Αφηρημένη

Ιστορικό/Στόχοι:Οι ολιγοσακχαρίτες υαλουρονάνης (ΗΑ) εμπλέκονται σε διάφορες βιολογικές διεργασίες, κυρίως στην αναδιαμόρφωση του κολλαγόνου και στην επούλωση τραυμάτων. Η αναδόμηση του κολλαγόνου καθυστερεί στη γήρανση του δέρματος και προκαλεί ρυτίδες. Αυτή η μελέτη είχε στόχο να αξιολογήσει την επίδραση των ολιγοσακχαριτών 2-kDa HA (HA2k) στις ρυτίδες μέσω της διείσδυσης μέσω της κεράτινης στιβάδας και της προώθησης της αναδιαμόρφωσης του κολλαγόνου.

Ο γλυκοσίδης του cistanche μπορεί επίσης να αυξήσει τη δραστηριότητα του SOD στους ιστούς της καρδιάς και του ήπατος και να μειώσει σημαντικά την περιεκτικότητα σε λιποφουσκίνη και MDA σε κάθε ιστό, καθαρίζοντας αποτελεσματικά διάφορες δραστικές ρίζες οξυγόνου (OH-, H2O2, κ.λπ.) και προστατεύοντας από βλάβη του DNA που προκαλείται από ρίζες ΟΗ. Οι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες του Cistanche έχουν ισχυρή ικανότητα δέσμευσης ελεύθερων ριζών, υψηλότερη αναγωγική ικανότητα από τη βιταμίνη C, βελτιώνουν τη δραστηριότητα του SOD στο εναιώρημα σπέρματος, μειώνουν την περιεκτικότητα σε MDA και έχουν μια ορισμένη προστατευτική δράση στη λειτουργία της σπερματικής μεμβράνης. Οι πολυσακχαρίτες Cistanche μπορούν να ενισχύσουν τη δραστηριότητα των SOD και GSH-Px σε ερυθροκύτταρα και πνευμονικούς ιστούς πειραματικά γηρασμένων ποντικών που προκαλούνται από D-γαλακτόζη, καθώς και να μειώσουν την περιεκτικότητα σε MDA και κολλαγόνο στους πνεύμονες και στο πλάσμα και να αυξήσουν την περιεκτικότητα σε ελαστίνη. ένα καλό αποτέλεσμα σάρωσης στο DPPH, παρατείνει το χρόνο της υποξίας σε γηρασμένα ποντίκια, βελτιώνει τη δραστηριότητα του SOD στον ορό και καθυστερεί τον φυσιολογικό εκφυλισμό του πνεύμονα σε πειραματικά γηρασμένα ποντίκια Με τον κυτταρικό μορφολογικό εκφυλισμό, τα πειράματα έχουν δείξει ότι το Cistanche έχει την καλή αντιοξειδωτική ικανότητα και έχει τη δυνατότητα να είναι φάρμακο για την πρόληψη και τη θεραπεία ασθενειών της γήρανσης του δέρματος. Ταυτόχρονα, η εχινακοσίδη στο Cistanche έχει σημαντική ικανότητα να καθαρίζει τις ελεύθερες ρίζες DPPH και έχει την ικανότητα να καθαρίζει δραστικά είδη οξυγόνου και να αποτρέπει την αποικοδόμηση του κολλαγόνου που προκαλείται από ελεύθερες ρίζες, και έχει επίσης μια καλή επίδραση επιδιόρθωσης στη βλάβη των ανιόντων από τις ελεύθερες ρίζες θυμίνης.

Κάντε κλικ για να δείτε τα αντιοξειδωτικά προϊόντα

【Για περισσότερες πληροφορίες: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Μέθοδοι:Ένα τρισδιάστατο μοντέλο δέρματος και το αποκομμένο ανθρώπινο δέρμα χρησιμοποιήθηκαν για την αξιολόγηση της διείσδυσης του επισημασμένου με φλουορεσκεΐνη HA2k. Η επίδραση του HA2k στον μεταβολισμό του κολλαγόνου αξιολογήθηκε με τη μέτρηση του επιπέδου πρωτεΐνης του προκολλαγόνου τύπου 1 (COL1A1) και της μεταλλοπρωτεϊνάσης μήτρας-1 (MMP-1) στο τρισδιάστατο μοντέλο δέρματος. 0.1 τοις εκατό διάλυμα HA2k και έλεγχος οχήματος εφαρμόστηκαν στον ανθρώπινο αντιβράχιο για 8 εβδομάδες για την αξιολόγηση της πυκνότητας του δέρματος του κολλαγόνου. Για να αξιολογηθεί η επίδραση του HA2k στο βάθος των ρυτίδων του προσώπου, πραγματοποιήθηκε μια τυχαιοποιημένη ελεγχόμενη δοκιμή με 0.1 τοις εκατό λοσιόν HA2k και λοσιόν οχήματος για 8 εβδομάδες.

Αποτελέσματα:Το HA2k επιβεβαιώθηκε ότι διεισδύει μέσω της κεράτινης στιβάδας με μικροσκόπιο φθορισμού. Τόσο το COL1A1 όσο και το MMP-1 ρυθμίστηκαν προς τα πάνω από την εφαρμογή HA2k σε μια καλλιέργεια τρισδιάστατου μοντέλου δέρματος. Η πυκνότητα κολλαγόνου ήταν υψηλότερη για το αντιβράχιο που υποβλήθηκε σε αγωγή με HA2k απ' ό,τι για το αντιβράχιο που υποβλήθηκε σε αγωγή με έλεγχο όχημα μετά από 4 εβδομάδες. Τα μέγιστα βάθη ρυτίδων στη ρινοχειλική πτυχή και στην περιοχή των ποδιών της χήνας ήταν σημαντικά μικρότερα στην ομάδα λοσιόν HA2k από ό,τι στην ομάδα ελέγχου.

Συμπέρασμα:Το HA2k διαπέρασε την κεράτινη στοιβάδα, ενεργοποίησε τη σύνθεση και την αποικοδόμηση κολλαγόνου ταυτόχρονα και βελτίωσε τις ρυτίδες.

ΛΕΞΕΙΣ ΚΛΕΙΔΙΑ

αντιγήρανση, κυτταροκαλλιέργεια, αναδιαμόρφωση κολλαγόνου, ανθρώπινη μελέτη, υαλουρονίνη

1|ΕΙΣΑΓΩΓΗ

Η εξωκυτταρική μήτρα (ECM) είναι ένα σύνθετο μακρομορίων, συμπεριλαμβανομένων πρωτεϊνών και γλυκοζαμινογλυκανών, που παρέχει μηχανική υποστήριξη στα γύρω κύτταρα. Στον δερματικό ιστό, η ECM συμβάλλει στις φυσικές ιδιότητες του δέρματος. Για παράδειγμα, το κολλαγόνο, το κύριο συστατικό της δερματικής ECM, συμβάλλει στην ακεραιότητα, την ελαστικότητα και την απαλότητα του δέρματος.1 Φυσιολογικά, το κολλαγόνο του δέρματος διατηρείται με την αποικοδόμηση του παλιού κολλαγόνου και την επανασύνθεση του νέου κολλαγόνου σε μια διαδικασία που ονομάζεται κολλαγόνο αναδιαμόρφωση.2 Ωστόσο, ο κύκλος της αναδιαμόρφωσης του κολλαγόνου μπορεί να επιβραδυνθεί στη γήρανση του δέρματος, με αποτέλεσμα ρυτίδες, χαλάρωση και μειωμένη ελαστικότητα.3 Αυτά τα προβλήματα σχετίζονται σημαντικά με την υψηλότερη αντιληπτή ηλικία ενός ατόμου από την πραγματική ηλικία. Επομένως, η αναδιαμόρφωση του κολλαγόνου είναι ένας πολλά υποσχόμενος στόχος για την αντιγήρανση. Μια προσέγγιση που στοχεύει δυνητικά το ECM θα μπορούσε να είναι καλύτερη για τη διαχείριση αυτών των προβλημάτων, επειδή οι επιφανειακές προσεγγίσεις δεν επηρεάζουν το ECM. Το Micro-needling είναι ένας τρόπος που στοχεύει την ECM για την προώθηση της αναδόμησης του δερματικού κολλαγόνου. ωστόσο είναι μια σχετικά επεμβατική μέθοδος.

Η υαλουρονάνη (ΗΑ), ένας βιολογικά προερχόμενος πολυσακχαρίτης, είναι επίσης συστατικό του ECM. Η ΗΑ ανακαλύφθηκε αρχικά στο υαλοειδές σώμα του ματιού και αργότερα στο αρθρικό υγρό, τον ομφάλιο λώρο και το δέρμα. Το μοριακό βάρος του ΗΑ διαφέρει ανάλογα με τον τύπο του ιστού και τη βιολογική του κατάσταση, και κυμαίνεται από 1 kDa έως 3000 kDa.4 Το HA στο δέρμα γενικά υπάρχει σε κατάσταση υψηλού μοριακού βάρους και λόγω της υψηλής ιξωδοελαστικότητάς του και του νερού- ικανότητα συγκράτησης, το HA λειτουργεί ως μαξιλάρι, λιπαντικό και ενυδατικό. Ως εκ τούτου, το ΗΑ υψηλού μοριακού βάρους χρησιμοποιείται στον τομέα των καλλυντικών για τη διατήρηση της περιεκτικότητας σε νερό της κεράτινης στιβάδας. Δεδομένου ότι τα μακρομόρια έχουν πολύ περιορισμένη διαπερατότητα μέσω του δέρματος, έχουν γίνει κάποιες προσπάθειες να βελτιωθεί η διαπερατότητα του ΗΑ με αποικοδόμηση του ΗΑ σε μικρά θραύσματα, τα οποία έχει επιβεβαιωθεί ότι διεισδύουν μέσω της κεράτινης στιβάδας.5

Εκτός από τη φυσική λειτουργία, η βιολογική λειτουργία του ΗΑ ήταν ένα πρόσφατο θέμα έρευνας. Μερικές αξιοσημείωτες αναφορές έχουν δημοσιευθεί σχετικά με τη βιολογική λειτουργία του ΗΑ ως συστατικού της θέσης των βλαστοκυττάρων6 και την εξαιρετική μακροζωία των γυμνών τυφλοπόντικων αρουραίων. Το μοριακό βάρος του ΗΑ πρέπει να λαμβάνεται υπόψη όταν συζητούνται οι βιολογικές του λειτουργίες. Το ΗΑ στο δέρμα γενικά υπάρχει σε κατάσταση υψηλού μοριακού βάρους και σύμφωνα με πληροφορίες διατηρεί τη σταθερότητα των ιστών. Αντίθετα, η χαμηλού μοριακού βάρους ΗΑ ενεργοποιεί αρκετές βιολογικές διεργασίες.7 Σε προηγούμενες αναφορές, ο τετρασακχαρίτης ΗΑ ρύθμισε προς τα πάνω τη σύνθεση του ΗΑ και του κολλαγόνου τύπου Ι σε συγκαλλιεργημένα κερατινοκύτταρα και ινοβλάστες,8 επήγαγε δείκτες διαφοροποίησης στα κερατινοκύτταρα9 και βελτίωσε τη βλάβη στα ένα ποντίκι που ακτινοβολείται με υπεριώδη ακτινοβολία Α.5 Ειδικότερα, οι ολιγοσακχαρίτες κάτω των 10 kDa προάγουν κυρίως διαδικασίες επούλωσης τραυμάτων, όπως η σύνθεση ECM,9 η αγγειογένεση, η κυτταρική μετανάστευση και ο πολλαπλασιασμός. Η επούλωση τραυμάτων και η αναδιαμόρφωση του κολλαγόνου σχετίζονται στενά και ένα 12-μερές (δηλ. περίπου 2 kDa) ΗΑ ρυθμίζει προς τα πάνω το κολλαγόνο τύπου Ι και τη μεταλλοπρωτεϊνάση μήτρας 1 (MMP-1) ταυτόχρονα σε καλλιεργημένους ινοβλάστες, αλλά η επίδραση για τους ανθρώπους μένει να διευκρινιστεί.

Υπήρξαν κάποιες αναφορές για καλλυντικά HA που έδειξαν αντιρυτιδικά αποτελέσματα. Μια κρέμα δέρματος 50-kDa HA βελτίωσε το βάθος των ρυτίδων θηλυκών ατόμων ηλικίας 30-60 ετών σε μια τυχαιοποιημένη συγκριτική δοκιμή μισής πλευράς.10 Μια ανοιχτή μελέτη έδειξε ότι η κρέμα mi micronized-HA εφαρμόστηκε τοπικά σε 35 –65-άτομα ετών, τα οποία οδήγησαν σε βελτίωση των βαθμολογιών του ερωτηματολογίου για το βάθος των ρυτίδων.11 Σε αυτές τις μελέτες, η υψηλή διαπερατότητα του χαμηλού μοριακού βάρους ΗΑ προτάθηκε ως μηχανισμός δράσης, αν και υπήρχε δεν υπάρχουν δεδομένα για το ανθρώπινο δέρμα. Επιπλέον, η επίδραση των θραυσμάτων ΗΑ στην πυκνότητα του κολλαγόνου στους ανθρώπους μένει να διευκρινιστεί.

Υποθέσαμε ότι οι ολιγοσακχαρίτες HA διαπερνούν την κεράτινη στιβάδα, προάγουν την αναδόμηση του κολλαγόνου και βελτιώνουν τις ρυτίδες ως αντιγηραντική δράση. Αυτή η μελέτη είχε στόχο να αξιολογήσει τις επιδράσεις του 2-kDa HA (HA2k) στην αναδιαμόρφωση του κολλαγόνου και στις δερματικές παθήσεις μέσω in vitro και in vivo μελετών. Αρχικά, η διείσδυση του HA2k αξιολογήθηκε σε ένα μοντέλο ανασυσταμένου δέρματος και σε ανθρώπινο δέρμα που έχει αφαιρεθεί. Στη συνέχεια, οι επιδράσεις στην αναδιαμόρφωση του κολλαγόνου αξιολογήθηκαν in vitro και σε ανθρώπους. Τέλος, πραγματοποιήθηκε μια τυχαιοποιημένη σύγκριση της μισής πλευράς της λοσιόν δέρματος που περιέχει HA2k και της λοσιόν ελέγχου μεταξύ 21 ατόμων για να αξιολογηθούν οι επιπτώσεις στις ρυτίδες του δέρματος.

2|ΥΛΙΚΑ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΙ

Αυτή η μελέτη διεξήχθη από τη Διακήρυξη του Ελσίνκι και εγκρίθηκε από την Επιτροπή Ιατρικής Δεοντολογίας της Kewpie Corp. και το Συμβούλιο Θεσμικής Αναθεώρησης της DERMAPRO Ltd., με αριθμούς έγκρισης 17–4 και 1-220 777-AN-02-DICN18228, αντίστοιχα . Αυτή η μελέτη διεξήχθη με την εθελοντική συναίνεση των υποκειμένων.

2.1|Αντιδραστήρια

Το HAbooster™, ένα αντιδραστήριο HA2k καλλυντικής ποιότητας, ελήφθη από την Kewpie Corp. (Ιαπωνία).

2.2|Δερματική διείσδυση του HA2k σε τρισδιάστατη καλλιεργημένη ανθρώπινη επιδερμίδα και αποκομμένο ανθρώπινο δέρμα

Η διαπέραση του HA2k αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας κύτταρο διάχυσης τύπου Franz, σύμφωνα με προηγούμενη αναφορά. 12 δείγματα ΗΑ σημασμένα με φλουορεσκεΐνη (Fl-) παρασκευάστηκαν σε<1.25 mg/ml HA in water and dimethyl sulfoxide mixed at a ratio of 2:1 (v:v). Next, 50 mg/ml each of 5-amino fluorescein, cyclohexyl isocyanide, and acetaldehyde was added to bind fluorescein to HA. After 5 h of reaction at room temperature in the dark, the sample was purified by gel filtration chromatography using a PD Midi Trap G-10 (GE Healthcare,) with an exclusion lower limit of 700 M r. The obtained FL-HA solution was lyophilized and used in the following experiments. For evaluation with reconstituted skin by cell culture, a 3D skin model EPI-606X (Mat Tek,), which was confirmed to retain barrier function, was fixed in a Franz-type diffusion cell. The three-dimensional (3D) skin model was precultured for 16–18 h at 37°C, 5% CO2 in the medium provided by the supplier. After the equilibration process, the medium was changed for testing. A 1% solution of Fl-HA samples of 2 or 8 kDa was applied to the upper compartment and then incubated for 5 h. After washing four times with phosphate-buffered saline, the specimen was embedded in OCT compound (Sakura Finetek,) and frozen by using dry ice/acetone for the preparation of the tissue section. For evaluation on human skin, dermatomed abdominal skin from a 34-year-old Caucasian woman (Biopredic International, France) was fixed in a Franz-type diffusion cell. A 0.1% Fl-HA solution (molecular weight, 2 or 1000 kDa) was applied to the human skin. After incubation at 32°C for 24 h, the tissue was subjected to cryosection preparation as described above. The tissue slides were observed under a fluorescent microscope.

2.3|Αξιολόγηση του μεταβολισμού του κολλαγόνου σε ένα τρισδιάστατο μοντέλο δέρματος και αποκομμένο ανθρώπινο δέρμα

Χρησιμοποιήθηκε ένα τρισδιάστατο μοντέλο δέρματος για την αξιολόγηση των επιδράσεων του HA2k στο μεταβολισμό του κολλαγόνου.13 Εν συντομία, ένα μοντέλο πλήρους πάχους (EFT-412, Mat Tek) που περιλαμβάνει κερατινοκύτταρα και ινοβλάστες καλλιεργήθηκε σε 8 ug/ml HA2k- που περιέχει μέσο. Μετά από 48 ώρες, το ρυθμισμένο μέσο συλλέχθηκε και η ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία (ELISA) μετρήθηκαν τα επίπεδα του προ-κολλαγόνου τύπου 1 (COL1A1) και της MMP-1. Ο ιστός υποβλήθηκε σε επεξεργασία για ανοσοϊστολογική ανάλυση. Το κολλαγόνο στους ιστούς αξιολογήθηκε με χρήση ανοσοϊστοχημικής χρώσης COL1A1 στις αντικειμενοφόρες πλάκες ιστών τμημάτων ενσωματωμένων σε παραφίνη σταθεροποιημένων με φορμαλίνη. Οι τομές υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με πρωτεϊνάση Κ για 10 λεπτά στους 37 βαθμούς για να ανακτηθεί το αντιγόνο. Μετά τον αποκλεισμό, τα μονοκλωνικά αντισώματα αντι-COL1A1 (Abcam,) επωάστηκαν στους 4 βαθμούς όλη τη νύχτα. Οι αντικειμενοφόρες πλάκες στη συνέχεια επωάστηκαν με Alexa Fluor® 488 Goat Anti-Rabbit IgG (Abcam) σε θερμοκρασία δωματίου για 2 ώρες. Ο πυρήνας αντιχρωματίστηκε με ιωδιούχο προπίδιο. Οι τομές παρατηρήθηκαν σε μικροσκόπιο φθορισμού.

2.4|Αξιολόγηση της πυκνότητας του κολλαγόνου του δέρματος, της υγρασίας και της τομογραφίας σε ανθρώπινα άτομα

Το HA2k εφαρμόστηκε τοπικά στο ανθρώπινο δέρμα για να αξιολογηθεί η λειτουργία του ως ενεργού συστατικού. Οκτώ άτομα (δύο γυναίκες και έξι άνδρες, ηλικία, 26–39 ετών) εγγράφηκαν εθελοντικά στη μελέτη. Οι πήχεις τους χωρίστηκαν σε δύο περιοχές διαστάσεων 2 cm × 2 cm για να εφαρμόζονται τα δείγματα δύο φορές την ημέρα. Το 0.1 τοις εκατό του διαλύματος HA2k και ο έλεγχος οχήματος εφαρμόστηκαν χωριστά στις δύο περιοχές. Στις 0, 4 και 8 εβδομάδες, αξιολογήθηκε η βαθμολογία κολλαγόνου, η υγρασία του δέρματος και η τραχύτητα του δέρματος. Τα άτομα εγκλιματίστηκαν κάτω από ελεγχόμενη ατμόσφαιρα στους 23 βαθμούς ± 1 βαθμό και μια σχετική υγρασία 55 τοις εκατό ± 2 τοις εκατό για 20 λεπτά. Αυτή η περίοδος εγκλιματισμού ακολουθήθηκε από μέτρηση.

2.5|Αξιολόγηση βαθμολογίας κολλαγόνου

Χρησιμοποιήθηκε υπερηχογράφημα για τη μέτρηση της πυκνότητας του κολλαγόνου του δέρματος (DermaLab, Cortex Technology, Δανία).14 Ο ανιχνευτής εφαρμόστηκε στη λοσιόν HA2k και στις θέσεις ελέγχου του οχήματος για τη μέτρηση των βαθμολογιών κολλαγόνου. Μετρήθηκαν συνολικά πέντε σημεία, που περιλαμβάνουν τις τέσσερις γωνίες και το κέντρο κάθε τοποθεσίας, και υπολογίστηκε η μέση τιμή.

2.6|Αξιολόγηση της υγρασίας του δέρματος

Η υγρασία του δέρματος μετρήθηκε με τη χρήση της μεθόδου σύνθετης αντίστασης (SKICON, Yayoi,).15 Ο ανιχνευτής εφαρμόστηκε στο σημείο αξιολόγησης για τη μέτρηση της υγρασίας του δέρματος. Μετρήθηκαν συνολικά πέντε πόντοι στις τέσσερις γωνίες και στο κέντρο. Υπολογίστηκε η μέση τιμή.

2.7|Αξιολόγηση τραχύτητας δέρματος

Η τραχύτητα του δέρματος μετρήθηκε με οπτική ανάλυση (VisioScan, Courage plus Khazaka Electronic, Γερμανία).16 Οι εικόνες ελήφθησαν στις τέσσερις γωνίες και αναλύθηκαν από το λογισμικό. Υπολογίστηκε η μέση τιμή.

2.8|Αξιολόγηση της ρυτίδας, της χαλάρωσης και της ελαστικότητας του δέρματος σε ανθρώπους

Δεδομένου ότι το δερματικό κολλαγόνο φέρεται να σχετίζεται με ρυτίδες, χαλάρωση και ελαστικότητα του δέρματος, αξιολογήθηκε η εφαρμογή του HA2K σε καλλυντικά προϊόντα. Είκοσι ένα άτομα εγγράφηκαν σύμφωνα με τα ακόλουθα κριτήρια: υγιή θηλυκά με ήπιες έως μέτριες ρυτίδες με οπτική και φωτογραφική αξιολόγηση που κυμαίνονται από βαθμούς ρυτίδων 1-3 σύμφωνα με την οδηγία βαθμολόγησης ρυτίδων της Japanese Cosmetic Science Society, με ρινοχειλική πτυχή, ούτε έγκυες ούτε το θηλασμό, και το δέρμα που δεν έχει ευαισθησία ούτε υπερευαισθησία. Κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου δοκιμής, τα υποκείμενα δεν χρησιμοποίησαν καλλυντικά προϊόντα, εργαλεία ομορφιάς ή διαδικασίες φροντίδας δέρματος εκτός από το αντικείμενο δοκιμής. Τα δείγματα προϊόντων που παρέχονται ως λοσιόν εφαρμόζονταν δύο φορές την ημέρα (πρωί και βράδυ). Οι συνθέσεις των λοσιόν φαίνονται στον Πίνακα 1. Μετά το πλύσιμο του προσώπου, εφαρμόστηκαν οι λοσιόν, ακολουθούμενες από μια καθορισμένη γαλακτώδη λοσιόν και κρέμα, εάν ήταν απαραίτητο. Η λοσιόν HA2k εφαρμόστηκε στη μία πλευρά και το προϊόν ελέγχου εφαρμόστηκε στην άλλη πλευρά. Τα άτομα εξετάστηκαν από ένα σύστημα ανάλυσης τρισδιάστατων εικόνων για την αξιολόγηση των ποδιών της χήνας, της ρινοχειλικής πτυχής, της χαλάρωσης του δέρματος και της ελαστικότητας κατά την έναρξη (0 εβδομάδες), 4 εβδομάδες και 8 εβδομάδες μετά τη θεραπεία. Όλες οι μετρήσεις πραγματοποιήθηκαν κάτω από μια δεδομένη σχετική θερμοκρασία (20 βαθμοί -24 βαθμοί) και υγρασία (45 τοις εκατό -55 τοις εκατό).

2.9|Μέτρηση παραμέτρων ρυτίδων

Οι παράμετροι ρυτίδων των ποδιών της χήνας και της ρινοχειλικής πτυχής αξιολογήθηκαν με οπτική ανάλυση (PRIMOS® Premium and Lite, GFMesstechnik,).17 Η εικόνα αναλύθηκε στην ίδια περιοχή κατά την έναρξη, 4 και 8 εβδομάδες μετά τη θεραπεία με χρήση λογισμικού (Primos 5.8 E εκδ.).

2.10|Μέτρηση ελαστικότητας δέρματος

Η ελαστικότητα του δέρματος μετρήθηκε με τη μέθοδο αναρρόφησης (Cutometer® MPA580, Courage plus Khazaka electronic,) σύμφωνα με προηγούμενη αναφορά.18 Εν συντομία, το δέρμα τραβήχτηκε στο άνοιγμα του καθετήρα στα 450 bar για 2 δευτερόλεπτα. Στη συνέχεια, η αρνητική πίεση απενεργοποιήθηκε για 2 δευτερόλεπτα και το δέρμα αφέθηκε να επιστρέψει στο αρχικό του σχήμα. Πραγματοποιήθηκαν τρεις επαναλήψεις σε έναν κύκλο μέτρησης. Η ελαστικότητα του δέρματος στο μάγουλο αναλύθηκε με παραμέτρους R2 κατά την έναρξη, 4 και 8 εβδομάδες μετά τη θεραπεία.

2.11|Μέτρηση χαλάρωσης δέρματος

Η χαλάρωση του δέρματος στο μάγουλο αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας τη μέθοδο τοπογραφίας Moire (F-ray®, Beyoung,),19, η οποία είναι μια τρισδιάστατη μορφομετρική μέθοδος στην οποία παράγονται χάρτες περιγράμματος από τα επικαλυπτόμενα κρόσσια παρεμβολής που δημιουργούνται όταν ένα αντικείμενο φωτίζεται από συνεκτικό φως. Ελήφθη το μοτίβο Moire στο μάγουλο και η γωνία που παρήχθη με το σχέδιο δύο γραμμών στο τέλος της μύτης αναλύθηκε χρησιμοποιώντας λογισμικό (Image-Pro Plus®, MediaCybernetics,) στην έναρξη, 4 και 8 εβδομάδες μετά τη θεραπεία.

2.12|Στατιστική ανάλυση

Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση του προγράμματος λογισμικού SPSS® (IBM,). Το Mann-Whitney U-test πραγματοποιήθηκε για να αξιολογηθεί η επίδραση του HA2k στην αναδιαμόρφωση του κολλαγόνου in vitro. Η επίδραση του HA2k στο κολλαγόνο σε ανθρώπινα υποκείμενα αναλύθηκε με τη χρήση του τεστ ζευγών t. Σε ανθρώπινες μελέτες που αξιολόγησαν την επίδραση του HA2k στις ρυτίδες, τη χαλάρωση και την ελαστικότητα του δέρματος, χρησιμοποιήθηκε το τεστ Shapiro-Wilks ή η κύρτωση και η λοξότητα για τον έλεγχο της κανονικότητας. Η στατιστική ανάλυση των παραμετρικών μεταβλητών πραγματοποιήθηκε με χρήση επαναλαμβανόμενων μετρήσεων ANOVA. Εάν η τιμή ήταν μη παραμετρική, όλα συγκρίθηκαν αρχικά χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία υπογεγραμμένης κατάταξης Wilcoxon με διόρθωση Bonferroni. Η στατιστική ανάλυση για σύγκριση μεταξύ των τοποθεσιών διεξήχθη με επαναλαμβανόμενες μετρήσεις ANOVA ή ANCOVA χρησιμοποιώντας την τιμή διακύμανσης από την αρχική τιμή έως τις 4 και 8 εβδομάδες μετά τη θεραπεία. Μια τιμή p του<0.05 was considered to be indicative of statistical significance. Change from baseline (%)   was defined as follows: (Baseline − After treatment)/Baseline × 100.

3|ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ

3.1|Δερματική διείσδυση HA2k

Σε ένα μοντέλο τρισδιάστατου δέρματος, το επισημασμένο με φλουορεσκεΐνη HA2k πέρασε από την κεράτινη στοιβάδα (Εικόνα 1), ενώ το 8-kDa HA όχι. Στο ανθρώπινο δέρμα, το επισημασμένο με φλουορεσκεΐνη HA2k διείσδυσε στο χόριο. Το 1000- kDa HA δεν πέρασε από την κεράτινη στιβάδα. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι σε σύγκριση με μεγαλύτερου μοριακού βάρους ΗΑ, το HA2k είχε υψηλή δερματική διαπερατότητα.

3.2|Επίδραση του HA2k στον μεταβολισμό του κολλαγόνου

Σε ένα μοντέλο τρισδιάστατου δέρματος, τα περιεχόμενα πρωτεΐνης τόσο του COL1A1 όσο και του MMP-1 στο ρυθμισμένο μέσο αυξήθηκαν με προσθήκη HA2k (Εικόνα 2). Επομένως, το HA2k υποτίθεται ότι προωθεί ταυτόχρονα την παραγωγή COL1A1 και MMP-1.

3.3|Επίδραση του HA2k στην περιεκτικότητα σε κολλαγόνο και στην κατάσταση του δέρματος σε ανθρώπους

Στις ανθρώπινες μελέτες, οι βαθμολογίες δερματικού κολλαγόνου ήταν υψηλότερες μετά από 4 εβδομάδες στο σημείο όπου είχε εφαρμοστεί 0.1 τοις εκατό διάλυμα HA2k από ό,τι στο σημείο όπου είχε εφαρμοστεί το διάλυμα ελέγχου (Εικόνα 3). Επιπρόσθετα, οι καταστάσεις της περιεκτικότητας σε νερό του δέρματος και της τραχύτητας του δέρματος ήταν καλύτερες μετά από 8 εβδομάδες στο σημείο που υποβλήθηκε σε επεξεργασία με το διάλυμα HA2k από ό,τι στο σημείο που υποβλήθηκε σε επεξεργασία με το διάλυμα ελέγχου. Ως εκ τούτου, προτάθηκε ότι το HA2k προάγει την παραγωγή κολλαγόνου στο ανθρώπινο δέρμα και βελτιώνει την κατάστασή του.

3.4|Επίδραση του HA2k στις ρυτίδες, τη χαλάρωση και την ελαστικότητα του δέρματος σε ανθρώπινα άτομα

Στην ανθρώπινη δοκιμή, το μέγιστο βάθος των ποδιών της χήνας και οι ρινοχειλικές ρυτίδες ήταν χαμηλότερες στις 4 εβδομάδες και 8 εβδομάδες στην πλευρά που υποβλήθηκε σε θεραπεία με 0.1 τοις εκατό λοσιόν HA2k από ό,τι στην πλευρά που υποβλήθηκε σε θεραπεία με τη λοσιόν ελέγχου (Εικόνα 4) . Η χαλάρωση του δέρματος βελτιώθηκε στην πλευρά που υποβλήθηκε σε θεραπεία με τη λοσιόν HA2k μετά από 4 εβδομάδες σε σχέση με την έναρξη. Η ελαστικότητα του δέρματος βελτιώθηκε μετά από 4 και 8 εβδομάδες από την πλευρά που υποβλήθηκε σε θεραπεία με τη λοσιόν HA2k, ενώ βελτιώθηκε μόνο μετά από 8 εβδομάδες στην πλευρά που είχε υποβληθεί σε θεραπεία με τη λοσιόν ελέγχου. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η λοσιόν HA2k βελτίωσε τις ρυτίδες, τη χαλάρωση και την ελαστικότητα του δέρματος.

4|ΣΥΖΗΤΗΣΗ

Έχει αναφερθεί ότι η ρινοχειλική πτυχή είναι ένας από τους ισχυρότερους παράγοντες που επηρεάζουν το χάσμα μεταξύ της πραγματικής ηλικίας ενός ατόμου και της αντίληψης ηλικίας. Η ένεση πληρωτικού είναι ένας κοινός τρόπος για τη βελτίωση της ρινοχειλικής πτυχής. Ωστόσο, το αποτέλεσμα και η ασφάλεια εξαρτώνται από την τεχνική των γιατρών. Έχουν αναφερθεί ορισμένες σοβαρές παρενέργειες της ένεσης που προκαλούνται από αγγειακή απόφραξη που οδηγεί σε νέκρωση του δέρματος και τύφλωση.20 ​​Το HA2k είναι μια ασφαλέστερη και λιγότερο επεμβατική επιλογή για τη βελτίωση της ρινοχειλικής πτυχής. Επιπλέον, το HA2k δοκιμάστηκε ως σκευασμένη λοσιόν σε αυτή τη μελέτη και υποτίθεται ότι ήταν ένα πιο πρακτικό ενεργό καλλυντικό συστατικό (ACI).

Η ρινοχειλική πτυχή προκαλείται από τη γήρανση στο χόριο και είναι δύσκολο να βελτιωθεί πλησιάζοντας μόνο το ανώτερο στρώμα της επιδερμίδας. Για να απελευθερωθούν ACI σε βαθύτερα στρώματα, όπως η επιδερμίδα και το χόριο, είναι απαραίτητο να διεισδύσουν μέσω της κεράτινης στιβάδας. Προηγουμένως,<300-kDa HAs have been shown to permeate through the stratum corneum of excised human skin.21 It is, therefore, reasonable that HA2k permeates through the stratum corneum. Interestingly,   a 1200-kDa HA has been reported to permeate through the stratum corneum of excised skin when polyion complex particles were constructed with a specific polycation.22 It is suggested that higher transdermal absorption of HA2k would be achieved by optimizing the formulation.

Ορισμένες αναφορές έχουν δηλώσει ότι τα ACI ρυθμίζουν προς τα πάνω τη σύνθεση κολλαγόνου. Έχουμε αναφερθεί προηγουμένως για τέτοια ACI, συμπεριλαμβανομένων τετρασακχαριτών ΗΑ, 8 πεπτιδίων σόγιας και πεπτιδίων κολλαγόνου. Το HA2k είναι μοναδικό επειδή ρυθμίζει προς τα πάνω τη σύνθεση και την αποικοδόμηση του κολλαγόνου ταυτόχρονα. Υπάρχει ανάγκη να αποσαφηνιστεί ο μηχανισμός ανοδικής ρύθμισης των COL1A1 και MMP-1 σε μελλοντικές μελέτες.

Η χαμηλού μοριακού βάρους ΗΑ έχει αναφερθεί ότι προκαλεί φλεγμονή στο δέρμα23. Ωστόσο, ο μηχανισμός δράσης παραμένει αμφιλεγόμενος. Μια άλλη μελέτη που χρησιμοποιούσε μια ανασυσταθείσα επιδερμίδα ανέφερε ότι ένα χαμηλού μοριακού βάρους ΗΑ ήταν φλεγμονώδες.24 Στην ανθρώπινη μελέτη μας, δεν παρατηρήθηκαν παρενέργειες, συμπεριλαμβανομένων των φλεγμονωδών συμπτωμάτων. Το χαμηλό μοριακό βάρος μπορεί να έχει προκαλέσει φλεγμονώδη σηματοδότηση μόνο in vitro, χωρίς χόριο. Κάτω από πιο περίπλοκες συνθήκες, όπως αυτές του ανθρώπινου δέρματος, εμφανίζεται αλληλεπίδραση μεταξύ διαφόρων κυττάρων ιστών και η φλεγμονώδης σηματοδότηση ακυρώνεται. Αξίζει να σημειωθεί ότι μια πρόσφατη μελέτη έδειξε ότι ο ενδογενής κατακερματισμός HA προκάλεσε φλεγμονώδεις αποκρίσεις, ενώ οι εξωγενείς χαμηλού μοριακού βάρους HA (2800– 60 000 Da) όχι.25

Η συγκέντρωση του HA2k που χρησιμοποιήθηκε σε αυτήν την ανθρώπινη μελέτη ήταν 0,1 τοις εκατό, αλλά η βέλτιστη δόση του μένει να διευκρινιστεί. Το HA2k μπορεί να χρησιμοποιηθεί ευρύτερα εάν είναι αποτελεσματικές χαμηλότερες δόσεις. Επιπλέον, σε συνδυασμό με HA υψηλού μοριακού βάρους θα επέτρεπε την ανάπτυξη πιο αποτελεσματικών καλλυντικών για την αντιγήρανση, επειδή τα μεγαλύτερα HA είναι καλύτερα ενυδατικά.4 Το HA2k εξακολουθεί να είναι ένα σχετικά οικονομικό υλικό για τη βελτίωση των ρυτίδων, καθώς δεν χορηγείται ενδοφλεβίως από ένας γιατρός.

5|ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑ

Σε αυτή τη μελέτη, διερευνήσαμε την επίδραση του HA2k στη βελτίωση των ρυτίδων του δέρματος με τοπική εφαρμογή στο ανθρώπινο δέρμα. Η ρινοχειλική πτυχή και τα πόδια της χήνας βελτιώθηκαν σημαντικά με μια λοσιόν HA2k 0,1 τοις εκατό. Το πρώτο βήμα στον προτεινόμενο μηχανισμό είναι η διείσδυση του HA2k μέσω της κεράτινης στιβάδας, το οποίο επιβεβαιώσαμε εκτελώντας ένα πείραμα διείσδυσης σε ένα τρισδιάστατο μοντέλο δέρματος και ανθρώπινο δέρμα που έχει αφαιρεθεί. Το δεύτερο βήμα του μηχανισμού είναι η ενεργοποίηση της αναδιαμόρφωσης του κολλαγόνου από το HA2k, το οποίο αποδείξαμε πραγματοποιώντας μια ELISA σε COL1A1 και MMP-1 σε ένα τρισδιάστατο μοντέλο δέρματος και με υπερηχογραφική ανάλυση της πυκνότητας κολλαγόνου σε μια πιλοτική μελέτη σε ανθρώπους μαθήματα. Συνολικά, το HA2k είναι ένα πολλά υποσχόμενο συστατικό για αντιγηραντικά καλλυντικά.

ΣΥΝΕΙΣΦΟΡΕΣ ΣΥΓΓΡΑΦΕΩΝ

Η YA και η YT σχεδίασαν την έρευνα. Οι YA, HK και MK πραγματοποίησαν πειράματα. Ο YA και ο SS ανέλυσαν δεδομένα και ο SS έγραψε το χειρόγραφο υπό την επίβλεψη του TY Όλοι οι συγγραφείς έχουν διαβάσει και εγκρίνει το τελικό χειρόγραφο.

ΑΝΑΓΝΩΡΙΣΗ

Επιστημονική συγγραφική βοήθεια παρείχε η Crimson Interactive Pvt. Ε.Π.Ε.

ΣΥΓΚΡΟΥΣΗ ΣΥΜΦΕΡΟΝΤΩΝ 

Η YT και η MK δηλώνουν ότι δεν έχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα. Οι YA, SS και HK είναι υπάλληλοι της Kewpie Corporation, προμηθευτή της HA.

ΔΗΛΩΣΗ ΔΙΑΘΕΣΙΜΟΤΗΤΑΣ ΔΕΔΟΜΕΝΩΝ

Τα δεδομένα που υποστηρίζουν τα ευρήματα αυτής της μελέτης είναι διαθέσιμα από τον αντίστοιχο συγγραφέα κατόπιν εύλογου αιτήματος.

ΗΘΙΚΗ ΕΓΚΡΙΣΗ

Αυτή η μελέτη διεξήχθη από τη Διακήρυξη του Ελσίνκι και εγκρίθηκε από την Επιτροπή Ιατρικής Δεοντολογίας της Kewpie Corp. και το Συμβούλιο Θεσμικής Αναθεώρησης της DERMAPRO Ltd., με αριθμούς έγκρισης 17-4 και 1-220777-AN-02-DICN18228 , αντίστοιχα

ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΑΝΑΦΟΡΕΣ

1. Arseni L, Lombardi A, Orioli D. Από τη δομή στον φαινότυπο: επίδραση των αλλαγών του κολλαγόνου στην ανθρώπινη υγεία. Int J Mol Sci. 2018; 19:1407.

2. Page-McCaw A, Ewald AJ, Werb Z. Matrix metalloproteinases and theregulation of tissue remodeling. Nat Rev ΜοΙ Cell Biol. 2007;8:221-233.

3. Lee DH, Oh JH, Chung JH. Γλυκοζαμινογλυκάνη και πρωτεογλυκάνη στη γήρανση του δέρματος. J Dermatol Sci. 2016;83:174-181.

4. Fraser JR, Laurent TC, Laurent UB. Υαλουρονικό: η φύση, η κατανομή, οι λειτουργίες και ο κύκλος εργασιών του. J Intern Med. 1997;242:27-33.

5. Kage M, Tokudome Y, Hashimoto F. Διαπερατότητα τετρασακχαριτών υαλουρονικής μέσω άτριχου δέρματος ποντικού: μελέτη in vitro και in vivo. Arch Dermatol Res. 2013;305:69-77. doi:10.1007/ s00403-012-1252-2

6. Gesteira TF, Sun Μ, Coulson-Thomas YM, et al. Το πλούσιο σε υαλουρονικό μικροπεριβάλλον στη θέση των βλαστοκυττάρων στα άκρα ρυθμίζει τη διαφοροποίηση των βλαστοκυττάρων του άκρου. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2017;58:4407-4421.

7. Kavasi RM, Berdiaki A, Spyridaki I, et al. Μεταβολισμός ΗΑ στην ομοιόσταση του δέρματος και τη φλεγμονώδη νόσο. Food Chem Toxicol. 2017;101:128-138.

8. Kage M, Tokudome Y, Matsunaga Y, Hariya T, Hashimoto F. Έκφραση υαλουρονικής συνθάσης και κολλαγόνου τύπου Ι mRNA από τετρασακχαρίτες υαλουρονάνης σε φυσιολογικούς ανθρώπινους δερματικούς ινοβλάστες. J Japanese Cosmet Sci Soc. 2013;37:1-5.

9. Kage M, Tokudome Y, Matsunaga Y, Hariya T, Hashimoto F. Επίδραση τετρασακχαριτών υαλουρονικής στην επιδερμική διαφοροποίηση σε φυσιολογικά ανθρώπινα επιδερμικά κερατινοκύτταρα. Int J Cosmet Sci. 2014;36:109- 115.

10. Pavicic Τ, Gauglitz GG, Lersch Ρ, et αϊ. Αποτελεσματικότητα νέων σκευασμάτων υαλουρονικού οξέος διαφορετικών μοριακών βαρών με βάση την κρέμα στην αντιρυτιδική θεραπεία. J Drugs Dermatol. 2011;10:990-1000.

11. Lubart R, Yariv I, Fixler D, Lipovsky A. Τοπική κρέμα προσώπου με υαλουρονικό οξύ με νέα τεχνολογία μικρονισμένων μορίων διεισδύει αποτελεσματικά και βελτιώνει την ποιότητα του δέρματος του προσώπου: αποτελέσματα in-vitro, ex-vivo και in-vivo (ανοιχτή ετικέτα ) σπουδές. J Clin Aesthet Dermatol. 2019;12:39-44.

12. Kano S, Todo Η, Sugie Κ, et αϊ. Αξιοποίηση ανακατασκευασμένων καλλιεργημένων μοντέλων ανθρώπινου δέρματος ως εναλλακτικό δέρμα για μελέτες διείσδυσης χημικών ενώσεων. Altern Anim Test Exp. 2010;15:61-70.

13. McDaniel DH, Hamzavi IH, Zeichner JA, et αϊ. Ολική άμυνα και επισκευή: μια νέα ιδέα για την ηλιακή προστασία και την αναζωογόνηση του δέρματος. J Drugs Dermatol. 2015;14:s3-s11.

14. Vitral GLN, Aguiar RAPL, de Souza IMF, Rego MAS, Guimarães RN, Reis ZSN. Το πάχος του δέρματος ως πιθανός δείκτης της ηλικίας κύησης κατά τη γέννηση παρά τα διαφορετικά προφίλ ανάπτυξης του εμβρύου: μια μελέτη σκοπιμότητας. PLoS One. 2018; 13: e0196542.

15. Clarys P, Clijsen R, Taeymans J, Barel AO. Μετρήσεις ενυδάτωσης της κεράτινης στιβάδας: σύγκριση μεταξύ της μεθόδου χωρητικότητας (ψηφιακή έκδοση του Corneometer CM 825) και της μεθόδου σύνθετης αντίστασης (Skicon-200EX). Skin Res Technol. 2012;18:316- 323.

16. Li X, Yuan C, Xing L, Humbert P. Τοπογραφική ποικιλομορφία της κοινής μικροχλωρίδας του δέρματος και η συσχέτισή της με τον τύπο του περιβάλλοντος του δέρματος: μια μελέτη παρατήρησης σε γυναίκες της Κίνας. Sci Rep. 2017; 7:18046.

17. Roques C, Téot L, Frasson N, Meaume S. PRIMOS: ένα οπτικό σύστημα που παράγει τρισδιάστατες μετρήσεις των επιφανειών του δέρματος. J Φροντίδα πληγών. 2003;12:362-364.

18. Matsunaga Υ, Fujiwara S, Mori Υ, et αϊ. Ανάπτυξη αυτοδιαλυόμενων μικροβελόνων που αποτελούνται από υαλουρονικό οξύ ως αντιρυτιδική θεραπεία. Περιοδικό IFSCC. 2012;15:73-78.

19. Borkow G, Elías AC. Ανύψωση και λάμψη του δέρματος του προσώπου μετά τον ύπνο σε μαξιλαροθήκες που περιέχουν οξείδιο του χαλκού. Καλλυντικά. 2016; 3:24.

20. Sito G, Manzoni V, Sommariva R. Vascular complications after Facial filler injection: a Library review and meta-analysis. J Clin Aesthet Dermatol. 2019;12:E65-E72.

21. Essendoubi M, Gobinet C, Reynaud R, Angiboust JF, Manfait M, Piot O. Διείσδυση ανθρώπινου δέρματος υαλουρονικού οξέος διαφορετικών μοριακών βαρών όπως ανιχνεύεται με φασματοσκοπία Raman. Skin Res Technol. 2016;22:55-62.

22. Tokudome Y, Komi T, Omata A, Sekita M. Μια νέα στρατηγική για την παθητική παροχή υαλουρονικού οξέος στο δέρμα υψηλού μοριακού βάρους νανοσωματιδίων που παρασκευάζεται με μέθοδο συμπλόκου πολυιόντων. Sci Rep. 2018; 8:2336.

23. Jiang D, Liang J, Noble PW. Το υαλουρονικό είναι ένας ρυθμιστής του ανοσοποιητικού σε ανθρώπινες ασθένειες. Physiol Rev. 2011;91:221-264.

24. Farwick Μ, Gauglitz G, Pavicic Τ, et αϊ. Το υαλουρονικό οξύ πενήντα kDa ρυθμίζει προς τα πάνω ορισμένα επιδερμικά γονίδια χωρίς να αλλάζει την έκφραση του TNF στην ανασυσταθείσα επιδερμίδα. Skin Pharmacol Physiol. 2011;24:210-217.

25. Takabe P, Kärnä R, Rauhala L, Tammi M, Tammi R, PasonenSeppänen S. Ο κατακερματισμός της υαλουρονικής επικάλυψης μελανοκυττάρων ενισχύει την επαγόμενη από την UVB σηματοδότηση του υποδοχέα TLR-4 και την έκφραση των προφλεγμονωδών μεσολαβητών IL6, ILXCL1, και CXCL10, μέσω ενεργοποίησης NF-kappaB. J Invest Dermatol. 2019;139:1993-2003.

【Για περισσότερες πληροφορίες: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】