Ερευνητική πρόοδος των αντιβακτηριακών επιδράσεων μεταξύ φυτικών εκχυλισμάτων και αντιβιοτικών Ⅱ

3 Συνεργικός αντιβακτηριδιακός μηχανισμός φυτικών εκχυλισμάτων και αντιβιοτικών

Τα φυτικά εκχυλίσματα μπορούν να ενισχύσουν την ευαισθησία των βακτηρίων στα αντιβιοτικά αναστέλλοντας τη δραστηριότητα των αντιβιοτικών ενζύμων υδρόλυσης/τροποποίησης, τροποποιώντας τους αντιβιοτικούς στόχους, αναστέλλοντας την εκροή αντλίας εκροής, αυξάνοντας τη διαπερατότητα της μεμβράνης και αναστέλλοντας/καθαρίζοντας βιομεμβράνες.

ΦΥΤΙΚΟ ΦΥΤΙΚΟ ΕΚΧΥΛΙΣΜΑ ΚΙΣΤΑΝΧΗΣ ΓΙΑΕΝΙΣΧΥΕΙ ΑΝΤΙΒΙΟΤΙΚΟ

Υποστήριξη της Wecistanche

Διεύθυνση ηλεκτρονικού ταχυδρομείου:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

3.1 Αναστολή της δράσης του ενζύμου υδρόλυσης/τροποποίησης αντιβιοτικών

-Η λακταμάση μπορεί να υδρολύσει και να καταστρέψει τα αντιβιοτικά πενικιλλίνης, κεφαλοσπορίνης και καρβαπενέμης και είναι η κύρια αιτία αδρανοποίησης των αντιβιοτικών, αυξάνοντας έτσι την αντίσταση των βακτηρίων στα αντιβιοτικά -λακτάμης[28]. Τα φυτικά εκχυλίσματα αποκαθιστούν την ευαισθησία των βακτηρίων στα αντιβιοτικά αναστέλλοντας τη δραστηριότητα της λακταμάσης. Οι Teng et al. διαπίστωσε[29] ότι τα αντιβιοτικά θεαφλαβίνης-3,3'-διγαλλικής (TFDG) και -λακτάμης έχουν συνεργική αντιβακτηριακή δράση στο MRSA και προσδιόρισαν τον ανασταλτικό μηχανισμό του TFDG στη -λακταμάση με προσομοίωση μοριακής δυναμικής. Βρέθηκε ότι το TFDG συνδέεται με το Gln 242 και το Ser 369, αναστέλλοντας έτσι τη δράση υδρόλυσης της -λακταμάσης και καθιστώντας το MRSA ευαίσθητο στα αντιβιοτικά -λακτάμης ξανά. Οι Karumathil et al. μελέτησε τις επιδράσεις της τρανς-κινναμαλδεΰδης (TC) και της ευγενόλης (EG) σε συνδυασμό με αντιβιοτικά 7 -λακτάμης στο πολυανθεκτικό Acinetobacter baumannii και διαπίστωσε ότι η TC και η EG σε συνδυασμό με αντιβιοτικά μπορούν να ενισχύσουν την ευαισθησία του Acinetobacter baumannii σε όλα τα αντιβιοτικά. Ταυτόχρονα, σύμφωνα με τα αποτελέσματα της RT-qPCR, οι TC και EG μείωσαν την έκφραση των περισσότερων γονιδίων που σχετίζονται με την αντίσταση στα αντιβιοτικά στη λακτάμη, ιδιαίτερα των blaP και adeAB. Αποδείχθηκε ότι η TC και η EG ελέγχουν τη μόλυνση του πολυανθεκτικού Acinetobacter αναστέλλοντας τη δραστηριότητα της λακταμάσης[30]. Επιπλέον, το ταννικό οξύ, η γαλλική επιγαλλοκατεχίνη[31], η μυρικετίνη[32], το αιθέριο έλαιο πιπεριού[33] κ.λπ. μπορούν να αναστείλουν τη δραστηριότητα της λακταμάσης in vitro και να ενισχύσουν την αντιβακτηριακή δράση των αντιβιοτικών.

3.2 Αναστολή της εκροής αντλίας εκροής

Οι αντλίες εκροής (EP) είναι σημαντικά συστατικά της πλασματικής μεμβράνης όλων των βακτηρίων. Αναγνωρίζουν και αντλούν αντιβιοτικά έξω από το κύτταρο πριν τα αντιβιοτικά φτάσουν στον επιδιωκόμενο στόχο, μειώνοντας την ενδοκυτταρική περιεκτικότητα σε φάρμακο και αναπτύσσοντας έτσι αντίσταση στα αντιβιοτικά. Τα φυτά έχουν δευτερογενείς μεταβολίτες με ποικίλες χημικές δομές και διάφορες φαρμακολογικές ιδιότητες. Πολλές μελέτες σε εκχυλίσματα φαρμακευτικών φυτών έχουν δείξει ότι υπάρχουν μόρια που μπορούν να εμποδίσουν τις αντλίες εκροής σε Gram-αρνητικά και Gram-θετικά βακτήρια και να αποκαταστήσουν την αποτελεσματικότητα των αντιβιοτικών, έτσι ώστε τα αντιβιοτικά να συσσωρεύονται σε μια ορισμένη συγκέντρωση στα βακτήρια για να επιτύχουν βακτηριοκτόνο αποτέλεσμα. Όταν η γενιστεΐνη και η γενιστεΐνη χρησιμοποιήθηκαν σε συνδυασμό με νορφλοξασίνη, το επίπεδο μεταγραφικής έκφρασης του NorA μειώθηκε σημαντικά και η τιμή MIC της νορφλοξασίνης μειώθηκε κατά 4 φορές, γεγονός που ενίσχυσε την αντιβακτηριακή δράση των αντιβιοτικών κινολόνης έναντι του MRSA[16]. DA et al. διαπίστωσε ότι το αιθέριο έλαιο πιπεριού μπορεί να αποκαταστήσει την αντιβακτηριακή δράση της τετρακυκλίνης και της σιπροφλοξασίνης έναντι του χρυσίζοντος σταφυλόκοκκου που είναι ανθεκτικό σε πολλά φάρμακα. Το φάσμα εκπομπής φθορισμού επιβεβαίωσε ότι ο αντιβακτηριακός μηχανισμός ήταν ότι το αιθέριο έλαιο πιπεριού ανέστειλε τη δραστηριότητα των αντλιών εκροής NorA και MepA[33]. Όταν τα διφλαβονοειδή που εξήχθησαν από τα εγγενή είδη του ανατολικού Αμαζονίου στη Βραζιλία χρησιμοποιήθηκαν σε συνδυασμό με νορφλοξασίνη, μπορούσαν να αναστείλουν τα γονίδια εκροής όπως τα QacA/B, Tetk και MsrA του Staphylococcus aureus και η τιμή MIC της νορφλοξασίνης μειώθηκε κατά 8 φορές[34]. Dwivedi et al. έδειξε ότι η βινβλαστίνη μπορεί να μειώσει σημαντικά τη δόση της τετρακυκλίνης και της στρεπτομυκίνης για ανθεκτικά σε πολλά φάρμακα κλινικά απομονωμένα στελέχη (KG-P2) και μπορεί επίσης να μειώσει τη βιωσιμότητα των κυττάρων. Εικάζεται ότι ο μηχανισμός της αντιστροφής της αντίστασης της βινμπλαστίνης μπορεί να οφείλεται στην αναστολή των αντλιών εκροής [35].

3.3 Αναστολή ή αφαίρεση βιοφίλμ

Το Biofilm είναι μια μικροβιακή κοινότητα που συνδέεται με βιολογικές και μη βιολογικές επιφάνειες. Ο σχηματισμός βιοφίλμ είναι μια πολύπλοκη διαδικασία πολλαπλών σταδίων που περιλαμβάνει τον μετασχηματισμό βακτηρίων από μια πλαγκτονική μορφή ελεύθερης κολύμβησης σε μια σταθερή μορφή σχηματισμού βιοφίλμ. Περιλαμβάνει κυρίως τέσσερα κύρια στάδια: προσκόλληση στην επιφάνεια των αντικειμένων, πολλαπλασιασμός, σχηματισμός μικροαποικιών και ωρίμανση σε δομημένες και ανθεκτικές μικροβιακές κοινότητες [36]. Ο σχηματισμός βιοφίλμ συμβάλλει στην ανάπτυξη ανθεκτικότητας στα αντιβιοτικά, που είναι ο κύριος λόγος για τον οποίο οι βακτηριακές λοιμώξεις είναι δύσκολο να ελεγχθούν. Τα φυτικά εκχυλίσματα μπορούν να αναστείλουν το σχηματισμό βιομεμβρανών διαφόρων βακτηρίων και να έχουν καταστροφική επίδραση στα υπάρχοντα βιοφίλμ, προάγοντας τη διείσδυση των αντιβιοτικών φαρμάκων, αναστρέφοντας έτσι τη βακτηριακή αντίσταση. Οι Kart et al. βρήκε ότι [13] η ελάχιστη συγκέντρωση αναστολής βιοφίλμ της σιπροφλοξασίνης σε συνδυασμό με κουρκουμίνη, βαϊκελαΐνη και φραξινοϋλ μπορεί να μειωθεί κατά 30 έως 60 φορές σε σύγκριση με τη σιπροφλοξασίνη μόνη, υποδεικνύοντας ότι τα φυτικά εκχυλίσματα μπορούν να χρησιμοποιηθούν σε συνδυασμό με αντιβιοτικά για την αναστολή ή την εξάλειψη των βιοφίλμ. Στη μελέτη των Bahari et al. [37], όταν η αζιθρομυκίνη και η γενταμυκίνη χρησιμοποιήθηκαν σε συνδυασμό με κουρκουμίνη, ο σχηματισμός βιοφίλμ του Pseudomonas aeruginosa μειώθηκε σημαντικά και η ανασταλτική δράση εξαρτιόταν από τη συγκέντρωση. Επιπλέον, ο συνδυασμός 1/4 MIC (64 μg/mL) αζιθρομυκίνης και 1/4 MIC (32 μg/mL) κουρκουμίνης έδειξε τη μεγαλύτερη ανασταλτική επίδραση στην ανάπτυξη των βιοφίλμ.

3.4 Αύξηση της διαπερατότητας της μεμβράνης

Ορισμένα βακτήρια ρυθμίζουν προς τα κάτω την αναπλήρωση των πρωτεϊνών των πόρων ή άλλων επιλεκτικών πρωτεϊνικών καναλιών, με αποτέλεσμα μειωμένη διαπερατότητα της κυτταρικής μεμβράνης στα αντιβιοτικά και μειωμένη είσοδο φαρμάκου στα βακτηριακά κύτταρα, αναπτύσσοντας έτσι αντίσταση στα αντιβιοτικά. Τα φυτικά εκχυλίσματα συνδέονται με τα λιπίδια των βακτηριακών κυτταρικών μεμβρανών και καταστρέφουν τη δομή του κυτταρικού τοιχώματος, οδηγώντας σε βλάβη της ακεραιότητας, ενισχύοντας τη διαπερατότητα της κυτταρικής μεμβράνης και το ενδοκυτταρικό περιεχόμενο αντιβιοτικών, την απώλεια κυτταρικού περιεχομένου και τον κυτταρικό θάνατο[38]. Οι Apinundecha et al. παρατήρησε τα αποτελέσματα της συνδυασμένης χρήσης τζίντζερ και κλοξακιλλίνης στο MRSA χρησιμοποιώντας ηλεκτρονική μικροσκοπία σάρωσης και ηλεκτρονική μικροσκοπία μετάδοσης[39]. Όταν συνέβη η συνδυασμένη χρήση, εμφανίστηκαν βαθουλώματα, ρωγμές, δομές κυστιδίων και εμφανής κυτταρική λύση στην επιφάνεια των κυττάρων MRSA. Η διαρροή των κυτταρικών τοιχωμάτων MRSA, των κυτταρικών μεμβρανών και του κυτταρικού περιεχομένου άλλαξαν όλα και η ποσότητα των αντιβιοτικών που εισέρχονταν στο κύτταρο αυξήθηκε, δείχνοντας σημαντική συνεργιστική αντιβακτηριακή δράση. Επιπλέον, τα φυτικά εκχυλίσματα μπορούν επίσης να ενισχύσουν τη διαπερατότητα της κυτταρικής μεμβράνης των Gram-αρνητικών βακτηρίων. Qu et al. διαπίστωσε ότι η συνδυασμένη χρήση τετρακυκλίνης και κερκετίνης είχε επίσης καταστροφική επίδραση στην ακεραιότητα της κυτταρικής μεμβράνης Escherichia coli, αυξάνοντας τη διαπερατότητά της, αυξάνοντας τα επίπεδα -γαλακτοσιδάσης και αλκαλικής φωσφατάσης, αυξάνοντας την περιεκτικότητα σε εξωκυτταρικό ATP και αυξάνοντας έτσι την πρόσληψη τετρακυκλίνης. αναστέλλοντας την ανάπτυξη της Escherichia coli και καθιστώντας την πολυανθεκτική Escherichia coli ευαίσθητη στην τετρακυκλίνη και πάλι [15]. Όταν η βαϊκελαΐνη χρησιμοποιήθηκε σε συνδυασμό με δοξυκυκλίνη, η ένταση φθορισμού του ιωδιούχου προπιδίου (PI) και της 1-Ν-φαινυλναφθυλαμίνης (NPN) και η εξωκυτταρική περιεκτικότητα σε -γαλακτοσιδάση και ΑΤΡ αυξήθηκε. Μελέτες έχουν επιβεβαιώσει ότι η συνδυασμένη χρήση των δύο φαρμάκων μπορεί να αναστείλει τη δέσμευση του Mg2+ στο λιπίδιο Α για να καταστρέψει την κυτταρική μεμβράνη των αρνητικών κατά Gram βακτηρίων, αναστέλλοντας έτσι συνεργικά την ανάπτυξη των αρνητικών κατά Gram βακτηρίων και μειώνοντας το φάρμακό τους αντίσταση [40].

3.5 Τροποποίηση αντιβιοτικού στόχου

Η επιλεκτική τοξικότητα πολλών αντιβιοτικών στα βακτήρια οφείλεται στην υψηλή συγγένεια και ειδικότητά τους σε βακτηριακούς στόχους. Μετά τη δέσμευση στο στόχο, η αντίστοιχη κυτταρική λειτουργία αναστέλλεται, επηρεάζοντας έτσι την ανάπτυξη βακτηρίων ή ακόμα και τον θάνατο. Ένας από τους βασικούς καθοριστικούς παράγοντες της βακτηριακής αντοχής στα αντιβιοτικά είναι η δομική αλλαγή ή τροποποίηση του αντιβιοτικού στόχου. Η πρωτεΐνη 2a που δεσμεύει την πενικιλλίνη (PBP2a) είναι ένα ένζυμο που καταλύει την αντίδραση διασύνδεσης μεταξύ δύο γειτονικών πεπτιδικών στελεχών κατά τη διάρκεια της βιοσύνθεσης πεπτιδογλυκάνης, η οποία μπορεί να μειώσει την αντιβακτηριακή δράση των αντιβιοτικών -λακτάμης και έτσι να προκαλέσει αντίσταση στα αντιβιοτικά. Τα φυτικά εκχυλίσματα μπορούν να αυξήσουν τη συγγένεια των βακτηρίων για τα αντιβιοτικά -λακτάμης αναστέλλοντας την PBP2a, καθιστώντας τα ξανά ευαίσθητα στα αντιβιοτικά. Οι Chang et al. διαπίστωσε ότι ο συνδυασμός τρεμαζόνης και χαμηλής δόσης οξακιλλίνης μείωσε την έκφραση του mecA και άσκησε την αντιβακτηριακή του δράση ρυθμίζοντας αρνητικά το PBP2a του MRSA, μειώνοντας έτσι την αντίστασή του. Οι Wang et al. διαπίστωσε ότι [42], όταν η trans-cinnamaldehyde συνδυάστηκε με οκτώ αντιβιοτικά, η δόση των αντιβιοτικών μπορούσε να μειωθεί κατά 2 έως 16 φορές. Όταν οι επιδράσεις της τρανς-κινναμαλδεΰδης στο γονίδιο μεταγραφής mecA και το PBP2a του MRSA αναλύθηκαν με RT-PCR και Western-blot, διαπιστώθηκε ότι τόσο η γονιδιακή μεταγραφή όσο και τα επίπεδα πρωτεΐνης επηρεάστηκαν σημαντικά, υποδεικνύοντας ότι ο κύριος μηχανισμός της ήταν να μειώσει το παραγωγή PBP2a. Vankwani et al. επιβεβαίωσε την ανασταλτική δράση του φλοιού του στελέχους Moringa και της αμπικιλλίνης στη -λακταμάση με αποχρωματισμό ιωδίου και επιβεβαίωσε την ανασταλτική επίδραση στην έκφραση της PBP2a από τα αποτελέσματα Western-blot και αποκατέστησε την ευαισθησία του MRSA στα αντιβιοτικά -λακτάμης [43].

4 Περίληψη και Outlook

Λόγω της αλόγιστης χρήσης ή και της κατάχρησης αντιβιοτικών, η βακτηριακή αντοχή γίνεται ολοένα και πιο σοβαρή, γεγονός που απειλεί σοβαρά την υγεία του ανθρώπου και των ζώων. Φυτικά εκχυλίσματα, όπως τερπένια, αλκαλοειδή, φλαβονοειδή κ.λπ., τα οποία επί του παρόντος αναφέρεται ότι έχουν αντιβακτηριακή δράση, έχουν καλή αντιβακτηριακή δράση, μειώνουν τη βακτηριακή αντίσταση, καθυστερούν ή ακόμη και αντιστρέφουν τη βακτηριακή αντίσταση, αλλά όταν χρησιμοποιούνται μόνα τους, η περίοδος αντιβακτηριακής δράσης είναι μεγάλη. , η δοσολογία είναι μεγάλη, και βρίσκεται ακόμα στα αρχικά στάδια της έρευνας. Για την καλύτερη πρόληψη και τον έλεγχο των βακτηριακών λοιμώξεων και τη βελτίωση της αποτελεσματικότητας, θα πρέπει να ενισχυθεί η συνδυασμένη έρευνα εφαρμογής με αντιβιοτικά, να μειωθεί η δόση των φυτικών εκχυλισμάτων και των αντιβιοτικών, οι τοξικές παρενέργειες που προκαλούνται από τη μεγάλης κλίμακας χρήση φαρμάκων θα πρέπει να μειωμένη, η ευαισθησία των βακτηρίων στα αντιβιοτικά θα πρέπει να μειωθεί και η δημιουργία ανθεκτικών στελεχών θα πρέπει να επιβραδυνθεί μειώνοντας την αντίσταση των βακτηρίων στα αντιβιοτικά.

Τα φυτικά εκχυλίσματα ενισχύουν την ευαισθησία των βακτηρίων στα αντιβιοτικά αναστέλλοντας τη δραστηριότητα των αντιβιοτικών ενζύμων υδρόλυσης/τροποποίησης, τροποποιώντας αντιβιοτικούς στόχους, αναστέλλοντας την εκροή αντλίας εκροής, αυξάνοντας τη διαπερατότητα της μεμβράνης και αναστέλλοντας/καθαρίζοντας βιομεμβράνες, παρέχοντας μια εφικτή στρατηγική για τη μείωση της βακτηριακής αντοχής. Αν και ο συνδυασμός φυτικών εκχυλισμάτων και αντιβιοτικών έχει δείξει εξαιρετικά συνεργιστικά αντιβακτηριακά αποτελέσματα σε πολλές τρέχουσες μελέτες, δεν έχει επιτύχει το επιθυμητό αντιβακτηριακό αποτέλεσμα σε επόμενες μελέτες, κάτι που συχνά σχετίζεται με την υπερβολική εξάρτηση από in vitro πειραματικές μελέτες και πειραματικά μοντέλα σε ζώα. Ως εκ τούτου, η εις βάθος εξερεύνηση του in vivo αντιβακτηριακού μηχανισμού φυτικών εκχυλισμάτων και σε συνδυασμό με πολλαπλές κλινικές δοκιμές στελεχών παραμένει το επίκεντρο της μελλοντικής έρευνας, προκειμένου να διερευνηθούν και να αναπτυχθούν νέα και αποτελεσματικά θεραπευτικά σχήματα συνδυασμού φαρμάκων για να ξεπεραστούν τα τρέχοντα ελαττώματα της συνδυασμένης χρήσης φυτικών εκχυλισμάτων και αντιβιοτικών.

Αναφορές

[1] ZHUO H, ZHANG X, LI M, ZHANG Q, et al. Αντιβακτηριακές και αντιφλεγμονώδεις ιδιότητες ενός νέου αντιμικροβιακού πεπτιδίου που προέρχεται από

LL-37[J]. Αντιβιοτικά (Βασιλεία), 2022,11(6):754.

[2] HUANG Z, YUAN T, CHEN J, et al. Νευροπροστατευτικές και αντιοξειδωτικές δράσεις διαφόρων μερών πολικότητας των εκχυλισμάτων του Ginkgo

φύλλο biloba και ρίζωμα Zingiber officinale από το Yongzhou[J]. Frontiers in Chemistry, 7 Σεπτεμβρίου 2022, 10:984495.

[3] SUN L, TANG Z, WANG M, et al. Διερεύνηση αντιμικροβιακών συστατικών σε σπόρους Psoralea corylifolia L. και σχετικός μηχανισμός κατά

ανθεκτικός στη μεθικιλλίνη Staphylococcus aureus. [J]Molecules, 2022,27(20):6952.

[4] ISLAM MA, AKHTAR Z, HASSAN MZ, et al. Μοτίβο χορήγησης αντιβιοτικών στα φαρμακεία σύμφωνα με τον ΠΟΥ πρόσβαση, ρολόι, αποθεματικό

Ταξινόμηση (AWaRe) στο Μπαγκλαντές[J]. Αντιβιοτικά (Βασιλεία), 2022,11(2):247.

[5] CHOI SR, BRITIGAN BE, NARAYANASAMY P. Τα νανοσωματίδια γαλλίου(III) που στοχεύουν στον μεταβολισμό σιδήρου/αίμης είναι δραστικά έναντι των εξωκυτταρικών

και ενδοκυτταρικό Pseudomonas aeruginosa και Acinetobacter baumannii[J]. Αντιμικροβιακά μέσα και Χημειοθεραπεία, 2019,63(4):ε02643-18.

[6] MCINNES RS, MCCALLUM GE, LAMBERTE LE, et al. Οριζόντια μεταφορά γονιδίων αντοχής στα αντιβιοτικά στο ανθρώπινο έντερο

μικροβίωμα[J]. Current Opinion in Microbiology,2020,53:35-43.

[7] SUBRAMANIAM G, GIRISH M. Αντοχή στα αντιβιοτικά-Αιτία επανεμφάνισης λοιμώξεων[J]. Indian Journal of

Παιδιατρική,2020,87(11):937-944.

[8] ROCHA DC, DA SILVA ROCHA C, TAVARES DS, et al. Κτηνιατρικά αντιβιοτικά και φυσιολογία φυτών: Επισκόπηση[J]. Η Επιστήμη του

Total Environment,2021.767:144902.

[9] LI Z, LI M, ZHANG Z, et al. Αντιβιοτικά σε υδάτινα περιβάλλοντα της Κίνας: Ανασκόπηση και μετα-ανάλυση [J]. Οικοτοξικολογία και Περιβάλλον

Ασφάλεια,2020,199:110668.

[10] LIU XH, LU SY, GUO W, et al. Αντιβιοτικά στο υδάτινο περιβάλλον: μια ανασκόπηση των λιμνών, Κίνα[J]. Η Επιστήμη του Συνόλου

Περιβάλλον,627, 1195-1208.

[11] SUN Y, ZHANG M, OU Z, et al. Μικρόβιωμα εσωτερικού χώρου, μικροβιακοί και φυτικοί μεταβολίτες, χημικές ενώσεις και συμπτώματα άσθματος σε παιδιά

μαθητές γυμνασίου: μια πολυκεντρική μελέτη συσχέτισης στη Μαλαισία[J]. European Respiratory Journal, 2022,60(5):2200260.

[12] TAN Z, DENG J, YE Q, et al. Η αντιβακτηριακή δράση των φλαβονοειδών φυσικής προέλευσης [J]. Τρέχοντα θέματα στην ιατρική

Χημεία,2022,22(12):1009-1019.

[13] KART D, REÇBER T, NEMUTLU E, et al. Υπο-ανασταλτικές συγκεντρώσεις σιπροφλοξασίνης μόνης και συνδυασμοί με φυτικής προέλευσης

ενώσεις κατά των βιομεμβρανών P. aeruginosa και οι επιδράσεις τους στο μεταβολομικό προφίλ των βιοφίλμ του P. aeruginosa [J]. Αντιβιοτικά

(Βασιλεία).2021,10(4):414