Μελέτη σχετικά με τη νευροενδοκρινική ανοσολογική λειτουργία του Cistanche Deserticola και των προϊόντων του που αχνίζουν κρασί από ρύζι σε μοντέλο αρουραίου που προκαλείται από γλυκοκορτικοειδή-Ⅱ

3.2.4. Ανοσοϊστοχημεία

Η νευρωνική απόπτωση ελέγχεται από πολλά αποπτωτικά και αντιαποπτωτικά γονίδια, κυρίως το γονίδιο που προάγει την απόπτωση Bax και τα αντιαποπτωτικά γονίδια της οικογένειας γονιδίων Bcl-2. Το Bcl-2 εντοπίζεται σε αντιδραστικά οργανίδια που παράγουν οξυγόνο όπως τα μιτοχόνδρια, το ενδοπλασματικό δίκτυο και οι πυρηνικές μεμβράνες. Το Bcl-2 έχει μικρή επίδραση στις ελεύθερες ρίζες οξυγόνου, αλλά μπορείαποτρέπει την οξειδωτική βλάβη στα κύτταρα. Το Bax μεταφέρεται από το κυτταρόπλασμα στη μιτοχονδριακή μεμβράνη, αλλάζει τη δομή της μιτοχονδριακής μεμβράνης και προάγει την απελευθέρωση του κυτοχρώματος c και την επαγωγή απόπτωσης.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA ΓΙΑ ΒΕΛΤΙΩΣΗ ΤΗΣ ΣΕΞΟΥΑΛΙΚΗΣ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑΣ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Υπήρχε έκφραση στο κυτταρόπλασμα των επινεφριδίων της πρωτεΐνης Bax και Bcl-2. Η χρώση έδειξε όλα τα κίτρινα σωματίδια. Σε σύγκριση με εκείνη της ομάδας BC, η μέση οπτική πυκνότητα της πρωτεΐνης Bax στην ομάδα MC αυξήθηκε σημαντικά (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the average optical density in the CD-LD and WCD-LD groups decreased significantly (P < 0.01) (Figure 5(a)).

Το σχήμα 5(β) δείχνει ότι σε σύγκριση με αυτήν της ομάδας BC, η μέση οπτική πυκνότητα της πρωτεΐνης Bcl-2 στην ομάδα MC μειώθηκε σημαντικά (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and CD-HD groups increased significantly (P < 0.01), while those of the WCD-MD and CD-MD groups increased (P < 0.05).

Η πρωτεΐνη κασπάση-3 εντοπίζεται κυρίως στο κυτταρόπλασμα στην αρχική της μορφή σε φυσιολογικούς ιστούς και έχει χαμηλή έκφραση. Τα θετικά σήματα είναι ανοιχτό κίτρινο ή καστανοκίτρινο. Σε σύγκριση με αυτήν της ομάδας BC, η έκφραση της κασπάσης-3 στην ομάδα MC αυξήθηκε σημαντικά (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the expression of caspase-3 in the WCD-HD and WCD-MD groups increased (P < 0.05) (Figure 5(c)).

Σε φυσιολογικούς ιστούς, η έκφραση του γονιδίου Fas μειώθηκε και το θετικό σήμα για τον in situ υβριδισμό ήταν καστανοκίτρινο. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 5(δ), σε σύγκριση με εκείνη της ομάδας BC, η μέση οπτική πυκνότητα της πρωτεΐνης Fas στην ομάδα MC αυξήθηκε (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and WCD-LD groups improved (P < 0.05) (Figure 5(d)).

Η πρωτεΐνη FasL βρίσκεται κυρίως στην κυτταρική μεμβράνη ή στο κυτταρόπλασμα και τα θετικά της σήματα είναι καφέ. Σε σύγκριση με εκείνη της ομάδας BC, η μέση οπτική πυκνότητα του γονιδίου FasL στην ομάδα MC αυξήθηκε σημαντικά (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density of the FasL gene in the WCD-HD, WCD-MD, CDHD, and CD-MD groups increased significantly (P < 0.01) (Figure 5(e)).

Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα CD και WCD μπορούσανπροκαλούν απόπτωση σε φλεγμονώδη κύτταρακαι να μειώσουν τη βλάβη των επινεφριδίων προάγοντας την έκφραση της πρωτεΐνης FasL και τη σύνδεση με την πρωτεΐνη Fas, ενεργοποιώντας την πρωτεΐνη κασπάσης-3 και πυροδοτώντας έναν καταρράκτη κασπάσης. Το αποτέλεσμα της ομάδας WCD-HD ήταν το καλύτερο.

3.3. Προσδιορισμός Ανοσολογικής Λειτουργίας

3.3.1. Δείκτης Ανοσοποιητικού Οργάνου

Σε σύγκριση με εκείνους της ομάδας BC, ο συντελεστής θύμου αδένα και ο δείκτης σπλήνας της ομάδας MC μειώθηκαν σημαντικά (P< 0.01). Compared to the MC group, the WCD-MD group had the greatest difference (P < 0.05). The thymus coefficient was almost back to the normal level. For the spleen index, the WCDMD, WCD-LD, and CD-MD groups showed significant differences compared with that of the MC group (P < 0.01) (see Figure 6). Therefore, WCD and CD treatment could protect the immune organs, and the effects of WCD were better. 

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA ΓΙΑ ΒΕΛΤΙΩΣΗ ΤΗΣ ΣΕΞΟΥΑΛΙΚΗΣ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑΣ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

3.3.2. Ανίχνευση υποομάδων Τ λεμφοκυττάρων στο Περιφερικό αίμα

Το ποσοστό των κυττάρων CD4+ στο άνω αριστερό τεταρτημόριο και των κυττάρων CD8+ στο δεξί κάτω τεταρτημόριο στο BC και κάθε ομάδα φαρμάκου ήταν υψηλότερο από αυτό στην ομάδα MC. Σε σύγκριση με αυτήν της ομάδας BC, η αναλογία CD4+ThCD8+ μειώθηκε σημαντικά στην ομάδα MC (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the ratio of CD4+ThCD8+ increased significantly in the PC group, the WCD group, and the CD-HD group (P < 0.01) (Figure 7).

3.3.3. Προσδιορισμός του επιπέδου IL-10, IL-6, IL-2, TNF-Α και IFN-C στον ορό

Το Σχήμα 8 δείχνει ότι σε σύγκριση με αυτό της ομάδας BC, το επίπεδο των IL-6, TNF- και IFN-c αυξήθηκε σημαντικά (P< 0.01). The level of IL-10 and IL-2 decreased in the MC group. Compared to that of the MC group, the level of IL-6, TNF-α, and IFN-c decreased and IL-10 and IL-2 increased in serum in each of the drug groups. The effect of WCD was better than the effect of CD, especially in the WCD-MD group, in which the effect was close to that of the PC group.

3.3.4. Αποτελέσματα του πειράματος παρατήρησης με μικροσκόπιο ιστού Lymus

Το Σχήμα 9 δείχνει ότι στην ομάδα BC, υπήρχε μεγάλος αριθμός λεμφοκυττάρων. Τα λεμφοκύτταρα και τα δικτυοερυθρά ήταν χαλαρά διατεταγμένα στο κέντρο με διάσπαρτα στρογγυλά ή οβάλ θυμοκύτταρα. Δεν υπήρξε νέκρωση, καμία φλεγμονώδης κυτταρική διήθηση και μη φυσιολογικές αλλαγές.

Η ομάδα MC έδειξε μεγάλη ποσότητα λεμφοειδούς νέκρωσης ιστού, με διαταραγμένη διάταξη λεμφοκυττάρων και δικτυοερυθροκυττάρων στο κέντρο. Τα στρογγυλά ή οβάλ θυμοκύτταρα εξαφανίστηκαν, ο μαζικός εκφυλισμός ή η νέκρωση των κυττάρων ήταν εμφανής και υπήρχε φλεγμονώδης κυτταρική διήθηση με μη φυσιολογικές παθολογικές αλλαγές.

Στις ομάδες CD, τα μορφολογικά χαρακτηριστικά των λεμφοκυττάρων είχαν επανέλθει στο φυσιολογικό και η διάταξη των κεντρικών λεμφοκυττάρων και των δικτυοερυθροκυττάρων ήταν σχεδόν φυσιολογική. Τα στρογγυλά ή οβάλ θυμοκύτταρα είχαν ανακάμψει, αλλά παρέμεινε ένας μικρός αριθμός εκφυλιστικών ή νεκρωτικών λεμφοκυττάρων και διεισδυτικών φλεγμονωδών κυττάρων.

Στις ομάδες WCD και στην ομάδα PC, τα μορφολογικά χαρακτηριστικά των λεμφοκυττάρων επιδιορθώθηκαν καλύτερα. Τα λεμφοκύτταρα και τα δικτυοερυθρά στο κέντρο ήταν καλά ευθυγραμμισμένα, τα στρογγυλά ή οβάλ θυμοκύτταρα ήταν σχεδόν φυσιολογικά, αλλά παρέμενε ένας μικρός αριθμός διεισδυτικών και εκφυλιστικών λεμφοκυττάρων.

3.4. Έκφραση γονιδίου πρωτεΐνης CaM

Η τιμή RQ (CaM mRNA - mRNA ακτίνης) θεωρήθηκε για την εξέταση της έκφρασης του CaM mRNA. Το RQ της ομάδας BC ήταν 1. Η έκφραση του CaM mRNA στον υποθάλαμο στην ομάδα MC αυξήθηκε σημαντικά (Ρ< 0.01), while the value decreased in the WCD-HD, WCD-MD, WCDLD, and CD-HD groups (P < 0.05) (Figure 10). The expression of CaM mRNA in the hypophysis in the MC group was lower than that in the BC group (P < 0.01). The expression in the WCD-HD, WCD-MD, WCD-LD, CD-HD, and CD-LD groups increased (P < 0.05), and the effect in the WCD groups was better than the effect in the CD groups.

4. Συζήτηση

Η Κινεζική Φαρμακοποιία [2] καταγράφει ότι τα CD και WCD μπορούν να χρησιμοποιηθούν στην κλινική ως οι κύριοι τύποι τεμαχίων αφέψημα. Αφού αχνιστούν με κρασί από ρύζι, τοαντιγηραντικές και τονωτικές επιδράσεις των νεφρών-yangενισχύθηκαν. Μέσω του UPLC-QqQ-MS, εντοπίσαμε τις ποσοτικές αλλαγές στη βάση του χημικού υλικού κατά τη διαδικασία του ατμού του κρασιού ρυζιού. Οι ιριδοειδείς γλυκοσίδες ήταν ασταθείς και η περιεκτικότητα σε αυτές τις γλυκοσίδες μειώθηκε, ακόμη και να μην ανιχνευθεί. Η περιεκτικότητα σε γλυκοσίδες φαινυλαιθανόλης άλλαξε επίσης, γεγονός που θα μπορούσε να προκαλέσει αλλαγές στη φαρμακοδυναμική και την κλινική επίδραση.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA ΓΙΑ ΒΕΛΤΙΩΣΗ ΤΗΣ ΣΕΞΟΥΑΛΙΚΗΣ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑΣ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Το κλασικό μοντέλο ανεπάρκειας νεφρού-yang αναπαράχθηκε με υποδόρια ένεση κορτικοστερόνης [19]. Η υπερβολική δόση κορτικοστερόνης θα μπορούσε να αναστείλει το μυστικό της CRH στον υποθάλαμο. Εν τω μεταξύ, το μυστικό της ACTH αναστέλλεται επίσης. Το επίπεδο της ορμόνης του φλοιού των επινεφριδίων μειώθηκε, και έτσι, η λειτουργία του άξονα HPA μειώθηκε. Η υπολειτουργία του άξονα HPA είναι ένα κοινό χαρακτηριστικό της ανεπάρκειας νεφρού-yang [20]. Τότε οι αρουραίοι εμφανίζουν φαινόμενα «εξάντλησης» και τα συμπτώματα συμφωνούν με αυτά της ανεπάρκειας νεφρού-γιανγκ στην κλινική.

Στην ομάδα MC, τα επίπεδα CRH, ACTH, T και CORT στον ορό αρουραίου μειώθηκαν σημαντικά (P< 0.01). After being treated by CD and WCD, the content of CRH, ACTH, T, CORT, and cortisol all increased to some degree, and the effect of WCD-MD was the best, almost equal to that in the PC group. These results indicated that the relative hormone balance in the HPA axis had been destroyed in the MC group, CD and WCD could improve the functional recovery of abnormal adrenal axis hormone levels, but the effect of WCD was better.

Η ρύθμιση της αναλογίας των μελών της οικογένειας Bcl-2 είναι ένας από τους βασικούς μηχανισμούς με τους οποίους το FasThFasL μεσολαβεί στην οδό του υποδοχέα θανάτου και η οικογένεια Bcl-2 ρυθμίζει τη μιτοχονδριακή οδό [21]. Ο παράγοντας Bcl-2 που αναστέλλει την απόπτωση και οι παράγοντες που προκαλούν απόπτωση, όπως το Bax, ανήκουν όλοι στην οικογένεια Bcl-2 [22]. Η κυτταρική απόπτωση μπορεί να προσδιοριστεί από τη σχετική αναλογία παραγόντων αναστολής της απόπτωσης και παραγόντων που προκαλούν απόπτωση [23]. Τα μιτοχόνδρια έχουν τη λειτουργία κεντρικών σημείων ελέγχου για πολλές μορφές απόπτωσης [24]. Η παρούσα μελέτη έδειξε ότι τα CD-MD και WCDs μπορούσαν να συναγάγουν την έκφραση του Bax και να αυξήσουν το Bcl-2 σεβελτίωση της ανεπάρκειας νεφρού-yang. Το Fas είναι ο κύριος υποδοχέας θανάτου που προκαλεί απόπτωση μέσω απολίνωσης με τον συνδέτη Fas (FasL) [25]. Η έκφραση των Fas και FasL στην ομάδα MC αυξήθηκε, ενώ αυτή η έκφραση αυξήθηκε σημαντικά στην ομάδα WCD-MD (P< 0.01) compared with the MC group. Both FasThFasL and BaxThBcl-2 systems transduce apoptotic signals to the caspase family [26]. Caspase-3 is one of the pivotal proteinases that initiate cell apoptosis. The activation of caspase-3 indicates that apoptosis enters an irreversible stage [27]. The expression of caspase-3 in the MC group increased and increased significantly in the WCD-HD and WCD-MD groups (P < 0.05).

Η ανεπάρκεια της ανοσοποιητικής λειτουργίας είναι μια από τις σημαντικές εκδηλώσεις της ανεπάρκειας νεφρού-yang [28]. Σε αυτή τη μελέτη, βρήκαμε ότι ο δείκτης της σπλήνας και του θύμου αδένα της ομάδας WCD-MD ανέκαμψε σημαντικά (P< 0.01, P < 0.05). The immune response of the immune system is regulated mainly by the Th subgroups [29]. IL-2 is the growth factor for T cells, secreted by T cells and macrophages, participates in inflammatory regulation, regulates immunity, and increases infection resistance [30]. The level of IL-2 in the MC group decreased (P < 0.01), and after treatment with CD and WCD, the level of IL-2 recovered. IL-6 and TNF-α are proinflammatory cytokines. Increased levels of IL-6 and TNF-α cytokines cause cytokine imbalances and exacerbate inflammation. The levels of IL-6 and TNF-α increased in the MC group, while after treatment, the levels of IL-6 and TNF-α decreased. T cells are divided into CD4 cells and CD8 cells, and the CD4+ThCD8+ ratio can be used as an important index of immune regulation [31]. CD4+ThCD8+ in the MC group decreased (P < 0.01), while in the WCD and CDHD groups increased (P < 0.01).

Ο άξονας HPA είναι το πιο σημαντικό ρυθμιστικό σύστημα επειδή ρυθμίζει την έκκριση γλυκοκορτικοειδών και το ενδοκρινικό σύστημα για τη διατήρηση της εκκριτικής λειτουργίας του φλοιού των επινεφριδίων [32]. Η υπερέκφραση του CaM mRNA στον ιστό του υποθαλάμου σχετιζόταν με ανεπάρκεια νεφρού yang. Τα CD και WCD θα μπορούσαν να μπλοκάρουν τα κανάλια ασβεστίου, να αναστείλουν την έκφραση CaM mRNA στον υποθάλαμο και να μειώσουν την εισροή ασβεστίου, μειώνοντας έτσι τη δραστηριότητα του συμπλέγματος Ca2+·CaM.

Ο σχηματισμός ανεπάρκειας νεφρού-yang είναι μια διαδικασία ανάπτυξης χρόνιας νόσου. Ο νεφρός δεν είναι πλέον μια καθαρά ανατομική έννοια και είναι ένας γενικός όρος για τα νευροενδοκρινικά-ανοσοποιητικά και το ουρογεννητικό σύστημα. Το δίκτυο νευροενδοκρινικής ανοσίας (NEI) είναι ένα σημαντικό ολοκληρωμένο ρυθμιστικό σύστημα [33]. Τα CD και WCD μπορούν να ρυθμίσουν τη λειτουργία του άξονα HPAT και να βελτιώσουν την αποκατάσταση της ανεπάρκειας νεφρού-yang. Αυτό το αποτέλεσμα παρέχει την πειραματική βάση για την κλινική πρόληψη και θεραπεία της ανεπάρκειας των νεφρών-yang.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA ΓΙΑ ΒΕΛΤΙΩΣΗ ΤΗΣ ΣΕΞΟΥΑΛΙΚΗΣ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑΣ PHGS75% ECH 30% ACT 12%