Οι ολικοί γλυκοζίτες του Cistanche Deserticola προάγουν την αποκατάσταση της νευρολογικής λειτουργίας προκαλώντας νευροαγγειακή αναγέννηση μέσω της οδού Nrf- 2/Keap-1 σε αρουραίους MCAO/R

Ιστορικό:

Η παραδοσιακή κινεζική ιατρική Cistanche deserticola έχει αναφερθεί ότι ισχύει για καρδιαγγειακά και εγκεφαλοαγγειακά νοσήματα. Ωστόσο, τα ενεργά συστατικά του για την προστασία του ισχαιμικού εγκεφαλικού δεν είναι ξεκάθαρα. Στόχος μας ήταν να διερευνήσουμε τα ενεργά συστατικά του C. deserticola κατά του ισχαιμικού εγκεφαλικού επεισοδίου καθώς και τους πιθανούς μηχανισμούς του.

Μέθοδοι:

Διερευνήσαμε τις προστατευτικές επιδράσεις του εγκεφάλου των εκχυλισμάτων από C. deserticola, ολικών γλυκοσιδών (TGs), πολυσακχαριτών (PSs) και ολιγοσακχαριτών (OSs) σε ένα μοντέλο αρουραίου απόφραξης-επαναδιάχυσης της μέσης εγκεφαλικής αρτηρίας (MCAO/R). 2, 3, 5-Χρώση με χλωριούχο τριφαινυλτετραζόλιο (TTC) χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση του όγκου του εγκεφαλικού εμφράγματος και η δοκιμασία μπλε Evans υιοθετήθηκε για την αξιολόγηση της διαπερατότητας του αιματοεγκεφαλικού φραγμού (BBB). Στη συνέχεια, οι εκφράσεις CD31, a-SMA, PDGFRb, SYN, PSD95, MAP-2, ZO{-1, claudin-5, occludin, Keap-1 και Nrf{{ 13}} αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας στύπωμα western ή ανοσοφθορισμό και οι δραστηριότητες MDA, SOD, CAT και GSH-Px αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας κιτ.

Αποτελέσματα:

Η θεραπεία με TGs μείωσε σημαντικά τις βαθμολογίες νευρολογικού ελλείμματος και τους όγκους εμφράγματος, προώθησε την αγγειογένεση και τη νευρική αναδιαμόρφωση και διατήρησε αποτελεσματικά την ακεραιότητα του αιματοεγκεφαλικού φραγμού σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου. Επιπλέον, τα TG μείωσαν σημαντικά τα επίπεδα MDA και αύξησαν τις αντιοξειδωτικές δραστηριότητες (SOD, CAT και GSH-Px) στον εγκέφαλο. Εν τω μεταξύ, τα TG μείωσαν σημαντικά την έκφραση Keap-1 και διευκόλυναν την πυρηνική μετατόπιση Nrf-2. Αντίθετα, δεν παρατηρήθηκαν προστατευτικές επιδράσεις για ομάδες PS και OS.

Συμπέρασμα:

Τα TG είναι τα κύρια ενεργά συστατικά του C. deserticola κατά της MCAO/Επαγόμενης εγκεφαλικής βλάβης και η προστασία γίνεται κυρίως μέσω της οδού Nrf-2/Keap-1.

Κάντε κλικΦυσικό προϊόν Cistanche Deserticola Extract

ΕΙΣΑΓΩΓΗ

Τα εγκεφαλικά θεωρούνται ως κύρια αιτία θανάτου και αναπηρίας στον κόσμο (Donnan et al., 2008). Σχεδόν το 87 τοις εκατό όλων των περιπτώσεων εγκεφαλικού προκαλούνται από ισχαιμικό εγκεφαλικό επεισόδιο (Ovbiagele και Nguyen-Huynh, 2011). Επί του παρόντος, ο πιο αποτελεσματικός παράγοντας και το μόνο εγκεκριμένο από την FDA φάρμακο που χρησιμοποιείται για τη θεραπεία του ισχαιμικού εγκεφαλικού είναι ένας ανασυνδυασμένος ενεργοποιητής πλασμινογόνου ιστού. Ωστόσο, ένας μεγάλος αριθμός ασθενών με εγκεφαλικό αποτυγχάνει να ανταποκριθεί σε αυτό το φάρμακο, λόγω του στενού θεραπευτικού του χρόνου και του σοβαρού κινδύνου αιμορραγικών επιπλοκών (Lee et al., 2012· Schellinger and Kohrmann, 2014). Μια σημαντική πρόκληση της θρομβολυτικής θεραπείας είναι ο τραυματισμός ισχαιμίας/επαναιμάτωσης (I/R), που θεωρείται κύρια αιτία εγκεφαλικής βλάβης και καταστροφής της λειτουργίας. Η επαναιμάτωση μετά από εγκεφαλική ισχαιμία αυξάνει τον κίνδυνο εγκεφαλικής αιμορραγίας ενώ οδηγεί σε νευροαγγειακή βλάβη και παράγει υπερβολικά αντιδραστικά είδη οξυγόνου (ROS) που βλάπτουν τον αιματοεγκεφαλικό φραγμό (Alluri et al., 2015). Αρκετές μελέτες έχουν επιβεβαιώσει ότι η διαταραχή του BBB είναι μια κύρια αιτία της παθογένεσης του ισχαιμικού εγκεφαλικού επεισοδίου (Cao et al., 2016b).

Το BBB αποτελείται κυρίως από ενδοθηλιακά κύτταρα, περικύτταρα, αστροκύτταρα, νευρώνες και βασικές μεμβράνες. Τα βασικά συστατικά του BBB είναι εγκεφαλικά μικροαγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα που ενώνονται με σφιχτές συνδέσεις, περιορίζοντας έτσι τα εξωγενή μόρια στον εγκέφαλο. Οι παθολογικές αλλοιώσεις των σφιχτών συνδέσμων—ιδιαίτερα της occludin, claudin-5 και zonula occludens-1 (ZO-1)— επηρεάζουν σημαντικά τη λειτουργία BBB κατά τη διάρκεια ενός ισχαιμικού εγκεφαλικού, ιδιαίτερα τη διαπερατότητα του φραγμού (Liu et al., 2014· Hu et al., 2018· Liu et al., 2019). Κατά τις περιόδους I/R, το υπερβολικό ROS είναι ένας από τους κύριους παράγοντες που οδηγούν στην άμεση βλάβη των νευρώνων του εγκεφάλου (Ding et al., 2014). Η υπερπαραγωγή ROS οδηγεί σε υποβάθμιση ορισμένων συνδέσμων και διαταραχή του BBB, που έχει ως αποτέλεσμα εξωγενή μόρια να εισέρχονται στον εγκέφαλο μέσω του BBB, οδηγώντας σε επιδείνωση της εγκεφαλικής βλάβης (Cheon et al., 2016; Zhang QY et al., 2017). Ως εκ τούτου, η προστασία του BBB από αντιοξειδωτικά έχει θεωρηθεί ως ένας πιθανός τρόπος για την πρόληψη τραυματισμού επαναιμάτωσης.

Εκτός από τη διάσπαση του BBB, το I/R μπορεί να οδηγήσει σε νευροαγγειακή βλάβη και νευρωνικό θάνατο (Jung et al., 2010). Κατά τη διάρκεια ενός εγκεφαλικού, αυξημένος θάνατος νευρωνικών κυττάρων μπορεί να προκύψει από οξειδωτικό στρες (Chi et al., 2018) και πολυάριθμες μελέτες έχουν δείξει ότι το ROS επιδεινώνει τη σοβαρότητα του εγκεφαλικού και τη νευρολογική βλάβη (Kondo et al., 1997; Crack et al., 2001; Crack et al., 2006). Αν και οι κλινικές δοκιμές δεν έχουν ικανοποιητικά αποτελέσματα, η νευροπροστασία εξακολουθεί να είναι μια πολλά υποσχόμενη στρατηγική για τη θεραπεία του οξέος ισχαιμικού εγκεφαλικού επεισοδίου (Moretti et al., 2015). Έτσι, η εύρεση αποτελεσματικών φαρμάκων νευροπροστασίας για τη θεραπεία των εγκεφαλικών είναι ένα όφελος για τους ασθενείς με εγκεφαλικό επεισόδιο.

Η παραδοσιακή κινεζική ιατρική (TCM) λαμβάνει μέτρα για να παρέμβει ενάντια στην εσωτερική ανισορροπία του σώματος (Gaire, 2018). Λόγω της πολύπλοκης παθογένεσης των ισχαιμικών εγκεφαλικών επεισοδίων, η πολυπαραγοντική επίδραση της TCM και των ενεργών συστατικών της διαδραματίζουν κρίσιμο ρόλο στη θεραπεία των εγκεφαλικών επεισοδίων. Το Cistanche deserticola YC Ma, ευρέως διαδεδομένο σε άνυδρες ή ημίξηρες περιοχές σε όλη τη Μογγολία και τη Βορειοδυτική Κίνα, είναι ένα ευρέως χρησιμοποιούμενο βότανο TCM για τη θεραπεία διαφόρων ασθενειών όπως η λήθη και η κατάθλιψη για περισσότερα από 1,000 χρόνια στην Κίνα . Σύγχρονες φαρμακολογικές μελέτες έδειξαν ότι τα ακατέργαστα εκχυλίσματα από το C. deserticola έδειξαν πολλαπλές φαρμακολογικές δραστηριότητες, όπως η ενίσχυση της λειτουργίας μάθησης και μνήμης, νευροπροστασία, ενίσχυση του ανοσοποιητικού, αντιοξειδωτικά, αντιγηραντικά και αντικόπωση (Ko and Leung, 2007; Wang et al. , 2012, Li et al., 2015). Η χημική ανάλυση του C. deserticola έδειξε ότι τα κύρια συστατικά του περιλαμβάνουν φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες, ιριδοειδή γλυκοσίδες, πολυσακχαρίτες και ολιγοσακχαρίτες (Jiang and Tu, 2009). Ωστόσο, τα ενεργά συστατικά του C. deserticola για την προστασία του εγκεφάλου δεν είναι πολύ σαφή.

Η νευροπροστατευτική ιδιότητα του C. deserticola υποδηλώνει τις θεραπευτικές του δυνατότητες σε γνωστικές ασθένειες όπως το εγκεφαλικό επεισόδιο και η κατάθλιψη, καθώς και η νόσος Alzheimer (Wang et al., 2017). Ωστόσο, η έρευνα για την επίδραση του C. deserticola στα εγκεφαλικά, συμπεριλαμβανομένων των ενεργών συστατικών και των μηχανισμών δράσης του, είναι πολύ περιορισμένη.

Στην τρέχουσα εργασία, διερευνήσαμε την προστατευτική επίδραση τριών εκχυλισμάτων από το C. deserticola, των ολικών γλυκοσιδών (TGs, φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων και άλλων γλυκοσιδίων), πολυσακχαριτών (PSs) και ολιγοσακχαριτών (OSs) σε εγκεφαλικές βλάβες I/R. Τα ευρήματά μας μπορεί να συμβάλουν στην ακριβή κλινική εφαρμογή του C. deserticola και να παρέχουν έναν υποψήφιο παράγοντα για θεραπεία ισχαιμικού εγκεφαλικού επεισοδίου.

ΥΛΙΚΑ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΙ

Χημικά και Αντιδραστήρια

Οι μίσχοι του Cistanche deserticola αγοράστηκαν από το Alasan, Εσωτερική Μογγολία, και αναγνωρίστηκαν από έναν από τους συγγραφείς (P.-F. Tu). Τα TG, τα PS και τα OS παρασκευάστηκαν σύμφωνα με τη μέθοδο που αναφέρθηκε προηγουμένως (Gao et al., 2015). Η ποσοτική ανάλυση των TG πραγματοποιήθηκε με υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC) όπως περιγράφηκε προηγουμένως (Li et al, 2019) και το χρωματογράφημά της φαίνεται στο Σχήμα 1. Τα κύρια συστατικά των TGs είναι η εχινακοσίδη, η τουμπουλοσίδη Α, η ακτεοσίδη, η ισοακτεοσίδη, και 2'-ακετυλολακτεοζίτη. το περιεχόμενό τους είναι 163,05 mg/g, 4,125 mg/g, 41,66 mg/g, 22,655 mg/g και 12,045 mg/g, αντίστοιχα. Τα περιεχόμενα των PS και των OS είναι 69,42 τοις εκατό και 65,24 τοις εκατό, αντίστοιχα, όπως προσδιορίζεται με HPLC και την ανάλυση φαινόλης-θειικού οξέος, αντίστοιχα (Zhang A. et al., 2018; Shi et al, 2019).

Οι τυπικές αναφορές εχινακοσίδης (Α0282), τουμπουλοσίδης Α (Α0942), ακτεοσίδης (Α0280), ισοακτεοσίδης (Α0281) και 2'-ακετυλολακτεοσίδης (Α0943) αγοράστηκαν από την Chengdu Must Biotechnology (Sichuan, Κίνα). Η καθαρότητα όλων των προτύπων είναι μεγαλύτερη από 98 τοις εκατό. Τα κιτ Nissl Stain H&E αγοράστηκαν από την Boster (Wuhan, Κίνα). Το Edaravone (T0407-1) ​​αγοράστηκε από την Target Mol (Σαγκάη, Κίνα). Αγοράστηκαν Κουνέλι κατά των αρουραίων MAP-2 (ab32454), Nrf-2 (ab31163), PDGFRb (ab32570), Keap-1 (ab66620) και CD31 κατά ποντικιού (ab24590) από την Abcam Inc (Cambridge, MA, ΗΠΑ). Rabbit anti-rat Claudin5 (BS1069), ZO-1 (BS9802M) και Occludin (BS72035) αγοράστηκαν από την Bioworld Technology (Nanjing, Κίνα). Η Cell Signaling Technology Inc. (Βοστώνη, MA, Η.Π.Α.) ήταν η πηγή της συναψίνης αντι-ποντικιού κουνελιού-1 (SYN,5297T), PSD95 (3450T), a-Smooth Muscle Actin (a-SMA,19245T). Το GAPDH (HRP-60004) αγοράστηκε από την Proteintech Group, Inc. (Σικάγο, ΗΠΑ).

Τα δευτερεύοντα αντισώματα παρασχέθηκαν από την Zhongshan Golden Bridge Biotechnology (Πεκίνο, Κίνα). Το Hoechst 33258 ελήφθη από την Beyotime (Jiangsu, Κίνα).

Των ζώων

Οι αρουραίοι Sprague-Dawley (αρσενικοί, βάρους 250-300 g) ελήφθησαν από το Vital River Laboratory Animal Technology (Πεκίνο, Κίνα) και στεγάστηκαν σε ένα κλιματιζόμενο δωμάτιο που διατηρήθηκε σε κύκλο φωτός/σκότους 12 ωρών. Όλα τα πειράματα σε ζώα διεξήχθησαν σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές ARRIVE για την έρευνα σε ζώα (Kilkenny et al., 2010; McGrath et al., 2010) και εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Ιδρυματικής Φροντίδας και Χρήσης Ζώων του Κέντρου Επιστημών Υγείας του Πανεπιστημίου του Πεκίνου (LA2019123).

Πειραματικά Πρωτόκολλα Ζώων

Οι αρουραίοι υποβλήθηκαν σε MCAO/R, όπως περιγράφηκε προηγουμένως (Wang et al., 2018). Εν συντομία, η αριστερή κοινή καρωτιδική αρτηρία (CCA), η εξωτερική καρωτίδα (ECA) και η εσωτερική καρωτίδα (ICA) εκτέθηκαν και ένα ράμμα με μονόινα νήματα 3-0 εισήχθη από το ECA στο ICA μέχρι να φτάσει στη μέση εγκεφαλική αρτηρία (MCA). Μετά από 1,5 ώρα απόφραξης MCA, προσομοιώθηκε η επαναιμάτωση αφαιρώντας το νήμα. Κατά τη διάρκεια της χειρουργικής επέμβασης, η θερμοκρασία του σώματος όλων των αρουραίων διατηρήθηκε στους 37,0 βαθμούς.

Χορήγηση φαρμάκου

Οι αρουραίοι χωρίστηκαν τυχαία σε έξι ομάδες χρησιμοποιώντας την έκδοση λογισμικού SPSS 22.0 όπως περιγράφεται (Jiang et al., 2014): κανονική ομάδα (NOR); ομάδα μοντέλων (MOD); ομάδα edaravone (θετικό φάρμακο, 6 mL/kg, EDI); Ομάδα TGs (280 mg/kg, TGs); Ομάδα PSs (280 mg/kg, PSs) και ομάδα OSs (280 mg/kg, OSs). Τα TGs, PS και OSs χορηγήθηκαν μία φορά την ημέρα μετά από MCAO/R για 14 ημέρες. Οι ομάδες NOR και MOD υποβλήθηκαν σε αγωγή με φυσιολογικό ορό. Οι αριθμοί των ζώων φαίνονται στον Πίνακα 1.

Μέτρηση βάρους και τροποποιημένες βαθμολογίες νευρολογικού ελλείμματος (NSS)

Το σωματικό βάρος παρακολουθήθηκε τη 14η ημέρα χρησιμοποιώντας μια ψηφιακή ζυγαριά ADVENTURE™ (OHAUS, New Jersey, ΗΠΑ). Η μάζα εκτιμήθηκε σύμφωνα με τη μέθοδο που περιγράφεται από τον FJ Wang (Wang et al., 2018), με μικρές αναθεωρήσεις.

2, 3, 5-Χρώση με χλωριούχο τριφαινυλτετραζόλιο (TTC)

Ο όγκος του εμφράγματος μετρήθηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως (Wang et al., 2015). Εν συντομία, οι εγκέφαλοι τεμαχίστηκαν σε επτά στεφανιαία τετράγωνα σε ίση απόσταση (2 mm). Αυτές οι τομές χρωματίστηκαν με 2 τοις εκατό TTC (Coolaber, Πεκίνο, Κίνα) στους 37 βαθμούς για 15 λεπτά. Όγκος εμφράγματος ( ποσοστό )=(ομόπλευρος όγκος ισχαιμικού ημισφαιρίου −όγκος ετερόπλευρου ισχαιμικού ημισφαιρίου)/όγκος ετερόπλευρου ισχαιμικού ημισφαιρίου × 100.

Nissl και H&E Staining

Οι αρουραίοι αναισθητοποιήθηκαν βαθιά και ολόκληρος ο εγκέφαλος αφαιρέθηκε γρήγορα από το κρανίο και στερεώθηκε χρησιμοποιώντας 4 τοις εκατό παραφορμαλδεΰδη και ενσωματώθηκε σε κερί παραφίνης και τεμαχίστηκε σε φέτες πάχους 7 μm. Οι τομές χρωματίστηκαν με Nissl και H&E. Σε αυτή τη μελέτη, έξι τυχαία πεδία 200 × 200 μm καταγράφηκαν σε κάθε δείγμα ιστού με μικροσκόπιο φωτός. Ο αριθμός των σωμάτων της Nissl μετρήθηκε με την έκδοση λογισμικού IPP 6.0 (Media Cybernetics, Bethesda, ΗΠΑ).

Evans Blue Assay

Οι αρουραίοι έλαβαν ένεση με 2 τοις εκατό EB (Coolaber Science & Technology Co., LTD) μετά από MCAO/R. Δύο ώρες αργότερα, οι αρουραίοι αναισθητοποιήθηκαν και ολόκληρος ο εγκέφαλος αφαιρέθηκε γρήγορα και ομογενοποιήθηκε σε ακετόνη. Τα υπερκείμενα αναλύθηκαν στα 620 nm με συσκευή ανάγνωσης απορρόφησης 800 TS (BioTek, ΗΠΑ).

Μέτρηση των Δραστηριοτήτων της Καταλάσης (CAT), της Δισμουτάσης του Υπεροξειδίου (SOD), της Μηλονοδιαλδεΰδης (MDA) και της Υπεροξειδάσης της Γλουταθειόνης (GSH-Px)

Όλα τα δείγματα ορού φυγοκεντρήθηκαν στις 4,000 × rpm για 15 λεπτά στους 4 βαθμούς και στη συνέχεια αναλύθηκαν για να ανιχνευθούν οι δραστηριότητες των MDA, CAT, SOD και GSH-Px ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή (Jiangsu Meimian Industrial Co., Ltd, Κίνα).

Ανάλυση Western Blotting

Οι ιστοί εγκεφάλου (100 mg) που συλλέχθηκαν από κάθε αρουραίο ομογενοποιήθηκαν και λύθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα λύσης RIPA και στη συνέχεια αναλύθηκαν για να ανιχνευθεί η συγκέντρωση πρωτεΐνης χρησιμοποιώντας κιτ BCA (Beijing TransGen Biotech Co., Ltd.). Οι ολικές πρωτεΐνες του ιστού φορτώθηκαν σε πηκτές SDS-PAGE 10 τοις εκατό και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνη νιτροκυτταρίνης. Η μεμβράνη αποκλείστηκε χρησιμοποιώντας 5 τοις εκατό αποβουτυρωμένο γάλα, στη συνέχεια επωάστηκε όλη τη νύχτα με πρωτογενή αντισώματα στους 4 βαθμούς. Η μεμβράνη στη συνέχεια επωάστηκε με ένα δευτερεύον αντίσωμα. Η ανάλυση κηλίδας Western αναλύθηκε χρησιμοποιώντας σύστημα ψηφιακής απεικόνισης Kodak (5200 Multi, Tanon, China).

Ανάλυση ανοσοφθορισμού

Πραγματοποιήθηκε χρώση ανοσοφθορισμού για CD31, a-SMA, ZO-1, claudin5, ocludin, PDGFRb, SYN, PSD95, MAP-2, Nrf-2 και Keap-1. Τα πρωτογενή αντισώματα κατά Nrf-2, CD31, a-SMA, ZO{-1, claudin5, occludin, PDGFRb, SYN, PSD95, MAP-2 και Keap-1 αραιώθηκαν σε 1 :200 και 1:100, αντίστοιχα. Τα δευτερεύοντα αντισώματα Alexa Flur 488 ποντικού κατά κουνελιού IgG και ροδαμίνης (TRITC) κατσίκας κατά κουνελιού IgG αραιώθηκαν και τα δύο σε 1:200. Οι πυρήνες χρωματίστηκαν με Hoechst 33258. Οι εικόνες ελήφθησαν χρησιμοποιώντας Vectra® Polaris™ Automated Quantitative Pathology Imaging System (PerkinElmer, USA). Η έκφραση πρωτεΐνης αναλύθηκε χρησιμοποιώντας λογισμικό IPP έκδοση 6.0.

Στατιστική ανάλυση

Όλα τα δεδομένα περιγράφηκαν ως μέσος όρος ± SD. Το λογισμικό SPSS έκδοση 22.0 πραγματοποιήθηκε για στατιστική ανάλυση. Χρησιμοποιήθηκε μονόδρομη ANOVA κατά τη σύγκριση διαφορετικών ομάδων. P < 0.05 θεωρήθηκε η στατιστική διαφορά.

ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ

Οι TGs αυξάνουν το σωματικό βάρος και μειώνουν τις βλάβες στον εγκέφαλο σε αρουραίους MCAO/R

Μετά από 14 ημέρες θεραπείας με TGs, PSs, Oss και EDI, αξιολογήθηκαν τα σωματικά βάρη, τα νευρολογικά ελλείμματα και οι όγκοι εμφράγματος των I/R αρουραίων. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα σωματικά βάρη στην ομάδα MOD μειώθηκαν σημαντικά, ενώ τα μειωμένα βάρη στις ομάδες TG, PS και EDI αυξήθηκαν (Εικόνα 2Α). Οι βαθμολογίες νευρολογικού ελλείμματος μειώθηκαν σημαντικά από το EDI και το TG (Εικόνα 2Β). Οι φέτες του εγκεφάλου στους αρουραίους της ομάδας NOR ήταν βαθύ κόκκινο και δεν υπήρχαν έμφραγμα, ενώ οι αρουραίοι της ομάδας MOD εμφάνισαν μεγάλο ομόπλευρο εγκεφαλικό έμφραγμα. Μετά τη θεραπεία με TGs, οι όγκοι του εμφράγματος μειώθηκαν σημαντικά (Εικόνες 2C, D). Η θεραπεία PS και OSs δεν έδειξε εμφανή επίδραση στους παραπάνω δείκτες. Τα παραπάνω δεδομένα έδειξαν ότι τα TGs μπορούσαν να ανακουφίσουν σημαντικά την εγκεφαλική βλάβη που προκαλείται από I/R, αλλά τα PS και OS δεν μπορούσαν.

Οι TGs Βελτιώνουν την Ιστοπαθολογική Βλάβη σε αρουραίους MCAO/R

Για να προσδιοριστούν ορισμένες από τις επιδράσεις της θεραπείας με TGs, PSs και OSs στην ιστοπαθολογική βλάβη, πραγματοποιήθηκε χρώση H&E για να αποκαλυφθεί παθολογική βλάβη. Οι ιστομορφολογικές δομές των εγκεφάλων στην ομάδα NOR τακτοποιήθηκαν τακτικά. Οι μορφολογικές αλλαγές στις ομάδες TGs ήταν μικρότερες από αυτές στην ομάδα MOD. Ωστόσο, οι ομάδες θεραπείας με PS και OSs δεν έδειξαν σημαντική βελτίωση των αλλαγών της μορφολογίας (Εικόνα 3).

Τα TG εξασθενούν τον νευρωνικό τραυματισμό μετά από αρουραίους που προκαλούνται από I/RI

Η χρώση Nissl έδειξε τις ιστοπαθολογικές αλλαγές των νευρώνων στον ημισφαίριο της ισχαιμικής περιοχής. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 4, οι φυσιολογικοί νευρώνες είχαν καθαρό πυρήνα και ανέπαφη δομή. Στην ομάδα MOD, οι νευρώνες είχαν διευρυμένους μεσοκυττάριους χώρους. Τα ωραία κορμιά εξαφανίστηκαν, συρρικνώθηκαν και λερώθηκαν βαθιά. Ωστόσο, αυτές οι αλλαγές σπάνια παρατηρήθηκαν στις ομάδες EDI, TGs και PSs. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα TGs και τα PSs θα μπορούσαν να μετριάσουν σημαντικά την ισχαιμία/επαγόμενη από επαναιμάτωση νευρωνική βλάβη.

Τα TG εξασθενούν τη διαταραχή BBB μετά από I/RT θεραπεία αρουραίων

Η δοκιμασία μπλε Evans είναι μια κλασική μέθοδος για την έρευνα της αλλαγής της διαπερατότητας BBB. Τα αποτελέσματα του πειράματος έδειξαν ότι αυξημένο μπλε του Evans παρατηρήθηκε στην ομάδα MOD, ενώ υπήρχε σημαντικά μειωμένο μπλε του Evans στους αρουραίους TGs και στους επίμυες που έλαβαν θεραπεία με EDI. Επιπλέον, δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ των ομάδων θεραπείας PS και OS (Εικόνα 5). Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι τα TGs θα μπορούσαν να μετριάσουν σημαντικά τη διαταραχή του BBB.

Τα TG προάγουν την αγγειογένεση σε αρουραίους που έχουν τραυματιστεί με Ε/Κ

Πιο πρόσφατες μελέτες δείχνουν ότι η αγγειογένεση παίζει κρίσιμο ρόλο στη νευρολογική λειτουργική αποκατάσταση και στα προγνωστικά αποτελέσματα μετά από οξύ ισχαιμικό εγκεφαλικό επεισόδιο (Yuen et al., 2015). Για την αξιολόγηση των επιδράσεων των TGs, PSs και OSs στην αγγειογένεση, χρησιμοποιήθηκαν τα CD31 και a-SMA για τον ποσοτικό προσδιορισμό των τριχοειδών αριθμών. Η χρώση με ανοσοφθορισμό έδειξε ότι η ομάδα MOD προκάλεσε μια αξιοσημείωτη μείωση στις εκφράσεις του CD31 (Εικόνες 6Α, Β) και του aSMA (Εικόνες 6C, D) στον μισοβόλο ισχαιμικών περιοχών των αρουραίων I/R, σε σύγκριση με τους φυσιολογικούς αρουραίους. Αυτό το αποτέλεσμα έδειξε ότι το I/R θα μπορούσε να προκαλέσει αγγειακή βλάβη στον ημισφαίριο του φλοιού των ισχαιμικών ημισφαιρίων. Ωστόσο, η θεραπεία TGs και EDI αύξησε αξιοσημείωτα την πυκνότητα των τριχοειδών, την αγγειογένεση και την αρτηριογένεση, όπως υποδεικνύεται από τις αυξημένες εκφράσεις των CD31 και a-SMA. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι τα TGs θα μπορούσαν να προάγουν την αγγειογένεση στον ισχαιμικό ημισφαίριο αρουραίων I/R, αλλά τα PS και OS δεν μπορούσαν.

Τα TG Αυξάνουν την Έκφραση των Πρωτεϊνών Σφιχτής Σύνδεσης σε Αρουραίους που έχουν τραυματιστεί με Ε/Κ

Η διαταραχή του BBB μπορεί να αυξήσει την περιεκτικότητα σε νερό του εγκεφάλου και το πρήξιμο των ιστών, οδηγώντας σε εγκεφαλική βλάβη. Οι πρωτεΐνες σφιχτής σύνδεσης είναι σημαντικά δομικά συστατικά του BBB (Tenreiro et al., 2016; Jiang et al., 2018). Για να ελεγχθεί εάν η θεραπεία με TG, PS και OSs μετά το εγκεφαλικό επεισόδιο μπορεί να επηρεάσει την ακεραιότητα του BBB, οι εκφράσεις των ZO-1, claudin-5 και ocludin πραγματοποιήθηκαν με ανάλυση ανοσοφθορισμού. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι οι εκφράσεις του claudin-5, του ocludin και του ZO-1 ήταν εμφανώς μειωμένες στην ομάδα MOD. Ωστόσο, αυξήθηκαν σημαντικά μετά από 14 ημέρες από τη χορήγησή του. Οι ομάδες PS και OSs δεν έδειξαν σημαντικές αλλαγές σε αυτές τις πρωτεϊνικές εκφράσεις (Εικόνα 7). Αυτά τα δεδομένα έδειξαν ότι τα TGs μπορούσαν να ρυθμίσουν τις εκφράσεις της πρωτεΐνης σφιχτής σύνδεσης και να διατηρήσουν την ακεραιότητα BBB μετά από τραυματισμό I/R.

Οι TG αυξάνουν την κάλυψη των περικυττάρων στα τριχοειδή αγγεία σε αρουραίους που έχουν τραυματιστεί από Ε/Κ

Η κάλυψη των περικυττάρων στα τριχοειδή αγγεία παίζει κρίσιμο ρόλο στη διατήρηση της ακεραιότητας του BBB (Armulik et al., 2010; Daneman et al., 2010). Έτσι, δοκιμάσαμε εάν η κάλυψη των περικυττάρων θα μπορούσε να αυξηθεί με θεραπεία TG, PS και OS. Τα αποτελέσματα της ανάλυσης έντασης ανοσοφθορισμού έδειξαν ότι τόσο οι εκφράσεις PDGFRb όσο και CD31 μειώθηκαν δραματικά στην ομάδα MOD. Η χορήγηση TG στους αρουραίους I/R ανέκτησε σημαντικά ή ακόμη και αύξησε τις εντάσεις έκφρασης των PDGFRb και CD31, αλλά δεν παρατηρήθηκε διαφορά στις ομάδες θεραπείας με PS και OSs (Εικόνα 8). Έτσι, η θεραπεία των TGs θα μπορούσε να αυξήσει σημαντικά την κάλυψη των περικυττάρων. Αυτά τα ευρήματα επιβεβαίωσαν περαιτέρω ότι τα TG μπορούν να διατηρήσουν την ακεραιότητα του BBB μετά το I/R.

Οι TGs προωθούν τη νευρωνική αναδιαμόρφωση σε αρουραίους που έχουν τραυματιστεί με φλέβα

Σύμφωνα με πολυάριθμες μελέτες, η νευρογένεση μετά από ένα εγκεφαλικό μπορεί να βελτιώσει σημαντικά τη λειτουργική αποκατάσταση (Grefkes and Ward, 2014; Zhang et al., 2019). Η συναπτοφυσίνη (SYN), οι πρωτεΐνες μετασυναπτικής πυκνότητας 95 (PSD-95) και η πρωτεΐνη 2 που σχετίζεται με μικροσωληνίσκους (MAP-2) χρησιμοποιήθηκαν ως δείκτες για την εξέταση της πλαστικότητας των νευρώνων στον ισχαιμικό ημισφαίριο του φλοιού. Για να αξιολογηθούν οι επιδράσεις της θεραπείας με TGs, PSs και OSs στη νευρογένεση σε αρουραίους που έχουν τραυματιστεί με I/R, διεξήχθη ο ανοσοφθορισμός και το western blot για εκφράσεις SYN, PSD95 και MAP-2. Όπως φαίνεται στα Σχήματα 9 και 10, τα επίπεδα έκφρασης SYN, PSD95 και MAP{12}} σε αρουραίους I/R μετά από 14 ημέρες επαναιμάτωσης μειώθηκαν σε σύγκριση με τους αρουραίους NOR, ενώ η θεραπεία TGs και PSs θα μπορούσε να αυξηθεί σημαντικά- ρυθμίζουν τα επίπεδα έκφρασής τους. Η ομάδα OSs δεν είχε σημαντική αλλαγή σε σύγκριση με την ομάδα MOD. Τα δεδομένα έδειξαν ότι η θεραπεία TGs και PSs ήταν σε θέση να προωθήσει δραματικά τη νευρική αναδιαμόρφωση μετά από τραυματισμό I/R.

Εκφράσεις TGs Alter Nrf-2 και Keap-1 σε I/R τραυματισμένους αρουραίους

Το οξειδωτικό στρες είναι ο κύριος παθογόνος μηχανισμός στον τραυματισμό I/R (Ya et al., 2018; Yu et al., 2018). Οι μελέτες επαλήθευσαν ότι ο Nrf-2 είναι ο κύριος ρυθμιστής των αντιοξειδωτικών αποκρίσεων (Thompson et al., 2015). Για να διερευνήσουμε τις οξειδωτικές αποκρίσεις που προκαλούνται από Nrf-2 και Keap{-1 μετά από τραυματισμό I/R, αξιολογήσαμε την κυτταροπλασματική έκφραση καθώς και την πυρηνική μετατόπιση του Keap-1. Εν τω μεταξύ, η έκφραση του Nrf-2 σε ιστούς εγκεφάλου αρουραίων που έχουν τραυματιστεί I/R προσδιορίστηκε επίσης (Εικόνες 10 και 11). Σύμφωνα με την ανάλυση ανοσοφθορισμού, το Nrf-2 βρέθηκε να εντοπίζεται κυρίως στο κυτταρόπλασμα της ομάδας NOR. Στην ομάδα TGs, η έκφραση του Nrf-2 στον κυτταροπλασματικό εντοπισμό ρυθμίστηκε προς τα κάτω, αλλά ρυθμίστηκε προς τα πάνω στον πυρήνα και παρατηρήθηκε επίσης μειωμένη έκφραση Keap-1. Τα δεδομένα έδειξαν ότι η προστασία του εγκεφάλου των TGs θα μπορούσε να συσχετιστεί με τη διαμόρφωση των Nrf-2 και Keap-1.

Οι TG μετριάζουν το οξειδωτικό στρες του εγκεφαλικού ιστού σε αρουραίους που έχουν τραυματιστεί με φλέβα

Για να επιβεβαιωθούν οι αντιοξειδωτικές επιδράσεις των TGs, αξιολογήθηκαν οι δραστηριότητες των SOD, CAT, GSH-Px και MDA σε αρουραίους που έχουν τραυματιστεί με I/R. Στο Σχήμα 12, η ​​περιεκτικότητα σε MDA αυξήθηκε σημαντικά στην ομάδα MOD και ταυτόχρονα, οι δραστηριότητες των SOD, CAT και GSH-Px μειώθηκαν, σε σύγκριση με τους κανονικούς αρουραίους. Αντίθετα, η θεραπεία με TGs οδήγησε σε σημαντική μείωση της περιεκτικότητας σε MDA και αύξηση των δραστηριοτήτων των SOD, CAT και GSH-Px. Αυτά τα αποτελέσματα επιβεβαίωσαν περαιτέρω την αντιοξειδωτική δράση των TGs.

ΣΥΖΗΤΗΣΗ

Πολλές μελέτες υποδηλώνουν ότι το TCM C. deserticola έχει εκτεταμένες βιολογικές δραστηριότητες, π.χ. ενισχύει την ικανότητα μάθησης, τη μνήμη και την ανοσία (Dong et al., 2007; Jiang and Tu, 2009; Wang et al., 2017; Xia et al., 2018). Ωστόσο, τα ενεργά συστατικά του C. deserticola για νευροπροστασία παραμένουν ασαφή. Η τρέχουσα εργασία στοχεύει στον έλεγχο των ενεργών συστατικών από το C. deserticola έναντι του ισχαιμικού εγκεφαλικού επεισοδίου στο μοντέλο MCAO/R. Τρία εκχυλίσματα από C. deserticola (TGs, PSs και OSs) χρησιμοποιήθηκαν για την αξιολόγηση των επιπτώσεών τους σε αρουραίους MCAO/R, καθώς και πιθανούς μηχανισμούς. Το εγκεφαλικό είναι μια κοινή οξεία εγκεφαλοαγγειακή νόσος. Επιδημιολογικές μελέτες δείχνουν ότι το εγκεφαλικό είναι πιο συχνό στους άνδρες παρά στις γυναίκες (Sealy-Jefferson et al., 2012; Guzik and Bushnell, 2017).

Έτσι, στο πείραμά μας, αρσενικοί αρουραίοι υιοθετήθηκαν για τις δοκιμές. Τα αποτελέσματά μας απέδειξαν ότι η επαγωγή I/R επιτάχυνε το οξειδωτικό στρες και τον όγκο του εμφράγματος, σπάζοντας το BBB και οδηγώντας σε νευρική και εγκεφαλοαγγειακή βλάβη. Μετά τον έλεγχο, τα TGs βρέθηκαν να μειώνουν τον όγκο του εμφράγματος και προάγουν τη νευρική αναδιαμόρφωση και την αγγειογένεση. Επιπλέον, παρατηρήθηκε ότι τα TG διατηρούν την ακεραιότητα του BBB μετά από τραυματισμό I/R. Αντίθετα, τα PS και τα OS δεν ανακουφίζουν σημαντικά τον τραυματισμό I/R. Έτσι, οι TGs θεωρούνται το κύριο ενεργό κλάσμα του C. deserticola για νευροπροστασία, πιθανώς μέσω της προώθησης της νευρικής αναδιαμόρφωσης, της αγγειογένεσης και της ακεραιότητας του BBB μέσω της οδού ενεργοποίησης Nrf2/Keap-1.

Τα αυξανόμενα στοιχεία υποδεικνύουν ότι η δημιουργία αποτελεσματικής παράπλευρης κυκλοφορίας είναι σημαντικά σημαντική για την αποφυγή του σχηματισμού εμφράγματος και ισχαιμικού ισχαιμικού εγκεφαλικού επεισοδίου και αποτελεί κρίσιμη θεραπεία σε πρώιμο στάδιο του ισχαιμικού εγκεφαλικού επεισοδίου (ElAli, 2016; Iwasawa et al., 2016). Ο πολλαπλασιασμός των αγγειακών ενδοθηλιακών κυττάρων και των λείων μυϊκών κυττάρων μετά από ισχαιμικό έμφραγμα καθορίζει την εγκαθίδρυση παράπλευρης κυκλοφορίας.

Ωστόσο, τα μοντέλα ισχαιμίας έχουν ένα κοινό φαινόμενο - δηλαδή, το οξειδωτικό στρες υπήρχε ευρέως στο μικροαγγειακό σύστημα του εγκεφάλου. Τα δεδομένα της μελέτης έχουν δείξει ότι ένας μεγάλος αριθμός αντιοξειδωτικών μπορεί να διαταράξει τη λειτουργία του BBB και τις ιδιότητες της αγγειογένεσης (Mentor and Fisher, 2017). Το CD31 και το a-SMA είναι οι δείκτες των αγγειακών ενδοθηλιακών κυττάρων καθώς και των λείων μυϊκών κυττάρων, αντίστοιχα (Saboor et al., 2016). Για τη διερεύνηση της επίδρασης του προαναφερθέντος κυτταρικού πολλαπλασιασμού των εκχυλισμάτων από το C. deserticola, εξετάσαμε τις εκφράσεις των CD31 και a-SMA στο ομογενοποιημένο εγκεφαλικό ισχαιμικό μισοφέγγαρο. Τα δεδομένα μας έδειξαν ότι τα TG ενίσχυσαν εντυπωσιακά τις εκφράσεις των CD31 και a-SMA. Ωστόσο, δεν υπήρχαν σημαντικές διαφορές μεταξύ των ομάδων PS και OS. Επομένως, συμπεράνουμε ότι τα TGs μπορεί να μειώσουν την εγκεφαλική βλάβη προάγοντας την αγγειογένεση μέσω της αύξησης των εκφράσεων των CD31 και a-SMA, ενώ τα PS και τα OS δεν παρείχαν τέτοια προστασία από εγκεφαλική βλάβη. Αυτά τα αποτελέσματα επιβεβαίωσαν περαιτέρω ότι μόνο τα TG θα μπορούσαν να αποτρέψουν την εγκεφαλική βλάβη I/R.

Το ισχαιμικό εγκεφαλικό μπορεί να θεωρηθεί ως το αποτέλεσμα εγκεφαλικής ισχαιμίας που προκαλείται από βλάβη της νευρωνικής πλαστικότητας ή αναδιαμόρφωση των περιοχών του εγκεφάλου. Η πλειοψηφία των ασθενών με εγκεφαλικό υποφέρει από νευρολογικά ελλείμματα. Η ενεργοποίηση της νευρογένεσης είναι μια πολλά υποσχόμενη στρατηγική για τους ασθενείς με εγκεφαλικό για να βελτιώσουν τις νευρολογικές τους λειτουργίες (Cramer and Chopp, 2000). Η νευρογένεση συμμετέχει άμεσα στην αποκατάσταση της νευρολογικής λειτουργίας μετά από τραυματισμό του εγκεφάλου I/R (Zhang et al., 2019). Προηγούμενη έρευνα δείχνει ότι τα TG μπορούν να βελτιώσουν το ποσοστό επιβίωσης των πυραμιδικών κυττάρων του ιππόκαμπου και να προκαλέσουν νευρογένεση (Lian et al., 2017). Το οξειδωτικό στρες προκαλεί την απώλεια νευρώνων κατά τη διάρκεια πολλών ασθενειών, όπως το Πάρκινσον, το εγκεφαλικό κ.λπ. (Duan and Si, 2019; Singh et al., 2019). Το Nrf-2 μεταγράφει πολλά γονίδια που σχετίζονται με τη νευροπροστασία στην περιοχή προαγωγέα τους, κυρίως συμπεριλαμβανομένων των λιγασών SOD, MDA, CAT και γλουταμυλοκυστεΐνης, κ.λπ. (Satoh et al., 2006). Οι πρωτεΐνες SYN, PSD-95 και MAP-2, οι οποίες συνδέονται στενά με τον συναπτικό σχηματισμό και τη νευροδιαβίβαση, μπορούν να θεωρηθούν δείκτες της ερευνητικής νευρωνικής πλαστικότητας στην περιοχή του ισχαιμικού ημισφαίρου. Μετά από μελέτη, διαπιστώσαμε ότι η θεραπεία με TGs θα μπορούσε να αυξήσει σημαντικά τις εκφράσεις των PSD95, SYN και MAP-2, υποδεικνύοντας ότι η εγκεφαλική προστασία των TGs συσχετίστηκε με ενισχυμένη νευρωνική πλαστικότητα κατά τη διάρκεια του I/R. Ωστόσο, είναι κρίμα που δεν υπάρχει εμφανής διαφορά μεταξύ των PS καθώς και των ομάδων OS. Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα TGs θα μπορούσαν να ενισχύσουν τη νευροπλαστικότητα μετά από εγκεφαλική βλάβη I/R.

Η έρευνα απεικόνισης σε ασθενείς με εγκεφαλικό έδειξε ότι η δυσλειτουργία BBB μπορεί να θεωρηθεί ως ένα εντυπωσιακό χαρακτηριστικό του ανά ισχαιμικό εγκέφαλο (Bang et al., 2007). Τα TJs, τα οποία αποτελούνται από κυτταροπλασματικές πρωτεΐνες, διαμεμβρανικές πρωτεΐνες και μόρια προσκόλλησης σύνδεσης μεταξύ τριχοειδών ενδοθηλιακών κυττάρων, είναι πολύ σημαντικά για τη διατήρηση της ακεραιότητας του BBB (Ye et al., 2019). Μεταξύ αυτών, η ZO-1, η claudin-5 και η οκλουδίνη είναι οι πιο σημαντικές πρωτεΐνες στα TJ. Τα αυξανόμενα στοιχεία δείχνουν ότι η αυξημένη διαπερατότητα του BBB που προκαλείται από ισχαιμία γενικά συσχετίζεται με τις μεταβολές του ZO-1, του claudin-5 και του occludin (Cao et al., 2016a; Page et al., 2016; Yu et al., 2017· Liu et al., 2018).

Σε αυτήν την εργασία, τα αποτελέσματα έδειξαν ότι παρόλο που τα TGs μπορούσαν να αυξήσουν σημαντικά τις εκφράσεις των πρωτεϊνών ZO-1, claudin-5 και οκλουδίνης σε εγκεφαλικούς ιστούς που προκαλούνται από MCAO, ούτε τα PSs ούτε τα OSs το έκαναν. Το BBB αποτελείται από εγκεφαλικά ενδοθηλιακά κύτταρα και συνδέεται στενά με περικύτταρα (Nyul-Toth et al., 2016). Τα περικύτταρα είναι ζωτικής σημασίας για την ακεραιότητα του BBB (Bell et al., 2010). Το ισχαιμικό εγκεφαλικό πυροδοτεί τον θάνατο των περικυττάρων και την αποκόλληση από τα ενδοθηλιακά κύτταρα του εγκεφάλου στην οξεία φάση, αποσταθεροποιώντας έτσι τη μικροαγγείωση και μεταβάλλοντας τις ιδιότητες του BBB (Zechariah et al., 2013). Τα δεδομένα μας έδειξαν ότι τα TG θα μπορούσαν να αυξήσουν την κάλυψη των περικυττάρων στα τριχοειδή αγγεία και να αυξήσουν τα επίπεδα έκφρασης των ZO-1, claudin-5 και ocludin. Αυτά τα φαινόμενα απέδειξαν ότι τα TGs μπορούσαν να προστατεύσουν αποτελεσματικά την ακεραιότητα του BBB μετά από εγκεφαλική βλάβη I/R. Συνοπτικά, τα TGs μπορούν να μετριάσουν την εγκεφαλική βλάβη με πολλούς τρόπους, όπως η προώθηση της αγγειογένεσης, η βελτίωση της πλαστικότητας των νευρώνων και η διατήρηση της ακεραιότητας του BBB.

Στη συνέχεια, ερευνήσαμε το μονοπάτι σηματοδότησης για να εξερευνήσουμε τον μηχανισμό που βρίσκεται κάτω από την προστασία του εγκεφάλου του TG. Η διαδικασία του τραυματισμού I/R είναι πολυπαραγοντική, και έτσι πολλοί μηχανισμοί εμπλέκονται στην παθογένεση. Το οξειδωτικό στρες είναι ένας θεμελιώδης παράγοντας κινδύνου που συμβάλλει σε εγκεφαλική βλάβη που προκαλείται από I/R (Suda et al., 2013), όπως η βλάβη στη δομή του BBB, η αγγειακή ενδοθηλιακή δυσλειτουργία και η επιδείνωση της ισχαιμικής νευρωνικής βλάβης (Xiong et al., 2015; Caglayan et al., 2019· Priestley et al., 2019).

Έτσι, το οξειδωτικό στρες έχει γίνει ένας ελκυστικός θεραπευτικός στόχος σε εγκεφαλική βλάβη που προκαλείται από I/R. Τα ένζυμα φάσης 2, τα οποία διαμεσολαβούνται από τον πυρηνικό παράγοντα Ε2-σχετικός παράγοντας-2 (Nrf-2), έχουν θεωρηθεί σημαντικό μέσο με το οποίο οι νευρώνες προστατεύονται από το οξειδωτικό στρες (Suzuki και Yamamoto , 2015; Ya et al., 2018). Τα αυξανόμενα στοιχεία δείχνουν ότι η ενεργοποίηση του Nrf-2 κατά τη διάρκεια του I/R είναι ένας πιθανός θεραπευτικός στόχος για νευροπροστασία (Ding et al., 2015· Zhang R. et al., 2017). Το Nrf-2, ως σημαντικός ρυθμιστής της ενδογενούς αντιοξειδωτικής άμυνας, μεσολαβεί στο επίπεδο της οξυγενάσης της αίμης 1 (HO{12}}) και άλλων αντιοξειδωτικών ενζύμων, όπως το NAD(P)H οξειδορεδουκτάση της κινόνης 1 (NQO1), SOD, CAT, GSH και MDA (Siow et al., 2007; Ding et al., 2014). Επιπλέον, το Nrf-2 παίζει σημαντικό ρυθμιστικό ρόλο στην αγγειογένεση. Η παρούσα μελέτη δείχνει ότι το Nrf-2 μπορεί να ενισχυθεί σημαντικά και να ενεργοποιηθεί στη διαδικασία της αγγειακής ανάπτυξης (Wei et al., 2013).

Όπως περιγράφηκε προηγουμένως (Jiang and Tu, 2009), τα TG περιέχουν πολλές βιοδραστικές ενώσεις, για παράδειγμα, εχινακοσίδη, τουμπουλοσίδη Α, ακτεοσίδη, ισοακτεοσίδη και 2'-ακετυλακτεοσίδη, και μερικά από αυτά εμφάνισαν νευροπροστατευτικές λειτουργίες μετά από εγκεφαλική βλάβη I/R. Peng et al., 2016). Η εχινακοσίδη έχει πολλές φαρμακολογικές επιδράσεις, όπως αντιοξείδωση, αντιγήρανση, νευροπροστασία, αντιφλεγμονή, προαγωγή του γαλακτώματος, ηπατοπροστασία, προαγωγή του σχηματισμού οστών και αντικαρκινικές δραστηριότητες (Yu et al., 2016; Li et al., 2018· Zhang Y. et al., 2018· Ji et al., 2019· Xu et al., 2019).

Πρόσφατα, η εχινακοσίδη έχει αναγνωριστεί ως ισχυρό αντιοξειδωτικό στο κεντρικό νευρικό σύστημα (Lu et al., 2016). Η εχινακοσίδη μπορεί να μειώσει την περιεκτικότητα σε MDA και να βελτιώσει τις δραστηριότητες των SOD και GSHPx σε ισχαιμική εγκεφαλική βλάβη και η μοριακή ανάλυση σύνδεσης έδειξε ότι η εχινακοσίδη μπορεί να συνδεθεί με το Keap-1, οδηγώντας στην πυρηνική μετατόπιση Nrf-2 (Li et al., 2018). Η μελέτη Xia έδειξε ότι η ακτεοσίδη θα μπορούσε να μειώσει τον όγκο του εμφράγματος και την περιεκτικότητα σε νερό του εγκεφάλου για να βελτιώσει τα νευρολογικά ελλείμματα σε αρουραίους MCAO/R μετριάζοντας το οξειδωτικό στρες (Xia et al., 2018). Άλλες μελέτες έχουν δείξει ότι η ισοακτεοσίδη θα μπορούσε να αυξήσει τις δραστηριότητες των κυτταρικών αντιοξειδωτικών ενζύμων, SOD και CAT σε κύτταρα V79-4 που έχουν υποστεί αγωγή με H2O2-(Chae et al., 2005). Με βάση τις παραπάνω αναφορές των δραστικών ενώσεων που περιέχονται στα TG, είναι δυνατό να συμπεράνουμε ότι τα TG θα μπορούσαν να προστατεύσουν από το ισχαιμικό εγκεφαλικό μέσω των οδών αντιοξείδωσης.

Ανέφερα για τις νευροπροστατευτικές επιδράσεις των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών (PhGs) στην απόπτωση που προκαλείται από H2O2- στα κύτταρα PC12 μέσω της οδού Nrf2/ARE (Li et al., 2018). Αυτά τα PhG καταστέλλονται σημαντικά με την ενεργοποίηση της πυρηνικής μετατόπισης του Nrf2 και τις αυξανόμενες εκφράσεις των HO-1, NQO1, καταλυτικής υπομονάδας λιγάσης γλουταμικού-κυστεΐνης (GCLC) και υπομονάδας τροποποίησης λιγάσης γλουταμινικού-κυστεΐνης (GCLM) (Li et al. Gong et al., 2019).

Επομένως, αυτά τα ευρήματα υποδηλώνουν ότι η οδός Nrf-2/ARE διαδραματίζει κρίσιμο ρόλο στις προστατευτικές επιδράσεις με τη μεσολάβηση PhGs στα νευρωνικά κύτταρα. Ομοίως, σε αυτή τη μελέτη, διαπιστώσαμε ότι τα TGs θα μπορούσαν να μειώσουν το επίπεδο του MDA και να αυξήσουν τα επίπεδα SOD, CAT και GSH-Px στους αρουραίους I/R. Εν τω μεταξύ, τα TG θα μπορούσαν να ρυθμίσουν προς τα πάνω την έκφραση Nrf2 στον πυρήνα, να μειώσουν την αντίστοιχη έκφραση στο κυτταρόπλασμα και να μειώσουν σημαντικά την έκφραση Keap-1. Επομένως, η οδός Nrf-2/Keap-1 μπορεί να εμπλέκεται σε νευροπροστατευτικά αποτελέσματα που προκαλούνται από TG. Περαιτέρω επικύρωση αυτής της οδού θα πραγματοποιηθεί in vitro κυτταρική καλλιέργεια με μοντέλα τραυματισμών στέρησης οξυγόνου-γλυκόζης/επαναοξυγόνωσης στο μέλλον. Επιπλέον, εκχυλίσματα C. deserticola χορηγήθηκαν στη μελέτη μας για 14 ημέρες συνεχώς. Εφόσον η νευρογένεση ενηλίκων θα επηρεάσει την ερμηνεία των νευροπροστατευτικών επιδράσεων κατά τη διάρκεια 14 ημερών επαναιμάτωσης, η νευρογένεση δεν μπορεί να αποκλειστεί από τον τρέχοντα σχεδιασμό πειράματός μας για τη διερεύνηση της νευροπροστατευτικής επίδρασης των CT. Αυτός είναι ο περιορισμός της έρευνάς μας.

Συμπερασματικά, είναι τα TG από το C. deserticola που μπορούν να ενισχύσουν την αγγειογένεση και τη νευρογένεση καθώς και να διατηρήσουν την ακεραιότητα του BBB σε αρουραίους τραυματισμού I/R, αλλά όχι τα PS και τα OS. Τα εφέ θα μπορούσαν να διαμεσολαβηθούν από την ενεργοποίηση της διαδρομής Nrf-2/Keap-1.

ΔΗΛΩΣΗ ΔΙΑΘΕΣΙΜΟΤΗΤΑΣ ΔΕΔΟΜΕΝΩΝ

Τα ανεπεξέργαστα δεδομένα που υποστηρίζουν τα συμπεράσματα αυτού του άρθρου θα διατεθούν από τους συγγραφείς, χωρίς αδικαιολόγητες επιφυλάξεις, σε οποιονδήποτε ειδικευμένο ερευνητή.

ΔΗΛΩΣΗ ΗΘΙΚΗΣ

Αυτή η εργασία πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με τις Οδηγίες για τα πειράματα σε ζώα του Πανεπιστημίου του Πεκίνου. Τα πρωτόκολλα της μελέτης εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Ιδρυματικής Φροντίδας και Χρήσης Ζώων στο Κέντρο Επιστημών Υγείας του Πανεπιστημίου του Πεκίνου (LA2019123).

ΣΥΝΕΙΣΦΟΡΕΣ ΣΥΓΓΡΑΦΕΩΝ

Οι YJ, KZ και PT σχεδίασαν την έρευνα. Η FW πραγματοποίησε την έρευνα. Οι FW και RL ανέλυσαν τα δεδομένα. Οι FW, RL και JC έγραψαν το χειρόγραφο και την ανάλυση HPLC. Οι JC, KZ, YJ και PT αναθεώρησαν το χειρόγραφο.

ΧΡΗΜΑΤΟΔΟΤΗΣΗ

Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από το National Key Research and Development Project (2017YFC1702400, 2019YFC1711000), το National Natural Science Foundation of China (81773932) και το National Key Technology R&D Program "New Drug Innovation" της Κίνας (2018ZX{{{6}) ).

ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΑΝΑΦΟΡΕΣ

Alluri, H., Anasooya Shaji, C., Davis, ML, and Tharakan, B. (2015). Στέρηση οξυγόνου γλυκόζης και επαναοξυγόνωση ως μοντέλο τραυματισμού ισχαιμίας-επαναιμάτωσης in vitro για τη μελέτη της δυσλειτουργίας του αιματοεγκεφαλικού φραγμού. J. Vis. Exp. 99, e52699. doi: 10.3791/52699

Armulik, Α., Genove, G., Mae, Μ., Nisancioglu, MH, Wallgard, Ε., Niaudet, C., et al. (2010). Τα περικύτταρα ρυθμίζουν τον αιματοεγκεφαλικό φραγμό. Nature 468 (7323), 557–561. doi: 10.1038/nature09522

Bang, OY, Buck, BH, Saver, JL, Alger, JR, Yoon, SR, Starkman, S., et al. (2007). Πρόβλεψη αιμορραγικού μετασχηματισμού μετά από θεραπεία επανακαναλιοποίησης με χρήση μαγνητικής τομογραφίας διαπερατότητας Τ2*. Αννα. Neurol. 62 (2), 170– 176. doi: 10.1002/ana.21174

Bell, RD, Winkler, EA, Sagare, AP, Singh, Ι., LaRue, B., Deane, R., et al. (2010). Τα περικύτταρα ελέγχουν βασικές νευροαγγειακές λειτουργίες και νευρωνικούς φαινοτύπους στον εγκέφαλο των ενηλίκων και κατά τη γήρανση του εγκεφάλου. Neuron 68 (3), 409-427. doi: 10.1016/j.neuron.2010.09.043

Caglayan, Β., Kilic, Ε., Dalay, Α., Altunay, S., Tuzcu, Μ., Erten, F., et al. (2019). Το ισοθειοκυανικό αλλύλιο εξασθενεί το οξειδωτικό στρες και τη φλεγμονή ρυθμίζοντας τα μονοπάτια Nrf2/HO-1 και NF-kappaB σε τραυματική εγκεφαλική βλάβη σε ποντίκια. ΜοΙ. Biol. Απ. 46 (1), 241–250. doi: 10.1007/s11033-018-4465-4

Cao, G., Jiang, Ν., Hu, Υ., Zhang, Υ., Wang, G., Yin, Μ., et αϊ. (2016a). Η ρουσκογενίνη εξασθενεί τη δυσλειτουργία του αιματοεγκεφαλικού φραγμού που προκαλείται από την εγκεφαλική ισχαιμία καταστέλλοντας την ενεργοποίηση του φλεγμονώδους TXNIP/NLRP3 και την οδό MAPK. Int. J. ΜοΙ. Sci. 17 (9), 1–17. doi: 10.3390/ijms17091418

Cao, G., Ye, X., Xu, Y., Yin, Μ., Chen, Η., Kou, J., et αϊ. (2016β). Η έγχυση σκόνης YiQiFuMai βελτιώνει τη δυσλειτουργία του αιματοεγκεφαλικού φραγμού και το οίδημα του εγκεφάλου μετά από εστιακό τραυματισμό εγκεφαλικής ισχαιμίας-επαναδιάχυσης σε ποντίκια. Drug Des. Dev. Εκεί. 10, 315–325. doi: 10.2147/dddt.S96818

Chae, S., Kim, JS, Kang, KA, Bu, HD, Lee, Y., Seo, YR, et al. (2005). Αντιοξειδωτική δράση ισοακτεοσίδης από το Clerodendron trichotomum. J. Toxicol. Περιβάλλω. Health A 68 (5), 389–400. doi: 10.1080/15287390590900750

Cheon, SY, Cho, KJ, Kim, SY, Kam, EH, Lee, JE και Koo, BN (2016). Ο αποκλεισμός της κινάσης 1 που ρυθμίζει το σήμα απόπτωσης εξασθενεί τη δραστηριότητα της μεταλλοπρωτεϊνάσης 9 της θεμέλιας ουσίας στα ενδοθηλιακά κύτταρα του εγκεφάλου και την επακόλουθη απόπτωση στους νευρώνες μετά από ισχαιμικό τραυματισμό. Εμπρός. Cell Neurosci. 10, 213. doi: 10.3389/fncel.2016.00213

Chi, H., Chang, HY, and Sang, TK (2018). Μηχανισμοί θανάτου νευρωνικών κυττάρων σε μείζονες νευροεκφυλιστικές ασθένειες. Int. J. ΜοΙ. Sci. 19 (10), 1–18. doi: 10.3390/ ijms19103082

Crack, PJ, Taylor, JM, Flentjar, NJ, de Haan, J., Hertzog, Ρ., Iannello, RC, et al. (2001). Αυξημένο μέγεθος εμφράγματος και επιδείνωση της απόπτωσης στον εγκέφαλο ποντικού με νοκ-άουτ της υπεροξειδάσης της γλουταθειόνης-1 (Gpx-1) ως απόκριση στην ισχαιμία/ τραυματισμό επαναιμάτωσης. J. Neurochem. 78 (6), 1389–1399. doi: 10.1046/j.1471- 4159.2001.00535.x

Crack, PJ, Taylor, JM, Ali, U., Mansell, A., and Hertzog, PJ (2006). Η πιθανή συμβολή του NF-kappaB στον θάνατο των νευρωνικών κυττάρων στο ποντίκι νοκ-άουτ της υπεροξειδάσης της γλουταθειόνης-1 ως απόκριση στον τραυματισμό ισχαιμίας-επαναιμάτωσης. Stroke 37 (6), 1533–1538. doi: 10.1161/01.Str.0000221708.17159.64

Cramer, SC και Chopp, M. (2000). Η ανάρρωση ανακεφαλαιώνει την οντογένεση. Trends Neurosci. 23 (6), 265–271. doi: 10.1016/s0166-2236(00)01562-9

Daneman, R., Zhou, L., Kebede, AA, and Barres, BA (2010). Τα περικύτταρα απαιτούνται για την ακεραιότητα του αιματοεγκεφαλικού φραγμού κατά την εμβρυογένεση. Nature 468 (7323), 562–566. doi: 10.1038/nature09513

Ding, Υ., Chen, Μ., Wang, Μ., Wang, Μ., Zhang, Τ., Park, J., et αϊ. (2014). Η νευροπροστασία από το ακετυλο-11-κετο-βήτα-βοσβελικό οξύ, σε ισχαιμική εγκεφαλική βλάβη, περιλαμβάνει την αμυντική οδό Nrf2/HO-1. Sci. Rep. 4, 7002. doi: 10.1038/srep07002

Ding, Y., Chen, M., Wang, M., Li, Y., and Wen, A. (2015). Η μετά τη θεραπεία με 11- κετο-βήτα-βοσβελικό οξύ βελτιώνει την εγκεφαλική ισχαιμική βλάβη-επαναιμάτωση: μονοπάτι Nrf2/HO-1 ως δυνητικός μηχανισμός. ΜοΙ. Neurobiol. 52 (3), 1430–1439. doi: 10.1007/s12035-014-8929-9

Dong, Q., Yao, J., Fang, JN, and Ding, Κ. (2007). Δομικός χαρακτηρισμός και ανοσολογική δράση δύο εκχυλίσιμων με κρύο νερό πολυσακχαριτών από το Cistanche deserticola YC Ma. Υδατάνθρακες. Res. 342 (10), 1343–1349. doi: 10.1016/j.carres.2007.03.017

Donnan, GA, Fisher, M., Macleod, M., and Davis, SM (2008). Εγκεφαλικό. Lancet 371 (9624), 1612–1623. doi: 10.1016/s0140-6736(08)60694-7

Duan, Q., and Si, E. (2019). Το MicroRNA-25 επιδεινώνει τον τραυματισμό του ιππόκαμπου που προκαλείται από το Abeta1-42- στη νόσο του Alzheimer μειώνοντας τη ρύθμιση του KLF2 μέσω της οδού σηματοδότησης Nrf2 σε ένα μοντέλο ποντικού. J. Cell Biochem. 120 (9), 15891–15905. doi: 10.1002/jcb.28861

ΕλΑλή, Α. (2016). Η επίπτωση της σηματοδότησης της νευροαγγειακής μονάδας στον έλεγχο της λεπτής ισορροπίας μεταξύ τραυματισμού και αποκατάστασης μετά από ισχαιμικό εγκεφαλικό επεισόδιο. Νευρικό αναγεννητικό. Res. 11 (6), 914–915. doi: 10.4103/1673-5374.184485

Gaire, BP (2018). Βοτανοθεραπεία στο ισχαιμικό εγκεφαλικό: προκλήσεις και προοπτικές. Πηγούνι. J. Integr. Med. 24 (4), 243–246. doi: 10.1007/s11655-018-2828-2

Gao, Υ., Jiang, Υ., Dai, F., Han, Ζ., Liu, Η., Bao, Ζ., et αϊ. (2015). Μελέτη για καθαρτικά συστατικά στο Cistanche deserticola YC Ma. Mod. Πηγούνι. Med. 17 (04), 19–22 συν 26. doi: 10.13313/j.issn.1673-4890.2015.4.003.

Gong, X., Xu, Y., Ren, K., Bai, X., Zhang, C., and Li, M. (2019). Οι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες από την Paraboea martini προστατεύουν τα κύτταρα του φαιοχρωμοκυτώματος αρουραίου (PC12) από τον κυτταρικό τραυματισμό που προκαλείται από το υπεροξείδιο του υδρογόνου. Biosci. Biotechnol. Biochem. 83 (12), 2202–2212. doi: 10.1080/09168451.2019.1654359

Grefkes, C., and Ward, NS (2014). Αναδιοργάνωση του φλοιού μετά από εγκεφαλικό: πόσο και πόσο λειτουργικό; Νευροεπιστήμονας 20 (1), 56–70. doi: 10.1177/ 1073858413491147

Guzik, A., and Bushnell, C. (2017). Επιδημιολογία εγκεφαλικού και διαχείριση παραγόντων κινδύνου. Continuum (Minneap Minn) 23 (1, Cerebrovascular Dis), 15– 39. doi: 10.1212/con.0000000000000416

Hu, S., Wu, Υ., Zhao, Β., Hu, Η., Zhu, Β., Sun, Ζ., et αϊ. (2018). Οι σαπωνίνες Panax notoginseng προστατεύουν τα εγκεφαλικά μικροαγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα από δυσλειτουργία φραγμού στέρησης οξυγόνου-γλυκόζης/επαγόμενης από επαναιμάτωση μέσω της ενεργοποίησης της οδού σηματοδότησης αντιοξειδωτικών PI3K/Akt/Nrf2. Molecules 23 (11), 1–17. doi: 10,3390/μόρια23112781

Iwasawa, E., Ichijo, M., Ishibashi, S., and Yokota, T. (2016). Οξεία ανάπτυξη παράπλευρης κυκλοφορίας και θεραπευτικές προοπτικές στο ισχαιμικό εγκεφαλικό επεισόδιο. Νευρικό αναγεννητικό. Res. 11 (3), 368–371. doi: 10.4103/1673-5374.179033

Ji, S., Li, S., Zhao, Χ., Kang, Ν., Cao, Κ., Zhu, Υ., et αϊ. (2019). Προστατευτικός ρόλος των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων, τορενοζίτη Β και σαβατισίδης Α, στη νόσο του Αλτσχάιμερ. Exp. Εκεί. Med. 17 (5), 3755–3767. doi: 10.3892/τεμ.2019.7355

Jiang, Y., and Tu, PF (2009). Ανάλυση χημικών συστατικών στα είδη Cistanche. J. Chromatogr. 1216 (11), 1970–1979. doi: 10.1016/ j.chroma.2008.07.031

Jiang, Τ., Yu, JT, Zhu, XC, Wang, HF, Tan, MS, Cao, L., et αϊ. (2014). Η οξεία προετοιμασία της μετφορμίνης προσφέρει νευροπροστασία έναντι της εστιακής εγκεφαλικής ισχαιμίας μέσω της προενεργοποίησης της εξαρτώμενης από την ΑΜΡΚ αυτοφαγίας. Br. J. Pharmacol. 171 (13), 3146–3157. doi: 10.1111/bph.12655

Jiang, Χ., Andjelkovic, AV, Zhu, L., Yang, Τ., Bennett, MVL, Chen, J., et αϊ. (2018). Δυσλειτουργία αιματοεγκεφαλικού φραγμού και ανάρρωση μετά από ισχαιμικό εγκεφαλικό επεισόδιο. Επαιτώ. Neurobiol. 163-164, 144–171. doi: 10.1016/j.pneurobio.2017.10.001

Jung, JE, Kim, GS, Chen, Η., Maier, CM, Narasimhan, Ρ., Song, YS, et al. (2010). Επαναιμάτωση και νευροαγγειακή δυσλειτουργία στο εγκεφαλικό επεισόδιο: από βασικούς μηχανισμούς έως πιθανές στρατηγικές για νευροπροστασία. ΜοΙ. Neurobiol. 41 (2-3), 172–179. doi: 10.1007/s12035-010-8102-z

Kilkenny, C., Browne, WJ, Cuthill, IC, Emerson, M., and Altman, DG (2010). Βελτίωση της αναφοράς της έρευνας στη βιοεπιστήμη: οι κατευθυντήριες γραμμές ARRIVE για την αναφορά της έρευνας σε ζώα. PLoS Biol. 8 (6), e1000412. doi: 10.1371/περιοδικό. βιο.1000412

Ko, KM και Leung, HY (2007). Ενίσχυση της ικανότητας παραγωγής ATP, της αντιοξειδωτικής δράσης και των ανοσοτροποποιητικών δραστηριοτήτων από κινέζικα τονωτικά βότανα Yang και Yin. Πηγούνι. Med. 2, 3. doi: 10.1186/1749-8546-2-3

Kondo, Τ., Reaume, AG, Huang, ΤΤ, Carlson, Ε., Murakami, Κ., Chen, SF, et αϊ. (1997). Η μείωση της δραστηριότητας της δισμουτάσης του υπεροξειδίου του CuZn επιδεινώνει τη βλάβη των νευρωνικών κυττάρων και το σχηματισμό οιδήματος μετά από παροδική εστιακή εγκεφαλική ισχαιμία. J. Neurosci. 17 (11), 4180–4189. doi: 10.1523/JNEUROSCI.17-11-04180

Lee, Μ., Saver, JL, Alger, JR, Hao, Q., Starkman, S., Ali, LK, et al. (2012). Διαταραχές διαπερατότητας αιματοεγκεφαλικού φραγμού στο ισχαιμικό εγκεφαλικό επεισόδιο της οπίσθιας κυκλοφορίας: συχνότητα και σχέση με τον αιμορραγικό μετασχηματισμό. J. Neurol. Sci. 313 (1-2), 142–146. doi: 10.1016/j.jns.2011.08.048

Li, Ν., Wang, J., Ma, J., Gu, Ζ., Jiang, C., Yu, L., et αϊ. (2015). Νευροπροστατευτικά αποτελέσματα της εξ αποστάσεως θεραπείας με βότανα σε ασθενείς με μέτρια νόσο Alzheimer. Εναλλακτικό συμπλήρωμα με βάση το Evid. Med. 2015, 103985. doi: 10.1155/2015/103985

Li, Μ., Xu, Τ., Zhou, F., Wang, Μ., Song, Η., Xiao, Χ., et αϊ. (2018). Νευροπροστατευτικές επιδράσεις τεσσάρων γλυκοζιτών φαινυλαιθανοειδών στην απόπτωση που προκαλείται από Η(2)Ο(2) σε κύτταρα PC12 μέσω της οδού Nrf2/ARE. Int. J. ΜοΙ. Sci. 19 (4), 1–17. doi: 10.3390/ijms19041135

Li, R., Zhao, M., Tu, P., and Jiang, Y. (2019). Ταυτόχρονος προσδιορισμός πέντε φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών στο Cistanches Herba χρησιμοποιώντας ποσοτική ανάλυση πολλαπλών συστατικών με έναν μόνο δείκτη. J. Chin. Pharm. Sci. 28 (08), 537–546. doi: 10.5246/jcps.2019.08.051

Lian, J., Wang, L., Zhao, F., Lin, S., Yan, X., Jia, J., et αϊ. (2017). Επιδράσεις των γλυκοσιδών του cistanche στη συναπτική μορφολογική πλαστικότητα σε ποντίκια με επιτάχυνση της γήρανσης. J. Baotou Medl Coll. 33 (08), 78–80. doi: 10.16833/j.cnki.jbmc.2017.08.036

Liu, Y., Wang, D., Wang, H., Qu, Y., Xiao, X., and Zhu, Y. (2014). Η προστατευτική επίδραση του HET0016 στο οίδημα του εγκεφάλου και στη δυσλειτουργία του αιματοεγκεφαλικού φραγμού μετά από εγκεφαλική ισχαιμία/επαναιμάτωση. Brain Res. 1544, 45–53. doi: 10.1016/ j.brainres.2013.11.031

Liu, Ρ., Zhang, R., Liu, D., Wang, J., Yuan, C., Zhao, Χ., et αϊ. (2018). Διερεύνηση χρονικής πορείας της διαπερατότητας του αιματοεγκεφαλικού φραγμού και των μεταβολών της πρωτεΐνης σφιχτής σύνδεσης σε ένα μοντέλο αρουραίου μόνιμης εστιακής ισχαιμίας. J. Physiol. Sci. 68 (2), 121– 127. doi: 10.1007/s12576-016-0516-6

Liu, S., Chang, L., and Wei, C. (2019). Η ηχητική οδός του σκαντζόχοιρου μεσολαβεί στην προστασία που προκαλείται από την κάψουλα Tongxinluo έναντι της διαταραχής του αιματοεγκεφαλικού φραγμού μετά από ισχαιμικό εγκεφαλικό επεισόδιο σε ποντίκια. Βασική κλινική. Pharmacol. Toxicol. 124 (6), 660– 669. doi: 10.1111/bcpt.13186

Lu, CW, Lin, TY, Huang, SK και Wang, SJ (2016). Η εχινακοσίδη αναστέλλει την απελευθέρωση γλουταμικού καταστέλλοντας την εξαρτώμενη από την τάση είσοδο Ca(2 plus) και την πρωτεϊνική κινάση C στα άκρα των εγκεφαλοφλοιωδών νεύρων αρουραίου. Int. J. ΜοΙ. Sci. 17 (7), 1–13. doi: 10.3390/ijms17071006

McGrath, JC, Drummond, GB, McLachlan, EM, Kilkenny, C., and Wainwright, CL (2010). Οδηγίες για την αναφορά πειραμάτων με ζώα: οι κατευθυντήριες γραμμές ARRIVE. Br. J. Pharmacol. 160 (7), 1573–1576. doi: 10.1111/j.1476-5381.2010.00873.x

Mentor, S., and Fisher, D. (2017). Το επιθετικό αντιοξειδωτικό αναγωγικό στρες βλάπτει την αγγειογένεση των ενδοθηλιακών κυττάρων του εγκεφάλου και τη λειτουργία του αιματοεγκεφαλικού φραγμού. Curr. Neurovasc Res. 14 (1), 71–81. doi: 10.2174/1567202613666161129113950

Moretti, A., Ferrari, F., and Villa, RF (2015). Νευροπροστασία για ισχαιμικό εγκεφαλικό επεισόδιο: τρέχουσα κατάσταση και προκλήσεις. Pharmacol. Εκεί. 146, 23–34. doi: 10.1016/j.pharmthera.2014.09.003

Nyul-Toth, Α., Suciu, Μ., Molnar, J., Fazakas, C., Hasko, J., Herman, Η., et αϊ. (2016). Διαφορές στη μοριακή δομή του αιματοεγκεφαλικού φραγμού στον εγκεφαλικό φλοιό και τη λευκή ουσία: μελέτη in silico, in vitro και ex vivo. Είμαι. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 310 (11), H1702–H1714. doi: 10.1152/ajpheart.00774.2015

Ovbiagele, B., and Nguyen-Huynh, MN (2011). Επιδημιολογία εγκεφαλικού επεισοδίου: προώθηση της κατανόησής μας για τον μηχανισμό και τη θεραπεία της νόσου. Neurotherapeutics 8 (3), 319-329. doi: 10.1007/s13311-011-0053-1

Page, S., Munsell, A., and Al-Ahmad, AJ (2016). Η εγκεφαλική υποξία/ισχαιμία διαταράσσει επιλεκτικά συμπλέγματα στενής σύνδεσης σε μικροαγγειακά ενδοθηλιακά κύτταρα ανθρώπινου εγκεφάλου που προέρχονται από βλαστοκύτταρα. Fluids Barriers CNS 13 (1), 16. doi: 10,1186/ s12987-016-0042-1

Peng, F., Chen, J., Wang, X., Xu, C., Liu, T., and Xu, R. (2016). Αλλαγές στα επίπεδα των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων, αντιοξειδωτική δράση και άλλα ποιοτικά χαρακτηριστικά σε φέτες cistanche deserticola με επεξεργασία με ατμό. Chem. Pharm. Ταύρος. (Τόκιο) 64 (7), 1024–1030. doi: 10.1248/CPB.c16-00033

Priestley, JRC, Fink, KE, McCord, JM και Lombard, JH (2019). Η ενεργοποίηση του NRF2 με το Protandim εξασθενεί την αγγειακή δυσλειτουργία που προκαλείται από το αλάτι και τη μικροαγγειακή αραίωση. Microcirculation, 26 (7), e12575. doi: 10.1111/διάφορα 12575

Saboor, F., Reckmann, AN, Tomczyk, CU, Peters, DM, Weissmann, Ν., Kaschtanow, Α., et al. (2016). Τα κύτταρα του αγγειακού τοιχώματος που εκφράζουν τη νεστίνη οδηγούν στην ανάπτυξη πνευμονικής υπέρτασης. Ευρώ. Αναπνοή. J. 47 (3), 876–888. doi: 10.1183/13993003.00574-2015

Satoh, Τ., Okamoto, SI, Cui, J., Watanabe, Υ., Furuta, Κ., Suzuki, Μ., et αϊ. (2006). Ενεργοποίηση της οδού Keap1/Nrf2 για νευροπροστασία από ηλεκτρόφιλους [διόρθωση ηλεκτροφιλικών] επαγωγέων φάσης ΙΙ. Proc. Natl. Ακαδ. Sci. ΗΠΑ 103 (3), 768–773. doi: 10.1073/pnas.0505723102

Schellinger, PD, and Kohrmann, M. (2014). Καθιερώνεται ένα χρονικό παράθυρο 45- ωρών για ενδοφλέβια θρομβόλυση με ανασυνδυασμένο ενεργοποιητή πλασμινογόνου τύπου ιστού. Εγκεφαλικό επεισόδιο 45 (3), 912–913. doi: 10.1161/ strokeaha.113.002700

Sealy-Jefferson, S., Wing, JJ, Sanchez, BN, Brown, DL, Meurer, WJ, Smith, MA, et al. (2012). Διαφορές φύλου ανάλογα με την ηλικία και την εθνικότητα στον κίνδυνο εγκεφαλικού. Gend Med. 9 (2), 121–128. doi: 10.1016/j.genm.2012.02.002

Shi, Ζ., Wu, Υ., Zhu, Υ., Cui, Wang, Μ., Yin, Η., et αϊ. (2019). Ποσοτικός προσδιορισμός βεταΐνης, μαννιτόλης, φρουκτόζης, γλυκόζης και σακχαρόζης σε Cistanches Herba με HPLC-ELSD. Mod. Πηγούνι. Med. 32 (6), 1–11. doi: 10.13313/ j.issn.1673-4890.20190320006

Singh, D., Reeta, KH, Sharma, U., Jagannathan, NR, Dinda, AK και Gupta, YK (2019). Νευροπροστατευτική επίδραση του φουμαρικού μονομεθυλεστέρα σε τραυματισμό ισχαιμίας-επαναιμάτωσης σε αρουραίους: Ρόλος της οδού Nrf2/HO1 στην περιοχή περιέμφραγμα. Neurochem. Int. 126, 96–108. doi: 10.1016/j.neuint.2019.03.010

Siow, RC, Ishii, Τ., and Mann, GE (2007). Τροποποίηση της έκφρασης αντιοξειδωτικού γονιδίου από 4-hydroxynonenal: αθηροπροστατευτικός ρόλος της οδού μεταγραφής Nrf2/ARE. Redox Rep. 12 (1), 11–15. doi: 10.1179/ 135100007x162167

Suda, S., Katsura, K., Kanamaru, T., Saito, M., and Katayama, Y. (2013). Το βαλπροϊκό οξύ εξασθενεί τον τραυματισμό ισχαιμίας-επαναιμάτωσης στον εγκέφαλο του αρουραίου μέσω της αναστολής του οξειδωτικού στρες και της φλεγμονής. Ευρώ. J. Pharmacol. 707 (1-3), 26–31. doi: 10.1016/j.ejphar.2013.03.020

Suzuki, T., and Yamamoto, M. (2015). Μοριακή βάση του συστήματος Keap1-Nrf2. Free Radic. Biol. Med. 88 (Pt B), 93–100. doi: 10.1016/j.freeradbiomed.2015.06.006

Tenreiro, MM, Ferreira, R., Bernardino, L., and Brito, MA (2016). Κυτταρική απόκριση του αιματοεγκεφαλικού φραγμού σε τραυματισμό: Πιθανοί βιοδείκτες και θεραπευτικοί στόχοι για την αναγέννηση του εγκεφάλου. Neurobiol. Dis. 91, 262–273. doi: 10.1016/j.nbd.2016.03.014

Thompson, JW, Narayanan, SV, Koronowski, KB, Morris-Blanco, K., Dave, KR και Perez-Pinzon, MA (2015). Μονοπάτια σηματοδότησης που οδηγούν σε ισχαιμική μιτοχονδριακή νευροπροστασία. J. Bioenerg. Biomembr. 47 (1-2), 101–110. doi: 10.1007/s10863-014-9574-8

Wang, T., Zhang, X., and Xie, W. (2012). Cistanche deserticola YC Ma"Desert ginseng": μια κριτική. Είμαι. J. Chin. Med. 40 (6), 1123–1141. doi: 10.1142/s0192415x12500838

Wang, Χ., Wang, S., Wang, J., Guo, Η., Dong, Ζ., Chai, L., et αϊ. (2015). Νευροπροστατευτική δράση του xueshuantong για ένεση (λυοφιλοποιημένη) σε μοντέλο παροδικής και μόνιμης εγκεφαλικής ισχαιμίας αρουραίου. Εναλλακτικό συμπλήρωμα με βάση το Evid. Med. 2015, 134685. doi: 10.1155/2015/134685

Wang, D., Wang, H., and Gu, L. (2017). Οι αντικαταθλιπτικές και γνωστικές δραστηριότητες βελτίωσης του παραδοσιακού κινέζικου βοτάνου cistanche. Εναλλακτικό συμπλήρωμα με βάση το Evid. Med. 2017, 3925903. doi: 10.1155/2017/3925903

Wang, FJ, Wang, SX, Chai, LJ, Zhang, Y., Guo, H. και Hu, LM (2018). Η ένεση Xueshuantong (λυοφιλοποιημένη) σε συνδυασμό με τη σαλβιανολική λυοφιλοποιημένη ένεση προστατεύει από εστιακή εγκεφαλική ισχαιμία/ τραυματισμό επαναιμάτωσης σε αρουραίους μέσω της εξασθένησης του οξειδωτικού στρες. Acta Pharmacol. Αμαρτία. 39 (6), 998–1011. doi: 10.1038/aps.2017.128Wei, Y., Gong, J., Thimmulappa, RK, Kosmider, B., Biswal, S., and Duh, EJ (2013). Το Nrf2 δρα αυτόνομα στα κύτταρα στο ενδοθήλιο για να ρυθμίσει τον σχηματισμό των κυττάρων της κορυφής και τη διακλάδωση των αγγείων. Proc. Natl. Ακαδ. Sci. USA 110 (41), E3910–E3918. doi: 10.1073/pnas.1309276110

Xia, D., Zhang, Z., and Zhao, Y. (2018). Το Acteoside εξασθενεί το οξειδωτικό στρες και την απόπτωση των νευρώνων σε αρουραίους με εστιακή εγκεφαλική ισχαιμία-επαναιμάτωση. Biol. Pharm. Ταύρος. 41 (11), 1645–1651. doi: 10.1248/bob.b18-00210

Xiong, W., MacColl Garfinkel, AE, Li, Y., Benowitz, LI και Cepko, CL (2015). Το NRF2 προάγει τη νευρωνική επιβίωση σε νευροεκφυλισμό και οξεία νευρική βλάβη. J. Clin. Επενδύω. 125 (4), 1433–1445. doi: 10.1172/jci79735

Xu, HT, Zhang, CG, He, YQ, Shi, SS, Wang, YL και Chou, GX (2019). Οι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες από το Schnabelia centifolia (Benth.) PDCantino προάγουν τον πολλαπλασιασμό των οστεοβλαστών. Phytochemistry 164, 111-121. doi: 10.1016/j.phytochem.2019.05.003

Ya, BL, Liu, Q., Li, HF, Cheng, HJ, Yu, Τ., Chen, L., et αϊ. (2018). Το ουρικό οξύ προστατεύει από την εστιακή εγκεφαλική ισχαιμία/επαγόμενη από επαναιμάτωση οξειδωτικού στρες μέσω της ενεργοποίησης του Nrf2 και της ρύθμισης της έκφρασης του νευροτροφικού παράγοντα. Οξείδιο. Med. Cell Longev 2018, 6069150. doi: 10.1155/2018/6069150

Ye, ZY, Xing, HY, Wang, B., Liu, M. και Lv, PY (2019). Το DL-3-βουτυλοφθαλίδιο προστατεύει τον αιματοεγκεφαλικό φραγμό από τραυματισμό ισχαιμίας/υποξίας μέσω της ανοδικής ρύθμισης των πρωτεϊνών σφιχτής σύνδεσης. Πηγούνι. Med. J. (Engl.) 132 (11), 1344–1353. doi: 10,1097/cm9,0000000000000232

Yu, Q., Li, X., and Cao, X. (2016). Καρδιοπροστατευτικά αποτελέσματα εκχυλίσματος πλούσιου σε φαινυλαιθανοειδή γλυκοσίδια από Cistanche deserticola σε έμφραγμα του μυοκαρδίου που προκαλείται από ισχαιμία-επαναιμάτωση σε αρουραίους. Αννα. Vasc. Surg. 34, 234–242. doi: 10.1016/j.avsg.2016.04.002

Yu, Ν., Wang, Ζ., Chen, Υ., Yang, J., Lu, Χ., Guo, Υ., et αϊ. (2017). Το βελτιωτικό αποτέλεσμα της παρακέντησης αιμορραγίας σε δώδεκα σημεία Jing-well στο εγκεφαλικό οίδημα που προκαλείται από μόνιμη μέση εγκεφαλική ισχαιμία μέσω της προστασίας των σφιχτών συνδέσμων του αιματοεγκεφαλικού φραγμού. Εναλλακτικό συμπλήρωμα BMC. Med. 17 (1), 470. doi: 10,1186/s12906-017-1979-6

Yu, W., Gao, D., Jin, W., Liu, S. και Qi, S. (2018). Η προποφόλη προλαμβάνει το οξειδωτικό στρες μειώνοντας την ισχαιμική συσσώρευση ηλεκτρικού σε εστιακή εγκεφαλική ισχαιμία-επαναιμάτωση. Neurochem. Res. 43 (2), 420–429. doi: 10.1007/ s11064-017-2437-z

Yuen, CM, Chung, SY, Tsai, TH, Sung, PH, Huang, ΤΗ, Chen, YL, et al. (2015). Το εξωσωματικό κρουστικό κύμα μειώνει αποτελεσματικά τον όγκο του εγκεφαλικού εμφράγματος και βελτιώνει τη νευρολογική λειτουργία στον αρουραίο μετά από οξύ ισχαιμικό εγκεφαλικό επεισόδιο. Είμαι. J. Transl. Res. 7 (6), 976–994.

Zechariah, Α., ElAli, Α., Doeppner, TR, Jin, F., Hasan, MR, Helfrich, Ι., et αϊ. (2013). Ο αγγειακός ενδοθηλιακός αυξητικός παράγοντας προάγει την κάλυψη των περικυττάρων των τριχοειδών αγγείων του εγκεφάλου, βελτιώνει την εγκεφαλική ροή αίματος κατά τη διάρκεια της επακόλουθης εστιακής εγκεφαλικής ισχαιμίας και διατηρεί το μεταβολικό μισοφέγγαρο. Stroke 44 (6), 1690–1697. doi: 10.1161/strokeaha.111.000240

Zhang, QY, Wang, ZJ, Sun, DM, Wang, Y., Xu, P., Wu, WJ, et al. (2017). Νέα θεραπευτικά αποτελέσματα της θητείας στο ισχαιμικό εγκεφαλικό επεισόδιο: νέοι μηχανισμοί ακεραιότητας BBB. Οξείδιο. Med. Cell Longev 2017, 7150376. doi: 10.1155/2017/7150376

Zhang, R., Xu, M., Wang, Y., Xie, F., Zhang, G., and Qin, X. (2017). Nrf2-ένας πολλά υποσχόμενος θεραπευτικός στόχος για την άμυνα έναντι του οξειδωτικού στρες στο εγκεφαλικό. ΜοΙ. Neurobiol. 54 (8), 6006–6017. doi: 10.1007/s12035-016-0111-0

Zhang, Α., Yang, Χ., Li, Q., Yang, Υ., Zhao, G., Wang, Β., et αϊ. (2018). Ανοσοδιεγερτική δράση πολυσακχαριτών που εκχυλίζονται με νερό από το Cistanche deserticola ως φυτικό ανοσοενισχυτικό in vitro και in vivo. PLoS One 13 (1), e0191356. doi: 10.1371/journal.pone.0191356

Zhang, Υ., Wang, Κ., Chen, Η., He, R., Cai, R., Li, J., et αϊ. (2018). Αντιφλεγμονώδεις λιγνάνες και φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες από τη ρίζα του Isodon terricolous (D.Don) Kudo. Phytochemistry 153, 36-47. doi: 10.1016/ j.phytochem.2018.05.017

Zhang, Κ., Zhang, Q., Deng, J., Li, J., Li, J., Wen, L., et αϊ. (2019). Η οδός σηματοδότησης ALK5 μεσολαβεί στη νευρογένεση και στη λειτουργική αποκατάσταση μετά από εγκεφαλική ισχαιμία/επαναιμάτωση σε αρουραίους μέσω του Gadd45b. Cell Death Dis. 10 (5), 360. doi: 10,1038/s41419-019-1596-z

Σύγκρουση συμφερόντων:

Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι η έρευνα διεξήχθη απουσία εμπορικών ή οικονομικών σχέσεων που θα μπορούσαν να ερμηνευθούν ως πιθανή σύγκρουση συμφερόντων.

Ο επεξεργαστής χειρισμού δήλωσε κοινή συνεργασία, αν και καμία άλλη συνεργασία, με τους συγγραφείς KZ και YJ, τη στιγμή της αναθεώρησης.

Πνευματικά δικαιώματα © 2020 Wang, Li, Tu, Chen, Zeng και Jiang. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοιχτής πρόσβασης που διανέμεται σύμφωνα με τους όρους της άδειας αναφοράς Creative Commons (CC BY). Επιτρέπεται η χρήση, η διανομή ή η αναπαραγωγή σε άλλα φόρουμ, υπό την προϋπόθεση ότι ο αρχικός συγγραφέας και ο κάτοχος των πνευματικών δικαιωμάτων αναφέρονται και ότι αναφέρεται η αρχική δημοσίευση σε αυτό το περιοδικό, σύμφωνα με την αποδεκτή ακαδημαϊκή πρακτική. Δεν επιτρέπεται καμία χρήση, διανομή ή αναπαραγωγή που δεν συμμορφώνεται με αυτούς τους όρους.

For more information:1950477648nn@gmail.com