Επιδράσεις του Xiaoyaosan στο μονοπάτι σηματοδότησης CAMP στον εγκεφαλικό φλοιό των καταθλιπτικών αρουραίων
Nov 26, 2025
Περίληψη
Σκοπός:Για την αξιολόγηση των αλλαγών στην προσταγλανδίνη ορού Ε2 (PGE2) και την ουσία P (SP) και την έκφραση mRNA της κυκλικής μονοφωσφορικής αδενοσίνης (cAMP) και της πρωτεΐνης 1 που δεσμεύει το στοιχείο απόκρισης cAMP (CREB1) στον εγκεφαλικό φλοιό των καταθλιπτικών αρουραίων και για τη διερεύνηση του μοριακού μηχανισμού μέσω του οποίου το Xiaoyadean εξάγει τα αντικαταθλιπτικά αποτελέσματα.
Μέθοδοι: Σαράντα οκτώ αρσενικοί αρουραίοι SD κατανεμήθηκαν τυχαία σε τέσσερις ομάδες (n=12 η καθεμία): φυσιολογικό, μοντέλο, Xiaoyaosan και φλουοξετίνη. Ένα μοντέλο κατάθλιψης καθιερώθηκε χρησιμοποιώντας το χρόνιο στρες ακινητοποίησης (CIS). Το Xiaoyaosan χορηγήθηκε με καθετήρα 30 λεπτά πριν από την καθημερινή μοντελοποίηση για 21 ημέρες. Τα αποτελέσματα που μοιάζουν με αντικαταθλιπτικά αξιολογήθηκαν με μακροσκοπική παρατήρηση συμπεριφοράς, δοκιμή προτίμησης σακχαρόζης, δοκιμή ανοιχτού πεδίου και δοκιμασία αναγκαστικής κολύμβησης. Τα επίπεδα cAMP και CREB1 mRNA του φλοιού ποσοτικοποιήθηκαν με qPCR φθορισμού σε πραγματικό χρόνο. Η PGE2 και η SP ορού μετρήθηκαν με ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία (ELISA).
Αποτελέσματα: Σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλων, τόσο το Xiaoyaosan όσο και η φλουοξετίνη εξασθένησαν σημαντικά τη συμπεριφορά που μοιάζει με κατάθλιψη. αυξημένη κατανάλωση σακχαρόζης, κατακόρυφες μετρήσεις εκτροφής, οριζόντιες διασταυρώσεις και περιποίηση στη δοκιμή ανοιχτού αγρού. και μειωμένο αθροιστικό χρόνο ακινησίας στο τεστ αναγκαστικής κολύμβησης. Και οι δύο θεραπείες βελτίωσαν την ιστοπαθολογία του φλοιού, αύξησαν την έκφραση mRNA cAMP και CREB1 στον εγκεφαλικό φλοιό και μείωσαν τα επίπεδα PGE2 και SP στον ορό (P <0,01).
Σύναψη:Το Xiaoyaosan ασκεί σαφή αντικαταθλιπτικά αποτελέσματα σε καταθλιπτικούς αρουραίους, πιθανώς μέσω της ρύθμισης της οδού σηματοδότησης του φλοιού cAMP.
Λέξεις-κλειδιά: Xiaoyaosan; Κατάθλιψη; στρατόπεδο; CREB1; Προσταγλανδίνη Ε2 (PGE2); Ουσία P (SP)
Εισαγωγή
Η κατάθλιψη είναι η κύρια αιτία νοσηρότητας και αναπηρίας παγκοσμίως, μειώνοντας βαθιά την ποιότητα ζωής. Το Xiaoyaosan, μια κλασική φόρμουλα παραδοσιακής κινεζικής ιατρικής (TCM) με πολλά βότανα, έχει αποδείξει κλινική χρησιμότητα σε κοινές καταθλιπτικές παρουσιάσεις, υποστηρίζοντας τη συνεχή ανάπτυξή της ως βοτανική θεραπεία.
Μηχανιστικά, ο καταρράκτης σηματοδότησης cAMP-πρωτεϊνικής κινάσης Α (PKA)-CREB είναι κεντρικός στη ρύθμιση της διάθεσης και της συναισθηματικής συμπεριφοράς. Η μείωση αυτής της οδού μπορεί να προκαλέσει καταθλιπτικούς φαινοτύπους. Το CREB εμπλέκεται στην παθοφυσιολογία της κατάθλιψης και η ενεργοποίηση από το cAMP ενισχύει τη μεταγραφή των κατάντη γονιδίων. Οι πολυμορφισμοί και οι λειτουργικές μειώσεις σε αυτόν τον άξονα έχουν θεωρηθεί παράγοντες ευαισθησίας στην κατάθλιψη.
Οι φλεγμονώδεις μεσολαβητές συμβάλλουν επίσης στην κατάθλιψη. Η προσταγλανδίνη Ε2 (PGE2) προκαλεί φλεγμονώδεις αποκρίσεις και η αυξημένη PGE2 μπορεί να προκαλέσει καταθλιπτικές συμπεριφορές. Η ουσία P (SP), ένα νευροπεπτίδιο που συνδέεται με το στρες και το συναίσθημα, είναι συχνά αυξημένη στον ορό ασθενών με κατάθλιψη. Έτσι, η αλλοιωμένη έκφραση mRNA του φλοιού cAMP και CREB1 μαζί με αυξημένα PGE2 και SP ορού μπορεί να αντιπροσωπεύουν έναν μοριακό μηχανισμό που υποβόσκει φλοιώδη βλάβη στην κατάθλιψη.
Αν και πολυάριθμοι τύποι ενώσεων TCM έχουν διερευνηθεί για αντικαταθλιπτικούς μηχανισμούς, η επίδραση των περισσότερων τύπων στην οδό cAMP παραμένει ασαφής. Χρησιμοποιώντας ένα παράδειγμα χρόνιου στρες ακινητοποίησης (CIS) για να προκληθεί συμπεριφορά παρόμοια με την κατάθλιψη σε αρουραίους, αυτή η μελέτη διερευνά περαιτέρω τον αντικαταθλιπτικό μηχανισμό του Xiaoyaosan και τον συγκρίνει με τη φλουοξετίνη, με στόχο να ενημερώσει τη μελλοντική ανάπτυξη βοτανικών θεραπευτικών και να προσφέρει χρήσιμες ιδέες σε άτομα που αναζητούν βοήθεια για την κατάθλιψη.
ΠΩΣ ΤΑ ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΑ ΒΟΤΑΝΩΝ TCM ΑΝΑΚΑΛΥΨΟΥΝ ΤΑ ΣΥΜΠΤΩΜΑΤΑ ΠΡΟΣΤΑΤΙΤΙΔΑΣ
Υλικά
Ζώα
Σαράντα οκτώ υγιείς ενήλικοι αρσενικοί αρσενικοί αρουραίοι Sprague–Dawley (ηλικίας 8 εβδομάδων, 200–220 g) βαθμού SPF αγοράστηκαν από την Beijing Viton Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd. [Αριθμός άδειας: SCXK (Beijing) 2016-0006]. Οι αρουραίοι στεγάστηκαν σε εγκαταστάσεις φραγμού ζώων του Πανεπιστημίου Guizhou της Παραδοσιακής Κινέζικης Ιατρικής στους 22 ± 2 βαθμούς, σχετική υγρασία 35%-55%, 12 ώρες φως/12 ώρες σκοτάδι (7:00-19:00), τέσσερις αρουραίοι ανά κλουβί, με 7 ημέρες εγκλιματισμού. Έγκριση δεοντολογίας: Πανεπιστήμιο Guizhou της TCM (Αρ.. 20210142).
ΠΩΣ ΤΑ ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΑ ΒΟΤΑΝΩΝ TCM ΑΝΑΚΑΛΥΨΟΥΝ ΤΑ ΣΥΜΠΤΩΜΑΤΑ ΠΡΟΣΤΑΤΙΤΙΔΑΣ
ΠΩΛΟΥΝΤΑΙ ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΑ TCM HERB
Ναρκωτικά
Η φόρμουλα Xiaoyaosan ακολουθούσε τις αναλογίες Taiping Huimin Heji Ju Fang. Τα ακατέργαστα βότανα αγοράστηκαν από την Beijing Tongrentang (Bozhou) Decoction Pieces Co., Ltd.: Bupleurum (Chaihu), White Peony (Baishao), Angelica sinensis (Danggui), Stir-fried Atractylodes (Baizhu), Poria (Fuling), Licorice τηγανητό με μέλι (Zighea) (Shengjiang), σε συνδυασμό σε αναλογία 5:5:5:5:5:4:1:5. Το αφέψημα και η συμπύκνωση παρασκευάστηκαν σύμφωνα με την έκδοση του 2020 της Φαρμακοποιίας της Λαϊκής Δημοκρατίας της Κίνας από τον Hunan Jiuzhitang, που χρησιμεύει ως παρέμβαση TCM. Οι δόσεις μετατράπηκαν για αρουραίους, διαλύθηκαν σε απιονισμένο νερό και παρασκευάστηκαν ως εναιώρημα.
Κάψουλες υδροχλωρικής φλουοξετίνης (Patheon France, συσκευασμένο από την Eli Lilly Suzhou Pharmaceutical Co., Ltd., παρτίδα αρ.. 6663Β, 20 mg/κάψουλα) χρησιμοποιήθηκαν ως το αντικαταθλιπτικό αναφοράς.
Αντιδραστήρια
ExTaq (TAKARA, Κατ. DRR100A); SYBR Green/Fluorescein qPCR Master Mix (2×) (Fermentas, Cat. #K0242); αστάρια (Qingke Bio); Κιτ ELISA για αρουραίους PGE2 και SP (Shanghai Yuanju Biotechnology Center, Κατ. CK-E30697 και CK-E30122).
Όργανα
7900 σύστημα qPCR φθορισμού σε πραγματικό χρόνο (Applied Biosystems, ΗΠΑ). μικροπιπέτες (Eppendorf); μικροτόμος παραφίνης (HY1508, Jinhua Huiyou); Σύστημα υπερκαθαρού νερού Aquapro (AJY-0501, Aikepu).
Μέθοδοι
Ομαδοποίηση και μοντελοποίηση
Οι αρουραίοι κατατάχθηκαν τυχαία σε ομάδες φυσιολογικών, μοντέλων, Xiaoyaosan και φλουοξετίνης (n=12 η καθεμία). Εκτός από την κανονική ομάδα, όλες οι ομάδες υποβλήθηκαν σε CIS για 3 ώρες/ημέρα σε τυχαιοποιημένους χρόνους για 21 ημέρες. Οι κανονικοί αρουραίοι δεν ήταν περιορισμένοι, αλλά δεν είχαν τροφή και νερό κατά τη διάρκεια της ίδιας χρονικής περιόδου για να ταιριάζουν με το χειρισμό.
Χορήγηση φαρμάκου
Με βάση προηγούμενες μελέτες, το Xiaoyaosan χορηγήθηκε με καθετήρα σε 2,22 g ακατέργαστου φαρμάκου·kg−1·ημέρα−1. φλουοξετίνη σε 2,0 mg·kg−1·ημέρα−1. Τα φάρμακα διαλύθηκαν σε απιονισμένο νερό. Οι δόσεις υπολογίστηκαν με μετατροπή της επιφάνειας του σώματος. Ο όγκος καθετήρα ήταν 10 mL/kg, χορηγούμενος 30 λεπτά πριν από κάθε ημερήσια συνεδρία περιορισμού. Οι κανονικές ομάδες και οι ομάδες μοντέλου έλαβαν ίσους όγκους απιονισμένου νερού.
Μέτρα και διαδικασίες αποτελεσμάτων
3.1 Μακροσκοπικές παρατηρήσεις
Οι καθημερινές παρατηρήσεις κατέγραφαν την ψυχική κατάσταση, την κίνηση και τη γενική εμφάνιση.
3.2 Δοκιμή προτίμησης σακχαρόζης
Οι αρουραίοι εκπαιδεύτηκαν για 3 ημέρες. Ημέρα 1: δύο μπουκάλια σακχαρόζης 1% ανά κλουβί. Ημέρα 2: αντικατάσταση ενός μπουκαλιού με ίσου όγκου διπλής απεσταγμένου νερού. Μετά από 24 ώρες στέρηση τροφής και νερού, κάθε αρουραίος έλαβε ένα μπουκάλι σακχαρόζη 1% και ένα διπλά απεσταγμένο νερό για 1 ώρα. Οι φιάλες ζυγίστηκαν για να υπολογιστεί η προτίμηση σακχαρόζης (%): πρόσληψη σακχαρόζης / (σακχαρόζη + πρόσληψη νερού) × 100%.
3.3 Δοκιμή ανοιχτού πεδίου
Ένα ανοιχτό πεδίο με μαύρους τοίχους (125 cm × 125 cm × 50 cm) χρησιμοποιήθηκε σε ένα ήσυχο δωμάτιο. Οι αρουραίοι τοποθετήθηκαν στο κέντρο. σε διάστημα 5 λεπτών, καταγράφηκαν κατακόρυφες μετρήσεις εκτροφής, οριζόντιες διασταυρώσεις πλέγματος και γεγονότα περιποίησης. Η αρένα καθαρίστηκε με 75% αιθανόλη και νερό μεταξύ των δοκιμών.
3.4 Δοκιμή αναγκαστικής κολύμβησης
Οι αρουραίοι τοποθετήθηκαν χωριστά σε γυάλινους κυλίνδρους με νερό 35 cm στους 20 ± 2 βαθμούς. Από τη βύθιση, η συμπεριφορά καταγράφηκε για 5 λεπτά με κάμερα υψηλής ανάλυσης. Μετρήθηκε ο αθροιστικός χρόνος ακινησίας άνω των 5 λεπτών (η ακινησία ορίζεται ως η ελάχιστη κίνηση για να κρατηθεί η μύτη πάνω από το νερό, ελαφρά κάμψη του σώματος για ισορροπία). Το νερό άλλαζε μεταξύ των ζώων.
3.5 Ιστοπαθολογία
Οι αρουραίοι αναισθητοποιήθηκαν με 3% πεντοβαρβιτάλη νατρίου (0,15 mL/100 g). Έξι αρουραίοι ανά ομάδα υποβλήθηκαν σε διακαρδιακή αιμάτωση με 4% παραφορμαλδεΰδη ακολουθούμενη από φυσιολογικό ορό 0,9% για καθήλωση, αποκεφαλισμό και εξαγωγή εγκεφάλου. Οι εγκέφαλοι βυθίστηκαν σε 4% παραφορμαλδεΰδη (4 βαθμοί) για 72 ώρες, ενσωματώθηκαν σε παραφίνη, κόπηκαν και τεμαχίστηκαν στα ~5 μm. Τα τμήματα επιπλέθηκαν στους 48 βαθμούς, τοποθετήθηκαν, ψήθηκαν στους 60 βαθμούς για 4 ώρες, αποπαραφινώθηκαν και επανυδατώθηκαν, χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη, διαφοροποιήθηκαν, ξεπλύθηκαν, αντιχρωματίστηκαν με ηωσίνη, αφυδατώθηκαν, καθαρίστηκαν και καλυπτρώθηκαν για μικροσκοπική εξέταση. Οι υπόλοιποι έξι αρουραίοι ανά ομάδα υποβλήθηκαν σε ευθανασία. Ο εγκεφαλικός φλοιός ανατέμθηκε γρήγορα σε πάγο και αποθηκεύτηκε στους -80 βαθμούς για εξαγωγή RNA.
3,6 ποσοτικοποίηση mRNA
Οι αλληλουχίες στόχοι ανακτήθηκαν από το NCBI και οι εκκινητές που σχεδιάστηκαν με Primer 6.0.
cAMP: Εμπρός 5′-CCGTGCTGTGGATGACTTCAACC-3′; Αντίστροφη 5′-AGTCTCCTTCACTCGGAACCTCA-3′; 133 μ.β.
CREB1: Εμπρός 5′-GGAGCAGACAACCAGCAGAGTG-3′; Αντίστροφη 5′-GGATACCTGGGCTAATGTGGCA-3′; 105 μ.β.
GAPDH: Εμπρός 5′-AAGGGCTCATGACCACAGTC-3′; Αντίστροφη 5′-GGATGCAGGGATGATGTTCT-3′; 116 μ.β.
Συνθήκες qPCR: προ-μετουσίωσης 90 μοίρες για 30 δευτερόλεπτα. 45 κύκλοι των 95 μοιρών 10 δευτ., 60 μοιρών 30 δευτ., 72 μοιρών 30 δευτ. Ανάλυση καμπύλης τήγματος: 95 μοίρες 1 λεπτό, 55 μοίρες 1 λεπτό, 95 μοίρες 1 λεπτό.
3.7 Φλεγμονώδεις παράγοντες ορού
Για την ELISA: (i) καθορισμός προτύπων και δειγμάτων. προσθέστε πρότυπα 50 μL σε βαθμολογημένες συγκεντρώσεις σε τυπικά φρεάτια. (ii) Προσθέστε 40 μL αραιωτικού δείγματος στα τυφλά πηγαδάκια και στη συνέχεια 10 μL δείγματος και αναμείξτε. (iii) προσθέστε 100 μL συζυγούς ενζύμου σε όλα εκτός από τα κενά. (iv) σφραγίστε και επωάστε στους 37 βαθμούς για 1 ώρα. (v) αραιωμένο συμπυκνωμένο ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης 1:20. (vi) πλύνετε 5 φορές και στεγνώστε τα. (vii) προσθέστε 50 μL Υποστρώματος Α και στη συνέχεια 50 μL Υποστρώματος Β, επωάστε στους 37 βαθμούς προστατευμένο από το φως για 15 λεπτά. (viii) προσθήκη διαλύματος διακοπής. (ix) ανάγνωση απορρόφησης στα 450 nm με μηδενικά κενά.
Στατιστική ανάλυση
Τα δεδομένα αναλύθηκαν σε SPSS 26.0 και εκφράστηκαν ως μέσος όρος ± SD. Μετά την επιβεβαίωση της κανονικότητας και της ομοιογένειας της διακύμανσης, χρησιμοποιήθηκε μονόδρομη ANOVA. P < 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντικό.
Σημείωση αναγνώστη για επαγγελματίες και άτομα που αναζητούν βοήθεια
Για τους προγραμματιστές βοτανικών/TCM αντικαταθλιπτικών: Η μελέτη συνδέει μια κλασική φόρμουλα με μια συγκεκριμένη νευροβιολογική οδό (cAMP–CREB) και φλεγμονώδεις μεσολαβητές (PGE2, SP). Τέτοια σηματοδότηση διπλής διαμόρφωσης-νευροπλαστικότητας συν φλεγμονή-ευθυγραμμίζεται με τη σύγχρονη βιολογία της κατάθλιψης και μπορεί να καθοδηγήσει τη βελτιστοποίηση της φόρμουλας, την επιλογή βιοδεικτών και τις στρατηγικές συνδυασμού με SSRIs όπως η φλουοξετίνη.
Για άτομα που διερευνούν βοήθεια για την κατάθλιψη: Τα προκλινικά αποτελέσματα δεν μπορούν να αντικαταστήσουν την ιατρική περίθαλψη, αλλά προτείνουν ότι το Xiaoyaosan μπορεί να βελτιώσει τις καταθλιπτικές συμπεριφορές ομαλοποιώντας τη σηματοδότηση του εγκεφάλου και μειώνοντας τα φλεγμονώδη σήματα. Εάν σκέφτεστε επιλογές βοτάνων, συμβουλευτείτε έναν εξειδικευμένο κλινικό ιατρό, ειδικά εάν λαμβάνετε αντικαταθλιπτικά, για να αποφύγετε τις αλληλεπιδράσεις και να εξασφαλίσετε τη δοσολογία και τον ποιοτικό έλεγχο.
Μεταβατικό φαγητό σε πακέτο
Το Xiaoyaosan βελτίωσε τη συμπεριφορά, την ιστολογία του εγκεφάλου και τους μοριακούς δείκτες σε καταθλιπτικούς αρουραίους που προκαλούνται από CIS, πιθανότατα μέσω της ανοδικής ρύθμισης της σηματοδότησης του φλοιού cAMP/CREB ενώ μειώνει τα περιφερειακά PGE2 και SP. Με βάση αυτό, η επόμενη μελέτη θα αναλύσει τους ανοδικούς ρυθμιστές του cAMP (π.χ. ισομορφές αδενυλυλοκυκλάσης και φωσφοδιεστεράσες) και θα καθορίσει εάν το Xiaoyaosan ρυθμίζει άμεσα αυτούς τους στόχους ή δρα κυρίως μέσω αντιφλεγμονωδών οδών που συγκλίνουν στο CREB.
