Πρόοδος έρευνας και εφαρμογή στην τεχνολογία δακτυλικών αποτυπωμάτων στην κινεζική Materia Medica Ⅱ

1.2 Ηλεκτροχημικό δακτυλικό αποτύπωμα

Η ηλεκτροχημεία είναι μια απλή αναλυτική μέθοδος που βασίζεται στις ηλεκτροχημικές ιδιότητες και αρχές της προς δοκιμή ουσίας, η οποία είναι χαμηλού κόστους, πολύ ευαίσθητη και απαιτεί λίγα αναλώσιμα [19]. Ωστόσο, αυτή η μέθοδος έχει ορισμένους περιορισμούς και επί του παρόντος εφαρμόζεται κυρίως στην ανάλυση κινεζικών φαρμάκων που περιέχουν χημικά συστατικά όπως τερπένια (όπως Angelica sinensis), φλαβονοειδή (όπως Scutellaria baicalensis), αλκαλοειδή (όπως Aconite) και ανθρακινόνες ( όπως το ραβέντι) που μπορούν να υποστούν ηλεκτροχημικές αντιδράσεις.

Οι Wu Di et al. [20] χρησιμοποίησε ένα ηλεκτροχημικό δακτυλικό αποτύπωμα για να καθορίσει τη βέλτιστη διαδικασία εξαγωγής του Scutellaria baicalensis Georgi, παρέχοντας μια καλή μέθοδο για ορθολογική χρήση κινεζικών φαρμακευτικών υλικών. Shi Huihui et al. [21] χρησιμοποίησε την τεχνολογία χημικής ταλάντωσης αντίδρασης Belousov-Chabotinsky (BZ) για να διερευνήσει τις επιδράσεις της θερμοκρασίας, της ταχύτητας περιστροφής και του αριθμού των φαρμακευτικών υλικών που προστέθηκαν στα πειραματικά αποτελέσματα και καθιέρωσε λογικές πειραματικές συνθήκες για τη λήψη του ηλεκτροχημικού αποτυπώματος του Magnolia biondii Pamp ., παρέχοντας μια νέα μέθοδο για τον ποιοτικό έλεγχο του Magnolia biondii. Οι Zou Guihua et al. [22] καθιέρωσε το μη γραμμικό ηλεκτροχημικό αποτύπωμα του Codonopsis pilosula (Franch.) Nannf. Και Gentiana macrophylla Pall. Τα ηλεκτροχημικά αποτυπώματα των δύο φαρμακευτικών υλικών είναι οπτικά διαφορετικά, τα οποία μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως μια απλή και αποτελεσματική μέθοδος για τη διάκριση του Codonopsis pilosula από το Gentiana macrophylla. Οι Dai Hongxia et al. [23] πραγματοποίησε ηλεκτροχημική ανάλυση σε 20 παρτίδες Angelica sinensis (Oliv.) Diels με περίοδο ανάπτυξης 1, 2 και 3 ετών. Σε συνδυασμό με την ανάλυση του κύριου συστατικού, βρέθηκε ότι τα ηλεκτροχημικά αποτυπώματα και οι παράμετροι ταλάντωσης (συμπεριλαμβανομένου του χρόνου επαγωγής ταλάντωσης, του μέγιστου δυναμικού, της διάρκειας ζωής ταλάντωσης, του μέγιστου πλάτους, του δυναμικού διακοπής και του αριθμού κύκλων) του Angelica sinensis σε διαφορετικές περιόδους ανάπτυξης ήταν σημαντικά διαφορετικές. που μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως βάση για τον εντοπισμό της Angelica sinensis σε διάφορες περιόδους.

ΚΙΝΕΖΙΚΟ ΥΛΙΚΟ ΙΑΤΡΙΚΟ ΒΟΤΑΝΟ CISTANCHE HPLC

1.3 Χρωματογραφικό αποτύπωμα

1.3.1 Χρωματογραφία λεπτής στιβάδας

Η χρωματογραφία λεπτής στιβάδας είναι μια χρωματογραφική μέθοδος που επιτυγχάνει το διαχωρισμό βασιζόμενη στις διαφορετικές ικανότητες προσρόφησης του ίδιου προσροφητικού για διαφορετικά χημικά συστατικά. Είναι η πιο συχνά χρησιμοποιούμενη μέθοδος για τον εντοπισμό παραδοσιακών κινεζικών φαρμάκων, με τα πλεονεκτήματα της εύκολης λειτουργίας, του απλού εξοπλισμού, της καλής ευαισθησίας, της υψηλής συγκρισιμότητας, της ισχυρής ειδικότητας και της εύκολης ανάπτυξης χρώματος. Η αυθεντικότητα του φαρμακευτικού υλικού μπορεί να προσδιοριστεί από την παρουσία ή την απουσία κηλίδων στην πλάκα λεπτής στρώσης. Το βάθος και το μέγεθος του χρώματος των κηλίδων μπορεί να αντικατοπτρίζει την ποιότητα του φαρμακευτικού υλικού σε κάποιο βαθμό[24]. Επί του παρόντος, χρωματογραφία λεπτής στιβάδας υψηλής απόδοσηςΤο (HPTLC) χρησιμοποιείται συχνά για την αντικατάσταση της υγρής χρωματογραφίας υψηλής απόδοσης (HPLC) για την ποιοτική και ποσοτική αναγνώριση προϊόντων παραδοσιακής κινεζικής ιατρικής λόγω της απλότητας, της ακρίβειας, του χαμηλού κόστους, της υψηλής απόδοσης και της ταχύτητάς της. Τα δακτυλικά αποτυπώματα HPTLC έχουν καλύτερη ανάλυση και μπορούν να εκτιμήσουν εύλογα και με ακρίβεια τα δραστικά συστατικά του φαρμάκου σε συντομότερο χρόνο[25]. Ωστόσο, λόγω του μεγάλου αριθμού παραγόντων που επηρεάζουν (υγρασία, θερμοκρασία κ.λπ.), η αναπαραγωγιμότητα των αποτελεσμάτων είναι φτωχή σε σύγκριση με την HPLC. Οι Loescher et al. [26] χρησιμοποίησε HPLC και HPTLC για να αναλύσει το εκχύλισμα Calendula officinalis και διαπίστωσε ότι το HPLC ήταν πιο κατάλληλο για ποσοτική ανάλυση από το HPTLC.

Σε απάντηση σε αυτό το αποτέλεσμα, οι Li Xiangjun et al. [27] έκανε μια σειρά από αντίστοιχες λύσεις, συμπεριλαμβανομένης της διεξαγωγής του πειράματος ανάπτυξης σε ένα ψυγείο ή μια σφραγισμένη συσκευή ελεγχόμενης θερμοκρασίας για τη μείωση της επίδρασης της θερμοκρασίας και την προσθήκη διαφορετικών αναλογιών θειικού οξέος στο ένα άκρο του κυλίνδρου ανάπτυξης για τον έλεγχο της υγρασίας.

ΚΙΝΕΖΙΚΟ ΥΛΙΚΟ ΙΑΤΡΙΚΟ ΒΟΤΑΝΟ CISTANCHE HPLC LABLE

Οι Patil et al. [28] καθιέρωσε το δακτυλικό αποτύπωμα HPTLC του εκχυλίσματος πετρελαϊκού αιθέρα του Catsia tora Linn. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα φύλλα, οι σπόροι και τα άνθη περιείχαν 10, 7 και 11 τύπους συστατικών, αντίστοιχα. Αυτή η μέθοδος μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τον προσδιορισμό της αυθεντικότητας του Catsia tora Linn. Οι Xiao Honghua et al. [29] χρησιμοποίησε χρωματογραφία λεπτής στιβάδας σε συνδυασμό με φασματομετρία μάζας για να δημιουργήσει ένα χρωματογραφικό αποτύπωμα λεπτής στιβάδας χρωμόνων, οργανικών οξέων και τριτερπενοειδών σαπωνινών στο Cimicifuga foetida L. και πραγματοποίησε ανάλυση ομοιότητας, ανάλυση συστάδων και ανάλυση κύριων συστατικών σε 16 παρτίδες Δείγματα Cimicifuga από πέντε πηγές, παρέχοντας βάση για τον ποιοτικό έλεγχο του Cimicifuga.

Οι Guzelmeric et αϊ. [30] χρησιμοποίησε οξικό αιθυλεστέρα-μυρμηκικό οξύ-οξικό οξύ-νερό (30:1,5:1,5:3) ως διαλύτη ανάπτυξης για να αναπτύξει το δακτυλικό αποτύπωμα HPTLC του γλυκοζίτη απιγενίνης{{10}, ενός ενεργού δείκτη του Matricaria chamomilla L., που μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως κύριος οδηγός για την αξιολόγηση της ποιότητας του χαμομηλιού. Οι Bazylko et al. [31] καθιέρωσε το δακτυλικό αποτύπωμα HPTLC πέντε φλαβονοειδών ενώσεων, συγκεκριμένα ταγετοειδών, κερκετίνης, φλαβονοειδή, καφεϊκού οξέος και χλωρογενικού οξέος, από το Galinsoga parviflora Cav. Αυτή η μέθοδος μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την αναγνώριση του Galinsoga parviflora. Ethanolic et al. [32] καθιέρωσε το δακτυλικό αποτύπωμα του αιθανολικού εκχυλίσματος του Acacia catechu (L. f.) Willd. Χρησιμοποιώντας HPTLC πραγματοποιήθηκε μια απλή και γρήγορη ποσοτική αξιολόγηση της ρουτίνης και της κερκετίνης στο εκχύλισμα. Agatonovic-Kustrin et al. [33] χρησιμοποίησε HPTLC για να αναλύσει ποσοτικά την απιγενίνη, τη Matricaria και τη βισαβολόλη στα εκχυλίσματα φύλλων και λουλουδιών Pyrethrum parthenium (L.) Smith, Matricaria chamomilla L. και Calendula officinalis L., συνδύασε τη μέθοδο DPPH για να συγκρίνει το αντιοξειδωτικό χωρητικότητα αυτών των εξαρτημάτων. Αυτή η μέθοδος είναι απλή, γρήγορη, αξιόπιστη και φθηνή και μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για τον έλεγχο της αντιοξειδωτικής δράσης των φυτικών εκχυλισμάτων.

1.3.2 Μέθοδος HPLC Η HPLC είναι μια καθολική αναλυτική μέθοδος για την ανίχνευση διαφόρων χημικών συστατικών στην παραδοσιακή κινεζική ιατρική.

Χρησιμοποιείται ευρέως στην ανίχνευση χημικών συστατικών στην παραδοσιακή κινεζική ιατρική λόγω των πλεονεκτημάτων της υψηλής πίεσης, υψηλής ευαισθησίας, υψηλής απόδοσης και αυτοματισμού [34]. Ο ανιχνευτής UV, ο ανιχνευτής συστοιχίας διόδων (DAD), ο ηλεκτροχημικός ανιχνευτής, ο ανιχνευτής εξατμιστικού φωτός κ.λπ. που μπορούν να συνδεθούν σε αυτόν δείχνουν την αναντικατάστατη υπεροχή τους.

Qiao et al. [35] χρησιμοποίησε ολοκληρωμένη δισδιάστατη υγρή χρωματογραφία αντίστροφης φάσης × ανάστροφης φάσης (RP × RP 2DLC) για να διαχωρίσει τις φαινολικές ενώσεις που ελήφθησαν με εκχύλιση οξικού αιθυλεστέρα γλυκόριζας Glycyrrhiza uralensis Fisch.

311 ενώσεις ανιχνεύθηκαν μέσα σε 40 λεπτά και οι δομές 21 άγνωστων ενώσεων χαρακτηρίστηκαν προκαταρκτικά με φασματομετρία μάζας και 8 από αυτές βρέθηκαν στη γλυκόριζα για πρώτη φορά. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το σύστημα RP×RP2DLC/MS έχει καλή επίδραση στον διαχωρισμό σύνθετων εκχυλισμάτων παραδοσιακής κινεζικής ιατρικής και στην ποιοτική ανάλυση φυσικών προϊόντων. Οι Peng Liang et al. [36] ανέλυσε τα φλαβονοειδή συστατικά 10 παρτίδων Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Ο Makino καθόρισε το HPLC δακτυλικό αποτύπωμα του Gynostemma pentaphyllum και βαθμολόγησε 11 κοινές χαρακτηριστικές κορυφές. Τα αποτελέσματα της ανάλυσης ομοιότητας έδειξαν ότι η υψηλότερη ομοιότητα των 10 παρτίδων δακτυλικών αποτυπωμάτων Gynostemma pentaphyllum σε σχέση με το φάσμα αναφοράς ήταν 0,989 και η χαμηλότερη ήταν 0,128, υποδεικνύοντας ότι τα φλαβονοειδή συστατικά του Gynostemma pentaphyllum από διαφορετική προέλευση ήταν παρόμοια σε τύπου αλλά είχε σημαντικές διαφορές στο περιεχόμενο. Sun et al. [37] χρησιμοποίησε τη μέθοδο HPLC-DAD για να αναλύσει την ομοιότητα των χημικών συστατικών του Bupleurum chinense DC. και Β. scorzonerifolium Willd. Για πρώτη φορά, και διαπίστωσε ότι τα δύο είχαν 12 κοινές κορυφές φλαβονοειδών και 4 κορυφές σαπωνίνης, αντίστοιχα, και ταυτόχρονα, το καθένα είχε 6 μοναδικές κορυφές φλαβονοειδών και 5 κορυφές σαπωνίνης, αντίστοιχα. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι αυτή η μέθοδος μπορεί εύλογα και αποτελεσματικά να αντικατοπτρίζει τη διαφορά στα χημικά συστατικά μεταξύ Bupleurum και Bupleurum chinense. Η συσχέτιση μεταξύ των δύο είναι κακή. Επομένως, το Bupleurum chinense θα πρέπει να χρησιμοποιείται με προσοχή στην κλινική πράξη. Ο He et al. [38] ανέλυσε ποσοτικά 10 είδη βιοενεργού γαλλικού οξέος, χλωρογενικού οξέος, καφεΐνης και κατεχινών που περιέχονται σε 10 παρτίδες πράσινου τσαγιού Ziyang. Το δακτυλικό αποτύπωμα HPLC που αναπτύχθηκε ήταν απλό και αξιόπιστο. Li et al. [39] καθιέρωσε το HPLC δακτυλικό αποτύπωμα της φλούδας του ροδιού. Επέλεξαν 15 χαρακτηριστικές κορυφές και αξιολόγησαν την ομοιότητα 10 παρτίδων φλούδας ροδιού σε 0,968. Επίσης, διαχώρισαν και ανέλυσαν ποσοτικά την πουνικαλαγίνη, το γαλλικό οξύ, την κατεχίνη, το χλωρογενικό οξύ, το καφεϊκό οξύ, την επικατεχίνη, τη ρουτίνη και το ελλαγικό οξύ που περιέχονται σε αυτό, παρέχοντας μια αξιόπιστη και αποτελεσματική μέθοδο για τον προσδιορισμό της γνησιότητας και του ποιοτικού ελέγχου της φλούδας του ροδιού. Οι Sumathy et al. [1] χρησιμοποίησε HPLC σε συνδυασμό με HPTLC και αέρια χρωματογραφία-φασματομετρία μάζας (GC-MS) για τον προσδιορισμό της χημικής σύνθεσης του μεθανολικού εκχυλίσματος του Ixora chinensis Lam. Η ανάλυση HPLC έδειξε την παρουσία βιοχίνης Α, μυρικετίνης, κερκετίνης, ρουτίνης, δαϊδζεΐνης και φορμονονετίνης. ουρσολικό οξύ βρέθηκε στο δακτυλικό αποτύπωμα HPTLC. 24 φυτοχημικά συστατικά βρέθηκαν με GC-MS. Αυτή η συνδυασμένη ποιοτική και ποσοτική μέθοδος μπορεί εύκολα να αξιολογήσει την ποιότητα και τη σταθερότητα του Ixora chinensis Lam. Οι Ge et al. [40] καθιέρωσε το δακτυλικό αποτύπωμα UHPLC-DAD του Radix Angelicae Pubescentis, ανέλυσε ποσοτικά τις κουμαρίνες και τα φαινολικά οξέα που περιέχονται στο Radix Angelicae Pubescentis και προσδιόρισε ποιοτικά τα ενεργά συστατικά του χρησιμοποιώντας φασματομετρία μάζας τετραπολικού χρόνου πτήσης (Q-TOF-MS). Βρήκαν 9 φαινολικά οξέα, 30 κουμαρίνες και 41 ενώσεις μύρου και αδενοσίνης. Συνδύασαν τη μέθοδο ανάλυσης διάκρισης για να διακρίνουν αποτελεσματικά και γρήγορα 32 παρτίδες Radix Angelicae Pubescentis από διαφορετικές επαρχίες. Αυτή η μέθοδος παρέχει μια νέα ιδέα για τον ποιοτικό έλεγχο του Radix Angelicae Pubescentis.

ΛΙΣΤΑ προδιαγραφών CISTANCHE

Οι Yang et al. [41] χρησιμοποίησε ανιχνευτή υγρής χρωματογραφίας υπερυψηλής απόδοσης (UPLC)-DAD και τεχνολογία ESI-MS για να αποκτήσει το δακτυλικό αποτύπωμα HPLC και το δακτυλικό αποτύπωμα φασματομετρίας μάζας των δισκίων Xiaoyanlidan, αντίστοιχα. Ανέλυσαν 113 δείγματα δισκίων Xiaoyanlidan και έλαβαν 39 κορυφές, εκ των οποίων οι 26 ήταν από την Quassia, 9 από το Andrographis paniculata και 4 από το Rhizoma Cynoglossi. Χρησιμοποιώντας τις χημειομετρικές μεθόδους ομοιότητας και PCA, προσδιόρισαν ότι τα πέντε σημαντικά συστατικά ήταν η 4-μεθοξυ-5-υδροξυφερροκεφαλοστομόνη, το ανδρογραφολίδιο, το δεϋδροανδρογραφολίδιο, το νεοανδρογραφολίδιο και το ροσμαρινικό οξύ. Καθιέρωσαν ένα συστηματικό και ολοκληρωμένο δακτυλικό αποτύπωμα για τη βελτίωση και την αξιολόγηση της ποιότητας των δισκίων Xiaoyanlidan. Fan et al. [42] καθιέρωσε HPLC και UPLC δακτυλικά αποτυπώματα φλαβονοειδών γλυκοσιδών στο Lophatherum gracile Brongn. και απομόνωσε ένα νέο φλαβονοειδές C-γλυκοσίδιο λουτεολίνη 6-C- -D-γλυκουρονικό οξύ-(1→2){{19 }}D-πυρανογλυκοσίδη για πρώτη φορά. Ανακάλυψαν επίσης τα οπτικά ισομερή δύο ενώσεων, φλαβονοειδών φλαβονοειδών και φλαβονοειδών υδροξυφλαβονοειδών, για πρώτη φορά. Χρησιμοποίησαν μονοδιάστατο και δισδιάστατο πυρηνικό μαγνητικό συντονισμό και φασματομετρία μάζας για να διακρίνουν και να καθορίσουν τις δομές τους, παρέχοντας μια νέα μέθοδο για τον ποιοτικό έλεγχο του Lophatherum gracile Brongn. Οι Tshibangu et al. [43] χρησιμοποίησε HPLC-DAD σε συνδυασμό με χρωματογραφία λεπτής στιβάδας, πυρηνικό μαγνητικό συντονισμό και φασματομετρία μάζας για να διαχωρίσει αποτελεσματικά τις κύριες διφλαβονοειδή ενώσεις GB1, GB2, GB{-1a και φλαβονοειδή από το Garcinia kola Linn., και επιβεβαίωσε τη δομή τους , η οποία μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως μέθοδος ανάλυσης ρουτίνας για φαρμακευτικά σκευάσματα. Οι Zhao et al. [44] καθόρισε το δακτυλικό αποτύπωμα HPLC-UV-MS του Andrographis paniculata (Burm. f.) Nees, προσδιόρισε ποσοτικά το andrographolide και dehydroandrographolide που περιέχονται στο Andrographis paniculata και αξιολόγησε τις διαφορές 10 παρτίδων Andrographis paniculata συνδυάζοντας ανάλυση και PCA. Αυτή η μέθοδος παρέχει τη βάση για τον ποιοτικό έλεγχο του Andrographis paniculata.

Ο Ahmed et al. [45] χρησιμοποίησε HPLC για να αποκτήσει το δακτυλικό αποτύπωμα της ρητίνης Commiphora wightii (Arn.) Bhandari και ανέλυσε ποσοτικά την trans- και cis-στερολόνη που περιέχεται σε αυτήν. Ταυτόχρονα, αυτή η μέθοδος μπορεί να διακρίνει αποτελεσματικά 22 παρτίδες ρητίνης Commiphora wightii και 9 παρτίδες νοθευμένης ρητίνης, η οποία μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως μέθοδος για τον προσδιορισμό της γνησιότητας της ρητίνης Commiphora wightii.

2 Βιολογικά αποτυπώματα

Τα βιολογικά δακτυλικά αποτυπώματα είναι η χρήση μεθόδων ανάλυσης αλληλουχίας γονιδίων σε μοριακό επίπεδο για τη διάκριση και ταξινόμηση της γεωγραφικής κατανομής και των αλλαγών στα κινεζικά φαρμακευτικά υλικά, συμπεριλαμβανομένων των γονιδιωματικών δακτυλικών αποτυπωμάτων, των πρωτεομικών δακτυλικών αποτυπωμάτων[60] και των δακτυλικών αποτυπωμάτων DNA[61]. Προς το παρόν, υπάρχουν λιγότερες μελέτες για τα βιολογικά δακτυλικά αποτυπώματα κινεζικών φαρμάκων από τα χημικά αποτυπώματα. Οι πιο συχνά χρησιμοποιούμενες μέθοδοι είναι η ηλεκτροφόρηση γέλης πολυακρυλαμιδίου (PAGE), η τεχνολογία τυχαίας ενίσχυσης πολυμορφικού DNA μοριακών δεικτών (RAPD), η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης.

(PCR) και άλλες μεθόδους.

Liu Li et al.[62] χρησιμοποίησε δείκτες RAPD, σε συνδυασμό με PCR και ανάλυση συστάδων, για την αποτελεσματική αναγνώριση του Panax notoginseng (Burk.) f. Η. Chen, Panax ginseng CA Mey., και αμερικανικό ginseng Panaxquinquefolium L. Fan Wei et al. [63] για πρώτη φορά καθιέρωσε το δακτυλικό αποτύπωμα πρωτεΐνης SDS-PAGE των Eupolyphaga sinensis Walker, Bombyx mori Linnaeus και Scolopendra subsidies mutilans L. Koch, παρέχοντας μια αξιόπιστη και αποτελεσματική μέθοδο για την αναγνώριση αυτών των τριών φαρμακευτικών υλικών. Οι Wei Yicong et al. [64] σχεδίασε εκκινητές ειδικούς για δύο θέσεις και κατασκεύασε πολυπλεξική PCR Η ταχεία αναγνώριση δύο φαρμακευτικών υλικών, της Houttuynia cordata Thunb. Και το Gymnotheca chinensis Decne., μπορεί ταυτόχρονα να αναγνωρίσει τα δύο είδη θετικά και να καθορίσει εάν είναι αναμεμειγμένα. Οι Wang Fu et al. [65] χρησιμοποίησε την αλληλουχία ITS2 (εσωτερικός μεταγραφόμενος διαχωριστής 2) ως γραμμωτός κώδικας DNA για να προσδιορίσει με ακρίβεια την κινεζική ιατρική, Zanthoxylumbungeanum Maxim. Και το μπαχαρικό του Zanthoxylumbungeanum Maxim., παρέχοντας μια βάση για την ταυτοποίηση της κινεζικής ιατρικής Zanthoxylumbungeanum και του μπαχαρικού Zanthoxylumbungeanum.