Πολυσακχαρίτες Xinjiang Cistanche: ικανοί να καθαρίσουν αντιδραστικά είδη οξυγόνου και ελεύθερες ρίζες

περίληψη

Μελετήθηκε in vitro η αντιοξειδωτική δράση του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola. Λαμβάνοντας ασκορβικό οξύ ως έλεγχο, λαμβάνοντας την αντίδραση τύπου Fenton για την παραγωγή ριζών υδροξυλίου, την αντίδραση αυτοοξείδωσης της ντοπαμίνης για την παραγωγή ριζών ανιόντων υπεροξειδίου, την αντίδραση υποχλωριώδους νατρίου με υπεροξείδιο του υδρογόνου για την παραγωγή απλού οξυγόνου, ρίζες διφαινυλ πικρή υδραζίνη ως πειραματικό μοντέλο, οι επιδράσεις του C superoxide anion. ρίζες υδροξυλίου DPPH · ελεύθερες ρίζες (ρίζα πικρής υδραζίνης διφαινυλίου), η επίδραση σαρωτής του απλού οξυγόνου. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι οι πολυσακχαρίτες από το Cistanche deserticola είχαν προφανή αποτελέσματα σάρωσης στις παραπάνω ελεύθερες ρίζες και η επίδραση σάρωσης συσχετίστηκε θετικά με τη συγκέντρωση πολυσακχαριτών.

Λέξεις-κλειδιά :Cistanche deserticola; Πολυσακχαρίτης; Ελεύθερες ρίζες

1 . Εισαγωγή

Το σώμα παράγει συνεχώς διάφορες δραστικές ελεύθερες ρίζες οξυγόνου (ROS) στη διαδικασία του οξειδωτικού μεταβολισμού των δραστηριοτήτων της ζωής, οι οποίες είναι τα ενδιάμεσα προϊόντα της αντίδρασης οξείδωσης-μείωσης του αερόβιου μεταβολισμού.Η έρευνα έχει βρει ότι η περίσσεια ελεύθερων ριζών θα επιτεθεί σε μακρομόρια της ζωής και διάφορα οργανίδια, προκαλώντας διάφορες βλάβες σε μοριακό επίπεδο, επίπεδο κυττάρων, ιστών και οργάνων, επιταχύνοντας τη διαδικασία γήρανσης του σώματος και προκαλώντας ασθένειες όπως θρόμβωση, διαβήτης, αθηροσκλήρωση, όγκοι κ.. [1]. Λόγω της τοξικότητας των χημικά συντιθέμενων αντιοξειδωτικών στο ανθρώπινο σώμα, η αναζήτηση φυσικών αντιοξειδωτικών υψηλής απόδοσης και χαμηλής τοξικότητας που μπορούν να απομακρύνουν τις ελεύθερες ρίζες οξυγόνου έχει γίνει ένα καυτό ερευνητικό θέμα στους τομείς της ιατρικής, των τροφίμων, της χημικής μηχανικής και άλλων τομέων τα τελευταία χρόνια.

Cistanche deserticola (Y.C...)είναι ένα σπάνιο κινέζικο παραδοσιακό φάρμακο και είναι γνωστό ως "τζίνσενγκ της ερήμου" [2]. Cistanche deserticola maΟ πολυσακχαρίτης είναι ένα από τα κύρια βιοδραστικά συστατικά του Cistanche deserticola, αλλά δεν υπάρχει καμία αναφορά για το εάν ο πολυσακχαρίτης του Cistanche deserticola έχει ως αποτέλεσμα τον καθαρισμό των ελεύθερων ριζών. Σε αυτό το άρθρο, τα αποτελέσματα σάρωσης του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola στη ρίζα ανιόντων υπεροξειδίου, στη ρίζα υδροξυλίου, στην ελεύθερη ρίζα DPPH και στο μονό οξυγόνο προσδιορίστηκαν με φασματική ανάλυση για την αξιολόγηση της αντιοξειδωτικής του δράσης και την παροχή επιστημονικής βάσης για την πλήρη ανάπτυξη και χρήση αυτού του φυσικού πόρου.

Κινεζικό βότανο cistanche

2. Πειραματικό μέρος

2.1 Όργανα και αντιδραστήρια

UV-2401 Φασματοφωτόμετρο ορατό με υπεριώδη ακτινοβολία (Shimadzu, Ιαπωνία); LumatLB9507 υπερευαίσθητο φωτόμετρο σωλήνα (Γερμανία

BertholdTechnologies); RE-52CS περιστροφικός εξατμιστής (Shanghai Yarong Biochemical Instrument Factory); HW-SY ηλεκτρονικό θερμοστατικό λουτρό νερού (Jintan Xinhang Instrument Factory); PHS-3C μετρητής pH (Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd.); DZF-6020 φούρνος στεγνώματος κενού (Shanghai Yiheng Technology Co., Ltd.). Cistanche deserticola: αγοράστηκε από την Kuitun Pharmaceutical Corporation. Η λουμινόλη (Sigma, ΗΠΑ), η ντοπαμίνη (Κινεζικό Ινστιτούτο για τον Έλεγχο Φαρμακευτικών και Βιολογικών Προϊόντων), FeSO4, EDTA, βιταμίνη C, H2O2, NaClO, Na2CO3, NaHCO3, κ.λπ., είναι όλα εγχώρια αναλυτικά αντιδραστήρια. Το πειραματικό νερό είναι απεσταγμένο νερό ανταλλαγής ιόντων.

2.2 Πειραματική μέθοδος

2.2.1 Μέθοδος εκχύλισης πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola

Πάρτε 30 g σκόνης Cistanche deserticola και βάλτε το σε μια κωνική φιάλη των 500 mL. Βυθίστε το σε πετρελαϊκό αιθέρα (60-90 βαθμοί), αιθέρα και θερμό διάλυμα αιθανόλης 80% (30 μοίρες) για 6 ώρες, αντίστοιχα, και το υπόλειμμα εξατμίζεται για να στεγνώσει ο διαλύτης. Μουλιάζουμε το υπόλειμμα του φίλτρου σε νερό σε αναλογία 1:10 για 24 ώρες, το θερμαίνουμε στους 30 βαθμούς και το εκχυλίζουμε για 100 λεπτά. Μετά την εκχύλιση, φυγοκεντρήστε για να ληφθεί το υπερκείμενο. Αφού το υπερκείμενο συμπυκνωθεί υπό ελαττωμένη πίεση, κατακρημνίζεται με 95% αιθανόλη τριπλάσια του όγκου. Επιτρέπεται να παραμείνει για 24 ώρες στους 4 βαθμούς. Μετά τη φυγοκέντρηση, συλλέγεται και κατακρημνίζεται. Μετά την ξήρανση υπό κενό, μπορεί να ληφθεί ο ακατέργαστος πολυσακχαρίτης του Cistanche deserticola. Ζυγίστε 1,00 g ακατέργαστου πολυσακχαρίτη, διαλύστε τον με νερό και βάλτε τον σε ογκομετρική φιάλη 50 mL για αναμονή.

Τζίνσενγκ της ερήμου-Αντιοξειδωτικό

Κάντε κλικ εδώ για να δείτε τα προϊόντα σε σκόνη Cistanche

【Ζητήστε περισσότερα】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / WhatsApp: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2.2.2 Δοκιμή για την ικανότητα σάρωσης του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola σε ελεύθερες ρίζες O2

Η ικανότητα σάρωσης του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola σε O-2 · δοκιμάστηκε με την παραγωγή ελεύθερων ριζών υπεροξειδίου (O-2 ·) από αυτοοξείδωση ντοπαμίνης [3]. Προσθέστε 3,0 mL ρυθμιστικού διαλύματος ανθρακικού 0,1 mmol/LpH=10.12, 3,0 mL νερού και 0,5 mL διαλύματος δείγματος πολυσακχαρίτη διαφορετικών συγκεντρώσεων στον δοκιμαστικό σωλήνα ξήρανσης με κλίμακα με τη σειρά. Μετά από προθέρμανση σε υδατόλουτρο 30 μοιρών για 5 λεπτά, προσθέστε 1,0 mL 2,0 mmol/L ντοπαμίνης προθερμασμένης σε υδατόλουτρο 30 βαθμών, αμέσως ανακατέψτε και χρονομετρήστε, διατηρήστε την αντίδραση στους 30 βαθμούς για 5 λεπτά και σταματήστε αμέσως την αντίδραση με 2 σταγόνες 10mol/L HCl. Χρησιμοποιήστε το ρυθμιστικό διάλυμα ως αναφορά, μετρήστε την απορρόφηση (δείγμα Α) στα 221 nm, αντικαταστήστε το δείγμα (κενό Α) με 0,5 mL νερού στην τυφλή ομάδα και αντικαταστήστε το δείγμα με 0,5 mL ασκορβικού οξέος στην ομάδα ελέγχου, μετρήστε κάθε δείγμα τρεις φορές παράλληλα και λάβετε τη μέση τιμή. O-2 · ποσοστό κάθαρσης (%)=(Ένα κενό - Ένα δείγμα)/Α κενό × 100%

2.2.3 Δοκιμή για την ικανότητα σάρωσης του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola στην ελεύθερη ρίζα ΟΗ

Desert live cistanche-Αντιοξειδωτικό

Το σύστημα EDTA-Fe (Ⅱ) - μπλε του μεθυλενίου - H2O2 χρησιμοποιήθηκε για να ελεγχθεί η ικανότητα σάρωσης του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola σε ρίζα υδροξυλίου. Η αρχή είναι ότι το EDTA-Fe (Ⅱ) αντιδρά με το υπεροξείδιο του υδρογόνου για να παράγει · ΟΗ ελεύθερες ρίζες, οι οποίες μειώνουν τη χαρακτηριστική κορυφή απορρόφησης του διαλύματος μπλε του μεθυλενίου στα 660 nm.

Προσθέστε 1,0 mL διαλύματος LFeSO4 5 mmol/L, 1,2 mL διαλύματος LEDTA 5 mmol/L, 2,0 mL ρυθμιστικού διαλύματος NaH2PO4-Na2HPO4 (pH=7.4) 0,03mol/L και 1,3 mL 20mmol/L διαλύματος peroxide με σειρά δοκιμών υδρογόνου πώματα, ανακινήστε καλά, προσθέστε 0,7 mL διαλύματος κυανού του μεθυλενίου 0,2 mmol/L και στη συνέχεια προσθέστε 1,0 mL του προς δοκιμή διαλύματος και βιταμίνη C1,0 διαφορετικών συγκεντρώσεων αντίστοιχα, αραιώστε στα 10,00 mL με νερό, ανακατέψτε καλά, διατηρήστε στους 37 βαθμούς για 30 λεπτά και μετρήστε την τιμή απορρόφησης του διαλύματος 6 bla για κάθε ομάδα νερό. Κάθε δείγμα μετράται τρεις φορές παράλληλα και λαμβάνεται η μέση τιμή. · Ρυθμός σάρωσης ριζών OH δείγματος (%)=[(A2-A1)/(A0-A1) × Στον τύπο του 100%: A0 -- τιμή απορρόφησης άθικτου σωλήνα. Α1 - τιμή απορρόφησης κατεστραμμένου σωλήνα. Α2 -- Φωτομετρική τιμή μετά την προσθήκη δείγματος.

2.2.4 Δοκιμή σε DPPH · ικανότητα σάρωσης του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola

Πάρτε 0,1 mL διαλύματος πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola και προσθέστε το σε διάλυμα DPPH · 5,0 mL, ανακατέψτε το γρήγορα και αφήστε το για 10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου,

Προσδιορίστε τη μεταβολή της απορρόφησής του σε μήκος κύματος 517 nm [4]. Κάθε δείγμα μετράται τρεις φορές παράλληλα και λαμβάνεται η μέση τιμή. Ο ρυθμός κάθαρσης δείγματος της DPPH · (%)=1 - [(AB)/A0] × Στον τύπο 100%: A0 -- τιμή απορρόφησης της DPPH · (1,9 mLDPPH ·+0.1mL50% αιθανόλη) χωρίς δείγμα. Α - τιμή απορρόφησης του δείγματος μετά την αντίδραση με DPPH ·; B -- τιμή απορρόφησης τυφλού δείγματος (δείγμα 0,1 mL+1.9mL 50% αιθανόλη).

2.2.5 Δοκιμή μονήρους οξυγόνου 1O2 για σάρωση πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola

Το οξυγόνο μονής γραμμής (1O2) παράγεται από τη χημική αντίδραση του NaClO και του H2O2 στους 37 βαθμούς [5]. Το διάλυμα που χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό του 1O2 είναι 100 μ L2,8 mmol/L διάλυμα NaClO, 400 μL διαλύματος 5 mmol/NaOH, 300 μL διαλύματος 10 mmol/H2O2 και 50 μL διαλύματος 1 mmol/L/Λουμινόλης. Κατά τη διάρκεια της αντίδρασης, το διάλυμα αντίδρασης προστίθεται στο διάλυμα του δείγματος και το όργανο χημειοφωταύγειας καταγράφει αυτόματα τη διαδικασία αντίδρασης ταυτόχρονα. Πάρτε NaClO-H2O2-NaOH-Λουμινόλη ως τυφλό μάρτυρα. Ξεκινήστε την αντίδραση και προσθέστε το διάλυμα αντίδρασης στο σωλήνα δείγματος από τη φιάλη αποθήκευσης του οργάνου χημειοφωταύγειας σύμφωνα με την ποσότητα που ορίζεται από τη διαδικασία. Στη συνέχεια, η ένταση χημειοφωταύγειας του μίγματος αντίδρασης καταγράφεται στο χαρτί εγγραφής κάθε 5 δευτερόλεπτα, κάθε δείγμα μετράται τρεις φορές παράλληλα και λαμβάνεται η μέση τιμή.

Ο ρυθμός κάθαρσης υπολογίζεται σύμφωνα με τον ακόλουθο τύπο: ποσοστό κάθαρσης (%)=(έντονη φωτεινή ένδειξη ελέγχου - φωτεινή ένταση δείγματος)/ φωτεινή ένταση ελέγχου × 100%

3 Αποτελέσματα και συζήτηση

3.1 Καθαριστική επίδραση του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola στο O-2 ·

Οφέλη του cistanche tubulosa-Antioxidant

Η χημική ιδιότητα του O-2 · είναι ενεργή, η οποία μπορεί να κάνει τα λιπαρά οξέα στο βιοφίλμ να παράγουν υπεροξείδιο και στη συνέχεια να καταστρέψουν τα κύτταρα [6]. Σε αυτό το έγγραφο, η μέθοδος ντοπαμίνης χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό της ικανότητας σάρωσης του O2 ·. Η ικανότητα σάρωσης του Cistanche deserticola σε O2 · φαίνεται στο Σχήμα 1. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι ο πολυσακχαρίτης Cistanche deserticola θα μπορούσε να αναστείλει το O2 · που παράγεται από την αυτοοξείδωση της ντοπαμίνης και αυξήθηκε με την αύξηση της συγκέντρωσης εντός του εύρους συγκέντρωσης που μετρήθηκε (0-8mg/mL), αλλά η ικανότητα σάρωσης ήταν μικρότερη από αυτήν.

3.2 Καθαριστικό αποτέλεσμα του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola · OH

·Το OH είναι μια από τις πιο ενεργές ρίζες ελεύθερες από οξυγόνο στα είδη ενεργού οξυγόνου. Μπορεί να αντιδράσει με σχεδόν οποιοδήποτε βιολογικό μακρομόριο στα ζωντανά κύτταρα και μπορεί να οδηγήσει σε βιοχημικές διεργασίες όπως υπεροξείδωση λιπιδίων, πολυμερισμός πρωτεϊνών, αποπολυμερισμός, θραύση νουκλεϊκού οξέος κ.λπ. Η ικανότητα σάρωσης του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola σε · ΟΗ φαίνεται στο Σχήμα 2. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι ο πολυσακχαρίτης Cistanche deserticola είχε καλή επίδραση σάρωσης στο ·ΟΗ και αυξήθηκε με την αύξηση της συγκέντρωσης.

3.3 Η ικανότητα σάρωσης του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola σε DPPH ·

Η DPPH · (ρίζα πικρής διφαινυλικής υδραζίνης) είναι μια σταθερή ελεύθερη ρίζα, η οποία είναι μωβ σε οργανικούς διαλύτες και έχει ισχυρή απορρόφηση κοντά στα 517 nm. Μετά την προσθήκη αντιοξειδωτικών, ορισμένες ελεύθερες ρίζες απομακρύνονται, οι οποίες εξασθενούν την απορρόφηση, η οποία μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την αξιολόγηση της αντιοξειδωτικής δράσης αυτής της ουσίας [8]. Δείτε την Εικόνα 3 για την ικανότητα σάρωσης DPPH του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola. Τα πειραματικά αποτελέσματα έδειξαν ότι η ικανότητα σάρωσης του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola σε DPPH · συσχετίστηκε θετικά με τη συγκέντρωσή του και η ικανότητα σάρωσης ήταν μεγαλύτερη από αυτή του ασκορβικού οξέος.

3.4 Ικανότητα σάρωσης του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola σε 1O2

Το οξυγόνο μονής γραμμής είναι διεγερμένο μοριακό οξυγόνο με ενεργές χημικές ιδιότητες. Επειδή τα ασύζευκτα ηλεκτρόνια τείνουν να ζευγαρώνουν, οι ελεύθερες ρίζες εμφανίζουν πιο ενεργές χημικές ιδιότητες [9]. Η ικανότητα σάρωσης του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola σε 1O2 φαίνεται στο Σχήμα 4. Τα πειραματικά αποτελέσματα έδειξαν ότι η ικανότητα σάρωσης του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola ήταν χαμηλότερη από εκείνη του ασκορβικού οξέος στην περιοχή από 0-4,0 mg/mL, και η ικανότητα σάρωσης του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola ήταν υψηλότερη από την ικανότητα σάρωσης του πολυσακχαρίτη deserticola. ήταν μεγαλύτερη από 4,0 mg/mL.

 

4. Συμπέρασμα

Η αντιοξειδωτική δράση των πολυσακχαριτών Cistanche deserticola in vitro μελετήθηκε λεπτομερώς μέσω διαφορετικών συστημάτων αντιδραστικών ριζών χωρίς οξυγόνο.Από τα πειραματικά αποτελέσματα, μπορεί να φανεί ότι εντός του εύρους της πειραματικής συγκέντρωσης, το εκχύλισμα πολυσακχαρίτη του Cistanche deserticola έχει σαρωτικές επιδράσεις στο O2 ·, · OH, DPPH · και 1O2, και τα αποτελέσματα σάρωσης είναι διαφορετικά για διαφορετικά συστήματα.Τα αποτελέσματα έδειξαν ότιΟ πολυσακχαρίτης Cistanche deserticola είναι ένα αποτελεσματικό εξωγενές φυσικό αντιοξειδωτικό, το οποίο αξίζει περαιτέρω έρευνας, ανάπτυξης και ολοκληρωμένης χρήσης.

Cistanche 200 mg-Αντίοxidant

αναφορά

[1] Ling Guanting. Αντιοξειδωτικά τρόφιμα και υγεία [M]. Beijing: Chemical Industry Press, 2004.1-58.

[2] Gao Ming, Tian Ziyu, Cai Hongmei, et al. Εξαγωγή αλκαλίων και χημική ανάλυση πολυσακχαριτών από Cistanche deserticola [J]. Agricultural and Food Science and Technology, 2008,2 (3): 32-34.

[3] Shi Shuangqun, Song Xinfang. Η αυτοοξείδωση της ντοπαμίνης [J]. Journal of Hebei Normal University, 1997,21 (4): 387-389.

[4] Zhang Zeqing, Tian Yingjuan, Zhang Jing. Μελέτη για την αντιοξειδωτική δράση του πολυσακχαρίτη Fangfeng [J]. Κινέζικη Ιατρική, 2008,31 (2): 268-271.

[5] Li Haiping, Zhang Shuhai, Zhang Kunsheng. Μελέτη για την αντιοξειδωτική δράση της λεντινάνης [J]. Έρευνα και Ανάπτυξη Τροφίμων, 2008,29 (4): 56-60.

[6] Μο Τζιαν. Εισαγωγή στην Ιατρική Βιολογία Ελεύθερων Ριζών [Μ]. Πεκίνο: Εκδοτικός Οίκος People's Health, 1989.21-25.

[7]FrederickVL.FreeRadicals[J].ClinicalChemistry,1993,65(12):374-377.

[8]MatsudaM,NagahamaY,SatoTetal.DMYisaSpecificDMDdomainGeneRequiredforMaleDevelopmentintheMedakaFish[J].Nature,2002,30:559-563.

[9]KanofskyJR.SingletOxygenProductionbyLactoperoxidase[J].JournalofBiologicalChemistry,1983,258(10):5991-5993.