Αντιοξειδωτικό και αντι-γήρανση του δέρματος Δυνατότητα επιλεγμένων φυτών της Ταϊλάνδης: In vitro αξιολόγηση και πρόβλεψη στόχου σε πυριτία Μέρος 2

3. Συζήτηση

Η γήρανση του δέρματος είναι μια φυσική διαδικασία σε όλους τους ανθρώπους. Ωστόσο, πολλοί τρόποι ζωής και περιβαλλοντικοί παράγοντες μπορούν επίσης να επιταχύνουν αυτή τη διαδικασία που οδηγεί σε πρόωρη γήρανση του δέρματος [19]. Το ROS είναι γνωστό ως ένας σημαντικός παθογόνος παράγοντας στη διαδικασία γήρανσης του δέρματος. Η συσσώρευση ROS μπορεί να ρυθμίσει προς τα πάνω την έκφραση τόσο της ελαστάσης όσο και των ενζύμων τυροσινάσης, η οποία στη συνέχεια οδηγεί σε σχηματισμό ρυτίδων, έλλειψη ελαστικότητας και υπερμελάγχρωση [20-22]. Όλα αυτά είναι κοινά χαρακτηριστικά της γήρανσης του δέρματος [4]. Εδώ, η μελέτη μας διερεύνησε τις αντιοξειδωτικές, αντι-ελαστάση και αντι-τυροσινάση ιδιότητες των φυτικών εκχυλισμάτων από 16 είδη φυτών της Ταϊλάνδης και αποκάλυψε πολλά υποσχόμενες φυσικές ενώσεις για την πιθανή ανάπτυξη νέων θεραπειών κατά της γήρανσης του δέρματος.

Το γλυκοσίδιο του cistanche μπορεί επίσης να αυξήσει τη δραστηριότητα του SOD στους ιστούς της καρδιάς και του ήπατος και να μειώσει σημαντικά την περιεκτικότητα σε λιποφουσκίνη και MDA σε κάθε ιστό, καθαρίζοντας αποτελεσματικά διάφορες δραστικές ρίζες οξυγόνου (OH-, H2O2, κ.λπ.) και προστατεύοντας από βλάβη του DNA που προκαλείται από ρίζες ΟΗ. Οι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες του Cistanche έχουν ισχυρή ικανότητα σάρωσης των ελεύθερων ριζών, υψηλότερη αναγωγική ικανότητα από τη βιταμίνη C, βελτιώνουν τη δραστηριότητα του SOD στο εναιώρημα σπέρματος, μειώνουν την περιεκτικότητα σε MDA και έχουν μια ορισμένη προστατευτική δράση στη λειτουργία της σπερματικής μεμβράνης. Οι πολυσακχαρίτες Cistanche μπορούν να ενισχύσουν τη δραστηριότητα των SOD και GSH-Px σε ερυθροκύτταρα και ιστούς πνευμόνων πειραματικά γηρασμένων ποντικών που προκαλούνται από D-γαλακτόζη, καθώς και να μειώσουν την περιεκτικότητα σε MDA και κολλαγόνο στους πνεύμονες και στο πλάσμα και να αυξήσουν την περιεκτικότητα σε ελαστίνη. ένα καλό αποτέλεσμα σάρωσης στο DPPH, παρατείνει το χρόνο της υποξίας σε γηρασμένα ποντίκια, βελτιώνει τη δραστηριότητα του SOD στον ορό και καθυστερεί τον φυσιολογικό εκφυλισμό του πνεύμονα σε πειραματικά γηρασμένα ποντίκια Με τον κυτταρικό μορφολογικό εκφυλισμό, τα πειράματα έχουν δείξει ότι το Cistanche έχει την καλή αντιοξειδωτική ικανότητα και έχει τη δυνατότητα να είναι φάρμακο για την πρόληψη και τη θεραπεία ασθενειών της γήρανσης του δέρματος. Ταυτόχρονα, η εχινακοσίδη στο Cistanche έχει σημαντική ικανότητα να καθαρίζει τις ελεύθερες ρίζες DPPH και μπορεί να καθαρίζει δραστικά είδη οξυγόνου, να αποτρέπει την αποικοδόμηση του κολλαγόνου που προκαλείται από ελεύθερες ρίζες και επίσης έχει μια καλή επίδραση επιδιόρθωσης στη βλάβη των ανιόντων από τις ελεύθερες ρίζες θυμίνης.

Κάντε κλικ στο συμπλήρωμα cistanche tubulosa

【Για περισσότερες πληροφορίες:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Η ελαστάση είναι ένα ένζυμο πρωτεάσης που είναι κυρίως υπεύθυνο για την αποικοδόμηση της ελαστίνης, μιας σημαντικής πρωτεΐνης που βρίσκεται στο ECM. Η ελαστίνη είναι ζωτικής σημασίας για να δώσει ελαστικότητα στο δέρμα λόγω των ελαστικών ιδιοτήτων ανάκρουσής της [13]. Επομένως, η αναστολή της δραστηριότητας της ελαστάσης μπορεί να βοηθήσει στην πρόληψη της απώλειας ελαστικότητας του δέρματος και των ρυτίδων [23]. Το αποτέλεσμά μας βρήκε ότι το A. occidentale ήταν ο πιο ισχυρός αναστολέας ελαστάσης, ακολουθούμενο από το G. zeylanicum και το S. alata, με σειρά κατάταξης των τιμών IC50. Επιπλέον, τα αποτελέσματα σύνδεσης αποκάλυψαν ότι πέντε ενώσεις που προέρχονται από αυτά τα τρία φυτά έχουν χαμηλότερες ενέργειες δέσμευσης από το EGCG (θετικός έλεγχος) και το FRW (αρχικός αναστολέας), όπου οι ενώσεις που εμφανίζουν τη χαμηλότερη ενέργεια δέσμευσης θεωρήθηκαν ότι έχουν καλύτερη αναστολή (Πίνακας S4) [ 24]. Αυτές οι ενώσεις είναι φλαβονοειδή, τα οποία περιλαμβάνουν ένα τετραμερές της προανθοκυανιδίνης [25], της αμεντοφλαβόνης [25], της ρουτίνης [26,27], της αγαθισφλαβόνης [26] από το A. occidentale και της καμπφερόλης 3-O-gentiobioside από το S. alata [28] (Πίνακας S3). Τα αποτελέσματα πρότειναν ότι και οι πέντε ενώσεις είναι υπεύθυνες για τη δράση κατά της ελαστάσης, καθώς και ως υποσχόμενες υποψήφιες για την ανάπτυξη της γήρανσης του δέρματος. Ωστόσο, βρήκαμε ότι καμία από τις ενώσεις από το G. zeylanicum δεν έδειξε ισχυρή συγγένεια σύνδεσης σε σύγκριση με τους συνδέτες ελέγχου, αν και το εκχύλισμα του έδειξε τη δεύτερη πιο δραστικότητα με δοκιμασία in vitro. Αυτό μπορεί να οφείλεται στη συνεργική δράση των ενώσεων στο μείγμα και όχι στην ατομική επίδραση κάθε φυτοχημικού συστατικού.

Εκτός από την ελαστάση, η μελανίνη θεωρείται ένας άλλος σημαντικός στόχος για τη θεραπεία της γήρανσης του δέρματος. Η μελανίνη είναι ένα κύριο συστατικό του δέρματος, των μαλλιών και του χρώματος των ματιών που συντίθεται από τη μελανογένεση μέσα στα μελανοκύτταρα. Ωστόσο, η υπερπαραγωγή μελανίνης μπορεί να προκαλέσει δερματικές διαταραχές, όπως πανάδες, μέλασμα, κηλίδες ηλικίας και υπερμελάγχρωση, οδηγώντας σε εμφάνιση πρόωρης γήρανσης [12]. Στη μελανογένεση, η τυροσινάση είναι το κρίσιμο ένζυμο στο στάδιο περιορισμού του ρυθμού. Επομένως, η μείωση της δραστηριότητας της τυροσινάσης μπορεί να οδηγήσει σε μειωμένη παραγωγή μελανίνης [29]. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν ότι το G. zeylanicum ήταν ο πιο ισχυρός αναστολέας τυροσινάσης, ακολουθούμενο από το A. catechu και το A. occidentale, σύμφωνα με τις τιμές IC50. Παραδόξως, οι περισσότερες από τις ενώσεις (47 από τις 48 ενώσεις) σε αυτά τα τρία φυτά έδειξαν χαμηλότερη ενέργεια δέσμευσης έναντι της τυροσινάσης από την ΚΑ (θετικός έλεγχος) και την τροπολόνη (αρχικός αναστολέας) (Πίνακας S5). Μεταξύ των 47 ενώσεων, οι 16 προέρχονται από το G. zeylanicum, οι 12 προέρχονται από το A. catechu και οι 29 από το A. occidentale, από τις οποίες 10 από αυτές μπορούν να βρεθούν σε περισσότερα από ένα φυτά (Πίνακας S3). Ωστόσο, σε αντίθεση με τη δέσμευση της ένωσης με ελαστάση, οι ταυτοποιημένες πιθανές ενώσεις κατά της τυροσινάσης προέρχονται από μια ποικιλία φυτοχημικών τάξεων. Όσον αφορά την κατάταξη των ενεργειών δέσμευσης προς την τυροσινάση, οι ενώσεις που θεωρούνται οι καλύτεροι πέντε αναστολείς είναι το ο-κουμαρικό οξύ [30] (φαινολικό), ένα τετραμερές της προανθοκυανιδίνης [25] (φλαβονοειδές), το καφεϊκό οξύ [30] (φαινολικό), φερουλικό οξύ [30] (φαινολικό), και ταννίνη αρέκας Α1 [31] (ταννίνη), με την αύξουσα σειρά βαθμολογιών (Πίνακας S5). Τα αποτελέσματα που προέκυψαν από τον έλεγχο in vitro και την ανάλυση σύνδεσης σε αυτή τη μελέτη επιβεβαίωσαν τις αντιγηραντικές ιδιότητες τεσσάρων φαρμακευτικών φυτών της Ταϊλάνδης και πρότειναν τις πιθανές παραγόμενες ενώσεις τους που θα μπορούσαν να είναι υπεύθυνες για τις παρατηρούμενες δραστηριότητες. Περαιτέρω μελέτες για την κλασμάτωση, καθώς και την ταυτοποίηση και την απομόνωση βιοδραστικών ενώσεων σε αυτά τα πολλά υποσχόμενα φυτικά εκχυλίσματα, απαιτούνται κρίσιμα για να αποδειχθεί η παρουσία των προτεινόμενων μορίων μας που θα μπορούσαν στη συνέχεια να αναπτυχθούν για τη θεραπεία της γήρανσης του δέρματος [14].

Τα A. catechu, A. occidentale, G. zeylanicum και S. alata είναι φυτά που χρησιμοποιούνται στην παραδοσιακή ιατρική και βρίσκονται στην τροπική ζώνη της Νοτιοανατολικής Ασίας, συμπεριλαμβανομένης της Ταϊλάνδης [32-36]. Σημειωτέον, αυτά τα φυτά αποδείχθηκαν για διάφορες δραστηριότητες που σχετίζονται με αντιοξειδωτικά. Ο καρπός A. catechu είναι ένα δημοφιλές μασώμενο είδος με φύλλα betel, το οποίο είναι μεθυστικό και ελαφρώς εθιστικό [36]. Χρησιμοποιείται για τη θεραπεία εγκαυμάτων και δερματικών ελκών και δρα ως στυπτικό [35,37]. Έχει αναφερθεί για ισχυρά αντιοξειδωτικά και αντιφλεγμονώδη αποτελέσματα κατά της ηπατικής βλάβης που προκαλείται από το οξειδωτικό στρες σε αρουραίους [38]. Το A. occidentale και το G. zeylanicum, που ανήκουν στη Νότια Ταϊλάνδη, χρησιμοποιούνται ως τροφή και ως τοπικό φαρμακευτικό φυτό [32,33]. Τα φύλλα A. occidentale χρησιμοποιούνται για τη θεραπεία δερματικών εξανθημάτων, κνησμού, ελκών και πυρετού, ενώ τα φύλλα G. zeylanicum χρησιμοποιούνται για τη θεραπεία της ρευματοειδούς αρθρίτιδας, της γρίπης, της δυσεντερίας και της δυσπεψίας [32,33,39]. Τα εκχυλίσματα φύλλων του A. occidentale και του G. zeylanicum εμφάνισαν νευροπροστατευτικές επιδράσεις έναντι του γλουταμικού και του H2O2-που προκάλεσε οξειδωτική βλάβη [32,40]. Επιπλέον, το ακατέργαστο εκχύλισμα από τα φύλλα και των δύο φυτών άσκησε αντιοξειδωτικό στρες και αντιγηραντικές ιδιότητες στο νηματώδη Caenorhabditis elegans [33,41,42]. Τα φύλλα του S. alata χρησιμοποιούνται για τη θεραπεία δερματικών εξανθημάτων, μυκητίασης και δερματίτιδας [34]. Το εκχύλισμα φύλλων αυτού του φυτού μπόρεσε να αυξήσει τόσο τα ενζυματικά όσο και τα μη ενζυματικά αντιοξειδωτικά συστήματα και να αποτρέψει το ήπαρ και τους νεφρικούς ιστούς από βλάβες που προκαλούνται από το οξειδωτικό στρες κατά τη διάρκεια του διαβήτη σε ένα μοντέλο επίμυος [43].

Σε συμφωνία με προηγούμενες αναφορές, τα ευρήματά μας αποκαλύπτουν ότι τα A. catechu, A. occidentale, G. zeylanicum και S. alata παρουσιάζουν αντιοξειδωτικό δυναμικό, εκτός από τις δραστηριότητες προς ένζυμα που σχετίζονται με τη γήρανση του δέρματος. Διαπιστώσαμε ότι αυτά τα φυτά είναι πλούσια σε ολικές φαινολικές ουσίες και φλαβονοειδή με υψηλές αντιοξειδωτικές ικανότητες έναντι των ριζών DPPH και ABTS, εκτός από το S. alata, το οποίο έδειξε μόνο ένα μέτριο επίπεδο τόσο σε ποσότητες όσο και σε δραστηριότητες. Τα φαινολικά και τα φλαβονοειδή είναι δύο γνωστές κατηγορίες φυτικών δευτερογενών μεταβολιτών που είναι κυρίως υπεύθυνοι για την αντιοξειδωτική δράση [44,45]. Αυτό ήταν σύμφωνο με τα αποτελέσματά μας ότι τα συνολικά περιεχόμενα φαινολικών και φλαβονοειδών έδειξαν σημαντική θετική συσχέτιση με τις δραστηριότητες σάρωσης ελεύθερων ριζών (Εικόνα S1). Είναι ενδιαφέρον ότι η ανάλυση συσχέτισης αποκάλυψε επίσης ότι τα περιεχόμενα των συνολικών φαινολικών και φλαβονοειδών ενώσεων σε αυτά τα εκχυλίσματα φυτών που μελετήθηκαν συσχετίστηκαν θετικά τόσο με την αναστολή της ελαστάσης όσο και της τυροσινάσης. Ωστόσο, η ισχύς συσχέτισης βρέθηκε να είναι υψηλότερη με τα φαινολικά παρά με τα φλαβονοειδή. Οι δραστηριότητες δέσμευσης ελεύθερων ριζών αποδείχθηκε ότι έχουν υψηλή συσχέτιση με τις ανασταλτικές ενζυμικές δραστηριότητες των εκχυλισμάτων. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η υψηλή περιεκτικότητα σε φαινολικά και η αντιοξειδωτική δράση μπορεί να οδηγήσουν σε ισχυρή αναστολή των ενζύμων ελαστάσης και τυροσινάσης. Ωστόσο, η πιθανότητα αλληλεπιδράσεων πρωτεΐνης-πολυφαινόλης θα πρέπει επίσης να είναι ανησυχητική. Ορισμένες πολυφαινόλες θα μπορούσαν να προκαλέσουν άμεσα ενζυμική κατακρήμνιση μέσω της ικανότητάς τους να συνδέονται με πρωτεΐνες πλούσιες σε προλίνη, με αποτέλεσμα το σχηματισμό δεσμών υδρογόνου με το ένζυμο και ως εκ τούτου να οδηγεί σε μη εκλεκτική αναστολή [46].

4. Υλικά και Μέθοδοι

4.1. Χημικά και Αντιδραστήρια

Αντιδραστήριο φαινόλης Folin–Ciocalteu, χλωριούχο αργίλιο (AlCl3), διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO), οξικό νάτριο (NaOAc), κερκετίνη, 2,2-διφαινυλ-1-πικρυλυδραζυλ (DPPH), 2,{{5} } azinobis-(3-αιθυλβενζοθειαζολίνη-6-σουλφονικό οξύ) (ABTS), L-ασκορβικό οξύ, υπερθειικό κάλιο (K2S2O8), ελαστάση από χοίρο πάγκρεας, γαλλική επιγαλλοκατεχίνη (EGCG), Nsuccinyl-Ala-Ala- Ala-p-νιτροανιλίδιο (SANA), τυροσινάση από μανιτάρι, κοτζικό οξύ (KA) και 3,{19}}διυδροξυ-L-φαινυλαλανίνη (L-DOPA) αγοράστηκαν από τη Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, ΗΠΑ). Το ανθρακικό νάτριο (Na2CO3) αγοράστηκε από τη Merck (Darmstadt, Γερμανία). Το γαλλικό οξύ αγοράστηκε από την TCI America (Portland, OR, USA). Το φωσφορικό δικάλιο (K2HPO4) και το μονοβασικό φωσφορικό κάλιο (KH2PO4) αγοράστηκαν από την HiMedia (Βομβάη, Ινδία). Η βάση Tris αγοράστηκε από τη Vivantis Technologies (Shah Alam, Μαλαισία). Η αιθανόλη και η μεθανόλη αγοράστηκαν από την RCI Labscan (Μπανγκόκ, Ταϊλάνδη). Όλα τα χημικά και τα αντιδραστήρια ήταν αναλυτικής ποιότητας.

4.2. Φυτικά Υλικά και Εκχύλιση

Τα φυτά σε αυτή τη μελέτη συλλέχθηκαν τοπικά από κήπους ή αγοράστηκαν από τοπικές αγορές ανάλογα με την περίπτωση. Ο Πίνακας 1 παρέχει την επιστημονική ονομασία, το μέρος που χρησιμοποιείται και την πηγή κάθε φυτού. Αυτά τα φυτά επικυρώθηκαν βοτανικά και τα δείγματα κουπονιών τους κατατέθηκαν στο ερμπάριο του Kasin Suvatabhandhu, Τμήμα Βοτανικής, Σχολή Επιστημών, Πανεπιστήμιο Chulalongkorn, Μπανγκόκ, Ταϊλάνδη ή αναγνωρίστηκαν από βοτανολόγο. Τα φυτικά υλικά πλύθηκαν, ξηράνθηκαν στους 65 ◦C και αλέστηκαν λεπτά σε μηχανικό μύλο. Η εκχύλιση του αποξηραμένου φυτού (40 g) πραγματοποιήθηκε με μέθοδο εκχύλισης ή διαβροχής Soxhlet χρησιμοποιώντας 400 mL αιθανόλης ή μεθανόλης. Τα εκχυλίσματα διηθήθηκαν και εξατμίστηκαν μέχρι ξηρού υπό κενό. Στη συνέχεια, τα αποξηραμένα υπολείμματα διαλύθηκαν σε DMSO ως μητρικό διάλυμα 100 mg/mL και αποθηκεύτηκαν στους -20 ◦C για περαιτέρω μελέτη.

4.3. Προσδιορισμός Ολικής Φαινολικής Περιεκτικότητας

Η συνολική περιεκτικότητα σε φαινολικά συστατικά πραγματοποιήθηκε με τη μέθοδο Folin–Ciocalteu [47]. Εν συντομία, 50 μL εκχυλισμάτων σε 1 mg/mL σε απιονισμένο νερό αναμίχθηκαν με 50 μL αντιδραστηρίου φαινόλης 10 τοις εκατό (w/v) Folin–Ciocalteu σε μια πλάκα 96-πηγαδιού και επωάστηκαν στο σκοτάδι σε θερμοκρασία δωματίου ( RT) για 20 λεπτά. Μετά την επώαση, 50 μL Na2CO3 7,5 τοις εκατό (β/ο) προστέθηκαν στο μίγμα και επωάστηκαν για άλλα 20 λεπτά. Η απορρόφηση μετρήθηκε με συσκευή ανάγνωσης μικροπλάκας στα 760 nm. Η συνολική περιεκτικότητα σε φαινόλη υπολογίστηκε από μια τυπική καμπύλη βαθμονόμησης χρησιμοποιώντας γαλλικό οξύ από 1,56 έως 100 μg/mL, και τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως mg ισοδύναμου γαλλικού οξέος (GAE) ανά g εκχυλίσματος ξηρού βάρους.

4.4. Προσδιορισμός Ολικής Περιεκτικότητας σε Φλαβονοειδή

Η συνολική περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή πραγματοποιήθηκε με χρήση χλωριούχου αργιλίου (AlCl3) [47]. Εν συντομία, 50 μL εκχυλισμάτων σε 1 mg/mL σε απιονισμένο νερό φτιάχτηκαν μέχρι τα 200 μL με 95 τοις εκατό αιθανόλη, και στη συνέχεια 10 μL 10 τοις εκατό AlCl3 και 10 μL 1 M NaOAc προστέθηκαν σε ένα φρεάτιο 96-. πλάκα. Η πλάκα επωάστηκε στο σκοτάδι σε ΘΔ για 40 λεπτά και η απορρόφηση μετρήθηκε με συσκευή ανάγνωσης μικροπλάκας στα 415 nm. Η συνολική περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή υπολογίστηκε από μια τυπική καμπύλη βαθμονόμησης χρησιμοποιώντας κερκετίνη από 1,56 έως 100 μg/mL, και τα αποτελέσματα έδειξαν ως mg ισοδύναμου κερσετίνης (QE) ανά g εκχυλίσματος ξηρού βάρους.

4.5. Προσδιορισμός Δραστηριότητας Σάρωσης Ριζικών DPPH

Η δοκιμασία δραστικότητας σάρωσης ριζών DPPH πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [47]. Το αντιδραστήριο εργασίας DPPH• παρασκευάστηκε με DPPH διαλυμένο σε απόλυτη αιθανόλη. Εν συντομία, 180 μL διαλύματος εργασίας DPPH• αναμίχθηκαν με 20 μL εκχυλισμάτων σε μια πλάκα 96-πηγαδιού και επωάστηκαν στο σκοτάδι σε RT για 15 λεπτά και η απορρόφηση μετρήθηκε με συσκευή ανάγνωσης μικροπλακών στα 517 nm. Το ασκορβικό οξύ από 1,56 έως 100 μg/mL χρησιμεύει ως πρότυπο. Η δραστηριότητα δέσμευσης ριζών υπολογίστηκε ως το ποσοστό αναστολής των ελεύθερων ριζών χρησιμοποιώντας την ακόλουθη εξίσωση:

Τα ποσοστά της δραστηριότητας δέσμευσης DPPH κάθε εκχυλίσματος φυτού συγκρίθηκαν με εκείνα του ασκορβικού οξέος. Τα αποτελέσματα εκφράστηκαν ως mg αντιοξειδωτικής ικανότητας ισοδύναμου βιταμίνης C (VCEAC) ανά g εκχυλίσματος ξηρού βάρους. Η IC50 (μισή-μέγιστη ανασταλτική συγκέντρωση) προσδιορίστηκε από το γράφημα του ποσοστού αναστολής έναντι της συγκέντρωσης κάθε εκχυλίσματος.

4.6. Προσδιορισμός Δραστηριότητας Σάρωσης Ριζικών ABTS

Ο προσδιορισμός δραστηριότητας καθαρισμού ριζών ABTS πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [47]. Το αντιδραστήριο εργασίας ABTS• plus παρασκευάστηκε με ανάμειξη 7 mM ABTS• και 2,45 mM K2S2O8 σε αναλογία 1:1 και το μείγμα έπρεπε να παραμείνει για 16–18 ώρες στο σκοτάδι σε θερμοκρασία δωματίου. Το διάλυμα εργασίας ABTS• plus αραιώθηκε με απόλυτη αιθανόλη για να φτάσει η απορρόφηση μεταξύ 0,7 και 0,8 στα 734 nm. Εν συντομία, 180 μL διαλύματος εργασίας ABTS• συν αναμίχθηκαν με 20 μL εκχυλισμάτων σε μια πλάκα 96-πηγαδιού και επωάστηκαν στο σκοτάδι σε θερμοκρασία δωματίου για 30 λεπτά και η απορρόφηση μετρήθηκε με συσκευή ανάγνωσης μικροπλακών στα 734 nm. Το ασκορβικό οξύ από 1,56 έως 100 μg/mL χρησιμεύει ως πρότυπο. Η δραστικότητα δέσμευσης ριζών υπολογίστηκε ως το ποσοστό αναστολής των ελεύθερων ριζών χρησιμοποιώντας την Εξίσωση (1).

Τα ποσοστά της δραστηριότητας δέσμευσης ABTS κάθε εκχυλίσματος φυτού συγκρίθηκαν με εκείνα του ασκορβικού οξέος. Τα αποτελέσματα εκφράζονται ως mg ισοδύναμης αντιοξειδωτικής ικανότητας βιταμίνης C (VCEAC) ανά g εκχυλίσματος ξηρού βάρους. Η IC50 προσδιορίστηκε από το γράφημα της ποσοστιαίας αναστολής έναντι της συγκέντρωσης κάθε εκχυλίσματος.

4.7. Προσδιορισμός Δραστικότητας Αντι-Ελαστάσης

Η δράση κατά της ελαστάσης αξιολογήθηκε με τη δοκιμασία αναστολής ελαστάσης χρησιμοποιώντας το τροποποιημένο πρωτόκολλο [13,48,49]. Εν συντομία, 20 µL εκχυλισµάτων, 10 µL 0.4 U/mL παγκρεατικής ελαστάσης χοίρου (PPE) και 140 µL ρυθμιστικού διαλύματος Tris-HCL 0,1 M σε pH 8,0 προστέθηκαν σε μια πλάκα 96-πηγαδιού και προεπωάστηκαν σε RT για 20 λεπτά. Μετά την επώαση, 30 μL SANA 2 mM προστέθηκαν στο μίγμα της αντίδρασης και επωάστηκαν περαιτέρω για 30 λεπτά σε ΘΔ. Η απορρόφηση μετρήθηκε με συσκευή ανάγνωσης μικροπλάκας στα 734 nm. Το EGCG χρησιμοποιήθηκε για να χρησιμεύσει ως θετικός έλεγχος για αναστολή. Ο αρνητικός έλεγχος περιείχε 100 τοις εκατό DMSO αντί των εκχυλισμάτων. Η εκατοστιαία αναστολή της δραστικότητας ελαστάσης υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας την εξίσωση (1). Η IC50 προσδιορίστηκε από το γράφημα της ποσοστιαίας αναστολής ελαστάσης έναντι μιας συγκέντρωσης κάθε εκχυλίσματος.

4.8. Προσδιορισμός της δράσης κατά της τυροσινάσης

Η δράση κατά της τυροσινάσης πραγματοποιήθηκε με τη μέθοδο της ντοπαχρώμης με ορισμένες τροποποιήσεις [8]. Εν συντομία, 20 μL εκχυλισμάτων, 20 μL 200 U/mL τυροσινάσης μανιταριού και 140 μL ρυθμιστικού διαλύματος φωσφορικών 0,1 Μ σε pH 6,8 προστέθηκαν σε τρυβλία φρεατίων και προεπωάστηκαν σε RT για 20 λεπτά. Μετά την επώαση, 40 μL L-DOPA 2,5 mM προστέθηκαν στο μίγμα της αντίδρασης και επωάστηκαν περαιτέρω για 20 λεπτά σε ΘΔ. Η απορρόφηση διαβάστηκε με συσκευή ανάγνωσης μικροπλάκας στα 492 nm. Το ΚΑ χρησιμοποιήθηκε για να χρησιμεύσει ως θετικός μάρτυρας για αναστολή. Ο αρνητικός έλεγχος περιείχε 100 τοις εκατό DMSO αντί των εκχυλισμάτων. Η εκατοστιαία αναστολή της δραστηριότητας τυροσινάσης υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας την εξίσωση (1). Η IC50 προσδιορίστηκε από το γράφημα της ποσοστιαίας αναστολής της τυροσινάσης έναντι μιας συγκέντρωσης κάθε εκχυλίσματος.

4.9. Molecular Docking

4.9.1. Παρασκευή προσδέματος

Ένας κατάλογος φυτοχημικών ενώσεων από τα τρία πιο αποτελεσματικά φυτά με ισχυρή αναστολή έναντι της ελαστάσης ή της τυροσινάσης επιλέχθηκε από τη δημοσιευμένη βιβλιογραφία [25–28,30–32,42,50–61] (Πίνακας S3). Όλες οι χημικές δομές των ενώσεων δημιουργήθηκαν από την ονομασία IUPAC χρησιμοποιώντας το BIOVIA Draw 2019 (BIOVIA, San Diego, CA, USA). Στη συνέχεια, οι ενώσεις καθαρίστηκαν γεωμετρικά και αποθηκεύτηκαν το αρχείο σε μορφή pdb χρησιμοποιώντας το Discovery Studio Visualizer (BIOVIA, San Diego, CA, USA). Αυτά τα αρχεία μετατράπηκαν σε μορφή pdbqt χρησιμοποιώντας το λογισμικό AutoDockTools-1.5.6 (The Scripps Research Institute, San Diego, CA, USA).

4.9.2. Παρασκευή πρωτεϊνών

Οι κρυσταλλογραφικές δομές ακτίνων Χ της ελαστάσης (PDB ID: 3HGP) [62] και της τυροσινάσης (PDB ID: 2Y9X) [63] ελήφθησαν από την RCSB Protein Data Bank. Πριν από τη μελέτη σύνδεσης, χρησιμοποιώντας το Discovery Studio Visualizer, τα μόρια νερού και ο αρχικός αναστολέας αφαιρέθηκαν από τη δομή της πρωτεΐνης, εξαιρουμένου του Cu2 plus στις δομές της τυροσινάσης. Αυτές οι δομές πρωτεΐνης παρασκευάστηκαν χρησιμοποιώντας την προετοιμασμένη διάταξη πρωτεΐνης στο λογισμικό AutoDockTools-1.5.6. Όλα τα υδρογόνα που λείπουν και τα φορτία Kollman προστέθηκαν στη δομή της πρωτεΐνης και αποθηκεύτηκαν στο αρχείο για να μορφοποιήσουν το pdbqt για μελέτη σύνδεσης.

4.9.3. Molecular Docking

Πραγματοποιήθηκαν μελέτες μοριακής σύνδεσης χρησιμοποιώντας το προεπιλεγμένο πρωτόκολλο στο λογισμικό AutoDockTools{{0}}.5.6. Οι θέσεις πλέγματος ορίστηκαν με απόσταση 0,375 Å. Οι διαστάσεις x–y–z ορίστηκαν σε 40 × 40 × 40 σημεία για την ελαστάση και 60 × 60 × 60 σημεία για την τυροσινάση. Το πλαίσιο πλέγματος των κέντρων x, y και z ήταν 12,58, 9,36 και 2,251 για την ελαστάση και −10,044, −28,706 και −43,443 για την τυροσινάση. Η μελέτη σύνδεσης πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας τον Γενετικό Αλγόριθμο Λαμάρκ (GA) με προεπιλεγμένες παραμέτρους και τα αποτελέσματα σύνδεσης αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό AutoDockTools-1.5.6 και το Discovery Studio Visualizer.

4.10. Στατιστική ανάλυση

Όλα τα πειράματα πραγματοποιήθηκαν τουλάχιστον εις τριπλούν και τα αποτελέσματα αντιπροσωπεύθηκαν ως η μέση ± τυπική απόκλιση (SD). Οι τιμές IC50 αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό SigmaPlot έκδοση 12.0. Η συσχέτιση μεταξύ διαφορετικών μεταβλητών εκφράστηκε ως συντελεστές συσχέτισης Pearson (r). Η συσχέτιση προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το GraphPad Prism (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA) και τα αποτελέσματα θεωρήθηκαν στατιστικά σημαντικά όταν το p ήταν μικρότερο από 0,05 (ρ < 0,05).

5. Συμπεράσματα

Συνοπτικά, τα ευρήματά μας αποκάλυψαν τέσσερα φαρμακευτικά φυτά της Ταϊλάνδης που περιέχουν πολλά υποσχόμενες υποψήφιες ενώσεις για ανάπτυξη ως παράγοντες κατά της γήρανσης του δέρματος. Τα εκχυλίσματα φύλλων του A. occidentale και του G. zeylanicum επέδειξαν ισχυρή ανασταλτική δράση έναντι των ενζύμων ελαστάσης και τυροσινάσης, ενώ τα εκχυλίσματα φύλλων S. alata και φρούτου A. catechu εμφάνισαν τη δράση τους πιο έντονα μόνο προς την ελαστάση ή την τυροσινάση, αντίστοιχα. Αρκετές ενώσεις που προέρχονται από αυτά τα φυτά επιβεβαιώθηκαν επίσης για τις ικανότητές τους να συνδέονται και στα δύο ένζυμα μέσω της μελέτης μοριακής σύνδεσης. Επιπλέον, το φύλλο G. zeylanicum, το φύλλο A. occidentale και ο καρπός A. catechu διαθέτουν σημαντικό αντιοξειδωτικό δυναμικό έναντι των ελεύθερων ριζών με υψηλές ποσότητες φαινολικών και φλαβονοειδών. Συνολικά, ο καρπός A. catechu, το φύλλο A. occidentale, το φύλλο G. zeylanicum και το φύλλο S. alata αναγνωρίζονται ως φυσικές πηγές αντιοξειδωτικών, αντι-ελαστάσης και αντι-τυροσινάσης, τα οποία θεωρούνται δυνητικά χρήσιμα για τη θεραπεία κατά της γήρανσης του δέρματος.

Συνεισφορές συγγραφέα:Conceptualization, AP; Διερεύνηση και επίσημη ανάλυση, KC, SC (Sawarin Chumpolphant), PR και CS; Επικύρωση, PR και AP. Οπτικοποίηση, KC και SC (Sawarin Chumpolphant); Γράψιμο—Προετοιμασία πρωτότυπου σχεδίου, KC, SC (Sawarin Chumpolphant), PR, CS και AP. Γράψιμο—Επισκόπηση και επεξεργασία, KC, SC (Sawarin Chumpolphant), PR, CS, SC (Siriporn Chuchawankul), TT και AP; Εποπτεία, TT και AP. Software, SC (Siriporn Chuchawankul) και TT; Πόροι, TT και AP. Απόκτηση χρηματοδότησης, AP Όλοι οι συγγραφείς έχουν διαβάσει και έχουν συμφωνήσει με τη δημοσιευμένη έκδοση του χειρογράφου.

Χρηματοδότηση: Αυτή η έρευνα υποστηρίχθηκε οικονομικά από το Ταμείο Επιστημονικής Έρευνας και Καινοτομίας της Ταϊλάνδης Chulalongkorn University (CU_FRB65_hea (91)_198_53_01) και το Γραφείο του Μόνιμου Γραμματέα, Υπουργείο Τριτοβάθμια Εκπαίδευση, Επιστήμη, Έρευνα και Καινοτομία (Αριθμός επιχορήγησης RGNS 63- 003). Η KC θα ήθελε επίσης να ευχαριστήσει την 90η επέτειο του Πανεπιστημιακού Ταμείου Chulalongkorn (Ratchadaphiseksomphot Endowment Fund).

Δήλωση διαθεσιμότητας δεδομένων:Δεν εφαρμόζεται.

Ευχαριστίες: Οι συγγραφείς είναι ευγνώμονες στους Maneewan Suwatronnakorn, Somchai Issaravanich και Chatrawee Duangjan για την ευγενική τους βοήθεια στην προετοιμασία των φυτικών εκχυλισμάτων. Είμαστε επίσης ευγνώμονες στους Nijsiri Ruangrungsi και Chanida Palanuvej για τη βοήθειά τους με την αναγνώριση φυτών και τον Dicson Sheeja Malar για τη βοήθειά τους στην αγγλική επεξεργασία του χειρογράφου. Το AP είναι ευγνώμονες για τις επιχορηγήσεις για την ανάπτυξη νέου προσωπικού καθηγητών, Ratchadaphiseksomphot Endowment Fund, Πανεπιστήμιο Chulalongkorn.

Σύγκρουση συμφερόντων:Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν υπάρχει σύγκρουση συμφερόντων.

βιβλιογραφικές αναφορές

1. Kligman, AM Ποια είναι η «αληθινή» λειτουργία του δέρματος; Exp. Dermatol. 2002, 11, 159.

2. Zhang, S.; Duan, E. Καταπολέμηση της γήρανσης του δέρματος: Ο δρόμος από τον πάγκο στο κρεβάτι. Μεταμόσχευση κυττάρων. 2018, 27, 729–738. [CrossRef] [PubMed]

3. Farage, MA; Miller, KW; Elsner, Ρ.; Maibach, HI Χαρακτηριστικά του Γηράσκοντος Δέρματος. Adv. Wound Care 2013, 2, 5–10. [CrossRef] [PubMed]

4. Farage, MA; Miller, KW; Maibach, HI (Επιμ.) Εκφυλιστικές αλλαγές στο γήρανση του δέρματος. Στο Textbook of Aging Skin; Springer: Βερολίνο/Χαϊδελβέργη, Γερμανία, 2017; σελ. 15–30.

5. Vierkötter, Α.; Krutmann, J. Περιβαλλοντικές επιρροές στη γήρανση του δέρματος και σε εθνοτικές εκδηλώσεις. Dermatoendocrinology 2012, 4, 227-231. [CrossRef] [PubMed]

6. Shin, J.-W.; Kwon, S.-H.; Choi, J.-Y.; Na, J.-I.; Huh, C.-H.; Choi, H.-R.; Park, K.-C. Μοριακοί μηχανισμοί δερματικής γήρανσης και προσεγγίσεις αντιγήρανσης. Int. J. ΜοΙ. Sci. 2019, 20, 2126. [CrossRef]

7. Rinnerhaler, Μ.; Bischof, J.; Streubel, Μ.; Trost, Α.; Richter, K. Oxidative Stress in Aging Human Skin. Biomolecules 2015, 5, 545-589. [CrossRef]

8. Chatatikun, Μ.; Chiabchalard, A. Ταϊλανδικά φυτά με υψηλά επίπεδα αντιοξειδωτικών, δράση δέσμευσης ελεύθερων ριζών, δράση κατά της τυροσινάσης και κατά της κολλαγενάσης. Συμπλήρωμα BMC. Εναλλακτική. Med. 2017, 17, 487. [CrossRef]

9. Lephart, ED Γήρανση του δέρματος και οξειδωτικό στρες: Τα αντιγηραντικά αποτελέσματα του Equol μέσω βιοχημικών και μοριακών μηχανισμών. Aging Res. Αναθ. 2016, 31, 36–54. [CrossRef]

10. Peng, Η.-Υ.; Lin, C.-C.; Wang, Η.-Υ.; Shih, Υ.; Chou, S.-T. Οι επιδράσεις αλλοίωσης της μελανογένεσης του αιθέριου ελαίου Achillea millefolium L. και του οξικού λιναλυλεστέρα: Εμπλοκή του οξειδωτικού στρες και των οδών σηματοδότησης JNK και ERK στα κύτταρα μελανώματος. PLoS ONE 2014, 9, e95186. [CrossRef]

11. Park, JH; Ku, HJ; Lee, JH; Park, J.-W. Η ανεπάρκεια IDH2 επιταχύνει τη μελάγχρωση του δέρματος σε ποντίκια μέσω της ενίσχυσης της μελανογένεσης. Redox Biol. 2018, 17, 16–24. [CrossRef]

12. Jiratchayamaethasakul, C.; Ding, Υ.; Hwang, Ο.; Im, S.-T.; Jang, Υ.; Myung, S.-W.; Lee, JM; Kim, H.-S.; Ko, S.-C.; Lee, S.-H. In vitro έλεγχος ελαστάσης, κολλαγενάσης, υαλουρονιδάσης και τυροσινάσης ανασταλτικές και αντιοξειδωτικές δράσεις 22 φυτικών εκχυλισμάτων αλόφυτων για νέα καλλυντικά. Ψάρι. Aquat. Sci. 2020, 23, 6. [CrossRef]

13. Thring, TS; Hili, Ρ.; Naughton, DP Αντικολλαγενάση, αντι-ελαστάση και αντιοξειδωτική δράση εκχυλισμάτων από 21 φυτά. Συμπλήρωμα BMC. Εναλλακτική. Med. 2009, 9, 27. [CrossRef] [PubMed]

14. Bravo, Κ.; Alzate, F.; Osorio, E. Καρποί επιλεγμένων άγριων και καλλιεργημένων φυτών των Άνδεων ως πηγές πιθανών ενώσεων με αντιοξειδωτική και αντιγηραντική δράση. Ind. Crops Παρ. 2016, 85, 341–352. [CrossRef]

15. Kunwar, RM; Shrestha, KP; Bussmann, RW Παραδοσιακή βοτανοθεραπεία στο Άπω-Δυτικό Νεπάλ: Μια φαρμακολογική εκτίμηση. J. Ethnobiol. Ethnomedicine 2010, 6, 35. [CrossRef] [PubMed]

16. Singh, G.; Passsari, AK; Leo, VV; Mishra, VK; Subbarayan, S.; Singh, BP; Kumar, Β.; Kumar, S.; Gupta, VK; Lalhlenmawia, H. Evaluation of phenolic content variability μαζί με το αντιοξειδωτικό, αντιμικροβιακό και κυτταροτοξικό δυναμικό επιλεγμένων παραδοσιακών φαρμακευτικών φυτών από την Ινδία. Εμπρός. Plant Sci. 2016, 7, 407. [CrossRef]

17. Byun, N.-y.; Heo, M.-R.; Yim, S.-H. Συσχέτιση των αντιρυτιδικών και των αντιοξειδωτικών δράσεων των ελεύθερων ριζών του ξηρού καρπού Areca με περιεκτικότητα σε φαινολικά και φλαβονοειδή. Food Sci. Τεχνολ. 2021, 41, 1041–1049. [CrossRef]

18. Sellar, Τ.; Arulrajah, AA; Lanka, V. The Role of Social Support on Job Burnout in the Apparel Firm. Int. Λεωφορείο. Res. 2019, 12, 110–118. [CrossRef]

19. Vierkötter, Α.; Schikowski, Τ.; Ranft, U.; Sugiri, D.; Matsui, Μ.; Krämer, U.; Krutmann, J. Έκθεση σωματιδίων στον αέρα και εξωτερική γήρανση του δέρματος. J. Investig. Dermatol. 2010, 130, 2719–2726. [CrossRef]

20. Lee, Α.-Υ. Ανωμαλίες μελάγχρωσης του δέρματος και η πιθανή σχέση τους με τη γήρανση του δέρματος. Int. J. ΜοΙ. Sci. 2021, 22, 3727. [CrossRef]

21. Popoola, ΟΚ. Marnewick, JL; Rautenbach, F.; Ameer, F.; Iwuoha, EI; Hussein, AA Αναστολή του οξειδωτικού στρες και των ενζύμων που σχετίζονται με τη γήρανση του δέρματος από πρενυλιωμένες χαλκόνες και άλλα φλαβονοειδή από το Helichrysum teretifolium. Molecules 2015, 20, 7143-7155. [CrossRef]

22. Tu, Υ.; Quan, T. Οξειδωτικό στρες και γήρανση του συνδετικού ιστού του ανθρώπινου δέρματος. Cosmetics 2016, 3, 28. [CrossRef]

23. Azmi, Ν.; Hashim, Ρ.; Hashim, DM; Halimoon, Ν.; Majid, NMN Αντι-ελαστάση, αντι-τυροσινάση και ανασταλτική δράση μεταλλοπρωτεϊνάσης μήτρας-1 εκχυλισμάτων γαιοσκώληκα ως πιθανό νέο αντιγηραντικό παράγοντα. Asian Pac. J. Trop. Biomed. 2014, 4, S348–S352. [CrossRef] [PubMed]

24. Rangsinth, Ρ.; Sillapachaiyaporn, C.; Nilkhet, S.; Tencomnao, Τ.; Ung, AT; Chuchawankul, S. Οι βιοδραστικές ενώσεις που προέρχονται από μανιτάρια δυνητικά χρησιμεύουν ως αναστολείς της κύριας πρωτεάσης SARS-CoV-2: Μια in silico προσέγγιση. J. Tradit. Συμπλήρωμα. Med. 2021, 11, 158–172. [CrossRef] [PubMed]

25. Konan, NA; Bacchi, EM Αντιελκογόνο δράση και οξεία τοξικότητα υδροαιθανολικού εκχυλίσματος από φύλλα κάσιους (Anacardium occidentale L.). J. Ethnopharmacol. 2007, 112, 237–242. [CrossRef] [PubMed]

26. Ajileye, Ο.; Obuotor, Ε.; Akinkunmi, Ε.; Aderogba, M. Απομόνωση και χαρακτηρισμός αντιοξειδωτικών και αντιμικροβιακών ενώσεων από εκχύλισμα φύλλων Anacardium occidentale L.(Anacardiaceae). J. King Saud Univ. Sci. 2015, 27, 244–252. [CrossRef]

27. Chotphruethipong, L.; Benjakul, S.; Kijroongrojana, K. Βελτιστοποίηση εκχύλισης αντιοξειδωτικών φαινολικών ενώσεων από φύλλα κάσιους (Anacardium occidentale L.) με χρήση μεθοδολογίας επιφάνειας απόκρισης. J. Food Biochem. 2017, 41, e12379. [CrossRef]

28. Moriyama, Η.; Iizuka, Τ.; Nagai, Μ.; Miyazaki, Η.; Satoh, T. Αντιφλεγμονώδης δράση του θερμικά επεξεργασμένου εκχυλίσματος φύλλων Cassia alata και του φλαβονοειδούς γλυκοζίτη του. Yakugaku Zasshi 2003, 123, 607–611. [CrossRef]

29. Chatatikun, Μ.; Yamauchi, Τ.; Yamasaki, Κ.; Aiba, S.; Chiabchalard, Α. Αντιμελανογονική επίδραση των φύλλων υποστρωμάτων Croton roxburghii και Croton σε κύτταρα B16F10 που διεγείρονται από -MSH. J. Tradit. Συμπλήρωμα. Med. 2019, 9, 66–72. [CrossRef]

30. Wang, R.; Pan, F.; Αυτήν.; Kuang, F.; Wang, L.; Εκχυλίσματα σπόρων Lin, X. Arecanut (Areca catechu L.) που εκχυλίζονται με συμβατικούς και φιλικούς προς το περιβάλλον διαλύτες: Σχέση μεταξύ φυτοχημικών συνθέσεων και βιολογικών δραστηριοτήτων με πολυπαραγοντική ανάλυση. J. Appl. Res. Med. Αρωματικό. Plants 2021, 25, 100336. [CrossRef]

31. Nonaka, G.-i.; Hsu, F.-L.; Nishioka, Ι. Δομές διμερών, τριμερών και τετραμερών προκυανιδινών από την Areca catechu LJ Chem. Soc. Chem. Commun. 1981, 15, 781-783. [CrossRef]

32. Duangjan, C.; Rangsinth, Ρ.; Zhang, S.; Wink, Μ.; Tencomnao, T. Anacardium Occidentale, L. Leaf Extracts Protect Against Glutamate/H2O2-Επαγόμενη οξειδωτική τοξικότητα και επάγουν ανάπτυξη νευρίτη: Η συμμετοχή του μονοπατιού σηματοδότησης SIRT1/Nrf2 και της Διαμεμβρανικής Πρωτεϊνίνης 4. Εμπρός. Pharmacol. 2021, 12, 627738. [CrossRef] [PubMed]

33. Duangjan, C.; Rangsinth, Ρ.; Gu, Χ.; Zhang, S.; Wink, Μ.; Τα εκχυλίσματα φύλλων Tencomnao, T. Glochidion zeylanicum επιδεικνύουν ιδιότητες επιμήκυνσης της διάρκειας ζωής και αντοχής στο οξειδωτικό στρες στο Caenorhabditis elegans μέσω οδών σηματοδότησης DAF{-16/FoxO και SKN-1/Nrf-2. Phytomedicine 2019, 64, 153061. [CrossRef] [PubMed]

34. Oladeji, OS; Adelowo, FE; Oluyori, AP; Bankole, DT Εθνοβοτανική περιγραφή και βιολογικές δραστηριότητες του Senna alata. Evid. Βασισμένο Συμπλήρωμα. Εναλλακτικό. Med. 2020, 2020, 2580259. [CrossRef] [PubMed]

35. Peng, W.; Liu, Υ.-J.; Wu, Ν.; Sun, Τ.; Αυτός, Χ.-Υ.; Gao, Υ.-Χ.; Wu, C.-J. Areca catechu L.(Arecaceae): Ανασκόπηση των παραδοσιακών χρήσεών του, της βοτανικής, της φυτοχημείας, της φαρμακολογίας και της τοξικολογίας. J. Ethnopharmacol. 2015, 164, 340–356. [CrossRef]

36. Salehi, Β.; Konovalov, DA; Fru, Ρ.; Kapewangolo, Ρ.; Peron, G.; Ksenija, MS; Cardoso, SM; Pereira, OR; Nigam, Μ.; Nicola, S. Areca catechu—Από το αγρόκτημα στα τρόφιμα και τις βιοϊατρικές εφαρμογές. Phytother. Res. 2020, 34, 2140–2158. [CrossRef]

37. Verma, DK; Bharat, Μ.; Nayak, D.; Shanbhag, Τ.; Shanbhag, V.; Rajput, RS Areca catechu: Επίδραση τοπικού αιθανολικού εκχυλίσματος στην επούλωση πληγών εγκαυμάτων σε αλμπίνο αρουραίους. Int. J. Pharmacol. Clin. Sci. 2012, 1, 74–78.

38. Pithayanukul, Ρ.; Nithitanakool, S.; Bavovada, R. Ηπατοπροστατευτικό δυναμικό εκχυλισμάτων από σπόρους Areca catechu και nutgalls Quercus infectoria. Molecules 2009, 14, 4987-5000. [CrossRef]

39. Salehi, Β.; Gültekin-Özgüven, M.; Kirkin, C.; Özçelik, Β.; Morais-Braga, MFB; Carneiro, JNP; Bezerra, CF; Silva, TGd; Coutinho, HDM; Amina, B. Αντιοξειδωτικές, αντιμικροβιακές και αντικαρκινικές επιδράσεις των φυτών Anacardium: Μια εθνοφαρμακολογική προοπτική. Εμπρός. Endocrinol. 2020, 11, 295. [CrossRef]

40. Duangjan, C.; Rangsinth, Ρ.; Zhang, S.; Gu, Χ.; Wink, Μ.; Tencomnao, T. Νευροπροστατευτικές Επιδράσεις του Εκχυλίσματος Φύλλων Glochidion zeylanicum κατά της Τοξικότητας που προκαλείται από H2O2/Γλουταμινικό σε Καλλιεργημένα Νευρονικά Κύτταρα και Α-Επαγόμενη Τοξικότητα σε Caenorhabditis elegans. Biology 2021, 10, 800. [CrossRef]

41. Duangjan, C.; Rangsinth, Ρ.; Gu, Χ.; Wink, Μ.; Tencomnao, T. Ιδιότητες επέκτασης και αντοχής στο οξειδωτικό στρες εκχυλισμάτων φύλλων από Anacardium occidentale L. στο Caenorhabditis elegans. Οξείδιο. Med. Κύτταρο. Λόνγκεφ. 2019, 2019, 9012396. [CrossRef]

42. Duangjan, C.; Rangsinth, Ρ.; Gu, Χ.; Zhang, S.; Wink, Μ.; Tencomnao, T. Δεδομένα για τις επιδράσεις των εκχυλισμάτων φύλλων Glochidion zeylanicum σε Caenorhabditis elegans. Σύντομη περιγραφή δεδομένων 2019, 26, 104461. [CrossRef] [PubMed]

43. Sugumar, Μ.; Doss, DVA; Maddisetty, PP Ηπατονεφρικά προστατευτικά αποτελέσματα υδροαιθανολικού εκχυλίσματος Senna alata σε ενζυμικά και μη ενζυματικά αντιοξειδωτικά συστήματα σε διαβητικούς αρουραίους που προκαλούνται από στρεπτοζοτοκίνη. Ενσωμάτωση. Med. Res. 2016, 5, 276–283. [CrossRef] [PubMed]

44. Aryal, S.; Baniya, MK; Danekhu, Κ.; Kunwar, Ρ.; Gurung, R.; Koirala, N. Ολική περιεκτικότητα σε φαινολικά, περιεκτικότητα σε φλαβονοειδή και αντιοξειδωτικό δυναμικό άγριων λαχανικών από το Δυτικό Νεπάλ. Plants 2019, 8, 96. [CrossRef] [PubMed]

45. Panche, Α.; Diwan, Α.; Chandra, S. Φλαβονοειδή: Μια επισκόπηση. J. Nutr. Sci. 2016, 5, e47. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Tazeddinova, D.; Rahman, Μ.; Hamdan, SB; Matin, MM; Bin Bakri, MK; Rahman, MM Συσχετίσεις πολυφαινολών με βάση τις φυτές με πρωτεΐνη: μια προοπτική ανασκόπηση. BioResources 2022, 17, 1–25. [CrossRef]

47. Prasansuklab, Α.; Το εκχύλισμα φύλλων Tencomnao, T. Acanthus ebracteate παρέχει προστασία των νευρωνικών κυττάρων έναντι του τραυματισμού του οξειδωτικού στρες που προκαλείται από το γλουταμικό. Συμπλήρωμα BMC. Εναλλακτική. Med. 2018, 18, 278. [CrossRef]

48. Abhijit, S.; Manjushree, D. Αντι-υαλουρονιδάση, η δράση κατά της ελαστάσης του Garcinia indica. Int. J. Bot. 2010, 6, 299–303.

49. Widowati, W.; Rani, AP; Hamzah, RA; Arumwardana, S.; Afifah, Ε.; Kusuma, HSW; Rihibiha, DD; Nufus, Η.; Amalia, A. Αντιοξειδωτικές και αντιγηραντικές δοκιμασίες του εκχυλίσματος Hibiscus sabdariffa και των ενώσεων του. Nat. Κέντρο. Sci. 2017, 23, 192–200. [CrossRef]

50. Fernand, VE; Dinh, DT; Ουάσιγκτον, SJ; Fakayode, SO; Losso, JN; van Ravenswaay, RO; Warner, IM Προσδιορισμός φαρμακολογικά δραστικών ενώσεων σε εκχυλίσματα ριζών Cassia alata L. με χρήση υγρής χρωματογραφίας υψηλής απόδοσης. Talanta 2008, 74, 896–902. [CrossRef]

51. Jain, V.; Garg, Α.; Parascandola, Μ.; Chaturvedi, Ρ.; Khariwala, SS; Stepanov, I. Ανάλυση αλκαλοειδών σε προϊόντα που περιέχουν καρύδια αρέκα με υγρή χρωματογραφία-διαδοχική φασματομετρία μάζας. J. Agric. Food Chem. 2017, 65, 1977–1983. [CrossRef]

52. Liu, Α.; Xu, L.; Ζου, Ζ.; Yang, S. Μελέτες για χημικά συστατικά από φύλλα Cassia alata. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 2009, 34, 861–863. [PubMed]

53. Ming-Yue, W.; Jin-Hui, L.; Jian-Guo, L. Προσδιορισμός Πολυφαινολών σε Areca catechu με HPLC. Nat. Κέντρο. Res. Dev. 2011, 23, 101.

54. Mohammed, AR; Ali, Α.; Aboul-Enein, S.; Mohamed, F.; Abou, Ε.; Magdy, Μ.; Mohammed, Α. Έρευνα φυτοχημικής, κυτταροτοξικότητας και αντιοξειδωτικών φύλλων Cassia alata που αναπτύσσονται στην Αίγυπτο. J. Innov. Pharm. Biol. Sci 2017, 4, 97–105.

55. Okpuzor, J.; Ogbunugafor, Η.; Kareem, G.; Igwo-Ezikpe, M. In vitro διερεύνηση αντιοξειδωτικών φαινολικών ενώσεων σε εκχυλίσματα Senna alata. Res. J. Phytochem. 2009, 3, 68–76. [CrossRef]

56. Pongnimitprasert, Ν.; Wadkhien, Κ.; Chinpaisal, C.; Satiraphan, Μ.; Wetwitayaklung, P. Αντιφλεγμονώδη αποτελέσματα της ρήνης και των ακατέργαστων εκχυλισμάτων από Cassia alata L. σε κύτταρα HaCaT. Sci. Eng. Health Stud. 2018, 12, 19–32.

57. Promgool, Τ.; Pancharoen, Ο.; Deachathai, S. Αντιβακτηριδιακές και αντιοξειδωτικές ενώσεις από την Cassia alata Linn. Songklanakarin J. Sci. Τεχνολ. 2014, 36, 459–463.

58. Singh, Β.; Nadkarni, JR; Vishwakarma, RA; Bharate, SB; Nivsarkar, Μ.; Anandjiwala, S. Το υδροαλκοολικό εκχύλισμα των φύλλων Cassia alata (Linn.) και η κύρια ένωση του rhein εμφανίζει αντιαλλεργική δράση μέσω της σταθεροποίησης των μαστοκυττάρων και της αναστολής της λιποξυγενάσης. J. Ethnopharmacol. 2012, 141, 469–473. [CrossRef]

59. Wu, Q.; Yang, Υ.; Simon, JE Ποιοτικό και ποσοτικό HPLC/MS προσδιορισμός προανθοκυανιδινών σε καρύδι αρέκας (Areca catechu). Chem. Βιοδύτες. 2007, 4, 2817–2826. [CrossRef]

60. Zhang, W.-M.; Huang, W.-Y.; Chen, W.-X.; Han, L.; Zhang, H.-D. Βελτιστοποίηση των συνθηκών εκχύλισης πολυφαινολών σπόρων areca και αξιολόγηση των αντιοξειδωτικών τους δράσεων. Molecules 2014, 19, 16416–16427. [CrossRef]

61. Zhang, Χ.; Mei, W.; Zeng, Υ.; Liu, J. Φαινολικά συστατικά από τους καρπούς του Areca catechu και οι αντιβακτηριδιακές τους δράσεις. J. Trop. Υποτροπ. Bot. 2009, 17, 74–76.

62. Tamada, Τ.; Kinoshita, Τ.; Kurihara, Κ.; Adachi, Μ.; Ohhara, Τ.; Imai, Κ.; Kuroki, R.; Tada, T. Η συνδυασμένη ανάλυση νετρονίων υψηλής ανάλυσης και ακτίνων Χ της ανασταλμένης ελαστάσης επιβεβαιώνει την οπή οξυανιόντος στην ενεργό θέση, αλλά αποκλείει έναν δεσμό υδρογόνου χαμηλού φραγμού. Μαρμελάδα. Chem. Soc. 2009, 131, 11033–11040. [CrossRef] [PubMed]

63. Ismaya, WT; Rozeboom, HJ; Weijn, Α.; Mes, JJ; Fusetti, F.; Wichers, HJ; Dijkstra, BW Κρυσταλλική δομή της τυροσινάσης μανιταριού Agaricus bisporus: Ταυτότητα των τετραμερών υπομονάδων και αλληλεπίδραση με την τροπολόνη. Biochemistry 2011, 50, 5477-5486. [CrossRef] [PubMed]

Αποποίηση ευθύνης/Σημείωση εκδότη:Οι δηλώσεις, οι απόψεις και τα δεδομένα που περιέχονται σε όλες τις δημοσιεύσεις είναι αποκλειστικά του μεμονωμένου συγγραφέα ή συντελεστών και όχι του MDPI ή/και του συντάκτη. Το MDPI ή/και ο συντάκτης αποποιούνται την ευθύνη για οποιονδήποτε τραυματισμό ατόμων ή περιουσίας που προκύπτει από οποιεσδήποτε ιδέες, μεθόδους, οδηγίες ή προϊόντα που αναφέρονται στο περιεχόμενο.

【Για περισσότερες πληροφορίες:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】