Βιώσιμα και σκοτωμένα από τη θερμότητα στελέχη προβιοτικών βελτιώνουν τη στοματική ανοσία αυξάνοντας τη συγκέντρωση IgA στον στοματικό βλεννογόνο

Αφηρημένη

Η στοματική-ρινική ανοσία του βλεννογόνου παίζει καθοριστικό ρόλο στην προστασία του οργανισμού από την εισβολή βακτηρίων και ιών. Ασφαλή προβιοτικά προϊόντα έχουν χρησιμοποιηθεί για την ενίσχυση της ανθρώπινης ανοσίας και της στοματικής υγείας. Σε αυτή τη μελέτη, επαληθεύσαμε τα ευεργετικά αποτελέσματα των μικτών βιώσιμων προβιοτικών δισκίων, που αποτελούνται από Lactobacillus salivarius subsp. salicinius AP-32, Bifdobacterium animalis subsp. lactis CP-9 και Lactobacillus paracasei ET-66 και προβιοτικά δισκία που θανατώνονται από τη θερμότητα, που αποτελούνται από L. salivarius subsp. salicinius AP-32 και L. paracasei ET-66, σχετικά με τη στοματική ανοσία μεταξύ 45 υγιών συμμετεχόντων. Οι συμμετέχοντες χωρίστηκαν τυχαία σε βιώσιμες ομάδες προβιοτικών, προβιοτικών που σκοτώθηκαν από τη θερμότητα και εικονικού φαρμάκου. Η χορήγηση της θεραπείας διήρκεσε για 4 εβδομάδες. Συλλέχθηκαν δείγματα σάλιου τις Εβδομάδες 0, 2, 4 και 6 και μετρήθηκαν πληθυσμοί Lactobacillus, Bifidobacterium και Streptococcus mutans και συγκέντρωση IgA. Οι συγκεντρώσεις IgA και τα επίπεδα TGF-βήτα και IL-10 σε κύτταρα PBMC ποσοτικοποιήθηκαν με τη μέθοδο ELISA. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα επίπεδα IgA του σάλιου αυξήθηκαν σημαντικά κατά τη χορήγηση και των δύο βιώσιμων (119,30±12,63%, ***P<0.001) and heat-killed (116.78±12.28%, ***P<0.001) probiotics for 4 weeks. Among three probiotic strains, AP-32 would effectively increase the levels of TGF-beta and IL-10 in PBMCs. The oral pathogen Streptococcus mutans was significantly reduced on viable probiotic tablet administration (49.60±31.01%, ***P<0.001). The in vitro antibacterial test confirmed that viable probiotics effectively limited the survival rate of oral pathogens. Thus, this clinical pilot study demonstrated that oral probiotic tablets both in viable form or heat-killed form could exert beneficial effects on oral immunity via IL-10, TGB-beta mediated IgA secretion. The effective dosage of viable probiotic content in the oral tablet was 109 CFUs/g and the heat-killed oral tablet was 1× 1010 cells/g.

Οφέλη συμπληρώματος cistanche-αύξηση της ανοσίας

Εισαγωγή

Ο στοματικός-ρινικός βλεννογόνος, η πύλη για την επαφή με τα εισπνεόμενα αντιγόνα, είναι η πρώτη γραμμή άμυνας του ανθρώπινου ανοσοποιητικού συστήματος [1, 2]. Συνήθως, παθογόνοι ιοί ή βακτήρια εισβάλλουν στις βλεννογόνες επιφάνειες της στοματικής-ρινικής κοιλότητας καταπολεμώντας το τοπικό ανοσοποιητικό σύστημα και την υγιή μικροχλωρίδα [3]. Η φλεγμονή και τα συμπτώματα, συμπεριλαμβανομένου του βήχα, του πονόλαιμου, της καταρροής και του πυρετού, αναπτύσσονται λόγω των ανοσολογικών αποκρίσεων έναντι των διεισδυτικών παθογόνων ιών και βακτηρίων [4]. Επιπλέον, η ανοσοσφαιρίνη Α (IgA) είναι ο κύριος ανοσοποιητικός παράγοντας στο σάλιο και ρυθμίζει την ομοιόσταση της στοματικής μικροχλωρίδας [5]. Αρκετές μελέτες έχουν αναφέρει την ικανότητα του εκκριτικού IgA να προστατεύει το σώμα από μόλυνση από ιικά παθογόνα, συμπεριλαμβανομένου του αναπνευστικού συγκυτιακού ιού [6], του ροταϊού [7] και του ιού της γρίπης [7]. Η εκκριτική IgA λειτουργεί για την προστασία του βλεννογόνου επιθηλίου. Οι Nicolas Millet et al. ανακάλυψε ότι η IgA του βλεννογόνου μπορεί να αποτρέψει τη δυσβίωση του Candida albicans στη στοματική κοιλότητα [8]. Αποτρέπει επίσης τη συσσώρευση του στοματικού παθογόνου Streptococcus mutans, που προκαλεί οδοντική πλάκα [9].

Επιπλέον, οι ερευνητές ανακάλυψαν ότι η στοματική μικροχλωρίδα και οι μεταβολίτες της μπορεί να επηρεάσουν τοπικά την ανοσία στον στοματικό φραγμό [10]. Προηγούμενες μελέτες έδειξαν την αποτελεσματικότητα των προβιοτικών στην αύξηση της συγκέντρωσης IgA στον στοματικό βλεννογόνο [11]. Οι Ericson et al. έδειξε ότι η τσίχλα που περιέχει Lactobacillus reuteri συμμετείχε στην προσαρμοστική ανοσοαπόκριση υγιών ατόμων αυξάνοντας τα επίπεδα IgA του σάλιου [12]. Στους ανθρώπους, οι άνοσες κυτοκίνες TGF-beta και IL-10 συσχετίζονται με την παραγωγή IgA [13].

Ωστόσο, το αν η μικροχλωρίδα του στόματος αύξησε τα εκκριτικά επίπεδα IgA μέσω των κυτοκινών TGF-beta και IL-10 είναι ακόμα ασαφές. Επιπλέον, τα στοματικά παθογόνα περιλαμβάνουν S. mutans, P. gingivalis και F. nucleatum subsp. πολυμορφισμός και A. actinomycetemcomitans έδειξαν υψηλή συσχέτιση με την περιοδοντική νόσο και την κακοσμία του στόματος [14]. Τα προβιοτικά προϊόντα θα μπορούσαν να είναι μια πιθανή εναλλακτική θεραπεία στην περιοδοντίτιδα αναστέλλοντας τα στοματικά παθογόνα Fusobacterium nucleatum, αλλά τα Porphyromonas gingivalis και Aggregatibacter actinomycetemcomitans δεν παρουσίασαν σημαντική μείωση [15]. Τα προβιοτικά συμπληρώματα μπορούν επίσης να αποτρέψουν παθογόνες λοιμώξεις [16]. Έχει αναφερθεί ότι βασικά είδη της μικροχλωρίδας περιόρισαν την ανάπτυξη του παθογόνου πνευμονικού στρεπτόκοκκου [17]. Έτσι, η διατήρηση ενός ισορροπημένου μικροβιακού οικοσυστήματος μέσω της πρόσληψης προβιοτικών στελεχών μπορεί να είναι ένας εναλλακτικός τρόπος ρύθμισης της στοματικής ανοσίας και ενίσχυσης της στοματικής υγείας. Προηγούμενα ευρήματα σχετικά με την αναστολή παθογόνων του στόματος από προβιοτικά στελέχη έχουν αποκαλύψει ότι ο Lactobacillus salivarius subsp. salicinius AP-32, Bifdobacterium animalis subsp. Το lactis CP-9 και το Lactobacillus paracasei ET-66 ασκούν εξαιρετικά αντιβακτηριακά αποτελέσματα in vitro. Ωστόσο, όχι με τον μηχανισμό αύξησης των επιπέδων H2O2 [18]. Οι κύριες στρατηγικές για τα προβιοτικά στελέχη για τον περιορισμό της στοματικής παθογόνου ανάπτυξης ήταν η συνσυσσώρευση παθογόνων από το στόμα, η παραγωγή βιοεπιφανειοδραστικών, η αλλαγή του στοματικού περιβάλλοντος και η παραγωγή αντιμικροβιακών ουσιών [19]. Επιπλέον, μια in vitro μελέτη έδειξε ότι ο L. salicinius AP-32 μεσολαβούσε στην έκφραση της φλεγμονώδους κυτοκίνης [ιντερλευκίνη (IL)-8, IL-10] σε ανθρώπινα επιθηλιακά κύτταρα [20]. Επομένως, σε αυτή τη μελέτη, επαληθεύσαμε εάν αναμείχθηκαν βιώσιμα προβιοτικά δισκία, που αποτελούνται από L. salivarius subsp. salicinius AP-32, B. animalis subsp. lactis CP-9 και L. paracasei ET-66 και προβιοτικά δισκία που θανατώνονται από τη θερμότητα, που αποτελούνται από L. salivarius subsp. Οι Salicinius AP-32 και L. paracasei ET-66, βελτίωσαν την ανοσοποιητική λειτουργία μέσω TGF-beta, IL{-10 ή αύξησαν το επίπεδο συγκέντρωσης IgA του σάλιου. Ελέγχθηκε η αντιβακτηριακή λειτουργία της πρόσληψης προβιοτικών προϊόντων στη στοματική κοιλότητα.

Οφέλη συμπληρώματος cistanche-πώς να ενισχύσετε το ανοσοποιητικό σύστημα

Κάντε κλικ εδώ για να δείτε τα προϊόντα Cistanche Enhance Immunity

【Ζητήστε περισσότερα】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Υλικό και μέθοδοι

Συμμετέχοντες

Συνολικά, 45 υγιείς συμμετέχοντες ηλικίας 20–40 ετών στρατολογήθηκαν και χωρίστηκαν τυχαία σε τρεις υποομάδες: το βιώσιμο προβιοτικό από του στόματος δισκίο, το από του στόματος δισκίο που σκοτώθηκε από τη θερμότητα και τις ομάδες εικονικού φαρμάκου. Κάθε ομάδα αποτελούνταν από 15 συμμετέχοντες. Συμμετέχοντες με διατροφικές συνήθειες καπνίσματος και καρύδι betel αποκλείστηκαν. Στοματικά δισκία χορηγήθηκαν τυφλά στους συμμετέχοντες. Όλοι οι συμμετέχοντες έλαβαν τα από του στόματος δισκία τρεις φορές την ημέρα (πρωί, μεσημέρι και βράδυ) για 4 εβδομάδες. Συλλέχθηκαν δείγματα σάλιου (2 mL) για τη μέτρηση της συγκέντρωσης IgA και των πληθυσμών μικροοργανισμών στις Εβδομάδες 0, 2, 4 και 6. Ελήφθη ενημερωμένη συγκατάθεση από όλους τους συμμετέχοντες που συμπεριλήφθηκαν σε αυτή τη μελέτη. Το πρωτόκολλο εγκρίθηκε από την Επιτροπή Θεσμικής Αναθεώρησης του Ιατρικού Πανεπιστημίου Chung Shan, Ταϊβάν (CS19052).

βιώσιμα προβιοτικά από του στόματος δισκία

Το βιώσιμο προβιοτικό από του στόματος δισκίο (1 g) περιείχε τρία βιώσιμα προβιοτικά στελέχη, L. salivarius subsp. salicinius AP-32, B. animalis subsp. lactis CP-9 και L. paracasei ET-66. Αναμίξαμε 0.01 g 1011 μονάδων σχηματισμού αποικιών (CFUs) μεμονωμένο προβιοτικό στο από του στόματος δισκίο. Κάθε μεμονωμένο προβιοτικό στέλεχος μετρήθηκε περίπου 0,33 * 109 CFUs/g. Η συνολική περιεκτικότητα σε προβιοτικά στο από του στόματος δισκίο ήταν 109 CFU αποικιών/g. Η ενεργή δόση του προβιοτικού από του στόματος δισκίου ακολουθούσε προηγούμενες δημοσιευμένες εργασίες [18]. Όλα τα προβιοτικά στελέχη ελήφθησαν από το εργαστήριο της Biofag Biotech Co., Ltd. (Tainan, Taiwan). L. salivarius subsp. salicinius AP-32 απομονώθηκε από ένα υγιές ανθρώπινο έντερο και κατατέθηκε στο Food Industry Research and Development Institute, Ταϊβάν (ID: BCRC 910437) και στο Πανεπιστήμιο Wuhan, Κίνα (ID: CCTCC-M2011127). B. animalis subsp. Το γαλακτικό CP-9 απομονώθηκε από υγιές ανθρώπινο μητρικό γάλα και κατατέθηκε στο Ινστιτούτο Έρευνας και Ανάπτυξης της Βιομηχανίας Τροφίμων, Ταϊβάν (ID: BCRC 910645) και στο Πανεπιστήμιο της Γουχάν (ID: CCTCC-M2014588). Το L. paracasei ET-66 απομονώθηκε από υγιές ανθρώπινο μητρικό γάλα και κατατέθηκε στο Food Industry Research and Development Institute, Ταϊβάν (ID: BCRC 910753) και στο China General Microbiological Culture Collection Center, Πεκίνο, Κίνα (ID: CGMCC{ {22}}). Lactobacillus. salivarius subsp. salicinius AP-32 και L. paracasei ET-66 καλλιεργήθηκαν σε πλάκες άγαρ de Man, Rogosa και Sharpe (MRS) (110,660, Merck, Darmstadt, Γερμανία) και επωάστηκαν υπό προαιρετικές αναερόβιες συνθήκες στους 37 βαθμούς για 48 ώρες. B. animalis subsp. Το Lactis CP-9 καλλιεργήθηκε σε άγαρ MRS συμπληρωμένο με 0,05% κυστεΐνη και επωάστηκε αναερόβια στους 37 βαθμούς για 48 ώρες. Πραγματοποιήθηκε καταμέτρηση αποικιών για τον ποσοτικό προσδιορισμό της βακτηριακής CFU μετά την καλλιέργεια προβιοτικών στελεχών [18].

φυτικό κιστανάκι που ενισχύει το ανοσοποιητικό σύστημα

Προβιοτικά από του στόματος δισκία που σκοτώνονται από τη θερμότητα

Τα από του στόματος δισκία που σκοτώθηκαν με θερμότητα προβιοτικά (1 g) αποτελούνταν από αδρανοποιημένο L. salivarius subsp. salicinius AP-32 και L. paracasei ET-66. Τα βιώσιμα στελέχη καλλιεργήθηκαν και επωάστηκαν, όπως περιγράφηκε προηγουμένως. Στη συνέχεια, το AP-32 και το ET-66 απενεργοποιήθηκαν με επώαση των βιώσιμων στελεχών σε μέσα MRS στους 100 βαθμούς για 1 ώρα. Η περιεκτικότητα σε προβιοτικά στο από του στόματος δισκίο ήταν 1×1010 κύτταρα/g. Η ενεργή δόση των από του στόματος δισκίων προβιοτικών που σκοτώθηκαν από τη θερμότητα ακολουθούσε προηγουμένως δημοσιευμένες δοκιμές in vitro [11]. Όλες οι πειραματικές διαδικασίες πραγματοποιήθηκαν στο εργαστήριο της Biofag Biotech Co., Ltd. (Tainan, Taiwan).

Μέτρηση των πληθυσμών Lactobacillus και Bifidobacterium σε δείγματα σάλιου

Συλλέχθηκαν δείγματα σάλιου (2 mL) από κάθε συμμετέχοντα τις Εβδομάδες 0, 2, 4 και 6. Τα δείγματα σάλιου (100 μL) αραιώθηκαν σειριακά και προστέθηκαν στο MRS πιάτα. Για τη μέτρηση των πληθυσμών Lactobacillus, ο Lactobacillus καλλιεργήθηκε και επωάστηκε στις πλάκες άγαρ MRS υπό προαιρετικές αναερόβιες συνθήκες στους 37 βαθμούς για 48 ώρες. Για τη μέτρηση των πληθυσμών του Bifdobacterium, το Bifdobacterium καλλιεργήθηκε και επωάστηκε αναερόβια σε άγαρ MRS συμπληρωμένο με 0.05% κυστεΐνη στους 37 βαθμούς για 48 ώρες. Πραγματοποιήθηκε μέτρηση αποικιών για τον ποσοτικό προσδιορισμό της βακτηριακής CFU μετά από καλλιέργεια προβιοτικών στελεχών. Τα ποσοστά πληθυσμού Lactobacillus και Bifidobacterium κανονικοποιήθηκαν στον αριθμό πληθυσμού προβιοτικών την Εβδομάδα 0. Το ποσοστό πληθυσμού των Lactobacillus και Bifidobacterium που συλλέχθηκαν την Εβδομάδα 0 θεωρήθηκε 100%. Η πειραματική μέθοδος ακολούθησε προηγούμενα δημοσιευμένα έργα [18].

Μέτρηση της συγκέντρωσης IgA στο στοματικό βλεννογόνο

Δείγματα σάλιου (2 mL) συλλέχθηκαν από κάθε συμμετέχοντα τις Εβδομάδες 0, 2, 4 και 6 και διατηρήθηκαν στους 20 βαθμούς . Το κιτ IgA Human Uncoated ELISA (Κατάλογος # 88-50600-88; Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, San Jose, CA, USA) χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση της συγκέντρωσης IgA. Αρχικά, επικαλύψαμε αντισώματα IgA κατά του ανθρώπου σε μια πλάκα 96-πηγαδιού. Η IgA του σάλιου που υπήρχε στο δείγμα ή στο πρότυπο προστέθηκε στο μικροκυψελίδα και στη συνέχεια συζευγμένο με HRP αντίσωμα αντι-ανθρώπινου IgA προστέθηκε σε θερμοκρασία δωματίου για 1 ώρα. Μεταφέρετε με πιπέτα το υπόστρωμα TMB σε κάθε φρεάτιο για 30 λεπτά. Τέλος, η συνεννόηση IgA μετρήθηκε σε φασματοφωτόμετρο στα 450 nm. Όλες οι πειραματικές διαδικασίες πραγματοποιήθηκαν εις τριπλούν, σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Ο ρυθμός συγκέντρωσης της IgA που συλλέχθηκε την Εβδομάδα 0 θεωρήθηκε 100%. Η πειραματική μέθοδος ακολούθησε προηγούμενα δημοσιευμένα έργα [18].

cistanche tubulosa-βελτίωση του ανοσοποιητικού συστήματος

Μέτρηση της συγκέντρωσης TGF-Beta και IL-10 σε PBMC

Ο έλεγχος της επαγόμενης από προβιοτικά αύξησης των επιπέδων TGF-βήτα και IL-10 μετά την προηγούμενη μελέτη [20]. Τα μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMCs) ελήφθησαν από δείγματα αίματος υγιών δοτών (Tainan Blood Center, Taiwan Blood Services Foundation). Η φυγοκέντρηση ολικού αίματος μέσω βαθμίδωσης Ficoll-Hypaque (Pharmacia, Σουηδία) και το κλάσμα πυκνότητας φωτός από τη διεπαφή 42,5%-50% εκλούστηκε. Σπορά 4 * 105 εκχυλισμένων κυττάρων PBMC κυττάρων σε 100 μl RPMI-1640 με 1% FBS (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, ΗΠΑ) σε κάθε φρεάτιο πλακών 96 φρεατίων. Στη συνέχεια, προσθέτοντας 5 * 105 cfu/20 µl προβιοτικής επεξεργασίας σε κάθε φρεάτιο σποράς PBMC (κύτταρα: προβιοτικά στελέχη=1:10). Οι θετικοί μάρτυρες πρόσθεταν 10 μg/ml Φυτοαιμοσυγκολλητίνης (PHA) (Sigma-Aldrich, Μόναχο, Γερμανία) σε φρεάτια σποράς PBMCs για την παραγωγή TGF-, IL-10 αντίστοιχα [21]. Συγκαλλιέργεια προβιοτικών με PBMCs για 48 ώρες. Μέτρηση του υπερκείμενου που περιέχει κυτοκίνες IL-10 και TGF- με ανάλυση ενζυμικής ανοσοπροσροφητικής δοκιμασίας (ELISA) (Thermo Scientific, Carlsbad, CA, USA). Όλα τα πειράματα μετρήθηκαν και ακολούθησαν το εμπορικό πρωτόκολλο τουλάχιστον εις τριπλούν.

Αξιολόγηση της Αντιβακτηριδιακής Λειτουργίας στη Στοματική κοιλότητα

Ο στρεπτόκοκκος mutans είναι μια κοινή απειλή για την στοματική υγεία, η οποία προκαλεί οδοντική τερηδόνα σχηματίζοντας πανώλη ή βιοφίλμ [22]. Συλλέχθηκαν δείγματα Streptococcus mutans από τα επιχρίσματα, με τα οποία συλλέξαμε το S. mutans στο υπερουλικό τμήμα, τα ούλα και τον στοματικό βλεννογόνο, τις Εβδομάδες 0, 2, 4 και 6. Το S. mutans διατηρήθηκε σε θρυπτική ζωμός σόγιας (TSB, 5 mL) συμπληρωμένος με 50% γλυκερίνη. Το μέσο S. mutans αραιώθηκε σειριακά και προστέθηκε στην πλάκα Mitis Salivarius-Bacitracin Agar (MSBA, 0.2 U/mL), η οποία επωάστηκε στους 37 βαθμούς για 2 ημέρες. Τέλος, ο αριθμός των αποικιών S. mutans σε κάθε συμμετέχον δείγμα μετρήθηκε για τον υπολογισμό των ποσοστών παθογόνου επιβίωσης. το ποσοστό επιβίωσης του S. mutans που συλλέχθηκε την Εβδομάδα 0 θεωρήθηκε 100%. Η πειραματική μέθοδος ακολούθησε προηγούμενα δημοσιευμένα έργα [18].

Αντιβακτηριακή δράση in vitro των δισκίων από του στόματος

Oral tablets (1 g) that contained viable (AP-32, CP-9, and ET-66; > 109 CFUs) and heat-killed (AP-32 and ET-66,>1010 CFUs) προβιοτικά στελέχη διαλύθηκαν σε TSB και μέσο έγχυσης εγκεφαλικής καρδιάς, αντίστοιχα, για να ληφθεί τελική συγκέντρωση 0,1 g/mL. Μόνο το μέσο χρησιμοποιήθηκε για την τυφλή ομάδα, ενώ δισκία (1 g) χωρίς προβιοτικά συστατικά διαλύθηκαν στα αντίστοιχα μέσα για την ομάδα εικονικού φαρμάκου. Στη συνέχεια, στοματικά παθογόνα (106 CFUs) εισήχθησαν στα διαλύματα δισκίων και συνεπωάστηκαν στους 37 βαθμούς για 2 (S. mutans) ή 3 (Porphyromonas gingivalis, Fusobacterium nucleatum subsp. polymorphum, και Aggregatibacter actinomy cetemcomitans). Τα παθογόνα ελήφθησαν από το BCRC. Το ποσοστό αναστολής παθογόνων από το στόμα (%) υπολογίστηκε ως εξής: (CFUblank control–CFUπειραματική ομάδα)/CFUblank control. Η πειραματική μέθοδος ακολούθησε προηγουμένως δημοσιευμένες δοκιμές [11].

Στατιστική ανάλυση

Το λογισμικό GraphPad Prism χρησιμοποιήθηκε για τη στατιστική ανάλυση των αποτελεσμάτων t-test δύο ουρών. Τα δεδομένα παρουσιάστηκαν ως η μέση τυπική απόκλιση (SD) ή ο μέσος όρος των αποτελεσμάτων δύο ή τριών ανεξάρτητων πειραμάτων. Οι στατιστικές διαφορές θεωρήθηκαν σημαντικές στην τιμή P<0.05.

Αποτελέσματα

Τα προβιοτικά δισκία αύξησαν τον πληθυσμό των Bifidobacterium στη στοματική κοιλότητα

Ο πληθυσμός του Bifidobacterium ήταν σταθερά αυξημένος στη στοματική κοιλότητα μετά τη χορήγηση προβιοτικών δισκίων. Οι βακτηριακοί πληθυσμοί μετά τις θεραπείες κανονικοποιήθηκαν από τους βακτηριακούς πληθυσμούς πριν από τις θεραπείες (Ποσοστό πληθυσμού %=CFU μετά τη θεραπεία/CFU πριν από τη θεραπεία). Στη βιώσιμη ομάδα προβιοτικών, το ποσοστό πληθυσμού αυξήθηκε σημαντικά σε 244,14±164,96% την Εβδομάδα 2 (**P<0.01, Fig. 1a) and 438.41±308.58 at Week 4 (***P<0.001), compared to Week 0. The Bifidobacterium population rate remained high at Week 6 (no administration of viable probiotic tablets for 2 weeks after Week 4, 550.16±448.19%, ***P<0.001), compared to Week 0. The Bifidobacterium population number was significantly different between the viable probiotic and placebo groups at Week 6 (**P<0.01). In the heat-killed probiotic group, the Bifidobacterium population was increased at Weeks 2 (149.92±60.47%, **P<0.01) and 4 (199.87±148.64%, *P<0.05), but was decreased at Week 6 after administration of the heat-killed probiotic tablets was stopped for 2 weeks (182.98±163.73%, Fig. 1a).

Τα προβιοτικά δισκία αύξησαν τον πληθυσμό των γαλακτοβακίλλων στη στοματική κοιλότητα

Η αλλαγή στον από του στόματος πληθυσμό Lactobacillus λόγω χορήγησης προβιοτικών δισκίων αποκάλυψε ένα μοτίβο παρόμοιο με αυτό που ακολουθήθηκε από την αλλαγή στον πληθυσμό Bifidobacterium από το στόμα. Οι βακτηριακοί πληθυσμοί μετά τις θεραπείες κανονικοποιήθηκαν από τους βακτηριακούς πληθυσμούς πριν από τις θεραπείες. Στη βιώσιμη ομάδα προβιοτικών, το ποσοστό πληθυσμού Lactobacillus αυξήθηκε σημαντικά σε 447,74±337,89% την Εβδομάδα 2 (**P<0.01, Fig. 1b) and 982.27±726.66% at Week 4 (***P<0.001), compared to Week 0. The Lactobacillus population rate was higher at Week 6 (no administration of viable probiotic tablets for 2 weeks after Week 4, 727.57±539.76%, ***P<0.001) than at Week 0. The Lactobacillus population number was significantly different between the viable probiotic and placebo groups at Week 6 (***P<0.001). In the heat-killed probiotic group, the Lactobacillus population was increased at Weeks 2 (256.66±183.78%, **P<0.01) and 4 (312.85 ± 279.71%, *P < 0.05). Additionally, the Lactobacillus number remained but showed no significant difference at Week 6 after the administration of heat-killed probiotics was stopped for 2 weeks (208.00±199.50%, Fig. 1b).

Εικ. 1 α Μέτρηση πληθυσμών Bifidobacterium στις επιφάνειες του στοματικού βλεννογόνου. V βιώσιμα προβιοτικά δισκία; H θερμικά σκοτωμένα αδρανοποιημένα προβιοτικά δισκία. Δισκία εικονικού φαρμάκου C (μάρτυρας); και βακτήρια γαλακτικού οξέος LAB. Πραγματοποιήθηκε συλλογή και ανάλυση δειγμάτων σάλιου τις Εβδομάδες 0, 2, 4 και 6. Τα δεδομένα παρουσιάστηκαν ως η μέση τυπική απόκλιση (SD). Για την ανάλυση των στατιστικών διαφορών χρησιμοποιήθηκε ένα τεστ t δύο ουρών. Οι στατιστικές σημαντικότητες σημειώθηκαν με *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001. b Measurement of Lactobacillus populations on the oral mucosal surfaces. V viable probiotic tablets; H heat-killed inactivated probiotic tablets; C placebo tablets (control); and LAB lactic acid bacteria. Collection and analysis of salivary samples at Weeks 0, 2, 4, and 6 were performed. Data were presented as the mean standard deviation (SD). A two-tailed t-test was used to analyze statistical differences. Statistical significances were marked with *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001

Τα προβιοτικά δισκία που περιέχουν AP‑32, ET‑66 και CP‑9 αύξησαν σημαντικά τη συγκέντρωση IgA στον στοματικό βλεννογόνο

Καθώς η κατανάλωση προβιοτικών δισκίων (βιώσιμη ή θερμικά σκοτωμένη) έχει αποδειχθεί ότι αυξάνει τα επίπεδα Bifidobacterium και Lactobacillus στη στοματική κοιλότητα, αναλύσαμε περαιτέρω τις μεταβολές της συγκέντρωσης IgA στο σάλιο, που προέκυψαν λόγω της πρόσληψης προβιοτικών προϊόντων. Τα επίπεδα IgA μετά τις θεραπείες κανονικοποιήθηκαν από τα επίπεδα IgA πριν από τις θεραπείες. Στη βιώσιμη προβιοτική ομάδα, η συγκέντρωση IgA του σάλιου αυξήθηκε ελαφρώς σε 103,24 ± 8,10% την Εβδομάδα 2 (Εικ. 2) και 104,81 ± 13,26 την Εβδομάδα 4, αλλά χωρίς στατιστικά σημαντικές διαφορές. Ωστόσο, η συγκέντρωση IgA στο σάλιο στη βιώσιμη ομάδα προβιοτικών, σε σύγκριση με την ομάδα του εικονικού φαρμάκου, αυξήθηκε σημαντικά σε 119,30 ± 12,63% την Εβδομάδα 6 (καμία χορήγηση βιώσιμων προβιοτικών δισκίων για 2 εβδομάδες μετά την Εβδομάδα 4), σε σύγκριση με την Εβδομάδα 0 ( ***Π<0.001). Furthermore, in the heat-killed probiotic group, the salivary IgA concentration was slightly increased at Weeks 2 (102.51± 7.20%) and 4 (104.35 ± 10.27%). The saliva IgA concentration was increased at Week 6 (116.78 ± 12.28%, ***P < 0.001, Fig. 2), compared to Week 0.

Βιώσιμα στελέχη αύξησαν τα επίπεδα IL-10 και TGF-beta στα PBMC

Ο θετικός έλεγχος 10 μg/ml Φυτοαιμοσυγκολλητίνης (PHA) αύξησε επιτυχώς τα επίπεδα της IL-10 (58,2 ± 7,9 pg/ml, ***P < 0,001, Εικ. 3α) και του TGF- (53,4±8 pg/ml, ***P<0.001, Fig. 3b) in PBMCs by comparing to the negative control (PBMCs treated with medium only). Viable strains of CP-9, AP-32 and ET-66 signifcantly increased the levels of IL-10 in PBMCs to 84.2±9 pg/ml (***P<0.001, ##P<0.01), 303.1±170.9 pg/ml (*P<0.05, ##P<0.01) and 98.2±17.5 pg/ml (***P<0.01, ##P<0.01), respectively. Symbol *indicated a significant difference by comparing to the medium-treated control; symbol #indicated a significant difference by comparing to the PHA control (Fig. 3a). Besides, viable strains of CP-9, AP-32, and ET-66 significantly increased the levels of TGF-beta in PBMCs to 23.2 ± 4.7 pg/ml (***P < 0.001), 130.9 ± 16 pg/ ml (***P < 0.001, ###P < 0.001) and 31.4 ± 5.5 pg/ml (***P<0.01), respectively (Fig. 3b).

Εικ. 2 Συγκέντρωση ανοσοσφαιρίνης Α (IgA) στα δείγματα σάλιου. V βιώσιμα προβιοτικά δισκία; H θερμικά σκοτωμένα αδρανοποιημένα προβιοτικά δισκία. Δισκία εικονικού φαρμάκου C (μάρτυρας); και βακτήρια γαλακτικού οξέος LAB. Πραγματοποιήθηκε συλλογή και ανάλυση δειγμάτων σάλιου τις Εβδομάδες 0, 2, 4 και 6. Τα δεδομένα παρουσιάστηκαν ως η μέση τυπική απόκλιση (SD). Για την ανάλυση των στατιστικών διαφορών χρησιμοποιήθηκε ένα τεστ t δύο ουρών. Στατιστικός

Τα προβιοτικά δισκία που περιέχουν AP-32, ET-66 και CP-9 απαγόρευσαν τον πληθυσμό S. mutans στο σάλιο

Αυξημένοι πληθυσμοί Bifidobacterium και Lactobacillus και αυξημένη συγκέντρωση IgA στο σάλιο μπορεί να συμβάλουν στην καταπολέμηση των στοματικών παθογόνων μικροοργανισμών. Στο επόμενο πείραμα, δοκιμάσαμε την αλλαγή στον πληθυσμό του στοματικού παθογόνου S. mutans λόγω προβιοτικής παρέμβασης. Οι βακτηριακοί πληθυσμοί μετά τις θεραπείες κανονικοποιήθηκαν από τους βακτηριακούς πληθυσμούς πριν από τις θεραπείες. Στη βιώσιμη προβιοτική ομάδα, ο πληθυσμός του S. mutans μειώθηκε σημαντικά τις Εβδομάδες 2 (53,55±31,60%, ***P<0.001), 4 (49.60±31.01%, ***P<0.001), and 6 (55.19±42.72%, **P<0.01, Fig. 4). At week 6, S. mutans was significantly inhibited in the viable probiotic group (55.19±42.72%, ***P<0.001), compared to in the placebo group. Furthermore, in the heat-killed probiotic group, the S. mutans population was slightly decreased at Week 2 (85.81±49.87%) and significantly reduced at Week 4 (58.35 ± 33.17%, ***P<0.001). The S. mutans population level in the heat-killed probiotic group (202.81±167.99%) reverted to that in the placebo group (225.05±127.01%) at Week 6 (no administration of heat-killed probiotic tablets for 2 weeks from Week 4) (Fig. 4).

Εικ. 3 Τα βιώσιμα στελέχη αύξησαν τα επίπεδα IL-10 και TGF-βήτα στα PBMCs. Το επίπεδο της IL-10 και του b TGF-βήτα στα PBMC δοκιμάστηκαν με θεραπεία προβιοτικών στελεχών. Προσθήκη 5 * 105 cfu/20 µl βιώσιµων στελεχών CP-9, AP-32 και ET-66 σε PMBC 10 µg/ml. Ως θετικός μάρτυρας χρησιμοποιήθηκε η φυτοαιμοσυγκολλητίνη (PHA). Ο αρνητικός έλεγχος ήταν PBMC που υποβλήθηκαν σε επεξεργασία μόνο με μέσο RMPI-1640. Πραγματοποιήθηκαν τριπλούν τεστ. Τα δεδομένα παρουσιάστηκαν ως η μέση τυπική απόκλιση (SD). Για την ανάλυση των στατιστικών διαφορών χρησιμοποιήθηκε ένα τεστ t δύο ουρών. Η στατιστική σημασία σημειώθηκε με P<0.05, P<0.01, P<0.001. The symbol *indicated a significant difference by comparing to the medium-treated control; symbol #indicated significant difference by comparing to the PHA control

Εικ. 4 Μέτρηση πληθυσμών παθογόνου Streptococcus mutans στις επιφάνειες του στοματικού βλεννογόνου. V βιώσιμα προβιοτικά δισκία; H θερμικά σκοτωμένα αδρανοποιημένα προβιοτικά δισκία. Δισκία εικονικού φαρμάκου C (μάρτυρας); και βακτήρια γαλακτικού οξέος LAB. Πραγματοποιήθηκε συλλογή και ανάλυση δειγμάτων σάλιου τις Εβδομάδες 0, 2, 4 και 6. Τα δεδομένα παρουσιάστηκαν ως η μέση τυπική απόκλιση (SD). Για την ανάλυση των στατιστικών διαφορών χρησιμοποιήθηκε ένα τεστ t δύο ουρών. Οι στατιστικές σημαντικότητες σημειώθηκαν με *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001

Επιβεβαίωση της ικανότητας των προβιοτικών δισκίων να αναστέλλουν την ανάπτυξη παθογόνων του στόματος με δοκιμή in vitro

Η in vitro μελέτη αποκάλυψε ότι τα βιώσιμα προβιοτικά δισκία ανέστειλαν σημαντικά το ποσοστό επιβίωσης των παθογόνων του στόματος (Εικ. 5α). Οι βακτηριακοί πληθυσμοί μετά τις θεραπείες κανονικοποιήθηκαν από τους βακτηριακούς πληθυσμούς πριν από τις θεραπείες. Το ποσοστό επιβίωσης των S. mutans, P. gingivalis, F. nucleatum και A. actinomy cetemcomitans στη βιώσιμη ομάδα προβιοτικών, σε σύγκριση με την ομάδα του εικονικού φαρμάκου, μειώθηκε στο 4,23% (***P < 0 .001, εικονικό φάρμακο=91%), 8,64% (***P < 0,001, εικονικό φάρμακο=89%), 5,77% (**Ρ<0.01, placebo=98%), and 6.23% (**P<0.01, placebo=87%), respectively. However, the heat-killed probiotic tablet exerted weaker antibacterial effects than the viable probiotic tablet (Fig. 5b). The survival rate of S. mutans, P. gingivalis, F. nucleatum, and A. antinomy cetemcomitans in the heat-killed probiotic group, compared to in the placebo group, was slightly decreased without statistical significance (82%, placebo=91%), significantly reduced to 53% (*P<0.05, placebo=89%), not inhibited (96.88%, placebo=98%), and significantly reduced to 80% (**P<0.01, placebo=87%), respectively.

Συζήτηση

Σε σύγκριση με την ομάδα εικονικού φαρμάκου, οι από του στόματος πληθυσμοί των Lactobacillus και Bifidobacterium θα αυξηθούν σημαντικά με τη χορήγηση βιώσιμων προβιοτικών δισκίων ή δισκίων προβιοτικών που σκοτώνονται από τη θερμότητα για 4 εβδομάδες. Επιπλέον, οι αριθμοί Lactobacillus και Bifidobacterium παρέμειναν σε σημαντικά υψηλά επίπεδα για 2 εβδομάδες μετά την αναστολή της κατανάλωσης βιώσιμης κατανάλωσης προβιοτικών (Εικ. 1α και β). Ομοίως, οι Camila Casuccio Almeida et al. έδειξε ότι μια χορήγηση τεσσάρων εβδομάδων μιας θεραπείας με προβιοτικά θα μπορούσε να επιμείνει στη βελτίωση των συμπτωμάτων σε ασθενείς με δυσανεξία στη λακτόζη για τουλάχιστον 3 μήνες μετά τη διακοπή της κατανάλωσης προβιοτικών [23]. Ωστόσο, η επίμονη επίδραση των προβιοτικών στη μακροχρόνια θεραπεία θα πρέπει να αξιολογηθεί στο μέλλον. Επιπλέον, η συγκέντρωση IgA του σάλιου αυξήθηκε σημαντικά με τη χορήγηση βιώσιμων δισκίων προβιοτικών που θανατώνονται από τη θερμότητα. Και οι δύο ομάδες που σκοτώθηκαν από τη θερμότητα και οι βιώσιμες προβιοτικές ομάδες αύξησαν την IgA του σάλιου χορηγώντας από του στόματος δισκία για 4 εβδομάδες, αλλά χωρίς να δείξουν στατιστική διαφορά με το εικονικό φάρμακο. Η συγκέντρωση IgA σε ομάδες που σκοτώθηκαν από τη θερμότητα και βιώσιμες προβιοτικές ομάδες έδειξε σημαντική αύξηση την Εβδομάδα 6. Ωστόσο, ο μηχανισμός της αύξησης της IgA μετά τη διακοπή της χορήγησης προβιοτικών για 2 εβδομάδες θα πρέπει να διερευνηθεί περαιτέρω (Εικ. 2) Braathen et al. ανέφεραν παρόμοια αποτελέσματα σχετικά με τον ανοσοτροποποιητικό ρόλο των προβιοτικών στελεχών στη στοματική κοιλότητα [24]. Επιπλέον, τα προβιοτικά στελέχη έχουν αναφερθεί ότι αυξάνουν σημαντικά τη συγκέντρωση IgA στα κόπρανα σε χοιρομητέρες και χοιρίδια [25]. Ωστόσο, οι μελέτες για την ανακούφιση των συμπτωμάτων IgA σε λοιμώξεις των ανώτερων αεραγωγών παραμένουν ανεπαρκείς. Ο λεπτομερής μοριακός μηχανισμός αναστολής και πρόληψης λοιμώξεων των ανώτερων αεραγωγών από προβιοτικά στελέχη CP-9, AP-32 και ET{-66 θα μπορούσε να διερευνηθεί σε μελλοντικές μελέτες. Στην παρούσα μελέτη, τα βιώσιμα στελέχη CP-9, AP{-32 και ET{-66 θα αύξαναν το επίπεδο της IL-10 και του TFG-βήτα στα κύτταρα PBMC. Το AP-32 έδειξε αποτελεσματική ικανότητα στην αύξηση της IL-10 και του TFG-βήτα στα PBMCs συγκρίνοντάς τα με τον θετικό μάρτυρα PHA (Εικ. 3α και β). Υπέθεσε ότι τα βιώσιμα στελέχη CP-9, AP-32 και ET-66 ενδέχεται να προκαλέσουν έκκριση Β-κυττάρων IL-10 και TFG-βήτα για να αυξήσουν τα επίπεδα IgA του σάλιου. Ωστόσο, η συσχέτιση μεταξύ της IL-10 του σάλιου, του TFG-beta και της IgA του σάλιου θα πρέπει να ελεγχθεί περαιτέρω [26]. Επιπλέον, το εάν τα προβιοτικά που σκοτώθηκαν από τη θερμότητα αύξησαν την IgA μέσω της επαγωγής της IL-10 και του TFG-beta είναι ακόμα ασαφές. Μια δοκιμασία in vitro έδειξε ότι η ΑΠ-32 που σκοτώθηκε από τη θερμότητα προήγαγε την έκκριση ιντερφερόνης και IL-12p70 και μείωσε τα επίπεδα IL-13 [27]. Έτσι, σε αυτήν την κλινική μελέτη, η ικανότητα των προβιοτικών στελεχών CP{-9, AP{-32 και ET{-66 και AP-32 και ET-66 που καταστρέφουν τη θερμότητα στελέχη για την αναστολή παθογόνων βακτηρίων στη στοματική κοιλότητα επικυρώθηκε περαιτέρω (Εικ. 4). Οι βιώσιμες προβιοτικές παστίλιες παρουσίασαν καλύτερη αντιπαθογόνο ικανότητα από τις παστίλιες που σκοτώνονται με θερμότητα μέσω εκκρίνουσας οργανικών οξέων, αντιμικροβιακών πεπτιδίων [28], εξωπολυσακχαριτών (EPSs) [29] βακτηριοσινών [30] (Εικ. 5α και β). Τα λειτουργικά αντιμικροβιακά συστατικά που παράγονται από βιώσιμα προβιοτικά στελέχη θα πρέπει να ανιχνεύονται με υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC) και υγρή χρωματογραφία (LC) – φασματομετρία μάζας στο μέλλον [31]. Έχει αναφερθεί ότι τα προβιοτικά που σκοτώνονται από τη θερμότητα διέθεταν βασικά πλεονεκτήματα των βιώσιμων προβιοτικών αλλά χωρίς ορισμένες ανησυχίες για την ασφάλεια των βιώσιμων προβιοτικών στελεχών [32]. Ωστόσο, τα αντιμικροβιακά συστατικά των προβιοτικών που σκοτώνονται από τη θερμότητα θα πρέπει να επαληθεύονται περαιτέρω.

Εικ. 5 Επιβεβαίωση της ικανότητας των προβιοτικών δισκίων να αναστέλλουν την ανάπτυξη του στοματικού παθογόνου με μια δοκιμή in vitro. Επικυρώθηκε η ικανότητα βιώσιμων προβιοτικών δισκίων που θανατώνονται από τη θερμότητα να αναστέλλουν το ποσοστό επιβίωσης των στοματικών παθογόνων, συμπεριλαμβανομένων των Streptococcus mutans, Porphyromonas gingivalis, Fusobacterium nucleatum και Aggregatibacter actinomycetemcomitans. Κενή ομάδα, μόνο μεσαία. ομάδα εικονικού φαρμάκου, δισκία (1 g) χωρίς προβιοτικά συστατικά. Πραγματοποιήθηκαν τριπλούν τεστ. Τα δεδομένα παρουσιάστηκαν ως η μέση τυπική απόκλιση (SD). Για την ανάλυση των στατιστικών διαφορών χρησιμοποιήθηκε ένα τεστ t δύο ουρών. Οι στατιστικές σημαντικότητες σημειώθηκαν με *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001

συμπέρασμα

Μικτά βιώσιμα προβιοτικά δισκία, που αποτελούνται από L. salivarius subsp. salicinius AP-32, B. animalis subsp. γαλακτικό CP-9 και L. paracasei ET-66 και προβιοτικά που σκοτώνονται από τη θερμότητα, συμπεριλαμβανομένου του L. salivarius subsp. salicinius AP-32 και L. paracasei ET-66, άσκησαν τις ευεργετικές τους λειτουργίες αυξάνοντας τους στοματικούς πληθυσμούς Lactobacillus και Bifdobacterium, μειώνοντας το S. mutans στη στοματική κοιλότητα και αυξάνοντας τη συγκέντρωση IgA του σάλιου σε υγιείς συμμετέχοντες. Τα αποτελέσματα δοκιμών in vitro επικύρωσαν ότι τα βιώσιμα προβιοτικά ανέστειλαν αποτελεσματικά τα στοματικά παθογόνα, συμπεριλαμβανομένων των S. mutans, P. gingivalis και F. nucleatum subsp. πολυμορφισμό, και Α. actinomycetemcomitans. Η στοματική-ρινική ανοσία του βλεννογόνου είναι η πρώτη γραμμή άμυνας ενάντια στους εισβάλλοντες μικροοργανισμούς, και αυτό έχει γίνει ένα κρίσιμο ζήτημα. Έτσι, αυτή η μελέτη θα προσφέρει μια εναλλακτική στρατηγική (συμπληρώματα προβιοτικών) για τη διατήρηση της στοματικής ανοσίας και της στοματικής υγείας.

Οφέλη συμπληρώματος cistanche-πώς να ενισχύσετε το ανοσοποιητικό σύστημα

βιβλιογραφικές αναφορές

1. Takaki H, Ichimiya S, Matsumoto M, Seya T (2018) Βλεννογονική ανοσοαπόκριση σε ρινικό λεμφικό ιστό κατά την ενδορινική χορήγηση από ανοσοενισχυτικά. J Innate Immun 10(5–6):515–521

2. Wu RQ, Zhang DF, Tu E, Chen QM, Chen WJ (2014) Το ανοσοποιητικό σύστημα του βλεννογόνου στη στοματική κοιλότητα—μια ορχήστρα της ποικιλομορφίας των Τ κυττάρων. Int J Oral Sci 6(3):125–132

3. Man WH, de Steenhuijsen Piters WAA, Bogaert D (2017) The microbiota of the respiratory tract: gatekeeper to respiratory health. Nat Rev Microbiol 15(5):259–270

4. Wald ER, Guerra N, Byers C (1991) Λοιμώξεις του ανώτερου αναπνευστικού συστήματος σε μικρά παιδιά: διάρκεια και συχνότητα επιπλοκών. Παιδιατρική 87(2):129–133

5. Marcotte H, Lavoie MC (1998) Oral microbial ecology and the role of salivary immunoglobulin A. Microbiol Mol Biol Rev 62(1):71–109

6. Weltzin R, Traina-Dorge V, Soike K, Zhang JY, Mack P, Soman G et al (1996) Το ενδορινικό μονοκλωνικό αντίσωμα IgA στον αναπνευστικό συγκυτιακό ιό προστατεύει τους πιθήκους rhesus από λοίμωξη της ανώτερης και κατώτερης αναπνευστικής οδού. J Infect Dis 174(2):256–261

7. Ruggeri FM, Johansen K, Basile G, Kraehenbuhl JP, Svensson L (1998) Η ανοσοσφαιρίνη Α αντιροταϊού εξουδετερώνει τον ιό in vitro μετά από διακυττάρωση μέσω των επιθηλιακών κυττάρων και προστατεύει τα βρέφη ποντίκια από τη διάρροια. J virol 72(4):2708-2714

8. Millet N, Solis NV, Swidergall M (2020) Η IgA του βλεννογόνου αποτρέπει τη συμπαθητική δυσβίωση του Candida albicans στη στοματική κοιλότητα. Front Immunol 11:2448

9. Katz J, Harmon CC, Buckner GP, Richardson GJ, Russell MW, Michalek SM (1993) Protective salivary immunoglobulin A Respons against Streptococcus mutans μετά από ενδορινική ανοσοποίηση με S. mutans αντιγόνο Ι/ΙΙ συζευγμένο με την υπομονάδα Β τοξίνης του . Infect Immun 61(5):1964–1971

10. Μουτσόπουλος NM, Konkel JE (2018) Ιστολογική ανοσία στον φραγμό του στοματικού βλεννογόνου. Trends Immunol 39(4):276–287

11. Lin CW, Chen YT, Ho HH, Hsieh PS, Kuo YW, Lin JH, Liu CR, Huang YF, Chen CW, Hsu CH, Lin WY, Yang SF (2021) Οι παστίλιες με προβιοτικά στελέχη ενισχύουν την στοματική ανοσολογική απόκριση και την υγεία . Oral Dis. https://doi.org/10.1111/odi.13854

12. Ericson D, Hamberg K, Bratthall G, Sinkiewicz-Enggren G, Ljunggren L (2013) Απόκριση Salivary IgA σε προβιοτικά βακτήρια και μεταλλαγμένους στρεπτόκοκκους μετά τη χρήση τσίχλας που περιέχει Lactobacillus reuteri. Pathog Dis 68(3):82–87

13. Defrance T, Vanbervliet B, Briere F, Durand I, Rousset F, Banchereau J (1992) Η ιντερλευκίνη 10 και ο αυξητικός παράγοντας μετασχηματισμού βήτα συνεργάζονται για να επάγουν τα αφελή ανθρώπινα Β κύτταρα που έχουν ενεργοποιηθεί από αντι-CD{4}} να εκκρίνουν ανοσοσφαιρίνη Α. J Exp Med 175(3):671–682

14. Papone V, Verolo C, Zafaroni L, Batlle A, Capo C, Bueno L et al (2015) Ανίχνευση και επικράτηση περιοδοντικών παθογόνων σε πληθυσμό της Ουρουγουάης με χρόνια περιοδοντίτιδα με χρήση συμβατικής μεθοδολογίας και μεταγονιδιωματικής. Odontoestomatologia 17(25):23–32

15. Butera A, Gallo S, Maiorani C, Molino D, Chiesa A, Preda C, Scribante A (2021) Προβιοτική εναλλακτική λύση στη χλωρεξιδίνη στην περιοδοντική θεραπεία: αξιολόγηση κλινικών και μικροβιολογικών παραμέτρων. Microorganisms 9(1):69

16. Wang Y, Li X, Ge T, Xiao Y, Liao Y, Cui Y et al (2016) Προβιοτικά για πρόληψη και θεραπεία λοιμώξεων της αναπνευστικής οδού σε παιδιά: συστηματική ανασκόπηση και μετα-ανάλυση τυχαιοποιημένων ελεγχόμενων δοκιμών. Ιατρική 95(31):e4509. https://doi.org/10.1097/ MD.0000000000004509

17. Laufer AS, Metlay JP, Gent JF, Fennie KP, Kong Y, Pettigrew MM (2011) Μικροβιακές κοινότητες της ανώτερης αναπνευστικής οδού και μέση ωτίτιδα στα παιδιά. mBio 2(1):e00245-10. https://doi.org/10. 1128/mBio.00245-10

18. Chen YT, Hsieh PS, Ho HH, Hsieh SH, Kuo YW, Yang SF, Lin CW (2020) Αντιβακτηριακή δράση βιώσιμων και θανατωμένων από τη θερμότητα προβιοτικών στελεχών έναντι παθογόνων του στόματος. Lett Appl Microbiol 70(4):310–317

19. Bonifait L, Chandad F, Grenier D (2009) Προβιοτικά για στοματική υγεία: μύθος ή πραγματικότητα; J Can Dent Assoc 75(8):585–90

20. Hsieh PS, An Y, Tsai YC, Chen YC, Chuang CJ, Zeng CT, King AE (2013) Δυνατότητα προβιοτικών στελεχών για ρύθμιση των φλεγμονωδών αποκρίσεων των επιθηλιακών και ανοσοκυττάρων in vitro. New Microbiol 36(2):167–179

21. Elrefaei M, Burke CM, Baker CA, Jones NG, Bousheri S, Bangsberg DR, Cao H (2009) Η παραγωγή TGF- and IL-10 από HIV-specifc CD8+ Τ κύτταρα ρυθμίζεται από CTLA{ {5}} σηματοδότηση σε CD4+ Τ κύτταρα. PloS ONE 4(12):e8194

22. Ranganathan V, Akhila CH (2019) Streptococcus mutans: Έχει γίνει κύριος αυτουργός για στοματικές εκδηλώσεις; J Microbiol Exp 7(4):207–213

23. Almeida CC, Lorena SLS, Pavan CR, Akasaka HMI, Mesquita MA (2012) Τα ευεργετικά αποτελέσματα της μακροχρόνιας κατανάλωσης ενός προβιοτικού συνδυασμού Lactobacillus casei Shirota και Bifidobacterium breve Yakult μπορεί να επιμείνουν μετά την αναστολή της θεραπείας σε ασθενείς με λακτόζη-ΐνη. Nutr Clin Pract 27(2):247–251

24. Braathen G, Ingildsen V, Twetman S, Ericson D, Jørgensen MR (2017) Η παρουσία του Lactobacillus reuteri στο σάλιο συμπίπτει με υψηλότερη IgA του σάλιου σε νεαρούς ενήλικες μετά από λήψη προβιοτικών παστίλιων. Benef Microbes 8(1):17–22

25. Scharek L, Guth J, Filter M, Schmidt MFG (2007) Επίδραση των προβιοτικών βακτηρίων Enterococcus faecium NCIMB 10415 (SF68) και Bacillus cereus var. σε εσάς NCIMB 40112 σχετικά με την ανάπτυξη IgG ορού και IgA κοπράνων των χοιρομητέρων και των χοιριδίων τους. Arch Anim Nutr 61(4):223–234

26. Ebrahimpour-Koujan S, Milajerdi A, Larijani B, Esmaillzadeh A (2020) Επιδράσεις των προβιοτικών στις κυτοκίνες και τις ανοσοσφαιρίνες του σάλιου: μια συστηματική ανασκόπηση και μετα-ανάλυση σε κλινικές δοκιμές. Sci Rep 10(1):1–11

27. Ou CC, Lin SL, Tsai JJ, Lin MY (2011) Τα βακτήρια γαλακτικού οξέος που σκοτώνονται με θερμότητα ενισχύουν το ανοσοτροποποιητικό δυναμικό παραμορφώνοντας την ανοσοαπόκριση προς την πόλωση Th1. J Food Sci 76(5):M260–M267. https://doi.org/10.1111/j.1750-3841.2011. 02161.χ

28. Nair MS, Amalaradjou MA, Venkitanarayanan K (2017) Αντιμολυσματικές ιδιότητες των προβιοτικών στην καταπολέμηση της μικροβιακής παθογένεσης. Adv Appl Microbiol 98:1–29

29. Wu MH, Pan TM, Wu YJ, Chang SJ, Chang MS, Hu CY (2010) Exopolysaccharide activities from probiotic bifidobacterium: Immunomodulatory effect (on J774A. 1 macrophages) and antimicrobial properties. Int J Food Microbiol 144(1):104–110

30. Barefoot SF, Klaenhammer TR (1983) Ανίχνευση και δραστηριότητα της λακτακίνης Β, μιας βακτηριοσίνης που παράγεται από τον Lactobacillus acidophilus. Appl Environ Microbiol 45(6):1808–1815

31. Kim PI, Sohng JK, Sung C, Joo HS, Kim EM, Yamaguchi T, Kim BG (2010) Χαρακτηρισμός και ταυτοποίηση δομής ενός αντιμικροβιακού πεπτιδίου, της ανθρωπίνης, που παράγεται από τον Staphylococcus hominis MBBL 2–9. Biochem Biophys Res Commun 399(2):133-138

32. Piqué N, Berlanga M, Miñana-Galbis D (2019) Οφέλη για την υγεία των προβιοτικών που σκοτώνονται από τη θερμότητα (Tyndallized): μια επισκόπηση. Int J Mol Sci 20(10):2534