Η μελέτη του εκχυλίσματος Cistanche Deserticola που ρυθμίζει την πόλωση M2 όπως τα μακροφάγα για τη μείωση της κυτταρικής μετανάστευσης και του σχηματισμού αποικιών στον καρκίνο του μαστού

Περίληψη: Στόχος Η διερεύνηση του ρυθμιστικού μηχανισμού του αιθανολικού εκχυλίσματος του Cistanche deserticola epimedium brevican στην πόλωση των Μακροφάγων in vitro και την επίδρασή του σε Μ{{0}}όπως τα μακροφάγα που προάγουν τη μετανάστευση των κυττάρων 4T1 και το σχηματισμό αποικιών. Μέθοδοι Η μέθοδος CCK-8 χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση της επίδρασης διαφορετικών συγκεντρώσεων αιθανολικού εκχυλίσματος Cistanche deserticola deserticola στη δραστηριότητα μακροφάγων που προέρχονται από μυελό των οστών (BMDM) και για τον προσδιορισμό της ασφαλούς συγκέντρωσης αιθανολικού εκχυλίσματος Cistanche deserticola deserticola deserticola. Western blotting και qRT PCR χρησιμοποιήθηκαν για την ανίχνευση της επίδρασης του αιθανολικού εκχυλίσματος του Cistanche deserticola deserticola στην έκφραση της αργινάσης-1 (Arg-1) και του CD163, των δεικτών μακροφάγων όπως το Μ2. Η QRT PCR χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση της επίδρασης του αλκοολικού εκχυλίσματος Cistanche deserticola deserticola στη φλεγμονώδη ζώνη 1 (Fizz1) και τον ενεργοποιημένο με πολλαπλασιαστή υπεροξισώματος υποδοχέα (PPAR) των γονιδίων που σχετίζονται με μακροφάγα M2 (TAMs) (δέκτης ενεργοποιημένος από υπεροξείσωμο-πολλαπλασιαστή, PPAR ）, Οι επιδράσεις της χιτινάσης 3-όπως 3 (Ym1), χημειοκίνης 24 (CCL24), μακροφάγου Γαλακτόζη τύπου C-τύπου λεκτίνη 2 (MGL2) και έκφραση mRNA του ρυθμιστικού παράγοντα 4 (IRF4) ιντερφερόνης· Η επίδραση του εκχυλίσματος αιθανόλης του Cistanche deserticola deserticola σε M2 TAM που προάγουν τη μετανάστευση κυττάρων 4T1 ανιχνεύθηκε με τεστ ξυσίματος· Η επίδραση του αιθανολικού εκχυλίσματος του Cistanche deserticola deserticola στην ανάπτυξη των κυττάρων 4T1 που διεγείρονται από M2 TAMs ανιχνεύθηκε με πείραμα αποικίας. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το εκχύλισμα αιθανόλης Το Epimedium δεν είχε τοξικές ή παρενέργειες στα κύτταρα BMDM σε συγκέντρωση 0.015 625 έως 2.000 000 mg/mL. Το αιθανολικό εκχύλισμα του Cistanche deserticola αναστέλλει σημαντικά τα γονίδια που σχετίζονται με τα M2 TAMs Arg{{{ 36}}, CD163, Fizz1, PPAR, Η έκφραση των CCL24, Ym1, MGL2 και IRF4 (Ρ<0.05, 0.01, 0.001) inhibited the migration and colony formation ability of M2-TAMs in 4T1 cells (P<0.05, 0.001). Conclusion The ethanol extract of Cistanche deserticola can weaken the promotion of M2-like macrophages on 4T1 Cell migration and colony formation, and its mechanism may be related to the inhibition of M2-type polarization of macrophages.

Λέξεις κλειδιά: Cistanche deserticola; Μακροφάγα; Πόλωση Μ2; Καρκίνος του μαστού; Μετανάστευση; Σχηματισμός αποικίας; Βενζοϊνικό οξύ; Κωνοφόρο αλδεΰδη; Emodin; Βανιλικό οξύ

Επιδράσεις του Cistanche-Antitor

Ο καρκίνος του μαστού είναι ο κύριος κακοήθης όγκος που θέτει σε κίνδυνο την υγεία των γυναικών και επίσης η δεύτερη κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο στον κόσμο [1-2]. Στο τελευταίο στάδιο του καρκίνου του μαστού, υπάρχουν μεταστάσεις στους πνεύμονες και στο ήπαρ. Όταν συμβεί μετάσταση οργάνων, το ποσοστό επιβίωσης και η ποιότητα ζωής των ασθενών θα μειωθούν σημαντικά [3]. Η θεραπεία πρώτης γραμμής του καρκίνου του μαστού βασίζεται κυρίως στη χημειοθεραπεία με ανθρακυκλίνη, πακλιταξέλη και άλλα κυτταροτοξικά φάρμακα, αλλά συχνά εμφανίζεται αντίσταση στα φάρμακα κατά τη διάρκεια της θεραπείας. Ως εκ τούτου, είναι πολύ σημαντικό να διερευνηθεί ο παθολογικός μηχανισμός του καρκίνου του μαστού και να βρεθούν αποτελεσματικές μέθοδοι θεραπείας. Τα μακροφάγα είναι ζωτικής σημασίας για την εμφάνιση και την ανάπτυξη διαφόρων όγκων [4-5] και οι βιοδείκτες των μακροφάγων μπορούν να χρησιμεύσουν ως προγνωστικοί δείκτες. Το υψηλό ποσοστό διήθησης μακροφάγων σχετίζεται με την κακή πρόγνωση του καρκίνου του μαστού. Τα μακροφάγα σχετιζόμενα με όγκους (TAMs) είναι ο πιο τυπικός τύπος κυττάρων του ανοσοποιητικού που διεισδύουν στον όγκο. Παίζουν σημαντικό ρόλο από τον πρώιμο καρκίνο του καρκίνου του μαστού έως την εξέλιξη, ιδιαίτερα τη μετάσταση [6]. Τα ΤΑΜ εμπλέκονται στη μετάσταση, την αγγειογένεση, την αναδιαμόρφωση της μήτρας, την εισβολή και την ανοσοκαταστολή του καρκίνου του μαστού. Η παραδοσιακή κινεζική ιατρική παίζει σημαντικό ρόλο στην όλη πορεία θεραπείας του καρκίνου του μαστού. Η παραδοσιακή κινεζική ιατρική έχει τα χαρακτηριστικά πολλαπλών συστατικών, μονοπατιών και στόχων, τα οποία μπορούν να μειώσουν τα ποσοστά υποτροπής και μετάστασης των ασθενών με όγκο, να βελτιώσουν την ποιότητα ζωής τους και να παρατείνουν τον χρόνο επιβίωσής τους. Cistanche deserticola deserticornu Maxim. Είναι φυτό Berberidaceae των Ranunculales. Είναι γλυκό και γλυκό στη γεύση, ζεστό στη φύση και ακολουθεί τα δύο κανάλια του ήπατος και των νεφρών. Έχει τα αποτελέσματα της ενδυνάμωσης των μυών και των οστών, την τόνωση του νεφρού yang, την προστασία του καρδιαγγειακού συστήματος [7], την προώθηση του σχηματισμού οστών [8], τη ρύθμιση της ικανότητας του ανοσοποιητικού [9] και την αναστολή του καρκίνου [10]. Η έρευνα δείχνει ότι το αλκοολικό εκχύλισμα του Cistanche deserticola μπορεί να αναστείλει τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων του μαστού [11], αλλά η έρευνα για το πώς το αλκοολούχο εκχύλισμα του Epimedium επηρεάζει το ανοσοποιητικό μικροπεριβάλλον του καρκίνου του μαστού δεν έχει αναφερθεί. Ως εκ τούτου, αυτή η μελέτη σκοπεύει να διερευνήσει την επίδραση του αλκοολικού εκχυλίσματος Cistanche deserticola deserticola σε μακροφάγα τύπου Μ2-και τη ρύθμισή του στη μετανάστευση κυττάρων και τον σχηματισμό αποικιών καρκίνου του μαστού 4T1, για να παράσχει πειραματική βάση και θεωρητική καθοδήγηση για την παρακολούθηση κλινική εφαρμογή του Epimedium.

Οφέλη για την υγεία σε σκόνη Cistanche - Κατά του όγκου

Κάντε κλικ εδώ για να δείτε τα προϊόντα Cistanche

【Ζητήστε περισσότερα】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

1. Υλικό

1.1 Ζώο και κύτταρο

Ποντίκι SPF Grade Female C57BL/6, ηλικίας 8 εβδομάδων, αγορασμένο από τη Sibeifu (Beijing) Biotechnology Co., Ltd., με αριθμό πιστοποιητικού ζώων 110324210105240115. Τα ποντίκια ανατράφηκαν στο Πειραματικό Κέντρο Ζώων του Πέμπτου Ιατρικού Κέντρου του Γενικού Νοσοκομείου ο Λαϊκός Απελευθερωτικός Στρατός. Καθ' όλη τη διάρκεια της πειραματικής περιόδου, τα ποντίκια έλαβαν δωρεάν τροφή και νερό και τους δόθηκε ένας κύκλος 12-ώρας φωτός/12-ώρας σκότους. Πειράματα σε ζώα διεξήχθησαν σύμφωνα με τις οδηγίες για τη φροντίδα και τη χρήση των πειραματόζωων και εγκρίθηκαν από το Πέμπτο Ιατρικό Κέντρο του Γενικού Νοσοκομείου του Λαϊκού Απελευθερωτικού Στρατού. Ο αριθμός ηθικής έγκρισης για πειράματα σε ζώα είναι IACUC-2021-0007. Τα κύτταρα 4T1 αγοράστηκαν από τη Shanghai Fuheng Biotechnology Co., Ltd.

Πειραματική Μελέτη στο Cistanche deserticola

1.2 Το φάρμακο

Το Cistanche deserticola αναγνωρίστηκε από τον ερευνητή Xiao Xiaohe ως Epimedium E., ένα φυτό από ξηρά φύλλα Berberidaceae από το Brevicornum Maxim. Πάρτε φύλλα Cistanche deserticola deserticola, θρυμματίστε τα και περάστε τα από το κόσκινο Νο. 4, ζυγίστε τα ακριβώς, προσθέστε αραιή αιθανόλη, εκτελέστε την επεξεργασία με υπερήχους (ισχύς 400 W, συχνότητα 50 kHz) για 1 ώρα, ψύξτε τα, ζυγίστε τα ξανά. χρησιμοποιήστε αραιή αιθανόλη για να αναπληρώσετε το χαμένο βάρος, ανακινήστε τα, διηθήστε τα, πάρτε το συνεχές διήθημα, καταψύξτε και στεγνώστε τα για να λάβετε εκχύλισμα Cistanche deserticola deserticola. 1.3 Φάρμακα και αντιδραστήρια αντίσωμα αργινάσης-1 (Arg-1) (αριθμός παρτίδας: 93668) αγοράστηκε από την CST Company των Ηνωμένων Πολιτειών. - Το αντίσωμα ακτίνης (αριθμός παρτίδας 20536 1-AP) αγοράστηκε από την Protentech Company. Το δευτερεύον αντίσωμα IgG κατσίκας αντι-κουνελιού με επισήμανση HRP (αριθμός παρτίδας J111-035-003) αγοράστηκε από την Jackson Immuno Research. Το αντιδραστήριο Trizol (αριθμός παρτίδας BSC51M1) αγοράστηκε από την εταιρεία Biolux. Το αντιδραστήριο CCK-8 (αριθμός παρτίδας KTA1020-1000T) αγοράστηκε από την Abbkine Company. Ο παράγοντας Interleukin 4 (IL-4) (αριθμός παρτίδας 96-214-14-20) αγοράστηκε από την Peprotech.

1.4 Όργανο

QB-9002 Seismic Plate Instrument (Haimen Qilin Bell Company); Epoch συνδεδεμένος με ένζυμο ανοσοπροσροφητικός προσδιορισμός και αναλυτής συγκέντρωσης P100 συν νουκλεϊκού οξέος (Bio Tek Company, Η.Π.Α.); Quantstudio 6 Flex fluorescence quantitative PCR όργανο (Thermo Fisher Scientific, USA); Φυγόκεντρος παλάμης MINI6K (Hangzhou Aosheng Company); Δονητής Vortex-Genie 2 (Scientific Industries, ΗΠΑ).

2 Μέθοδοι

2.1 Ανάλυση συστατικών αλκοολούχου εκχυλίσματος Cistanche deserticola

2.1.1 Δείγμαπροετοιμασία Προσθέστε μεθανόλη στο αλκοολούχο εκχύλισμα του Cistanche deserticola για να παρασκευαστεί ένα εναιώρημα 5 mg/mL, εκχυλίστε το με υπερήχους για 40 λεπτά, πάρτε 1 mL και φυγοκεντρήστε το με 12 000 r/min για 10 λεπτά , πάρτε το υπερκείμενο μετά τη φυγοκέντρηση, περάστε τη μεμβράνη φίλτρου 0,22 μ M, δείγμα σε UPLC-MS/MS. Τα συστατικά του Cistanche deserticola συλλέχθηκαν μέσω της βάσης δεδομένων φαρμακολογίας και της πλατφόρμας ανάλυσης συστημάτων παραδοσιακής κινεζικής ιατρικής (TCMSP). Τα αποτελέσματα του MS αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας την πλατφόρμα δεδομένων Progression QI (με βάση τις βάσεις δεδομένων NPATLAS και GNPS) και τα αποτελέσματα συγκρίθηκαν με την ανάκτηση στοιχείων Cistanche deserticola για ανάλυση μη στοχευμένων συστατικών.

2.1.2 Χρωματογραφικές συνθήκες:

Απόκτηση χρωματογραφικής στήλης UPLC BEH C18 (100 mm × 2,1 mm, 1,7 μm), η κινητή φάση είναι διπλά απεσταγμένο νερό (Α) - ακετονιτρίλιο (Β), έκλουση βαθμίδας: 0-3 λεπτά, 5 τοις εκατό Β; 3 έως 35 λεπτά, 5 τοις εκατό έως 95 τοις εκατό Β. 35-42 λεπτά, 95 τοις εκατό -5 τοις εκατό Β. Ο ογκομετρικός ρυθμός ροής είναι 0,3 mL/min. ο όγκος έγχυσης είναι 5 μ L. Η θερμοκρασία του κουτιού θερμοκρασίας στήλης είναι 40 μοίρες. 2.1.3 Συνθήκες φασματομετρίας μάζας: Η πηγή ιόντων ηλεκτροψεκασμού (ESI) χρησιμοποιείται για ανίχνευση σε λειτουργία θετικού ιόντος και η τριχοειδική θερμοκρασία είναι 275 μοίρες. Ρυθμός ροής όγκου αερίου περιβλήματος 20 Arb; Ρυθμός ροής βοηθητικού όγκου αερίου 5 Arb; Η τάση πηγής ιόντων είναι 5 kV. 2.2 Κυτταρική καλλιέργεια Μακροφάγα που προέρχονται από μυελό των οστών (BMDM) απομονώθηκαν από τον μυελό των οστών του μηριαίου οστού 8-εβδομάδων θηλυκών ποντικών C57BL/6. Καλλιεργήθηκαν σε μέσο DMEM που περιείχε 10 τοις εκατό εμβρυϊκό βόειο ορό, 1 τοις εκατό πενικιλλίνη/στρεπτομυκίνη και παράγοντα διέγερσης αποικίας μακροφάγων ποντικού M-CSF (50 ng/mL) και τοποθετήθηκαν σε επωαστήρα στους 37 βαθμούς και 5 τοις εκατό CO2 για 6 ημέρες.

Πέψτε τα κύτταρα με 0,25 τοις εκατό θρυψίνη EDTA (2:1) με ρυθμό 1,2 × Εμβολιάστε πυκνότητα 106/mL σε τρυβλίο φρεατίου όλη τη νύχτα. Τη δεύτερη ημέρα, μετά την προσθήκη του αλκοολικού εκχυλίσματος Cistanche deserticola για 1 ώρα, τα κύτταρα διεγέρθηκαν με IL-4 (20 ng/mL) για 24 ώρες.

2.3 Η μέθοδος CCK{{0}} χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση της κυτταροτοξικότητας του αλκοολικού εκχυλίσματος Cistanche deserticola deserticola σε κύτταρα BMDM × Εμβολιάστε 106/mL πυκνότητα σε πλάκες 96 φρεατίων, τοποθετήστε στον επωαστήρα όλη τη νύχτα, θεραπεύστε κύτταρα με διαφορετικές συγκεντρώσεις μάζας (0, 0.015 625, {{10}}.031 25, 0.{{ 9}}, 0,125, 0,25, 0,5, 1, 2, 4 mg/mL) αλκοολούχου εκχυλίσματος Cistanche deserticola για 24 ώρες. Απορρίψτε το μέσο καλλιέργειας, προσθέστε διάλυμα CCK-8-μέσου καλλιέργειας (1:10), επωάστε στον επωαστήρα για 1 ώρα, μετρήστε την απορρόφηση (A) στα 450 nm με συσκευή ανάγνωσης μικροπλακών και ανιχνεύστε την τοξικότητα του αλκοολικού εκχυλίσματος Cistanche deserticola deserticola στα κύτταρα.

2.4Χρησιμοποιήθηκε στύπωμα Western για την ανίχνευση της έκφρασης της πρωτεΐνης Arg{{0}} σε κύτταρα BMDM. Η ομάδα ελέγχου, η ομάδα μοντέλου και η ομάδα εκχυλίσματος αλκοόλης Cistanche deserticola με διαφορετικές συγκεντρώσεις μάζας (0.062 5, 0.125, 0,25 mg/mL) δημιουργήθηκαν. Το φάρμακο χορηγήθηκε σύμφωνα με τη μέθοδο υπό "2.2". Τα κύτταρα συλλέχθηκαν και προστέθηκε προϊόν λύσης RIPA για εκχύλιση πρωτεΐνης. Το δείγμα πρωτεΐνης υποβλήθηκε σε ηλεκτροφόρηση γέλης 10 τοις εκατό δωδεκυλοθειικού νατρίου-πολυακρυλαμιδίου, μεταφέρθηκε σε μεμβράνη PVDF, σφραγίστηκε σε TBST που περιέχει 5 τοις εκατό αποβουτυρωμένο γάλα για 1 ώρα, προστέθηκε με πρωτογενές αντίσωμα και επωάστηκε όλη τη νύχτα στους 4 βαθμούς. Μετά το πλύσιμο με TBST, επωάστε με δευτερεύον αντίσωμα και αναπτύξτε χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο ανίχνευσης ενισχυμένης χημειοφωταύγειας.

2.5 Χρησιμοποιήθηκε qRT PCR για την ανίχνευση του χημειοτακτικού παράγοντα 24 των κυττάρων BMDM (CCL24), της φλεγμονώδους ζώνης 1 (Fizz1), της χιτινάσης 3-όπως 3 (Ym1), του μακροφάγου γαλακτόζης τύπου C-τύπου λεκτίνη 2 (MGL2) και του πολλαπλασιαστή υπεροξισώματος- ενεργοποιημένος υποδοχέας (δέκτης ενεργοποιημένος από υπεροξείσωμα-πολλαπλασιαστής, PPAR）, ρυθμιστικός παράγοντας ιντερφερόνης 4 (IRF4), Arg-1 και έκφραση mRNA CD163 ορίστηκαν στην ομάδα ελέγχου, την ομάδα μοντέλου και διαφορετικές συγκεντρώσεις μάζας ({{17} }.062 5, 0.125, 0.25 mg/mL) αλκοολούχου εκχυλίσματος Cistanche deserticola σύμφωνα με το "2.2"

2.6Παρασκευή ρυθμισμένου μέσου Μέθοδος αναφοράς [12]: Το BMDM καλλιεργήθηκε σύμφωνα με τη μέθοδο στο «2.2». Αφού προσαρτήθηκε η πλάκα σπόρων κυττάρων, προστέθηκε ένα μέσο χωρίς ορό που περιείχε αλκοολικό εκχύλισμα Cistanche deserticola (0.25 mg/mL) και IL-4 (20 ng/mL ) προστέθηκε 1 ώρα αργότερα. Μετά από 24 ώρες, συλλέξτε το υπερκείμενο ως το ρυθμισμένο μέσο. Το ρυθμισμένο μέσο φυγοκεντρήθηκε σε 2000 r/min για να κατακρημνίσει τα θραύσματα, αναρροφήθηκε και αποθηκεύτηκε στους -80 βαθμούς για πειράματα μετανάστευσης κυττάρων. Το BMDM καλλιεργήθηκε σύμφωνα με τη μέθοδο του "2.2" και προστέθηκε μέσο DMEM που περιείχε αλκοολικό εκχύλισμα Cistanche deserticola (0,25 mg/mL) αφού προσαρτήθηκε η πλάκα σποράς κυττάρων στο τοίχωμα και IL{16}} (20 ng /mL) προστέθηκε μία ώρα αργότερα. Μετά από 24 ώρες, συλλέξτε το υπερκείμενο ως το ρυθμισμένο μέσο. Φυγοκεντρήστε το ρυθμισμένο μέσο 2000 για να κατακρημνιστούν θραύσματα, αναρροφήστε το υπερκείμενο και αποθηκεύστε το σε -80 βαθμό για πειράματα κυτταρικών αποικιών.2.7 Πείραμα μετανάστευσης κυττάρων Τοποθετήστε το πρόσθετο {{0}}hole plug-in για επούλωση τραυμάτων σε 12-πλάκα οπών και τα κύτταρα 4T1 υποβάλλονται σε επεξεργασία με 3,6 × 105/mL εμβολιασμό . Αφού τα κύτταρα κολλήσουν στον τοίχο κατά τη διάρκεια της νύχτας, αφαιρέστε το πρόσθετο και ξεπλύνετε τα αιωρούμενα νεκρά κύτταρα με PBS. Προσθέστε μέσο χωρίς ορό που περιέχει 50 τοις εκατό ρυθμισμένο μέσο. Επωάστε σε θερμοκοιτίδα για 24 ώρες. Στις 0 και στις 24 ώρες, τραβήξτε φωτογραφίες με ένα ανεστραμμένο μικροσκόπιο, αναλύστε τις εικόνες με το Image J και υπολογίστε τον ρυθμό μετανάστευσης κυψελών. Ρυθμός μετανάστευσης κυττάρων=(0 h περιοχή τραύματος -24 h περιοχή τραύματος)/0 h περιοχή τραύματος

2.8Πείραμα κυτταρικής αποικίας 1000 4Κύτταρα Τ1 εμβολιάστηκαν σε κάθε φρεάτιο πλακών 6 φρεατίων και επωάστηκαν με μέσο που περιείχε 50 τοις εκατό ρυθμισμένο μέσο για 8 ημέρες. Διορθώστε με 2 τοις εκατό παραφορμαλδεΰδη, βαφή με 1 τοις εκατό Crystal violet, τραβήξτε φωτογραφίες και αναλύστε τις εικόνες με το Image J.

2.9Η στατιστική ανάλυση διεξήχθη χρησιμοποιώντας το λογισμικό GraphPad Prism 8, με τα δεδομένα μέτρησης να εκφράζονται ως xs ±, και τις συγκρίσεις μεταξύ των ομάδων χρησιμοποιώντας μονόδρομη ANOVA.

3 Αποτελέσματα

3.1 Η ανάλυση σύνθεσης του αλκοολικού εκχυλίσματος του Cistanche deserticola deserticola φαίνεται στο Σχήμα 1 και στον Πίνακα 2. Το αλκοολικό εκχύλισμα του Cistanche deserticola deserticola περιέχει βενζοϊκό οξύ, κωνοφερυλαλδεΰδη, Emodin, βανιλικό οξύ, υαλίνη και λεπιρουδίνη Α.

Πίνακας 1 Αλληλουχίες εκκινητών

Σχήμα 1 Ανάλυση αλκοολικών εκχυλισμάτων από Cistanche deserticola deserticola

Πίνακας 2 Ανάλυση συστατικών αλκοολικού εκχυλίσματος Cistanche deserticola deserticola

3.2Κυτταροτοξικότητα του εκχυλίσματος αλκοόλης Cistanche deserticola στο BMDM Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι 0.015 625 - 2 mg/mL εκχυλίσματος αλκοόλης Cistanche deserticola δεν είχε τοξική επίδραση στα κύτταρα BMDMs μετά την επεξεργασία των κυττάρων BMDMs με διαφορετικές συγκεντρώσεις αλκοολικού εκχυλίσματος Cistanche deserticola για 24 ώρες (Εικόνα 2).

Εικ. 2 Κυτταροτοξικότητα αλκοολικού εκχυλίσματος Cistanche deserticola deserticola σε BMDM (xs ±, n=3)

3.3 Το αιθανολικό εκχύλισμα Cistanche deserticola αναστέλλει την πόλωση Μ2 των μακροφάγων in vitro. Στα μακροφάγα BMDM M0, οι δείκτες Arg-1 και CD163 των μακροφάγων τύπου M2- έχουν χαμηλή έκφραση και η έκφραση αυξάνεται σημαντικά μετά την επαγωγή από την IL-4, υποδεικνύοντας ότι το BMDM πολώνεται επιτυχώς σε μακροφάγα τύπου Μ2-. Οι τεχνικές Western blotting και qRT PCR χρησιμοποιήθηκαν για να επαληθευτεί ότι το αλκοολικό εκχύλισμα του Cistanche deserticola μπορεί να ρυθμίσει την έκφραση του Arg-1 και του CD163 που προκαλείται από την IL-4 με δοσοεξαρτώμενο τρόπο (Εικόνα 3), υποδεικνύοντας ότι το αλκοολικό εκχύλισμα του Cistanche deserticola μπορεί να αναστείλει άμεσα την πόλωση όπως το Μ2 των μακροφάγων. Για περαιτέρω διερεύνηση της επίδρασης του αλκοολικού εκχυλίσματος Cistanche deserticola deserticola στην πόλωση M2 των μακροφάγων, χρησιμοποιήθηκε qRT PCR για τη μελέτη των γονιδίων που σχετίζονται με τα μακροφάγα Μ2 Fizz1 και PPAR. Τα επίπεδα μεταγραφής των Ym1, CCL24, MGL2 και IRF4 φαίνονται στο σχήμα. 4. Σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλων, τα επίπεδα έκφρασης mRNA των Fizz1, Ym1, CCL24 και IRF4 στο αλκοολούχο εκχύλισμα του Cistanche deserticola (0.062 5, 0.125, { Η ομάδα {29}}.25 mg/mL μειώθηκε σημαντικά (Ρ<0.05, 0.01, 0.001), and the PPAR in the alcohol extract of Cistanche deserticola (0.125, 0.25 mg/mL) group γ The mRNA expression level decreased significantly (P<0.01, 0.001), and the MGL2 mRNA expression level in the alcohol extract of Cistanche deserticola deserticola (0.25 mg/mL) group decreased significantly (P<0.001).

3.4 Το αιθανολικό εκχύλισμα Cistanche deserticola αποδυναμώνει την προώθηση μακροφάγων τύπου Μ2-στη μετανάστευση των κυττάρων 4T1. Το scratch test χρησιμοποιήθηκε για να παρατηρηθεί η επίδραση του υπερκειμένου του εκχυλίσματος αιθανόλης Cistanche deserticola στην ικανότητα μετανάστευσης των καρκινικών κυττάρων του μαστού. Το BMDM επωάστηκε σε μέσο χωρίς ορό που περιείχε IL-4 και εκχύλισμα αλκοόλης Cistanche deserticola deserticola για 24 ώρες και το υπερκείμενο συλλέχθηκε ως ρυθμισμένο μέσο. Το 4T1 καλλιεργήθηκε σε μέσο χωρίς ορό που περιείχε 50 τοις εκατό ρυθμισμένο μέσο, ​​όπως φαίνεται στο σχήμα 5, το ρυθμισμένο μέσο που συλλέχθηκε με BMDM που υποβλήθηκε σε επεξεργασία μόνο με IL-4 προώθησε σημαντικά τη μετανάστευση των κυττάρων 4T1 (Ρ<0.05), while the conditioned medium of BMDM treated with alcohol extract of Cistanche deserticola significantly inhibited the migration of 4T1 cells (P<0.05). 3.5 Cistanche deserticola alcohol extract weakens the promotion of M2-like macrophages on 4T1 cell colony formation Use colony formation experiment to evaluate the effect of Cistanche deserticola alcohol extract on M2-like macrophages promoting 4T1 cell colony formation. As shown in Figure 6, the conditioned medium treated with IL-4 significantly promoted the colony formation of 4T1 cells (P<0.05), while the conditioned medium treated with alcohol extract of Cistanche deserticola significantly inhibited the colony formation of cells (P<0.001)

4. Συζήτηση

Οφέλη από σωληνοειδές σωληνίσκο-αντικαρκινικό

Επί του παρόντος, ο καρκίνος του μαστού εξακολουθεί να αποτελεί παγκόσμιο πρόβλημα δημόσιας υγείας. Η συχνότητα εμφάνισης του καρκίνου του μαστού αυξάνεται χρόνο με το χρόνο και σε νεαρή ηλικία, γεγονός που απειλεί σοβαρά την υγεία των γυναικών [13]. Η παραδοσιακή κινεζική ιατρική πιστεύει ότι στα πρώιμα στάδια των όγκων, λόγω της αδυναμίας του σώματος να διασπείρει το τσι λόγω της ανεπάρκειας του yang, το yin qi είναι ανεπαρκές και δεν μπορεί να σχηματίσει φυσιολογική συσσώρευση σπέρματος. Ωστόσο, η μη φυσιολογική συσσώρευση οδηγεί σε παθολογικά προϊόντα όπως η θολότητα των φλεγμάτων και η στάση του αίματος, οδηγώντας στη μετατροπή των τοξινών σε όγκους [14]. Το Cistanche deserticola deserticola, ως απαραίτητο φάρμακο για τονωτικό γιανγκ, έχει τα αποτελέσματα της τονωτικής ζωτικής ενέργειας και του γιανγκ των νεφρών και μπορεί να ρυθμίσει την ανοσία. Είναι ένα ευρέως χρησιμοποιούμενο κινέζικο φάρμακο που τονώνει τα νεφρά στην κλινική πράξη. Τώρα χρησιμοποιείται συχνά για τη θεραπεία του καρκίνου του μαστού και χρησιμοποιείται συχνά ως σύνθετο φάρμακο υψηλής συχνότητας. Ένα από τα χαρακτηριστικά του καρκίνου είναι η δυσλειτουργία του ανοσοποιητικού. Τα κύτταρα του ανοσοποιητικού που πρέπει να καταπολεμήσουν τους όγκους είναι συγκεκριμένα η σεξουαλική αναστολή από τους περιβάλλοντες ιστούς και το μικροπεριβάλλον του όγκου, που οδηγεί σε ανεξέλεγκτη ανάπτυξη και εξάπλωση των όγκων [15]. Όλο και περισσότερα στοιχεία δείχνουν ότι όταν υπάρχει στο μικροπεριβάλλον του όγκου, έμφυτα ανοσοκύτταρα (μακροφάγα, ουδετερόφιλα, δενδριτικά κύτταρα, έμφυτα λεμφοειδή κύτταρα, κύτταρα σεξουαλικής αναστολής που προέρχονται από μυελό των οστών και κύτταρα ΝΚ) και προσαρμοστικά ανοσοκύτταρα (Τ κύτταρα και Β κύτταρα ) συμβάλλουν στην εξέλιξη του όγκου [16]. Τα μακροφάγα είναι απαραίτητοι μεσολαβητές της ομοιόστασης των ιστών και η πόλωσή τους προς εναλλακτικά ενεργοποιημένα μακροφάγα (τύπου Μ2) μπορεί να προάγει τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων, την αγγειογένεση και τη μετάσταση. Ως εκ τούτου, η ρύθμιση των TAMs και η διατήρηση της ομοιόστασής τους έχει γίνει το επίκεντρο της θεραπείας του όγκου [17]. Τα ΤΑΜ εμπλέκονται στη μετάσταση, την αγγειογένεση, την αναδιαμόρφωση της μήτρας, την εισβολή και την ανοσοκαταστολή του καρκίνου του μαστού. Τα ΤΑΜ χωρίζονται κυρίως σε δύο διαφορετικούς φαινότυπους, δηλαδή σε κλασικά ενεργοποιημένα μακροφάγα Μ1-όπως και σε εναλλακτικά ενεργοποιημένα Μ2-μακροφάγα [18]. Σε καλοήθεις ή μη λειτουργικούς όγκους, τα περισσότερα TAM είναι κλασικά ενεργοποιημένα Μ1-όπως μακροφάγα, τα οποία είναι ενεργοποίηση ιντερφερόνης, IFN- ή λιποπολυσακχαρίτη (LPS), προάγοντας έτσι τα TAM να παράγουν προφλεγμονώδεις παράγοντες και φαγοκυττάρωση των καρκινικών κυττάρων. Τα μακροφάγα τύπου Μ{14}}μπορούν να ενεργοποιηθούν από Th2 κυτοκίνες όπως η IL-4 για την παραγωγή μεγάλου αριθμού αντιφλεγμονωδών παραγόντων, οι οποίοι προάγουν άμεσα την ανάπτυξη καρκίνου του μαστού [19]. Επομένως, η αντιστροφή ή η αναστολή της πόλωσης μακροφάγων τύπου Μ2-είναι η στρατηγική της ανοσοθεραπείας για τον καρκίνο του μαστού. Το Arg-1 είναι δείκτης μακροφάγων τύπου Μ2-και η υπερέκφρασή του σχετίζεται με κακή πρόγνωση σε ασθενείς με καρκίνο [20].

Κινεζικό βότανο cistanche-Αντιόγκο

Το CD163 είναι ένας ειδικός δείκτης μακροφάγων τύπου Μ2-[21], ο οποίος σχετίζεται με μετάσταση όγκου. Το CD163 συν TAM προκαλεί επιθηλιακή-μεσεγχυματική μετάβαση (EMT) και προάγει τη μετανάστευση των καρκινικών κυττάρων [22]. Τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης υποδεικνύουν ότι το εκχύλισμα Cistanche deserticola deserticola παίζει ρόλο στη ρύθμιση της ανοσίας σε κάποιο βαθμό, αναστέλλοντας την έκφραση του Arg{-1 και του CD163, των επιφανειακών δεικτών M2-όπως μακροφάγων, και την αναστολή της πόλωσης τύπου Μ2-των μακροφάγων. PPAR Είναι ένας μεταβολικός αισθητήρας που ρυθμίζει την ομοιόσταση των λιπιδίων μέσω της ενεργοποίησης διαφόρων λιπαρών οξέων και παραγώγων λιπαρών οξέων (όπως το παλμιτικό οξύ) [23]. PPAR Σε σχέση με την πόλωση Μ2 των μακροφάγων, το PPAR έχει γίνει ο κύριος ρυθμιστής της πόλωσης του Μ2 στα μακροφάγα [24], οι συνδέτες PPAR έχουν αποδειχθεί ότι έχουν ισχυρές ανασταλτικές επιδράσεις στην ανάπτυξη του όγκου in vivo [25]. Το Fizz1 και το Ym1 είναι και τα δύο γονίδια δεικτών μακροφάγων τύπου Μ2-και τα Fizz1 και Ym1 εμπλέκονται στην ίνωση κατά την επιδιόρθωση των ιστών [26]. Μ2-όπως τα μακροφάγα παράγουν μεγάλη ποσότητα CCL24 in vitro [27] και η αυξημένη έκφραση του CCL24 μπορεί να προάγει τον πολλαπλασιασμό του όγκου, τη μετανάστευση και την εισβολή [28]. Το IRF4 είναι μέλος της οικογένειας IRF. Συμμετέχει στη διαδικασία πόλωσης Μ2 των μακροφάγων και δρα ως αρνητικός ρυθμιστής των σημάτων υποδοχέων τύπου Toll συνδυαζόμενος με το μόριο προσαρμογέα MyD88 [29]. Το MGL2 είναι μέλος της οικογένειας μακροφάγων γαλακτόζης τύπου C τύπου C και εκφράζεται επίσης σε μακροφάγα που διεγείρονται υπό εναλλακτικές συνθήκες ενεργοποίησης [30]. Τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης υποδεικνύουν ότι το εκχύλισμα Cistanche deserticola deserticola αναστέλλει το γονίδιο PPAR που σχετίζεται με μακροφάγους όπως το M2, η έκφραση των Fizz1, Ym1, CCL24, IRF4 και MGL2 αναστέλλει την πόλωση τύπου M2 των μακροφάγων, υποδεικνύοντας ότι το Epimedium μπορεί να χρησιμεύσει ως αποτελεσματικό αναστολέας μακροφάγων όπως το Μ2. Όλο και περισσότερα στοιχεία υποδεικνύουν ότι τα μακροφάγα τύπου Μ2-μπορούν να προάγουν τη μετάσταση και την ανάπτυξη του καρκίνου [31]. Ρυθμισμένα μέσα από μακροφάγα τύπου Μ2-μπορούν να προσομοιώσουν το μικροπεριβάλλον του όγκου και να προκαλέσουν μετανάστευση και ανάπτυξη όγκου, κάτι παρόμοιο με τα μακροφάγα που απομονώνονται από κακοήθεις όγκους [12]. Η IL{45}} μπορεί να προάγει την πόλωση των μακροφάγων προς τον τύπο Μ2 και να προάγει τον πολλαπλασιασμό και την αγγειογένεση του όγκου [18]. Αυτή η μελέτη έδειξε τη συσχέτιση μεταξύ της πόλωσης των μακροφάγων και της αντικαρκινικής επίδρασης του Cistanche deserticola deserticola. Ρυθμισμένα μέσα από μακροφάγα ενεργοποιημένα με IL-4-προώθησαν τη μετανάστευση και την ανάπτυξη των κυττάρων 4T1 και μετά από συν-παρέμβαση με το Cistanche deserticola, ανέστρεψαν αυτό το Μ2-ενεργοποιημένο αποτέλεσμα προαγωγής όγκου, υποδεικνύοντας ότι η IL{{55} }η ενεργοποιημένη πόλωση Μ2 εξαλείφθηκε από το Cistanche deserticola.

Αυτή η μελέτη έδειξε τη συσχέτιση μεταξύ της πόλωσης των μακροφάγων και της αντικαρκινικής επίδρασης του Cistanche deserticola deserticola. Ρυθμισμένα μέσα από μακροφάγα ενεργοποιημένα με IL-4-προώθησαν τη μετανάστευση και την ανάπτυξη των κυττάρων 4T1 και μετά από συν-παρέμβαση με το Cistanche deserticola, ανέστρεψαν αυτό το Μ2-ενεργοποιημένο αποτέλεσμα προαγωγής όγκου, υποδεικνύοντας ότι η IL{{7} }ενεργοποιημένη πόλωση Μ2 εξαλείφθηκε από το Epimedium. Αυτή η μελέτη διαπίστωσε ότι το εκχύλισμα Cistanche deserticola αναστέλλει την κυτταρική μετανάστευση και το σχηματισμό αποικιών του καρκίνου του μαστού ρυθμίζοντας την πόλωση των μακροφάγων in vitro, υποδεικνύοντας ότι η θεραπεία του καρκίνου του μαστού του Cistanche deserticola μπορεί να σχετίζεται με τη ρύθμιση του μικροπεριβάλλοντος του όγκου και το Epimedium μπορεί να ενεργεί ως ένας ρυθμιστής του μικροπεριβάλλοντος του όγκου στο σημείο της μετάστασης επηρεάζοντας τα μακροφάγα, που παρέχει νέες γνώσεις μηχανισμού για την αντικαρκινική λειτουργία του Cistanche deserticola. Αποκαλύπτει τον νέο πιθανό μηχανισμό του Cistanche deserticola για τη θεραπεία του καρκίνου, ο οποίος μπορεί να βοηθήσει στη μείωση του ποσοστού εμφάνισης καρκίνο και θνησιμότητα που σχετίζεται με τον καρκίνο. Στο μέλλον, η ερευνητική ομάδα θα διερευνήσει περαιτέρω την επίδραση του Cistanche deserticola στην ανάπτυξη και τη μετάσταση του καρκίνου του μαστού μετά την αναστολή της πόλωσης Μ2 των μακροφάγων in vivo, για να εξηγήσει περαιτέρω τον αντικαρκινικό μηχανισμό του Cistanche deserticola και να παράσχει τη βάση για κλινική εφαρμογή του Cistanche deserticola στη θεραπεία ασθενειών όγκου.

βιβλιογραφικές αναφορές

βιβλιογραφικές αναφορές

[1] GBD 2019 Συνεργάτες Παράγοντες Κινδύνου Καρκίνου. Το παγκόσμιο βάρος του καρκίνου που αποδίδεται σε παράγοντες κινδύνου, 2010-19: Μια συστηματική ανάλυση για τη Μελέτη Παγκόσμιας Επιβάρυνσης Νοσημάτων 2019 [J]. Lancet, 2022, 400(10352): 563-591.

[2] Yin L, Duan JJ, Bian XW, et al. Τριπλά αρνητικός μοριακός υποτύπος καρκίνου του μαστού και πρόοδος θεραπείας [J]. Breast Cancer Res, 2020, 22(1): 61.

[3] Medeiros B, Allan A L. Μοριακοί μηχανισμοί μετάστασης του καρκίνου του μαστού στον πνεύμονα: Κλινικές και πειραματικές προοπτικές [J]. Int J Mol Sci, 2019, 20(9): 2272.

[4] Pathria P, Louis TL, Varner J A. Στόχευση μακροφάγων που σχετίζονται με όγκους στον καρκίνο [J]. Trends Immunol, 2019, 40(4): 310-327.

[5] Shen MJ, Chen YB, Xu LJ, et al. Η αυξημένη διήθηση μακροφάγων σε ραδιοανθεκτικά καρκινικά κύτταρα του πνεύμονα συμβάλλει στην ανάπτυξη της πρόσθετης αντίστασης των καρκινικών κυττάρων στις κυτταροτοξικές επιδράσεις των ΝΚ κυττάρων [J]. Int J Oncol, 2018, 53(1): 317-328.

[6] Tariq M, Zhang JQ, Liang GK, et al. Πόλωση μακροφάγων: Αντικαρκινικές στρατηγικές για τη στόχευση μακροφάγων που σχετίζονται με όγκους στον καρκίνο του μαστού [J]. J Cell Biochem, 2017, 118(9): 2484-2501.

[7] Ma Li Επιδράσεις του γλυκοσιδίου Cistanche deserticola στον παράγοντα που προέρχεται από στρωματικά κύτταρα-1 (SDF-1) και στον υποδοχέα του CXCR-4 σε αρουραίους με οξύ έμφραγμα της μέσης εγκεφαλικής αρτηρίας [D] Nanjing : Πανεπιστήμιο Κινεζικής Ιατρικής Nanjing, 2014

[8] Hao Fuliang Η επίδραση και ο μηχανισμός του γλυκοζίτη Cistanche deserticola στην επιδιόρθωση και επούλωση ελαττωμάτων του κρανίου κουνελιού [D] Shijiazhuang: Ιατρικό Πανεπιστήμιο Hebei, 2013

[9] He J, Zang SL, Liu N, et al. Οι πολυσακχαρίτες του επιμέδιου εξασθενούν την αιματοτοξικότητα μειώνοντας το οξειδωτικό στρες και ενισχύοντας τη λειτουργία του ανοσοποιητικού σε ποντίκια μοντέλο ανεπάρκειας μυελού των οστών που προκαλείται από βενζόλιο [J]. Biomed Pharmacother, 2020, 125: 109908.

[10] Hua Ciyi, Shi Youyang, Xie Ying, et al Πρόοδος της έρευνας σχετικά με τον μηχανισμό του Cistanche deserticola Ενεργό συστατικό στη θεραπεία του καρκίνου του μαστού [J] Κινεζική βοτανοθεραπεία, 2022, 53 (20): 6593-6600

[11]Chen Xiaolei, Tang Lijian, Li Qinglin Μελέτη σχετικά με τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων του μαστού από Cistanche deserticola και εκχυλίσματα frazil in vitro [J] China Pharmacy, 2007, 18 (15): 1124-1127

[12] Xu F, Cui WQ, Wei Y, et al. Η αστραγαλοσίδη IV αναστέλλει την εξέλιξη και τη μετάσταση του καρκίνου του πνεύμονα ρυθμίζοντας την πόλωση των μακροφάγων μέσω της σηματοδότησης AMPK [J]. J Exp Clin Cancer Res, 2018, 37(1): 207.

[13] Britt KL, Cuzick J, Phillips K A. Βασικά βήματα για την αποτελεσματική πρόληψη του καρκίνου του μαστού [J]. Nat Rev Cancer, 2020, 20(8): 417-436.

[14] Hao Feifei, Tian Sisheng Exploration of the "Yang Dominating Yin Following" in Malignant Tumor Metastasis Based on the Theory of Gasification [J] Shi Zhen Guoyi Guoyao, 2021, 32 (1): 164-166

[15] Denk D, Petrocelli V, Conche C, et al. Επέκταση βλαστοκυττάρων μνήμης Τ με ανώτερη αντικαρκινική ανοσία από μιτοφαγία που προκαλείται από την ουρολιθίνη Α [J]. Immunity, 2022, 55(11): 2059-2073.

[16] Hinshaw DC, Shevde L A. Το μικροπεριβάλλον του όγκου ρυθμίζει εγγενώς την εξέλιξη του καρκίνου [J]. Cancer Res, 2019, 79(18): 4557-4566.

[17] DeNardo DG, Ruffell B. Τα μακροφάγα ως ρυθμιστές της ανοσίας του όγκου και της ανοσοθεραπείας [J]. Nat Rev Immunol, 2019, 19(6): 369-382.

[18] Dong R, Gong YL, Meng W, et al. Η εμπλοκή της αναστολής πόλωσης των μακροφάγων Μ2 σε χημειοπροληπτικά αποτελέσματα με τη μεσολάβηση της φενρετινίδης στον καρκίνο του παχέος εντέρου [J]. Cancer Lett, 2017, 388: 43-53. [19] Jiménez-Garcia L, Herránz S, Luque A, et al. Ο κρίσιμος ρόλος του p38 MAPK στην IL-4-προκάλεσε εναλλακτική ενεργοποίηση των περιτοναϊκών μακροφάγων [J]. Eur J Immunol, 2015, 45(1): 273-286.

[20] Ma ZG, Lian J, Yang M, et al. Η υπερέκφραση της αργινάσης-1 είναι δείκτης κακής πρόγνωσης σε ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου [J]. Pathol Res Pract, 2019, 215(6): 152383.

[21] Tao SF, Chen Q, Lin C, et al. Το Linc00514 προάγει τη μετάσταση του καρκίνου του μαστού και την πόλωση M2 των μακροφάγων που σχετίζονται με όγκους μέσω της οδού σηματοδότησης με μεσολάβηση Jagged1-Notch [J]. J Exp Clin Cancer Res, 2020, 39(1): 191.

[22] Wei C, Yang CG, Wang SY, et al. Απαιτείται αλληλεπίδραση μεταξύ καρκινικών κυττάρων και μακροφάγων που σχετίζονται με όγκους για μετάσταση καρκίνου του παχέος εντέρου που προκαλείται από μεσεγχυματικά κυκλοφορούντα κύτταρα όγκου [J]. Mol Cancer, 2019, 18(1): 64.

[23] Francque S, Szabo G, Abdelmalek MF, et al. Μη αλκοολική στεατοηπατίτιδα: Ο ρόλος των υποδοχέων που ενεργοποιούνται από τον πολλαπλασιαστή υπεροξισωμάτων [J]. Nat Rev Gastroenterol Hepatol, 2021, 18(1): 24-39.

[24] Tian Y, Yang CM, Yao QY, et al. Η προκυανιδίνη Β2 ενεργοποιεί το PPAR για να προκαλέσει πόλωση Μ2 σε μακροφάγα ποντικού [J]. Front Immunol, 2019, 10: 1895.

[25] Takada I, Makishima M. Αγωνιστές και ανταγωνιστές υποδοχέα που ενεργοποιούνται από πολλαπλασιαστή υπεροξισώματος: Ανασκόπηση διπλώματος ευρεσιτεχνίας (2014- παρούσα) [J]. Expert Opin Ther Pat, 2020, 30(1): 1-13.

[26] Okuzumi S, Miyata J, Kabata H, et al. Ο αγωνιστής TLR7 καταστέλλει την έμφυτη φλεγμονή που προκαλείται από λεμφοειδή κύτταρα της ομάδας 2 μέσω IL-27-που παράγουν διάμεση μακροφάγα [J]. Am J Respir Cell Mol Biol, 2021, 65(3): 309-318.

[27] Makita N, Hizukuri Y, Yamashiro K, et al. Η IL-10 ενισχύει τον φαινότυπο των μακροφάγων Μ2 που προκαλείται από την IL-4 και προσδίδει την ικανότητα να αυξάνει τη μετανάστευση των ηωσινοφίλων [J]. Int Immunol, 2015, 27(3): 131-141.

[28] Jin L, Liu WR, Tian MX, et al. Το CCL24 συμβάλλει στην κακοήθεια του HCC μέσω της οδού αγγειογένεσης RhoB-VEGFA-VEGFR2 και υποδεικνύει κακή πρόγνωση [J]. Oncotarget, 2017, 8(3): 5135-5148.

[29] Satoh T, Takeuchi O, Vandenbon A, et al. Ο άξονας Jmjd3-Irf4 ρυθμίζει την πόλωση των μακροφάγων Μ2 και τις αποκρίσεις του ξενιστή έναντι της μόλυνσης από ελμινθία [J]. Nat Immunol, 2010, 11(10): 936-944.

[30] Raes G, Brys L, Dahal BK, et al. Μακροφάγοι γαλακτόζη τύπου C-τύπου λεκτίνες ως νέοι δείκτες για εναλλακτικά ενεργοποιημένα μακροφάγα που προκαλούνται από παρασιτικές λοιμώξεις και αλλεργική φλεγμονή των αεραγωγών [J]. J Leukoc Biol, 2005, 77(3): 321-327.

[31] Mantovani A, Allavena P, Sica A, et al. Φλεγμονή που σχετίζεται με τον καρκίνο [J]. Nature, 2008, 454(7203): 436-444.