Μελέτη σχετικά με τα θεραπευτικά αποτελέσματα και τους μηχανισμούς των μονομερών της παραδοσιακής κινεζικής ιατρικής σε ένα μοντέλο αρουραίου όψιμης έναρξης υπογοναδισμού

 

Περίληψη

Σκοπός
Για την αξιολόγηση των θεραπευτικών αποτελεσμάτων και των μηχανισμών τριών μονομερών παραδοσιακής κινεζικής ιατρικής (TCM)-ικαριην, βερμπασκοσίδη, καιginsenoside Rg1-επίόψιμος υπογοναδισμός (LOH)σε ένα μοντέλο αρουραίου και να εξερευνήσουν τις δυνατότητές τους ωςφυσικές παρεμβάσεις για μείωση της τεστοστερόνης που σχετίζεται με την ηλικίασε μεσήλικες άντρες.

Μέθοδοι
Ένα μοντέλο υπογοναδισμού όψιμης έναρξης (LOH) καθιερώθηκε σε ηλικιωμένους άνδρεςΑρουραίοι Sprague-Dawleyμέσω ενδοπεριτοναϊκής ένεσης τουκυκλοφωσφαμίδη, προσομοίωση ανεπάρκειας ανδρογόνων. Τρία μονομερή TCM-ικαριην, βερμπασκοσίδη, καιginsenoside Rg1-χορηγήθηκαν από το στόμα για 60 ημέρες.

Στο τέλος της θεραπείας μετρήθηκαν το σωματικό βάρος και τα βάρη των αναπαραγωγικών οργάνων (όρχεις, επιδιδυμίδα, σπερματοδόχοι κ.λπ.).Ιστοπαθολογικές αλλαγέςστον ιστό των όρχεων αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώνταςχρώση αιματοξυλίνης-ηωσίνης (Η&Ε).. Επίπεδα ορού τουFSH, LH, καιτεστοστερόνηδοκιμάστηκαν μέσωELISA. Η έκφραση τουυποδοχέας ανδρογόνου (AR)πρωτεΐνη και mRNA αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώνταςWestern blotκαιποσοτική PCR σε πραγματικό χρόνο (qRT-PCR).

 

 

 

Αποτελέσματα

Ginsenoside Rg1παρουσίασε τη σημαντικότερη βελτίωση σεσωματικό βάροςκαιβάρος του αναπαραγωγικού οργάνου(Ρ < 0,01).

Icariinαύξησε σημαντικά το βάρος τουόρχεις, επιδιδυμίδα, καισπερματικά κυστίδια(Ρ < 0,01).

Βερμπασκοσίδημέτρια βελτιωμένο βάρος σπερματικού κυστιδίου (P <0,05).

Και τα τρία μονομερή TCM αποτελεσματικάαντίστροφη εκφύλιση των όρχεωνσε αρουραίους LOH, αποκαθιστώντας τη δομή των σπερματοζωαρίων και αυξάνοντας τον αριθμό τωνσπερματογόνα κύτταρακαιώριμο σπέρμα.

Όλες οι μονομερείς ομάδες έδειξαν την ικανότητα ναχαμηλότερα επίπεδα FSH και LH ορούενώαύξηση της τεστοστερόνης του ορού. Οομάδα icariinπαρουσίασαν τις πιο σημαντικές ενδοκρινικές βελτιώσεις (P <0,01).

Επίπεδα έκφρασης τουυποδοχέας ανδρογόνου (AR)τόσο στην πρωτεΐνη όσο και στο mRNA ρυθμίστηκαν σημαντικά προς τα πάνω σε όλες τις ομάδες που έλαβαν θεραπεία. Η επίδραση τουικαριηνήτανπιο έντονη από την προπιονική τεστοστερόνη, υποδεικνύοντας αισχυρή ρυθμιστική επίδραση στη σηματοδότηση AR.

 

Σύναψη

Αυτή η μελέτη προτείνει ότιginsenoside Rg1είναι πιο αποτελεσματικό στη βελτίωσηβάρος σώματος και οργάνωνσε αρουραίους LOH, ενώικαριηνδείχνει το ισχυρότερο αποτέλεσμα σεενισχύοντας την παραγωγή τεστοστερόνηςκαιενίσχυση της έκφρασης AR. Και τα τρία μονομερή-ικαριην, βερμπασκοσίδη, καιginsenoside Rg1- επίδειξηπροστατευτικά αποτελέσματα κατά της εκφύλισης των όρχεωνκαιυποστηρίζουν την αναπαραγωγική ενδοκρινική λειτουργία των ανδρών, προσφέροντας πολλά υποσχόμενες φυσικές εναλλακτικές λύσεις για τη διαχείριση τουυπογοναδισμός που σχετίζεται με την ηλικία.

 

Λέξεις-κλειδιά

Υπογοναδισμός όψιμης έναρξης (LOH); Icariin; Βερμπασκοσίδη; Ginsenoside Rg1; Παραδοσιακή Κινέζικη Ιατρική; Φυσικό ενισχυτικό τεστοστερόνης. Ανδρικό σύνδρομο γήρανσης; Έκφραση υποδοχέα ανδρογόνων; Βοτανοθεραπεία για την ανδρική υγεία

Κάντε κλικ στην εικόνα για να μάθετε περισσότερα σχετικά με το βότανο TCM για τη σεξουαλική υγεία

 

 

Φόντο

Υπογοναδισμός όψιμης έναρξης (LOH)σε μεσήλικες και ηλικιωμένους άνδρες συνδέεται στενά μεμείωση των επιπέδων ανδρογόνων που σχετίζεται με την ηλικία, ιδιαίτερα η τεστοστερόνη. Μια πληθυσμιακή επιδημιολογική μελέτη του 2021 που διεξήχθη σε έξι αντιπροσωπευτικές επαρχίες της Κίνας, η οποία αφορούσε6.296 άνδρες ηλικίας 40–79 ετών, αποκάλυψε τα ακόλουθα ποσοστά επικράτησης του LOH:

3.2%σε άνδρες στα 50 τους

11.2%στα 60 τους

24.0%στα 70 τους [1]

Το LOH χαρακτηρίζεται απόμειωμένη τεστοστερόνη ορούμαζί με έναν αστερισμό τωνσυμπτώματα ανεπάρκειας ανδρογόνωνόπως:

Χαμηλή λίμπιντο

Στυτική δυσλειτουργία

Κατάθλιψη και ευερεθιστότητα

Γνωστική έκπτωση και απώλεια μνήμης

Αυτά τα συμπτώματα μπορούνβλάπτουν σημαντικά τη σωματική και ψυχική ευεξία, καθώς καιποιότητα ζωής [2–3].

Τη στιγμή,Θεραπεία υποκατάστασης τεστοστερόνης (TRT)είναι η κύρια θεραπεία για το LOH και μπορεί να ανακουφίσει προσωρινά τα συμπτώματα. Ωστόσο, ανησυχίες γιακαρδιαγγειακό κίνδυνο, υγεία του προστάτη, καιμακροπρόθεσμη ασφάλειαπαραμένουν [4]. Ως εκ τούτου, υπάρχει αυξανόμενο ενδιαφέρον για εξερεύνησηφυσικές, ασφαλέστερες εναλλακτικές λύσεις, ειδικά απόΠαραδοσιακή Κινέζικη Ιατρική (TCM).

Η μελέτη αυτή στοχεύει στην αξιολόγηση τωνθεραπευτικά αποτελέσματα και μηχανισμοίτριών μονομερών TCM-ικαριην, βερμπασκοσίδη, καιginsenoside Rg1-χρησιμοποιώντας αμοντέλο αρουραίου του LOH.

 

1. Υλικά και Μέθοδοι

1.1 Πειραματόζωα

ΕξήνταΑρσενικοί αρουραίοι Sprague-Dawley (SD) 15 μηνών(700–800 g) ελήφθησαν τον Ιανουάριο του 2022 από το Πειραματικό Κέντρο Ζώων του Πανεπιστημίου Three Gorges της Κίνας. Αριθμοί αδειών:

Πιστοποιητικό ζώου: Όχι. 42010200007997

Άδεια Παραγωγής: SCXK (E) 2022-0012

Οι αρουραίοι στεγάστηκαν σε ελεγχόμενο περιβάλλον (θερμοκρασία: 19–23 βαθμούς, σχετική υγρασία: 55%–65%), με φυσικό κύκλο φωτός-σκότους και ελεύθερη πρόσβαση σε τροφή και νερό. Μετά1 εβδομάδα εγκλιματισμού, άρχισαν τα πειράματα.

1.2 Αντιδραστήρια και όργανα

Κυκλοφωσφαμίδη(Nanjing Jiancheng)

Icariin(Nanjing Guangrun Biotech)

Ginsenoside Rg1(Σαγκάη Μάκλιν)

Βερμπασκοσίδη(Shanghai Zhenzhun Biotech)

AR αντίσωμα(Σάντα Κρουζ, ΗΠΑ)

-αντίσωμα ακτίνης(Sigma, ΗΠΑ)

Κιτ χρώσης H&E(Βιομηχανική Shanghai Yiji)

Κιτ ELISA για ορό FSH, LH, τεστοστερόνη(Shanghai Meilian)

Αντιδραστήρια qRT-PCR (SYBR Green I)(Shanghai Julu Biotech)

Όργανα: Θερμική συσκευή ανάγνωσης μικροπλάκας, οπτικό μικροσκόπιο Olympus, σύστημα απεικόνισης LI-COR Odyssey, μηχανή ABI qRT-PCR

 

1.3 Ομαδοποίηση ζώων και Επαγωγή μοντέλου LOH

Οι αρουραίοι κατανεμήθηκαν τυχαία σε6 ομάδες (n=10 ανά ομάδα):

Ομάδα ελέγχου:

Ενδοπεριτοναϊκή (IP) ένεση φυσιολογικού ορού 0,9% για 5 ημέρες

Φόρμα φυσιολογικού ορού (1 mL/100 g) για 60 ημέρες

Ομάδα μοντέλων:

ενδοπεριτοναϊκή κυκλοφωσφαμίδη 20 mg/kg/ημέρα για 5 ημέρες

Ακολούθησε από του στόματος φυσιολογικό ορό για 60 ημέρες

Προπιονική τεστοστερόνη (θετικός έλεγχος):

ip κυκλοφωσφαμίδη (όπως παραπάνω)

Υποδόρια ένεση προπιονικής τεστοστερόνης 5 mg/kg/ημέρα για 7 ημέρες

Ομάδα Icariin:

ip κυκλοφωσφαμίδη (ίδιο)

Από του στόματος ικαριίνη 200 mg/kg/ημέρα για 60 ημέρες

Ομάδα βερμπασκοσίδης:

ip κυκλοφωσφαμίδη (ίδιο)

Από του στόματος βερμπασκοσίδη 200 mg/kg/ημέρα για 60 ημέρες

Ομάδα Ginsenoside Rg1:

ip κυκλοφωσφαμίδη (ίδιο)

Από του στόματος ginsenoside Rg1 200 mg/kg/ημέρα για 60 ημέρες

Όλες οι θεραπείες χορηγήθηκαν μεταξύ8:00–11:30 π.μ. Έγιναν αξιολογήσεις24 ώρες μετά την τελική δόση.

 

1.4 Βάρος σώματος και δείκτης αναπαραγωγικών οργάνων

Μετά τη ζύγιση, οι αρουραίοι υποβλήθηκαν σε ευθανασία με εξάρθρωση του τραχήλου της μήτρας. Οόρχεις, επιδιδυμίδα και σπερματοδόχα κυστίδιαανατέμνονταν και ζυγίστηκαν.

Εναςόρχεις από κάθε αρουραίοστερεώθηκε σε4% παραφορμαλδεΰδηγια 72 ώρες, αφυδατώθηκε με διαβαθμισμένη αλκοόλη, ενσωματώθηκε σε παραφίνη, τεμαχίστηκε (5 μm) και χρωματίστηκε μεΑιματοξυλίνη-Ηωσίνη (H&E). Μορφολογικές αλλαγές παρατηρήθηκαν σε μικροσκόπιο φωτός.

 

1.5 Δοκιμασίες ορμονών ορού

Οι αρουραίοι αναισθητοποιήθηκαν με3% πεντοβαρβιτάλη νάτριο, και συλλέχτηκε αίμα μέσωκαρδιακή παρακέντηση. Ο ορός διαχωρίστηκε απόφυγοκέντρηση στις 3000 rpm για 10 λεπτά στους 4 βαθμούς. Για τη μέτρηση χρησιμοποιήθηκαν κιτ ELISAFSH, LH και τεστοστερόνηεπίπεδα σύμφωνα με τα πρωτόκολλα του κατασκευαστή.

 

1.6 Έκφραση πρωτεΐνης AR (Western Blot)

Ο ιστός των όρχεων λύθηκε και μετρήθηκε η συγκέντρωση πρωτεΐνης. Ίσες ποσότητες πρωτεΐνης επιλύθηκαν με10% SDS-PAGE, μεταφέρθηκε σε μεμβράνες PVDF και επωάστηκε με πρωτογενή αντισώματα κατάARκαι-ακτίνη (1:1000)διανυκτέρευση. Η δευτερογενής επώαση αντισωμάτων ακολουθήθηκε από ανίχνευση χημειοφωταύγειας.ImageJχρησιμοποιήθηκε για ανάλυση.

 

1.7 Έκφραση AR mRNA (qRT-PCR)

Ολικό RNA εκχυλίστηκε από ιστό όρχεων. Το cDNA συντέθηκε μέσω αντίστροφης μεταγραφής. Η qRT-PCR πραγματοποιήθηκε με τη μέθοδο SYBR Green.

AR εκκινητές:

Εμπρός: 5′-CAGGGACCA CGTTTTACCCA-3′

Αντίστροφη: 5′-TTCCCTTCCGCAGCTCTTTTT-3′

- εκκινητές ακτίνης (εσωτερικός έλεγχος):

Εμπρός: 5′-CCACCATGTACCCAGGCATT-3′

Αντίστροφη: 5′-CGGACTCATCGTACTCCTGC-3′

Θερμικός κύκλος: 95 μοίρες για 15 λεπτά (προ-μετουσίωσης), ακολουθούμενοι από 40 κύκλους 95 μοιρών για 15 δευτερόλεπτα και 60 μοίρες για 1 λεπτό. Τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το2^-ΔΔCtμέθοδος.

 

1.8 Στατιστική Ανάλυση

Τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώνταςSPSS 26.0.

Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ωςμέση ± τυπική απόκλιση (x̄ ± s)

t-testχρησιμοποιήθηκε για συγκρίσεις δύο ομάδων

Μονόδρομος ANOVAχρησιμοποιήθηκε για συγκρίσεις πολλαπλών ομάδων

Ρ < 0,05θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική