Το εμβόλιο WT1 Pulsed Human CD141+ δενδριτικών κυττάρων έχει υψηλό δυναμικό στην ανοσοθεραπεία στοχευμένη σε συμπαγή όγκο
Feb 20, 2024
Αφηρημένη:
Τα δενδριτικά κύτταρα (DC) είναι ισχυρά κύτταρα που παίζουν κρίσιμους ρόλους στην αντικαρκινική ανοσία και η χρήση τους στην ανοσοθεραπεία του καρκίνου ξεκλειδώνει κρυφές ικανότητες ως αποτελεσματικό θεραπευτικό. Για να μεγιστοποιήσουμε το πλήρες δυναμικό του DC, αναπτύξαμε ένα εμβόλιο DC που ονομάζεται CellgramDC-WT1 (CDW). Το CDW υποβλήθηκε σε παλμό με WT1, ένα αντιγόνο που εκφράζεται συνήθως σε συμπαγείς όγκους και προκλήθηκε με zoledronate για να βοηθήσει την ωρίμανση του DC. Αν και η προηγούμενη μελέτη μας επικεντρώθηκε στη χρήση του Rg3 ως επαγωγέα ωρίμανσης DC, τα προβλήματα με τον ποιοτικό έλεγχο και την πρόσβαση μας οδήγησαν να επιλέξουμε τη ζολεδρονάτη ως καλύτερη εναλλακτική λύση. Επιπλέον, το CDW εκκρίνει IL-12 και IFN-, οι οποίες προκάλεσαν τη διαφοροποίηση των αρχέγονων Τ κυττάρων σε ενεργά CD8+ Τ κύτταρα και προκάλεσαν απόκριση κυτταροτοξικών Τ λεμφοκυττάρων (CTL) έναντι καρκινικών κυττάρων με αντιγόνα WT1. Επιβεβαιώνοντας την ταυτότητα και τη λειτουργία του CDW, πιστεύουμε ότι το CDW είναι ένα βελτιωμένο εμβόλιο DC και έχει πολλά υποσχόμενες δυνατότητες στον τομέα της ανοσοθεραπείας του καρκίνου.
cistanche tubulosa-βελτίωση του ανοσοποιητικού συστήματος
Λέξεις-κλειδιά:
Εμβόλιο DC; CD141; δενδριτικά κύτταρα; zoledronate; Ενεργοποίηση Τ-κυττάρων; ανοσοθεραπεία καρκίνου? συμπαγής όγκος? αντιγόνα καρκίνου; Ο όγκος του Wilms1 (WT1); αντιγόνα που σχετίζονται με όγκους
1. Εισαγωγή
Ο καρκίνος είναι η κύρια αιτία θανάτου σε όλο τον κόσμο και ενώ οι παραδοσιακοί τρόποι θεραπείας περιλαμβάνουν χειρουργική επέμβαση, χημειοθεραπεία και ακτινοβολία, συχνά προκαλούν δυσμενείς παρενέργειες λόγω της αδυναμίας διαφοροποίησης μεταξύ καρκινικών και φυσιολογικών κυττάρων [1]. Ωστόσο, οι πρόσφατες εξελίξεις στον τομέα της ανοσοθεραπείας επέτρεψαν την ανάπτυξη εμβολίων κατά του καρκίνου, τα οποία στοχεύουν στην ενεργοποίηση του ανοσοποιητικού συστήματος του οργανισμού για να στοχεύουν ειδικά τα καρκινικά κύτταρα και κατά συνέπεια να ελαχιστοποιούν τις παρενέργειες [2]. Τα εμβόλια κατά του καρκίνου χρησιμοποιούν κυρίως αντιγόνα που σχετίζονται με όγκο ή αντιγόνα ειδικά για τον όγκο για να ενεργοποιήσουν τα ειδικά για το αντιγόνο λεμφοκύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος [3]. Τα ενεργοποιημένα λεμφοκύτταρα, κυρίως Τ κύτταρα, αναλαμβάνουν τελεστικές λειτουργίες όπως η κυτταροτοξικότητα και η παραγωγή κυτταροκινών για τον έλεγχο της εξέλιξης του καρκίνου [4]. Διαφορετικοί τύποι εμβολίων κατά του καρκίνου χρησιμοποιούν ένα συγκεκριμένο σύνολο ανοσοκυττάρων, όπως κύτταρα φυσικού φονέα (NK) [5] και δενδριτικά κύτταρα (DC) [6]. Από αυτά, τα DC είναι αντιγονοπαρουσιαστικά κύτταρα (APC) και παίζουν κρίσιμο ρόλο στην ενεργοποίηση της ανοσολογικής απόκρισης μέσω των Τ κυττάρων. Το κύριο χαρακτηριστικό του DC περιλαμβάνει την ικανότητα σύλληψης αντιγόνων και επεξεργασίας της πρωτεΐνης σε ένα πεπτίδιο που θα παρουσιαστεί στα Τ κύτταρα από τα κύρια μόρια του συμπλέγματος ιστοσυμβατότητας (MHC). Ωστόσο, το DC περιλαμβάνει έναν ετερογενή πληθυσμό με κάθε υποσύνολο που φέρει διαφορετικούς φαινότυπους και λειτουργίες [7].
φυτικό κιστανάκι που ενισχύει το ανοσοποιητικό σύστημα
Τα DCs χωρίζονται σε μεγάλο βαθμό σε κλασικά/συμβατικά DC (cDC), πλασματοκυτταροειδή DC (pDC) και DC προερχόμενα από μονοκύτταρα (mo-DC). Υπάρχουν δύο ευρείες ομάδες cDC: τύπου 1 DC (cDC1), που παρουσιάζει κυρίως αντιγόνα χρησιμοποιώντας MHC κατηγορίας Ι για να προκαλέσει απόκριση CTL από CD{4}} Τ κύτταρα (CTL) και τύπου 2 DC (cDC2), που χρησιμοποιεί MHC κατηγορίας II για την προώθηση μιας ανταπόκρισης από CD{7}} Τ κύτταρο (βοηθητικό Τ κύτταρο) [8]. Τα πλασμακυτταροειδή DC είναι ένα μοναδικό υποσύνολο DC που είναι εξειδικευμένο στην έκκριση ιντερφερόνης τύπου Ι (IFN) [9]. Το Mo-DC εμπλέκεται κυρίως στη φλεγμονή και προάγει την ανοσοαπόκριση TH17 [10] (Εικόνα 1Α). Επί του παρόντος, το mo-DC χρησιμοποιείται περισσότερο στον τομέα της έρευνας για την αντικαρκινική ανοσοθεραπεία DC [11-13]. Αν και το mo-DC είναι καλά ανεκτό και ασφαλές, η χαμηλή θεραπευτική αποτελεσματικότητα έχει εμποδίσει την ευρεία χρήση του. Ο περιορισμός του mo-DC αποδεικνύεται in vitro, όπου παρουσιάζουν περιορισμένη ικανότητα μετανάστευσης σε λεμφαδένες για να ενεργοποιήσουν ισχυρές αποκρίσεις κυτταροτοξικών Τ λεμφοκυττάρων (CTL) [14]. Για να ξεπεραστούν οι περιορισμοί των τρεχόντων τρόπων εμβολίου DC, επιλέχθηκε το cDC1 σε αυτή τη μελέτη, καθώς έχει την πιο ανώτερη ικανότητα παρουσίασης αντιγόνου και επιδεικνύει υψηλή απόκριση CTL. Αν και οι μελέτες για τα εμβόλια cDC1 αυξάνονται, το cDC1 δεν έχει ακόμη διερευνηθεί σε κλινική δοκιμή [15].
Λάβαμε μονοπύρηνα κύτταρα (MNC) από μυελό των οστών και στη συνέχεια απομονώσαμε κύτταρα CD34+ (αιματοποιητικά βλαστοκύτταρα) χρησιμοποιώντας την τεχνική MACS® Cell Separation. Τα κύτταρα πολλαπλασιάστηκαν χρησιμοποιώντας παράγοντα διέγερσης αποικίας κοκκιοκυττάρων-μακροφάγων (GM-CSF), παράγοντα βλαστοκυττάρων (SCF) και υποδοχέα κινάσης τυροσίνης τύπου Fms 3 (FLT3), ο οποίος επάγει άμεσα τη διαφοροποίηση σε DC [16] και τη διαφοροποίηση σε DC προκλήθηκε με GM-CSF και ιντερλευκίνη 4 (IL-4). Το ανώριμο DC αναγνωρίζει την πρωτεΐνη WT1 ως αντιγόνο και ωριμάζει χρησιμοποιώντας zoledronate. Το αντιγόνο WT1 (Wilms' tumor1) εκφράζεται σε μεγάλο βαθμό σε διάφορες κακοήθειες και σε μια ποικιλία συμπαγών όγκων. Ως εκ τούτου, το WT1 έχει χρησιμοποιηθεί ως ένας από τους στόχους της ανοσοθεραπείας για τον καρκίνο [17]. Το Zoledronate είναι ένα φάρμακο της κατηγορίας των διφωσφονικών, το οποίο χρησιμοποιείται ευρέως για τη θεραπεία τόσο της οστεοπόρωσης όσο και της σκελετικής μετάστασης. Επιπλέον, η ζολεδρονάτη αναστέλλει το ένζυμο συνθάση της διφωσφορικής φαρνεσυλίου, το οποίο παίζει ρόλο στην οδό του μεβαλονικού και στην επακόλουθη πρενυλίωση μικρών πρωτεϊνών GTPase, όπως το Ras [18]. Το ώριμο DC στη συνέχεια οριστικοποιείται ως εμβόλιο DC (Εικόνα 1Α). Γενικά, τα ώριμα DC εκκρίνουν διάφορες κυτοκίνες για να επάγουν την ενεργοποίηση των ανοσοκυττάρων [19] και να δεσμεύονται απευθείας στα Τ κύτταρα για την παρουσίαση αντιγόνου [20]. Τα Τ κύτταρα αντέδρασαν με το DC για να γίνουν βοηθητικά Τ κύτταρα (CD4+) για να βοηθήσουν την ανοσοαπόκριση ή τα κυτταροτοξικά Τ κύτταρα (CD8+) να ξεκινήσουν άμεσα αντικαρκινικά αποτελέσματα [21] (Εικόνα 1Β). Η σύνθεση του εμβολίου DC επιβεβαιώθηκε με κυτταρομετρία ροής και η λειτουργία του εμβολίου αναλύθηκε μέσω δοκιμής έκκρισης κυτοκίνης, αλλαγής Τ κυττάρων και κυτταροτοξικού Τ λεμφοκυττάρου (CTL).
cistanche tubulosa-βελτίωση του ανοσοποιητικού συστήματος
Κάντε κλικ εδώ για να δείτε τα προϊόντα Cistanche Enhance Immunity
【Ζητήστε περισσότερα】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
2. Αποτελέσματα
2.1. Προφίλ κυτταρομετρίας ροής που απεικονίζουν εμβόλιο DC με υψηλή έκφραση CD141+
Για να επιβεβαιωθεί η ταυτότητα του DC, αναλύθηκαν διάφοροι δείκτες, συμπεριλαμβανομένου του CD141 (ο πιο ευρέως χρησιμοποιούμενος δείκτης cDC1), του CD1c (ένας δείκτης του cDC2) και του CD303a (ένας δείκτης του pDC). Επιπλέον, αναλύθηκαν επίσης τα HLA-DR, CD80 και CD86, που είναι δείκτες ενεργοποίησης. Σε αντίθεση με το 70% του cDC2 που βρέθηκε στο ανθρώπινο DC αίματος, το DC που παρήχθη αποτελούνταν κυρίως από cDC1 (CD{141+ κύτταρα) και η διπλή θετική εμφάνιση του CD141+CD1c+ στο ενεργοποιημένο DC ήταν επιβεβαιώθηκε επίσης [22,23]. Επιπλέον, τα αποτελέσματα έδειξαν ένα σημαντικά υψηλό επίπεδο δραστικότητας για το DC (Εικόνα 2Α, Β). Οι αλλαγές μορφολογίας των κυττάρων παρακολουθήθηκαν επίσης με χρήση πλήρους αίματος (CBC) για διαφορετικά χρονικά σημεία στην παραγωγή DC. Ενώ τα περισσότερα από τα κύτταρα πολλαπλασιάζονται ως μονοκύτταρα στη φάση πολλαπλασιασμού (Πίνακας 1), η φάση διαφοροποίησης είχε ως αποτέλεσμα μια σταδιακή μείωση των μονοκυττάρων σε ένα επίπεδο εξαφάνισης προς το τέλος της διαδικασίας παραγωγής.
Σχήμα 2. Προσδιορισμός υποσυνόλων CDW. Φαινοτυπικά χαρακτηριστικά DC. Κατά τη διάρκεια της διαδικασίας διαφοροποίησης, τα DC παλμοποιήθηκαν με πρωτεΐνη WT1 και υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 1 μΜ zoledronate για 3 ώρες. Τα δεδομένα δείχνουν την έκφραση διεγερτικού δείκτη και υποτύπου DC αντιπροσωπευτικού ανθρώπινου DC (n=5) (A). Τα αποτελέσματα εμφανίζονται ως διαγράμματα με κουκκίδες (Β).
Πίνακας 1. Κατά τη διάρκεια της διαδικασίας πολλαπλασιασμού και διαφοροποίησης από κύτταρα CD34+ σε DC, οι φαινοτυπικές αλλαγές αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας CBC.
2.2. Το πλασματικό επίπεδο IL-12 και κυτοκινών IFN που προσδιορίζεται με ELISA
Από τις πολλές κυτοκίνες που εκκρίνονται από το DC, οι πιο αντιπροσωπευτικές είναι η IL-12 και η IFN- . Η IL-12 ρυθμίζει τη φλεγμονή συνδέοντας έμφυτες και προσαρμοστικές ανοσολογικές αποκρίσεις. Οι περισσότερες από τις επαγόμενες από την IL-12-επιδράσεις μεσολαβούνται από την έκκριση της IFN- και αποδείχθηκε ότι είναι κρίσιμες για την επαγωγή των κυττάρων Th1. Η IFN- παίζει βασικό ρόλο στην ενεργοποίηση της κυτταρικής ανοσίας και, στη συνέχεια, στη διέγερση της αντικαρκινικής ανοσοαπόκρισης [24-26]. Προκειμένου να επαληθευτεί η αποτελεσματικότητα των επιπέδων έκκρισης CDW, IL-12 και IFN- αναλύθηκαν μέσω αλληλεπίδρασης με Τ κύτταρα. Ενώ μόνο τα Τ κύτταρα και τα Τ κύτταρα που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με μη παλμικές συνθήκες DC οδήγησαν σε επίπεδα έκκρισης παρόμοια μεταξύ τους, όταν οι ομάδες συγκρίθηκαν με εκείνα της ομάδας Τ κυττάρων + CDW, η επαγωγή CDW στα Τ κύτταρα απέδωσε διπλάσια επίπεδα IL -12(Εικόνα 3Α) και αύξησε σημαντικά το επίπεδο IFN- (Εικόνα 3Β).
Σχήμα 3. Σύγκριση επαγωγής CDW σε Τ κύτταρα μέσω ανάλυσης κυτοκίνης. Η έκκριση IL-12 (A) και IFN- (B) μετρήθηκε μόνο σε Τ κύτταρα (ενεργοποιημένο IL-2 και Trans ACT), Τ κύτταρα + μη παλμικό DC και Τ κύτταρα + CDW συνκαλλιέργεια υπερκείμενο με χρήση ανάλυσης ELISA (n=3). Διεξήχθη ELISA χρησιμοποιώντας το υπερκείμενο κατά τη στιγμή της ολοκλήρωσης. Η ανάλυση πραγματοποιήθηκε μέσω SigmaPlot. *** p < 0.001.
2.3. Επίδραση Zoledronate στη Διαφοροποίηση και Ωρίμανση του cDC1 σε CDW
Στην προηγούμενη μελέτη, το Rg3 [27], ένα ginsenoside που βρέθηκε στο Panax ginseng, χρησιμοποιήθηκε για να προκαλέσει την ωρίμανση του DC. Ωστόσο, το τελικό προϊόν αποτελούνταν από ένα στρώμα ακαθαρσιών, που προκαλούσε δυσκολίες στον ποιοτικό έλεγχο. Το Zoledronate χρησιμοποιήθηκε ως υποκατάστατο του Rg3 για να ξεπεραστεί αυτό το πρόβλημα και αναλύθηκε η επίδρασή του στην επαγωγή της ωρίμανσης DC. Η πιο σημαντική διαφορά μεταξύ των επιδράσεων των δύο ουσιών είναι η ικανότητα της ζολεδρονάτης να παράγει μια εξαιρετικά υψηλή έκφραση του δείκτη επιφάνειας cDC1 (CD141+ κυττάρου) (Εικόνα 4Α). Έτσι, καθώς το cDC1 είναι γνωστό ότι είναι ο ανώτερος υποτύπος DC στην παρουσίαση αντιγόνου, η ζολεδρονάτη επιλέχθηκε για την επαγωγή της ωρίμανσης DC [18]. Αξιολογήθηκε επίσης ο βέλτιστος χρόνος θεραπείας της ζολεδρονάτης για την πρόκληση ωρίμανσης DC. Παρόλο που η 24ωρη θεραπεία απέδωσε επαρκή αναλογία CD141+, η αναλογία CD141+ κυττάρων στο αποτέλεσμα της θεραπείας 3 ωρών ήταν μεγαλύτερη κατά περίπου 20% και η CD86 (συν- διεγερτικός δείκτης) η αναλογία στη θεραπεία 3 ωρών ήταν επίσης μεγαλύτερη κατά 30%. Επιπλέον, λαμβάνοντας υπόψη τον μηχανισμό δράσης της ζολεδρονάτης, ένας μικρότερος χρόνος θεραπείας 3 ωρών σε σύγκριση με 24 ώρες κρίθηκε πιο αποτελεσματικός για την παραγωγή υψηλότερης ποιότητας DC (Πίνακας 2).
Εικόνα 4. Επίδραση της ζολεδρονάτης στη διαφοροποίηση και την ωρίμανση του cDC1 στην παραγωγή εμβολίου DC. Επιδράσεις της ζολεδρονάτης στο εμβόλιο DC. Στη διαδικασία παραγωγής εμβολίου DC, η θεραπεία 3 ωρών με zoledronate προκαλεί διαφοροποίηση και ωρίμανση του DC σε cDC1 και αποδίδει υψηλότερο επίπεδο δείκτη CD141. Οι δείκτες φαινοτύπου αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής για να συγκριθεί το Rg3 (n=4) και η ζολεδρονάτη (n=5), τα οποία χρησιμοποιήθηκαν για την επαγωγή της ωρίμανσης DC. *** p < 0.001.
Πίνακας 2. Επίδραση των χρόνων θεραπείας με ζολεδρονάτη (3 ώρες και 24 ώρες) σε δείκτες επιφάνειας.
2.4. Αποκρίσεις Τ-κυττάρων ειδικών για το αντιγόνο WT1 που προκαλούνται από εμβολιασμό CDW
Εικόνα 5. Το CDW αυξάνει τα CD8+ Τ κύτταρα για να προωθήσει την κυτταροτοξικότητα έναντι των καρκινικών κυττάρων. Επίδραση CDW στην απόκριση Τ κυττάρων που αξιολογήθηκε μέσω CTL. Το IL-2 και το Trans-Act είναι διεγέρτες Τ κυττάρων και χρησιμοποιήθηκαν για τη διέγερση Τ κυττάρων. Τα ενεργοποιημένα Τ κύτταρα συγκαλλιεργήθηκαν με DC για την πρώτη επαγωγή, η οποία διαρκεί επτά ημέρες και τη δεύτερη επαγωγή που εκτείνεται σε 10 ημέρες. Οι αλλαγές στον υποτύπο των Τ κυττάρων αναλύθηκαν μέσω κυτταρομετρίας ροής (Α). Τα Τ κύτταρα που καλλιεργήθηκαν για 10–14 ημέρες συγκαλλιεργήθηκαν με καρκινικά κύτταρα που εκφράζουν το WT1 σύμφωνα με κατάλληλες αναλογίες σε ένα τρυβλίο φρεατίου 96-. Μετά την -72 ώρα, το ποσοστό επιβίωσης των καρκινικών κυττάρων αναλύθηκε χρησιμοποιώντας CCK8 (B–D). Τ κύτταρα που επάγονται από την ομάδα CDW (Β). Ομάδα μόνο κυττάρων Τ (ενεργοποιημένη IL-2 και Trans ACT) (C). Τ κύτταρα που προκαλούνται από μη παλμική ομάδα DC (D). * p < 0,05, *** p < 0,001.
2.5. Επιβεβαίωση της ασφάλειας του εμβολίου CellgramDC
Και στις δύο ομάδες χορήγησης (3,4 × 104 κύτταρα/ζώο ή 1,7 × 105 κύτταρα/ζώο), δεν παρατηρήθηκαν ανωμαλίες όσον αφορά τον θάνατο ή τα γενικά συμπτώματα ως αποτέλεσμα της χορηγούμενης ουσίας.
Κατά τη διάρκεια της περιόδου παρατήρησης, δεν παρατηρήθηκαν τοξικολογικά σημαντικές αλλαγές στις ομάδες χορήγησης (3,4 × 104 κύτταρα/ζώο ή 1,7 × 105 κύτταρα/ζώο) ως αποτέλεσμα της χορηγούμενης ουσίας. Οι παρατηρήσεις περιελάμβαναν σωματικό βάρος (Εικόνα 6Α), ανάλυση ούρων (Εικόνα 6Β), πρόσληψη τροφής, οφθαλμολογική εξέταση, αιματολογική εξέταση, βιοχημική εξέταση αίματος, βάρος οργάνου, αυτοψία και τεστ τοπικής ανοχής (Συμπλήρωμα 1, Πίνακες S1–S9). Διάφορες δοκιμές επιβεβαιώθηκαν με σύγκριση DC που προέρχεται από στέλεχος (CellgramDC) και DC που προέρχεται από μονοκύτταρα (mo-DC). Η επιβίωση και το μέγεθος του όγκου των ποντικών δοκιμάστηκαν επίσης. Το μέγεθος του όγκου στην ομάδα stem-DC μειώθηκε περισσότερο από 50% σε σύγκριση με αυτό της ομάδας mo-DC και το ποσοστό επιβίωσης αυξήθηκε επίσης, επιβεβαιώνοντας μια ισχυρή αντικαρκινική δράση (Συμπλήρωμα 2).
Εικόνα 6. Μελέτη τοξικότητας υποδόριας δόσης του CellgramDC σε ποντικούς C57BL/6. Για να δοκιμαστεί η ασφάλεια και η τοξική απόκριση του CellgramDC, θηλυκά και αρσενικά ποντίκια του στελέχους C57BL/6 ενέθηκαν υποδόρια με CellgramDC για συνολικά έξι εβδομάδες (μία ένεση την εβδομάδα). Η ασφάλεια του Cell gramDC δοκιμάστηκε με υποδόρια ένεση σε θηλυκά και αρσενικά ποντίκια για συνολικά έξι εβδομάδες (μία ένεση την εβδομάδα). Οι ομάδες χορήγησης αποτελούνταν από δύο ομάδες: 10 ποντίκια στους οποίους έγινε ένεση 3,4 χ 104 κύτταρα/ζώο και 15 ποντικοί στους οποίους έγινε ένεση με 1,7 χ 105 κύτταρα/ζώο. Μια ομάδα αρνητικού ελέγχου αποτελούνταν από 15 ποντίκια και εγχύθηκε ενδοφλεβίως με ένα διάλυμα αποτελούμενο από έκδοχο, διάλυμα πλάσματος-Α/λευκωματίνη ανθρώπινου ορού (HSA) 90% + DMSO 10%, και φυσιολογικό ορό για έξι εβδομάδες (μία ένεση την εβδομάδα). Προκειμένου να δοκιμαστεί για αναστρέψιμη τοξική απόκριση, σε πέντε ποντίκια από κάθε ομάδα σύγκρισης, ομάδα αρνητικού ελέγχου και 1,7 × 105 κύτταρα/ζώο ομάδα χορήγησης δόθηκαν δύο εβδομάδες από την περίοδο ανάκτησης. Κατά την περίοδο ανάρρωσης, παρατηρήθηκαν έλεγχος βάρους (Α), ανάλυση ούρων (Β), γενικά συμπτώματα, μέτρηση πρόσληψης τροφής και οφθαλμολογική εξέταση. Μετά την περίοδο παρατήρησης, πραγματοποιήθηκαν αιματολογικές εξετάσεις, βιοχημικές εξετάσεις αίματος και μετρήσεις βάρους οργάνων, καθώς και οπτικές και ιστοπαθολογικές εξετάσεις κατά τη νεκροψία.
Επιβεβαιώσαμε τη σταθερότητα και την αποτελεσματικότητα του CellgramDC. Το CDW που υποβάλλεται σε παλμό με WT1 και υποβάλλεται σε θεραπεία με zoledronate θα ελεγχθεί επίσης για τοξικότητα και αποτελεσματικότητα και αναμένονται βελτιωμένα αποτελέσματα.
3. Συζήτηση
Στο εμβόλιο CDW που παρασκευάστηκε, το cDC1 ήταν το υψηλότερο σε αναλογία και έδειξε υψηλό επίπεδο δραστηριότητας. Τα cDC1 είναι κύτταρα με την ανώτερη ικανότητα παρουσίασης αντιγόνου και είναι υπεύθυνα για την κύρια λειτουργία του DC. Λαμβάνοντας υπόψη πώς το cDC1 αποτελεί ένα σπάνιο υποσύνολο DC [~0.03% του PBMC] [28], η κυριαρχία του πληθυσμού CD141+ στο CDW είναι ένα σαφές πλεονέκτημα στην αύξηση της αποτελεσματικότητας του εμβόλιο. Επιπλέον, το cDC1 στο CDW εκκρίνει κυτοκίνες (IL-12 και IFN-) σε υψηλό επίπεδο και ήταν ικανό να επάγει τη διαφοροποίηση των παρελθοντικών Τ κυττάρων σε ενεργά CD{10}} Τ κύτταρα. Στην προηγούμενη μελέτη μας, το Rg3 χρησιμοποιήθηκε ως παράγοντας ωρίμανσης, αλλά δεδομένης της δυσκολίας απόκτησης προμήθειας και ποιοτικού ελέγχου του τελικού προϊόντος, η zoledronate χρησιμοποιήθηκε ως υποκατάστατο για να ξεπεραστούν αυτές οι προκλήσεις. Το DC που επάγεται από τη ζολεδρονάτη μελετήθηκε για να αναλυθεί ο ρόλος του ως επαγωγέα της ενεργοποίησης των κυττάρων V 9 δ Τ [29]. Το Zoledronate είναι μια κατηγορία διφωσφονικών και τα διφωσφονικά επάγουν τη δραστηριότητα των δ Τ κυττάρων να παράγουν γρήγορα και άφθονα προφλεγμονώδεις κυτοκίνες [30], λαμβάνοντας αυτό υπόψη, σχεδιάσαμε το πείραμά μας για να ελέγξουμε τα αποτελέσματα της βραχυπρόθεσμης θεραπείας. Στη μελέτη μας, η ζολεδρονάτη (σε σύγκριση με το Rg3) προκάλεσε την ενεργοποίηση των CD8+ Τ κυττάρων σε CDW και επίσης αύξησε το επίπεδο cDC1. Η πρώτη κλινική δοκιμή διεξήχθη για DC που προκαλείται από Rg3 (NCT 046158-45) από την προηγούμενη μελέτη μας, αλλά τα αποτελέσματα δεν έχουν αναφερθεί. Ωστόσο, αναμένουμε βελτιωμένα αποτελέσματα σε μελλοντικές κλινικές δοκιμές με χρήση DC που προκαλείται από τη ζολεδρονάτη δεδομένων των τρεχόντων ευρημάτων.
φυτικό κιστανάκι που ενισχύει το ανοσοποιητικό σύστημα
Πρόσφατα, έχουν γίνει πολλές μελέτες σχετικά με την ανοσοθεραπεία κατά του καρκίνου και οι πιο ερευνητικές θεραπείες είναι οι CAR-T [31,32] και CAR-NK [33,34]. Αυτές οι θεραπείες έχουν επιβεβαιώσει την αποτελεσματικότητά τους και αναμένονται ιδιαίτερα για τη θεραπεία του καρκίνου. Ωστόσο, το CAR-T περιορίζεται στη θεραπεία του καρκίνου του αίματος, ο οποίος περιλαμβάνει ένα πολύ μικρό ποσοστό όλων των τύπων καρκίνου [35]. Επιπλέον, οι ασθενείς μπορεί να υποφέρουν από παρενέργειες της θεραπείας, όπως το σύνδρομο απελευθέρωσης κυτοκίνης (CRS) [36]. Προκειμένου να ξεπεραστούν αυτές οι ελλείψεις, ερευνάται η ανοσοθεραπεία με τη χρήση κυττάρων ΝΚ. Τα κύτταρα ΝΚ είναι εξαιρετικά ισχυρά λεμφοκύτταρα και στοχεύουν τον καρκίνο μέσω πολλαπλών ευρέως εκφραζόμενων συνδετών ενεργοποίησης. Ως αποτέλεσμα, τα κύτταρα ΝΚ μπορεί να αντιμετωπίσουν τους περιορισμούς της θεραπείας με αυτόλογα κύτταρα CAR T. Ωστόσο, υπάρχουν πολλά πιθανά μειονεκτήματα στη χρήση των κυττάρων ΝΚ, όπως η δυσκολία στην κυτταρική καλλιέργεια, η αμεσότητα στη μέγιστη δραστηριότητα της κυτταρικής κινητικής και η μικρότερη εγγενής μακροζωία καθώς και ο περιορισμένος φαινότυπος μνήμης στη διάρκεια ζωής και στην απόκριση [34,37 ,38]. Άλλη έρευνα περιλαμβάνει συνδυαστικές θεραπείες που χρησιμοποιούν DC ή Τ κύτταρα και αναστολείς του ανοσοποιητικού σημείου ελέγχου όπως αντι-PD1 (προγραμματισμένη πρωτεΐνη κυτταρικού θανάτου1) [39] ή αντι-PD-L1 (προγραμματισμένος συνδέτης θανάτου1) [40]. Η συγχορήγηση αυτών των φαρμάκων επιτρέπει τη στόχευση του ανοσοκατασταλτικού μικροπεριβάλλοντος του όγκου και βρίσκεται σε εξέλιξη περαιτέρω έρευνα για την αύξηση της αποτελεσματικότητας αυτών των θεραπειών.
Οφέλη από το σωληνίσκο cistanche- ενίσχυση του ανοσοποιητικού συστήματος
Η έρευνα για την ανάπτυξη εμβολίου DC για ανοσοθεραπεία αυξάνεται διαρκώς και πολλές προόδους γίνονται σε αυτόν τον τομέα. Το DC παίζει κεντρικό και κρίσιμο ρόλο στο προηγμένο ανοσοποιητικό σύστημα και το εμβόλιο DC μπορεί να προσφέρει ένα πλεονέκτημα σε σύγκριση με άλλους τρόπους ανοσοθεραπείας για τον καρκίνο. Επειδή το DC δεν σκοτώνει άμεσα τα καρκινικά κύτταρα, τα φυσιολογικά κύτταρα δεν επηρεάζονται, εξαλείφοντας τις ανεπιθύμητες παρενέργειες. Επιπλέον, με παλμό DC με WT1, ένα αντιγόνο που εκφράζεται συνήθως σε πολλούς συμπαγείς όγκους [17], το εμβόλιο DC μπορεί να στοχεύσει μοντέλα συμπαγών όγκων. Πριν αποφασίσουμε για το αντιγόνο πρωτεΐνης WT1, πειραματιστήκαμε με διάφορους τύπους αντιγόνων. Χρησιμοποιώντας προϊόντα εγγυημένης ποιότητας, καθώς και διάφορα αντιγόνα, όπως ένα πεπτίδιο, ένα δεσμευτικό ή ένα μείγμα pop, το αντιγόνο με τη μεγαλύτερη επίδραση ήταν όταν χρησιμοποιήθηκε ως πρωτεΐνη. Κατά συνέπεια, χρησιμοποιήσαμε την πρωτεΐνη WT1 για παλμό αντιγόνου. Η πιο ευρέως μελετημένη προσέγγιση στη θεραπεία DC χρησιμοποιεί mo-DC παλμικό με WT1 σε συνδυασμό με χημειοθεραπεία [12]. Η ασφάλεια και η ανοσογονικότητα του mo-DC έχει επιβεβαιωθεί μέσω κλινικών δοκιμών [13]. Ενώ άλλες έρευνες για το εμβόλιο DC αναπτύσσουν τα εμβόλιά τους χρησιμοποιώντας DC που προέρχεται από μονοκύτταρα από αίμα, προβλέψαμε ότι το DC που προέρχεται από βλαστοκύτταρα θα έχει αυξημένο δυναμικό. Επιπλέον, είναι γνωστό ότι το cDC έχει μεγαλύτερη ισχύ από το mo-DC, ωθώντας μας προς αυτή την έρευνα. Επομένως, το CDW μπορεί να είναι καλύτερη εναλλακτική του mo-DC, καθώς το κύριο συστατικό του είναι το cDC1, ένας υποτύπος DC με την πιο αποτελεσματική ικανότητα διασταυρούμενης παρουσίασης. Αν και η κυτταροτοξική δραστηριότητα ήταν παρόμοια στα Τ κύτταρα+μη παλμική ομάδα DC και στην ομάδα CDW, υποθέτουμε ότι αυτό συμβαίνει επειδή το μη παλμικό DC είναι επίσης ένας τύπος κυττάρου cDC1. Ανεξάρτητα από αυτό, το CDW μπορεί να προκαλέσει αποτελεσματικά μια ισχυρή αντικαρκινική ανοσοαπόκριση αυξάνοντας τον πληθυσμό του cDC1. Μέσω της προκλινικής μελέτης, δοκιμάσαμε την τοξικότητα επαναλαμβανόμενων δόσεων του εμβολίου DC. Η διαδικασία ανάπτυξης και παραγωγής του CDW έχει επαληθευτεί και ελπίζουμε να πραγματοποιήσουμε περαιτέρω μελέτες για να ελέγξουμε τις βελτιωμένες επιδράσεις του CDW. Ενώ η αποτελεσματικότητα επιβεβαιώθηκε in vitro, πραγματοποιήθηκε μελέτη τοξικότητας δόσης για την επικύρωση της αποτελεσματικότητας in vivo. Μόλις αναφερθούν τα αποτελέσματα των κλινικών δοκιμών που χρησιμοποιούν CDW, σκοπεύουμε να καθοδηγήσουμε την έρευνά μας προς την κατεύθυνση που θα βελτιώσει την τρέχουσα έρευνα.
βιβλιογραφικές αναφορές
1. Padma, VV Μια επισκόπηση της στοχευμένης θεραπείας του καρκίνου. BioMedicine 2015, 5, 19. [CrossRef] [PubMed]
2. Schirrmacher, V. Τα εμβόλια κατά του καρκίνου και οι ογκολυτικοί ιοί έχουν πολύ χαμηλότερες παρενέργειες σε ασθενείς με καρκίνο από άλλες συστηματικές θεραπείες: Συγκριτική ανάλυση. Biomedicines 2020, 8, 61. [CrossRef] [PubMed]
3. Smith, CC; Selitsky, SR; Chai, S.; Armistead, PM; Vincent, BG; Serody, JS Εναλλακτικά αντιγόνα ειδικά για τον όγκο. Nat. Rev. Cancer 2019, 19, 465–478. [CrossRef] [PubMed]
4. Lu, Η.; Zhao, Χ.; Li, Ζ.; Hu, Υ.; Wang, H. Από τα κύτταρα CAR-T στα κύτταρα CAR-NK: Μια αναπτυσσόμενη μέθοδος ανοσοθεραπείας για αιματολογικές κακοήθειες. Εμπρός. Oncol. 2021, 11, 720501. [CrossRef]
5. Chu, J.; Gao, F.; Yan, Μ.; Zhao, S.; Yan, Ζ.; Shi, Β.; Liu, Y. Φυσικά κύτταρα φονείς: Μια πολλά υποσχόμενη ανοσοθεραπεία για τον καρκίνο. J. Transl. Med. 2022, 20, 240. [CrossRef] [PubMed]
6. Sabado, RL; Balan, S.; Bhardwaj, Ν. Ανοσοθεραπεία βασισμένη σε δενδριτικά κύτταρα. Cell Res. 2017, 27, 74–95. [CrossRef] [PubMed]
7. Patente, TA; Pinho, βουλευτής; Oliveira, AA; Evangelista, GCM; Bergami-Santos, PC; Barbuto, JAM Ανθρώπινα δενδριτικά κύτταρα: Η ετερογένεια και η δυνατότητα κλινικής εφαρμογής τους στην ανοσοθεραπεία του καρκίνου. Εμπρός. Immunol. 2019, 9, 3176. [CrossRef]
8. Collin, Μ.; Bigley, V. Υποσύνολα ανθρώπινων δενδριτικών κυττάρων: Μια ενημέρωση. Immunology 2018, 154, 3–20. [CrossRef]
9. Fitzgerald-Bocarsly, P.; Dai, J.; Singh, S. Πλασμακυτταροειδή δενδριτικά κύτταρα και IFN τύπου Ι: 50 χρόνια συγκλίνουσας ιστορίας. Cytokine Growth Factor Rev. 2008, 19, 3–19. [CrossRef]
10. Segura, Ε.; Touzot, Μ.; Bohineust, Α.; Cappuccio, Α.; Chiocchia, G.; Hosmalin, Α.; Dalod, Μ.; Σουμελής, Β.; Amigorena, S. Τα ανθρώπινα φλεγμονώδη δενδριτικά κύτταρα επάγουν τη διαφοροποίηση των κυττάρων Th17. Immunity 2013, 38, 336–348. [CrossRef]
11. Geskin, LJ; Damiano, JJ; Patrone, CC; Butterfield, L.; Kirkwood, JM; Falo, LD Τρεις μέθοδοι φόρτωσης αντιγόνου σε εμβόλια δενδριτικών κυττάρων για μεταστατικό μελάνωμα. Melanoma Res. 2018, 28, 211. [CrossRef] [PubMed]
12. Guo, Ζ.; Yuan, Υ.; Chen, C.; Lin, J.; Ma, Q.; Liu, G.; Gao, Υ.; Huang, Υ.; Chen, L.; Chen, L.-Z.; et al. Ανθεκτική πλήρης ανταπόκριση σε εμβόλιο δενδριτικών κυττάρων φορτωμένο με νεοαντιγόνο μετά από θεραπεία αντι-PD-1 στον μεταστατικό γαστρικό καρκίνο. Npj Precis. Oncol. 2022, 6, 34. [CrossRef] [PubMed]
13. Bol, KF; Schreibelt, G.; Rabold, Κ.; Wculek, SK; Schwarze, JK; Dzionek, Α.; Teijeira, Α.; Kandalaft, LE; Romero, Ρ.; Κούκος, Γ.; et al. Η κλινική εφαρμογή της ανοσοθεραπείας του καρκίνου που βασίζεται σε φυσικά κυκλοφορούντα δενδριτικά κύτταρα. J. Immunother. Cancer 2019, 7, 109. [CrossRef] [PubMed]
14. Koya, Τ.; Ημερομηνία, Ι.; Kawaguchi, Η.; Watanabe, Α.; Sakamoto, Τ.; Togi, Μ.; Kato, JT; Yoshida, Κ.; Kojima, S.; Yanagisawa, R.; et al. Δενδριτικά κύτταρα προ-παλμοποιήθηκαν με Wilms' Tumor 1 σε βελτιστοποιημένη καλλιέργεια για εμβολιασμό κατά του καρκίνου. Pharmaceutics 2020, 12, 305. [CrossRef] [PubMed]
15. Zhou, Υ.; Slone, Ν.; Χρυσικός, Τ.Τ. Kyrysyuk, Ο.; Babcock, RL; Medik, YB; Li, HS; Kleinerman, ES; Watowich, SS Εμβόλιο αποτελεσματικότητα κατά του πρωτοπαθούς και μεταστατικού καρκίνου με συμβατικά δενδριτικά κύτταρα CD103+ που δημιουργούνται in vitro. J. Immunother. Cancer 2020, 8, e000474. [CrossRef]
16. Cueto, F.; Sancho, D. Ο άξονας Flt3L/Flt3 στη βιολογία των δενδριτικών κυττάρων και στην ανοσοθεραπεία του καρκίνου. Cancers 2021, 13, 1525. [CrossRef]
17. Yanagisawa, R.; Koizumi, Τ.; Koya, Τ.; Sano, Κ.; Koido, S.; Nagai, Κ.; Kobayashi, Μ.; Okamoto, Μ.; Sugiyama, Η.; Shimodaira, S. WT1-παλμικό εμβόλιο δενδριτικών κυττάρων σε συνδυασμό με χημειοθεραπεία για εκτομή καρκίνου του παγκρέατος σε μια μελέτη φάσης Ι. Αντικαρκινικό. Res. 2018, 38, 2217–2225. 18. Orsini, G.; Failli, Α.; Legitimo, Α.; Adinolfi, Β.; Romanini, Α.; Consolini, R. Zoledronic acid ρυθμίζει την ωρίμανση των δενδριτικών κυττάρων που προέρχονται από ανθρώπινα μονοκύτταρα. Exp. Biol. Med. 2011, 236, 1420–1426. [CrossRef] [PubMed]
19. Schmidt, SV; Nino-Castro, AC; Schultze, JL Ρυθμιστικά δενδριτικά κύτταρα: Υπάρχει κάτι περισσότερο από απλή ενεργοποίηση του ανοσοποιητικού. Εμπρός. Immunol. 2012, 3, 274. [CrossRef]
20. Tai, Υ.; Wang, Q.; Korner, Η.; Zhang, L.; Wei, W. Μοριακοί μηχανισμοί ενεργοποίησης Τ κυττάρων από δενδριτικά κύτταρα σε αυτοάνοσες ασθένειες. Εμπρός. Pharmacol. 2018, 9, 642. [CrossRef]
21. Alfei, F.; Ho, P.-C.; Lo, W.-L. Η λήψη DCision σε όγκους διέπει την ανοσία των Τ κυττάρων κατά του όγκου. Oncogene 2021, 40, 5253-5261. [CrossRef] [PubMed]
22. Granot, Τ.; Senda, Τ.; Ξυλουργός, DJ; Matsuoka, Ν.; Weiner, J.; Gordon, CL; Miron, Μ.; Kumar, BV; Griesemer, Α.; Ho, S.-H.; et al. Τα δενδριτικά κύτταρα εμφανίζουν υποσύνολο και δυναμική ωρίμανσης ειδική για τον ιστό κατά τη διάρκεια της ανθρώπινης ζωής. Immunity 2017, 46, 504–515. [CrossRef] [PubMed]
23. Breton, G.; Lee, J.; Zhou, YJ; Schreiber, JJ; Keler, Τ.; Puhr, S.; Anandasabapathy, Ν.; Schlesinger, S.; Caskey, Μ.; Liu, Κ.; et al. Κυκλοφορούν πρόδρομοι ανθρώπινων CD1c+ και CD141+ δενδριτικών κυττάρων. J. Εχρ. Med. 2015, 212, 401–413. [CrossRef] [PubMed]
24. Tugues, S.; Burkhard, SH; Ω, εγώ. Vrohlings, Μ.; Nussbaum, Κ.; vom Berg, J.; Kulig, Ρ.; Becher, B. Νέες πληροφορίες για την καταστολή όγκων με τη μεσολάβηση της IL-12-. Διαφέρει ο κυτταρικός θάνατος. 2015, 22, 237–246. [CrossRef]
25. Ashour, D.; Αραμπατζή, Π.; Pavlovic, V.; Förstner, KU; Kaisho, Τ.; Beilhack, Α.; Erhard, F.; Lutz, MB IL-12 από ενδογενές cDC1 και όχι DC εμβολίου, απαιτείται για την επαγωγή Th1. JCI Insight. 2020, 5, e135143. [CrossRef]
26. Jorgovanovic, D.; Τραγούδι, Μ.; Wang, L.; Zhang, Y. Roles of IFN- in tumor progression and regression: A review. Biomark. Res. 2020, 8, 49. [CrossRef]
27. Son, K.-j.; Choi, KR; Lee, SJ; Lee, H. Ανοσογόνος κυτταρικός θάνατος που προκαλείται από ginsenoside Rg3: Σημασία στην ανοσοθεραπεία κατά του όγκου που βασίζεται σε δενδριτικά κύτταρα. Immune Netw. 2016, 16, 75–84. [CrossRef]
28. Jongbloed, SL; Kassianos, AJ; McDonald, KJ; Clark, GJ; Ju, Χ.; Angel, CE; Chen, C.-JJ; Dunbar, PR; Wadley, RB; Jeet, V.; et al. Τα ανθρώπινα CD141+ (BDCA-3)+ δενδριτικά κύτταρα (DCs) αντιπροσωπεύουν ένα μοναδικό μυελοειδές υποσύνολο DC που παρουσιάζει διασταυρούμενα αντιγόνα νεκρωτικών κυττάρων. J. Εχρ. Med. 2010, 207, 1247–1260. [CrossRef]
29. Noguchi, Α.; Kaneko, Τ.; Καμιγάκη, Τ.; Fujimoto, Κ.; Ozawa, Μ.; Saito, Μ.; Ariyoshi, Ν.; Goto, S. Η ανοσοθεραπεία με ενεργοποιημένη με ζολεδρονάτη V 9 δ Τ κύτταρα είναι εφικτή και αποκαθιστά την εξασθένηση των δ κυττάρων σε ασθενείς με συμπαγείς όγκους. Κυτταροθεραπεία 2011, 13, 92-97. [CrossRef]
30. Hewitt, RE; Λισσίνα, Α.; Green, AE; Slay, ES; Τιμή, DA; Sewell, AK Η απόκριση οξείας φάσης διφωσφονικού: Η ταχεία και άφθονη παραγωγή προφλεγμονωδών κυτοκινών από τα gd T κύτταρα του περιφερικού αίματος σε απόκριση σε αμινοδιφωσφονικά αναστέλλεται από τις στατίνες. Clin. Exp. Immunol. 2005, 139, 101–111. [CrossRef]
31. June, CH; O'Connor, RS; Kawalekar, OU; Ghassemi, S.; Milone, MC CAR T cell ανοσοθεραπεία για τον ανθρώπινο καρκίνο. Science 2018, 359, 1361–1365. [CrossRef] [PubMed]
32. Sterner, RC; Sterner, RM CAR-T κυτταρική θεραπεία: Τρέχοντες περιορισμοί και πιθανές στρατηγικές. Blood Cancer J. 2021, 11, 69. [CrossRef] [PubMed]
33. Xie, G.; Dong, Η.; Liang, Υ.; Ham, JD; Rizwan, R.; Chen, J. CAR-NK κύτταρα: Μια πολλά υποσχόμενη κυτταρική ανοσοθεραπεία για τον καρκίνο. EBioMedicine 2020, 59, 102975. [CrossRef] [PubMed]
34. Zhang, L.; Meng, Υ.; Feng, Χ.; Han, Z. CAR-NK κύτταρα για ανοσοθεραπεία καρκίνου: Από τον πάγκο στο κρεβάτι. Biomark. Res. 2022, 10, 12. [CrossRef] [PubMed]
35. Marofi, F.; Motavalli, R.; Safonov, VA; Thangavelu, L.; Yumashev, AV; Alexander, Μ.; Shomali, Ν.; Chartrand, MS; Pathak, Υ.; Jarahian, Μ.; et al. CAR T κύτταρα σε συμπαγείς όγκους: Προκλήσεις και ευκαιρίες. Stem Cell Res. Εκεί. 2021, 12, 81. [CrossRef]
36. Santomasso, Β.; Bachier, C.; Westin, J.; Ρεζβάνη, Κ.; Shpall, EJ Η άλλη πλευρά της θεραπείας με CAR T-cell: Σύνδρομο απελευθέρωσης κυτοκίνης, νευρολογική τοξικότητα και οικονομική επιβάρυνση. Είμαι. Soc. Clin. Oncol. Εκπαίδευση. Βιβλίο 2019, 39, 433–444. [CrossRef]
37. Liu, S.; Galat, V.; Galat, Υ.; Lee, ΥΚΑ; Wainwright, D.; Wu, J. NK ανοσοθεραπεία καρκίνου με βάση τα κύτταρα: Από τη βασική βιολογία στην κλινική ανάπτυξη. J. Hematol. Oncol. 2021, 14, 7. [CrossRef]
38. Streltsova, Μ.; Ustiuzhanina, Μ.; Barsov, Ε.; Kust, S.; Velichinskii, R.; Kovalenko, E. Η ανάστροφη μεταγραφάση της τελομεράσης αυξάνει τον πολλαπλασιασμό και τη διάρκεια ζωής των ανθρώπινων ΝΚ κυττάρων χωρίς αθανασία. Biomedicines 2021, 9, 662. [CrossRef]
39. Garris, CS; Arlauckas, SP; Kohler, RH; Trefny, βουλευτής; Garren, S.; Piot, C.; Engblom, C.; Pfirschke, C.; Siwicki, Μ.; Gungabeesoon, J.; et al. Η επιτυχής ανοσοθεραπεία κατά του καρκίνου κατά του PD-1 απαιτεί διασταύρωση Τ κυττάρου-δενδριτικού κυττάρου που περιλαμβάνει τις κυτοκίνες IFN- και IL{-12. Immunity 2018, 49, 1148–1161.e7. [CrossRef]
40. Thongchot, S.; Jirapongwattana, Ν.; Luangwattananun, Ρ.; Chiraphapphaiboon, W.; Chuangchot, Ν.; Sa-Nguanraksa, D.; O Charoenrat, Ρ.; Thuwajit, Ρ.; Yenchitsomanus, Ρ.-Τ.; Thuwajit, C. Αποδεκτή μεταφορά αντι-νουκλεολίνης Τ κυττάρων σε συνδυασμό με αναστολή PD-L1 κατά του τριπλά αρνητικού καρκίνου του μαστού. ΜοΙ. Καρκίνος Θερ. 2022, 21, 727–739. [CrossRef]
