Μελέτη σχετικά με την επίδραση της ανοσίας σε ποντίκια

Για να μάθετε περισσότερες πληροφορίες επικοινωνήστε μαζί μαςdavid.wan@wecistanche.com

Δύο από τους τριάντα άνδρεςDBA/2NCrl(D2N)ποντίκια που χρησιμοποιούνται ως στέλεχος ελέγχου στην ανάλυση δεδομένων υποβάθρουDBA/2N-MDXποντίκια, που παρουσιάζονται με μη φυσιολογικά ευρήματα που προτείνονται για λοίμωξη. Περίπτωση 1: Ένα αρσενικό ποντίκι D2N ηλικίας 4 εβδομάδων έδειξε βλάβη λευκής πλάκας στον αριστερό νεφρό (χωρίς κλινικά συμπτώματα) και πραγματοποιήθηκε παθολογική εξέταση του νεφρού. Διήθηση φλεγμονωδών κυττάρων, κυρίως ουδετερόφιλα, παρατηρήθηκαν στα σωληνάρια και στο διάμεσο του αριστερού νεφρού και ανιχνεύθηκε Staphylococcus aureus (S.aureus) από το αριστερό νεφρικό τμήμα. Ως εκ τούτου, αυτή η βλάβη στον αριστερό νεφρό διαγνώστηκε ως πυώδηςσωληναριοδιαμεσολαβητικήνεφρίτιδα που προκαλείται από λοίμωξη από S. aureus. Περίπτωση 2: Το αριστερό torticollis με απώλεια βάρους ανιχνεύθηκε σε ένα αρσενικό ποντίκι D2N ηλικίας 9 εβδομάδων. Η ιστολογική αξιολόγηση αποκάλυψε εξιδρωματική φλεγμονή γύρω από το στόμιο του φάρυγγα των ευσταχιακών σωλήνων και πυώδη φλεγμονή τόσο των μεσαίων αυτιών όσο και του αριστερού εσωτερικού αυτιού με σχηματισμό αποστήματος και συστάδες ως θετικές κατά Gram μικροκολωνίες. Ο S. aureus εντοπίστηκε από καλλιέργειες επιχρίσματος και των δύο εξωτερικών καναλιών του αυτιού. Ως αποτέλεσμα, αυτή η περίπτωση torticollis προκλήθηκε από S. aureus-πυώδη μέση ωτίτιδα και το διαδίκτυο. Το S. aureus είναι γνωστό ως ένα ευκαιριακό παθογόνο με τη δυνατότητα να προκαλεί συχνά πυώδεις ασθένειες σε ανοσοεπαρκείς πειραματόζωα. Ωστόσο, εξ όσων γνωρίζουμε, αυτή η περίπτωση μόλυνσης από S. aureus που παρουσιάζεται με torticollis σε ποντίκι D2N δεν αναφέρεται.

Κάντε κλικ εδώ για να μάθετε περισσότερα για το Cistanche

Ένα ανθεκτικό στη μεθικιλλίνη Απομόνωμα Staphylococcus aureus (MRSA) εμφανίστηκε σε ένα εργαστηριακό ποντίκι στο Κέντρο Επιστήμης Εργαστηριακών Ζώων του Ιατρικού Κολλεγίου Εθνικής Άμυνας το 2018 καιMRSAτα απομονωθέντα στελέχη ανασύρθηκαν από ποντίκια και στα άλλα δωμάτια ποντικών στη συνέχεια. Σε αυτά τα απομονωθέντα στελέχη MRSA, πραγματοποιήθηκαν μοριακά δακτυλογραφικά πρότυπα όπως η πληκτρολόγηση αλληλουχίας πολλαπλών τόπων (MLST), η τυποποίηση της πρωτεΐνης Staphylococcus aureus A(spa), η τυποποίηση SCCmec και ο τύπος πηκτάσης για τον προσδιορισμό των γονότυπων τους. Όλα τα απομονωθέντα στελέχη αποκάλυψαν πανομοιότυπους γονότυπους (ST1, spa t1784, SCCmec τύπου IV και πηκτάση τύπου VII), υποδηλώνοντας ότι τα απομονωθέντα στελέχη ήταν πανομοιότυποι κλώνοι. Πριν από την εμφάνιση του MRSA το 2018, δεν είχαν απομονωθεί απομονωθέντα στελέχη με τέτοιους γονότυπους σε αυτήν την εγκατάσταση, υποτίθεται ότι ο κλώνος MRSA εισήχθη στην εγκατάσταση μέσω ανθρώπινων ή πειραματόζωων. Το STl1 είναι το πρώτο MRSA που αποκτήθηκε από την κοινότητα και ανακτήθηκε από παιδιά στις Ηνωμένες Πολιτείες, ωστόσο, το ST1 ανακτάται από ανθρώπους και ζώα παγκοσμίως επί του παρόντος. Στην Ιαπωνία, τα στελέχη ST1 και SCCmec τύπου IV έχουν απομονωθεί από ανθρώπους και γάτες, υποδηλώνοντας ότι το ST1 μεταδίδεται μεταξύ ανθρώπων και ζώων. Ένα στέλεχος MRSA με αυτούς τους γονότυπους αλλά και με spa tl784 έχει ανακτηθεί από τον άνθρωπο. Επί του παρόντος, η διάκριση μεταξύ του MRSA που αποκτήθηκε από το νοσοκομείο, του MRSA που αποκτήθηκε από την κοινότητα και του MRSA που σχετίζεται με το ζωικό κεφάλαιο είναι πιο διφορούμενη. Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι τα ποντίκια μπορεί να λειτουργούν ως δεξαμενές του MRSA.

Στην πρόσφατη ανοσοθεραπεία του καρκίνου, η δραστηριότητα μορίων όπως το PD-1 αναστέλλεται για να αυξήσει τη δραστηριότητα των ανοσοκυττάρων κατά του καρκίνου. Παρά το υψηλό θεραπευτικό αποτέλεσμα, υπάρχουν περιπτώσεις στις οποίες αναπτύσσεται αυτοάνοση ασθένεια στην ανοσοθεραπεία του καρκίνου. Εδώ, δημιουργήσαμε ένα σύστημα που μπορεί να υποβαθμίσει το PD-1 με συγκεκριμένο χρόνο τρόπο σε καλλιεργημένα κύτταρα και ποντίκια χρησιμοποιώντας τοΣύστημα απογύμνωσης SMASh. Η πρωτεΐνη σύντηξης PD-1-SMASh στα κύτταρα Jurkat και στα σπληνοκύτταρα CD3+ μειώθηκε κατά 1 ημέρα μετά τη χορήγηση του Asunaprevir(ASV) ή του Grazoprevir(GRV) που είναι αναστολείς πρωτεάσης NS3/4A. Η ανάπτυξη των κυττάρων MC-38 αδενοκαρκινώματος που εμβολιάστηκαν σε ποντίκια PD-1-cherry-SMASh knockin(KI) με ASV κατεστάλη σε σύγκριση με τα ποντίκια άγριου τύπου (WT) και τα ποντίκια KI που δεν έλαβαν θεραπεία. Επιπλέον, τα ποντίκια WT που μεταμοσχεύθηκαν με κύτταρα μυελού των οστών KI μετά από ακτινοβόληση με θανατηφόρα ακτινοβολία θα μπορούσαν να απορρίψουν τα κύτταρα MC-38 με GRV. Τα ποντίκια KI εμφανίστηκαν υγιή και δεν έδειξαν σημάδια αυτοάνοσης νόσου. Προτείνουμε ότι η χρήση του συστήματος απογόνων σε ζωντανούς οργανισμούς αναμένεται να προωθήσει όχι μόνο διάφορες βιολογικές μελέτες αλλά και τη θεραπεία ασθενειών.

Η προγεστερόνη (P4) εκκρίνεται από τον πλακούντα για να διατηρήσει την κύηση και λειτουργεί ως ανοσορυθμιστής. Το γλυκοκορτικοειδές είναι ένα άλλοανοσοποιητικό-ρυθμιστικόστεροειδές για τη ρύθμιση της φλεγμονής. Σε αυτή τη μελέτη, ανθρώπινα μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMCs) μεταμοσχεύθηκαν σε ποντίκια NOG για να προκαλέσουν μεταμόσχευση έναντι της νόσου του ξενιστή (GVHD) και χρησιμοποιήθηκαν για τη σύγκριση μεταξύ των επιδράσεων P4 και κορτιζόλης (COR). Τα PBMCs διεγείρονται παρουσία διαφόρων συγκεντρώσεων P4 ή COR και τα κύτταρα αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής (FCM). Υποπολλαπλάσια τουPBMCsμεταμοσχεύθηκαν σε ποντίκια NOG και το P4 ή cor εγχύθηκε στα ποντίκια δύο φορές την εβδομάδα. Μετά από 28 ημέρες, πραγματοποιήθηκαν FCM και ανοσοϊστοχημικές αναλύσεις. Ως αποτέλεσμα, μια υψηλή συγκέντρωση P4 ανέστειλε την ενεργοποίηση των Τ κυττάρων in vitro, ενώ η αναστολή δεν συνεχίστηκε μετά την αφαίρεση. Η καταστολή της ενεργοποίησης των Τ κυττάρων ήταν μικρότερη στη θεραπεία με COR σε σύγκριση με την P4 και η εξάντληση των Τ κυττάρων ήταν πιο εμφανής. Τα ποντίκια με έγχυση P4 μετέφεραν περισσότερα σπληνοκύτταρα, ειδικά CD8 Τ κύτταρα, σε σύγκριση με ποντίκια ελέγχου. Ωστόσο, η χαμηλότερη έκφραση του CD25, λιγότερη διήθηση των ανθρώπινων Τ κυττάρων στον πνεύμονα και το ήπαρ και λιγότερεςGVHDπαρατηρήθηκαν συμπτώματα. Από την άλλη, ο αριθμός των σπληνοκυττάρων, ειδικά των Τ κυττάρων, σε ποντίκια με ένεση COR ήταν σημαντικά χαμηλότερος και τα ενεργοποιημένα/εξαντλημένα κύτταρα ήταν άφθονα. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι το P4 προτιμά να διατηρεί τα Τ κύτταρα σε σύγκριση με το COR in vitro.

Οι λογαριασμοί Helicobacter liverus και Helicobacter είναι γνωστοί ως παθογόνα που προκαλούν ηπατίτιδα και κολίτιδα σε ποντίκια. Η ύπαρξη αρκετών θετικών κρουσμάτων εξακολουθεί να επιβεβαιώνεται ετησίως σε εγκαταστάσεις πειραματόζωων στην Ιαπωνία. Είναι καλύτερο να χρησιμοποιείτε το περιεχόμενο cecal ή τα φρέσκα κόπρανα ως δείγμα για τον έλεγχο PCR του H. liverus και του H. bilis.

Πρόσφατα, τα αντιδραστήρια μεταφοράς και αποθήκευσης DNA και RNA έχουν κατασκευαστεί από διάφορους κατασκευαστές. Αναμένεται ότι αυτά τα αντιδραστήρια θα είναι τα προβλήματα στη μεταφορά των δειγμάτων που χρησιμοποιούνται για τις δοκιμές PCR θα καθαριστούν. Ως εκ τούτου, σε αυτή τη μελέτη, η χρησιμότητα του αντιδραστηρίου αποθήκευσης νουκλεϊκού οξέος εξετάστηκε με την εκτέλεση μιας δοκιμής PCR του Helicobacter χρησιμοποιώντας το περιεχόμενο του τυφλού που διατηρείται χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο συντήρησης νουκλεϊκού οξέος. Ως αποτέλεσμα, τα δείγματα που αποθηκεύτηκαν για 7 ημέρες χρησιμοποιώντας το διάλυμα συντήρησης μπορούσαν να ανιχνευθούν helicobacter στο ίδιο επίπεδο με το φρέσκο δείγμα. Από τα παραπάνω, προτάθηκε ότι στη δοκιμή PCR του Helicobacter, Ακόμη και αν η μεταφορά διαρκεί ημέρες, είναι δυνατή η διεξαγωγή της δοκιμής με υψηλή ακρίβεια με τη μεταφορά του δείγματος που βυθίζεται στο αντιδραστήριο αποθήκευσης νουκλεϊκού οξέος με πτήση στο ψυγείο.

Έχουμε αναπτύξει προηγουμένως μεταλλαγμένα στελέχη E.coli με σημαντικά ενισχυμένη προσκόλληση σε in vitro στερεές επιφάνειες τροποποιώντας τα γονίδια που ανταποκρίνονται στην πείνα με θρεπτικά συστατικά. Για να αξιολογήσουμε την αλληλεπίδραση μεταξύ αυτών των στελεχών E. coli (AEEs) που ενισχύονται με προσκόλληση (AEEs) και του in vivo εντερικού περιβάλλοντος, αξιολογήσαμε την ικανότητα αποικισμού τους στον εντερικό σωλήνα εμβολιάζοντας ποντίκια.

Πριν από το πείραμα αξιολόγησης, μεταμορφώσαμε τα AEEes με ένα πλασμίδιο που εκφράζει τη λουσιφεράση για απεικόνιση in vivo. όπως εμβολιάστηκαν από το στόμα σε νηστίσιμα ποντίκια και συλλέχθηκαν περιττώματα κάθε λίγες μέρες. Ο αριθμός των ζωντανώνΑΕΕΕεκτιμήθηκε μετρώντας το CFU από τα συλλεγόμενα κόπρανα.

Ως αποτέλεσμα, σε σύγκριση με το στέλεχος ελέγχου, τα ΑΕΕ ήταν πιο άφθονα στα κόπρανα για περισσότερο από μία εβδομάδα, γεγονός που υποδηλώνει ενισχυμένο αποικισμό στην εντερική οδό. Παρατηρώντας τον εντοπισμό της φωταύγειας της λουσιφεράσης με μη επεμβατική απεικόνιση χρησιμοποιώντας το IVIS, διαπιστώθηκε επίσης ότι τα AEEes έτειναν να αποικίζουν στο τυφλό και το παχύ έντερο.

[Στόχος] Επί του παρόντος, [Παστεριέλλα]πνευμονοτροπικήέχει επαναταξινομηθεί ως νέο γένος Rodentibacter. Από αυτούς, ο R.pneumotropicus και ο R. Healy είναι οι κύριοι στόχοι για μικροβιολογική παρακολούθηση σε τρωκτικά. Έχουμε απομονώσει μια σειρά από Rodentibacter sp. που δεν θα μπορούσαν να αναγνωριστούν ως είδη από τρωκτικά. Σε αυτή τη μελέτη, διερευνούμε τα χαρακτηριστικά του απομονωμένου rodentibacter sp., εστιάζοντας στη βακτηριακή μολυσματικότητα. [Μέθοδοι] Για τη μελέτη χρησιμοποιήθηκε το τρωκτικοβακτηρίδιο sp. που απομονώθηκε από την τραχεία αρουραίων. Το προσχέδιο αλληλούχισης του γονιδιώματος πραγματοποιήθηκε στο sequencer επόμενης γενιάς και στη συνέχεια προβλέφθηκαν τα γονίδια που σχετίζονται με τη μολυσματικότητα. Σε πειράματα σε ζώα, τα ποντίκια Rag2 χρησιμοποιήθηκαν για τη μόλυνση από το Rodentibacter sp.| Αποτελέσματα| Με το προσχέδιο της αλληλούχισης του γονιδιώματος, ένα μοναδικό γονίδιο που κωδικοποιεί την τοξίνη RTX είχε εντοπιστεί στο Rodentibacter sp. Η πρωτεϊνική αλληλουχία της τοξίνης RTX ήταν πιο ομόλογη με εκείνες που παράγονται από τα Εντεροβακτηριοειδή παρά από τα Παστεριωδελλοειδή. Σε ένα πείραμα σε ζώα, σχεδόν όλα τα μολυσμένα ποντίκια Rag 2 επιβεβαιώθηκαν θανατηφόρα πνευμονία ή σηψαιμία. Αν και το απομονωθέν στέλεχος δεν μπορούσε να αναγνωριστεί ως R. pneumotropicus και R. heylii, αυτό το στενά συγγενικό είδος μπορεί να είναι θανατηφόρο για τα ανοσοκατεσταλμένα ζώα παρουσία λοιμογόνων παραγόντων όπως η τοξίνη RTX.

Στο Πρόγραμμα Ανάπτυξης Βασικής Τεχνολογίας του NBRP (2018-2019), αλληλουχήσαμε τα γονιδιώματα των ευκαιριακών παθογόνων βακτηρίων του ποντικού και εκτελέσαμεRNAseqπρωτόζωων σε ποντίκια, προκειμένου να αναπτυχθούν δοκιμασίες PCR για αυτούς τους οργανισμούς. Χρησιμοποιήσαμε αυτά τα αποτελέσματα για να αναλύσουμε το Rodentibacter spp. και τα πρωτόζωα σε αρουραίους σε συνεργασία με το Πανεπιστήμιο του Κιότο (NBRP Rat). Εδώ, αναφέρουμε τα αποτελέσματα των δοκιμών σε δείγματα αρουραίων. [Μέθοδοι] Οι αλληλουχίες γονιδίων 16S rRNA περίπου 1,5 kbp διαβάστηκαν με PCR για έξι απομονώματα αρουραίων του Rodentibacter spp., και η πρόχειρη αλληλουχία γονιδιώματος ενός απομονωθέντος(#25) προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το Illumina HiSeq 2500. Η PCR της περιεκτικότητας του δακτυλίου των αρουραίων πραγματοποιήθηκε με βάση τα αποτελέσματα RNAseq των πρωτόζωων ποντικών. [Αποτελέσματα] Οι αλληλουχίες γονιδίων 16S rRNA όλων των απομονωθέντων στελεχών ήταν πανομοιότυπες και αναγνωρίστηκαν ως Rodentibacter Ratti με ανάλυση OTU. Η επανασύνδεση του απομονωμένου #25 αποκάλυψε επίσης ότι αυτό το στέλεχος ήταν το R. Ratti.PCR για πρωτόζωα ποντικού έδωσε θετικά αποτελέσματα για την αμοιβάδα αρουραίων. Δεν ελήφθησαν θετικά αποτελέσματα για το TrichomonasPCRσε δείγματα αρουραίων. [Συζήτηση] Τα απομονωμένα στελέχη αρουραίων του Rodentibacter spp. που εξετάστηκαν σε αυτή την έκθεση ήταν όλα R. Ratti. Είναι σημαντικό να γνωρίζετε την παρουσία του R. Ratti κατά την εκτέλεση δοκιμών τρωκτικοδραστικών σε αρουραίους. Ορισμένα δείγματα κοπράνων αρουραίων έδειξαν θετικά για PCR αμοιβάδας ποντικού. Αυτό είναι το πρώτο βήμα στην ανάπτυξη της PCR για την ανίχνευση πρωτόζωων σε αρουραίους.

Οι οργανισμοί τρωκτικοβακτηριδίων «Pasteurella pneumotropica» είναι ευκαιριακό παθογόνο βακτήριο που προκαλεί αναπνευστικές παθήσεις σε ποντίκια και αρουραίους. Παλαιότερα ταξινομήθηκαν στο γένος Pasteurella και αρκετά στελέχη προτάθηκαν διστακτικά ως βιοτύποι. Το 2017, αναδιοργανώθηκαν συλλογικά στο γένος Rodentibacter. Τα στελέχη MaM και MaR απομονώθηκαν από ποντίκια και αρουραίους, αντίστοιχα, γύρω στη δεκαετία του 1980. Σε αυτή τη μελέτη, προσδιορίσαμε τις αλληλουχίες του γονιδιώματος και των δύο στελεχών και τις συγκρίναμε με εκείνες του γένους Rodentibacter, υλικά και ΜεθόδουςIΤα στελέχη MaM και MaR ελήφθησαν από το Εθνικό Ινστιτούτο Λοιμωδών Νοσημάτων (NIAID)

(Μανάμπου Σάιτο --> Γιασούσι Άμι -->Φούμιο Ικ). Και τα δύο στελέχη αναπτύχθηκαν με υγρή καλλιέργεια για την εξαγωγή γονιδιωματικού DNA και οι γονιδιωματικές αλληλουχίες προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας τα Illumina Hiseq 2500 και PacBio Sequel. [Αποτελέσματα] Με βάση την αλληλουχία γονιδίων 16S rRNA, το στέλεχος MaM αναγνωρίστηκε ως R.pneumotropicus και το στέλεχος MaR ως R. Ratti. Επιπλέον, προσδιορίστηκε η πλήρης αλληλουχία του γονιδιώματος (2.213.961 bp)του στελέχους MaR (ο αριθμός των οπερόνων rRNA ήταν 6 και ο αριθμός των γονιδίων εκτιμήθηκε σε 2.063). [Συζήτησηl Τα στελέχη MaM και MaR έχουν χρησιμοποιηθεί ως πρότυπα για τον προσδιορισμό της «Pasteurella pneumotropica» στην Ιαπωνία. Από αυτή την ανάλυση, προσδιορίσαμε τα είδη και των δύο στελεχών ως εξής: το στέλεχος MaM είναι R.pneumotropicus και το στέλεχος MaR είναι R.ratti. Είναι αξιοσημείωτο ότι αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι ο R. Ratti μπορεί να απομονωθεί από αρουραίους στην Ιαπωνία.

Το Clostridium pili for me(CP) είναι ευαίσθητο σε μολυσματικά σε διάφορα πειραματόζωα, συμπεριλαμβανομένων αρουραίων και ποντικών, και παρουσιάζει ασυμπτωματική λοίμωξη εκτός από τα ανοσοκατεσταλμένα ζώα. Θεωρείται σημαντική διαφορική διάγνωση για τη διατήρηση των εγκαταστάσεων σε ζώα και είναι γνωστό ότι επηρεάζει πειραματικά δεδομένα από μελέτες σε ζώα. Η σεροδιάγνωση (ELISA, IFA) και η PCR χρησιμοποιούνται συνήθως για τη διάγνωση της CP επειδή η απομόνωση στο τεχνητό θρεπτικό μέσο είναι δύσκολη για την CP. Ωστόσο, η ύπαρξη του μη ειδικού αντισώματος που υποδεικνύει τη διασταυρούμενη αντιδραστικότητα με την CP χρησιμοποιώντας τη σεροδιάγνωση αναφέρεται και αναγνωρίζεται συχνά σε παρόμοια περίπτωση στις εγκαταστάσεις μας. Επιπλέον, η μέθοδος PCR έχει όρια ως αξιόπιστη διαγνωστική μέθοδος με περιοδική παρακολούθηση, επειδή η CP είναι μη ανιχνεύσιμη στα κόπρανα μετά τον αυξανόμενο τίτλο αντισωμάτων. Πρόσφατα, εξετάσαμε μια διαφορετική προσέγγιση, διατηρώντας τα περιττώματα από τα ζώα κάθε μήνα. Υιοθετήσαμε το τεστ PCR για CP που δεν επηρεάζεται από την επίδραση των αντισωμάτων ως πιο αξιόπιστα διαγνωστικά χρησιμοποιώντας τα κόπρανα που διατηρούνται συνεχώς. Σε αυτήν την έκθεση, παρουσιάζουμε μια πρόσφατη περίπτωση. (μη ειδικό αντίσωμα) για να οδηγήσει στην επιθεώρηση της ροής που αναπτύσσεται στην εταιρεία μας.