Η συνολική γλυκοσίδη του cistanche έχει επιπτώσεις στην όσφρηση;

Επικοινωνία:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Η επίδραση των ολικών γλυκοσιδών του cistanche στα οσφρητικά κύτταρα επίμυος και στην έκκριση νευροτροφικών παραγόντων τους

Li Chuangfeng, Guo Jinyu, Zhang Xu, Liu Yunnan

Η βλάβη του νωτιαίου μυελού (SCI) είναι ένας σοβαρός τραυματισμός του κεντρικούνευρικό σύστημα, που αντιστοιχεί στο {{0}},2 τοις εκατό —0,5 τοις εκατό του συνολικού τραύματος. Στα κατάγματα της σπονδυλικής στήλης, το 16% —40% επιπλέκεται από τραυματισμό του νωτιαίου μυελού, αφήνοντας συχνά σοβαρή αναπηρία, οδηγώντας σε Δυσκολίες στην καθημερινή ζωή που επηρεάζουν την ποιότητα ζωής των ασθενών και προκαλούν μεγάλη επιβάρυνση στην οικογένεια και την κοινωνία.ΟσφρητικόςΤα κύτταρα επένδυσης (OECs) είναι ένας ειδικός τύπος κόλλας νεύρων. Τα κύτταρα πλάσματος μπορούν να μεταναστεύσουν στον εγκέφαλο μεοσφρητικόςνευράξονες και μπορεί να εκκρίνει πολλούς αυξητικούς παράγοντες όπως NGF, GDNF, BDNF, NT-3, νευροπεπτίδιο-Υ και S-100. Λόγω αυτών των χαρακτηριστικών τουοσφρητικόςκαλύπτοντας κύτταρα, τα OECs θεωρούνται ένα από τα πολλά υποσχόμενα κύτταρα-σπορά για μεταμόσχευση κυττάρων για την αποκατάσταση του SCI. Προς το παρόν, η θεραπεία της ΚΝΜ στον τομέα της ιατρικής αποκατάστασης βασίζεται κυρίως στην ολοκληρωμένη αποκατάσταση. Προκειμένου να βρεθεί μια πιο αποτελεσματική μέθοδος, έχει πραγματοποιηθεί η ακόλουθη έρευνα σχετικά με την επίδραση τουκιστανάκισύνολογλυκοσίδεςγια τους ΟΕΚ:

Ολικός γλυκοσίδης Cistanche για οσφρητικά κύτταρα

1 Υλικό και μέθοδοι

1.1 Πειραματικά υλικά

Αρουραίος Wistar (παρέχεται από το Animal Center of Inner Mongolia University).κιστανάκισύνολογλυκοσίδες, Μέσο DMEM/F12, ορός εμβρύου μόσχου (FCS), πολυ-D-λυσίνη, αραβινοσίδη (Ara-C), θρυψίνη, διάλυμα D-Hanks, κουνέλι anti-p75NGFR (Santa Cruz), κιτ ELISA (Promega), θερμοκοιτίδα κυττάρων (Thermo-HEPA Class 100), μικροσκόπιο ανεστραμμένης αντίθεσης φάσης (Olympus CKX41, Ιαπωνία), εξαιρετικά καθαρός πάγκος εργασίας (Suzhou Antai Air Technology Co., Ltd.) Η εταιρεία, SW-CJ-2FD), ένζυμο αναλυτής ετικετών (Wellscan MKH), κυτταρόμετρο ροής κ.λπ.

1.2 Μέθοδοι έρευνας

1.2.1 Καλλιέργεια, καθαρισμός και ταυτοποίηση OECs: Οι αρουραίοι Wistar θυσιάστηκαν με αποκεφαλισμό και εμποτίστηκαν σε κρασί για 5 λεπτά. Το πρόσθιο κρανίο ανοίχτηκε για να εκτεθεί τοοσφρητικόςβολβός. Τα δύοοσφρητικόςΟι βολβοί αφαιρέθηκαν πλήρως με μικροσκόπιο ανατομής. Πλύσιμο σε διάλυμα D-Hanks. Κόψε τοοσφρητικόςβολβό με μικροχειρουργικό ψαλίδι, προσθέστε 2ml 0,25 τοις εκατό παγκρεατίνης και επωάστε στους 37 βαθμούς για 20 λεπτά. προσθήκη μέσου καλλιέργειας D MEM/F12 που περιέχει 10 τοις εκατό ορό μόσχου σε σωλήνα φυγοκέντρησης 2 ml. Η πέψη τερματίστηκε στη μέση. Η πιπέτα διαύλου αναρρόφησε τον ατελώς χωνεμένο ιστό στις 800 rpm και φυγοκεντρήθηκε για 5 λεπτά, απέρριψε το υπερκείμενο. τελικά χρησιμοποίησε το ρυθμισμένο μέσο (20 τοις εκατό FCS συν 20|i, mol/LForskolin συν 20|ig/mlBPE συν DMEM /F12) Φτιάξτε το σε lx 107 ml εναιώρημα μονοκυττάρου, ενοφθαλμίστε το σε φιάλη κυτταροκαλλιέργειας επικαλυμμένη με πολυλυσίνη, τοποθετήστε το σε επωαστήρα 37 μοιρών, 5 τοις εκατό CO2 και στη συνέχεια προσθήκη Arac Ο καθαρισμός πραγματοποιήθηκε στις 36 ώρες. Χρησιμοποιήστε δευτερεύον αντίσωμα κατσίκας αντι-p75E και επισημασμένο με FITC κατσίκας αντι-κουνελιού IgG για ανοσοϊστοχημική ταυτοποίηση κυττάρων και παρατήρηση με μικροσκόπιο φθορισμού.

1.2.2 Χρησιμοποιήστε MTT και κυτταρομετρία ροής για να προσδιορίσετε την επίδραση τουολικές γλυκοσίδες κιστάνουεπίοσφρητικόςεπικαλυπτικά κύτταρα: ενοφθαλμίστε τα καλλιεργημένα και καθαρισμέναοσφρητικόςκαλύπτοντας τα κύτταρα σε μια 96-πλάκα φρεατίου στο 1Χ106 και προσθέστεολικές γλυκοσίδες κιστάνου(οι συγκεντρώσεις δράσης είναι Ijig/ml, 10mg/ml, 100mg/ml), μετρήστε την τιμή OD και μετρήστε την κυτταρομετρία ροής κυττάρων μετά από 24 ώρες δράσης. Ρύθμιση ομάδας ελέγχου καιΟλικές γλυκοσίδες Cistancheδιαφορετικές ομάδες συγκέντρωσης: Ομάδα Α (ομάδα ελέγχου): Το μέσο καλλιέργειας που περιέχει ορό χρησιμοποιείται ως αρνητικός μάρτυρας. Ομάδα Β (ολικές γλυκοσίδες κιστάνουομάδα χαμηλής συγκέντρωσης: llig/ml); Ομάδα C (συγκέντρωση ολικών γλυκοσιδών cistanche μέσης συγκέντρωσης Ομάδα: L10jxg/MK); Ομάδα Δ (ολικές γλυκοσίδες κιστάνουομάδα υψηλής συγκέντρωσης: 100|xg/mlo): 15 αρουραίοι σε κάθε ομάδα.

1.2.3 Προσδιορισμός της περιεκτικότητας σε νευροτροφικό παράγοντα στο υπερκείμενο με ELISA: ενοφθαλμισμός του καλλιεργημένου και καθαρισμένουοσφρητικόςκαλύπτοντας κελιά σε 6-πλάκα φρεατίου στο 1x106, προσθέστεολικές γλυκοσίδες κιστάνου(την ίδια συγκέντρωση όπως παραπάνω) μετά από 24 ώρες και δράστε για 24 ώρες και συλλέξτε το υπερκείμενο ξεχωριστά, Αποθηκεύτηκε σε -80 Long. Η περιεκτικότητα των παραγόντων ανάπτυξης των νεύρων στο υγρό προσδιορίστηκε με τη μέθοδο ELISA.

1.3 Στατιστική ανάλυση

Τα δεδομένα σε αυτήν τη μελέτη αντιμετωπίζονται ως δεδομένα μέτρησης και τα δεδομένα που λαμβάνονται εκφράζονται ως μέσος όρος ± τυπική απόκλιση και χρησιμοποιείται στατιστικό λογισμικό SPSS 11.0 για στατιστική ανάλυση. Τα δεδομένα που λαμβάνονται αναλύονται με ανάλυση διακύμανσης και το P<0.05 indicates="" that="" there="" is="" a="" significant="">

2 Αποτελέσματα

2.1 Η επίδραση τουκιστανάκιολικές γλυκοσίδες επίοσφρητικόςκαλύπτοντας κύτταρα

2.1.1 Αποτελέσματα προσδιορισμού της μεθόδου μεθυλοξαζολυλτετραζόλης (MT): Ομάδα Α: 0.617±0.149; Ομάδα Β: 0.589±0.147; Ομάδα Γ: 0.761±0.138; Ομάδα Δ: 0.732±0.234. Σύγκριση μεταξύΟλικές γλυκοσίδες Cistanche group (B) and Control group (A), P>0.05, η διαφορά δεν ήταν σημαντική.Ολικές γλυκοσίδες CistancheΟμάδα συγκέντρωσης 10mg/ml, 100mg/ml (C, D) σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (A) P<0.05, the="" difference="" is="">

2.1.2 Το αποτέλεσμα του προσδιορισμού της κυτταρομετρίας ροής φαίνεται στο σχήμα 1. Σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου, ηολικές γλυκοσίδες κιστάνουη ομάδα ήταν υψηλότερη από την ομάδα ελέγχου και το ποσοστό των αποπτωτικών κυττάρων ήταν χαμηλότερο από την ομάδα ελέγχου.

2.2 Αποτελέσματα ενζυμικής ανοσοπροσροφητικής δοκιμασίας (ELISA).

Τα αποτελέσματα της δοκιμής έδειξαν ότι η περιεκτικότητα σε νευροτροφικό παράγοντα που προέρχεται από νευρογλοιακή κυτταρική γραμμή (GDNF): πριν από τη δόση: 302,1±16,6 pg/ml, ομάδα Α: 340,5±13,2 pg/ml. ομάδα Β: 333,2±23,6 pg/ml; Ομάδα C: 355,2±17,6 pg/ml; Ομάδα Δ; 379,2±15,3 pg/ml. Σε σύγκριση με την προχορήγηση, το περιεχόμενο GDNF αυξήθηκε σημαντικά. σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (Α), το περιεχόμενο GDNF τουΟλικές γλυκοσίδες CistancheΗ ομάδα συγκέντρωσης 100 mg/ml (D) αυξήθηκε σημαντικά.

3 Συζήτηση

Η δυσκολία στην αναγέννηση των αξόνων είναι ένας από τους κύριους λόγους για τους οποίους είναι δύσκολη η ανάκτηση μετά από κάκωση του νωτιαίου μυελού. Τα OEC διαδραματίζουν ρόλο στην αναγέννηση των νευραξόνων του κεντρικού νευρώνα που άλλοι τύποι κυττάρων είναι δύσκολο να αντικατασταθούν. Τα τελευταία χρόνια, η έρευνα τουοσφρητικόςτο περίβλημα των κυττάρων έχει γίνει ένα καυτό σημείο.ΟσφρητικόςΤα επικαλυπτικά κύτταρα είναι ένας ειδικός τύπος νευρογλοιακών κυττάρων που έχουν τα χαρακτηριστικά των κυττάρων Schwann και των αστροκυττάρων. Προέρχονται από τοοσφρητικόςβασική μεμβράνη και κατανέμονται ευρέως στην επιφάνεια τουοσφρητικόςβλεννογόνος,οσφρητικόςνεύρο, καιοσφρητικόςβολβός. Έχει την ικανότητα να διαιρείται και να αναγεννάται εφ' όρου ζωής και μπορεί να συνοδεύει τοοσφρητικόςνευράξονες να μεταναστεύσουν στον εγκέφαλο. Οι άξονες τωνοσφρητικόςΤο νεύρο μπορεί να διέρχεται από τη διασταύρωση μεταξύ του περιφερικού νευρικού συστήματος και του κεντρικού νευρικού συστήματος κάθε 30-60 ημέρες, και εκ νέου αναπτύσσεται σεοσφρητικόςθήκη και δημιουργία συναπτικών συνδέσεων4.Οσφρητικόςπου καλύπτουν τα κύτταρα μπορούν να εκκρίνουν πολλούς αυξητικούς παράγοντες όπως NGF, BDNF, GDNF, NT-3, νευροπεπτίδιο-Y και S-100. Μελέτες έχουν δείξει ότι ο αυξητικός παράγοντας νεύρων (NGF) μπορεί να αποτρέψει τους νευρώνες του ερυθρού πυρήνα της σπονδυλικής στήλης από την ατροφία και να ενισχύσει τη φλοιώδη οδό. τόσο ο προερχόμενος από τον εγκέφαλο νευροτροφικός παράγοντας (BDNF) όσο και η νευροτροφίνη-3 (NT-3) μπορούν να αποτρέψουν την απόπτωση των κυττάρων του νωτιαίου μυελού του ερυθρού πυρήνα σε ενήλικους αρουραίους με αξονική βλάβη και να διασώσουν τους νεκρούς νευρώνες και να προάγουν την αξονική αναγέννηση P. Επιπλέον,οσφρητικόςΤα κύτταρα που καλύπτουν το περίβλημα εκφράζουν επίσης άλλους παράγοντες στις κυτταρικές τους μεμβράνες, όπως ο παράγοντας προσκόλλησης νευρικών κυττάρων (N-CAM), οι οποίοι εμπλέκονται στην κυτταρική προσκόλληση και στην ανάπτυξη του άξονα. Λόγω αυτών των χαρακτηριστικών τουοσφρητικόςκαλύπτοντας κύτταρα, τα OECs θεωρούνται ένα από τα πολλά υποσχόμενα κύτταρα-σπορά για μεταμόσχευση κυττάρων για την αποκατάσταση του SCI.

Τα χημικά συστατικά τουCistancheπεριλαμβάνουν κυρίως φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες, ιριδοειδή, πτητικά συστατικά, λιγνάνες, πολυσακχαρίτες και αλκαλοειδή. Η μελέτη διαπίστωσε ότιCistancheκαι τα χημικά συστατικά του έχουν νευροπροστατευτικά αποτελέσματα. Deng et al. μελέτησε την επίδραση του σωληνίσκου Β στην απόπτωση των νευρώνων SH-SY5Y που προκαλείται από τον παράγοντα νέκρωσης όγκου (TNF). Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι μετά από 100 μg/ Οι νευρώνες SH-SY5Y μετά από 36 ώρες θεραπείας με TNF με L έδειξαν τυπικά χαρακτηριστικά απόπτωσης, ενώ η θεραπεία της τουμπουλίνης Β για 2 ώρες θα μπορούσε να μειώσει σημαντικά την απόπτωση που προκαλείται από τον TNF. Επιπλέον, μελέτες έχουν δείξει επίσης ότι οι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες μπορούν να αναστείλουν την απόπτωση των κοκκωδών κυττάρων της παρεγκεφαλίδας αρουραίου αναστέλλοντας την κασπάση-3 και την κασπάση-8 και κατά του μαύρου ποντικού C57 που προκαλείται από τη μεθυλφαινυλ τετραϋδροπυριδίνη (MPTP). Η βλάβη των ποιοτικών ντοπαμινεργικών νευρώνων έχει προστατευτική δράση. Όχι μόνο αυτό, αλλάCistancheμπορεί επίσης να ανακουφίσει διάφορες βλάβες όπως ισχαιμία-επαναιμάτωση του νευρικού συστήματος. Το πείραμα τραυματισμού ισχαιμίας εγκεφάλου σε ποντίκι δείχνει ότι το εύρος εμφράγματος των 24 ωρών και 48 ωρών μετά την ισχαιμία στην ομάδα εγκεφαλικής ισχαιμίας-επαναιμάτωσης είναι 72,98 τοις εκατό και 60,45 τοις εκατό κατά μέσο όρο. Αντίθετα, τοκιστανάκιολικές γλυκοσίδες μεγάλες, μεσαίες και χαμηλής δόσης ομάδες (250.0mg·kg/ημέρα· 125,0 mg·kg/ημέρα· 62,5 mg·kg/ημέρα) αντίστοιχα μπορούν να δημιουργήσουν τον εγκέφαλο των ποντικών μετά από εγκεφαλική ισχαιμία-επαναιμάτωση 24 ώρες Το μέγεθος του εμφράγματος μειώθηκε σε 25,94 τοις εκατό , 25,81 τοις εκατό και 31,13 τοις εκατό και το μέγεθος του εγκεφαλικού εμφράγματος μειώθηκε σε 22,14 τοις εκατό , 20,06 τοις εκατό και 22,27 τοις εκατό μετά από 48 ώρες. Υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ των δύο, δείχνοντας σημαντική ανασταλτική επίδραση στην απόπτωση των νευρώνων.

Σε αυτή τη μελέτη, διαφορετικές συγκεντρώσεις τουολικές γλυκοσίδες κιστάνουεφαρμόστηκαν στους ΟΕΚ. Η μέθοδος MTT και η μέτρηση κυτταρομετρίας ροής επιβεβαίωσαν ότι 10mg/ml100mg/mlολικές γλυκοσίδες κιστάνουμπορεί να προωθήσει τον πολλαπλασιασμό τωνοσφρητικόςκαλύπτοντας κύτταρα. Τα αποτελέσματα της κυτταρομετρίας ροής έδειξαν ότιολικές γλυκοσίδες κιστάνουμπορεί να προωθήσει τον πολλαπλασιασμό τωνοσφρητικόςκαλύπτοντας κύτταρα Προωθεί κυρίως τον πολλαπλασιασμό του κύκλου G1 τουοσφρητικόςσπερματοζωάρια και μειώνει σημαντικά τα αποπτωτικά κύτταρα. Επομένως,Ολικές γλυκοσίδες Cistancheμπορεί όχι μόνο να προωθήσει τον πολλαπλασιασμό τωνοσφρητικόςκαλύπτοντας τα κύτταρα αλλά και αυξάνουν τη δραστηριότητα των κυττάρων και αναστέλλουν την απόπτωση τους. Η ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία το αποδεικνύει αυτόΟλικές γλυκοσίδες Cistancheμπορεί να προάγει σημαντικά την έκκριση του GDNF απόοσφρητικόςκαλύπτοντας κύτταρα. Τα παραπάνω αποτελέσματα παρέχουν μια πειραματική βάση για την κλινική εφαρμογή τουΟλικές γλυκοσίδες Cistanche.

βιβλιογραφικές αναφορές

[1] Qiu Weihong, Zhu Hongxiang, Zhang Baixiang, et al. Παράγοντες που επηρεάζουν την ποιότητα ζωής ασθενών με κάκωση νωτιαίου μυελού κατά την αποκατάσταση [J]. Chinese Journal of Rehabilitation Medicine, 2009, 4(24): 313.

[2] Richter MW, Fletcher PA, Liu J, et al. Lamina propria καιοσφρητικόςΤα κύτταρα που καλύπτουν ταύρο εμφανίζουν διαφορική ενσωμάτωση και μετανάστευση και προάγουν τη βλάστηση αναφορικού άξονα στον τραυματισμένο νωτιαίο μυελό [J]. J Neurosci, 2005.25(46):10700 -10711.

[3] Fairless R, Bamet SC. οσφρητικά κύτταρα περιβλήματος: ο ρόλος τους στην επιδιόρθωση του κεντρικού νευρικού συστήματος [J.Int J Biochem Cell Biol. 2005,37(4):693-699.

[4] Chen X, Fang H. Schwob JE. Πολυδύναμη του καθαρισμένου. μεταμοσχευμένα βασικά κύτταρα γλυκόζης σεοσφρητικόςεπιθήλιο[J]. J Comp Neurol, 2004, 46914):457-474.

[5] La P, Jones LL. Tuszynski MH. Μαροστρωμικό κύτταρο που εκφράζει BDNF. υποστηρίζουν εκτεταμένη αξονική ανάπτυξη σε θέσεις d κάκωση νωτιαίου μυελού[J]. Exp Neurol, 2005,191(2):344-360.

[6] Deng M, Zhao JY, Ju XD, et al. Προστατευτική επίδραση του σωληναρίου Β στην απόπτωση που προκαλείται από TNF σε νευρωνικά κύτταρα [J]. Acta Pharmacol Sin,2004,25(102 1276

[7] TianXue-Fei, PuXiao-Ping.ΦαινυλαιθανοειδέςγλυκοσίδεςαπόΚιστανάκιαΤο salsa αναστέλλει την απόπτωση που προκαλείται από το ιόν 1-μεθυλ-4-φαινυλοπυριδινίου στους νευρώνες[J]. J Ethnopharmacol, 2005,97 (1):59.

[8] Geng X, Song L.Pu X, et al. Νευροπροστατευτικό αποτέλεσμα