Αξιολόγηση των ιδιοτήτων αντι-τυροσινάσης, αντι-ελαστάσης και αντι-ακετυλοχολινεστεράσης των ζυμωμένων φύλλων μάνγκο σε διαφορετικά επίπεδα ωριμότητας

Παρακαλώ επικοινώνησεoscar.xiao@wecistanche.comΓια περισσότερες πληροφορίες

ΠΕΡΙΛΗΨΗ

Daun mangga diketahui mempunyai banyak manfaat kesihatan tetapi industri hanya mementingkan pengeluaran buah mangga, menyebabkan banyak daun mangga yang tidak digunakan sebaiknya. Dalam kajian ini, kami berjaya menambahbaik daun mangga dengan menghasilkan minuman fermentasi baharu yang mempunyai rasa yang menyenangkan melalui proses bio-fermentasi. Daun mangga dengan kematangan yang berbeza telah dipilih: daun pramatang (coklat muda, LBML); daun matang perantaraan (hijau muda, LGML) dan daun matang (hijau, ML) dan menjalani proses penapaian menggunakan kultur campuraln bakteria dan yis. Kandungan tanin, profil asid organik dan pelbagai aktiviti berfungsi enzim(contoh: perencatan tirosinase, elastase dan asetilkolinesterase) dikaji pada minuman mangga difermentasi. Πενγκουράνγκαν καντούνγκαν τανίν παντασέμουα ντάουν μάνγκα γιανγκ ντιφερμέντασι τελαχ μενγιεμπκάν κουράνγκ ράσα παχίτ ακιμπάτ τιντάκαν πινγκουραιαν τανιν ολεχ μικροοργανισμός. Asid asetik, oksalat, kojik dan kuinik yang dikesan di dalam daun mangga difermentasi menyumbang kepada rasa yang bersifat sedikit berasid. Secara perbandingan, kepada daun mangga yang tidak difermentusi, terutamanya minuman LBML menunjukkan peningkatan (P<0.05)terhadap perencatan="" tirosinase(87.96%).daun="" mangga="" yang="" difermentasijuga="" menunjukkan="" aktiviti="" perencatan="" yang="" baik="" terhadap="" aktiviti="" elastase(="">8%) dan asetilkolinesterase (>90 τοις εκατό). Tambahan pula, kajian histopatologi terhadap pelbagai organ tikus (buah pinggang, hati, limpadan perut)menunjukkan tiada gejala keradangan. Το Melalui penilaian είχε keracunan toksikologi, kadar penggunaan selamat (nilai IC,) untuk daun mangga terfermentasi adalah 1000 mL/50 kg berat badan manusia. Peningkatan aktiviti berfungsi ke atas daun mangga difermentasi dengan kadar perencatan yang tinggi terhadap tirosinase, elastase dan asetilkolinesterase menunjukkan potensi yang besar sebagai makanan kesihatan untuk rawatan anti-penuaan.

Κάντε κλικ εδώ για να μάθετε περισσότερα

ΕΙΣΑΓΩΓΗ

Σήμερα, πολλοί ερευνητές επέλεξαν να μελετήσουν φυσικά συστατικά που ωφελούν την ανθρώπινη υγεία. Αξιοποιούν τους άφθονους φυσικούς διαθέσιμους πόρους για να μετατραπούν σε μια ποικιλία προϊόντων καλής υγείας. Σε αυτή τη μελέτη, επιλέξαμε φύλλα μάνγκο λόγω της άφθονης διαθεσιμότητάς τους, τα οποία θα απορρίπτονταν πάντα ως γεωργικά απόβλητα. Το μάνγκο ή επιστημονικά γνωστό ως Mangifera indica είναι ένα από τα εμπορικά τροπικά φρούτα στη Μαλαισία. Ωστόσο, τα δέντρα μάνγκο πρέπει να κλαδεύονται συχνά για να ενισχύσουν την επιθυμητή ανάπτυξη βλαστών, να ελέγξουν τα παράσιτα και τις ασθένειες καθώς και να διευκολύνουν τη συγκομιδή των καρπών (Poffley & Owens 2006). Αυτές οι διαδικασίες άφησαν μια σημαντική ποσότητα φύλλων ανεπαρκώς χρησιμοποιούμενη.

Τα φύλλα μάνγκο έχουν αναφερθεί ότι περιέχουν ένωση μαγγιφερίνης, η οποία ήταν γνωστό ότι έχει πολλά πλεονεκτήματα όπως αντιγηραντική, αντιδιαβητική, αντιοξειδωτική, αντικαρκινική και αντι-ιική (Kulkarni & Rathod 2018). Η μαγγιφερίνη είναι ένα από τα φυσικά φυτοχημικά που δρουν ως πιθανή ανθρώπινη αντιγηραντική ένωση (Song et al.2013).Μέθοδος εκχύλισης φλαβονοειδών pdfΗ γήρανση είναι μια πολύπλοκη βιολογική διαδικασία που χαρακτηρίζεται από σταδιακή απώλεια φυσιολογικών λειτουργιών και αυξημένη ευπάθεια στο θάνατο. Σύμφωνα με τους Rasul et al. (2012), η γήρανση του δέρματος προκλήθηκε από τη συνεχή έκθεση στην υπεριώδη ακτινοβολία που είχε ως αποτέλεσμα την καταστροφή του ανθρώπινου δέρματος. Η τυροσινάση είναι ένα ένζυμο με πολυλειτουργική, γλυκοζυλιωμένη, οξειδάση που περιέχει χαλκό που καταλύει τη μετατροπή της μελανίνης και άλλων χρωστικών από την τυροσίνη μέσω της διαδικασίας οξείδωσης, οι οποίες είναι υπεύθυνες για το σχηματισμό σκούρου δέρματος. Βρίσκεται μέσα στα μελανοσώματα και συντίθεται στα μελανοκύτταρα (Tu & Tawata 2015). Η αναστολή της τυροσινάσης μπορεί να αποτρέψει το σχηματισμό μελανίνης καθώς η υπερπαραγωγή μελανίνης μπορεί να οδηγήσει σε δερματικές διαταραχές (Ebanks et al.2009).

Το Cistanche μπορεί να αντιγηρανθεί

Έτσι, η αναστολή της τυροσινάσης είναι ένας από τους καλύτερους τρόπους για να ξεπεραστούν τα προβλήματα του σκούρου δέρματος. Η ελαστάση είναι ένα άλλο σημαντικό ένζυμο του δέρματος, το οποίο παίζει ρόλο στη διάσπαση της δομής της ελαστίνης στο δέρμα και στην πρόκληση του σχηματισμού ρυτίδων. Η αναστολή των ενζύμων ελαστάσης βοηθά στην πρόληψη της απώλειας της ελαστικότητας του δέρματος και στην καταπολέμηση της γήρανσης του δέρματος. Ευρήματα από τους Ochocka et al. (2017) έδειξε ότι η μαγγιφερίνη έχει την ικανότητα να αναστέλλει την καταλυτική δραστηριότητα της ελαστάσης, η οποία είναι υπεύθυνη για τη γήρανση του δέρματος. Επιπλέον, η γήρανση παίζει επίσης ρόλο στις περισσότερες νευροεκφυλιστικές ασθένειες όπως η νόσος του Αλτσχάιμερ. Η ακετυλχολινεστεράση είναι ένα ένζυμο που καταλύει τη διάσπαση της ακετυλοχολίνης που λειτουργεί ως νευροδιαβιβαστής, μια χημική ουσία που παράγεται από νευρικά κύτταρα ή νευρώνες. Μέχρι σήμερα δεν υπάρχει κάποιο συγκεκριμένο φάρμακο για τη θεραπεία του Αλτσχάιμερ.φλαβονοειδή,Ωστόσο, φάρμακα που εμπλέκονται στην αναστολή της χολινεστεράσης συνταγογραφούνται συνήθως για τη θεραπεία της νόσου. Ο αναστολέας της ακετυλοχολινεστεράσης είναι μια αποτελεσματική ένωση, η οποία παίζει αμυντικό ρόλο στη θεραπεία γνωστικών διαταραχών όπως το Alzheimer, η γεροντική, η άνοια, η αταξία, η βαριά μυασθένεια και οι ασθένειες του Parkinson (Colovic et al.2013). Ωστόσο, τα τελευταία χρόνια, συσσωρεύονται στοιχεία που έχουν δείξει ότι η μαγγιφερίνη στα φύλλα μάνγκο περιέχει πιθανές νευροπροστατευτικές ιδιότητες που μπορούν να συμβάλουν στη μείωση του προβλήματος της γήρανσης. Επιπλέον, η μαγγιφερίνη έχει επίσης τη δυνητική λειτουργία πρόληψης νευρολογικής βλάβης και άνοιας, καθώς και βελτίωσης της εξασθένησης της μάθησης και της μνήμης, όπως φαίνεται στο μοντέλο ποντικιού με επιτάχυνση της γήρανσης (Du et al.2019). Ως εκ τούτου, ο αναστολέας της ακετυλοχολινεστεράσης προσφέρει μια θεραπευτική εναλλακτική λύση για τη θεραπεία του Alzheimer.

Σε αυτή τη μελέτη, τα φύλλα μάνγκο ζυμώθηκαν με επιλεγμένες μικτές καλλιέργειες Komagataiebacter sp. βακτήρια και Dekkera sp. μαγιά με στόχο τη βελτίωση των λειτουργικών ιδιοτήτων των φύλλων μάνγκο. Η μικροβιακή ζύμωση θα μπορούσε να βοηθήσει στην ενίσχυση των πλεονεκτημάτων των φύλλων μάνγκο και στη βελτίωση των οργανοληπτικών ιδιοτήτων των τελικών προϊόντων που έχουν υποστεί ζύμωση. Σύμφωνα με τους Jayabalan et al. (2014), η διαδικασία ζύμωσης βελτίωσε τη λειτουργικότητα των προϊόντων φυσικής προέλευσης στο τσάι Kombucha. Ομοίως, οι Faria-Oliveira et al. (2015) έχουν δείξει ότι η διαδικασία ζύμωσης είναι μία από τις τεχνικές επεξεργασίας τροφίμων που χρησιμοποιούνται συνήθως για τη βελτίωση του τελικού προϊόντος με καλύτερη γεύση και άρωμα μέσω μικροβιολογικής δραστηριότητας. Κατά τη διάρκεια της ζύμωσης, μικροοργανισμοί όπως η μαγιά παράγουν κάποιους μεταβολίτες που μπορεί να συμβάλλουν στις επιθυμητές αρωματικές και γευστικές ενώσεις με την παρουσία ορισμένης ποσότητας αιθανόλης. Ταυτόχρονα, τα βακτήρια οξικού οξέος θα μεταβολίσουν την αλκοόλη που παράγεται από τη μαγιά σε οργανικά οξέα. Άλλοι μεταβολίτες που παράγονται κατά τη ζύμωση είναι τα απλά σάκχαρα και το διοξείδιο του άνθρακα (Neffe-Skoci'nska et al.2017). Η τοξικολογική μελέτη σε φύλλα μάνγκο που έχουν υποστεί ζύμωση διερευνήθηκε επίσης για να διασφαλιστεί η πτυχή της ασφάλειας της κατανάλωσης αυτού του ποτού από φύλλα μάνγκο που έχουν υποστεί ζύμωση.

ΥΛΙΚΑ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΙ

ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΦΥΤΙΚΟΥ ΥΛΙΚΟΥ ΚΑΙ ΖΥΜΩΣΗΣ Τα φύλλα μάνγκο από την ποικιλία Mangifera indica Chokanan συλλέχθηκαν από το οικόπεδο μάνγκο MARDI στο Serdang (Selangor, Μαλαισία). Τα φύλλα πλύθηκαν για να απομακρυνθεί η βρωμιά και στέγνωσαν σε φούρνο σε επεξεργασμένο ξηραντήριο στους 40 βαθμούς για 48 ώρες.χρήσεις της εσπεριδίνηςΤα αποξηραμένα φύλλα στη συνέχεια αλέστηκαν χρησιμοποιώντας έναν υπερφυγόκεντρο μύλο (Retsch, ZM 200, Haan, Γερμανία) σε μέγεθος σωματιδίων 0,5 mm και συσκευάστηκαν σε κενό πριν από την αποθήκευση στους 4 βαθμούς για μελλοντική χρήση. Επιλέχθηκαν φύλλα μάνγκο με διαφορετικά στάδια ωριμότητας. πρόωρα φύλλα (ανοιχτό καφέ, LBML). ενδιάμεσα ώριμα φύλλα (ανοιχτό πράσινο, LGML) και ώριμα φύλλα (πράσινα, ML) όπως περιγράφονται στο Σχήμα 1. Τα φύλλα μάνγκο ζυμώθηκαν με επιλεγμένες συμβιωτικές καλλιέργειες βακτηρίων (Komagataiebacter sp.) και ζυμομύκητα (Dekkera sp.), γνωστά ως SCOBY για οκτώ ημέρες σε θερμοκοιτίδα αναδευτήρα (New Brunswick Innova@42/42R, Eppendorf AG, Γερμανία) με ελεγχόμενη θερμοκρασία στους 30 βαθμούς. Τα ζυμωμένα φύλλα μάνγκο φυγοκεντρήθηκαν στις 10,000 rpm για 5 λεπτά (Centrifuge 5810 R, Eppendorf, Γερμανία) για να συλλεχθεί το υπερκείμενο αφαιρώντας το μικρόβιο και τα υπολείμματα του υποστρώματος. Το CO και το D8 χαρακτηρίστηκαν ως φύλλα μάνγκο που δεν έχουν υποστεί ζύμωση και φύλλα μάνγκο που έχουν υποστεί ζύμωση, αντίστοιχα.

ΑΞΙΟΛΟΓΗΣΗ ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΟΥ ΤΑΝΝΙΝΗΣ ΦΥΛΛΟΥ ΜΑΝΓΚΟ ΖΥΜΩΜΕΝΟ

Η περιεκτικότητα σε τανίνες των ζυμωμένων φύλλων μάνγκο προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας τη φασματοφωτομετρική μέθοδο Folin-Ciocalteu με γαλλικό οξύ ως πρότυπο (Tambe &Bhambar 2014). Κατά προσέγγιση, 0.1 mL εκχυλίσματος φύλλων μάνγκο που έχουν υποστεί ζύμωση προστέθηκε σε ογκομετρική φιάλη που περιείχε 7,5 mL απεσταγμένου νερού, 0,5 mL αντιδραστηρίου φολίνης-Ciocalteu-φαινόλης και 1 mL διαλύματος Na CO 35 τοις εκατό πριν αραιωθεί με 10 mL απεσταγμένο νερό. Το μίγμα ανακινήθηκε καλά και διατηρήθηκε σε θερμοκρασία δωματίου για 30 λεπτά. Η απορρόφηση μετρήθηκε στα 725 nm χρησιμοποιώντας ένα ορατό φασματοφωτόμετρο υπεριώδους (Varian Cary③ 50 Conc UV-Vis φασματοφωτόμετρο, Varian Inc., USA).

ΑΞΙΟΛΟΓΗΣΗ ΟΡΓΑΝΙΚΩΝ ΟΞΕΩΝ ΤΩΝ ΖΥΜΩΜΕΝΩΝ ΦΥΛΛΩΝ ΜΑΝΓΚΟ

Το προφίλ οργανικών οξέων των φύλλων μάνγκο που έχουν υποστεί ζύμωση πραγματοποιήθηκε με υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC), Alliance Separation Module uopoop Keur oporp e unto poddinbo (S697's. IOPPM) (Waters,2996) και η παράμετρος λειτουργίας διεξήχθη σύμφωνα με τη διαδικασία ως περιγράφεται στους Koh et al. (2019). Ο ποσοτικός προσδιορισμός των οργανικών οξέων προσδιορίστηκε από την μεμονωμένη τυπική καμπύλη βαθμονόμησης οργανικού οξέος. Όλη η ανάλυση έγινε εις τριπλούν.

ΑΞΙΟΛΟΓΗΣΗ ΕΝΖΥΜΙΚΗΣ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΚΟΤΗΤΑΣ ΔΡΑΣΤΗΡΙΟΤΗΤΕΣ ΖΥΜΩΜΕΝΩΝ ΦΥΛΛΩΝ ΜΑΝΓΚΟ

ΑΞΙΟΛΟΓΗΣΗ ΑΝΑΣΤΟΛΗΣ ΤΥΡΟΣΙΝΑΣΗΣ ΖΥΜΩΜΕΝΟΥ ΦΥΛΛΟΥ ΜΑΝΓΚΟ

Η αναστολή της δραστηριότητας τυροσινάσης των ζυμωμένων φύλλων μάνγκο μετρήθηκε χρησιμοποιώντας L-DOPA ως υπόστρωμα και κοτζικό οξύ ως θετικό μάρτυρα σύμφωνα με τη μέθοδο των Suganya et al. (2015) με μικρή τροποποίηση. Ως ένζυμο και υπόστρωμα χρησιμοποιήθηκαν η τυροσινάση και η L-DOPA, αντίστοιχα. Περίπου 40μL 5mML-DOPA αναμίχθηκαν με 100 μL ρυθμιστικού φωσφορικού διαλύματος 0,1 M, pH 6,8 σε μια πλάκα μικροτιτλοδότησης 96-πηγαδιών. Το μίγμα αναμίχθηκε καλά και επωάστηκε στους 37 βαθμούς για 10 λεπτά. Περίπου 120 μL εκχυλίσματος φύλλων μάνγκο που έχουν υποστεί ζύμωση και 40 μL τυροσίνης (62 U/mL σε 0,1 Μ, ρυθμιστικό φωσφορικού pH6,8) προστέθηκαν και επωάστηκαν στους 37 βαθμούς για 10 λεπτά πριν μετρηθεί η απορρόφηση στα 475 nm χρησιμοποιώντας το Varian Cary⑧ Φασματοφωτόμετρο Conc UV-Vis (Varian Inc., ΗΠΑ). Όλες οι ανασταλτικές δραστηριότητες του ενζύμου εκφράστηκαν στο ποσοστό αναστολής (%)

ΑΞΙΟΛΟΓΗΣΗ ΑΝΑΣΤΟΛΗΣ ΕΛΑΣΤΑΣΕΙΑΣ ΖΥΜΩΜΕΝΟΥ ΜΑΓΚΟΛΑΒΙΟΥ

Η ανασταλτική δράση της ελαστάσης των ζυμωμένων φύλλων μάνγκο πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με τη διαδικασία από τους Liyanaarachchi et al. (2018) με ελαφρά τροποποίηση, η οποία αφορούσε τη χρήση παγκρεατικής ελαστάσης χοίρου (PPE). Η γαλλική επιγαλλοκατεχίνη (EGCG) χρησιμοποιήθηκε ως θετικός έλεγχος ενώ το ολεανολικό οξύ χρησιμοποιήθηκε ως πρότυπο.χαμένη αυτοκρατορία cistancheΠροστέθηκαν 5{2}} uL στο δείγμα με 50 μL ελαστάσης διαλυμένη σε ρυθμιστικό διάλυμα Tris HCI 0,2 mM (pH 8). Το μίγμα αναμίχθηκε επιμελώς και προκατεργάστηκε στους 25 βαθμούς για 10 λεπτά προτού προστεθεί διάλυμα Ν-ηλεκτρυλ-Αla-Αla-Αla-ρ-νιτροανιλίδιο (AAAPVN) και επωάστηκε στους 25 βαθμούς για άλλα 30 λεπτά σε σκοτεινή κατάσταση. Η απορρόφηση μετρήθηκε στα 410 nm χρησιμοποιώντας το ορατό φασματοφωτόμετρο υπεριώδους (Varian Cary③ 50 Conc UV-Vis φασματοφωτόμετρο, Varian Inc., USA). Όλες οι ανασταλτικές δραστηριότητες του ενζύμου εκφράστηκαν στο ποσοστό αναστολής (%) χρησιμοποιώντας την εξίσωση που αναφέρεται εδώ:

ΑΞΙΟΛΟΓΗΣΗ ΑΝΑΣΤΟΛΗΣ ΑΚΕΤΥΛΧΟΛΙΝΟΣΤΕΡΑΣΗΣ (ΠΟΝΟΣ) ΖΥΜΩΜΕΝΟΥ ΦΥΛΛΟΥ ΜΑΝΓΚΟ

Η αναστολή της δραστηριότητας της ακετυλοχολινεστεράσης των φύλλων μάνγκο μετρήθηκε όπως περιγράφεται από τον Ellman et al. (1961) με κάποια τροποποίηση. Περίπου 100 μL δείγματος προστέθηκε σε 20 μL ακετυλοχολινεστεράσης διαλυμένης σε ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών 0,1 Μ, pH 7,4. Το μίγμα στροβιλίστηκε επιμελώς πριν προστεθούν 120 μL αντιδραστηρίου Ellman. Μετά από 2 λεπτά αντίδρασης, προστέθηκαν 30 μL διαλύματος ATCI 25 mM και επωάστηκαν στους 25 βαθμούς για 30 λεπτά. Η απορρόφηση μετρήθηκε αμέσως χρησιμοποιώντας το ορατό φασματοφωτόμετρο UV στα 412 nm (φασματοφωτόμετρο Varian Cary® 50 Conc UV-Vis, Varian Inc., USA). Η δραστικότητα της ακετυλοχολινεστεράσης προσδιορίστηκε εις τριπλούν και το Tacrine χρησιμοποιήθηκε ως πρότυπο. Όλες οι ανασταλτικές δραστηριότητες του ενζύμου εκφράστηκαν στο ποσοστό αναστολής (%) όπως στην εξίσωση του παρόντος:

ΑΞΙΟΛΟΓΗΣΗ ΤΟΞΙΚΟΤΗΤΑΣ ΣΕ ΠΟΥΡΑΙΟΥΣ ΠΟΥ ΤΡΕΦΘΗΚΑΝ ΜΕ ΖΥΜΩΜΕΝΑ ΦΥΛΛΑ ΜΑΝΓΚΟ

Το οριακό τεστ διεξήχθη σε 5 θηλυκούς αρουραίους Sprague Dawley που τράφηκαν με φύλλα μάνγκο που είχαν υποστεί ζύμωση σύμφωνα με την οδηγία δοκιμής 407 του OECD/OCDE. Οι επίμυες αναγκάστηκαν να τραφούν από το στόμα με 200 mg/kg σωματικού βάρους ζυμωμένο προϊόν την Ημέρα 1. Η σίτιση αυξήθηκε κατά 200 mg /kg σωματικού βάρους ανά ημέρα έως ότου οι αρουραίοι έδειξαν σημάδια τοξικότητας.μικρονισμένο καθαρισμένο κλάσμα φλαβονοειδών 1000 mg χρήσειςΤα συμπτώματα τοξικότητας παρακολουθούνταν καθημερινά με την παρατήρηση των συμπεριφορικών και σωματικών αλλαγών (υπερκινητικότητα, τρόμος, αταξία, σιελόρροια, διάρροια, λήθαργος και ύπνος) των αρουραίων. Διεξήχθη ιστοπαθολογική ανάλυση σε διάφορα όργανα (νεφρά, ήπαρ, σπλήνα και στομάχι). Όλα τα όργανα στερεώθηκαν σε 10 τοις εκατό φορμαλίνη, ένα φυσικό ρυθμιστικό διάλυμα προτού συντηρηθούν με παραφίνη για την προετοιμασία τμημάτων οργάνων. Τα όργανα χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη και ηωσίνη (Η&Ε), τα οποία στη συνέχεια παρατηρήθηκαν με μικροσκόπιο (Leica, Γερμανία). Αυτή η μελέτη σε ζώα εγκρίθηκε και διεξήχθη σύμφωνα με τις οδηγίες από την Επιτροπή Δεοντολογίας των Ζώων του MARDI (20170420/R/MAEC 00007).

ΣΤΑΤΙΣΤΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ

Το πείραμα ολοκληρώθηκε με τρεις επαναλήψεις και τα αποτελέσματα παρουσιάστηκαν ως μέση ± τυπική απόκλιση. Τα δεδομένα που ελήφθησαν αναλύθηκαν στατιστικά χρησιμοποιώντας ανάλυση διακύμανσης μονής κατεύθυνσης (ANOVA) και πραγματοποιήθηκαν πολλαπλές συγκρίσεις με τη δοκιμή Duncan. Η στατιστική σημασία ορίστηκε στο επίπεδο του P< 0.05.="" the="" data="" analysis="" was="" conducted="" using="" statistical="" analysis="" software,="" ibm="" spss="" statistic="" 22.0(imb="" corp.,="">

ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ ΚΑΙ ΣΥΖΗΤΗΣΗ

Στην παρούσα μελέτη, τρεις τύποι φύλλων μάνγκο που περιλαμβάνουν πρόωρα φύλλα (ανοιχτό καφέ, LBML), ενδιάμεσα ώριμα φύλλα (ανοιχτό πράσινο, LGML) και ώριμα φύλλα (πράσινα, ML) επιλέχθηκαν για την παραγωγή ζυμωμένων φύλλων μάνγκο μέσω της βιοζύμωσης διαδικασία υπό ελεγχόμενες συνθήκες χρησιμοποιώντας μικτές καλλιέργειες βακτηρίων και ζυμομυκήτων. Η μελέτη των λειτουργικών δραστηριοτήτων πραγματοποιήθηκε σε επιλεγμένα φύλλα μάνγκο που έχουν υποστεί ζύμωση, συμπεριλαμβανομένης της περιεκτικότητας σε τανίνες, του προφίλ οργανικών οξέων, της αναστολής της μελάγχρωσης του δέρματος, της αξιολόγησης της αντιρυτιδικής ικανότητας και της αναστολής της ακετυλοχολινεστεράσης. Το επίπεδο ωριμότητας των φύλλων Mangifera indica Chokanan προσδιορίστηκε σύμφωνα με τις αλλαγές χρώματος των φύλλων όπως περιγράφεται στο Σχήμα 1: Α) πρόωρα φύλλα (ανοιχτό καφέ, LBML), Β) ενδιάμεσα ώριμα φύλλα (ανοιχτό πράσινο, LGML) και Γ) ώριμα φύλλα ( πράσινο, ML).

The tannin content in mango leaves may affect the palatability of the extract since it contributes to a bitter taste (Wurger et al.2014). As the maturity of mango leaves progressed from premature to mature leaves, the tannin content increased significantly (Figure 2), whereby, the non-fermented mature green leaves(ML CO) contained the highest amount of tannin(3.09mg GA/mL). Generally, all fermented mango leaves displayed a significant reduction in tannin content after going through the microbial fermentation process. Both fermented mango leaves (LGML D8 and LBML D8) showed the lowest tannin content (>1 GA/ml) σε σύγκριση με το ζυμωμένο ML D8. Η περιεκτικότητα σε τανίνες σε όλα τα ζυμωμένα φύλλα μάνγκο μειώθηκε σημαντικά σε σύγκριση με τα φύλλα μάνγκο που δεν έχουν υποστεί ζύμωση. Αυτό το φαινόμενο μπορεί να συμβεί λόγω της παρουσίας μικροβιακών ενζύμων που εκκρίνονται κατά τη διαδικασία της μικροβιακής ζύμωσης, τα οποία βοήθησαν στη διάσπαση της περιεκτικότητας σε τανίνη στα φύλλα, συμβάλλοντας κατά συνέπεια στην ευνοϊκή γεύση των φύλλων μάνγκο που έχουν υποστεί ζύμωση (Ashok & Upadhyaya 2012). , τα ζυμωμένα πρόωρα φύλλα μάνγκο (LGML D8) έχουν χαμηλότερη περιεκτικότητα σε τανίνη από τα ώριμα φύλλα, τα οποία συμβάλλουν έμμεσα στη λιγότερο στυπτική και πικρή γεύση σε σύγκριση με τα ώριμα φύλλα μάνγκο που έχουν υποστεί ζύμωση.

Αρκετά οργανικά οξέα ανιχνεύθηκαν σε φύλλα μάνγκο που έχουν υποστεί ζύμωση, συμπεριλαμβανομένου του οξικού οξέος, του οξαλικού οξέος, του κοζικού οξέος και του κινικού οξέος (Πίνακας 1). Κατά τη διάρκεια της ζύμωσης, το οξικό οξύ παρήχθη σε σημαντική ποσότητα σε σύγκριση με άλλα οργανικά οξέα όταν χρησιμοποιήθηκαν διαφορετικά επίπεδα ωριμότητας φύλλων μάνγκο (LGMLD8; LBMLD8; MLD8) ως υπόστρωμα και απέδωσε περίπου 19396.{30}}8±3016,30,16855,80±8. 993,01 και 16565,80±1493,60 ppm, αντίστοιχα. Μεταξύ των τριών διαφορετικών τύπων φύλλων μάνγκο που έχουν υποστεί ζύμωση, μόνο το ML D8 παρήγαγε κινικό οξύ με συγκέντρωση 524,29±8,84 ppm. Κατά τη διάρκεια της ζύμωσης, σημειώθηκαν πολυάριθμες βιοχημικές αντιδράσεις ως αποτέλεσμα συμβιωτικών καλλιεργειών βακτηρίων και ζύμωσης ζυμομύκητα (SCOBY) που εμπλέκονται στη διαδικασία αλκοολικής και οξίνισης. Η συσσώρευση οξικού οξέος οφειλόταν στον μεταβολισμό των βακτηρίων οξικού οξέος Komagataiebacter sp., που είναι ο κύριος μεταβολίτης που παράγεται κατά τη ζύμωση των φύλλων του μάνγκο. Η αύξηση του οξικού οξέος κατά τη διάρκεια της ζύμωσης SCOBY παρατηρήθηκε επίσης από τους Neffe-Skocinska et al. (2017). Αντίθετα, η χαμηλότερη περιεκτικότητα σε οξαλικό οξύ και κοτζικό οξύ παρήχθη σε ζυμωμένα φύλλα μάνγκο, δείγματα ML D8 (24,93±1.00 και 3,30±0,24 ppm, αντίστοιχα) σε σύγκριση με άλλα δείγματα LBML D8 και LGML D8 που έχουν υποστεί ζύμωση . Αυτό το εύρημα έδειξε ότι το επίπεδο ωριμότητας των φύλλων μάνγκο θα μπορούσε να επηρεάσει τη συγκέντρωση των οργανικών οξέων κατά τη διαδικασία ζύμωσης. Το οξαλικό οξύ, το οποίο είναι ένα από τα οργανικά οξέα που εμπλέκονται στον ενεργειακό μεταβολισμό, ανιχνεύθηκε σε φύλλα μάνγκο που έχουν υποστεί ζύμωση (Watawana et al.2015). Το Kojic acid είναι ένας άλλος πολύτιμος μεταβολίτης που παράγεται κατά τη ζύμωση, ο οποίος έχει λευκαντική δράση στο δέρμα (Tang&Yang 2018; Taylor et al.2013). Η παρουσία του κοζικού οξέος στο ζυμωμένο φύλλο μάνγκο είναι ένας από τους παράγοντες που συμβάλλουν κατά της μελάγχρωσης για την εύρεση των συνεπειών στην αναστολή της τυροσινάσης αυτής της μελέτης.

Ο αναστολέας της τυροσινάσης είναι ένας από τους πολύτιμους λευκαντικούς παράγοντες που υπάρχουν στα προϊόντα περιποίησης δέρματος. Από την ανάλυση του λειτουργικού ενζύμου, τα ζυμωμένα φύλλα μάνγκο σε διαφορετικά επίπεδα ωριμότητας αποδείχθηκε ότι έχουν υψηλότερη ανασταλτική δράση τυροσινάσης σε σύγκριση με τα μη ζυμωμένα φύλλα μάνγκο (Εικόνα 3(Α)). Και τα τρία φύλλα μάνγκο που δεν έχουν υποστεί ζύμωση, LBML CO, Το LGML CO και το MLCO εμφάνισαν χαμηλότερη ανασταλτική δραστηριότητα τυροσινάσης σε 48,25 τοις εκατό, 51,91 τοις εκατό και 36,22 τοις εκατό, αντίστοιχα. Παραδόξως, όλα τα φύλλα μάνγκο που έχουν υποστεί ζύμωση εμφάνισαν σημαντική αύξηση των δραστηριοτήτων αναστολής της τυροσινάσης σε σχέση με τα μη ζυμωμένα φύλλα μάνγκο. Μεταξύ όλων των δειγμάτων φύλλων μάνγκο που δοκιμάστηκαν, το δείγμα LBML D8 εμφανίστηκε με την υψηλότερη ανασταλτική δραστηριότητα τυροσινάσης (87,96 τοις εκατό ) σε σύγκριση με τα δείγματα LGML D8 και ML D8, τα οποία έχουν μόνο 80,90 τοις εκατό και 79,93 τοις εκατό ανασταλτικές δραστηριότητες, αντίστοιχα. Ο θετικός έλεγχος του kojic acid έδειξε ότι έχει ανασταλτική δραστηριότητα τυροσινάσης 86,35 τοις εκατό, η οποία ήταν συγκρίσιμη με το δείγμα LBML D8. Τα περισσότερα εμπορικά προϊόντα περιποίησης δέρματος κατά της μελάγχρωσης περιέχουν έναν αναστολέα τυροσινάσης επειδή βοηθά στην πρόληψη της υπερβολικής παραγωγής μελανίνης. Παρόμοια ευρήματα από τους Shi et al. (2020) απέδειξε επίσης ότι το κλάσμα οξικού αιθυλεστέρα των φύλλων μάνγκο έχει ισχυρή ανασταλτική δράση τυροσινάσης με τιμή ICso 17,62±1,26 ug/mL.

Ομοίως, το ποσοστό της ανασταλτικής δράσης ελαστάσης όλων των δειγμάτων φύλλων μάνγκο που έχουν υποστεί ζύμωση ήταν υψηλότερο από τα φύλλα μάνγκο που δεν έχουν υποστεί ζύμωση (Εικόνα 3(Β) και έδειξε συγκρίσιμη αποτελεσματικότητα με ένα δείγμα θετικού μάρτυρα, το ολεανολικό οξύ. Το ολεανολικό οξύ είναι ένα προστατευτικό για το δέρμα πεντακυκλικό τριτερπένιο και χρησιμοποιήθηκε ως θετικός μάρτυρας λόγω της θετικής ανασταλτικής του δράσης κατά της ελαστάσης (Tu & Tawata 2015). Σε αυτή τη μελέτη, διαπιστώθηκε ότι όλα τα φύλλα μάνγκο που δεν είχαν υποστεί ζύμωση παρουσίασαν υψηλή ανασταλτική δράση ελαστάσης, γεγονός που έδειξε ότι τα ίδια τα φύλλα μάνγκο είναι μια καλή πηγή αναστολέα ελαστάσης. Ωστόσο, όλα τα φύλλα μάνγκο που έχουν υποστεί ζύμωση σημειώθηκε ότι είχαν μια ελαφρά βελτίωση στην ανασταλτική δράση της ελαστάσης από τα μη ζυμωμένα αντίστοιχα (Εικόνα 3(Β), όπου ο ρυθμός αναστολής των LBMLD8, LGMLD8 και MLD8 έφτασε το 88,65 τοις εκατό , 91,79 τοις εκατό και 91,55 τοις εκατό, αντίστοιχα. Τόσο τα μη ζυμωμένα όσο και τα ζυμωμένα φύλλα μάνγκο εμφάνισαν σημαντικά υψηλότερο ποσοστό αναστολής ελαστάσης από το ολ. εανολικό οξύ (69,27 τοις εκατό). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα διαφορετικά επίπεδα ωριμότητας των φύλλων μάνγκο έχουν φυσικά δράση κατά της ελαστάσης και τη διαδικασία ζύμωσης, βελτιώνοντας περαιτέρω την ανασταλτική δράση της ελαστάσης. Παρόμοια ευρήματα αναφέρθηκαν επίσης από τους Ochocka et al. (2017), το οποίο έδειξε ότι η μαγγιφερίνη θα μπορούσε να αναστείλει πλήρως τη δραστηριότητα ελαστάσης σε συγκεντρώσεις μαγγιφερίνης πάνω από 473 μΜ. Γενικά, τα φύλλα μάνγκο που έχουν υποστεί ζύμωση παρουσίασαν σημαντική βελτίωση στα ανασταλτικά αποτελέσματα τόσο της τυροσινάσης όσο και της ελαστάσης σε σχέση με τα αντίστοιχα φύλλα μάνγκο που δεν έχουν υποστεί ζύμωση, γεγονός που υποδεικνύει τη δυνατότητα των φύλλων μάνγκο που έχουν υποστεί ζύμωση ως νέος αναστολέας τυροσινάσης και ελαστάσης που μπορεί να ενσωματωθεί σε προϊόντα περιποίησης δέρματος για τη διαχείριση της ανάπτυξης που σχετίζεται με τη γήρανση για τη μελάγχρωση και το πρόβλημα των ρυτίδων του δέρματος.

Επί του παρόντος, ένας αναστολέας ακετυλοχολινεστεράσης χρησιμοποιήθηκε ως εναλλακτική θεραπεία για ασθενείς με Alzheimer για τη μείωση της διάσπασης της ακετυλοχολίνης από την ακετυλχολινεστεράση. Εν συντομία, το δείγμα LGMLD8 έδειξε την καλύτερη ανασταλτική επίδραση στο ένζυμο ακετυλοχολινεστεράση (96,51 τοις εκατό), ακολουθούμενο από το ML D8 (96,06 τοις εκατό) και το LBML D8 (95,31 τοις εκατό) όπως φαίνεται στο Σχήμα 3(C). Αυτό το εύρημα έδειξε ότι τα φύλλα μάνγκο που έχουν υποστεί ζύμωση θα μπορούσαν να είναι ένας πιθανός αναστολέας της ακετυλοχολινεστεράσης, ο οποίος έδειξε την ικανότητα να αναστέλλει αυτό το ένζυμο από τη διάσπαση της ακετυλοχολίνης όταν ταξιδεύει από το ένα κύτταρο στο άλλο. Υπάρχει μια ελαφρά αύξηση της ανασταλτικής δραστηριότητας του ενζύμου ακετυλοχολινεστεράσης σε φύλλα μάνγκο που έχουν υποστεί ζύμωση σε αντίθεση με τα φύλλα μάνγκο που δεν έχουν υποστεί ζύμωση (Εικόνα 3(C)). Σύμφωνα με τους Jung et al. (2009) και Wightman et al. (2020), η παρουσία μαγγιφερίνης στο εκχύλισμα φύλλων μάνγκο μπορεί να συμβάλει σε σημαντικό ρόλο στην αναστολή της ακετυλοχολινεστεράσης. Μια έρευνα από τους Sethiya και Mishra (2014) πρότεινε ότι η μαγγιφερίνη είναι μια από τις πολλά υποσχόμενες ενώσεις που στοχεύουν στη θεραπεία της νόσου Αλτσχάιμερ, καθώς παλαιότερα ερευνητικά ευρήματα ανέφεραν ότι η μαγγιφερίνη ανέστειλε σημαντικά την AChE με τιμή ICEg 55,42±1,52 ug/mL και προστατεύει την απώλεια ακετυλοχολίνη. Η μειωμένη περιεκτικότητα σε ακετυλοχολίνη είναι υπεύθυνη για την υποβάθμιση της γνωστικής λειτουργίας και την εξέλιξη της νόσου του Αλτσχάιμερ. Γενικά, όλα τα ζυμωμένα δείγματα φύλλων μάνγκο έδωσαν ισχυρή αναστολή της ακετυλοχολινεστεράσης μεγαλύτερη από 90 τοις εκατό και έδειξαν σημαντικά υψηλότερη ανασταλτική δράση (Ρ<0.05)than tacrine="" hcl.="" the="" safety="" aspect="" of="" consuming="" fermented="" mango="" leaves="" was="" also="" investigated.="" histopathology="" analyses="" on="" various="" organ="" tissues="" (liver,="" kidneys,="" spleen,="" and="" stomach)="" were="" carried="" out="" to="" evaluate="" the="" toxicity="" effect="" on="" rats="" treated="" with="" fermented="" mango="" leaves="" (figure="" 4).="" limit="" toxicology="" test="" analysis="" on="" rats="" was="" conducted="" by="" subjecting="" the="" rats="" to="" a="" daily="" increment="" of="" dosage="" consumption="" at="" 200="" mg/kg="" of="" bodyweight="" interval="" until="" the="" rats="" showed="" signs="" of="" toxicity.="" when="" the="" rats="" start="" to="" show="" abnormal="" physical="" behaviors,="" the="" rats="" were="" sacrificed="" in="" the="" co,="" chamber="" and="" various="" organs="" were="" harvested="" for="" histopathological="" analysis.="" generally,="" there="" was="" no="" sign="" of="" inflammation="" symptoms="" observed="" in="" all="" treated="" rat's="" organs="" tissue="" indicating="" no="" toxicity="" effect="" occurred="" in="" rats="" fed="" with="" fermented="" mango="" leaves.="" based="" on="" the="" data="" collected="" from="" the="" limit="" test="" analysis,="" it="" was="" identified="" that="" the="" ic,="" value,="" and="" safe="" dosage="" of="" fermented="" mango="" leaves="" was="" 1000="" ml/50="" kg="" of="" bodyweight,="" which="" indicated="" that="" fermented="" mango="" leaves="" are="" safe="" for="" consumption="" at="" the="" recommended="" dosage="" of="" 60="" ml/50="" lbmld8(fermented="" light="" brown="" leaves),="" lbml="" co(non-fermented="" light="" brown="" leaves),="" lgml="" d8(fermented="" light="" green="" leaves),="" lgml="" co(non-fermented="" light="" green="" leaves),="" ml="" d8(fermented="" green="" leaves)="" and="" ml="" co="" (non-fermented="" green="">

ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑ

Η αξιοσημείωτη μείωση της περιεκτικότητας σε τανίνες αλλά η αύξηση της περιεκτικότητας σε οργανικό οξύ σε όλα τα φύλλα μάνγκο που έχουν υποστεί ζύμωση έχουν βελτιώσει την αίσθηση του στόματος με λιγότερο δυσάρεστη γεύση ως συνέπεια της μικροβιακής δράσης. Τα φύλλα μάνγκο που έχουν υποστεί ζύμωση επιβεβαιώθηκε ότι έχουν υψηλότερη ανασταλτική δράση τυροσινάσης, ελαστάσης και ακετυλοχολινεστεράσης, που υποδεικνύουν τη δυνατότητά τους να ρυθμίζουν τη διαδικασία της μελάγχρωσης, της γήρανσης και των νευροεκφυλιστικών ασθενειών, αντίστοιχα. Δεν παρατηρήθηκε επίδραση τοξικότητας σε αρουραίους που τρέφονταν με φύλλα μάνγκο που έχουν υποστεί ζύμωση, με τα στοιχεία να υποστηρίζονται από τα ιστοπαθολογικά αποτελέσματα.

Αυτό το άρθρο εξάγεται από το Sains Malaysiana 50(9)(2021): 2675-2685 http://doi.org/10.17576/jsm-2021-5009-15