Ένα αιθανολικό εκχύλισμα Cucurbita Pepo L. Seeds Τροποποιεί τη νευροενδοκρινική διαταραχή σε επίμυες με χρόνια στρες και την έκφραση των επινεφριδίων φλεγμονωδών δεικτών και HSP70

1 Τμήμα Βασικών Επιστημών, Κολλέγιο Ιατρικής, Πανεπιστήμιο Princess Nourah Bint Abdulrahman (PNU), Ριάντ, Σαουδική Αραβία,

2 Τμήμα Ιατρικής Ιστολογίας και Κυτταρικής Βιολογίας, Ιατρική Σχολή, Πανεπιστήμιο Mansoura, Mansoura, Αίγυπτος,

3 Τμήμα Ιστολογίας, Ιατρική Σχολή, Μενουφιφία Πανεπιστήμιο, Shebin ElKoum, Αίγυπτος,

4 Τμήμα Βασικών Ιατρικών Επιστημών, Unaizah College of Medicine and Medical Sciences, Πανεπιστήμιο Qassim, Buraydah, Σαουδική Αραβία,

5 Τμήμα Βιολογικής Επιστήμης, Σχολή Επιστημών, Πανεπιστήμιο King Abdulaziz, Τζέντα, Σαουδική Αραβία,

6 Τμήμα Ιατρικής Εργαστηριακής Τεχνολογίας, Σχολή Εφαρμοσμένων Ιατρικών Επιστημών, Πανεπιστήμιο Tabuk, Tabuk, Σαουδική Αραβία,

7 Τμήμα Βιοχημείας, Σχολή Επιστημών, Πανεπιστήμιο King Abdulaziz, Τζέντα, Σαουδική Αραβία,

8 Τμήμα Ιστολογίας και Κυτταρικής Βιολογίας, Ιατρική Σχολή, Πανεπιστήμιο Assuit, Asyut, Αίγυπτος,

9Yousef Abdullatif Jameel Πρόεδρος Προφητικών Ιατρικών Εφαρμογών (YAJCPMA), Ιατρική Σχολή, Πανεπιστήμιο King Abdulaziz, Τζέντα, Σαουδική Αραβία,

10 Τμήμα Αιματολογίας/Παιδιατρικής Ογκολογίας, Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο King Abdulaziz (KAUH), Ιατρική Σχολή, Πανεπιστήμιο King Abdulaziz, Τζέντα, Σαουδική Αραβία,

11 Τμήμα Ιατρικής Ιστολογίας, Ιατρική Σχολή, Πανεπιστήμιο Damietta, Damietta, Αίγυπτος

Για περισσότερες πληροφορίες: ali.ma@wecistanche.com

Ιστορικό:Οι κολοκύθες (Cucurbita pepo L.) περιγράφηκαν ότι έχουν αντιοξειδωτικές, αντιφλεγμονώδεις, αντι-κουραστικές και αντικαταθλιπτικές επιδράσεις. οεπινεφρίδιαείναι ένα σημαντικό όργανο που ανταποκρίνεται στο στρες και διατηρεί την ομοιόσταση κατά τη διάρκεια του στρες.

Στόχοι:Αυτή η μελέτη είχε ως στόχο να αξιολογήσει την αποτελεσματικότητα της χορήγησης του Cucurbitaεκχύλισμα pepo L. (CP) για την ανακούφιση συμπεριφορικών, βιοχημικών και δομικών αλλαγών στοεπινεφρίδιαπου προκαλείται από την έκθεση σε χρόνιο απρόβλεπτο ήπιο στρες (CUMS) και για τη διερεύνηση του μηχανισμού πίσω από αυτόν τον αντίκτυπο. Υλικά και Μέθοδοι: Σαράντα αρσενικοί αλμπίνο αρουραίοι χωρίστηκαν σε 4 ομάδες (n-10): ομάδες ελέγχου, CUMS, που έλαβαν θεραπεία με φλουοξετίνη και CP. Οι αλλαγές συμπεριφοράς, το επίπεδο κορτικοστερόνης, οι προφλεγμονώδεις κυτοκίνες TNF- και IL-6 και το οξειδωτικό/αντιοξειδωτικό προφίλ αξιολογήθηκαν στον ορό στο τέλος του πειράματος.ΕπινεφρίδιοςΟι αδένες υποβλήθηκαν σε επεξεργασία για ιστοπαθολογική και ανοσοϊστοχημική αξιολόγηση. Η γονιδιακή έκφραση της κασπάσης-3 και του Ki67 και η πρωτεΐνη θερμικού σοκ 70 (HSP70) αξιολογήθηκαν σε επινεφρίδια χρησιμοποιώντας RT-PCR.

Αποτελέσματα:Το εκχύλισμα CP μείωσε σημαντικά το επίπεδο κορτικοστερόνης (p < 0.001),χρόνος ακινησίας (p < 0.001)="" και="" φλεγμονώδεις="" και="" οξειδωτικές="" αλλαγές="" που="" σχετίζονται="" με="" κατάθλιψη="" που="" προκαλείται="" από="" cums="" σε="" σύγκριση="" με="" την="" ομάδα="" που="" δεν="" έλαβε="" θεραπεία.="" το="" εκχύλισμα="" cp="" ανακούφισε="" την="" επαγόμενη="" από="">επινεφρίδιοςιστοπαθολογικές αλλαγές και σημαντικά μειωμένη απόπτωση (p < 0.001) και σημαντικά αυξημένη ρύθμιση των επιπέδων αντιοξειδωτικών στον ορό.

Λέξεις-κλειδιά:κολοκύθα, στρες, κατάθλιψη, κασπάση-3, ki67, Hsp70, απόπτωση

Κάντε κλικ στο cistanche tubulosa δοσολογία για τα επινεφρίδια

ΕΙΣΑΓΩΓΗ

Περισσότεροι από 264 εκατομμύρια άνθρωποι όλων των ηλικιών υποφέρουν από κατάθλιψη σε όλο τον κόσμο (WHO, 2020). Η απόδοση του καταθλιπτικού ατόμου είναι γενικά κακή στο σχολείο, στη δουλειά και στην οικογένεια. Η κατάθλιψη μπορεί να οδηγήσει σε αυτοκτονία. Έτσι, θεωρείται η δεύτερη κύρια αιτία θανάτου σε ηλικίες από 15- έως 29-ετών (ΠΟΥ, 2020). Τα θηλαστικά μπορούν να επιβιώσουν από στρεσογόνα γεγονότα ενεργοποιώντας τις κατάλληλες φυσιολογικές αντιδράσεις σε αυτά τα γεγονότα. Τα επινεφρίδια είναι μέρος του άξονα υποθαλάμου-υπόφυσης-επινεφριδίων (HPA) και του άξονα συμπάθειας-επινεφριδιωματικό που διατηρεί την ομοιόσταση κατά τη διάρκεια του στρες (Ulrich-Lai et al., 2006). Αναφέρθηκε ότι η έκθεση σε θερμικό στρες έχει ως αποτέλεσμα την ταχεία έκφραση του HSP70 στον φλοιό των επινεφριδίων (Huang et al., 2001). Αυτές οι πρωτεΐνες μοιράζονται την ενδοκυτταρική διακίνηση, την παρουσίαση αντιγόνου, την απόπτωση και πολλές άλλες δράσεις (Khar et al., 2001). Έχει περιγραφεί ότι οι εξωγενείς ορμόνες ή η παρεμβολή με ενδογενείς ορμόνες, κατά τις κρίσιμες περιόδους ανάπτυξης, μπορεί να έχουν μόνιμες επιδράσεις στις φυσιολογικές και συμπεριφορικές οδούς που ρυθμίζονται από τα υποθαλαμικά νευροενδοκρινικά κυκλώματα (Gore and Patisaul, 2010). Η νευροενδοκρινική διαταραχή περιγράφηκε επίσης για να επεκτείνει την έννοια της ενδοκρινικής διαταραχής ώστε να συμπεριλάβει το πλήρες εύρος της ολοκληρωμένης φυσιολογίας. Ως εκ τούτου, είναι κάτι περισσότερο από ορμονική αναστάτωση (Waye and Trudeau, 2011). Οι αλλαγές στη νευροενδοκρινική ρύθμιση, στο μεταβολισμό και στη διατροφή/μικροβιότα θεωρούνται ερεθίσματα για φλεγμονή και προδιάθεση για ανάπτυξη κατάθλιψης (Huang et al., 2019). Υποστηρίχθηκε ότι η κατάθλιψη -μία από τις νευροψυχιατρικές διαταραχές- και η φλεγμονή έχουν αμφίδρομη σχέση. Ενώ η κατάθλιψη προάγει φλεγμονώδεις αντιδράσεις, η φλεγμονή προάγει νευροψυχιατρικές διαταραχές συμπεριλαμβανομένης της κατάθλιψης (Bauer and Teixeira, 2019). Η φλουοξετίνη, ένα κλασικό αντικαταθλιπτικό, συγκαταλέγεται στα φάρμακα που διατίθενται στην αγορά για τη θεραπεία της κατάθλιψης. Θεωρείται πλέον ένας αναδυόμενος νευροενδοκρινικός διαταράκτης.

Αυτή η επίδραση της φλουοξετίνης είναι μια παρενέργεια και όχι ο κύριος θεραπευτικός στόχος στα θηλαστικά (León-Olea et al., 2014). Επομένως, υπάρχει ανάγκη για ασφαλέστερα αντικαταθλιπτικά χωρίς παρενέργειες στη νευροενδοκρινική κατάσταση. Οι κολοκύθες (Cucurbita pepo L.) είναι οικονομικά σημαντικά είδη που καλλιεργούνται παγκοσμίως. Έχουν θρεπτικά οφέλη και οφέλη για την υγεία καθώς είναι πλούσια σε φαινόλες, φλαβονοειδή, αμινοξέα, υδατάνθρακες και βιταμίνες (Wang et al., 2002). Αρκετές ερευνητικές μελέτες αποκάλυψαν ότι οι κολοκύθες έχουν εκτεταμένες βιοδραστηριότητες, όπως αντιδιαβητικές, αντικαρκινικές, αντιοξειδωτικές, αντιφλεγμονώδεις, αντικαταθλιπτικές και αντικαταθλιπτικές επιδράσεις (Wang et al., 2012; Zhang et al., 2012; Nawirska-Olszańska al., 2013· Kim Nr et al., 2016). Η παραδοσιακή ιατρική κυρίως τα συστήματα της Αγιουρβέδα και η κινεζική ιατρική έχουν χρησιμοποιήσει διαφορετικά μέρη της κολοκύθας, συμπεριλαμβανομένης της σάρκας των φρούτων και των σπόρων (Perez Gutierrez, 2016). Η αντικαταθλιπτική αποτελεσματικότητα του Sweetme Sweet Pumpkin (SSP) και του Cucurbita moschata Duch είχε προηγουμένως δοκιμαστεί σε μια in vivo μελέτη χρησιμοποιώντας ένα ζωικό μοντέλο κατάθλιψης που προκαλείται από τη δοκιμασία κολύμβησης (FST) και συγκρίθηκε με τη φλουοξετίνη (Kim Nr et al., 2016) . Μία από τις σχετικά πρόσφατες ανασκοπήσεις συνόψισε ότι τα αντικαταθλιπτικά τρόφιμα, όπως οι σπόροι κολοκύθας, περιγράφηκαν ότι έχουν βαθμολογία αντικαταθλιπτικών τροφίμων 47%, παρέχοντας την αντικαταθλιπτική τους δράση (Lachance and Ramsey, 2018). Πρόσφατα, οι Dotto και Chacha ενέκριναν τη διεξαγωγή περισσότερων ερευνητικών μελετών σε ζώα και κλινικές δοκιμές, προκειμένου να επιβεβαιωθεί η βελτιωτική επίδραση των σπόρων κολοκύθας στην κατάθλιψη (Dotto and Chacha, 2020). Αυτές οι αναφορές ήταν ενθαρρυντικές για να δοκιμαστεί η αποτελεσματικότητα της κολοκύθας στην ανακούφιση των επιπτώσεων του χρόνιου στρες στα επινεφρίδια. Ως εκ τούτου, αυτή η μελέτη πραγματοποιήθηκε για να αξιολογήσει την επίδραση της από του στόματος χορήγησης του εκχυλίσματος Cucurbita pepo L. (CP) στην ανακούφιση από το χρόνιο απρόβλεπτο ήπιο στρες (CUMS) που προκαλείται από τη συμπεριφορά, τη βιοχημική και τη δομή των επινεφριδίων και να διερευνήσει τον μηχανισμό πίσω από αυτή την επίδραση .

ΥΛΙΚΑ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΙ

Εκχύλιση και Δοσολογία Κολοκύθας

Το Cucurbita pepo L. (δείγμα κουπονιού: AQJ_95) αγοράστηκε από την τοπική αγορά στη Τζέντα της Σαουδικής Αραβίας. Ταυτοποιήθηκαν στο ερμπάριο του Πανεπιστημίου King Abdulaziz χρησιμοποιώντας δείγματα βοτάνου και τη χλωρίδα του KSA (Chaudhary, 2001). Δείγματα κουπονιών κατατέθηκαν στο βοτανείο. Η CP αναγνωρίστηκε από τους συγγραφείς και επαληθεύτηκε από έναν βοτανολόγο από τη Σχολή Επιστημών του Πανεπιστημίου King Abdulaziz. Η εξαγωγή της CP έγινε σύμφωνα με προηγούμενες μελέτες (Wang et al., 2012). Τα ακατέργαστα φρούτα με τη φλούδα κόπηκαν χρησιμοποιώντας έναν τεμαχιστή και ξηράνθηκαν χρησιμοποιώντας έναν λυοφιλοποιητή (FD5508; ilShinBioBase Co., Ltd., Κορέα) και στη συνέχεια συνθλίφθηκαν χρησιμοποιώντας μια ηλεκτρική μηχανή λείανσης. Η σκόνη περάστηκε από 40-δικτυωτό κόσκινο για να πάρει μια λεπτή σκόνη και αποθηκεύτηκε σε αεροστεγές δοχείο. Η ξηρή σκόνη (50 g) αναμίχθηκε με 450 ml αιθανόλης 80 τοις εκατό και αφέθηκε για 1 ημέρα στους 37 βαθμούς C σε αναδευτήρα (JSSI-100T; JS Research Inc., Compact Shaking Incubator., Κορέα) και στη συνέχεια διηθήθηκε με βαμβάκι και διηθητικό χαρτί τη δεύτερη μέρα. Αυτή η διαδικασία εκχύλισης επαναλήφθηκε δύο φορές στους 37 βαθμούς για να ληφθεί ένα εκχύλισμα αιθανόλης.

Προσδιορισμός των συστατικών του CP

Η χημική σύσταση του PE αναλύθηκε χρησιμοποιώντας φασματόμετρο μάζας ίχνους αερίου GC-TSQ Evo 8000 (Thermo Scientific, Austin, TX, Ηνωμένες Πολιτείες) με άμεση τριχοειδή στήλη TG-5MS ( πάχος φιλμ 30 m × 0,25 mm × 0,25 μm). Η θερμοκρασία του φούρνου στήλης ρυθμίστηκε αρχικά στους 50 βαθμούς και στη συνέχεια αυξήθηκε κατά 5 βαθμούς C/min στους 250 βαθμούς C και διατηρήθηκε για 2 λεπτά και στη συνέχεια αυξήθηκε σε μια τελική θερμοκρασία 300 βαθμών κατά 25 βαθμούς/λεπτό και διατηρήθηκε για 2 λεπτά. Οι θερμοκρασίες του εγχυτήρα και της γραμμής μεταφοράς MS διατηρήθηκαν στους 270 και 260 βαθμούς C, αντίστοιχα. Ήλιο χρησιμοποιήθηκε ως φέρον αέριο με σταθερό ρυθμό ροής 1 ml/min. Η καθυστέρηση του διαλύτη ήταν 4 λεπτά και τα αραιωμένα δείγματα των 3 μl εγχύθηκαν αυτόματα χρησιμοποιώντας ένα Autosampler AS1300 σε συνδυασμό με GC στη λειτουργία χωρίς διαχωρισμό σε έναν εγχυτήρα PTV. Τα φάσματα μάζας EI συλλέχθηκαν σε τάσεις ιονισμού 70 eV στην περιοχή m/z 50–650 στη λειτουργία πλήρους σάρωσης. Η θερμοκρασία της πηγής ιόντων ρυθμίστηκε στους 250 βαθμούς. Τα συστατικά ταυτοποιήθηκαν με σύγκριση των φασμάτων μάζας τους με εκείνα της φασματικής βάσης δεδομένων μάζας WILEY 09 και NIST 14 που χρησιμοποιούνται για τον εντοπισμό και τη μελέτη της χημικής σύστασης άγνωστων συστατικών σε οποιοδήποτε εκχύλισμα (Wiley, 2006; Mikaia et al., 2014). Η ανάλυση είχε γίνει σε ποιοτικό τύπο χρησιμοποιώντας το λογισμικό Thermo Scientifific™ Xcalibur™ 2.2 και όλες οι τιμές αναφέρθηκαν σε σχετικό ποσοστό (Abd El-Kareem et al., 2016).

Πειραματικό σχέδιο

Αυτή η μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας της Βιοϊατρικής Έρευνας της Ιατρικής Σχολής του Πανεπιστημίου King Abdulaziz, Τζέντα, KSA (αριθμός αναφοράς {{0}}). Σε αυτήν τη μελέτη, σαράντα αρσενικοί αλμπίνο αρουραίοι βάρους 150–200 g και ηλικίας 2–3 μηνών ελήφθησαν από το Ιατρικό Ερευνητικό Κέντρο King Fahd (KFMRC). Πριν από την έναρξη του πειράματος, οι αρουραίοι αφέθηκαν να εγκλιματιστούν στις εργαστηριακές συνθήκες για 1 εβδομάδα. Δέκα επίμυες ορίστηκαν ως η ομάδα ελέγχου που αφέθηκε μη εκτεθειμένη στο CUMS. Οι άλλοι τριάντα αρουραίοι υποβλήθηκαν στη διαδικασία του CUMS για 4 εβδομάδες που περιελάμβανε διαφορετικούς τύπους στρεσογόνων παραγόντων σε διαφορετικές ώρες κατά τη διάρκεια της ημέρας, προκειμένου να αποφευχθεί η εξοικείωση με το στρες. Η διαδικασία CUMS περιγράφηκε πλήρως σε προηγούμενες εργασίες (Ayuob et al., 2016; Ali et al., 2017) και παρουσιάστηκε στον Πίνακα 1. Οι αρουραίοι που εκτέθηκαν σε CUMS χωρίστηκαν σε 3 ομάδες (n 10). Η ομάδα που δεν υποβλήθηκε σε αγωγή (CUMS) έλαβε το όχημα 0,03 τοις εκατό καρβοξυμεθυλοκυτταρίνη (CMC-Na) με καθετήρα για 2 εβδομάδες. Η ομάδα που υποβλήθηκε σε θεραπεία με γρίπη έλαβε FLU (Dar Al Dawa Pharmaceuticals Co., Ltd., Amman, Jordan), ένα αντικαταθλιπτικό που χρησιμοποιείται για φαρμακολογική επικύρωση, διαλυμένο σε CMC-Na 0,03 τοις εκατό σε δόση 20 mg/kg με γαστρικό καθετήρα (Li et al., 2014). Η ομάδα που υποβλήθηκε σε αγωγή με CP έλαβε το εκχύλισμα CP διαλυμένο σε απεσταγμένο νερό σε δόση 100 mg/kg με καθετήρα για 2 εβδομάδες σύμφωνα με τους Wang et al. (2012).

Αξιολόγηση αλλαγών συμπεριφοράς

Η FST πραγματοποιήθηκε μετά από 4 εβδομάδες για να επιβεβαιωθεί η επίδραση του CUMS στους αρουραίους (Ali et al., 2017). Κατά τη διάρκεια αυτής της δοκιμής, κάθε αρουραίος τοποθετήθηκε σε ένα γυάλινο κυλινδρικό δοχείο (ύψος 20 cm, διάμετρος 14 cm) με 15 cm νερό στους 25 ± 2 βαθμούς C. Ο αρουραίος βιντεοσκοπήθηκε για 6 λεπτά χρησιμοποιώντας λογισμικό συμπεριφοράς (Noldus Information Technology, EthoVision XT®), και ο συνολικός χρόνος ακινησίας κατά τη διάρκεια των 6 λεπτών μετρήθηκε από έναν τεχνικό τυφλό στις πειραματικές ομάδες. Ο συνολικός χρόνος, σε δευτερόλεπτα, που πέρασαν οι αρουραίοι χωρίς κίνηση των άκρων, εκτός από τη μικρή κίνηση που είναι απαραίτητη για να κρατήσει το ποντίκι στην επιφάνεια, προσδιορίστηκε ο "χρόνος ακινησίας" κατά τη διάρκεια των 6 λεπτών.

Βιοχημικές Τεχνικές

Εικοσιτέσσερις ώρες μετά την ολοκλήρωση της δοκιμής συμπεριφοράς, ελήφθησαν δείγματα αίματος από τον ενδοκογχικό κόλπο αρουραίων μετά από αναισθησία με 4 τοις εκατό ισοφλουράνιο (SEDICO Pharmaceuticals Company, Κάιρο, Αίγυπτος) σε 100 τοις εκατό οξυγόνο. Μετά από αυτό, οι αρουραίοι υποβλήθηκαν σε ευθανασία με εξάρθρωση του τραχήλου της μήτρας. Τα δείγματα αίματος φυγοκεντρήθηκαν στις 3,000 rpm για 15 λεπτά στους 4 βαθμούς C για να ληφθεί ο ορός και διατηρήθηκαν στους -18 βαθμούς C για βιοχημική αξιολόγηση. Το επίπεδο κορτικοστερόνης (ALPCO Diagnostics, Orangeburg, NY, Ηνωμένες Πολιτείες) αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας κιτ ανοσοπροσροφητικού προσδιορισμού συνδεδεμένων με ένζυμα σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή, το TNF- και το IL{11}} (Quantakin R&D system, USA Kit) αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας μια ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία. Η οπτική πυκνότητα κάθε δείγματος προσδιορίστηκε εις διπλούν με συσκευή ανάγνωσης ELISA μικροπλάκας ρυθμισμένη στα 450 nm. Το κιτ δοκιμασίας αντιδραστικών ουσιών θειοβαρβιτουρικού οξέος (TBARS) (Biodiagnostic; Egypt) χρησιμοποιήθηκε για τη μέτρηση του επιπέδου της μηλονοδιαλδεΰδης (MDA) φασματοφωτομετρικά στα 535 nm (Gamal et al., 2018). Το επίπεδο της δισμουτάσης υπεροξειδίου (SOD) μετρήθηκε χρησιμοποιώντας το κιτ δοκιμασίας SOD (Biodiagnostic; Egypt) (Packer, 2002). Η αξιολόγηση του επιπέδου της υπεροξειδάσης της γλουταθειόνης (GPX) πραγματοποιήθηκε με τη χρήση του κιτ GPX (Randox Labs, Crumlin, Ηνωμένο Βασίλειο). Για να ποσοτικοποιηθεί η δραστηριότητα της καταλάσης (CAT), δημιουργήθηκε μια καμπύλη βαθμονόμησης για τον προσδιορισμό και όλα τα δείγματα, χρησιμοποιώντας κιτ ανάλυσης (Biodiagnostic, Egypt). Η μέθοδος περιγράφηκε προηγουμένως (Gamal et al., 2018).

Ποσοτική PCR σε πραγματικό χρόνο

Η εξαγωγή RNA από τα δείγματα ιστού έγινε χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο TriFast™ (PeqLab, Γερμανία, Cat No.: {{0}}), όπως περιγράφεται στο πρωτόκολλο του κατασκευαστή. Η συγκέντρωση του καθαρισμένου RNA υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας ένα φασματοφωτόμετρο NanoDrop 2000c (Thermo Scientific, Ηνωμένες Πολιτείες). Το εξαγόμενο RNA από κάθε δείγμα μεταγράφηκε αντίστροφα χρησιμοποιώντας το κιτ σύνθεσης cDNA SensiFAST™ για RT-qPCR (Bioline USA Inc., Ηνωμένες Πολιτείες, Αρ. Κατ.: BIO-65053), ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή. Το συντιθέμενο cDNA αποθηκεύτηκε σε -80 βαθμό μέχρι να χρησιμοποιηθεί για qRT-PCR. Οι αντιδράσεις qRT-PCR πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το κιτ SensiFAST™ SYBR Lo-ROX (Bioline USA Inc., Ηνωμένες Πολιτείες, Αρ. Κατ.: BIO-94002) ​​στο σύστημα ανίχνευσης PCR σε πραγματικό χρόνο Applied Biosystems 7500 (τεχνολογία Life) , Ηνωμένες Πολιτείες). Οι ειδικοί για το γονίδιο εκκινητές για αρουραίους, που χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη, σχεδιάστηκαν από το λογισμικό Primer3 (v.0.4.0) και η ειδικότητά τους ελέγχθηκε χρησιμοποιώντας το πρόγραμμα NCBI/Primer-BLAST. Οι εκκινητές στη συνέχεια αγοράστηκαν από την Willowfort™ (Ηνωμένο Βασίλειο). Οι εκκινητές ήταν GAPDH (5'-TGCACCACCAACTGCTTAGC-3', 5'-GGC ATGGACTGTGGTCATGAG-3'), κασπάση-3 (προς τα εμπρός 5- TGT ATGCTTACTACTACCGCACCG{25}}, αντίστροφη 5-GCGCAAAGT GACTGGATGAACC-3), HSP70 (5′-ACGAGGGTCTCAAGG GCAAG-3′, 5′-CTCTTTCTCAGCCAGCGTGTTAG-3′). Ki67 (εμπρός 5-AGAAGAGCCCACAGCACAGAGAGAA-3, αντίστροφη 5-AGAAGAGCCCACAGCACAGAGAGA 3). Το μίγμα PCR παρασκευάστηκε ως εξής: 10 μΙ μίγματος SensiFASTTM SYBR Lo-ROX, 0,8 μΙ εμπρόσθιου εκκινητή, 0,8 μΙ ανάστροφου εκκινητή, 2 μΙ cDNA εκμαγείου και 6,4 μΙ νερού χωρίς νουκλεάση. Το μίγμα της αντίδρασης μεταφέρθηκε σε έναν θερμικό κυκλοποιητή που είχε προηγουμένως προγραμματιστεί να διατηρείται στους 95 βαθμούς για 2 λεπτά, ακολουθούμενοι από 40 κύκλους 95 μοιρών για 15 δευτερόλεπτα και στη συνέχεια στους 60 βαθμούς για 30 δευτερόλεπτα. Σε κάθε πείραμα εκτελέστηκε μια αντίδραση αρνητικού ελέγχου που δεν περιείχε πρότυπο. Πραγματοποιήθηκε ανάλυση καμπύλης τήξης για να αποδειχθεί η ειδικότητα των προϊόντων PCR και η τιμή Ct για κάθε αντίδραση ελήφθη από γραφήματα ενίσχυσης. Η σχετική ποσοτικοποίηση για κάθε έκφραση γονιδίου στα δείγματα ιστού υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τη μέθοδο συγκριτικού ουδού (ΔΔCt) με το GAPDH ως γονίδιο εσωτερικού ελέγχου. Για τη συνολική αλλαγή πτυχής, υπολογίστηκε και γραμμικοποιήθηκε με τον αριθμητικό τύπο 2−ΔΔCt.

Ιστολογικές Τεχνικές

Στο τέλος του πειράματος και αφού οι αρουραίοι αναισθητοποιήθηκαν, η κοιλιά ανοίχτηκε και το δεξί επινεφρίδιο αφαιρέθηκε. Για να ληφθούν μπλοκ παραφίνης, πραγματοποιήθηκαν μονιμοποίηση των επινεφριδίων σε 10 τοις εκατό ουδέτερη ρυθμιστική φορμαλίνη και περαιτέρω διεργασίες. Οι τομές παραφίνης πάχους 4-μm παρασκευάστηκαν και χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη και ηωσίνη (H&E). Επιπλέον, άλλες τομές παραφίνης χρωματίστηκαν ανοσοϊστοχημικά χρησιμοποιώντας την τεχνική στρεπταβιδίνης-βιοτίνης-υπεροξειδάσης. Οι αντικειμενοφόρες πλάκες επωάστηκαν όλη τη νύχτα στους 4 βαθμούς και στη συνέχεια επωάστηκαν με μονοκλωνικό αντι-Ki67 (Dako Cytomation, Ηνωμένες Πολιτείες, σε αραίωση 1:1,000) ​​για επίδειξη του κυτταρικού πολλαπλασιασμού. Επιπλέον, χρησιμοποιήθηκε πολυκλωνικό αντίσωμα κατά της κασπάσης-3 (Santa Cruz Biotechnology, Ηνωμένες Πολιτείες, σε αραίωση 1:1,000) για την ανίχνευση της απόπτωσης. Χρησιμοποιήθηκε επίσης ένα πολυκλωνικό αντίσωμα κατά της πρωτεΐνης θερμικού σοκ-70 (HSP70) (Dako, Carpinteria, CA, Ηνωμένες Πολιτείες, σε αραίωση 1:1,000). Χρησιμοποιήθηκε αντίστοιχο βιοτινυλιωμένο συζευγμένο δευτερογενές αντίσωμα από το σύστημα χρώσης Dako. Οι αντικειμενοφόρες πλάκες που βάφτηκαν μόνο με το δευτερεύον αντίσωμα χρησιμοποιήθηκαν ως αρνητικοί μάρτυρες. Οι πυρήνες αντιχρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη. Η καφέ κυτταροπλασματική χρώση θεωρήθηκε θετική αντίδραση. Οι χρωματισμένες τομές εξετάστηκαν και φωτογραφήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα μικροσκόπιο Olympus BX-51 (Olympus) συνδεδεμένο σε ψηφιακή κάμερα και υπολογιστή. Η ημιποσοτική ανάλυση της ανοσοαντιδραστικότητας αντισωμάτων έγινε από το λογισμικό ανάλυσης εικόνας Pro Plus. Η εκατοστιαία περιοχή της ανοσοθετικής αντίδρασης αξιολογήθηκε σε 30 πεδία σε μεγέθυνση × 400. Τα θετικά κύτταρα μετρήθηκαν ανά 1,0 mm2 επιφάνειας, όπως περιγράφεται από τους Zhou et al. (2016). Τουλάχιστον πέντε πεδία από κάθε διαφάνεια εξετάστηκαν και ο μέσος όρος υπολογίστηκε για κάθε ζώο. Για μορφομετρική ανάλυση, εξετάστηκαν τέσσερις τομές σε κάθε ζώο (μεγέθυνση × 100). Το πάχος των διαφορετικών ζωνών των επινεφριδίων μετρήθηκε σε μικρόμετρα. Το πάχος του φλοιού των επινεφριδίων λήφθηκε μετρώντας την απόσταση μεταξύ του μυελού και της επινεφριδιακής κάψας σε ευθεία γραμμή, λαμβάνεται μία μέτρηση σε κάθε τεταρτημόριο του φλοιού των επινεφριδίων.

Στατιστική ανάλυση

ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ

Συμπεριφορικά Αποτελέσματα

Αποτελέσματα ανάλυσης εκχυλίσματος CP με χρήση GC-MS

Βιοχημική Αξιολόγηση

Επίπεδο κορτικοστερόνης στον ορό

Το επίπεδο κορτικοστερόνης αυξήθηκε σημαντικά (p < {{0}}.001) σε αρουραίους που δεν έλαβαν θεραπεία που εκτέθηκαν σε CUMS σε σύγκριση με εκείνο στους αρουραίους ελέγχου, ενώ αυτοί που έλαβαν θεραπεία με FLU και CP παρουσίασαν σημαντική μείωση (p <0,001) στο επίπεδο της κορτικοστερόνης στον ορό.

Επίπεδα TNF- και IL-6 στον ορό

Επίπεδα MDA, SOD, GPX και CAT στον ορό

Γονιδιακή έκφραση Ki67, Caspase-3 και HSP70

Η RT-PCR αποκάλυψε ασήμαντα υψηλή έκφραση γονιδίου Ki67 στα επινεφρίδια της ομάδας CUMS σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, ενώ αυτή των ομάδων που έλαβαν θεραπεία με FLU και CP έδειξε σημαντικά υψηλή έκφραση σε σύγκριση με εκείνη της ομάδας που εκτέθηκε σε CUMS (Εικόνα 3Ε) . Όσον αφορά την κασπάση-3, η γονιδιακή της έκφραση ήταν σημαντικά αυξημένη (p < 0.001)="" στα="" επινεφρίδια="" της="" ομάδας="" cums="" σε="" σύγκριση="" με="" την="" ομάδα="" ελέγχου,="" ενώ="" αυτή="" της="" γρίπης="" και="" της="" γρίπης-="" και="" οι="" ομάδες="" που="" έλαβαν="" θεραπεία="" με="" cp="" εμφάνισαν="" σημαντική="" μείωση="" σε="" σύγκριση="" με="" εκείνη="" της="" ομάδας="" που="" εκτέθηκε="" σε="" cums="" (εικόνα="" 3f="" όταν="" επρόκειτο="" για="" την="" έκφραση="" του="" γονιδίου="" hsp70,="" κατέγραψε="" σημαντικά="" υψηλότερα="" (p="">< 0,001)="" επίπεδα="" στα="" επινεφρίδια="" της="" ομάδας="" cums="" από="" ό,τι="" στην="" ομάδα="" ελέγχου,="" ενώ="" εκείνη="" των="" ομάδων="" που="" έλαβαν="" θεραπεία="" με="" γρίππη="" και="" cp="" παρουσίασε="" ασήμαντη="" μείωση="" σε="" σύγκριση="" με="" εκείνη="" της="" ομάδας="" που="" εκτέθηκε="" σε="" cums="" (εικόνα="">

Ιστοπαθολογική Εκτίμηση

ΣΥΖΗΤΗΣΗ

Η σύγχρονη κοινωνία είναι προφανώς γεμάτη άγχος που μπορεί να προκύψει από καθημερινά προβλήματα, υγειονομική περίθαλψη και θέματα που σχετίζονται με την εργασία. Αυτοί οι στρεσογόνοι παράγοντες μπορεί να προκαλέσουν τις λεγόμενες διαταραχές που σχετίζονται με το άγχος (Clayton and Mccance, 2014). Σε αυτή τη μελέτη, το αιθανολικό εκχύλισμα της σάρκας και της φλούδας του Cucurbita pepo L. χρησιμοποιήθηκε για τη διερεύνηση των δυνατοτήτων του στην ανακούφιση της καταθλιπτικής συμπεριφοράς που προκαλείται από το CUMS και των επιπτώσεών του στα επινεφρίδια. Αυτό απέδειξε ο α

σημαντική αύξηση του επιπέδου κορτικοστερόνης ορού και επαληθεύτηκε από παρατεταμένο χρόνο ακινησίας κατά τη διάρκεια της FST. Αυτά τα ευρήματα ήταν συνεπή με αυτά που αναφέρθηκαν προηγουμένως (Tang et al., 2015). Τόσο ο TNF- όσο και η IL-6 αναφέρθηκαν ότι εμπλέκονται στην παθογένεση της κατάθλιψης (Taraz et al., 2015; Pedraz-Petrozzi et al., 2020). Αναφέρθηκε ότι τα ποντίκια με έλλειψη σε υποδοχείς IL-6 ή TNF- είναι ανθεκτικά σε καταθλιπτικές συμπεριφορές (Viana et al., 2010). Ως εκ τούτου, αξιολογήθηκαν σε αυτήν τη μελέτη και παρατηρήθηκε ότι τόσο ο TNF- όσο και η IL{10}} αυξήθηκαν σημαντικά στον ορό των αρουραίων που εκτέθηκαν σε CUMS για 4 εβδομάδες, υποδεικνύοντας ότι είχαν κατάθλιψη. Αυτό το εύρημα υποστηρίχθηκε από τους Numakawa et al. (2014) σε ποντίκια με απελπισία συμπεριφοράς και από τους Taraz et al. (2015) σε ασθενείς με κατάθλιψη. Σε αυτή τη μελέτη, η χορήγηση εκχυλίσματος κολοκύθας συσχετίστηκε με τη βελτίωση της καταθλιπτικής συμπεριφοράς, εμφανής από τη σημαντική μείωση του χρόνου ακινησίας του FST και επιβεβαιώθηκε από τη σημαντική μείωση της κορτικοστερόνης και των φλεγμονωδών κυτοκινών TNF- και IL-6 στο ο ορός. Αυτά τα ευρήματα υποστηρίχθηκαν από τους Kim Nr et al. (2016) ο οποίος ανέφερε ότι το SSP για 28 ημέρες μείωσε το επίπεδο των φλεγμονωδών κυτοκινών στους καταθλιπτικούς αρουραίους.

Η αντιφλεγμονώδης δράση της κολοκύθας μπορεί να αποδοθεί στις δραστικές ενώσεις της κολοκύθας όπως το ελαϊκό και το παλμιτικό οξύ και η οιστραδιόλη. Η μείωση του ελαϊκού οξέος, του παλμιτικού οξέος και του λινολεϊκού οξέος περιγράφηκε στην κατάθλιψη (Conklin et al., 2010; Martín et al., 2010). Αναφέρθηκε ότι η νευροπροστασία που προκαλείται από ελαϊκό οξύ συνδέεται με την αντιφλεγμονώδη δράση της που προκαλείται από την ενεργοποίηση του υποδοχέα γάμμα (PPAR-) που ενεργοποιείται από τον πολλαπλασιαστή υπεροξισωμάτων (Song et al., 2019). Επιπλέον, το παλμιτικό οξύ αναφέρθηκε ότι αναστέλλει τη φωσφολιπάση Α(2) και επομένως θεωρείται αντιφλεγμονώδης ένωση (Aparna et al., 2012). Η οιστραδιόλη ήταν μία από τις ενώσεις της κολοκύθας που εντοπίστηκαν σε αυτή τη μελέτη. Η οιστραδιόλη αναφέρθηκε ότι προκαλεί αντιφλεγμονώδη δράση και στη συνέχεια ανακουφίζει την καταθλιπτική συμπεριφορά (Xu et al., 2015). Ένας άλλος μηχανισμός με τον οποίο η οιστραδιόλη μπορεί να προκαλέσει αντικαταθλιπτική δράση είναι η ανοδική ρύθμιση της έκφρασης του νευροτροφικού παράγοντα που προέρχεται από τον εγκέφαλο (BDNF) και η φωσφορυλίωση του ERK με την ενεργοποίηση του ER- στον εγκέφαλο (Yang et al., 2010). Σε αυτή τη μελέτη, το επίπεδο του MDA στον ορό ήταν αυξημένο, ενώ τα επίπεδα SOD, GPX και CAT μειώθηκαν στους επίμυες που εκτέθηκαν σε CUMS. Παρόμοιες αλλαγές τεκμηριώθηκαν μετά την έκθεση στο CUMS σε προηγούμενες μελέτες και πρόσθεσαν ότι αυτές οι βιοχημικές αλλαγές είχαν ως αποτέλεσμα οξειδωτικό στρες και εξασθένηση της HPA (Nabavi et al., 2015). Liu Τ. et al. (2015) ανέφερε επίσης ότι η ανάπτυξη της κατάθλιψης μπορεί να αποδοθεί στη χαμηλή περιεκτικότητα σε αντιοξειδωτικά στο σώμα.

Οι αντιοξειδωτικές ιδιότητες του εκχυλίσματος φρούτων κολοκύθας αναφέρθηκαν συχνά (Bahramsoltani et al., 2017). Επιπλέον, η σάρκα και η φλούδα του Cucurbita pepo L. αναφέρθηκε ότι επεξεργάζεται υψηλότερη αντιοξειδωτική δράση από τα άλλα μέρη, για παράδειγμα, τους σπόρους (Oyeleke et al., 2019). Η χορήγηση εκχυλίσματος κολοκύθας, σε πολλές προηγούμενες μελέτες, αύξησε σημαντικά τα επίπεδα SOD και GPX και μείωσε το MDA στον ορό των ποντικών (Guo-Hua et al., 2000; Dang, 2004), και αυτό το αποτέλεσμα τεκμηριώθηκε επίσης σε αυτή τη μελέτη. Ως εκ τούτου, η αντιοξειδωτική δράση της κολοκύθας θα μπορούσε να βρίσκεται πίσω από την αντικαταθλιπτική της δράση που είναι εμφανής σε αυτή τη μελέτη. Αυτό είναι σε ευθυγράμμιση με τις παρατηρήσεις των Kim Nr et al. (2016). Αναφέρθηκε ότι τα φυσικά προϊόντα με αντιφλεγμονώδη, αντιοξειδωτικά και κατά της κούρασης αποτελέσματα έχουν επίσης αντικαταθλιπτική δράση (Jeong et al., 2015). Όλες αυτές οι προηγούμενες δραστηριότητες αποδείχτηκαν στις κολοκύθες. Η αυξημένη κυτταροπλασματική κενοτοπία των κυττάρων του φλοιού των επινεφριδίων, που παρατηρήθηκε στην ομάδα CUMS σε αυτή τη μελέτη, μπορεί να αποδοθεί στην αυξανόμενη ζήτηση για λιπίδια, τα οποία αποτελούν τον ακρογωνιαίο λίθο για τη σύνθεση κορτιζόλης. Οι Cigankova et al. (2005) παρατήρησε ότι η μακροχρόνια πειραματική υπερδυναμική είχε ως αποτέλεσμα τη συνένωση πολλαπλών κυτταροπλασματικών λιπιδικών σταγονιδίων των φλοιωδών κυττάρων. Αυτά τα σταγονίδια λιπιδίων περιέχουν χοληστερόλη, η οποία είναι ο κύριος πρόδρομος στη σύνθεση των στεροειδών ορμονών.

Ωστόσο, οι Koldysheva και Lushnikova (2008) ανέφεραν ότι το στρες είχε ως αποτέλεσμα μια σημαντική μείωση των σταγονιδίων λιπιδίων στα κύτταρα του φλοιού των επινεφριδίων, ειδικά στο ZF (Koldysheva and Lushnikova, 2008). Περιγράφηκε ότι κατά την έκθεση σε σωματικό στρες, ερεθίσματα πόνου μεταδίδονται στον υποθάλαμο, με αποτέλεσμα την έκκριση CRH στο υποφυσιακό πυλαίο σύστημα, το οποίο αυξάνει την έκκριση ACTH και διεγείρει τους υποδοχείς της στο ZF και στο ZR για να αυξήσει την έκκριση κορτιζόλης (Patti et al. , 2018). Η παχύρρευστη κάψουλα και οι δοκίδες των επινεφριδίων που παρατηρήθηκαν σε επίμυες που εκτέθηκαν σε CUMS αναφέρθηκαν προηγουμένως (El-Desouki et al., 2011; Altayeb and Salem, 2017) ως αποτέλεσμα της αυξημένης σύνθεσης κολλαγόνου από ινοβλάστες κατά την έκθεση σε στρες ακινητοποίησης. Πολλά κύτταρα στα επινεφρίδια αρουραίων που εκτέθηκαν σε CUMS εμφάνισαν βαθιά χρωματισμένους πυρήνες, υποδεικνύοντας ότι υποβλήθηκαν σε απόπτωση που επιβεβαιώθηκε με ανοσοϊστοχημική χρώση με κασπάση-3. Μια παρόμοια παρατήρηση αναφέρθηκε από τους Altayeb και Salem, (2017), ενώ μελετούσαν την επίδραση του στρες ακινητοποίησης στα επινεφρίδια των αρουραίων. Liu Q. et al. (2015) ανέφερε ότι το υπερβολικό οξειδωτικό στρες, εμφανές μετά από έκθεση σε CUMS σε αυτή τη μελέτη, τροποποιεί τα επίπεδα έκφρασης των "γονιδίων που σχετίζονται με την απόπτωση" και προκαλεί απόπτωση και εκφυλισμό κυττάρων μέσω των οδών σηματοδότησης Bcl-2, Bax και κασπάσης -3. Αυτός ο μηχανισμός επιβεβαιώθηκε σε αυτή τη μελέτη με RT-PCR που αποκάλυψε σημαντική ανοδική ρύθμιση της έκφρασης του γονιδίου κασπάσης-3.

Κατά την ανασκόπηση της βιβλιογραφίας, δεν υπήρξε άμεση επίδραση του Cucurbita pepo στην απόπτωση που προκαλείται από κασπάση-3 σε διαφορετικούς ιστούς. Φαίνεται ότι η μείωση των θετικών αποπτωτικών κυττάρων σε κασπάση-3 που ανιχνεύθηκαν στα επινεφρίδια αποδόθηκε στην αντιοξειδωτική δράση του Cucurbita pepo που τεκμηριώθηκε σε αυτή τη μελέτη. Αυτό υποστηρίζεται από πολλές προηγούμενες μελέτες που έγιναν σε άλλα φυτά και βότανα με σημαντικές αντιοξειδωτικές δράσεις (Banagozar Mohammadi et al., 2019; Ghazizadeh et al., 2020). Αυτή η μελέτη έδειξε ότι η έκθεση σε CUMS αύξησε τα θετικά Ki67- κύτταρα στον φλοιό των επινεφριδίων που ήταν σημαντικά εμφανές στο ZF, υποδεικνύοντας αυξημένο αριθμό πολλαπλασιαζόμενων κυττάρων και ως αποτέλεσμα, το πάχος αυτού του στρώματος αυξήθηκε σημαντικά. Από την άλλη πλευρά, ο αριθμός των θετικών Ki67-πολλαπλασιαζόμενων κυττάρων μειώθηκε ασήμαντα στον μυελό ως απόκριση στο CUMS. Αυτές οι παρατηρήσεις ήταν σε ευθυγράμμιση με εκείνες των Ulrich-Lai et al. (2006) οι οποίοι ανέφεραν αύξηση στους θετικούς πυρήνες του Ki67-μόνο στο εξωτερικό ZF μετά από έκθεση σε χρόνιο μεταβλητό στρες, ενώ ο μυελός εμφάνισε κυτταρική υπερτροφία και όχι υπερπλασία. Επιπλέον, οι Laborie et al., (2003) ανέφεραν μια γενικευμένη αύξηση στη μυελική λειτουργία μετά από έκθεση σε χρόνιο στρες,

υποδηλώνοντας ότι το χρόνιο στρες μπορεί να οδηγήσει σε μυελική υπερτροφία. Σε αυτή τη μελέτη, η χορήγηση του εκχυλίσματος κολοκύθας αύξησε σημαντικά τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, εμφανής από την ανοδική ρύθμιση του γονιδίου Ki67 και την ανοσοέκφραση σχεδόν σε όλες τις ζώνες και το μυελό των επινεφριδίων σε σύγκριση με το CUMS. Αυτό εξηγεί το αυξημένο πάχος των ζωνών του αδένα που καταγράφηκε σε αυτή τη μελέτη. Μπορεί επίσης να αντισταθμίσει το αποπτωτικό αποτέλεσμα που προκαλείται από την έκθεση στο CUMS. Αυτό το εύρημα υποστηρίζεται από τους Kim Hy et al. (2016) οι οποίοι ανέφεραν σημαντική ανοδική ρύθμιση της έκφρασης mRNA του Ki67 και πολλαπλασιασμό σπληνοκυττάρων που απομονώθηκαν από τη σπλήνα ποντικών BALB/c που έλαβαν θεραπεία με SSP, σε ροή και Cucurbita moschata Duch και το κύριο συστατικό του, -καροτίνη. Στην παρούσα μελέτη, η έκθεση στο CUMS αύξησε σημαντικά την γονιδιακή έκφραση και την ανοσοέκφραση του HSP70 σε όλες τις ζώνες των επινεφριδίων. Σε συμφωνία με αυτό, οι Zheng et al. (2008) απέδειξε επίσης ότι η αυξημένη έκφραση HSP70 μετά από έκθεση σε στρεσογόνες συνθήκες ρυθμίζει τις φλεγμονώδεις αποκρίσεις αναστέλλοντας την ενεργοποίηση του φλεγμονώδους μεταγραφικού παράγοντα, του πυρηνικού παράγοντα-κάπα Β (NF-kappaB). Επιπλέον, το HSP70 μπορεί να επηρεάσει άμεσα την απόπτωση και τη νέκρωση (Yenari et al., 2005). Πιο πρόσφατα, οι Li et al. (2019) ανέφερε μια ανοδική ρύθμιση της έκφρασης HSP70 στον ιστό των επινεφριδίων χοίρου μετά από έκθεση σε θερμικό στρες, γεγονός που υποδεικνύει τον ρόλο του HSP70 στον τραυματισμό των επινεφριδίων και τονίζει τη σχέση του με τις φλεγμονώδεις αποκρίσεις.

Η ταχεία επαγωγή του HSP70 ως απόκριση στο στρες θεωρείται απαραίτητη για τη διαδικασία κυτταρικής προστασίας. Στη μελέτη μας, η θεραπεία αρουραίων που εκτέθηκαν σε CUMS με κολοκύθες συσχετίστηκε με ασήμαντη μείωση της έκφρασης του HSP70 που σχετίστηκε με μειωμένη απόπτωση και φλεγμονώδεις αποκρίσεις. Αυτό μπορεί να υποδηλώνει την ευεργετική επίδραση του σχετικά υψηλού επιπέδου HSP70 που προκαλείται τόσο από τη γρίπη όσο και από την CP, καθώς είχε ως αποτέλεσμα τη μείωση της απόπτωσης που προκαλείται από την κασπά-3 και την απελευθέρωση φλεγμονωδών κυτοκινών. Αν και η επίδραση της κολοκύθας στην οικογένεια πρωτεϊνών θερμικού σοκ δεν είχε περιγραφεί προηγουμένως, το ελαϊκό οξύ, το οποίο αντιπροσωπεύει τα κύρια συστατικά των κολοκύθας που χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη, περιγράφηκε ότι μειώνει την έκφραση του HSP60 στην κυτταρική σειρά των ανθρώπινων Τ λεμφοκυττάρων (Martins De Lima et al., 2004), το οποίο υποστηρίζει τα ευρήματα της μελέτης μας. Ο προτεινόμενος μηχανισμός δράσης του Cucurbita pepo ως ουσίας που μοιάζει με αντικαταθλιπτικό συνοψίζεται στο Σχήμα 7. Μεταξύ των περιορισμών αυτής της μελέτης ήταν η αδυναμία περαιτέρω διερεύνησης του σε βάθος μηχανισμού της αντικαταθλιπτικής δράσης της CP, και ως εκ τούτου, περαιτέρω μελέτη είναι ενθαρρύνεται να το κάνει αυτό. Συμπερασματικά, αυτή η μελέτη παρέχει στοιχεία που βασίζονται στην επιστήμη για την αποτελεσματικότητα του εκχυλίσματος Cucurbita pepo L. στην ανακούφιση των αλλαγών συμπεριφοράς και βιοχημικών που προκαλούνται από το CUMS καθώς και του ιστοπαθολογικού αντίκτυπου στα επινεφρίδια. Αυτές οι επιδράσεις ήταν εμφανείς μέσω της προς τα κάτω ρύθμισης της απόπτωσης και της έκφρασης HSP70 και φάνηκε να προκαλούνται μέσω της αντιοξειδωτικής και αντιφλεγμονώδους δράσης του εκχυλίσματος Cucurbita pepo L.. Αν και αυτή η μελέτη και ορισμένες άλλες πρόσφατες μελέτες έχουν τεκμηριώσει την αντικαταθλιπτική δράση του Cucurbita pepo και διερεύνησε τον μηχανισμό της, απαιτούνται περαιτέρω μελέτες, συμπεριλαμβανομένων κλινικών μελετών, για να επιβεβαιωθεί αυτή η επίδραση στους ανθρώπους.

Αυτό είναι το προϊόν μας κατά της κούρασης! Κάντε κλικ στην εικόνα για περισσότερες πληροφορίες!

ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΑΝΑΦΟΡΕΣ

Abd-El-Kareem, MSMA, Rabbih, MAEF, Selim, ETM, Elsherbiny, EAE-M. και El-Khateeb, AY (2016). Εφαρμογή GC/EIMS σε συνδυασμό με Ημιεμπειρικούς Υπολογισμούς για Αναγνώριση και Διερεύνηση Κάποιων Πτητικών Συστατικών στο Αιθέριο Έλαιο Βασιλικού.

Altayeb, Z., and Salem, M. (2017). Μικροσκοπική μελέτη φωτός και ηλεκτρονίων για την επίδραση του στρες ακινητοποίησης στον φλοιό των επινεφριδίων ενηλίκων αρουραίων και τον πιθανό βελτιωτικό ρόλο της βιταμίνης EJ Med. Histology 1, 44-56.

Aparna, V., Dileep, KV, Mandal, PK, Karthe, P., Sadasivan, C., and Haridas, M. (2012). Αντιφλεγμονώδης Ιδιότητα Ν-Δεξαδεκανοϊκού Οξέος: Δομικά Στοιχεία και Κινητική Εκτίμηση. Chem. Biol. Drug Des. 80, 434–439.

Bahramsoltani, R., Farzaei, MH, Abdolghaffari, AH, Rahimi, R., Samadi, Ν., Heidari, Μ., et al. (2017). Αξιολόγηση Φυτοχημικών, Αντιοξειδωτικών και Επουλωτικών Δραστηριοτήτων Εγκαυμάτων της Φλούδας Φρούτων Cucurbita Moschata Duchesne. Iran J. Basic Med. Sci. 20, 798–805. doi:10.22038/ IJBMS.2017.9015

Banagozar Mohammadi, A., Torbati, M., Farajdokht, F., Sadigh-Eteghad, S., Fazljou, SMB, Vatandoust, SM, et al. (2019). Η σερικίνη ανακουφίζει τις καταθλιπτικές και αγχώδεις συμπεριφορές που προκαλούνται από συγκράτηση μέσω της ρύθμισης του οξειδωτικού στρες, της νευροφλεγμονής και της απόπτωσης στον προμετωπιαίο φλοιό και στον ιππόκαμπο.

Bauer, ME, and Teixeira, AL (2019). Φλεγμονή σε ψυχιατρικές διαταραχές: τι έρχεται πρώτο; Αννα. Ν. Υ Ακαδ. Sci. 1437, 57–67.

Chaudhary, S. (2001). Χλωρίδα του Βασιλείου της Σαουδικής Αραβίας: Εικονογραφημένο Ριάντ: Υπουργείο Γεωργίας και Υδάτων, Εθνικό Βερμπάριο, Εθνικό Κέντρο Έρευνας Γεωργίας και Υδάτων, 2. Ριάντ: Ανατομία και μορφολογία.

Cigankova, V., Zibrin, M., Bod A, K., and Holovska, K. (2005). Επίδραση της Μακροχρόνιας Πειραματικής Υποδυναμίας στα Επινεφρίδια Ιαπωνικών Ορτύκια: και Υπερδομική Μελέτη. ΔΕΛΤΙΟ-ΚΤΗΝΙΑΤΡΙΚΟ ΙΝΣΤΙΤΟΥΤΟ PULAWY 49, 449.

Clayton, M., and Mccance, K. (2014). "Stress and Disease," στην Παθοφυσιολογία η Βιολογική βάση για τη νόσο σε ενήλικες και παιδιά. Editors K. Mccance, S. Huether, V. Brashers, and N. Rote. 7η έκδ. (ΗΠΑ: Καναδάς Elsevier).

Conklin, SM, Runyan, CA, Leonard, S., Reddy, RD, Muldoon, MF και Yao, JK (2010). Αλλαγές που σχετίζονται με την ηλικία των Ν-3 και Ν-6 πολυακόρεστων λιπαρών οξέων στον πρόσθιο κυκλικό φλοιό των ατόμων με μείζονα καταθλιπτική διαταραχή. Προσταγλανδίνες Leukot. Ουσιαστικά. Fatty Acids 82, 111-119.

Doron, R., Lotan, D., Versano, Z., Benatav, L., Franko, Μ., Armoza, S., et al. (2014). Η εσιταλοπράμη ή οι νέες θεραπείες με μείγμα βοτάνων κατά τη διάρκεια ή μετά την έκθεση στο στρες μειώνουν τη συμπεριφορά που μοιάζει με άγχος μέσω τροποποιήσεων κορτικοστερόνης και BDNF.

Dotto, JM και Chacha, JS (2020). Η δυνατότητα των σπόρων κολοκύθας ως λειτουργικού συστατικού τροφής: Μια ανασκόπηση. Επιστημονική Αφρ. 10, e00575.

Duke, JA (1992). Εγχειρίδιο φυτοχημικών συστατικών των βοτάνων GRAS και άλλων οικονομικών φυτών. [Σε σύνδεση]. Boca Raton: FL: CRC Press.

El-Desouki, N., El-Refaiy, A., Abdel-Azeem, H., and El-Baely, M. (2011). Ιστολογικές και Υπερδομικές Μελέτες της Επίδρασης της Ακινητοποίησης

Το άγχος στον φλοιό των επινεφριδίων του Albino Rat και ο Βελτιωτικός Ρόλος της Διαζεπάμης. J. Αίγυπτος. Γερ. Soc. Zool 62, 25–45. Gamal, M., Moawad, J., Rashed, L., Morcos, MA, and Sharawy, N. (2018).

Πιθανή εμπλοκή Τετραϋδροβιοπτερίνης στη Διαταραχή της Οξειδοαναγωγής Ομοιόστασης στη Σήψη - Προκαλούμενη Εγκεφαλική Δυσλειτουργία. Brain Res. 1685, 19–28.

Gore, AC και Patisaul, HB (2010). Νευροενδοκρινική διαταραχή: Ιστορικές ρίζες, τρέχουσα πρόοδος, ερωτήματα για το μέλλον. Εμπρός. Neuroendocrinol. 31, 395–399.

Guo-Hua, Χ., Zhi-Hong, Η., and Yong-Fangl, W. (2000). Μελέτη της πιθανής αντικαρκινικής επίδρασης και ανοσολογικής ικανότητας του πολυσακχαρίτη κολοκύθας. J. Wuhan Prof. Med. Coll. 28, 1–4.

Hema, R., Kumaravel, S., and Alagusundaram, K. (2011). GC/MS Προσδιορισμός Βιοδραστικών Συστατικών του Murraya Koenigii. Μαρμελάδα. Sci. 7, 80–83. Huang, L., Mivechi, NF, and Moskophidis, D. (2001). Πληροφορίες για τη ρύθμιση και τη λειτουργία του μορίου Hsp70 που προκαλείται από το κύριο στρες

Chaperone In Vivo: Ανάλυση ποντικών με στοχευμένο γονίδιο Διαταραχή του γονιδίου hsp70.1 ή hsp70.3. ΜοΙ. Cel, ΒίοΙ. 21, 8575–8591.

Huang, Q., Liu, H., Suzuki, K., Ma, S., and Liu, C. (2019). Συνδέοντας αυτό που τρώμε με τη διάθεσή μας: μια ανασκόπηση της διατροφής, των διαιτητικών αντιοξειδωτικών και της κατάθλιψης. Antioxidants 8, 376. doi:10.3390/antiox8090376

Jeong, HJ, Kim, JH, Kim, NR, Yoou, MS, Nam, SY, Kim, KY, et al. (2015). Αντικαταθλιπτική δράση του Stillen. Αψίδα. Pharm. Res. 38, 1223–1231.

Jonnalagadda, SC, Suman, P., Morgan, DC και Seay, JN (2017). "Κεφάλαιο 2 - Πρόσφατες εξελίξεις σχετικά με τη σύνθεση και τις εφαρμογές της βετουλίνης και των παραγώγων βετουλινικού οξέος ως θεραπευτικοί παράγοντες," στο Studies in Natural Products Chemistry. Editor R. Atta Ur (Elsevier). Khar, A., Ali, AM, Pardhasaradhi, BY, Varalakshmi, CH, Anjum, R., and Kumari, AL (2001). Η επαγωγή της απόκρισης στο στρες αποδίδει ανθρώπινο καρκινικό κύτταρο

Γραμμές ανθεκτικές στην απόπτωση που προκαλείται από κουρκουμίνη: Ρόλος των ενδιάμεσων αντιδραστικών οξυγόνου. Cell Stress Chaperones 6, 368–376. doi:10.1379/1466-1268(2001) 006<0368:iosrrh>2.0.co;2 Kikuchi, T., Ando, ​​H., Maekawa, KI, Arie, H., Yamada, T., and Tanaka, R. (2015). Δύο Νέοι Διτερπενικοί Γλυκοζίτες τύπου Ent-kaurane από σπόρους κολοκυθιού (Cucurbita Pepo L.). Fitoterapia 107, 69–76. doi:10.1016/j.fifitote.2015.09.019 Kim, HY, Nam, SY, Yang, SY, Kim, HM και Jeong, HJ (2016a). Cucurbita

Μοσχάτα Δουχ. Και το ενεργό συστατικό του, η καροτίνη, προάγει αποτελεσματικά τις ανοσολογικές αντιδράσεις μέσω της ενεργοποίησης των σπληνοκυττάρων και των μακροφάγων. Immunopharmacol. Ανοσοτοξικόλη. 38, 319–326.

Koldysheva, EV, και Lushnikova, EL (2008). Υπερδομική αναδιοργάνωση του φλοιού των επινεφριδίων αρουραίου μετά από υπερθερμία όλου του σώματος. Ταύρος. Exp. Biol. Med. 145, 650–655.

Η εξάντληση γλυκοκορτικοειδών που προκαλείται από τη μετυραπόνη ρυθμίζει την έκφραση γονιδίου υδροξυλάσης τυροσίνης και φαινυλαιθανολαμίνης Ν-μεθυλτρανσφεράσης στον επινεφρίδιο αρουραίου μέσω μιας μη χολινεργικής διασυναπτικής ενεργοποίησης. J. Neuroendocrinol. 15, 15–23.

Lachance, LR και Ramsey, D. (2018). Αντικαταθλιπτικές τροφές: Σύστημα προσδιορισμού θρεπτικών στοιχείων για την κατάθλιψη που βασίζεται σε στοιχεία. World J. Psychiatry 8, 97–104.