R.Wight. Είναι ένα από τα διάσημα παραδοσιακά κινέζικα φάρμακα που θρέφουν τα νεφρά-yang. Έχει τις λειτουργίες τουθρεπτικό νεφρό-yang, αναπλήρωση της ουσίας και του αίματος, και ενυδάτωση Έχει καθαρτική δράση και χρησιμοποιείται συχνά για τη θεραπεία της ανικανότητας, της στειρότητας, του πόνου της μέσης και των γονάτων, της αδυναμίας των μυών και των οστών, της ξηρότητας του εντέρου και της δυσκοιλιότητας κ.λπ. Έχει φαρμακολογικές επιδράσεις όπως αντι- άνοια, κατά της νόσου του Πάρκινσον, προστασία από την εγκεφαλική ισχαιμία και βελτίωση των ικανοτήτων μάθησης και μνήμης. Προκειμένου να διευκρινιστεί η υλική βάση για τηναποτελεσματικότητα του Cistanche deserticola, αυτό το κεφάλαιο χρησιμοποιεί HPLC και LC-IT-TOF-MS για τον αναλυτικό χαρακτηρισμό τουχημικά συστατικά του Cistanche. Με βάση μια συστηματική περίληψη των κανόνων πυρόλυσης διαφόρων τύπων χημικών συστατικών, αναλύονται συστηματικά οι ιδιότητες του Cistanche deserticola. Χημική σύνθεση, για την παροχή πλούσιων δεδομένων από αξιόπιστες πηγές γιασε βάθος διευκρίνισητων φαρμακευτικών ιδιοτήτων τουCistanche deserticolain vivo.

ΠΟΣΟ ΧΡΕΙΑΖΕΤΑΙ ΓΙΑ ΝΑ ΔΟΥΛΕΨΕΙ ΤΟ CISTANCHE;

Ενότητα 1 Πειραματικά Υλικά

1.Όργανο

Φασματόμετρο υγρής μάζας Shimadzu HPLC-IT-TOF-MS (εξοπλισμένο με 2 αντλίες LC-20ADXR, αυτόματο δειγματολήπτη SIL-20AC, φούρνο στήλης CTO{{6}AC, ανιχνευτή UV SPD-M20A, DGU-20Απολύμανση A3R Μηχάνημα αερίου, CBM-20Ένας ελεγκτής, πηγή ιόντων ESI, Shimadzu Company, Ιαπωνία), σύστημα καθαρισμού υπερκαθαρού νερού Milli-Q (Milipore Company, ΗΠΑ): Ηλεκτρονικός αναλυτικός ζυγός Mettler ME204 ( Mettler Toledo Company, Ελβετία).

2. Αντιδραστήρια

Μεθανόλη βαθμού χρωματογραφίας και φασματομετρίας μάζας, ακετονιτρίλιο και μυρμηκικό οξύ ποιότητας φασματομετρίας μάζας αγοράστηκαν από την Thermo-Fisher Company (Pittsburgh, PA, USA). Το νερό ήταν υπερκαθαρό νερό Milli-Q που παρασκευάστηκε στο εργαστήριο (Millipore, Bedford, MA, ΗΠΑ). Τα υπόλοιπα αντιδραστήρια είναι όλα αναλυτικής ποιότητας.

Salidroside, 6-deoxycatalpol, 8-epi-loganic acid, echinacoside, acteoside, isoside Verbascoside (isoacteoside,) και pinoresinol- -D-glucopyranoside (pinoresinol- -D-glucopyranoside) Και τα δύο παρασχέθηκαν από την ερευνητική ομάδα του καθηγητή Tu Pengfei στο Key Laboratory of Natural and Biomimetic Drugs στο Πανεπιστήμιο του Πεκίνου. Το Sarcoside F (cistanosideF) αγοράστηκε από την Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd., cistanoside A (cistanoside A), 2'-acetylakteoside (2'-acetylacteoside), 2'-acetylpoliumoside (2'-acetylpoliumpoliumoside), cistanoside (Cistanoside A) ), κιστανοσίδη Ε (cistanosideE), ισοκυστανοσίδη E (isocistanosideE), cistanoside C (cistanosideC), isocistanoside C (isocistanosideC) και cistanoside D (cistanosideD) αγοράστηκαν όλα από την Shanghai Shidande Biotechnology Co., Ltd., tubuloside A) andtubul tubuloside B (tubulosideB) αγοράστηκαν από την Chengdu Weikeqi Biotechnology Co., Ltd.

Ενότητα 2 Πειραματικό περιεχόμενο

1. Προετοιμασία δείγματος

1.1 Παρασκευή ουσίας αναφοράς

Ζυγίστε επακριβώς τις κατάλληλες ποσότητες διαφόρων ουσιών αναφοράς στα παραπάνω "Ενότητα 1 Πειραματικά Υλικά" και παρασκευάστε μητρικά διαλύματα 10 mM με DMSO. Μεταφέρετε με σιφώνιο 2 mL από κάθε μητρικό διάλυμα και αραιώστε το με 25% ακετονιτρίλιο για να φτιάξετε ένα μικτό διάλυμα ελέγχου 2 μM. 1.2 Παρασκευή διαλύματος δοκιμής

Το υδατικό εκχύλισμα Cistanche deserticola παρασκευάστηκε από το εργαστήριό μας και το δείγμα αποθηκεύεται στο Ερευνητικό Κέντρο Εκσυγχρονισμού της Παραδοσιακής Κινεζικής Ιατρικής, Σχολή Παραδοσιακής Κινέζικης Ιατρικής, Πανεπιστήμιο Κινέζικης Ιατρικής του Πεκίνου. Πάρτε 20 mg σκόνης Cistanche deserticola, προσθέστε 40 mL νερού για διάλυση, αναδεύστε και ανακατέψτε, φυγοκεντρήστε στις 10000 rpm για 10 λεπτά και πάρτε το υπερκείμενο. Δηλαδή, λαμβάνεται το διάλυμα δοκιμής.

3. Συνθήκες φασματομετρίας μάζας

Πηγή ιόντων ηλεκτροψεκασμού (ESI), η λειτουργία σάρωσης είναι η ταυτόχρονη σάρωση θετικών και αρνητικών ιόντων και η αυτόματη ενεργοποίηση φασματομετρίας μάζας πολλαπλών επιπέδων. Το εύρος σάρωσης μάζας του MS'~MS' για θετικά ιόντα είναι m/z50~800, και για τα αρνητικά ιόντα είναι m/z100~1000. Οι τάσεις του θαλάμου ψεκασμού είναι 4,5 kV και -3,5 kV αντίστοιχα: ο ρυθμός ροής αερίου ψεκασμού (Nz) είναι 1,5 Lmin. η πίεση του αερίου ξήρανσης είναι 110 MPa. η τάση ανίχνευσης είναι 1,55 kV. οι θερμοκρασίες του κυρτού σωλήνα αποδιαλύτη (CDL) και της μονάδας θέρμανσης είναι και οι δύο 200 μοίρες. Η πίεση του θαλάμου σύγκρουσης είναι 1,5e-Pa. η πίεση παγίδας ιόντων είναι 2,8e-Pa. ο αριθμός των επαναλήψεων του θετικού και του αρνητικού πρώτου σταδίου είναι 1 και ο χρόνος συσσώρευσης ιόντων είναι 30 ms. ο αριθμός των επαναλήψεων του θετικού και του αρνητικού δεύτερου σταδίου είναι 2 και ο χρόνος συσσώρευσης ιόντων είναι 20 ms. ; Η ενέργεια διάστασης που προκαλείται από σύγκρουση (CID) είναι 50%.

Ενότητα 3 Αποτελέσματα και Συζήτηση

Επιλογή στήλης

Προκειμένου να επιτύχουμε καλύτερο χρωματογραφικό διαχωρισμό, εξετάσαμε εκτενώς χρωματογραφικές στήλες από διαφορετικούς κατασκευαστές και προδιαγραφές, όπως χρωματογραφική στήλη ACEUltraCore 2.5 SuperC8 (3.0x150mm, 2,5 um, Advance Chromatography Technologies, Ltd., Aberdeen Shiseido Capcell Core Ci8 (2,1 mm x 150mm, 2,7μm), στήλη Waters Acquity UPLC HSS T3 (2,1 x 100 mm, 1,8 μm, Milford, MA, ΗΠΑ) και στήλη Capcell Core ADME (2,1x150 mm, 2,7μmporation, Shise Ιαπωνία). Μέσω συστηματικής σύγκρισης, διαπιστώθηκε ότι όταν χρησιμοποιείται η χρωματογραφική στήλη Capcell Core ADME (2,1x150mm, 2,7μm, Shiseido Co., Ltd., Japan), κάθε χρωματογραφικό σήμα μπορεί να διαχωριστεί καλύτερα (Εικόνα 3-1).

2. Επιλογή συνθηκών υγρής φάσης

Δεδομένου ότι τα κύρια χημικά συστατικά τουCistanche deserticolaείναι γλυκοσίδες φαινυλαιθανόλης, λιγνάνες, ιριδοειδή και άλλες ενώσεις, γενικά ανταποκρίνεται καλύτερα σε συνθήκες αρνητικών ιόντων. Προκειμένου να εντοπιστούν χημικά συστατικά χαμηλού επιπέδου στο υδατικό εκχύλισμα Cistanche deserticola, εικάζεται ότι μπορεί να χρειαστεί να προστεθούν οξέα στην κινητή φάση για να ενισχυθεί η ισχύς. Επομένως, αυτό το πείραμα χρησιμοποίησε νερό-μεθανόλη, νερό-ακετονιτρίλιο, 0.1% μυρμηκικό οξύ νερό-μεθανόλη και 0.1% μυρμηκικό οξύ νερό-ακετονιτρίλιο ως συστήματα κινητής φάσης για διερεύνηση. Βρέθηκε ότι το 0.1% μυρμηκικό οξύ νερό-ακετονιτρίλιο είχε το καλύτερο αποτέλεσμα διαχωρισμού, με καλό σχήμα κορυφής και μεγάλη χωρητικότητα κορυφής, επομένως επιλέχθηκαν 0.1% νερό μυρμηκικού οξέος και ακετονιτρίλιο κινητή φάση. 3. Ποιοτική ανάλυση χημικών συστατικών. Χρησιμοποιήστε 19 υπάρχουσες ουσίες αναφοράς για να εξερευνήσετε τους κανόνες κατακερματισμού της φασματομετρίας μάζας διαφόρων τύπων ενώσεων στο Cistanche deserticola. Οι μικτές ουσίες αναφοράς είναι χρωματογράμματα PDA στα 340 nm στη στήλη ADME και διαγράμματα BPC σε τρόπους θετικού και αρνητικού ιόντος. Δείτε την Εικόνα 3-1. Εξετάσαμε τη σχετική βιβλιογραφία μέσω των PubMed, RSC, CNKl, Springer, ScienceDirect, VIP και Wanfang κ.λπ., και κατασκευάσαμε μια αυτοδημιούργητη βάση δεδομένων χημικών συστατικών του Cistanche deserticola. Με βάση τη σύγκριση των κανόνων κατακερματισμού φασματομετρίας μάζας και των χρόνων κατακράτησης γνωστών ενώσεων, εντοπίσαμε προκαταρκτικά 45 ενώσεις στο Cistanche deserticola. ενώσεις, συμπεριλαμβανομένων 31 γλυκοζίτες φαινυλαιθανόλης, 9 ιριδοειδή, 3 βενζυλογλυκοσίδες και 2 λιγνάνες, όπως φαίνεται στον Πίνακα 3-1.

Συγκρίνοντας το χρόνο εμπιστευτικότητας, το φάσμα MS και το φάσμα MS της ουσίας αναφοράς, ενώσεις 11, 12, 13, 17, 21, 22, 24, 25, 26, 28, 29, 32, 33, 36, 37, 38 Ταυτοποιήθηκαν διαδοχικά με ακρίβεια ως genipin, cistanchein F, cistancheoside E, echinaceaside, chrysantoside, cistanchein A, tubersin A, larchresinol 4-0- -D glucoside, mullein Glycosides, isocannabinoid glycoside, echinorebase glycoside, pinoreside πλευρά C, ισοστανκοζίτη C, τουμπεροσίνη Β και γλυκοσίδη D cistanche.

Αυτό το πείραμα χρησιμοποιεί τεχνολογία HPLC-IT-TOF-MS για γρήγορη και ακριβή ανάλυση των σύνθετων χημικών συστατικών στο υδατικό εκχύλισμα του Cistanche deserticola, το οποίο παρέχει τη βάση για ολοκληρωμένη ανάλυση ποιότητας του Cistanche deserticola και έρευνα για φαρμακολογικές ουσίες in vivo.

Σχήμα 3-1 Χρωματόγραμμα μικτής ουσίας αναφοράς Επάνω: Διάγραμμα BPC σε λειτουργία θετικού ιόντος: Κάτω: Διάγραμμα BPC σε λειτουργία αρνητικού ιόντος

Σχήμα 3-1 Χρωματόγραμμα μικτής ουσίας αναφοράς Επάνω: Διάγραμμα BPC σε λειτουργία θετικού ιόντος: Κάτω: Διάγραμμα BPC σε λειτουργία αρνητικού ιόντος