Οι προστατευτικές επιδράσεις του παχυμικού οξέος στην οξεία νεφρική βλάβη

Επικοινωνία:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

GUI-PING JIANG,YUE-JUANLIAO, L-LI HUANG,XU-JIAZENG & XIAO-HUI LIAO

Αφηρημένη

Οξεία νεφρική βλάβη(ΑΚΙ) είναι μια κοινή κλινική ασθένεια. Η Ferroptosis, ένας νέος τύπος ρυθμιστικού κυτταρικού θανάτου, διαδραματίζει σημαντικό ρυθμιστικό ρόλο στο AKIΟξεία νεφρική βλάβη). Παχυδερμικό οξύ(PA), ένα τριτερπενοειδές τύπου lanostane από το Poria cocos, έχει αναφερθεί ότι είναι προστατευτικό έναντι του AKI(Οξεία νεφρική βλάβη). Ωστόσο, ο προστατευτικός μηχανισμός του PA(Παχυμικό οξύ) στο ΑΚΙ(Οξεία νεφρική βλάβη)δεν είναι ακόμη πλήρως κατανοητό. Η παρούσα μελέτη στόχευε στη διερεύνηση της επίδρασης και του μοριακού μηχανισμού του PA(Παχυμικό οξύ) σχετικά με τη φερρόπτωση σε τραυματισμό νεφρικής ισχαιμίας-επαναιμάτωσης in vio. Συνολικά 30 ποντίκια ενέθηκαν ενδοπεριτοναϊκά με 5,10 και 20 mg/kg PA (Παχυμικό οξύ) για 3 ημέρες. Ένα αμφοτερόπλευρο κλιπ νεφρικού μίσχου χρησιμοποιήθηκε για 40 λεπτά για να προκληθεί βλάβη νεφρικής ισχαιμίας-επαναιμάτωσης και να καθιερωθεί το μοντέλο. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η θεραπεία με PA(Παχυμικό οξύ) μειωμένη κρεατινίνη ορού και άζωτο ουρίας αίματος και βελτιωμένη νεφρική παθολογική βλάβη. Η ηλεκτρονική μικροσκοπία μετάδοσης δεν αποκάλυψε χαρακτηριστικές αλλαγές στη φερρόπτωση στα μιτοχόνδρια του νεφρικού ιστού στην υψηλή δόση PA (Παχυμικό οξύ) ομαδικό και μόνο ήπιο οίδημα. Επιπλέον, θεραπεία με PA(Παχυμικό οξύ) αύξησε την έκφραση γλουταθειόνης και μείωσε τα επίπεδα έκφρασης της μηλονοδιαλδεΰδης και της κυκλοοξυγενάσης 2. Θεραπεία με PA(Παχυμικό οξύ) ενίσχυσε τα επίπεδα έκφρασης πρωτεΐνης και mRNA των πρωτεϊνών που σχετίζονται με τη φερρόπτωση, υπεροξειδάση γλουταθειόνης 4 (GPX4), φορέα διαλυμένης ουσίας οικογένειας 7 (μεταφορέας κατιονικών αμινοξέων, σύστημα y συν) μέλος 11 (SLC7All) και οξυγενάση αίμης 1 (HO{{6 }}) στο νεφρό και αύξησε τα επίπεδα έκφρασης των μελών της οδού σηματοδότησης 2 like 2 (NRF2) που προέρχονται από πυρηνικό παράγοντα ερυθροειδή. Συνολικά, τα αποτελέσματα της παρούσας μελέτης υποδηλώνουν ότι το PA(Παχυμικό οξύ) έχει προστατευτική δράση στην επαγόμενη από ισχαιμία-επαναιμάτωσηοξεία νεφρική βλάβησε ποντίκια, τα οποία μπορεί να σχετίζονται με την αναστολή της φερρόπτωσης στους νεφρούς μέσω άμεσης ή έμμεσης ενεργοποίησης του NRF2 και ρύθμισης προς τα πάνω της έκφρασης των κατάντη πρωτεϊνών που σχετίζονται με τη φερρόπτωση, GPX4, SLCTA11 και HO-1.

dr vita opc fda εγκεκριμένοΓιανεφρό

ΚΑΝΤΕ ΚΛΙΚ ΕΔΩ ΓΙΑ ΜΕΡΟΣ Ⅰ

Συζήτηση

Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι το PA(Παχυμικό οξύ) βελτιώνει τη νεφρική βλάβη στην ΑΚΙ(Οξεία νεφρική βλάβη)και χρόνια νεφρική νόσο μέσω αντιφλεγμονώδους και αντιοξειδωτικού στρες(21,22). Ωστόσο, εάν η PA(Παχυμικό οξύ) αναστέλλει τη φερρόπτωση δεν έχει ακόμη διερευνηθεί. Από όσο γνωρίζουμε, η παρούσα μελέτη ήταν η πρώτη που διερεύνησε την επίδραση του PA(Παχυμικό οξύ) για τη φερρόπτωση στο IRI-AKI(Οξεία νεφρική βλάβη)Στην παρούσα μελέτη χρησιμοποιήθηκε αμφίπλευρη σύσφιξη νεφρικού μίσχου σε ποντικούς για 40 λεπτά ακολουθούμενη από επαναιμάτωση για 24 ώρες για την επιτυχή δημιουργία IRI και πρόκληση ΑΚΙ(Οξεία νεφρική βλάβη). Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα επίπεδα Scr και BUN ήταν σημαντικά αυξημένα στην ομάδα μοντέλου και τα νεφρικά σωληνάρια υπέστησαν σημαντική βλάβη, με βάση τη χρώση H&E και τη βαθμολογία Paller. Έτσι το ΙΡΙ-ΑΚΙ(Οξεία νεφρική βλάβη)κατασκευάστηκε το μοντέλο. Συγκεκριμένα, η χορήγηση της ΠΑ(Παχυμικό οξύ) μείωσε σημαντικά τα ενισχυμένα με IRI επίπεδα Scr και BUN ορού και ανακούφισε τον τραυματισμό των νεφρών με δοσοεξαρτώμενο τρόπο.

Το GPX4 διαδραματίζει σημαντικό ρόλο στη φερρόπτωση (30). Μικρά μόρια, όπως η ελαστίνη, το RSL-3 και το RSL-5(13), μέσω διαφορετικών μονοπατιών σηματοδότησης, αναστέλλουν άμεσα ή έμμεσα τη δραστηριότητα του GPX4, μειώνοντας έτσι την αντιοξειδωτική ικανότητα των κυττάρων, προκαλώντας υπερφόρτωση αντιδραστικών ειδών οξυγόνου και μεμβράνη αντιδράσεις υπεροξείδωσης λιπιδίων και τελικά βλάπτουν την ακεραιότητα της κυτταρικής μεμβράνης και προκαλούν φερρόπτωση των κυττάρων (13). Σε ποντικούς νοκ-άουτ GPX4, η ανεπάρκεια GPX4 οδηγεί σε αυθόρμητη οξεία νεφρική ανεπάρκεια και αυξημένο ποσοστό πρώιμης θνησιμότητας, ενώ η φερρόπτωση των νεφρικών σωληναριακών επιθηλιακών κυττάρων είναι η κύρια αιτία νεφρικής ανεπάρκειας σε ποντικούς με νοκ-άουτ GPX4 (30). Έτσι, η αύξηση της δραστηριότητας του GPX4 αναστέλλει αποτελεσματικά τη φερρόπτωση. Η σύνθεση της GSH, ενός συμπαράγοντα απαραίτητου για τη λειτουργία του GPX4, αυξάνει άμεσα τη δραστηριότητα του GPX4. Η σύνθεση της GSH επηρεάζεται από την κυστίνη. Η μεταφορά της κυστίνης από τον εξωκυτταρικό στον ενδοκυτταρικό χώρο εξαρτάται σε μεγάλο βαθμό από τον αντίστροφο μεταφορέα κυστίνης/γλουταμινικού (σύστημα xc-) στην κυτταρική μεμβράνη. Αυτός ο μεταφορέας είναι ένα ετεροδιμερές που αποτελείται από δύο υπομονάδες, SLC7Al1(xCT) και SLC3A2. Μεταφέρει κυρίως γλουταμικό στον εξωκυτταρικό χώρο και μεσολαβεί στην είσοδο της κυστεΐνης στο κύτταρο (28). Η αναστολή της δραστηριότητας του συστήματος xc-επηρεάζει τη σύνθεση της GSH αναστέλλοντας την απορρόφηση της κυστίνης, οδηγώντας έτσι σε αδράνεια της GPX4, μείωση της αντιοξειδωτικής ικανότητας των κυττάρων, συσσώρευση ειδών οξυγόνου που αντιδρούν στα λιπίδια και τελικά οξειδωτική βλάβη και φερρόπτωση (31). . Οι Yang et al (32) επιβεβαίωσαν ότι η συνθάση της προσταγλανδίνης-ενδοπεροξειδίου 2 (PTGS2), που κωδικοποιεί το COX-2, είναι ένας κατάλληλος δείκτης για την υπεροξείδωση των λιπιδίων που συμβαίνει κατά τη διάρκεια της φερρόπτωσης που ρυθμίζεται με GPX. Έτσι, η ανοδική ρύθμιση του PTGS2 έχει προταθεί ότι είναι ένας κατάντη δείκτης φερρόπτωσης. Η ενίσχυση του συστήματος xc-, η προώθηση της απορρόφησης της κυστίνης, η αύξηση της παραγωγής GSH και η αύξηση της δραστηριότητας του GPX4 μπορεί να αναστείλουν τη φερρόπτωση και να μειώσουν τη νεφρική βλάβη (32,33). Τα αποτελέσματα της παρούσας μελέτης έδειξαν ότι η δραστηριότητα xc του συστήματος μειώθηκε, η σύνθεση GSH μειώθηκε, η δραστηριότητα GPX4 μειώθηκε, η έκφραση MDA και Cox-2 αυξήθηκε και φερρόπτωση εμφανίστηκε στο IRI-AKI(Οξεία νεφρική βλάβη)ποντίκια. Επιπλέον, θεραπεία με PA(Παχυμικό οξύ) αύξησε σημαντικά τα επίπεδα έκφρασης των GSH, xCT και GPX4 και μείωσε τα επίπεδα έκφρασης των MDA και Cox-2, υποδηλώνοντας έτσι ότι η θεραπεία με μέτριες και υψηλές δόσεις PA(Παχυμικό οξύ) ενισχύει τη δραστηριότητα του συστήματος xc-, προάγει την απορρόφηση της κυστίνης, αυξάνει την παραγωγή GSH, αυξάνει τη δραστηριότητα του GPX4 και αναστέλλει τη φερρόπτωση.

Ο NRF2, ένας μεταγραφικός παράγοντας που επάγεται από το στρες, έχει αναδειχθεί ως βασικός ρυθμιστής τόσο της υπεροξείδωσης των λιπιδίων όσο και της φερρόπτωσης (23). Συγκεκριμένα, ορισμένες πρωτεΐνες και ένζυμα (όπως τα GPX4, xCT και οι καταλυτικές και τροποποιητικές υπομονάδες λιγάσης γλουταμινικής κυστεΐνης) είναι υπεύθυνα για την πρόληψη της υπεροξείδωσης των λιπιδίων, και επομένως την έναρξη της φερρόπτωσης, είναι γονίδια στόχοι NRF2 (23). Το NRF2 διαδραματίζει βασικό ρόλο στη ρύθμιση του μεταβολισμού σιδήρου/αίμης (34). Μετά την ενεργοποίηση του NRF2, το NRF2 ρυθμίζει προς τα πάνω τις πρωτεΐνες που σχετίζονται με το μεταβολισμό του σιδήρου που εμπλέκονται στη φερρόπτωση, όπως η φερριτίνη (ελαφριά αλυσίδα φερριτίνης και βαρύ πολυπεπτίδιο φερριτίνης 1), οι ενδοκυτταρικές πρωτεΐνες αποθήκευσης σιδήρου (35), η χελάση σιδήρου και το HO-1 (36). Οι Adedoyin et al (37) ανέφεραν ότι το HO‑1 στα εγγύς νεφρικά σωληναριακά επιθηλιακά κύτταρα μπορεί να αντισταθεί στη φερρόπτωση που προκαλείται από την Erastin στο AKI(Οξεία νεφρική βλάβη), άρα, μειώνοντας το ΑΚΙ(Οξεία νεφρική βλάβηy). Επιπλέον, το NRF2 ρυθμίζει πρωτεάσες που εμπλέκονται στη σύνθεση και το μεταβολισμό της GSH, όπως καταλυτικές και ρυθμιστικές υπομονάδες λιγάσης γλουταμίνης-κυστεΐνης, συνθάση γλουταθειόνης και μια υπομονάδα του μεταφορέα κυστίνης/γλουταμινικού xCT (38-40). Το GPX4 είναι ένα ρυθμιστικό γονίδιο στόχος του NRF2 (41). Οι Li et al (42) απέδειξαν ότι η προκαταρκτική θεραπεία με Roxadustat (FG-4592) εξασθενεί τον τραυματισμό των νεφρών που προκαλείται από το φολικό οξύ μέσω της αντι-φερρόπτωσης μέσω της οδού Akt/GSK-3/NRF2. Τα αποτελέσματα της παρούσας μελέτης έδειξαν ότι η χορήγηση μέτριων και υψηλών δόσεων PA(Παχυμικό οξύ) άμεσα ή έμμεσα προώθησε την ενεργοποίηση της οδού σηματοδότησης NRF2, ρύθμισε προς τα πάνω τα επίπεδα έκφρασης των κατάντη ρυθμιζόμενων πρωτεϊνών φερρόπτωσης, GPX4, xCT και HO‑1, αύξησε τα επίπεδα GSH στον νεφρικό ιστό και μείωσε τα επίπεδα του λιπιδίου που σχετίζεται με τη φερρόπτωση πρωτεΐνη υπεροξείδωσης, COX‑2 και δείκτης οξείδωσης λιπιδίων, MDA.

Συνολικά, τα αποτελέσματα της παρούσας μελέτης υποδηλώνουν ότι το PA(Παχυμικό οξύ) μπορεί να βελτιώσει τη νεφρική λειτουργία και να μειώσει τη νεφρική βλάβη στο IRI-AKI(Οξεία νεφρική βλάβη)ποντίκια. Αυτή η προστατευτική δράση μπορεί να συσχετιστεί με την αναστολή της φερρόπτωσης στους νεφρούς μέσω άμεσης ή έμμεσης ενεργοποίησης του NRF2 και ανοδικής ρύθμισης των κατάντη πρωτεϊνών που σχετίζονται με τη φερρόπτωση, GPX4, xCT και HO-1 (Εικ. 6). Ωστόσο, η παρούσα μελέτη δεν είναι χωρίς περιορισμούς. Η επίδραση του PA(Παχυμικό οξύ) για τη φερρόπτωση δεν έχει μελετηθεί εκτενώς. Έτσι, οι προοπτικές μελέτες θα πρέπει να χρησιμοποιούν ελαστίνη, έναν εκλεκτικό αναστολέα του συστήματος xc‑, για την αναστολή της δραστηριότητας του xCT σε ποντίκια και στη συνέχεια να επαληθεύουν εάν η αναστολή του xCT προκαλεί φερρόπτωση σε νεφρικά κύτταρα ποντικού, οδηγώντας έτσι σε AKI(Οξεία νεφρική βλάβη)και αν PA(Παχυμικό οξύ) αναστέλλει τη φερρόπτωση κυρίως μέσω της οδού xCT-GPX4. Πρέπει να πραγματοποιηθούν περαιτέρω μηχανιστικές μελέτες in vitro. Επιπλέον, το PA θα πρέπει να χρησιμοποιείται για τη θεραπεία των νεφρικών σωληναριακών επιθηλιακών κυττάρων για την επαλήθευση της επίδρασης του PA(Παχυμικό οξύ) σε φερρόπτωση in vitro.

Εικόνα 6. Σχηματικό διάγραμμα προτεινόμενων μοριακών μηχανισμών για PA(Παχυμικό οξύ) ρύθμιση της φερρόπτωσης στο IRI-AKI(Οξεία νεφρική βλάβη).PA(Παχυμικό οξύ) μπορεί να βελτιώσει τη νεφρική λειτουργία και να μειώσει τη νεφρική βλάβη στο IRI-AKI(Οξεία νεφρική βλάβη)ποντίκια ενεργοποιώντας το μονοπάτι σηματοδότησης NRF2, την GSH και τις κατάντη πρωτεΐνες που σχετίζονται με τη φερρόπτωση (GPX4, xCT και HO‑1) για την αναστολή της φερρόπτωσης στον νεφρό. PA,παχυδερμικό οξύ; IRI, τραυματισμός ισχαιμίας-επαναιμάτωσης. ΑΚΙ(Οξεία νεφρική βλάβη); NRF2, πυρηνικός παράγοντας ερυθροειδές που προέρχεται 2 όπως 2; GSH, γλουταθειόνη; GPX4, υπεροξειδάση γλουταθειόνης 4; HO‑1, αίμη οξυγενάση 1; xCT, σύστημα μεταφοράς γλουταμικού. Glu, γλουταμικό οξύ; Cys, κυστεΐνη.

βιβλιογραφικές αναφορές

1. Οικοδεσπότης EAJ, Kellum JA, Selby NM, Zarbock A, Palevsky PM, Bagshaw SM, Goldstein SL, Cerda J και Chawla LS: Παγκόσμια επιδημιολογία και αποτελέσματα οξείας νεφρικής βλάβης. Nat Rev Nephrol 14: 607-625.2018.

2. Kaddourah A.Basu RK.Bagshaw SM και Goldstein SL: AWARE Ερευνητές: Επιδημιολογία οξείας νεφρικής βλάβης σε βαρέως πάσχοντα παιδιά και νεαρούς ενήλικες. N Engl J Med 376: 11-20.2017.

3. Chertow GM, Burdick, Honor M, Bonventre JV και Bates DW: Οξεία νεφρική βλάβη, θνησιμότητα, διάρκεια παραμονής και κόστος σε νοσηλευόμενους ασθενείς. J Am Soc Nephrol 16:3365-3370,2005.

4. Susantitaphong P, Cruz DN, Cerda J, Abulfaraj M, Alqahtani F Koulouridis I and Jaber BL; Συμβουλευτική ομάδα οξείας νεφρικής βλάβης της Αμερικανικής Εταιρείας Νεφρολογίας: Παγκόσμια συχνότητα εμφάνισης ΑΚΙ(Οξεία νεφρική βλάβη): Μια μετα-ανάλυση. Clin JAm Soc Nephrol 8:1482-1493, 2013.

5. Ronco C, Bellomo R και Kellum JA: Οξεία νεφρική βλάβη. Lancet 394:1949-1964,2019.

6. James MT, Bhatt M, Pannu Nand Tonelli M: Μακροπρόθεσμα αποτελέσματα οξείας νεφρικής βλάβης και στρατηγικές για βελτιωμένη φροντίδα. Nat Rev Nephrol 16: 193-205,2020.

7. Han SJ και Lee HT: Μηχανισμοί και θεραπευτικοί στόχοι ισχαιμικής οξείας νεφρικής βλάβης. Kidney Res Clin Pract 38: 427-440, 2019.

8. Priante G, GianeselloL, Ceol M, Del Prete D και England F: Κυτταρικός θάνατος στο νεφρό.Int J Mol Sci 20:3598,2019.

9. Martin-Sanchez D, Poveda J, Fontecha-Barriuso M, Ruiz-Andres O, Sanchez-Nino MD, Ruiz-Ortega M, Ortiz A και Sanz AB: Στόχευση ρυθμιζόμενης νέκρωσης σε νεφρική νόσο. Nefrologia 38: 125-135.2018.

10. Kers J.Leemans JCand Linkermann A: Μια επισκόπηση των μονοπατιών της ρυθμιζόμενης νέκρωσης σε οξεία νεφρική βλάβη. Semin Nephrol 36:139-152,2016.

11. Pefanis A, Perino FL, Murphy JM, and Cowan PJ: Ρυθμιζόμενη νέκρωση σε τραυματισμό ισχαιμίας-επαναιμάτωσης νεφρού. Kidney Int 96:291-301,2019.

12. Hu Z, Zhang H, Yang SK, Wu X, He D, Cao K και Zhang W: Αναδυόμενος ρόλος της φερρόπτωσης στην οξεία νεφρική βλάβη. Oxid Med Cell Longev 2019:8010614,2019.

13. Dixon SJ, Lemberg KM, Lamprecht MR, Skouta R, Zaitsev EM, Gleason CE, Patel DN, Bauer AJ, Cantley AM, Yang WS, et al: Ferroptosis: Μια εξαρτώμενη από τον σίδηρο μορφή μη αποπτωτικού κυτταρικού θανάτου. Κελί 149: 1060-1072,2012.

14. Li J, Cao F, Yin HL, Huang ZJ, Lin ZT, Mao N, Sun B και Wang G: Ferroptosis: Παρελθόν, παρόν και μέλλον. Cell Death Dis 11:88,2020.

15. Linkermann A, Skouta R, Himmerkus N, Mulay SR, Dewitz C, De Zen F, Prokai A, Zuchtriegel G, Krombach F, Welz PS, et al: Ο συγχρονισμένος νεφρικός σωληναριακός κυτταρικός θάνατος περιλαμβάνει φερρόπτωση. Proc Natl Acad Sci USA 111: 16836-16841,2014.

16. Ling H, Zhang Y, Ng KY και Chew EH: Το παχυμικό οξύ μειώνει την εισβολή στα καρκινικά κύτταρα του μαστού καταστέλλοντας την έκφραση της μεταλλοπρωτεϊνάσης μήτρας που εξαρτάται από τον πυρηνικό παράγοντα kB. Breast Cancer Res Treat 126: 609-620.2011.

17. Li FF, Yuan Y, Liu Y, Wu QQ, Jiao R, Yang Z, Zhou MQ και Tang QZ: Το παχυμικό οξύ προστατεύει τα καρδιομυοκύτταρα H9c2 από φλεγμονή και απόπτωση που προκαλείται από λιποπολυσακχαρίτες αναστέλλοντας την κινάση 1/2 που ρυθμίζεται από το σήμα και p38 μονοπάτια. Mol Med Rep 12: 2807-2813,2015.

18. Li JY, Wu HX και Yang G: Το παχυμικό οξύ βελτιώνει την επιβίωση και μειώνει την οξεία βλάβη των πνευμόνων σε σηπτικούς αρουραίους που προκαλείται από απολίνωση και παρακέντηση του τυφλού.Eur Rev Med Pharmacol Sci 21:1904-1910.2017

19. Li TH, Hou CC, Chang CL και Yang WC: Αντι-υπεργλυκαιμικές ιδιότητες ακατέργαστου εκχυλίσματος και τριτερπενίων από το Poria cocos. Evid Based Complement Alternat Med 2011: 128402,2011.

20. Shah VK, Choi JJ, Han JY, Lee MK, Hong JT και Oh KW: Το παχυμικό οξύ ενισχύει τις συμπεριφορές ύπνου που προκαλούνται από πεντοβαρβιτάλη μέσω συστημάτων GABAA σε ποντίκια.Biomol Ther(Seoul)22:314-320. 2014.

21. Cai ZY, Sheng ZX και Yao H: Το παχυμικό οξύ βελτιώνει την οξεία νεφρική βλάβη που προκαλείται από σήψη καταστέλλοντας τη φλεγμονή και ενεργοποιώντας την οδό Nrf2/HO-1 σε αρουραίους.Eur Rev Med Pharmacol Sci 21:{{5} }, 2017.

22. Chen DQ, Feng YL, Chen L, Liu JR, Wang M, Vaziri ND και Zhao YY: Το πορικοϊκό οξύ Α ενισχύει την αναστολή της μελατονίνης του AKI(Οξεία νεφρική βλάβη)Μετάβαση σε ΧΝΝ με ρύθμιση του άξονα Gas6/AxINFxB/Nrf2. Free Radic Biol Med 134: 484-497,2019.

23. Dodson M, Castro-Portuguez R και Zhang DD: Το NRF2 παίζει κρίσιμο ρόλο στον μετριασμό της υπεροξείδωσης των λιπιδίων και της φερρόπτωσης. Redox Biol 23:101107,2019.

24. National Research Council (US)Institute for Laboratory Animal Research: Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Washington (DC): National Academies Press (US);1996.https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK232589/doi: 10.17226/5140.

25. Wei Qand Dong Z: Ένα μοντέλο ποντικιού ισχαιμικής οξείας νεφρικής βλάβης: Τεχνικές σημειώσεις και κόλπα. Am J Physiol Renal Physiol 303:F1487-F1494,.2012.

26. Paller MS, Hoidal JR και Ferris TF: Ελεύθερες ρίζες οξυγόνου σε ισχαιμική οξεία νεφρική ανεπάρκεια στον αρουραίο. J Clin Invest 74:1156-1164, 1984.