Αλλαγές στα επίπεδα των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών, της αντιοξειδωτικής δράσης και άλλων ποιοτικών χαρακτηριστικών σε φέτες Cistanche Deserticola με επεξεργασία ατμού

Fang Peng, Jun Chen, Xia Wang, Changqing Xu, Tonguing Liu και Rong Xu

Ινστιτούτο Ανάπτυξης Φαρμακευτικών Φυτών, Κινεζική Ακαδημία Ιατρικών Επιστημών, Ιατρικό Κολλέγιο Ένωσης Πεκίνου. 151 Malianwa Road, Πεκίνο 100193, Κίνα

Ningxia Yongning Plantation of Herb Cistanche; Yonghuang Road, Yinchuan 750100, Κίνα.

Επικοινωνία:joanna.jia@wecistanche.com

Αφηρημένη

Ερευνήσαμε την επίδραση του χρόνου ατμίσματος στοCistancheΤο deserticola YC MA κόβει φέτες αναλύοντας τα επίπεδα βιοδραστικών ενώσεων, την αντιοξειδωτική δράση και την απώλεια βάρους σε σύγκριση με φρέσκα δείγματα που έχουν στεγνώσει απευθείας σε φούρνο και λευκασμένα. Τα νωπά δείγματα είχαν εξαιρετικά χαμηλά επίπεδα φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων και αντιοξειδωτική δράση. Χαμηλότερα επίπεδα απώλειας βάρους και υψηλότερες ποσότητες διαλυτών σακχάρων, πολυσακχαριτών και αραιών διαλυτών σε αιθανόλη εκχυλίσματα βρέθηκαν όταν οι φέτες μαγειρεύτηκαν στον ατμό αντί να ασπρίσουν. Οι φέτες που μαγειρεύτηκαν στον ατμό για 5 και 7 λεπτά περιείχαν σημαντικά (σελ<0.05) higher="" amounts="" of="" acteoside,="" isoacteoside,="" and="" 2′-acetylacteoside="" than="" directly="" oven-dried="" samples.="" however,="" soluble="" sugars="" and="" dilute="" ethanol-soluble="" extracts="" decreased="" gradually="" throughout="" the="" steaming="" process.="" the="" concentration="" of="" polysaccharides="" fluctuated="" during="" the="" steaming="" process.="" the="" steaming="" time="" had="" a="" consistent="" effect="" on="" antioxidant="" properties="" evaluated="" by="" oxygen="" radical="" absorbance="" capacity="" (orac),="" 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl="" free="" radical="" scavenging="" activity="" (dpph),="" and="" ferric="" reducing="" antioxidant="" property="" (frap),="" showing="" a="" significant="" increase="" and="" reaching="" 108.62,="" 23.08,="" and="" 11.68="" micromoles="" trolox="" per="" mass="" of="" fresh="" slice="" (μmol="" te/g="" fw),="" respectively.="" the="" present="" results="" suggest="" that="" fresh-cut="" c.="" deserticola="" can="" be="" subjected="" to="" approximately="" 5–7="" min="" of="" steaming="" to="" improve="" phenylethanoid="" glycoside="" levels="" and="" antioxidant="" activity,="" while="" still="" preserving="" the="" amounts="" of="" soluble="" sugars,="" polysaccharides,="" and="" dilute="" ethanol-soluble="" extracts.="" these="" results="" would="" help="" to="" improve="" the="" production="" process="" for="" fresh-cut="" chinese="" medicines="" and="" increase="" the="" understanding="" of="" their="" associated="" health="">

κιστανάκιλευκαντική επίδραση στο δέρμα σε αντιοξειδωτική δράση

Λέξεις-κλειδιά: στον ατμό;Cistanchedeserticola; φαινυλαιθανοειδές γλυκοσίδιο; αντιοξειδωτική δράση? φρεσκοκομμένο

CistanchedeserticolaΤο YC MA (Orobanchaceae), κοινώς γνωστό ως "Desert ginseng", έχει χρησιμοποιηθεί από καιρό ως τονωτικό στην Κίνα και την Ιαπωνία. Οι σαρκώδεις μίσχοι κόβονται σε φέτες για τη θεραπεία διαφόρων ασθενειών, όπως η ανικανότητα, η γυναικεία υπογονιμότητα, η αίσθηση κρύου στην οσφύ και τα γόνατα και η γηριατρική δυσκοιλιότητα. Τα τελευταία χρόνια, αρκετές μελέτες έχουν αποκαλύψει την αποτελεσματικότητά του σε πειραματικά μοντέλα που σχετίζονται με νευρολογικές διαταραχές, ιδιαίτερα τη νόσο του Αλτσχάιμερ και τη νόσο του Πάρκινσον.1) Η αγορά υγιεινής διατροφής ενδιαφέρεται ολοένα και περισσότερο για αυτό το χρήσιμο φυσικό συμπλήρωμα διατροφής. Το κρασί και το τσάι που παρασκευάζονται από χυμώδεις μίσχους είναι δημοφιλείς υγιεινές τροφές που ανακουφίζουν την κούραση και ενισχύουν τη μάθηση και τη μνήμη. Το C. deserticola είναι μια πλούσια πηγή φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων, πολυσακχαριτών και διαλυτών σακχάρων, τα οποία παρουσιάζουν κυρίως αντιοξειδωτικά, 2,3) νευροπροστατευτικά, 4,5) ηπατοπροστατευτικά, 6) ανοσοενισχυτικά, 7-9) καθαρτικά, 10) και αντι -γήρανση11) επιδράσεις, μεταξύ των οποίων η αντιοξειδωτική δράση θεωρείται ότι είναι η βάση των άλλων φαρμακολογικών δράσεων. Η εχινακοσίδη και η ακτεοσίδη είναι αντιπροσωπευτικοί δείκτες για τον ποιοτικό έλεγχοΚιστανάκιαHerbaστην Κινεζική Φαρμακοποιία (έκδοση 2015), λόγω της κυρίαρχης αφθονίας, της ειδικότητας του γένους και των αξιοσημείωτων βιοδραστηριοτήτων τους. Ο προσδιορισμός των αραιών διαλυτών σε αιθανόλη εκχυλισμάτων περιλαμβάνεται επίσης στον ποιοτικό έλεγχο τουΚιστανάκιαHerba. Κιστανοσίδη Α, ισοακτεοζίτης και 2'-ακετυλακτεοσίδης έχουν επίσης αναφερθεί ότι είναι άφθονα στο C. deserticola. 12)

Η αυξανόμενη ζήτηση για το C. deserticola έχει τονώσει πολύ την καλλιέργειά του. Το C. deserticola ανήκει σε ένα πολυετές βότανο παρασίτων, το οποίο αναπτύσσεται κυρίως σε άνυδρες ή ημίξηρες περιοχές της βορειοδυτικής Κίνας.13) Αμέσως μετά τη συγκομιδή, αυτοί οι πολύ ζαχαρούχοι, βαρείς ακατέργαστοι μίσχοι πρέπει να αποξηρανθούν για να αποφευχθεί η απώλεια περιεκτικότητας σε θρεπτικά συστατικά και η αλλοίωση. Τα φρέσκα στελέχη περιέχουν συνήθως 75-85 τοις εκατό νερό και η στάθμη του νερού θα πρέπει να μειωθεί κάτω από το 10 τοις εκατό για τη διατήρησή τους. Στην πλειοψηφία τωνCistanche-περιοχές παραγωγής, ολόκληροι φρέσκοι μίσχοι τοποθετούνται σε ανοιχτά χωράφια για περίπου 2 μήνες για την προκαταρκτική διαδικασία ξήρανσης. Το αποξηραμένο υλικό στη συνέχεια μεταφέρεται στα εργοστάσια, μουλιάζεται σε νερό, κόβεται σε φέτες και στεγνώνει ξανά. Η καθυστέρηση της επεξεργασίας των φετών μπορεί να οφείλεται σε κακώς εκπαιδευμένους ή ανεπαρκώς εξοπλισμένους αγρότες. Ωστόσο, το κύριο πρόβλημα είναι η έλλειψη γνώσης και τεχνολογίας για να καταστεί δυνατή μια αποτελεσματική παραγωγική διαδικασία.

Η επεξεργασία υψηλής θερμότητας έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως σε λαχανικά και φρούτα και μπορεί να αναστείλει τη μικροβιακή ανάπτυξη και να παρατείνει τη διάρκεια ζωής.14–16) Ωστόσο, μπορεί επίσης να προκαλέσει αλλαγές στην εμφάνιση και στη σύνθεση των θρεπτικών συστατικών. Ορισμένα βιοενεργά συστατικά,17) και φαρμακολογικές δραστηριότητες όπως η αντιοξειδωτική δράση,18) έχει αποδειχθεί ότι αυξάνονται στα φαρμακευτικά βότανα μετά το άτμισμα. Έτσι, το μαγείρεμα στον ατμό του C. deserticola μπορεί να βελτιώσει πολλά οφέλη για την υγεία. Η χρήση ατμού ή λεύκανσης σε φρεσκοκομμένο C. deserticola έχει επίσης αναφερθεί ότι ενισχύει τις ποσότητες εχινακοσίδης και ακτεοσίδης. φρεσκοκομμένου C. deserticola κατά τη διαδικασία του ατμού. Ο στόχος αυτής της μελέτης ήταν επομένως να εξεταστεί η επίδραση του χρόνου ατμού (1, 3, 5, 7 λεπτά) στον αριθμό των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών, πολυσακχαριτών, διαλυτών σακχάρων, αραιών διαλυτών σε αιθανόλη εκχυλίσματα, απώλεια βάρους και αντιοξειδωτικές ιδιότητες στο C. φέτες deserticola σε σύγκριση με τρεις άλλες ομάδες (φρέσκες, απευθείας αποξηραμένες στο φούρνο, ασπρισμένες).

κιστανάκιέχουν τα αποτελέσματα της λεύκανσης του δέρματος καιαντιοξείδωση

Πειραματικός

Χημικά

Χημικά αναλυτικής ποιότητας: μεθανόλη, αιθανόλη, D-γλυκόζη, θειικό οξύ, όξινο φωσφορικό κάλιο και μονοένυδρο διόξινο φωσφορικό κάλιο αποκτήθηκαν από την Beijing Chemical Works (Πεκίνο, Κίνα). Μυρμηκικό οξύ και φαινόλη αγοράστηκαν από την Sinopharm Chemical Reagent Co. (Σαγκάη, Κίνα). Η μεθανόλη ποιότητας HPLC αγοράστηκε από την Fisher Scientific (Τορόντο, Καναδάς). Το απιονισμένο νερό ελήφθη χρησιμοποιώντας ένα σύστημα Milli-Q (Millipore Corp., Bedford, ΜΑ, ΗΠΑ). Το 2,2-Διφαινυλ-1-πικρυυλυδραζύλιο (DPPH) παρασχέθηκε από την Alfa Aesar (Ward Hill, MA, ΗΠΑ) και το διυδροχλωρικό 2,2'-αζοβις(2-αμινο-προπάνιο) (AAPH ) από τον Adamas-beta (Σαγκάη, Κίνα). ( BHT), και φλουορεσκεΐνη (άλας νατρίου) (FL) ελήφθησαν από την TCI (Τόκιο, Ιαπωνία) και το κιτ ανάλυσης συνολικής αντιοξειδωτικής ικανότητας (T-AOC) από το Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute (Nanjing, Κίνα). Τα πρότυπα για την ακτεοσίδη (111530-200706) και την εχινακοσίδη (111670-200503) αγοράστηκαν από το Εθνικό Ινστιτούτο Ελέγχου Τροφίμων και Φαρμάκων (Πεκίνο, Κίνα). Τα πρότυπα για τον 2'-ακετυλακτεοσίδη, τον κιστανοζίτη Α και τον ισοακτεοσίδη παρουσιάστηκαν ως δώρο από τον Δρ. Zhiguo Ma. Η καθαρότητα κάθε ένωσης αναφοράς προσδιορίστηκε ότι είναι πάνω από 98 τοις εκατό με κανονικοποίηση της περιοχής κορυφής που ανιχνεύθηκε από τον ανιχνευτή συστοιχίας διόδων HPLC (DAD).

Θεραπεία υλικού και Προσδιορισμός απώλειας βάρους

Τα δείγματα συλλέχθηκαν την άνοιξη του 2014 στη Φυτεία Ningxia τηςΚιστανάκιαHerba (106.08 μοίρες Β, 38,24 μοίρες Α, 1124,2 μ.) στην Κίνα και αναγνωρίστηκε από έναν από εμάς (καθ. Jun Chen). Ένα δείγμα κουπονιού κατατέθηκε στο Ινστιτούτο Ανάπτυξης Φαρμακευτικών Φυτών, Κινεζική Ακαδημία Ιατρικών Επιστημών, Peking Union Medical College. Περίπου 3 kg μίσχων C. deserticola συλλέχθηκαν τυχαία και ξεπλύθηκαν με καθαρό νερό. Τα μέρη της ταξιανθίας αφαιρέθηκαν με ένα κεραμικό μαχαίρι και στη συνέχεια οι μίσχοι κόπηκαν σε φέτες 3 mm. Κάθε φέτα 10{{30}} g μετρήθηκε σε βάρος (W0) ως αντίγραφο. Αξιολογήθηκαν επτά πειραματικές αγωγές με τρεις επαναλήψεις ανά θεραπεία. Για τον ατμό, τέσσερις παρτίδες φετών τοποθετήθηκαν σε υδρατμούς 93 μοιρών για 1, 3, 5 ή 7 λεπτά. Για λεύκανση, μία επεξεργασία τοποθετήθηκε σε νερό 96 βαθμών για 5 λεπτά. Νωπές και απευθείας αποξηραμένες φέτες στο φούρνο ήταν οι άλλες δύο θεραπείες που αναφέρθηκαν σε αυτό το πείραμα. Οι επεξεργασμένες φέτες ζυγίστηκαν (W1) και ξηράνθηκαν στους 60 βαθμούς στον φούρνο. Οι αποξηραμένες φέτες στη συνέχεια ζυγίστηκαν εκ νέου (W2), αλέστηκαν και κονιοποιήθηκαν (65 mesh). Οι σκόνες δειγμάτων αποθηκεύτηκαν σε σάκους κενού στους -20 βαθμούς μέχρι την ημέρα της ανάλυσης. Η απώλεια βάρους υπολογίστηκε ως εξής: απώλεια βάρους μετά από επεξεργασία υψηλής θερμότητας (%)=[(W0−W1)/ W0]×100, απώλεια βάρους μετά από στέγνωμα σε φούρνο (%)=[(W0 −W2)/W0]× 100, όπου W0 είναι το αρχικό βάρος και W1 και W2 είναι τα βάρη που μετρώνται μετά από υψηλή θερμική επεξεργασία και ξήρανση σε φούρνο, αντίστοιχα.

Φαινυλαιθανοειδείς Γλυκοζίτες και Αντιοξειδωτικές Ιδιότητες

Εξαγωγή δειγμάτων

Ένα {{0}}.5-g δείγματος σε σκόνη εκχυλίστηκε με 25 mL υδατικού διαλύματος μεθανόλης 60 τοις εκατό με υπερήχους KQ-250DE (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Jiangsu, Κίνα) στα 40 kHz, 200 W και 40 μοίρες για 30 λεπτά. Μετά την εκχύλιση, τα επεξεργασμένα δείγματα φυγοκεντρήθηκαν για 10 λεπτά στα 4600xg (TD5; Hunan Herexi Instrument & Equipment Co., Hunan, China). Το υπερκείμενο διηθήθηκε μέσω ενός φίλτρου μεγέθους πόρων 0,{14}}μm για επακόλουθες αναλύσεις.

Προσδιορισμός Φαινυλαιθανοειδών Γλυκοζιδίων

Ο προσδιορισμός της εχινακοσίδης, της κιστανοζίτης Α, της ακτεοσίδης, της ισοακτεοσίδης και του 2'-ακετυλακτεοσιδίου από δείγματα C. deserticola πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφεται από τους Ma et al.21) με ορισμένες τροποποιήσεις. Η ανάλυση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα όργανο HPLC 2695–2996 (Waters Corp., Milford, MA, ΗΠΑ) με απορρόφηση υπεριώδους ακτινοβολίας που παρακολουθείται στα 330 nm. Ο διαχωρισμός πραγματοποιήθηκε σε στήλη Merck Purospher® Star RP-C18 (250 mm×4,6 mm, 5 μm) που λειτουργεί σε 30 μοίρες. Η κινητή φάση με ρυθμό ροής 1 mL/min αποτελούνταν από διαλύτη Α (μεθανόλη) και διαλύτη Β ({{30}}.1 τοις εκατό υδατικό μυρμηκικό οξύ, ο/ο). Η έκλουση βαθμίδωσης λειτουργούσε ως εξής: 28 τοις εκατό Α (0–10 min), 28–38 τοις εκατό Α (10–30 λεπτά), 38 τοις εκατό Α (30–45 λεπτά) και το ο όγκος ένεσης ήταν 10 μL. Ένα μικτό διάλυμα που περιείχε πέντε πρότυπα αναφοράς παρασκευάστηκε με διάλυση των προτύπων αναφοράς σε 60 τοις εκατό μεθανόλη σε τελική συγκέντρωση 0,20 mg/mL για την εχινακοσίδη, 0,21 mg/mL για την ακτεοσίδη, 0,20 mg/mL για την 2'-ακετυλολακτεοσίδη, 0,05 mg/ mL για την κιστανοσίδη Α και 0,05 mg/mL για την ισοακτεοσίδη. Το διάλυμα στη συνέχεια αραιώθηκε σε επτά διαφορετικές συγκεντρώσεις για να δημιουργηθούν καμπύλες βαθμονόμησης. Η συγκέντρωση των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων των δειγμάτων εκφράστηκε σε g/kg νωπού βάρους (FW).

Προσδιορισμός της ικανότητας απορρόφησης ριζών οξυγόνου (ORAC)

Ο προσδιορισμός ORAC διεξήχθη όπως περιγράφεται από τους Huang et al.22) με ορισμένες τροποποιήσεις. Το συνθετικό αντιοξειδωτικό BHT χρησιμοποιήθηκε ως θετικός έλεγχος. Εν συντομία, 25 μL αραιωμένων εκχυλισμάτων δείγματος και 160 μL FL αναμίχθηκαν σε μια μικροπλάκα 96-πηγαδιού. Το μίγμα επωάστηκε στους 37 βαθμούς για 15 λεπτά, πριν από την προσθήκη 20 μL AAPH. Ο φθορισμός παρακολουθήθηκε χρησιμοποιώντας 485 nm (διέγερση) και 520 nm (εκπομπή) σε διαστήματα 3-λεπτών για 72 λεπτά χρησιμοποιώντας Fluoroskan Ascent FL (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA). Το Trolox (2,5–50,0 μmol/L) χρησιμοποιήθηκε ως πρότυπο αναφοράς και τα αποτελέσματα εκφράστηκαν ως μικρογραμμομόρια Trolox ανά μάζα φρέσκιας φέτας, μmol TE/g FW.

Προσδιορισμός της Δραστηριότητας Σάρωσης Ελεύθερων Ριζών 2,2-Διφαινυλ-1-πικρυυλυδραζυλίου (DPPH)

Ο προσδιορισμός DPPH πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφεται από τους Goupy et al.23) με ορισμένες τροποποιήσεις. Το συνθετικό αντιοξειδωτικό BHT χρησιμοποιήθηκε ως θετικός έλεγχος. Εν συντομία, 1 ml του αραιωμένου εκχυλίσματος δείγματος αναμίχθηκε με 1 mL διαλύματος μεθανόλης 0,2 mmol/L DPPH. Τα διαλύματα διατηρήθηκαν στο σκοτάδι στους 25 βαθμούς για 90 λεπτά και στη συνέχεια η απορρόφηση μετρήθηκε στα 517 nm. Το Trolox (4,0–119,5 μmol/L) χρησιμοποιήθηκε ως πρότυπο αναφοράς και τα αποτελέσματα εκφράστηκαν ως μικρογραμμομόρια Trolox ανά μάζα φρέσκιας φέτας, μmol TE/g FW.

Προσδιορισμός της αντιοξειδωτικής ιδιότητας μείωσης του σιδήρου (FRAP)

Η ανάλυση FRAP πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το κιτ δοκιμασίας T-AOC σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.

κιστανάκιέχουν τη λειτουργία της λεύκανσης του δέρματος καιαντιοξείδωση

Διαλυτά σάκχαρα και πολυσακχαρίτες

Παρασκευή δειγμάτων διαλυτών σακχάρων

Ένα 0.5-g δείγματος σε σκόνη εκχυλίστηκε με 25 mL υδατικού διαλύματος αιθανόλης 80 τοις εκατό με υπερήχους KQ-250DE στα 40 kHz, 150 W και 80 βαθμούς για 30 λεπτά. Το πρώτο εκχυλιστικό διάλυμα διηθήθηκε και μεταφέρθηκε σε ογκομετρική φιάλη 50-mL. Τα ιζήματα εκχυλίστηκαν εκ νέου και το διήθημα συνδυάστηκε με το πρώτο εκχυλιστικό διάλυμα στην ογκομετρική φιάλη 50-mL και πληρώθηκε μέχρι τη χαραγή με 80 τοις εκατό υδατικό διάλυμα αιθανόλης. Στη συνέχεια, 1 mL αυτού του διαλύματος μεταφέρθηκε με πιπέτα σε έναν γυάλινο σωλήνα 10-mL για εξάτμιση της αιθανόλης σε ένα λουτρό ζέοντος νερού. Προστέθηκε απεσταγμένο νερό (5 mL) για να διαλυθεί το υπόλειμμα, στη συνέχεια αυτό μεταφέρθηκε σε ογκομετρική φιάλη 100-mL και γεμίστηκε μέχρι τη χαραγή με απεσταγμένο νερό. Τέλος, 2 mL από αυτό το αραιωμένο διάλυμα χρησιμοποιήθηκαν για τον προσδιορισμό των διαλυτών σακχάρων.

Παρασκευή δειγμάτων Πολυσακχαριτών

Τα ιζήματα από την εκχύλιση των διαλυτών σακχάρων ξηράνθηκαν στον αέρα και εκχυλίστηκαν με 25 mL απεσταγμένου νερού με υπερήχους KQ- 250DE στα 40 kHz, 150 W και 80 βαθμούς για 30 λεπτά. Το πρώτο εκχυλιστικό διάλυμα διηθήθηκε και μεταφέρθηκε σε ογκομετρική φιάλη 50-mL. Τα ιζήματα εκχυλίστηκαν εκ νέου και το διήθημα συνδυάστηκε με το πρώτο εκχυλιστικό διάλυμα στην ογκομετρική φιάλη 50-mL και γεμίστηκε μέχρι τη χαραγή με απεσταγμένο νερό. Στη συνέχεια, ένα 5-mL διάλυμα αυτού μεταφέρθηκε με πιπέτα σε μια ογκομετρική φιάλη 50-mL και γεμίστηκε μέχρι τη χαραγή με απεσταγμένο νερό. Τέλος, 2 mL από αυτό το αραιωμένο διάλυμα χρησιμοποιήθηκαν για τον προσδιορισμό των πολυσακχαριτών.

Προσδιορισμός Διαλυτών Σακχάρων και Πολυσακχαριτών

Ο προσδιορισμός των διαλυτών σακχάρων και πολυσακχαριτών διεξήχθη χρησιμοποιώντας τη μέθοδο φαινόλης-θειικού οξέος, όπως περιγράφεται από τους Wang et al. 24) Ένα χιλιοστόλιτρο διαλύματος φαινόλης 6 τοις εκατό προστέθηκε σε 2 mL του διαλύματος του δείγματος και αναμίχθηκε καλά. Στη συνέχεια, προστέθηκαν ταχέως 5 mL πυκνού θειικού οξέος και ανακινήθηκαν για 5 λεπτά. Το μίγμα μεταφέρθηκε σε λουτρό ζέοντος νερού για 15 λεπτά και ψύχθηκε γρήγορα σε θερμοκρασία δωματίου για ανίχνευση υπεριώδους. Η απορρόφηση υπεριώδους ακτινοβολίας παρακολουθήθηκε στα 490 nm σε φασματοφωτόμετρο UV2550 (Shimadzu Co., Κιότο, Ιαπωνία). Ως τυφλό χρησιμοποιήθηκε απεσταγμένο νερό. Η πρότυπη άνυδρη D-γλυκόζη αναφοράς ζυγίστηκε με ακρίβεια και διαλύθηκε σε απεσταγμένο νερό σε τελική συγκέντρωση 0,10 mg/mL. Στη συνέχεια, 1, 2, 3, 4, 5, 6 και 7 ml του μητρικού διαλύματος μεταφέρθηκαν με πιπέτα σε επτά ογκομετρικές φιάλες 10-mL και γεμίστηκαν μέχρι τη χαραγή με απεσταγμένο νερό. Στη συνέχεια χρησιμοποιήθηκαν οι επτά διαφορετικές συγκεντρώσεις τυπικών διαλυμάτων για τη δημιουργία καμπυλών βαθμονόμησης.

Αραιωμένα Αιθανόλη-Διαλυτά Εκχυλίσματα

Τα δείγματα (4.0 g) ζυγίστηκαν με ακρίβεια για να προσδιοριστούν τα αραιά διαλυτά σε αιθανόλη εκχυλίσματά τους, σύμφωνα με τη μέθοδο που περιγράφεται στην Κινεζική Φαρμακοποιία (έκδοση 2015).25) Το δείγμα σε σκόνη ζυγίστηκε (W3) και εκχυλίστηκε με 100 mL υδατικού διαλύματος αιθανόλης 50 τοις εκατό σε κωνική φιάλη 250-mL με περιστασιακή ανακίνηση για 6 ώρες και αφήνεται σε ηρεμία για 18 ώρες. Το εκχυλιστικό διάλυμα διηθήθηκε και 20 ml του διηθήματος εξατμίστηκαν μέχρι ξηρού, ξηράνθηκαν στους 105 βαθμούς για 3 ώρες και ψύχθηκε σε ξηραντήρα (πήγμα πυριτίας) για 30 λεπτά. Τέλος, η ποσότητα ζυγίστηκε με ακρίβεια (W4). Η περιεκτικότητα σε αραιό διαλυτό σε αιθανόλη εκχύλισμα εκφράστηκε ως g/kg FW του δείγματος. Τα αραιά διαλυτά σε αιθανόλη εκχυλίσματα υπολογίστηκαν ως εξής: αραιά διαλυτά σε αιθανόλη εκχυλίσματα (g/kg FW)=[(W4×5)/W3]×(100−W5)×10, όπου W3 είναι το αρχικό βάρος , W4 είναι το βάρος που μετράται μετά την εκχύλιση και W5 είναι η απώλεια βάρους μετά το στέγνωμα στο φούρνο (%).

Στατιστική ανάλυση

Για να διευκρινιστούν τυχόν διαφορές μεταξύ των ομάδων θεραπείας, εφαρμόστηκε μονόδρομη ANOVA χρησιμοποιώντας SPSS 13.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Οι διαφορές αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας τη δοκιμή Duncan με όριο σημαντικότητας 0,05. Τα δεδομένα εκφράστηκαν ως η μέση ± τυπική απόκλιση (SD) (n=3).

Αποτελέσματα και συζήτηση

Απώλεια βάρους

Το βάρος των φετών C. deserticola καθορίζει άμεσα την εμπορική του αξία στην αγορά των φαρμακευτικών βοτάνων. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 1, η απώλεια βάρους του C. deserticola αναλύθηκε μετά από επεξεργασία υψηλής θερμότητας και ξήρανση σε φούρνο. Χαμηλότερα επίπεδα απώλειας βάρους βρέθηκαν όταν οι φέτες στέγνωσαν απευθείας στον φούρνο αντί να μαγειρευτούν στον ατμό ή να ασπρίσουν. Τα λευκασμένα δείγματα είχαν τα υψηλότερα επίπεδα απώλειας βάρους. Τα δείγματα στον ατμό είχαν υψηλότερα επίπεδα απώλειας βάρους με μεγαλύτερο χρόνο μαγειρέματος στον ατμό. Επτά λεπτά ψησίματος στον ατμό, ο μεγαλύτερος χρόνος για να κρατήσουν το σχήμα τους οι φρεσκοκομμένες φέτες έδειξε σημαντικά (σ.<0.05) higher="" levels="" of="" weight="" loss="" after="" oven-drying="" than="" 5="" min="" of="" steaming.="" since="" phenylethanoid="" glycosides="" had="" been="" detected="" in="" the="" hot="" water="" (data="" not="" shown),="" it="" suggested="" that="" blanching/steaming="" promoted="" more="" water-soluble="" compounds="" to="" be="" dissolved="" in="" the="" hot="" water.="" concerning="" weight="" loss="" after="" high-heat="" exposure,="" samples="" steamed="" for="" 1="" min="" exhibited="" extremely="" low="" weight="" loss.="" therefore,="" 1="" min="" of="" steaming="" was="" too="" short="" to="" make="" the="">Cistancheιστός εύθραυστος, επομένως ήταν λιγότερο ικανός να απελευθερώσει βιοδραστικές ενώσεις (όπως φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες) κατά τη διάρκεια της επακόλουθης διαδικασίας εκχύλισης, σε σύγκριση με δείγματα που είχαν μαγειρευτεί περισσότερο στον ατμό.

Φαινυλαιθανοειδείς Γλυκοζίτες

Τα επίπεδα εχινακοσίδης, κιστανοσίδης Α, ακτεοσίδης, ισοακτεοσίδης και 2'-ακετυλακτεοσίδης σε φέτες C. deserticola που έχουν υποστεί επεξεργασία με διαφορετικές μεθόδους φαίνονται στο Σχήμα 1. Δείγματα στον ατμό για 7 λεπτά περιείχαν 2,16 g/kg FW εχινακοσίδης και {{6} },29 g/kg FW σιστανοζίτη Α, αύξηση −140 και −6 φορές, αντίστοιχα, σε σύγκριση με τις φρέσκες φέτες. Η περιεκτικότητα σε φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες αυξήθηκε απότομα όταν τα φρέσκα δείγματα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με υψηλή θερμότητα και ξήρανση, ειδικά ακτεοσίδη, ισοακτεοσίδη και 2'-ακετυλακτεοσίδη, ενώ δεν ανιχνεύθηκαν στα φρέσκα δείγματα. Ένας πιθανός λόγος για αυτό θα μπορούσε να είναι η αποικοδόμηση των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών από την υπεροξειδάση και τη -γλυκοσιδάση.26) Αυτά τα ένζυμα θα αδρανοποιούνταν στα δείγματα που ξηράνθηκαν από υψηλές θερμοκρασίες και μειωμένη περιεκτικότητα σε νερό, οδηγώντας σε υψηλά επίπεδα φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων που διατηρούνται στα εκχυλίσματα. Επιπλέον, οι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες είναι φαινολικές ενώσεις, οι οποίες θα συντίθενται σε φρέσκα φυτά ως απόκριση στο στρες της υψηλής θερμοκρασίας και της απώλειας υγρασίας.27)

Τόσο ο ατμός όσο και η λεύκανση του φρεσκοκομμένου C. deserticola αναφέρθηκε ότι ενίσχυσαν την περιεκτικότητα σε εχινακοσίδη και ακτεοσίδη.19,20) Ωστόσο, στην παρούσα μελέτη, η λεύκανση έδωσε σημαντικά (σ.<0.05) lower="" concentration="" of="" acteoside="" and="" cistanoside="" a="" than="" drying="" directly.="" regarding="" the="" total="" concentration="" of="" the="" five="" phenylethanoid="" glycosides,="" the="" blanched="" samples="" were="" still="" lower="" than="" the="" directly="" oven-dried="" ones="" (1.73,="" 2.35="" g/kg="" fw,="" respectively).="" slices="" steamed="" for="" 5="" and="" 7="" min="" contained="" significantly=""><0.05) higher="" amounts="" of="" acteoside,="" isoacteoside,="" and="" 2′-acetylacteoside="" than="" directly="" oven-dried="" samples.="" in="" general,="" the="" highest="" levels="" of="" phenylethanoid="" glycosides="" were="" found="" in="" the="" steamed="" samples,="" suggesting="" that="" the="" above-mentioned="" pharmacological="" activities="" produced="" by="" phenylethanoid="" glycosides="" in="" c.="" deserticola="" slices="" may="" be="" enhanced="" by="" steaming="">

Επιπλέον, διαπιστώσαμε ότι ο χρόνος ατμού ήταν κρίσιμος για τον προσδιορισμό της περιεκτικότητας σε φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες. Η εχινακοσίδη, η κιστανοσίδη Α, η ακτεοσίδη και η ισοακτεοσίδη παρουσίασαν παρόμοια αυξητική τάση κατά τη διαδικασία ατμού, η οποία αυξήθηκε απότομα (στο 1, 3 λεπτά) και έφτασε τα μέγιστα επίπεδά τους στα 7 λεπτά. Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές αλλαγές στους τέσσερις προαναφερθέντες φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίτες κατά τη διάρκεια της διαδικασίας ατμού από 3 έως 7 λεπτά. Αντίθετα, 2'-ακετυλ-

Η ακτεοσίδη αυξήθηκε σημαντικά (σελ<0.05) with="" processing="" time.="" notably,="" the="" levels="" of="" phenylethanoid="" glycosides="" in="" slices="" steamed="" for="" 1="" min="" were="" significantly=""><0.05) lower="" than="" directly="" oven-dried="" slices,="" except="" isoacteoside.="" therefore,="" 1="" min="" steaming="" of="" 3-mm="" fresh-cut="" c.="" deserticola="" was="" not="" long="" enough="" to="" inactivate="" the="" above-mentioned="" enzymes.="" higher="" total="" levels="" of="" the="" five="" phenylethanoid="" glycosides="" were="" observed="" when="" the="" slices="" were="" steamed="" for="" 5="" and="" 7="" min="" (3.20,="" 3.52="" g/kg="" fw,="" respectively)="" rather="" than="" directly="" oven="" drying.="" steaming="" from="" 5="" to="" 7="" min="" more="" effectively="" promoted="" the="" extraction="" of="" phenylethanoid="" glycosides="" from="" c.="" deserticola,="" leading="" to="" a="" higher="" level="" of="" phenylethanoid="" glycosides="" in="" the="">

Αντιοξειδωτική Δραστηριότητα

Οι αντιοξειδωτικές ιδιότητες των φετών, όπως προσδιορίστηκαν από τα ORAC, DPPH και FRAP, παρουσιάζονται στο Σχήμα 2. Όπως αναμενόταν, οι τιμές ORAC έδειξαν μεγάλη διακύμανση μεταξύ των δειγμάτων, που κυμαίνονταν από 13,34 μmol TE/g FW σε φρέσκα δείγματα. σε 108,62 μmol TE/g FW σε 7 λεπτά στον ατμό. Κατά τη διαδικασία ατμού, η τιμή ORAC αυξήθηκε 4- φορές μεταξύ 1 και 7 λεπτών στον ατμό. Παρόμοιες τάσεις παρατηρήθηκαν και στις δύο δοκιμές DPPH και FRAP, παρουσιάζοντας γρήγορες αυξήσεις κατά τη διάρκεια της επεξεργασίας στον ατμό. Αν και τα δείγματα που υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με ατμό είχαν αρχικά χαμηλότερες αντιοξειδωτικές τιμές (σε 1 λεπτό), έδειξαν πολύ καλύτερη διατήρηση της αντιοξειδωτικής ικανότητας κατά τη διάρκεια της διαδικασίας. Στην περίπτωση της λεύκανσης, δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές στις αντιοξειδωτικές ιδιότητες σε σύγκριση με την απευθείας ξήρανση σε φούρνο.

Η αντιοξειδωτική δράση του ORAC είτε σε ακατέργαστα στελέχη είτε σε φέτες C. deserticola δεν έχει αναφερθεί προηγουμένως. Ωστόσο, τα αιθανολικά εκχυλίσματα των ακατέργαστων στελεχών του C. deserticola έχουν μετρηθεί στις αναλύσεις DPPH και FRAP,28) παρουσιάζοντας υψηλή αντιοξειδωτική δράση, ελαφρώς χαμηλότερη από 2(3)-t-βουτυλ-4-υδροξυανισόλη (BHA) και υψηλότερο από το BHT. Επιπλέον, οι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες που απομονώθηκαν από το C. deserticola εμφάνισαν ισχυρές δραστηριότητες σάρωσης DPPH, ελαφρώς χαμηλότερες από το ασκορβικό οξύ29) και υψηλότερες από -τοκοφερόλη. 2) Το C. deserticola μπορεί να είναι μια πιθανή πηγή φυσικών αντιοξειδωτικών, καθώς οι αντιοξειδωτικές ιδιότητες των απομονωμένων καθαρών ενώσεων από το C. deserticola ήταν υψηλότερα από αυτά ορισμένων συνθετικών αντιοξειδωτικών. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 2, το ΒΗΤ παρουσίασε σημαντικά (σελ<0.05) higher="" antioxidant="" properties="" than="" c.="" deserticola="" slices="" steamed="" for="" 7="" min.="" therefore,="" there="" is="" still="" a="" big="" gap="" between="" c.="" deserticola="" slices="" and="" synthetic="" antioxidants="" of="" equal="">

Η ανάλυση DPPH χρησιμοποιεί μηχανισμούς μεταφοράς ατόμου υδρογόνου (HAT) και μεταφοράς απλού ηλεκτρονίου (SET), ενώ οι προσδιορισμοί ORAC και FRAP ακολουθούν τις αρχές των αντιδράσεων HAT και SET, αντίστοιχα.30) Στην παρούσα μελέτη, οι γενικές τάσεις της αντιοξειδωτικής ικανότητας που αξιολογήθηκαν από τις τρεις αναλύσεις ήταν πολύ παρόμοιες. Έτσι, επιβεβαιώσαμε ότι οι αποξηραμένες φέτες C. deserticola (βρασμένες στον ατμό, απευθείας στον φούρνο και ασπρισμένες) είχαν σημαντικά (σ.<0.05) higher="" levels="" of="" antioxidant="" activity="" than="" fresh="" ones.="" furthermore,="" steaming="" for="" 5="" and="" 7="" min="" significantly=""><0.05) enhanced="" levels="" of="" antioxidant="" activity="" compared="" with="" directly="" oven="" drying="" and="" blanching.="" overall,="" our="" results="" showed="" that="" steaming="" of="" fresh-cut="" c.="" deserticola="" slices="" was="" effective="" in="" preserving="" phenylethanoid="" glycoside="" levels="" and="" antioxidant="">

Διαλυτά σάκχαρα, πολυσακχαρίτες και αραιά διαλυτά σε αιθανόλη εκχυλίσματα

As shown in Fig. 3, levels of soluble sugars and polysaccharides exhibited the following descending order: fresh>directly oven-dried>steamed>ασπρισμένο. Οι λευκασμένες φέτες είχαν πολύ χαμηλά επίπεδα διαλυτών σακχάρων, πολυσακχαριτών και αραιού διαλυτού σε αιθανόλη εκχυλίσματος, που αντιστοιχούσαν καλά με την υψηλή απώλεια βάρους τους. Τα νωπά δείγματα είχαν σημαντικά (σελ<0.05) higher="" content="" of="" soluble="" sugars="" (62.89="" g/kg="" fw)="" and="" polysaccharides="" (17.36="" g/kg="" fw)="" than="" the="" other="" samples,="" suggesting="" that="" heat="" treatment="" (oven="" drying,="" steaming,="" blanching)="" on="" fresh-cut="" samples="" would="" reduce="" the="" extraction="" of="" soluble="" sugars="" and="" polysaccharides.="" heat="" treatment="" inhibited="" the="" hydrolysis="" of="" phenylethanoid="" glycosides="" to="" release="" glucose,="" rhamnose,="" and="" so="" on.="" moreover,="" heat="" treatment,="" used="" as="" abiotic="" stress="" factors="" on="" fresh="" slices,="" gave="" rise="" to="" the="" synthesis="" of="" several="" phenylpropanoid="" compounds="" including="" phenylethanoid="" glycosides.27)="" particularly,="" sugars="" contained="" in="" the="" slices="" were="" dissolved="" in="" the="" hot="" water="" to="" different="" extents="" by="" steaming="" or="" blanching.="" thus,="" it="" is="" not="" surprising="" to="" see="" that="" the="" content="" of="" soluble="" sugars="" decreased="" by="" 23.88%="" in="" steaming="" and="" by="" 60.82%="" in="" blanching,="" while="" the="" content="" of="" polysaccharides="" decreased="" by="" 41.33%="" in="" steaming="" and="" by="" 53.83%="" in="" blanching,="" compared="" with="" fresh="" slices.="" it="" has="" been="" reported="" that="" the="" steaming="" process="" can="" increase="" reducing="" sugars="" and="" acidic="" polysaccharides="" in="" ginseng="" radix="" et="" rhizoma,18)="" and="" mono="" sugars,="" including="" galactose="" and="" glucose,="" in="" rehmanniae="" radix.17)="" however,="" the="" whole="" dried="" crude="" drugs="" studied="" in="" the="" above-mentioned="" literature="" were="" quite="" different="" from="" the="" fresh-cut="" slices="" used="" in="" the="" present="">

Οι φέτες που είχαν αποξηρανθεί απευθείας σε φούρνο είχαν την υψηλότερη περιεκτικότητα σε αραιά διαλυτά σε αιθανόλη εκχυλίσματα (89,26 g/kg FW), ενώ οι ασπρισμένες φέτες είχαν τη χαμηλότερη (47,60 g/kg FW). Αν και όλες οι επεξεργασμένες φέτες C. deserticola πληρούσαν το πρότυπο της Κινεζικής Φαρμακοποιίας (έκδοση 2015) για να χαρακτηριστούν ως Cistanches Herba, οι ασπρισμένες φέτες θα αποφέρουν λιγότερα οφέλη για την υγεία από τα δείγματα που έχουν αποξηρανθεί απευθείας σε φούρνο για τη σοβαρή απώλεια αραιής διαλυτής αιθανόλης εκχυλίσματα. Όσον αφορά τη διαδικασία ατμού, η τάση των διαλυτών σακχάρων ήταν πολύ παρόμοια με την τάση που παρατηρήθηκε για τα αραιά διαλυτά σε αιθανόλη εκχυλίσματα, μειώνοντας σταδιακά χωρίς να παρατηρούνται σημαντικές αλλαγές από 3 έως 7 λεπτά. Η συγκέντρωση των πολυσακχαριτών κυμάνθηκε με μια ελαφρά αύξηση σε όλη την περίοδο ατμού. Είναι αξιοσημείωτο ότι 7 λεπτά στον ατμό έδειξε καλή διατήρηση των πολυσακχαριτών αλλά μεγάλη απώλεια διαλυτών σακχάρων, ενώ 5 λεπτά στον ατμό έδειξε αντίστροφα, σε σύγκριση με την απευθείας ξήρανση σε φούρνο.

συμπέρασμα

Έχουμε αναφέρει την επίδραση του ατμού σε βιοδραστικές ενώσεις και την αντιοξειδωτική δράση σε φρέσκο ​​κομμένο C. deserticola για πρώτη φορά και παρέχουμε σημαντικές πληροφορίες για την ανάπτυξη αποτελεσματικών διαδικασιών για την επεξεργασία μετά τη συγκομιδή των στελεχών του C. deserticola. Οι φρέσκες φέτες έδειξαν τη χειρότερη αποτελεσματικότητα για την εκχύλιση φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων και αντιοξειδωτικών ενώσεων, αποκαλύπτοντας ότι αυτές οι ουσίες ήταν επιρρεπείς σε ενζυμική αποικοδόμηση. Αντίθετα, τα δείγματα στον ατμό είχαν τα υψηλότερα επίπεδα φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών και αντιοξειδωτικών δράσεων. Αν και η λεύκανση ενίσχυσε ελαφρώς την περιεκτικότητα σε ακτεοσίδη, ισοακτεοσίδη και 2'-ακετυλακτεοζίτη σε σύγκριση με την απευθείας ξήρανση σε φούρνο, οι τιμές για το βάρος, τα διαλυτά σάκχαρα, τους πολυσακχαρίτες και τα αραιά διαλυτά σε αιθανόλη εκχυλίσματα μειώθηκαν δραματικά. Για τη διαδικασία του ατμού, τα επίπεδα των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων και πολυσακχαριτών αυξήθηκαν ελαφρώς με την πάροδο του χρόνου. Μαγείρεμα στον ατμό για 5 και 7 λεπτά σημαντικά (σελ<0.05) enhanced="" total="" levels="" of="" the="" five="" phenylethanoid="" glycosides="" than="" directly="" oven="" drying.="" however,="" the="" longer="" the="" steaming="" process,="" the="" greater="" the="" decrease="" in="" weight,="" soluble="" sugars,="" and="" dilute="" ethanol-soluble="" extracts.="" no="" significant="" decrease="" in="" soluble="" sugars="" was="" observed="" when="" slices="" were="" steamed="" from="" 1="" to="" 5="" min="" compared="" with="" directly="" oven-dried="" samples.="" the="" steaming="" time="" had="" a="" consistent="" effect="" on="" the="" antioxidant="" properties,="" with="" a="" significant="" increase="" evaluated="" by="" the="" dpph,="" orac,="" and="" frap="" assays.="" it="" was="" concluded="" that="" c.="" deserticola="" slices="" can="" be="" successfully="" treated="" with="" 5="" to="" 7="" min="" of="" steaming="" to="" improve="" the="" phenylethanoid="" glycoside="" levels="" and="" antioxidant="" activity,="" while="" preserving="" the="" amounts="" of="" soluble="" sugars,="" polysaccharides,="" and="" dilute="" ethanol-soluble="">

κιστανάκιείναι ένας αναστολέας τυροσινάσης που μπορείαντιοξείδωση

Ευχαριστίες

Αυτή η εργασία υποστηρίχθηκε από το έργο του Εθνικού Ιδρύματος Φυσικών Επιστημών της Κίνας με το Grant No. Ευχαριστούμε πολύ τον Δρ. Zhiguo Ma για την παρουσίαση των προτύπων και τους Yucheng Chang και Yuan Liu για τη συγκομιδή και τη συλλογή φυτικών υλικών στη Φυτεία Cistanches Herba Ningxia.

Σύγκρουση συμφερόντων

Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν υπάρχει σύγκρουση συμφερόντων.

Συμπληρωματικά Υλικά

Η ηλεκτρονική έκδοση αυτού του άρθρου περιέχει συμπληρωματικό υλικό.

βιβλιογραφικές αναφορές

1) Wang T., Zhang XY, Xie WY, Am. J. Chin. Med., 40, 1123-1141 (2012).

2) Xiong Q., Kadota S., Tani Τ., Namba Τ., Biol. Pharm. Bull., 19, 1580–1585 (1996).

3) Sui ZF, Gu TM, Liu B., Peng SW, Zhao ZL, Li L., Shi DF, Yang RY, Carbohydr. Polym., 85, 75–79 (2011).

4) Luo L., Wu XC, Gao HJ, Lv SZ, Wang JH, Wang XW, Chin. Pharm., 24, 2122–2125 (2013).

5) Luo L., Tuerxun A., Wang XW, Chin. J. New Drugs Clin. Rem., 29, 115–118 (2010).

6) Xiong Q., Hase Κ., Tezuka Υ., Tani Τ., Namba Τ., Kadota S., Planta Med., 64, 120-125 (1998).

7) Wang XY, Qi Y., Cai RL, Li XH, Yang MH, Shi Y., Acta Lab. Anim. Sci. Sin., 17, 424–427 (2009).

8) Dong Q., Yao J., Fang JN, Ding Κ., Carbohydr. Res., 342, 1343– 1349 (2007).

9) Wang XY, Qi Y., Cai RL, Li XH, Yang MH, Shi Y., Chin. Pharmacol. Bull., 25, 787–790 (2009).

10) Gao JY, Jiang Y., Dai F., Han ZL, Liu HY, Bao Z., Zhang TM, Tu PF, Mod. Πηγούνι. Med., 17, 307-310, 314 (2015).

11) Xue DJ, Zhang M., Wu XH, Chen XD, Zhan YC, Chin. J. Chin. Μητήρ. Med., 20, 687-689, 704 (1995).

12) Lu D., Zhang JY, Yang ZY, Liu HM, Li S., Wu BJ, Ma ZG, J. Sep. Sci., 36, 1945–1952 (2013).

13) Xu R., Chen J., Chen SL, Liu TN, Zhu WC, Xu J., Genet. Ξυνό. Crop Evol., 56, 137–142 (2009).

14) Ornelas-Paz Jde J., Yahia ΕΜ, J. Sci. Food Agric., 94, 1078–1083 (2014).

15) Yun Z., Gao HJ, Liu P., Liu SZ, Luo T., Jin S., Xu Q., Xu J., Cheng YJ, Deng XX, BMC Plant Biol., 13, 44 (2013).

16) Gorinstein S., Leontowicz Η., Leontowicz Μ., Namiesnik J., Najman Κ., Drzewiecki J., Cvikrová Μ., Martincová Ο., Katrich Ε., Trakhtenberg S., J. Agric. Food Chem., 56, 4418-4426 (2008).

17) Chang WT, Choi YH, Van Der Heijden R., Lee MS, Lin MK, Kong HW, Kim HK, Verpoorte R., Hankemeier Τ., Van Der Greef J., Wang Μ., Chem. Pharm. Bull., 59, 546–552 (2011).

18) Jin Y., Kim YJ, Jeon JN, Wang C., Min JW, Noh HY, Yang DC, Plant Foods Hum. Nutr., 70, 141–145 (2015).

19) Lei L., Wang XY, CN Patent 200810059282.7 (2009).

20) Tu PF, Qi XB, Jiang Y., Feng J., CN Patent 200410048303.7 (2005).

21) Ma ZG, Yang ZL, Li Ρ., Li CH, J. Liquid Chromatogr. Σχετ. Technol., 31, 2838–2850 (2008).

22) Huang D., Ou BX, Hampsch-Woodill Μ., Flanagan JA, Prior RL, J. Agric. Food Chem., 50, 4437-4444 (2002).

23) Goupy Ρ., Hugues Μ., Boivin Ρ., Amiot MJ, J. Sci. Food Agric., 79, 1625–1634 (1999).

24) Wang LN, Chen J., Yang MH, Chen SL, Shi Y., Qi Y., Liu TN, Chin. Pharm., 18, 1620–1623 (2007).

25) "Chinese Pharmacopoeia Commission, Pharmacopoeia of the People's Republic of China 2015," Volume IV, China Medical Science Press, Beijing, 2015, σελ. 202.

26) Tamura Y., Nishibe S., J. Agric. Food Chem., 50, 2514-2518 (2002).

27) Hossain MB, Barry-Ryan C., Martin-Diana AB, Brunton NP, Food Chem., 123, 85–91 (2010).

28) Chen BQ, Liu YX, Kang WY, Fine Chem., 27, 342–345 (2010).

29) Yang JH, Hu JP, Rena Κ., Du NS, J. Chin. Med. Mater., 32, 1067–1069 (2009).

30) Prior RL, Wu X., Schaich Κ., J. Agric. Food Chem., 53, 4290-4302 (2005).