Ποια είναι τα οφέλη του πολυσακχαρίτη Cistanche στην ανοσολογική λειτουργία

Επικοινωνία: emily.li@wecistanche.com

Η ανοσολογική δράση και ο μηχανισμός του πολυσακχαρίτη Cistanche

Zeng Qunli, Zheng Yifan, Lu Zhiliang

[Αφηρημένη]Στόχος: Να μελετήσει τοαπρόσβλητοςδραστηριότητα τουCistancheΠολυσακχαρίτης(CDPS) και ο μηχανισμός τηςαπρόσβλητοςρύθμιση in vitro. Μέθοδοι: Η χρωματομετρική μέθοδος μπλε της θειαζόλης (MTT) χρησιμοποιήθηκε για την παρατήρηση του ρυθμιστικού αποτελέσματος του CDPS (Πολυσακχαρίτης Cistanche) στο IQS DEX TNF που αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό των θυμικών λεμφοκυττάρων ποντικού in vitro. CDPS (Πολυσακχαρίτης Cistanche) χρησιμοποιήθηκε για τη διεξαγωγή ανάλυσης κυτταρικού κύκλου και κυτταρικού κύκλου χρησιμοποιώντας κυτταρομετρία ροής. Προσδιορισμός ενδοκυτταρικού Ca2. Αποτελέσματα: CDPS (Πολυσακχαρίτης Cistanche) σε υψηλότερη συγκέντρωση μπορεί να αντισταθεί στην ανασταλτική επίδραση του ISQDEX στον πολλαπλασιασμό των λεμφοκυττάρων και στην ανασταλτική επίδραση του TNF υψηλής συγκέντρωσης στον πολλαπλασιασμό των λεμφοκυττάρων και να συνέργει την επίδραση προαγωγής του πολλαπλασιασμού του TN F χαμηλής συγκέντρωσης στα λεμφοκύτταρα· 100ug/ml 200 μgΠολυσακχαρίτης Cistanche) μπορεί να αυξήσει σημαντικά τα κύτταρα στη φάση της διαίρεσης. υψηλότερη συγκέντρωση (100 ug/ml) CDPS (Πολυσακχαρίτης Cistanche) μπορεί να προάγει σημαντικά τη συγκέντρωση ιόντος Ca στα θυμοκύτταρα ποντικού. Συμπέρασμα: CDPS (Πολυσακχαρίτης Cistanche) μπορεί να προάγει τα κύτταρα να εισέλθουν στη φάση διαίρεσης, και συμπεραίνεται ότι η προαγωγική του επίδραση στον πολλαπλασιασμό των θυμικών λεμφοκυττάρων του ποντικού σχετίζεται με την προαγωγή της απελευθέρωσης ασβεστίου στα λεμφοκύτταρα του θύμου ποντικού.

Cistanche(CistancheDeserticolaΤο YC Ma) είναι ένα σπάνιο και πολύτιμο κινέζικο φαρμακευτικό υλικό στη χώρα μου. Αναφέρεται ως η κορυφαία βαθμολογία στο "Shen Nong's Materia Medica".Cistancheέχει τις λειτουργίες της θρέψης του αίματος, της θρέψης των νεφρών και της υποβοήθησης του γιανγκ, της ενυδάτωσης των εντέρων και της καθυστέρησης της γήρανσης. Η σύγχρονη φαρμακολογική έρευνα δείχνει ότιCistancheΠολυσακχαρίτηςμπορεί να βελτιώσει το σώμααπρόσβλητοςλειτουργία, προάγουν τη σύνθεση του DNA, ενισχύουν τη σωματική δύναμη, βελτιώνουν τη νοημοσύνη και έχουν εμφανή αντιγηραντικά αποτελέσματα [1]. Ο συγγραφέας μελέτησε τη ρύθμιση του CDPS(Πολυσακχαρίτης Cistanche), ένα συστατικό πολυσακχαρίτη τουCistanche, στοαπρόσβλητοςλειτουργίαλεμφοκυττάρων ποντικού.

Πολυσακχαρίτης Cistancheπροωθώνταςπολλαπλασιασμός τωνλεμφοκύτταρα

1 Υλικό και μέθοδοι

1.1 Αντιδραστήρια και φάρμακα.

RPM, I 1640 μέσο: GIB-CO; HEPES: FARCO; L-γλουταμίνη: Shanghai Dongfeng Reagent Factory; Πενικιλλίνη και Στρεπτομυκίνη: Φαρμακευτικό Εργοστάσιο Βόρειας Κίνας. Concanavalin (ConA), MTT: SIGM A Company; Φυτοαιμοσυγκολλητίνη (PHA): Ιατρικό Εργαστήριο της Σαγκάης. Ισοπροτερενόλη (ISO): Shanghai Tianfeng Pharmaceutical Factory; Μερκαπτοαιθανόλη: Fluka Company; Ορός νεογέννητου μόσχου: Sijiqing Bioengineering Company; Η δεξαμεθαζόνη (DEX) παρουσιάστηκε από τον Δρ. Ma Liang, το Πρώτο Συνεργαζόμενο Νοσοκομείο της Ιατρικής Σχολής του Πανεπιστημίου Zhejiang. Ο παράγοντας καταστολής όγκου (TNF) παρέχεται από τον Yu Yuehan, Καθηγητή, Τμήμα Κυττάρων, Σχολή Επιστημών Ζωής, Πανεπιστήμιο Zhejiang. Τα υπόλοιπα αντιδραστήρια είναι όλα εγχώριας παραγωγής αναλυτικών ποιοτήτων.

1.2 Πειραματόζωα.

Ποντίκια ICR, αρσενικά, ηλικίας 68 εβδομάδων, βάρους 18-20g, 22, αγοράστηκαν από το Zhejiang Experimental Animal Center.

1.3 Εκχύλιση Πολυσακχαρίτη Cistanche [2]:

CistancheΠολυσακχαρίτηςεξάγεται από το εργαστήριό μας! Μετά τη σύνθλιψη του ακατέργαστου ναρκωτικούCistanche, βυθίζεται σε καυτή αιθανόλη, εκχυλίζεται σε βραστό νερό και κατακρημνίζεται σε αιθανόλη. Ουδέτερο ένζυμο σε συνδυασμό με τη μέθοδο Sewag για αποπρωτεϊνοποίηση, χρωματογραφία ανταλλαγής ανιόντων DEAE-Sephadex A- 50 και χρωματογραφία διήθησης γέλης Sephacry S-200 για τη λήψη ενός μόνο συστατικού CDPS (Πολυσακχαρίτης Cistanche)). Διατηρήστε στεγνό, χρησιμοποιήστε ατελές RPMI1640 για να κάνετε μια συγκεκριμένη συγκέντρωση πριν από τη χρήση και αποστειρώστε με υπερδιήθηση

1.4 Παρασκευή λεμφοκυττάρων σπλήνας και θύμου αδένα [3]:

The mice were sacrificed by neck removal. The spleen or thymus was taken aseptically and sieved through a 200-mesh steel mesh. The Hanks solution containing porridge newborn calf serum was used to prepare a single-cell suspension. After centrifugation at 1500 r/min for 10 min, red blood cells were lysed with 0.01 mol/L Tris-NHCl hypotonic solution for 1 min, and then washed with Hanks liquid centrifugation. Finally, the cells were suspended in RPMI1640 containing 10% fresh calf serum for complete culture Solution (containing 2 mmol/LL glutamine, 100 mmol/L sodium pyruvate, 1 mmol/L mercaptoethanol, add penicillin 100 U/ml and streptomycin 100 μg/ml just before use), trypan blue count, live For cells>93, προσαρμόστε τη συγκέντρωση των σπληνικών κυττάρων σε X 10 /ml και τη συγκέντρωση των θυμοκυττάρων σε × 10 βαθμούς /ml

1.5 Αντίδραση πολλαπλασιασμού λεμφοκυττάρων:Σύμφωνα με τη μέθοδο Mosmanmn [4] Βελτίωση: 96-πλάκα κυτταροκαλλιέργειας φρεατίου, προσθέστε 10/ml εναιώρημα σπληνικών κυττάρων ή νερό 10/ml εναιώρημα θυμοκυττάρων 100M1 και διαφορετικές συγκεντρώσεις φαρμάκων 10041 σε κάθε φρεάτιο. Καλλιεργήστε σε επωαστήρα CO2.37C για 72 ώρες. 4 ώρες πριν το τέλος της καλλιέργειας, προσθέστε 8μ1 ΜΤΤ (5 mg/ml) σε κάθε φρεάτιο. Στο τέλος της καλλιέργειας, αναρροφήστε 150" 1 υπερκείμενου από κάθε φρεάτιο και προσθέστε 0,5 Ν υδροχλωρική ισοπροπανόλη 150 Μ1. Ανακινήστε απαλά στον μικρο αναδευτήρα για να διαλυθούν εντελώς οι μπλε κρύσταλλοι. Μετρήστε το OD570 στη συσκευή ανάγνωσης μικροπλάκας. Ρυθμίστε κάθε πειραματικό δείχνουν ως τρία επαναλαμβανόμενα φρεάτια.

1.6 Προσδιορισμός της επίδρασης στον κυτταρικό κύκλο [5]:

{{0}}πλάκα κυτταροκαλλιέργειας φρεατίου, προσθέστε 4 10 βαθμό /ml εναιώρημα θυμοκυττάρων 1 ml σε κάθε φρεάτιο, προσθέστε διάφορα αντιδραστήρια και διάλυμα πολυσακχαρίτη σε 2 ml σε ισχυρό CO, 37 επωαστήρες Μετά την καλλιέργεια για 72 ώρες, φυγοκεντρήστε στα 1500 r/min για 15 λεπτά, απορρίψτε το υπερκείμενο, προσθέστε 7 αιθανόλη για να σταθεροποιηθούν τα κύτταρα που καταβυθίστηκαν, αποθηκεύστε στους 4 C για δοκιμή αναμονής, πλύνετε τα κύτταρα δύο φορές με PBS, φυγοκεντρήστε στα 1500 r/min για 15 λεπτά, απορρίψτε το υπερκείμενο, και προσθέστε. Μετά από πέψη 0,5 ml0,1 RNaseA στους 4°C για 30 λεπτά, 50 μg/ml βρωμοοξικού εστέρα χρωματίστηκε για 30 λεπτά στους 4°C και η ένταση φθορισμού των δειγμάτων κυττάρων μετρήθηκε στο κυτταρόμετρο ροής FACScan. Συλλέχθηκαν 10,000 σημεία δοκιμής κυψελών για κάθε δείγμα και τα δεδομένα χρησιμοποίησαν ανάλυση λογισμικού πολλαπλών τρικύκλων.

1.7 Προσδιορισμός της ενδοκυτταρικής συγκέντρωσης ιόντων ασβεστίου [6]

Πάρτε θυμοκύτταρα ποντικού με τον ίδιο τρόπο όπως παραπάνω. Εναιωρήστε σε ατελές μέσο καλλιέργειας RPMIl640 και ρυθμίστε τη συγκέντρωση των κυττάρων σε × 10'/ml. Προσθέστε 1 ml εναιωρήματος θυμοκυττάρων και 1 μΜ σε κάθε πειραματικό σωλήνα Διάλυμα χρώσης Fluo-3AM 5μ1, 2 τοις εκατό F-275μ1, μετά από επώαση στους 37°C για 30 λεπτά, πλύσιμο δύο φορές με ατελές RPM1640, 1500r/ min, φυγοκεντρήστε για 10 λεπτά, απορρίψτε το υπερκείμενο και προσθέστε διαφορετικές συγκεντρώσεις πολυσακχαριτών και πολυσακχαριτών στα καταβυθισμένα κύτταρα Μετά το ConA, η ένταση φθορισμού μετρήθηκε στο κυτταρόμετρο ροής FACScan. Τα δεδομένα 10,000 σημείων δοκιμής κυττάρων συλλέχθηκαν για κάθε δείγμα και αναλύθηκαν από το λογισμικό CELLQUEST. 1.8 Για την ανάλυση διακύμανσης χρησιμοποιήθηκαν στατιστικές μέθοδοι και η μέτρηση του κυτταρικού κύκλου και των ιόντων ασβεστίου αναλύθηκαν από το λογισμικό του κυτταρομέτρου ροής.

Πολυσακχαρίτης Cistanche από cistanche deserticola

2 Αποτελέσματα

2.1 Ο πολυσακχαρίτης Cistanche in vitro αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό των θυμικών λεμφοκυττάρων ποντικού με το ISO DEX TNF

Ο αγωνιστής του αδρενεργικού υποδοχέα ισοπροτερενόλη (ISO) και μια κατηγορία ορμόνης του φλοιού των επινεφριδίων δεξαμεθαζόνη (DEX) αναστέλλουν τον πολλαπλασιασμό των λεμφοκυττάρων CDPS (Πολυσακχαρίτης Cistanche) σε υψηλότερη συγκέντρωση (75 125ug/ml) μπορεί να αντισταθεί στην ανασταλτική επίδραση του ISO DEX στον πολλαπλασιασμό των λεμφοκυττάρων (P<0.01) as="" shown="" in="" figure="" 1.="" tumor="" necrosis="" factor="" (tnf="" β)="" on="" lymphocytes="" at="" high="" concentration="" cdps="">Cistanche Πολυσακχαρίτης) (125 μg/ml) σε υψηλότερη συγκέντρωση μπορεί να αντισταθεί στην ανασταλτική δράση του TNF και να προάγει συνεργικά τον πολλαπλασιασμό των λεμφοκυττάρων με χαμηλή συγκέντρωση TNF (Εικόνα 2)

2.2 Ρύθμιση πολυσακχαρίτη Cistanche του κύκλου των λεμφοκυττάρων του θύμου αδένα

CDPS (CistancheΠολυσακχαρίτης) 25ug/ml 100ug/ml 200#g/ml τρεις συγκεντρώσεις ενεργήθηκαν σε λεμφοκύτταρα θυμικού ποντικού για 72 ώρες, η περιεκτικότητα σε DNA στα κύτταρα μετρήθηκε με FACS και υπολογίστηκε ο δείκτης πολλαπλασιασμού (PI) σύμφωνα με τον τύπο. Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι τόσο τα 100 ug/ml όσο και τα 200 ug/ml μπορούν να αυξήσουν σημαντικά τα κύτταρα στη φάση της διαίρεσης και ο δείκτης πολλαπλασιασμού (68,0 τοις εκατό , 56,6) και των δύο είναι σημαντικά υψηλότερος από την ομάδα ελέγχου (44,6) και από τα 200 ug/ml Η ομάδα είναι ελαφρώς χαμηλότερη από την ομάδα των 100 μg/ml επειδή, σε συγκέντρωση 200 μg/ml, η επίδρασή της στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων έχει γίνει πτωτική τάση [7]. Η τιμή PI (47,5 τοις εκατό) της ομάδας των 25 ug/ml δεν ήταν σημαντικά υψηλότερη από αυτή της ομάδας ελέγχου.

2.3 Η επίδραση του πολυσακχαρίτη Cistanche στη συγκέντρωση ιόντων ασβεστίου σε θυμοκύτταρα ποντικού

Τα πειραματικά αποτελέσματα δείχνουν ότι υψηλότερη συγκέντρωση (100 ug/ml) CDPS (Πολυσακχαρίτης Cistancheε) μπορεί να προάγει σημαντικά την αύξηση της συγκέντρωσης ιόντων ασβεστίου στα θυμοκύτταρα ποντικού Σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, υπάρχει σημαντική διαφορά (P<0.01), and="" there="" is="" a="" certain="" effect="" relationship="" with="" the="" action="" time="" (figure="">

3 Συζήτηση

Cistanche, κοινώς γνωστό ως«τζίνσενγκ της ερήμου», είναι ένα ξηρό, φολιδωτό σαρκώδες στέλεχος τουCistanche.Cistancheέχει τις λειτουργίες του θρεπτικού γιανγκ των νεφρών, της θρεπτικής ουσίας, του αίματος και των εντέρων. Ανήκει σε ένα είδος διέγερσης του φλοιού της υπόφυσης-επινεφριδίων ή έχει ορμονοειδές αποτέλεσμα παρόμοιο με τον φλοιό των επινεφριδίων. Ένα πολύτιμο κινέζικο φάρμακο που μπορεί να ρυθμίσει τηναπρόσβλητοςλειτουργίατου σώματος. Τα προηγούμενα ερευνητικά μας αποτελέσματα δείχνουν ότι το CDPS (Πολυσακχαρίτης Cistanche) in vitro μπορεί να προάγει τον πολλαπλασιασμό των θυμικών Τ λεμφοκυττάρων που δεν έχουν ενεργοποιηθεί ή ενεργοποιηθεί από το ConA PHA. Σε συνδυασμό με το ConA PHA, υπάρχουν δύο τύποι διεγέρτων Τ κυττάρων, πιστεύουμε ότι το CDPS (Πολυσακχαρίτης Cistanche) είναι ένα ανοσοενισχυτικό για τα Τ κύτταρα, και βρήκαμε επίσης ότι το CDPS (Πολυσακχαρίτης Cistanche) μπορεί να αυξήσει σημαντικά την έκκριση σπληνικών λεμφοκυττάρων ποντικού σε υψηλότερες συγκεντρώσεις [8]

Ορισμένες μελέτες έχουν βρει ότι ο ανασυνδυασμένος TNF μπορεί να προκαλέσει την απόπτωση φυσιολογικών συστάδων λεμφοκυττάρων Τ ποντικού και ανθρώπου in vitro και αυτό το αποτέλεσμα μπορεί δυνητικά να ανασταλεί από την IIL-2 IL-1 IFN και την IIL-4 με δεξαμεθαζόνη (DEX) Μπορεί να αναστείλει τον πολλαπλασιασμό των λεμφοκυττάρων αναστέλλοντας την έκφραση των λεμφοκυττάρων και την έκκριση της IL-2 και ρυθμίζοντας προς τα κάτω την παραγωγή IL-2R υψηλής συγγένειας. Αυτό το πείραμα διαπίστωσε ότι υψηλότερη συγκέντρωση CDPS (CistancheΠολυσακχαρίτης) μπορεί να εξουδετερώσει τις επιδράσεις της υψηλής συγκέντρωσης TN F στον πολλαπλασιασμό των λεμφοκυττάρων. Αναστολή, συνεργιστική με χαμηλή συγκέντρωση TNF για την προώθηση του πολλαπλασιασμού των λεμφοκυττάρων και μπορεί να αντιμετωπίσει την ανασταλτική επίδραση του ISQ DEX στον πολλαπλασιασμό των λεμφοκυττάρων. Αυτά τα αποτελέσματα είναι ακριβώς μέσω του CDPS (CistancheΠολυσακχαρίτης) για την προώθηση του πολλαπλασιασμού των Τ λεμφοκυττάρων και είναι αυτοκρινικά από τα Τ κύτταρα IL-2 και άλλες κυτοκίνες για να ολοκληρωθεί.

Τα τελευταία χρόνια, έχουν γίνει πολλές μελέτες για τις ανοσοφαρμακολογικές επιδράσεις των φυτικών πολυσακχαριτών, αλλά λίγες μελέτες για τηναπρόσβλητοςμηχανισμός ρύθμισης των πολυσακχαριτών, ειδικά της οδού μεταγωγής σήματος των πολυσακχαριτών που δρουν στα λεμφοκύτταρα με το Ca2 ως δεύτερο αγγελιοφόρο. Δεν υπάρχει αναφορά. Αυτό το πείραμα διεξήγαγε προκαταρκτική έρευνα σε αυτόν τον τομέα. Τα μόρια ενδοκυτταρικής σηματοδότησης περιλαμβάνουν cAM R Ca, IP3 DG cGMP, κ.λπ., μεταξύ των οποίων το Ca» έχει εξαιρετικά σημαντική φυσιολογική επίδραση στα κύτταρα. Η αύξηση της ενδοκυτταρικής συγκέντρωσης Ca2 είναι σημαντικό φαινόμενο στο πρώιμο στάδιο της ενεργοποίησης και του πολλαπλασιασμού των λεμφοκυττάρων. Αυτή η διαδικασία συμβαίνει κυρίως στις πρώτες δεκάδες δευτερόλεπτα έως λεπτά όταν τα κύτταρα ενεργοποιούνται από διεγερτές. Ο κλασικός τρόπος ενεργοποίησης των Τ κυττάρων είναι η φωσφατιδυλινοσιτόλη (PIB) για τον μεταβολισμό του φωσφατιδυλικού μυός. Ο μεταβολίτης αλκοόλης 1,4.5-τριφωσφορική ινοσιτόλη (IP3) μπορεί να προάγει την απελευθέρωση Ca" που είναι αποθηκευμένο στο εσωτερικό πλέγμα δεσμεύοντας τους υποδοχείς εσωτερικού πλέγματος, αυξάνοντας το επίπεδο του ενδοκυτταρικού Ca2 και τη συγκέντρωση του ενδοκυτταρικού Ca * αυξάνει. Υψηλό μπορεί να προάγει την παραγωγή NF-AT (γυμνικός παράγοντας ενεργοποιημένων Τ κυττάρου), ο τελευταίος έχει ως αποτέλεσμα την προώθηση της έκφρασης του γονιδίου IIL-2. Πειραματικά αποτελέσματα δείχνουν ότι υψηλότερη συγκέντρωση (100 μg/ml ) του CDPS (CistancheΠολυσακχαρίτης) είναι αποτελεσματικό για 5 10 λεπτά Ο χρόνος έχει σημαντική επίδραση στην αύξηση της συγκέντρωσης του Ca* στα θυμοκύτταρα του ποντικού και έχει συνεργική δράση με το ConA. Επομένως, εικάζουμε ότι το CDPS (Πολυσακχαρίτης Cistanche) προάγει την απελευθέρωση ασβεστίου στα λεμφοκύτταρα του θύμου ποντικού για την αύξηση της ενδοκυτταρικής συγκέντρωσης ιόντων ασβεστίου. Η αύξηση προάγει την έκφραση του γονιδίου IL-2 και οδηγεί στον πολλαπλασιασμό των Τ κυττάρων, που είναι ένα από τα θεωρητικά θεμέλια τουCistancheΠολυσακχαρίτηςρυθμιστική επίδραση στο σώμα

Πολυσακχαρίτης Cistanche

βιβλιογραφικές αναφορές

1. IN XiuHin, SU Yuke (Γενική κατάσταση της φαρμακολογικής έρευνας γιαCistancheSka 【J】. Κινεζικά παραδοσιακά και φυτικά φάρμακα ((Κινεζική βοτανοθεραπεία). 1993.24(10. 550-552(στα κινέζικα))

2. ZHANG Weijiee (Βιοχημική τεχνική της ένωσης πολυσακχαρίτη [M]. Hangzhou Zhejiang University Pres (Zhejiang University Press), 1994.16-17 (στα κινέζικα)

3. MA Bo- (Ma Baoli). Τεχνική Ανοσολογίας【M1. Shanghai Medical University Press (Shanghai Medical University Press), 1984 188-190. (n Chines))

4. Mosmann Τ. Ραπιλοϊμερική δοκιμασία για εφαρμογή ευκολότερης ανάπτυξης και επιβίωσης για τον πολλαπλασιασμό και την κυτταροτοξικότητα [JJ Immun Meth.1983,6 55- 58.

5. WU is-hi, WU shailing, Acai-n, et al (Wu Jiahui, Wu Shuibing. Li Carian, κ.λπ.), Η επίδραση του zin στον πολλαπλασιασμό των κυκλικών κυττάρων σεαπρόσβλητοςανάλυση οργάνου με χρήση κυτταρομετρίας ροής [J]. Chinese immunology (Chinese Journal of Immunology), 1994, 10Χ5: 278-281. (στην Κίνα)

6. ΤΑΟ αξίνη. JIYong-yong, GAO Qi-rong, et al (Tao Jiaxian, Ji Yongpu Gao Qirong, κ.λπ.). Ανάλυση FACS των αλλαγών στο ενδοκυτταρικό C2 κατά τη διάρκεια της ενεργοποίησης [J] Chinese journal of immunology (China Journal of Immunology), 1993, 9 (2): 97-10L. (στα κινέζικα)

7. ZENGQu-li.MAO Jum-hao, LU Suchiang; Καθαρισμός d πολυσακδαρίδιο τουCistancheDeserticolaΤο YC Mfa και οι ανοσοτροποποιητικές του επιδράσεις στο Tellfunction[J].burnal of Zhejiang Medical University (Journal of Zhejiang Medical University), 1998.27 (3: 108-111. (στα κινέζικα)

8. Sarin A, Michelle C C. Perre AH Cytotoxic Efed of TNF and Lymphotoxin on T Lymphoblak. J Immunol, 1995, 1553716-3721.