Το Urine Metabolomics εκθέτει την ανώμαλη ανάκαμψη μετά από μέγιστη άσκηση σε γυναίκες ασθενείς με ME/CFS Μέρος 3

Γιατί θα είμαστε κουρασμένοι; Πώς μπορούμε να λύσουμε τα προβλήματα κόπωσης;

【Επικοινωνία】Email: george.deng@wecistanche.com / WhatsApp:008613632399501/Wechat:13632399501

3. Συζήτηση

Αυτή είναι η πρώτη φορά που το μεταβολισμό των ούρων ασθενών με ME/CFS έχει χαρακτηριστεί πριν και μετά από μια πρόκληση άσκησης όταν οι ασθενείς με ME/CFS παρουσιάζουν PEM. Πολλοί από αυτούς τους μεταβολίτες δεν έχουν μετρηθεί ποτέ στο παρελθόν σε ασθενείς με ME/CFS, αφού προηγούμενες μελέτες μεταβολομικής ούρων σε ME/CFS περιορίστηκαν σε λιγότερους από 50 μεταβολίτες και η τρέχουσα μελέτη μετρήθηκε σε 1403. Επιπλέον, η χρήση καθιστικών υγιών μαρτύρων για Τα επίπεδα φυσικής δραστηριότητας, τα οποία μπορούν να επηρεάσουν τα επίπεδα του μεταβολίτη κατά την έναρξη και μετά την άσκηση, είναι ένα βασικό πλεονέκτημα του τρέχοντος σχεδιασμού της μελέτης που δεν έχει χρησιμοποιηθεί σε προηγούμενες μελέτες. Τα αποτελέσματά μας έδειξαν εκτεταμένες αυξήσεις στα επίπεδα των μεταβολιτών στα ούρα των μαρτύρων 24 ώρες μετά την άσκηση που δεν παρατηρήθηκαν στους ασθενείς με ME/CFS, με 110 από αυτές τις ενώσεις να έχουν σημαντική αλληλεπίδραση μεταξύ της κατάστασης της νόσου (ME/CFS ή ελέγχου ) και χρόνο (βασική γραμμή έναντι μετά την άσκηση) (Συμπληρωματικό Σχήμα S2). Εκτός από τις πολυάριθμες αναλύσεις των επιπέδων του μεταβολίτη στα ούρα, η συσχέτιση των επιπέδων μεταβολιτών στα ούρα και στο πλάσμα έδωσε πρόσθετες ενδείξεις μεταβολικής δυσρύθμισης στους ασθενείς με ME/CFS μετά την άσκηση. Αυτή η ανάλυση παρείχε περαιτέρω στοιχεία παθοφυσιολογικών αλλαγών σε πολλαπλά υπομονοπάτια, καθώς και ενδείξεις διαφορών σε επιπλέον υπομονοπάτια που δεν είχαν πολλές σημαντικές διαφορές μεταξύ των ασθενών με ME/CFS και των μαρτύρων κατά την εξέταση των επιπέδων του μεταβολίτη των ούρων μεμονωμένα.

Το Cistanche μπορεί να δράσει ως ενισχυτικό κατά της κούρασης και αντοχής, και πειραματικές μελέτες έχουν δείξει ότι το αφέψημα του Cistanche tubulosa θα μπορούσε να προστατεύσει αποτελεσματικά τα ηπατικά κύτταρα και τα ενδοθηλιακά κύτταρα που έχουν υποστεί βλάβη σε ποντίκια που κολυμπούν με βάρος, να ρυθμίζει προς τα πάνω την έκφραση του NOS3 και να προάγει το ηπατικό γλυκογόνο. σύνθεση, ασκώντας έτσι αποτελεσματικότητα κατά της κόπωσης. Το πλούσιο σε γλυκοσίδη φαινυλαιθανοειδή εκχύλισμα Cistanche tubulosa θα μπορούσε να μειώσει σημαντικά τα επίπεδα κρεατινικής κινάσης, γαλακτικής αφυδρογονάσης και γαλακτικού ορού και να αυξήσει τα επίπεδα αιμοσφαιρίνης (HB) και γλυκόζης σε ποντικούς ICR, και αυτό θα μπορούσε να διαδραματίσει έναν ρόλο κατά της κόπωσης μειώνοντας τη μυϊκή βλάβη και καθυστερώντας τον εμπλουτισμό γαλακτικού οξέος για αποθήκευση ενέργειας σε ποντίκια. Το Compound Cistanche Tubulosa δισκία παρέτεινε σημαντικά τον χρόνο κολύμβησης που αντέχουν το βάρος, αύξησε το ηπατικό απόθεμα γλυκογόνου και μείωσε το επίπεδο ουρίας στον ορό μετά την άσκηση σε ποντίκια, δείχνοντας την αντικαταθλιπτική του δράση. Το αφέψημα του Cistanchis μπορεί να βελτιώσει την αντοχή και να επιταχύνει την εξάλειψη της κόπωσης στα ποντίκια που ασκούνται και μπορεί επίσης να μειώσει την άνοδο της κινάσης της κρεατίνης ορού μετά από άσκηση και να διατηρήσει φυσιολογική την υπερδομή των σκελετικών μυών των ποντικών μετά την άσκηση, πράγμα που δείχνει ότι έχει τα αποτελέσματα ενίσχυσης της σωματικής δύναμης και κατά της κούρασης. Το Cistanchis παρέτεινε επίσης σημαντικά τον χρόνο επιβίωσης των δηλητηριασμένων από νιτρώδη ποντίκια και ενίσχυσε την ανοχή έναντι της υποξίας και της κόπωσης.

Κάντε κλικ στο νιώθετε κουρασμένοι όλη την ώρα

3.1. Σύγκριση με προηγούμενες μελέτες μεταβολομικής ούρων σε ασθενείς με ME/CFS

Συνολικά, τα αποτελέσματά μας δεν συμφωνούν με τις λίγες προηγούμενες μελέτες που μετρούσαν τους μεταβολίτες των ούρων σε ασθενείς με ME/CFS σε σύγκριση με άτομα ελέγχου που δεν ήταν ME/CFS. Για να συγκρίνουμε καλύτερα τα αποτελέσματά μας με προηγούμενες μελέτες, οι οποίες μέτρησαν λιγότερους μεταβολίτες, συγκρίναμε τα αποτελέσματα κατά την έναρξη για p < 0.05 στο LMM με τις προηγούμενες μελέτες. Η μόνη ένωση που βρέθηκε να είναι σημαντική σε μια άλλη μελέτη και στη δική μας ήταν η αλανίνη, αν και η προηγούμενη μελέτη βρήκε ότι η αλανίνη ήταν χαμηλότερη σε γυναίκες ασθενείς από ό,τι στους μάρτυρες (BH-adjust p-value < 0.05) και σε Η μελέτη μας η μέση κανονικοποιημένη συγκέντρωση ήταν υψηλότερη στους ασθενείς με ME/CFS από ότι στους μάρτυρες [20]. Ωστόσο, αρκετές από τις μελέτες εντόπισαν διαφορές κατά την έναρξη στις ενώσεις που διαπιστώσαμε ότι άλλαζαν διαφορετικά στους ασθενείς με ME/CFS και στους μάρτυρες κατά την αποκατάσταση κατά την άσκηση, συμπεριλαμβανομένης της φαινυλαλανίνης (χαμηλότερη σε ασθενείς με ME/CFS [23,24]) και της βαλίνης (χαμηλότερη σε Ασθενείς με ME/CFS [20]). Τόσο η φαινυλαλανίνη όσο και η βαλίνη ήταν επίσης σημαντικά αυξημένες στους καθιστικούς μάρτυρες μετά από άσκηση στην τρέχουσα μελέτη, επομένως είναι πιθανό οι μάρτυρες σε άλλες μελέτες να ήταν πιο δραστήριοι και να είχαν ήδη υψηλότερα επίπεδα φαινυλαλανίνης στα ούρα. Καμία άλλη μελέτη δεν προσέλαβε ειδικά άτομα που δεν ήταν ME/CFS καθιστική ζωή, αν και μια μελέτη επιδίωξε να ταιριάζει με τον «γενικό τρόπο ζωής» [23]. Οι Armstrong et al. εξέτασε τις συσχετίσεις του Pearson μεταξύ των μεταβολιτών των ούρων και του πλάσματος σε ασθενείς με ME/CFS και μάρτυρες κατά την έναρξη, και βρήκε διαφορές στα οξικά, γαλακτικά και φαινυλαλανίνη με ουδό |R| > 0,4 ​​σε κάθε ομάδα [20]. Το οξικό άλας είναι πολύ μικρό για να ανιχνευθεί στην ανάλυση μας και δεν εντοπίσαμε διαφορές στις συσχετίσεις του πλάσματος και των ούρων στο γαλακτικό ή τη φαινυλαλανίνη.

Ο McGregor και οι συνεργάτες του ερεύνησαν επίσης αλλαγές στα μεταβολώματα των ούρων και του πλάσματος σε ασθενείς με ME/CFS που παρουσίαζαν PEM [19]. Χρησιμοποίησαν μια έρευνα για να διαχωρίσουν ασθενείς με ME/CFS που επί του παρόντος παρουσιάζουν PEM τις τελευταίες επτά ημέρες και ανακάλυψαν ότι οκτώ από τους τριάντα μεταβολίτες των ούρων που μετρήθηκαν είχαν σημαντικά χαμηλότερες συγκεντρώσεις στην ομάδα ME/CFS σε σύγκριση με τους ελέγχους. Από αυτές, μόνο η σερίνη είχε σημαντικές διαφορές στις αναλύσεις μας. αυξήθηκε μετά την άσκηση στην ομάδα ελέγχου (Συμπληρωματικό Αρχείο Δεδομένων S2—Αποτελέσματα LMM). Τα επίπεδα δύο μεταβολιτών των ούρων, του οξικού και της μεθυλιστιδίνης, ήταν επίσης σημαντικά διαφορετικά στην ομάδα PEM έναντι της ομάδας χωρίς PEM [19]. Τα επίπεδα των μεθυλιστιδινών που προσδιορίστηκαν σε αυτή τη μελέτη δεν ήταν σημαντικά διαφορετικά στην ανάλυση LMM, αλλά βρήκαμε διαφορές στους συσχετισμούς πλάσματος και ούρων της 1-μεθυλιστιδίνης και της Ν-ακετυλ-3-μεθυλιστιδίνης (Εικόνα 9). Οι McGregor et al. Βρήκε επίσης συσχετίσεις των βαθμολογιών PEM επτά ημερών με αρκετούς μεταβολίτες στο πλάσμα και τα ούρα [19].

3.2. Η αύξηση των επιπέδων του μεταβολίτη των ούρων μετά την άσκηση σε καθιστικούς ελέγχους είναι σύμφωνη με προηγούμενες μελέτες

Ο μεταβολισμός των ούρων στις γυναίκες 24 ώρες μετά την άσκηση δεν έχει καλά χαρακτηριστεί. Από όσο γνωρίζουμε, καμία μελέτη δεν έχει μετρήσει το μεταβολισμό των ούρων κατά την έναρξη σε σύγκριση με 24 ώρες μετά την άσκηση στις γυναίκες. Μια μελέτη μέτρησε 32 μεταβολίτες στα ούρα πριν από την άσκηση και 24 ώρες μετά την άσκηση στους άνδρες, συγκρίνοντας εννέα ανταγωνιστικούς ποδηλάτες με οκτώ υγιείς αλλά ανεκπαίδευτους άνδρες της ίδιας ηλικίας (50-60 ετών) [48]. Ενώ η μελέτη τους επικεντρώθηκε στη σύγκριση των αθλητών με τα άτομα που δεν προπονήθηκαν, είδαν υψηλές αλλαγές μετά την άσκηση (πιο σημαντικές από δύο φορές) στα άτομα ελέγχου στα επίπεδα γαλακτικού, οξικού και υποξανθίνης. Το οξικό δεν μετρήθηκε στη μελέτη μας και ούτε το γαλακτικό ούτε η υποξανθίνη ήταν διαφορετικά από την έναρξη έως την μετά την άσκηση στην ομάδα των γυναικών ελέγχου. Οι Mukherjee et al. βρήκε σημαντικές διαφορές μεταξύ των ομάδων αθλητή και ελέγχου σε οκτώ από τους μετρούμενους μεταβολίτες που συνδέονται με μια ποικιλία βιοχημικών οδών [48]. Ως εκ τούτου, ένα πλεονέκτημα της τρέχουσας μελέτης είναι η επιλογή των καθιστικών υγιών ελέγχων σε αντίθεση με τα πιο δραστήρια άτομα, που μπορεί να έχουν αλλοιωμένο μεταβολισμό των ούρων λόγω τακτικής άσκησης.

Ενώ υπάρχει έλλειψη δημοσιευμένης βιβλιογραφίας για το μεταβολισμό των ούρων 24 ώρες μετά την άσκηση, υπάρχουν αρκετές μελέτες που μετρούν τους μεταβολίτες των ούρων τόσο σε άνδρες όσο και σε γυναίκες σε προηγούμενα χρονικά σημεία μετά την άσκηση (ανασκόπηση στο [49]). Ένα από τα ευρήματα που ήταν συνεπή μεταξύ των μελετών είναι ότι η συγκέντρωση των περισσότερων λιπιδίων αυξάνεται στα βιορευστά μετά την άσκηση, συμπεριλαμβανομένων των ούρων. Συγκεκριμένα, οι συγκεντρώσεις ακυλκαρνιτίνης έχει αποδειχθεί ότι αυξάνονται στο αίμα και στα ούρα ως απόκριση στην άσκηση. Αυτό συμφωνεί με τα αποτελέσματα της μελέτης μας στην οποία αρκετές ενώσεις ακυλκαρνιτίνης αυξήθηκαν σημαντικά μετά την άσκηση στα ούρα των μαρτύρων (Εικόνα 7Α).

Η μεγαλύτερη μελέτη που περιελάμβανε γυναίκες (255 συνολικά άτομα, 107 γυναίκες) βρήκε επίσης εκτεταμένες μεταβολικές αλλαγές στα ούρα μετά την άσκηση, με 37 από τους 47 μετρούμενους μεταβολίτες να αλλοιώθηκαν σημαντικά μετά τη διόρθωση FDR και 33 από αυτούς ήταν αυξημένοι μετά την άσκηση [50] . Αυτό είναι σύμφωνο με το εύρημα μας για μεγάλης κλίμακας μεταβολική αλλαγή μετά την άσκηση στα ούρα των ατόμων ελέγχου, με την πλειονότητα των ενώσεων που τροποποιήθηκαν να έχουν αυξημένες συγκεντρώσεις. Αυτή η μελέτη ολοκλήρωσε επίσης μια συγκριτική ανάλυση στρωματοποιημένης φύλου, αλλά βρήκε μόνο δύο μεταβολίτες με σημαντικά διαφορετικές αναλογίες μετά την άσκηση/αρχική γραμμή σε γυναίκες και άνδρες.

Στους Schranner et al. ανασκόπηση, τα ευρήματα για τα αμινοξέα δεν είναι τόσο συνεπή όσο αυτά για τα λιπίδια, τα οποία γενικά αυξάνουν μετά την άσκηση [49]. Ωστόσο, ορισμένα ευρήματα στα ούρα ήταν συνεπή σε τουλάχιστον δύο μελέτες (αν και όλα τα χρονικά σημεία μετά την άσκηση συνδυάζονται), συμπεριλαμβανομένου ότι οι ακόλουθες ενώσεις αυξήθηκαν στα ούρα μετά την άσκηση: αλανίνη, Ο-ακετυλο-ομοσερίνη, 5- υδροξυινδολεπυροσταφυλικό, ξανθουρενικό, L-μετανεφρίνη, Ν-ακετυλοβανιλαλανίνη και Ν-(καρβοξυαιθυλο)αργινίνη. Οι ακόλουθες ενώσεις βρέθηκαν να μειώνονται στα ούρα μετά την άσκηση σε τουλάχιστον δύο μελέτες: γλυκίνη, ιστιδίνη, n–οξείδιο τριμεθυλαμίνης. Συγκρίνοντας αυτά τα αποτελέσματα με τη μελέτη μας, οι περισσότεροι από τους μεταβολίτες είτε δεν ήταν σημαντικά διαφορετικοί πριν και μετά την άσκηση, είτε δεν μετρήθηκαν στη μελέτη μας. Ωστόσο, βρήκαμε επίσης σημαντική αύξηση στα επίπεδα αλανίνης στους μάρτυρες, η οποία είναι σύμφωνη με τις μελέτες που εξετάστηκαν. Στη μελέτη μας, τα επίπεδα γλυκίνης ήταν επίσης αυξημένα μετά την άσκηση στους ελέγχους σε αντίθεση με μειωμένα. Ωστόσο, οι Kistner et al. Η μελέτη, η οποία περιελάμβανε πολλές γυναίκες, διαπίστωσε επίσης ότι τα επίπεδα γλυκίνης ήταν σημαντικά αυξημένα μετά την άσκηση [50].

3.3. Διαφορές μεταξύ των καθιστικών μαρτύρων και των ασθενών με ME/CFS στην υπεροδό των λιπιδίων

Πολλά υπομονοπάτια λιπιδίων ήταν σημαντικά διαφορετικά στα ούρα των ασθενών και των μαρτύρων σε αυτή τη μελέτη, συμπεριλαμβανομένου του μεταβολισμού των λιπαρών οξέων της ακυλκαρνιτίνης. Οι μεταβολίτες της ακυλοκαρνιτίνης αυξήθηκαν μετά την άσκηση στα ούρα σε υγιείς μάρτυρες και οι αλλαγές που προκλήθηκαν από την άσκηση ήταν σημαντικά διαφορετικές μεταξύ των μαρτύρων και των ασθενών με ME/CFS (Εικόνες 3, 7 και S4). Επιπρόσθετα, αν και δεν είναι ακυλοκαρνιτίνη, η δεοξυκαρνιτίνη στην υποοδό λιπιδίων του μεταβολισμού της καρνιτίνης συσχετίστηκε διαφορετικά μεταξύ του πλάσματος και των ούρων στους ασθενείς με ME/CFS σε σύγκριση με τους μάρτυρες (Εικόνα 9). Οι ακυλοκαρνιτίνες είναι πολύ σημαντικές στον ενεργειακό μεταβολισμό, καθώς απαιτούνται για τη μεταφορά λιπαρών οξέων στα μιτοχόνδρια για -οξείδωση. Η οξείδωση λιπαρών οξέων μακράς αλυσίδας είναι ο πρωταρχικός τρόπος μεταβολισμού της ενέργειας κατά τη διάρκεια της αερόβιας άσκησης. Ο διαταραγμένος μεταβολισμός της ακυλκαρνιτίνης κατά τη διάρκεια της άσκησης θα μπορούσε να συμβάλλει στη δυσανεξία στην άσκηση και στο PEM σε ασθενείς με ME/CFS. Σε μια άλλη μελέτη που εξέτασε μόνο άτομα κατά την έναρξη και δεν στρατολόγησε συγκεκριμένα καθιστικούς μάρτυρες, η υποοδός ακυλκαρνιτίνης βρέθηκε να είναι σημαντικά διαφορετική στους ασθενείς με ME/CFS έναντι των μαρτύρων, με πέντε από τις οκτώ ενώσεις να έχουν χαμηλότερη συγκέντρωση στους ασθενείς [11]. Όταν αναλύθηκαν μόνο τα βασικά άτομα, οι ειδικές μετρήσεις της ακυλκαρνιτίνης στον ορό έδειξαν ότι η ένωση ήταν χαμηλότερη σε ασθενείς με ME/CFS από τους ελέγχους σε μια αναφορά [51], αλλά δεν παρατηρήθηκαν διαφορές στα επίπεδα ούρων ή πλάσματος σε άλλη μελέτη [52]. Στο πλάσμα της μεγαλύτερης κοόρτης της οποίας τα υποκείμενα της τρέχουσας μελέτης αποτελούν υποσύνολο, το χημικό σύμπλεγμα καρνιτίνης άλλαξε επίσης σημαντικά στους μάρτυρες που έκαναν καθιστική ζωή κατά τη διάρκεια της ανάρρωσης (που ορίζεται ως η διαφορά μεταξύ 24 ωρών μετά την άσκηση και 15 λεπτών μετά την άσκηση ) με την πλειονότητα των ενώσεων να αυξάνεται μετά την άσκηση [25]. Το σύμπλεγμα χημικών καρνιτίνης δεν βρέθηκε να μεταβάλλεται σημαντικά κατά την ανάκτηση κατά την άσκηση σε ασθενείς με ME/CFS. Ενώ αυτό το σύμπλεγμα περιλαμβάνει περισσότερα από ακυλκαρνιτίνες, οι ακυλκαρνιτίνες είναι μέλη και συμβάλλουν στη σημασία του στην ανάλυση εμπλουτισμού χημικής ομοιότητας και στην τρέχουσα μελέτη (Συμπληρωματικό Σχήμα S4). Έχει επίσης αποδειχθεί ex vivo ότι η παλμιτοϋλκαρνιτίνη, η οποία αυξάνεται παροδικά στους μυς μετά την άσκηση, μπορεί να λειτουργεί ως σήμα καταπόνησης από τους μυς σε ένα υποσύνολο νευρώνων [53].

Οι μεταβολίτες λιπαρών οξέων ακυλογλυκίνης είναι οι μόνες ενώσεις που βρέθηκαν στα ούρα σε σημαντικά διαφορετικές συγκεντρώσεις στο ME/CFS έναντι των μαρτύρων σε ένα μόνο χρονικό σημείο (24 ώρες μετά την άσκηση) και μια διαφορετική ένωση ακυλογλυκίνης, 3-υδροξυβουτυροϋλογλυκίνη , είχε σημαντική αρνητική συσχέτιση στους ασθενείς με ME/CFS όταν συσχετίστηκε το U3/U1 με το P3/P1 (Εικόνες 5 και 9). Επιπλέον, η cis-3,4-μεθυλενοεπτανοϋλογλυκίνη άλλαζε διαφορετικά κατά την ανάκτηση κατά την άσκηση στους ασθενείς με ME/CFS έναντι των μαρτύρων (LMM, Συμπληρωματικό Σχήμα S2). Ενώ ο μεταβολισμός της ακυλογλυκίνης δεν είναι μία από τις υποοδούς που αυξήθηκε σημαντικά μετά την άσκηση μόνο στους μάρτυρες, ήταν σημαντικά διαφορετικός στους ασθενείς με ME/CFS έναντι των μαρτύρων τόσο στο χρονικό σημείο 24 ωρών μετά την άσκηση όσο και κατά την ανάλυση της διαφοράς στις αναλογίες μετά την άσκηση/βασική γραμμή (Εικόνα 3). Η απέκκριση στα ούρα συγκεκριμένων ακυλογλυκινών μεταβάλλεται επίσης από διαταραχές που συνδέονται με την οξείδωση των λιπαρών οξέων στα μιτοχόνδρια, συμπεριλαμβανομένης της ανεπάρκειας της μεσαίας αλυσίδας ακυλο-συνένζυμου Α (CoA) αφυδρογονάσης (MCAD) [54]. Η ομάδα μας παρατήρησε ότι η οξείδωση των λιπαρών οξέων διαφέρει στα κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος από τους ασθενείς με ME/CFS έναντι των μαρτύρων [55].

3.4. Διαφορές μεταξύ καθιστικών μαρτύρων και ασθενών με ME/CFS στην υπεροδό αμινοξέων

Βρήκαμε επίσης πολλές διαφορές στα ούρα στα αμινοξέα στους ασθενείς με ME/CFS και στους ελέγχους μετά την άσκηση. Δύο από αυτές τις οδούς ξεχώρισαν επειδή είχαν σημαντικές αλλαγές στους ασθενείς με ME/CFS έναντι των μαρτύρων σε όλες τις αναλύσεις μας, συμπεριλαμβανομένης της ανάλυσης οδού KEGG, και συζητούνται περαιτέρω παρακάτω.

Ο κύκλος της ουρίας στο ήπαρ είναι ένα σημαντικό μέρος του μεταβολισμού της άσκησης επειδή απαιτείται για την απομάκρυνση των υψηλών επιπέδων αμμωνίας που παράγονται κατά τη διάρκεια της άσκησης [56,57]. Ο Germain και οι συνεργάτες του βρήκαν επίσης ότι ο κύκλος της ουρίας και οι οδοί ανακύκλωσης SMPDB της αμμωνίας μεταβλήθηκαν σημαντικά στο πλάσμα μεταξύ των γυναικών ασθενών με ME/CFS και των ελέγχων σε μια ανάλυση μονοπατιού όταν συνέκριναν τη διαφορά μεταξύ των επιπέδων του μεταβολίτη στις 24 ώρες μετά το CPET (P3) και 15 λεπτά μετά το CPET (P2) [25]. Η συσσώρευση αμμωνίας είχε συνδεθεί στο παρελθόν με νευροτοξικότητα και κόπωση που προκαλείται από την άσκηση [56,57]. Η απορρύθμιση του κύκλου της ουρίας στα ούρα και τα μεταβολώματα του πλάσματος μετά την άσκηση σε ασθενείς με ME/CFS μπορεί να προκαλεί συσσώρευση αμμωνίας, αλλά οι 1403 ενώσεις που μετρήθηκαν με το Metabolon στα ούρα δεν περιελάμβαναν αμμωνία επειδή είναι πτητική ένωση και επίσης μικρότερη από το όριο ανίχνευσης της πλατφόρμας Metabolon®.

Η κυστεΐνη, η μεθειονίνη, το SAM και η ταυρίνη είναι σημαντικά αμινοξέα καθώς είναι τα μόνα που περιέχουν θείο και η κυστεΐνη είναι μοναδική στην ικανότητά της να σχηματίζει δισουλφιδικούς δεσμούς. Η κυστεΐνη μπορεί επίσης να μετατραπεί σε γλουταθειόνη και ταυρίνη. Η κυστεΐνη και η μεθειονίνη παίζουν πολυάριθμους ρόλους στον κυτταρικό μεταβολισμό, αλλά είναι επίσης βασικά δομικά στοιχεία των πρωτεϊνών [37]. Λόγω της ομάδας θειόλης της, η κυστεΐνη εμπλέκεται στην κατάλυση πολλών ενζυματικών αντιδράσεων και στη διατήρηση της οξειδοαναγωγικής ομοιόστασης. Αλλαγές στον μεταβολισμό της κυστεΐνης συμβαίνουν σε πολλές νευροεκφυλιστικές διαταραχές, συμπεριλαμβανομένης της νόσου του Alzheimer, της νόσου του Huntington και της νόσου του Parkinson [58]. Ενώ ο μεταβολισμός της κυστεΐνης, της μεθειονίνης, του SAM και της ταυρίνης έδειξαν πολλές διαφορές μεταξύ των ασθενών και των μαρτύρων στις αναλύσεις μεταβολισμού των ούρων μας, οι συσχετίσεις ούρων και πλάσματος αποκάλυψαν επιπλέον ενώσεις με σημαντικές διαφορές μεταξύ των ασθενών με ME/CFS και των μαρτύρων, συμπεριλαμβανομένης της κυστεΐνης, η οποία είναι παράγεται όταν δύο κυστεΐνες οξειδώνονται για να σχηματίσουν έναν δισουλφιδικό δεσμό και η κυσταθειονίνη που είναι ενδιάμεσο στην παραγωγή κυστεΐνης στον κύκλο της μεθειονίνης [37].

3.5. Περιορισμοί

Η μελέτη μας έχει αρκετούς σημαντικούς περιορισμούς. Πρώτον, η δίαιτα των ατόμων δεν ελεγχόταν και η διαιτητική πρόσληψη μεταβολιτών μπορεί να επηρεάσει την απέκκρισή τους στα ούρα. Δεύτερον, αναγνωρίζουμε ότι η έλλειψη αντιστοίχισης ΔΜΣ δεν είναι ιδανική και αποτελεί περιορισμό αυτής της μελέτης. Η μεγαλύτερη ομάδα ασθενών μας με ME/CFS και υγιείς καθιστικοί μάρτυρες αντιστοιχεί στον ΔΜΣ και επομένως, εάν επεκταθεί αυτή η πιλοτική μελέτη, αυτό δεν θα αποτελέσει πρόβλημα στο μέλλον. Τρίτον, τα αποτελέσματά μας περιορίζονται σε γυναίκες ασθενείς με ME/CFS. Ενώ είναι πολύ σημαντικό να μελετηθούν και τα δύο φύλα σε ME/CFS και ανακαλύπτεται ένας αυξανόμενος αριθμός διαφορών φύλων στην παθοφυσιολογία [25,59,60], επιλέξαμε να επικεντρώσουμε την πιλοτική μας μελέτη στις γυναίκες λόγω της υψηλότερης επιβάρυνσης από νόσους της ΜΕ /CFS σε γυναίκες (60–65% γυναίκες) [2]. Επιπλέον, επειδή καταγράψαμε τον μεταβολισμό των ούρων μόνο σε δύο χρονικά σημεία, την έναρξη και 24 ώρες μετά την άσκηση, δεν μπορούμε να πούμε εάν οι ασθενείς με ME/CFS έχουν αλλάξει τα επίπεδα απέκκρισης ορισμένων από αυτούς τους μεταβολίτες είτε σε προγενέστερο είτε σε μεταγενέστερο χρόνο. σημείο από τα χειριστήρια. Αυτές οι αυξήσεις στα προϊόντα απέκκρισης μπορεί να συμβαίνουν σε ασθενείς αλλά με μεγαλύτερη καθυστέρηση, παρόμοια με το πώς οι ασθενείς με ME/CFS εμφανίζουν καθυστερημένη συνολική ανάκαμψη κατά την άσκηση. Ωστόσο, είναι επίσης πιθανό αυτή η έλλειψη αλλοιωμένης μεταβολικής απέκκρισης να είναι μέρος μιας συνολικής έλλειψης υγιούς μεταβολικής απόκρισης στην άσκηση.

4. Υλικά και Μέθοδοι

4.1. Θέματα Σπουδών

Οκτώ υγιείς καθιστικοί μάρτυρες και δέκα ασθενείς με ME/CFS συμπεριλήφθηκαν σε αυτή τη μελέτη. Οι ασθενείς με ME/CFS διαγνώστηκαν με τα Καναδικά Συναινετικά Κριτήρια [3]. Τα 18 άτομα που συμπεριλήφθηκαν σε αυτή τη μελέτη ήταν μέρος μιας μεγαλύτερης κοόρτης 173 συμμετεχόντων συνολικά (Αναγνωριστικό ClinicalTrials.gov: NCT04026425) [61]. Για αυτήν την πιλοτική μελέτη, όλα τα άτομα που συμπεριλήφθηκαν ήταν γυναίκες. Τα άτομα επιλέχθηκαν με τα ακόλουθα κριτήρια. Όλοι οι συμμετέχοντες πρέπει να είναι μεταξύ 18-70 ετών. Τα άτομα αποκλείστηκαν από κάθε ομάδα εάν ήταν καπνίστρια, έγκυος ή θηλάζουσα, ήταν διαβητικά, κατανάλωναν υπερβολικές ποσότητες αλκοόλ ή είχαν ορθοπεδικό περιορισμό που τους εμπόδιζε να πραγματοποιήσουν το CPET. Οι διαγνώσεις σχιζοφρένειας, μείζονος καταθλιπτικής διαταραχής, διπολικής διαταραχής ή αγχώδους διαταραχής ήταν επίσης κριτήρια αποκλεισμού και στις δύο ομάδες. Επιπλέον, οι υγιείς καθιστικοί μάρτυρες αποκλείστηκαν εάν είχαν διαγνωστεί με οποιεσδήποτε αυτοάνοσες διαταραχές. Η νεφρική λειτουργία ήταν φυσιολογική σε όλα τα άτομα για αυτήν τη μελέτη, όπως αξιολογήθηκε από τις ακόλουθες τυπικές εργαστηριακές εξετάσεις αίματος της Quest Diagnostics: κρεατινίνη ορού, άζωτο ουρίας αίματος και εκτιμώμενος ρυθμός σπειραματικής διήθησης (eGFR).

Δεκαεπτά άτομα πραγματοποίησαν τη δοκιμή άσκησης στο Ithaca College στην Ιθάκη της Νέας Υόρκης και ένα άτομο πραγματοποίησε τη δοκιμή άσκησης στο ID Med στο Torrance της Καλιφόρνια. Ζητήθηκε από όλους τους συμμετέχοντες να σταματήσουν τα συμπληρώματα διατροφής συμπεριλαμβανομένων των προβιοτικών για δύο εβδομάδες πριν από τη δοκιμή άσκησης. Ζητήθηκε από τους συμμετέχοντες να σταματήσουν τη θεραπεία για τον πόνο και τα διεγερτικά φάρμακα για δύο ημέρες πριν από τη δοκιμή άσκησης. Όλοι οι ασθενείς παρείχαν γραπτή ενημερωμένη συγκατάθεση και όλα τα πρωτόκολλα εγκρίθηκαν από το Ithaca College IRB #1017-12Dx2. Όλοι οι συμμετέχοντες συμπλήρωσαν την Κλίμακα Αναπηρίας Bell [26], τη Σύντομη Φόρμα-36 έρευνα για την υγεία [62] και τα προσαρμοσμένα ερωτηματολόγια. Οι ασθενείς με ME/CFS συμπλήρωσαν επιπλέον τον πολυδιάστατο κατάλογο κόπωσης [63].

4.2. Έλεγχος καρδιοπνευμονικής άσκησης και συλλογή δειγμάτων ούρων

Το CPET διεξήχθη σε σταθερό εργόμετρο κύκλου, με το ακόλουθο πρωτόκολλο: 3 λεπτά ανάπαυσης ακολουθούμενα από συνεχή ποδηλασία κατά την οποία ο αυξητικός φόρτος εργασίας αυξάνεται κατά 15 watt ανά λεπτό άσκησης μέχρι τη βουλητική εξάντληση (περίπου 8–10 λεπτά). Η αναλογία αναπνευστικής ανταλλαγής (RER), που είναι ο ρυθμός παραγωγής διοξειδίου του άνθρακα διαιρεμένος με τον ρυθμό κατανάλωσης οξυγόνου, μετρήθηκε για να διασφαλιστεί ότι οι συμμετέχοντες εκτελούσαν τη δοκιμή με επαρκή προσπάθεια (RER > 1,1 υποδηλώνει τη μέγιστη προσπάθεια).

Όλα τα δείγματα ούρων συλλέχθηκαν το πρωί: (1) 15-20 λεπτά πριν από το CPET και (2) 24 ώρες αργότερα. Τα ούρα συλλέχθηκαν στο μέσο της ροής σε αποστειρωμένους συλλέκτες ούρων, μοιράστηκαν σε δείγματα, φυγοκεντρήθηκαν στα 10,000× g για 10 λεπτά για να αφαιρεθούν τα κυτταρικά υπολείμματα και αποθηκεύτηκαν στους -80 ◦C. Τα δείγματα ούρων υποβλήθηκαν σε έναν κύκλο κατάψυξης/απόψυξης για περαιτέρω δειγματοληψία και τα δείγματα στάλθηκαν όλη τη νύχτα στο Metabolon® σε ξηρό πάγο.

4.3. Μεταβολική Δοκιμασία

Οι μεταβολίτες μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας την σφαιρική πλατφόρμα μεταβολομικής υγρής χρωματογραφίας Precision Metabolomics™-διαδοχικής φασματομετρίας μάζας (LC-MS/MS) στο Metabolon®. Λεπτομερείς μέθοδοι έχουν περιγραφεί προηγουμένως [64]. Εν συντομία, τα δείγματα εκχυλίστηκαν σε μεθανόλη (5:1 μεθανόλη: δείγμα) και στη συνέχεια εξατμίστηκαν. Μεταβολίτες ανιχνεύθηκαν σε κάθε δείγμα χρησιμοποιώντας τέσσερις διαφορετικές πλατφόρμες LC-MS/MS που βελτιστοποιήθηκαν για υδρόφιλες και υδρόφοβες ενώσεις και χρησιμοποιώντας θετικό και αρνητικό ιονισμό. Όλη η χρωματογραφία χρησιμοποίησε ένα Waters Acquity εξαιρετικά υψηλής απόδοσης (UP)LC και έναν όγκο έγχυσης 5 µL (με τα δείγματα ανασυσταμένα σε κατάλληλους διαλύτες για κάθε πλατφόρμα). Όλη η φασματομετρία μάζας εκτελέστηκε με φασματόμετρα υψηλής ανάλυσης/ακριβούς μάζας ThermoScientific Q-Exactive με πηγές θερμαινόμενου ιονισμού ηλεκτροψεκασμού (HESI-II) και αναλυτές μάζας Orbitrap που λειτουργούσαν σε 35,{10}} ανάλυση μάζας με εύρος σάρωσης 70–1000 m/ z. Το ιδιόκτητο λογισμικό Metabolon® χρησιμοποιήθηκε για την αντιστοίχιση πειραματικών δειγμάτων με μια βιβλιοθήκη αναφοράς προτύπων αναγνώρισης Βαθμίδας 1 όπως ορίζονται από το Metabolomics Standards Initiative και η περιοχή κάτω από την καμπύλη χρησιμοποιήθηκε για την ποσοτικοποίηση κορυφής. Οι τιμές κανονικοποιούνται ως προς τις μετρήσεις ακατέργαστων περιοχών και όλα τα δείγματα εκτελέστηκαν σε μία παρτίδα, επομένως δεν ήταν απαραίτητη η διόρθωση παρτίδας. Οι άγνωστες ενώσεις δεν έχουν πρότυπο και τα μερικώς χαρακτηρισμένα μόρια είναι εκείνα που δεν έχουν επιβεβαιωθεί επίσημα με βάση κάποιο πρότυπο ή για τα οποία δεν υπάρχει κάποιο πρότυπο, αλλά το Metabolon® είναι εύλογα σίγουρο για την ταυτότητά του.

4.4. Επεξεργασία δεδομένων

Τα ακατέργαστα δεδομένα κανονικοποιήθηκαν με ωσμωτικότητα για κάθε δείγμα και τα δεδομένα για κάθε μεταβολίτη ήταν κεντραρισμένα στο διάμεσο στο 1 (ακατέργαστα δεδομένα συμπεριλαμβανομένης της ωσμωτικότητας είναι διαθέσιμα στο Συμπληρωματικό Αρχείο S1). Οι τιμές που λείπουν καταλογίστηκαν με την ελάχιστη τιμή, εκτός από τα φάρμακα που καταλογίστηκαν ως 0. Τα δεδομένα μετασχηματίστηκαν log10 με μετασχηματισμό σταθεροποίησης διακύμανσης (MetaboanalystR) [65,66]. Συνολικά μετρήθηκαν αρχικά 1403 μεταβολίτες. Οι μεταβολίτες φιλτράρονταν σύμφωνα με τον τροποποιημένο κανόνα του 80%: μια ένωση συμπεριλήφθηκε εάν ανιχνευόταν σε τουλάχιστον 80% των δειγμάτων σε οποιαδήποτε από τις ομάδες ME/CFS ή ελέγχου [27]. Συνολικά, 1154 μεταβολίτες πληρούσαν τα κριτήρια και συμπεριλήφθηκαν σε μεταγενέστερες αναλύσεις. Η μόνη ανάλυση που πραγματοποιήθηκε χωρίς φιλτράρισμα ήταν οι συσχετίσεις με τους μεταβολίτες του πλάσματος. Οι αναλογίες μετά την άσκηση/αρχική γραμμή για κάθε μεταβολίτη υπολογίστηκαν στη λογαριθμική βάση 10 ως η τιμή μετά την άσκηση μείον την τιμή γραμμής βάσης για κάθε άτομο. Για τη γραφική παράσταση της γραφικής παράστασης του ηφαιστείου, οι μέσες αλλαγές λογαριθμικής αναδίπλωσης (ασθενείς ME/CFS έναντι μαρτύρων) μετατράπηκαν σε λογαριθμική βάση 2 χρησιμοποιώντας την αλλαγή του τύπου βάσης.

4.5. Ανάλυση Δεδομένων και Στατιστική

Πραγματοποιήθηκε μονομεταβλητή στατιστική ανάλυση για κάθε μεταβολίτη χρησιμοποιώντας ένα γραμμικό μικτό μοντέλο με σταθερές επιδράσεις της κατάστασης της νόσου, του χρονικού σημείου, της ηλικίας και του ΔΜΣ και μια τυχαία επίδραση του υποκειμένου (πακέτα έξυπνων [67] και μέσου όρου [68] R). Η μέθοδος Benjamini–Hochberg (BH) χρησιμοποιήθηκε για τη διόρθωση του λανθασμένου ποσοστού ανακάλυψης, με q < 0.1 να χρησιμοποιείται ως κατώφλι για τη σημασία. Το πακέτο EnhancedVolcano R χρησιμοποιήθηκε για οικόπεδα ηφαιστείων [69].

Το ChemRICH στο R χρησιμοποιήθηκε για την εκτέλεση της ανάλυσης μη επικαλυπτόμενων μονοπατιών με τα υπομονοπάτια που ορίζονται από το Metabolon® και τη σειρά μονοπατιών [29]. Το εργαλείο Ιστού ChemRICH χρησιμοποιήθηκε για την εκτέλεση της ανάλυσης ομαδοποίησης χημικής ομοιότητας [30]. Για αυτήν την ανάλυση, μπόρεσαν να συμπεριληφθούν μόνο ενώσεις που είχαν γνωστό κωδικό SMILES, για συνολικά 516 ενώσεις. Και για τις δύο αναλύσεις ChemRICH, οι στατιστικές εμπλουτισμού πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας τη δοκιμή Kolmogorov–Smirnov, η οποία δεν χρησιμοποιεί αποκοπή σημαντικότητας p-value, αλλά μάλλον συγκρίνει την κατανομή πιθανότητας με μια μηδενική υπόθεση κατανομή πιθανότητας [70]. Για τις δευτερεύουσες οδούς Metabolon®, το q < 0.05 επιλέχθηκε ως όριο σημαντικότητας και το q < 0,15 επιλέχθηκε για τις χημικές συστάδες (διόρθωση BH FDR). Και για τα δύο, όλα τα συμπλέγματα κάτω από τα όρια q που επιλέχθηκαν είχαν επίσης p < 0,05.

Ο εμπλουτισμός μονοπατιών και η ανάλυση τοπολογίας πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το διαδικτυακό εργαλείο Metaboanalyst 5.0 [65], τόσο για τα ανθρώπινα μεταβολώματα αναφοράς KEGG όσο και για τα SMPDB με τις ακόλουθες παραμέτρους επιλεγμένες: μια συνολική δοκιμή για τη δοκιμή στατιστικών και η σχετική μεταξύ τους κεντρικότητα ως το μέτρο σημασίας του κόμβου. Οι ενώσεις συμπεριλήφθηκαν σε αυτήν την ανάλυση εάν το HMDB ID που παρέχεται από την Metabolon® ταίριαζε με το HMDB ID στο Metaboanalyst. Για διπλές ενώσεις για ένα αναγνωριστικό HMDB, συμπεριλήφθηκε μόνο η πρώτη. Αυτό είχε ως αποτέλεσμα 453 συμπεριλαμβανόμενες ενώσεις.

Η ομαδοποίηση των υποκειμένων χρησιμοποιώντας τις τέσσερις ενώσεις που ήταν σημαντικά διαφορετικές μεταξύ των ασθενών και των ελέγχων μετά την άσκηση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση ιεραρχικής ομαδοποίησης, με την Ευκλείδεια απόσταση ως μετρική απόστασης, και τη μέθοδο "Ward.D2" (πακέτο Heatmap R [71 ]).

Οι συσχετίσεις Pearson μεταξύ ούρων και πλάσματος για 727 μεταβολίτες που μετρήθηκαν και στα δύο βιορευστά πραγματοποιήθηκαν σε R (πακέτο hmisc). Οι τιμές p υπολογίστηκαν για κάθε συσχέτιση χρησιμοποιώντας ένα τεστ t με τη μηδενική υπόθεση ότι ο συντελεστής συσχέτισης ισούται με 0, ακολουθούμενο από διόρθωση BH FDR με q < 0.15 ως όριο σημαντικότητας. Για το Σχήμα 8, οι ενώσεις εξετάστηκαν για να αφαιρεθούν εκείνες που είχαν ακραίες ακραίες τιμές χρησιμοποιώντας την τροποποιημένη μέθοδο z-score, η οποία υπολογίζει μια βαθμολογία z χρησιμοποιώντας τη διάμεση και τη διάμεση απόλυτη απόκλιση (πακέτο R outliers, κατώφλι z=6).

Εκτός εάν ορίζεται διαφορετικά, όλες οι οπτικοποιήσεις δεδομένων πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το πακέτο ggplot2 R. Η διόρθωση BH FDR επιλέχθηκε για όλες τις αναλύσεις αντί της πιο αυστηρής διόρθωσης Benjamini και Yekutieli FDR επειδή ένας εξαιρετικά μικρός αριθμός ενώσεων βρέθηκε να είναι συγγραμμικός (0.75% των στόχων είχε απόλυτη τιμή Συντελεστής συσχέτισης Pearson > { {3}}.7).

5. Συμπεράσματα

Συνολικά, υπήρξαν σημαντικές διαφορές στο μεταβολισμό των ούρων στους υγιείς καθιστικούς μάρτυρες και στους ασθενείς με ME/CFS ως απόκριση σε πρόκληση CPET σε ένα μεγάλο εύρος μεταβολικών σούπερ και υπομονάδων, που καλύπτουν αμινοξέα, λιπίδια, υδατάνθρακες, νουκλεοτίδια, ξενοβιοτικά και άγνωστοι. Αυτά τα μονοπάτια εμπλέκονται σε ένα πλήθος φυσιολογικών λειτουργιών, συμπεριλαμβανομένου αλλά χωρίς περιορισμό του ενεργειακού μεταβολισμού. Αυτό δείχνει ότι οι ασθενείς με ME/CFS έχουν μια γενική μεταβολική δυσρύθμιση που αποτελεί μέρος της δυσανεξίας στην άσκηση και PEM στην οποία η τροποποιημένη μεταβολική απέκκριση είναι ένας παράγοντας που συμβάλλει. Τα δεδομένα μας υποδηλώνουν ότι οι μεταβολισμοί των καθιστικών ατόμων που δεν έχουν ME/CFS υφίστανται σημαντικές αλλαγές που τους επιτρέπουν να αναρρώσουν από την προσπάθεια, ενώ οι ασθενείς με ME/CFS αποτυγχάνουν να κάνουν παρόμοιες προσαρμοστικές αποκρίσεις. Η μελλοντική εργασία θα περιλαμβάνει την επέκταση αυτής της μελέτης σε μια πολύ μεγαλύτερη κοόρτη που περιλαμβάνει και τα δύο φύλα για να επικυρωθούν αυτά τα αποτελέσματα, να εξεταστούν οι διαφορές φύλου στο μεταβολισμό των ούρων και να διερευνηθεί εάν υπάρχουν πιο ανεπαίσθητες διαφορές στους μεταβολίτες των ούρων σε ασθενείς με ME/CFS κατά την έναρξη που θα μπορούσαν ενδεχομένως να συμβάλλουν σε μια διαγνωστική εξέταση για τη νόσο στο μέλλον.

Συνεισφορές συγγραφέα:Conceptualization, AG, KAG και MRH. μεθοδολογία, AG, KAG, YVH και MRH. επίσημη ανάλυση, KAG, AG και YVH. έρευνα, KAG, AG και YVH· σύνταξη — προετοιμασία πρωτότυπου σχεδίου, KAG, AG και MRH. συγγραφή — κριτική και επιμέλεια, όλοι οι συγγραφείς. οπτικοποίηση, KAG και AG. διαχείριση έργου, MRH; απόκτηση χρηματοδότησης, MRH Όλοι οι συγγραφείς έχουν διαβάσει και έχουν συμφωνήσει με τη δημοσιευμένη έκδοση του χειρογράφου.

Χρηματοδότηση:Αυτή η έρευνα υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Ινστιτούτο Νευρολογικών Διαταραχών και Εγκεφαλικού (NINDS), NIH (U54NS105541) και το Ίδρυμα Amar. Το Εθνικό Κέντρο για την Προώθηση Μεταφραστικών Επιστημών του NIH παρείχε χρηματοδότηση για το Weill Cornell Medicine Clinical and Translational Science Center (CTSC) για τη διατήρηση της βάσης δεδομένων REDCap μέσω του UL1 TR 002384.

Δήλωση του Συμβουλίου Θεσμικής Αναθεώρησης:Η μελέτη διεξήχθη σύμφωνα με τις οδηγίες της Διακήρυξης του Ελσίνκι και εγκρίθηκε από το Ithaca College Institutional Review Board, Ithaca, New York, USA (πρωτόκολλο 1017-12Dx2) και το Weill Cornell Medical College Institutional Review Board ( πρωτοκόλλου 1708018518).

Δήλωση ενημερωμένης συναίνεσης:Ελήφθη ενημερωμένη συγκατάθεση από όλα τα άτομα που συμμετείχαν στη μελέτη.

Δήλωση διαθεσιμότητας δεδομένων:Όλα τα δεδομένα μεταβολιτών για κάθε άτομο είναι διαθέσιμα στα παρεχόμενα Συμπληρωματικά Αρχεία Δεδομένων.

Ευχαριστίες:Ο Carl Franconi διαχειριζόταν τη βάση δεδομένων και τη βιοτράπεζα στο Πανεπιστήμιο Cornell. Τα δείγματα αίματος κλασματοποιήθηκαν από τον David Wang στο EVMED Research με την υποστήριξη του Workwell Foundation και από τους Ivan Falsztyn, Carl Franconi, Ludovic Giloteaux, Madeline McCanne, Jineet Patel, Adam O'Neal, Alexandra Mandarano, Jessica Maya, Shannon Appelquist στο Πανεπιστήμιο Cornell. Ευχαριστούμε τα ακόλουθα άτομα που συμμετείχαν στον έλεγχο των συμμετεχόντων, πραγματοποιώντας τεστ άσκησης ή/και συλλέγοντας αίμα και ούρα: Betsy Keller, John Chia, Jared Stevens, Tiffany Ong και Maria Russell.

Σύγκρουση συμφερόντων:Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν υπάρχει σύγκρουση συμφερόντων. Οι χρηματοδότες δεν είχαν κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης. στη συλλογή, αναλύσεις ή ερμηνεία δεδομένων· στη συγγραφή του χειρογράφου· ή στην απόφαση δημοσίευσης των αποτελεσμάτων.

βιβλιογραφικές αναφορές

1. Jason, LA; Mirin, AA Ενημέρωση της Εθνικής Ακαδημίας Ιατρικής για τον επιπολασμό ME/CFS και τον οικονομικό αντίκτυπο για να ληφθεί υπόψη η πληθυσμιακή αύξηση και ο πληθωρισμός. Fatigue Biomed. Συμπεριφορά Υγείας. 2021, 9, 9–13. [CrossRef]

2. Valdez, AR; Hancock, EE; Adebayo, S.; Kiernicki, DJ; Proskauer, D.; Attewell, JR; Bateman, L.; DeMaria, A., Jr.; Lapp, CW; Rowe, PC; et al. Εκτίμηση του επιπολασμού, των δημογραφικών στοιχείων και του κόστους του ME/CFS με χρήση δεδομένων ιατρικών αξιώσεων μεγάλης κλίμακας και μηχανικής μάθησης. Εμπρός. Παιδιατρ. 2018, 6, 412. [CrossRef] [PubMed]

3. Carruthers, BM; Jain, AK; De Meirleir, KL; Peterson, DL; Klimas, NG; Lerner, AM; Bested, AC; Flor-Henry, Ρ.; Joshi, Ρ.; Powles, AP; et al. Μυαλγική εγκεφαλομυελίτιδα/Σύνδρομο χρόνιας κόπωσης: Ορισμός κλινικής περίπτωσης εργασίας, πρωτόκολλα διάγνωσης και θεραπείας. J. Σύνδρομο Χρόνιας Κόπωσης. 2003, 11, 7–115. [CrossRef]

4. Chu, L.; Valencia, IJ; Garvert, DW; Montoya, JG Αποδομώντας την αδιαθεσία μετά την καταπόνηση στο σύνδρομο μυαλγικής εγκεφαλομυελίτιδας/χρόνιας κόπωσης: Ασθενοκεντρική, διατομική έρευνα. PLoS ONE 2018, 13, e0197811. [CrossRef]

5. Stussman, Β.; Williams, Α.; Snow, J.; Gavin, Α.; Scott, R.; Nath, Α.; Walitt, B. Χαρακτηρισμός της δυσφορίας μετά την άσκηση σε ασθενείς με μυαλγική εγκεφαλομυελίτιδα/σύνδρομο χρόνιας κόπωσης. Εμπρός. Neurol. 2020, 11, 1025. [CrossRef]

6. Stevens, S.; Snell, C.; Stevens, J.; Keller, Β.; VanNess, JM Cardiopulmonary Exercise Test Methodology for Assessing Exertion Intolerance in Myalgic Encephalomyelitis/Chronic Fatigue Syndrome. Εμπρός. Παιδιατρ. 2018, 6, 242. [CrossRef]

7. Vanness, JM; Snell, CR; Stevens, SR Μειωμένη καρδιοπνευμονική ικανότητα κατά τη διάρκεια της δυσφορίας μετά την άσκηση. J. Σύνδρομο Χρόνιας Κόπωσης. 2007, 14, 77–85. [CrossRef]

8. Keller, BA; Pryor, JL; Giloteaux, L. Η αδυναμία των ασθενών με μυαλγική εγκεφαλομυελίτιδα/σύνδρομο χρόνιας κόπωσης να αναπαράγουν την κορυφή VO(2) υποδηλώνει λειτουργική έκπτωση. J. Transl. Med. 2014, 12, 104. [CrossRef]

9. Μισσαηλίδης, Δ.; Annesley, SJ; Fisher, PR Παθολογικοί Μηχανισμοί Υποκείμενοι στη Μυαλγική Εγκεφαλομυελίτιδα/Σύνδρομο Χρόνιας Κόπωσης. Diagnostics 2019, 9, 80. [CrossRef]

10. Huth, TK; Eaton-Fitch, Ν.; Staines, D.; Marshall-Gradisnik, S. Μια συστηματική ανασκόπηση της μεταβολομικής δυσρύθμισης στο Σύνδρομο Χρόνιας Κόπωσης/Μυαλγική Εγκεφαλομυελίτιδα/Νόσος της Συστημικής Δυσανεξίας στην Καταπόνηση (CFS/ME/SEID). J. Transl. Med. 2020, 18, 198. [CrossRef]

11. Germain, Α.; Barupal, DK; Levine, SM; Hanson, MR Comprehensive Circulatory Metabolomics in ME/CFS Reveals Disrupted Metabolism of Acyl Lipids and Steroids. Metabolites 2020, 10, 34. [CrossRef]

12. Germain, Α.; Ruppert, D.; Levine, SM; Hanson, MR Το μεταβολικό προφίλ μιας μυαλγικής εγκεφαλομυελίτιδας/συνδρόμου χρόνιας κόπωσης κοόρτη ανακάλυψης αποκαλύπτει διαταραχές στο μεταβολισμό των λιπαρών οξέων και των λιπιδίων. ΜοΙ. Biosyst. 2017, 13, 371–379. [CrossRef]

13. Germain, Α.; Ruppert, D.; Levine, SM; Hanson, MR Prospective Biomarkers from Plasma Metabolomics of Myalgic Encephalomyelitis/Chronic Fatigue Syndrome Implicate Redox Imbalance in Disease Symptomatology. Μεταβολίτες 2018, 8, 90. [CrossRef]

14. Yamano, Ε.; Sugimoto, Μ.; Hirayama, Α.; Kume, S.; Yamato, Μ.; Jin, G.; Tajima, S.; Goda, Ν.; Iwai, Κ.; Fukuda, S.; et al. Δείκτες δεικτών συνδρόμου χρόνιας κόπωσης με δυσλειτουργία των κύκλων TCA και ουρίας. Sci. Απ. 2016, 6, 34990. [CrossRef]

15. Armstrong, CW; McGregor, NR; Sheedy, JR; Buttfield, I.; Butt, HL; Το μεταβολικό προφίλ του ορού Gooley, PR NMR εντοπίζει διαταραχές αμινοξέων στο σύνδρομο χρόνιας κόπωσης. Clin. Chim. Acta 2012, 413, 1525–1531. [CrossRef]

16. Armstrong, CW; McGregor, NR; Lewis, DP; Butt, HL; Gooley, PR Η συσχέτιση της μικροχλωρίδας των κοπράνων και των μεταβολιτών κοπράνων, ορού αίματος και ούρων στο σύνδρομο μυαλγικής εγκεφαλομυελίτιδας/χρόνιας κόπωσης. Metabolomics 2016, 13, 8. [CrossRef]

17. Hoel, F.; Hoel, Α.; Pettersen, ΙΚ; Rekeland, IG; Risa, Κ.; Alme, Κ.; Sorland, Κ.; Fossa, Α.; Lien, Κ.; Herder, Ι.; et al. Χάρτης μεταβολικών φαινοτύπων σε ασθενείς με μυαλγική εγκεφαλομυελίτιδα/σύνδρομο χρόνιας κόπωσης. JCI Insight 2021, 6, e149217. [CrossRef]

18. Nagy-Szakal, D.; Barupal, DK; Lee, Β.; Che, Χ.; Williams, BL; Kahn, EJR; Ukaigwe, JE; Bateman, L.; Klimas, NG; Komaroff, AL; et al. Πληροφορίες για τον φαινότυπο μυαλγικής εγκεφαλομυελίτιδας/συνδρόμου χρόνιας κόπωσης μέσω ολοκληρωμένης μεταβολομικής. Sci. Απ. 2018, 8, 10056. [CrossRef]

19. McGregor, NR; Armstrong, CW; Lewis, DP; Gooley, PR Η δυσφορία μετά την άσκηση σχετίζεται με τον υπερμεταβολισμό, την υποακετυλίωση και την απορρύθμιση του μεταβολισμού πουρίνης σε περιπτώσεις ME/CFS. Diagnostics 2019, 9, 70. [CrossRef]

20. Armstrong, CW; McGregor, NR; Lewis, DP; Butt, HL; Gooley, PR Το μεταβολικό προφίλ αποκαλύπτει ανώμαλο ενεργειακό μεταβολισμό και μονοπάτια οξειδωτικού στρες σε ασθενείς με σύνδρομο χρόνιας κόπωσης. Metabolomics 2015, 11, 1626–1639. [CrossRef]

21. Fluge, Ο.; Mella, Ο.; Bruland, Ο.; Risa, Κ.; Dyrstad, SE; Alme, Κ.; Rekeland, IG; Sapkota, D.; Rosland, GV; Fossa, Α.; et al. Το μεταβολικό προφίλ υποδεικνύει μειωμένη λειτουργία της πυροσταφυλικής αφυδρογονάσης σε μυαλγική εγκεφαλοπάθεια/σύνδρομο χρόνιας κόπωσης. JCI Insight 2016, 1, e89376. [CrossRef] [PubMed]

22. Naviaux, RK; Naviaux, JC; Li, Κ.; Bright, AT; Alaynick, WA; Wang, L.; Baxter, Α.; Nathan, Ν.; Anderson, W.; Gordon, E. Μεταβολικά χαρακτηριστικά του συνδρόμου χρόνιας κόπωσης. Proc. Natl. Ακαδ. Sci. ΗΠΑ 2016, 113, E5472–E5480. [CrossRef] [PubMed]

23. Jones, MG; Cooper, Ε.; Amjad, S.; Goodwin, CS; Barron, JL; Chalmers, RA Οργανικά οξέα και αμινοξέα ούρων και πλάσματος στο σύνδρομο χρόνιας κόπωσης. Clin. Chim. Acta 2005, 361, 150–158. [CrossRef] [PubMed]

24. Niblett, SH; King, KE; Dunstan, RH; Clifton-Bligh, Ρ.; Hoskin, LA; Roberts, TK; Fulcher, GR; McGregor, NR; Dunsmore, JC; Butt, HL; et al. Αιματολογικές και ουρικές ανωμαλίες απέκκρισης σε ασθενείς με σύνδρομο χρόνιας κόπωσης. Exp. Biol. Med. 2007, 232, 1041–1049. [CrossRef] [PubMed]

25. Germain, Α.; Giloteaux, L.; Moore, GE; Levine, SM; Chia, JK; Keller, BA; Stevens, J.; Franconi, CJ; Mao, Χ.; Shungu, DC; et al. Η μεταβολομική του πλάσματος αποκαλύπτει διαταραγμένη απόκριση και ανάκαμψη μετά από μέγιστη άσκηση στο σύνδρομο μυαλγικής εγκεφαλομυελίτιδας/χρόνιας κόπωσης. JCI Insight 2022, 7, e157621. [CrossRef]

26. Bell, DS The Doctor's Guide to Chronic Fatigue Syndrome. Κατανόηση, θεραπεία και ζωή με το CFIDS. Addison-Wesley Publishing Company: Reading, MA, ΗΠΑ, 1994.

27. Yang, J.; Zhao, Χ.; Lu, Χ.; Lin, Χ.; Xu, G. Μια στρατηγική προεπεξεργασίας δεδομένων για τη μεταβολομική για τη μείωση της επίδρασης κάλυψης στην ανάλυση δεδομένων. Εμπρός. ΜοΙ. Biosci. 2015, 2, 4. [CrossRef]

28. Benjamini, Υ.; Hochberg, Y. Controlling the False Discovery Rate: A Practical and Powerful Approach to Multiple Testing. JR Stat. Soc. Ser. Β 1995, 57, 289–300. [CrossRef]

29. Barupal, DK; Fan, S.; Fiehn, O. Ενσωμάτωση προσεγγίσεων βιοπληροφορικής για μια ολοκληρωμένη ερμηνεία των συνόλων δεδομένων μεταβολομικής. Curr. Γνώμη. Biotechnol. 2018, 54, 1–9. [CrossRef]

30. Barupal, DK; Fiehn, O. Chemical Similarity Enrichment Analysis (ChemRICH) ως εναλλακτική λύση στη χαρτογράφηση βιοχημικών οδών για μεταβολομικά σύνολα δεδομένων. Sci. Rep. 2017, 7, 14567. [CrossRef]

31. Goeman, JJ; van de Geer, SA; de Kort, F.; van Houwelingen, HC Μια παγκόσμια δοκιμή για ομάδες γονιδίων: Συσχέτιση δοκιμών με κλινικό αποτέλεσμα. Bioinformatics 2004, 20, 93–99. [CrossRef]

32. Rosato, Α.; Tenori, L.; Cascante, Μ.; De Atauri Carulla, PR; Martins Dos Santos, VAP; Saccenti, E. Από τη συσχέτιση στην αιτιότητα: Ανάλυση μεταβολομικών δεδομένων χρησιμοποιώντας προσεγγίσεις βιολογίας συστημάτων. Metabolomics 2018, 14, 37. [CrossRef]

33. Cardounel, AJ; Cui, Η.; Samouilov, Α.; Johnson, W.; Kearns, Ρ.; Tsai, AL; Berka, V.; Zweier, JL Στοιχεία για τον παθοφυσιολογικό ρόλο των ενδογενών μεθυλαργινινών στη ρύθμιση της παραγωγής ΝΟ του ενδοθηλίου και της αγγειακής λειτουργίας. J. Biol. Chem. 2007, 282, 879–887. [CrossRef]

34. Chandrasekharan, UM; Wang, Ζ.; Wu, Υ.; Wilson Tang, WH; Hazen, SL; Wang, S.; Elaine Husni, M. Αυξημένα επίπεδα συμμετρικής διμεθυλαργινίνης στο πλάσμα και αυξημένη δραστηριότητα αργινάσης ως πιθανοί δείκτες καρδιαγγειακής συννοσηρότητας στη ρευματοειδή αρθρίτιδα. Arthritis Res. Εκεί. 2018, 20, 123. [CrossRef]

35. Siroen, MP; Teerlink, Τ.; Nijveldt, RJ; Prins, ΗΑ; Richir, MC; van Leeuwen, PA Η κλινική σημασία της ασύμμετρης διμεθυλαργινίνης. Annu. Αιδ. Nutr. 2006, 26, 203–228. [CrossRef]

36. Bertinat, R.; Villalobos-Labra, R.; Hofmann, L.; Blauensteiner, J.; Sepulveda, Ν.; Westermeier, F. Μειωμένη παραγωγή ΝΟ σε ενδοθηλιακά κύτταρα που εκτέθηκαν στο πλάσμα από ασθενείς με ME/CFS. Vasc. Pharmacol. 2022, 143, 106953. [CrossRef]

37. Brosnan, JT; Brosnan, ME Τα αμινοξέα που περιέχουν θείο: Μια επισκόπηση. J. Nutr. 2006, 136, 1636S–1640S. [CrossRef]

38. Fernández-García, JC; Martínez-Sánchez, MA; Bernal-López, MR; Muñoz-Garach, Α.; Martínez-González, MA; Fitó, M.; Salas-Salvadó, J.; Tinahones, FJ; Ramos-Molina, B. Επίδραση ενός προγράμματος παρέμβασης στον τρόπο ζωής με μεσογειακή δίαιτα περιορισμένης ενέργειας και άσκηση στον μεταβολισμό της πολυαμίνης ορού σε άτομα με υψηλό κίνδυνο καρδιαγγειακής νόσου: Μια τυχαιοποιημένη κλινική δοκιμή. Είμαι. J. Clin. Nutr. 2020, 111, 975–982. [CrossRef]

39. Wang, W.; Zhang, Η.; Xue, G.; Zhang, L.; Zhang, W.; Wang, L.; Lu, F.; Li, Η.; Bai, S.; Lin, Υ.; et al. Η άσκηση διατηρεί την ισχαιμική προετοιμασία σε ηλικιωμένες καρδιές αρουραίων αποκαθιστώντας τη δεξαμενή πολυαμίνης του μυοκαρδίου. Οξείδιο. Med. Κύτταρο. Λόνγκεφ. 2014, 2014, 457429. [CrossRef]

40. Blomstrand, Ε.; Eliasson, J.; Karlsson, HK; Kohnke, R. Τα αμινοξέα διακλαδισμένης αλυσίδας ενεργοποιούν βασικά ένζυμα στη σύνθεση πρωτεϊνών μετά από σωματική άσκηση. J. Nutr. 2006, 136, 269S–273S. [CrossRef]

41. Newsholme, Ρ.; Stenson, L.; Sulvucci, Μ.; Sumayao, R.; Krause, M. 1.02-Μεταβολισμός αμινοξέων. In Comprehensive Biotechnology, 2nd ed.; Moo-Young, Μ., Εκδ.; Academic Press: Burlington, ON, Καναδάς, 2011; σελ. 3–14. [CrossRef]

42. Li, S.; Gao, D.; Jiang, Y. Function, Detection and Alteration of Acylcarnitine Metabolism in Hepatocellular Carcinoma. Metabolites 2019, 9, 36. [CrossRef]

43. Braun, TP; Marks, DL Η ρύθμιση της μυϊκής μάζας από ενδογενή γλυκοκορτικοειδή. Εμπρός. Physiol. 2015, 6, 12. [CrossRef] [PubMed]

44. Furman, BL Mineralocorticoids. Στο xPharm: The Comprehensive Pharmacology Reference; Enna, SJ, Bylund, DB, Eds.; Elsevier: Νέα Υόρκη, Νέα Υόρκη, ΗΠΑ, 2007; Π. 1. [CrossRef]

45. Kavyani, Β.; Lidbury, BA; Schloeffel, R.; Fisher, PR; Μισσαηλίδης, Δ.; Annesley, SJ; Dehhaghi, Μ.; Heng, Β.; Guillemin, GJ Θα μπορούσε η οδός της κυνουρενίνης να είναι το βασικό κομμάτι που λείπει από το σύνθετο παζλ Μυαλγικής Εγκεφαλομυελίτιδας/Σύνδρομου Χρόνιας Κόπωσης (ME/CFS); Κύτταρο. ΜοΙ. Life Sci. 2022, 79, 412. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Kossman, DA; Williams, NI; Domchek, SM; Kurzer, MS; Stopfer, JE; Schmitz, KH Η άσκηση μειώνει τα επίπεδα οιστρογόνων και προγεστερόνης σε προεμμηνοπαυσιακές γυναίκες με υψηλό κίνδυνο καρκίνου του μαστού. J. Appl. Physiol. 2011, 111, 1687–1693. [CrossRef] [PubMed]

47. De Souza, MJ; Van Heest, J.; Demers, LM; Lasley, BL Ανεπάρκεια ωχρινικής φάσης σε δρομείς αναψυχής: Απόδειξη για υπομεταβολική κατάσταση. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2003, 88, 337–346. [CrossRef]

48. Mukherjee, Κ.; Edgett, BA; Burrows, HW; Castro, C.; Griffin, JL; Schwertani, AG; Gurd, BJ; Funk, CD Τρανσκριπτομική ολικού αίματος και μεταβολομική των ούρων για τον καθορισμό προσαρμοστικών βιοχημικών οδών άσκησης υψηλής έντασης σε αθλητές 50–{3}} ετών. PLoS ONE 2014, 9, e92031. [CrossRef]

49. Schranner, D.; Kastenmuller, G.; Schonfelder, Μ.; Romisch-Margl, W.; Wackerhage, H. Μεταβολές της συγκέντρωσης του μεταβολίτη στους ανθρώπους μετά από μια περίοδο άσκησης: Μια συστηματική ανασκόπηση των μελετών μεταβολικής της άσκησης. Sports Med. Ανοιχτά 2020, 6, 11. [CrossRef]

50. Kistner, S.; Rist, MJ; Doring, Μ.; Dorr, C.; Neumann, R.; Hartel, S.; Bub, A. An NMR-Based Approach to Identify Urinary Metabolits που σχετίζονται με την οξεία σωματική άσκηση και την καρδιοαναπνευστική ικανότητα σε υγιείς ανθρώπους-Αποτελέσματα της μελέτης KarMeN. Metabolites 2020, 10, 212. [CrossRef]

51. Kuratsune, Η.; Yamaguti, Κ.; Takahashi, Μ.; Misaki, Η.; Tagawa, S.; Kitani, T. Ανεπάρκεια ακυλοκαρνιτίνης στο σύνδρομο χρόνιας κόπωσης. Clin. Μολύνω. Dis. 1994, 18 (Suppl. 1), S62–S67. [CrossRef]

52. Jones, MG; Goodwin, CS; Amjad, S.; Chalmers, RA Πλάσματος και καρνιτίνης ούρων και ακυλκαρνιτίνες στο σύνδρομο χρόνιας κόπωσης. Clin. Chim. Acta 2005, 360, 173–177. [CrossRef]

53. Zhang, J.; Φως, AR; Hoppel, CL; Campbell, C.; Chandler, CJ; Burnett, DJ; Souza, EC; Casazza, GA; Hughen, RW; Keim, NL; et al. Οι ακυλκαρνιτίνες ως δείκτες κατανομής καυσίμου που σχετίζεται με την άσκηση, ξενομεταβολισμός και πιθανά σήματα στους μυϊκούς προσαγωγούς νευρώνες. Exp. Physiol. 2017, 102, 48–69. [CrossRef]

54. Costa, CG; Guerand, WS; Struys, EA; Holwerda, U.; ten Brink, HJ; Tavares de Almeida, Ι.; Duran, Μ.; Jakobs, C. Ποσοτική ανάλυση ακυλογλυκινών ούρων για τη διάγνωση ελαττωμάτων βήτα-οξείδωσης χρησιμοποιώντας GC-NCI-MS. J. Pharm. Biomed. Πρωκτικός. 2000, 21, 1215–1224. [CrossRef]

55. Maya, J.; Leddy, SM; Gottschalk, CG; Peterson, DL; Hanson, MR Altered Fatty Acid Oxidation σε πληθυσμούς λεμφοκυττάρων μυαλγικής εγκεφαλομυελίτιδας/Σύνδρομο χρόνιας κόπωσης. Int. J. ΜοΙ. Sci. 2023, 24, 2010. [CrossRef]

56. Wilkinson, DJ; Smeeton, NJ; Watt, PW Μεταβολισμός αμμωνίας, εγκέφαλος και κόπωση. επανεξέταση του συνδέσμου. Επαιτώ. Neurobiol. 2010, 91, 200–219. [CrossRef]

57. Chen, S.; Minegishi, Υ.; Hasumura, Τ.; Shimotoyodome, Α.; Ota, N. Συμμετοχή του μεταβολισμού της αμμωνίας στη βελτίωση της απόδοσης αντοχής από κατεχίνες τσαγιού σε ποντίκια. Sci. Rep. 2020, 10, 6065. [CrossRef]

58. Paul, BD; Sbodio, JI; Snyder, Μεταβολισμός SH Κυστεΐνης στην Ομοιόσταση Οξειδοαναγωγής Νευρωνών. Trends Pharmacol. Sci. 2018, 39, 513–524. [CrossRef]

59. Nkiliza, Α.; Parks, Μ.; Cseresznye, Α.; Oberlin, S.; Evans, JE; Darcey, Τ.; Aenlle, Κ.; Niedospial, D.; Mullan, Μ.; Crawford, F.; et al. Ειδικά για το φύλο προφίλ λιπιδίων του πλάσματος ασθενών με ME/CFS και η συσχέτισή τους με πόνο, κόπωση και γνωστικά συμπτώματα. J. Transl. Med. 2021, 19, 370. [CrossRef]

60. O'Neal, AJ; Glass, KA; Emig, CJ; Vitug, ΑΑ; Henry, SJ; Shungu, DC; Mao, Χ.; Levine, SM; Hanson, MR Survey of Anti-Pathogen Antibody Levels in Myalgic Encephalomyelitis/Chronic Fatigue Syndrome. Proteomes 2022, 10, 21. [CrossRef]

61. Ανάλυση της δυσφορίας μετά την άσκηση με χρήση CPET δύο ημερών σε άτομα με ME/CFS.

62. Ware, JE, Jr.; Sherbourne, CD The MOS 36-στοιχείο σύντομη έρευνα υγείας (SF-36). I. Εννοιολογικό πλαίσιο και επιλογή αντικειμένων. Med. Care 1992, 30, 473-483. [CrossRef]

63. Smets, EM; Garssen, Β.; Bonke, Β.; De Haes, JC Οι ψυχομετρικές ιδιότητες του πολυδιάστατου καταλόγου κόπωσης (MFI) ενός οργάνου για την αξιολόγηση της κόπωσης. J. Psychosom. Res. 1995, 39, 315-325. [CrossRef]

64. Ford, L.; Kennedy, AD; Goodman, KD; Pappan, KL; Evans, AM; Miller, LAD; Wulff, JE; Wiggs, BR; Lennon, JJ; Elsea, S.; et al. Ακρίβεια Πλατφόρμας Προφίλ Κλινικής Μεταβολομικής για Χρήση στον Εντοπισμό Εγγενών Σφαλμάτων του Μεταβολισμού. J. Appl. Εργαστήριο. Med. 2020, 5, 342–356. [CrossRef]

65. Pang, Ζ.; Chong, J.; Zhou, G.; de Lima Morais, DA; Chang, L.; Barrette, Μ.; Gauthier, C.; Jacques, PE; Li, S.; Xia, J. MetaboAnalyst 5.0: Μειώνοντας το χάσμα μεταξύ των πρωτογενών φασμάτων και των λειτουργικών πληροφοριών. Nucleic Acids Res. 2021, 49, Ε388–Ε396. [CrossRef] [PubMed]

66. Durbin, BP; Hardin, JS; Hawkins, DM; Rocke, DM Μετασχηματισμός σταθεροποίησης διακύμανσης για δεδομένα μικροσυστοιχίας έκφρασης γονιδίων. Bioinformatics 2002, 18 (Suppl. 1), S105–S110. [CrossRef] [PubMed]

67. Kuznetsova, Α.; Brockhoff, PB; Christensen, RHB lmerTest Package: Tests in Linear Mixed Effect Models. J. Stat. Softw. 2017, 82, 1–26. [CrossRef]

68. Lenth, R. Emmeans: Estimated Marginal Means, aka Least-Squares Means, 1.8.2; Πακέτο R. 2022.

69. Blighe, Κ.; Rana, S.; Lewis, M. EnhancedVolcano: Publication-Ready Volcano Plots with Enhanced Coloring and Labeling, Έκδοση 1.16.0; Πακέτο R. 2022.

70. Smirnov, NV Σχετικά με την εκτίμηση της απόκλισης μεταξύ των εμπειρικών καμπυλών κατανομής για δύο ανεξάρτητα δείγματα. Ταύρος. Μαθηματικά. Παν. Moscou 1939, 2, 3–14.

71. Kolde, R. Pheatmap: Pretty Heatmaps, 1.0.12; Πακέτο R. 2019.

Αποποίηση ευθύνης/Σημείωση εκδότη:Οι δηλώσεις, οι απόψεις και τα δεδομένα που περιέχονται σε όλες τις δημοσιεύσεις είναι αποκλειστικά του μεμονωμένου συγγραφέα ή συντελεστών και όχι του MDPI ή/και του συντάκτη. Το MDPI ή/και ο συντάκτης αποποιούνται την ευθύνη για οποιονδήποτε τραυματισμό ατόμων ή περιουσίας που προκύπτει από οποιεσδήποτε ιδέες, μεθόδους, οδηγίες ή προϊόντα που αναφέρονται στο περιεχόμενο.

【Επικοινωνία】Email: george.deng@wecistanche.com / WhatsApp:008613632399501/Wechat:13632399501