Μελέτη σχετικά με τις επιδράσεις βελτίωσης του εκχυλίσματος φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδών από το Rouchongrong (Cistanche Deserticola) στον μεταβολισμό των λιπιδίων στα συκώτια ApoE - / - Ποντίκια με δίαιτα υψηλής περιεκτικότητας σε λιπαρά με βάση τις ρυθμιστικές εκφράσεις ACOX1 - CPT2

ΠΕΡΙΛΗΨΗ Στόχος:Για να εξερευνήσετε τοεπιδράσεις του εκχυλίσματος φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδώναπόCistanche deserticola(PGCD) στον μεταβολισμό των λιπιδίων στο ήπαρ ποντικών ApoE-/- που προκαλείται από δίαιτα υψηλής περιεκτικότητας σε λιπαρά. Μέθοδοι: 70 αρσενικά ποντίκια ApoE-/- που τρέφονταν με δίαιτα υψηλής περιεκτικότητας σε λιπαρά χωρίστηκαν σε 5 ομάδες, ομάδα μοντέλου (MOD), ομάδα θετικού ελέγχου έλαβε ατορβαστατίνη [20 mg / (kg·d)] + εζετιμίμπη [20 mg / (kg ·δ)](Α + Ε), PGCD ομάδες χαμηλής, μέσης και υψηλής δόσης δόθηκανPGCD[250, 500, 1000 mg / (kg·d)]; άλλα 14 αρσενικά ποντίκια C57BL/ 6J με δίαιτα achow ορίστηκαν ως η κανονική ομάδα ελέγχου (CON). Το 12ο Σαββατοκύριακο, η περιεκτικότητα σε TG και οι δραστηριότητες της ALT και της AST στον ορό και τον ηπατικό ιστό ανιχνεύθηκαν σύμφωνα με τις οδηγίες λειτουργίας. Ο φρέσκος ιστός του ήπατος ομογενοποιήθηκε και τα περιεχόμενα σε συνθάση λιπαρών οξέων (FAS), αφυδρογονάση ακυλο-CoA μακράς αλυσίδας (LCAD) και υπεροξειδάση γλουταθειόνης (GSH - Px),υπεροξειδική δισμουτάση (SOD)Οι δραστηριότητες δοκιμάστηκαν με τη μέθοδο ELISA, εν τω μεταξύ, τα περιεχόμενα της μηλονοδιαλδεΰδης (MDA) και του υπεροξειδίου των λιπιδίων (LPO) ανιχνεύθηκαν με kidmethods. Οι εκφράσεις mRNA της οξειδάσης 1 του ακυλ-συνενζύμου Α (ACOX1) και της παλμιτοϋλοτρανσφεράσης 2 της καρνιτίνης (CPT2) ανιχνεύθηκαν με πειράματα RT-PCR.

ΚΑΝΤΕ ΚΛΙΚ ΕΔΩ ΓΙΑ ΝΑ ΜΑΘΕΤΕ 80%ΓΛΥΚΟΣΙΔΕΣ ΦΑΝΥΛΕΘΑΝΟΕΙΔΗΣΦΥΣΙΚΟ ΒΙΟΛΟΓΙΚΟ ΕΚΧΥΛΙΣΜΑ ΚΙΣΤΑΝΧΗΣ

Υποστήριξη της Wecistanche-Ο μεγαλύτερος εξαγωγέας κιστάνι στην Κίνα:

Διεύθυνση ηλεκτρονικού ταχυδρομείου:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Αγορά για περισσότερες λεπτομέρειες Λεπτομέρειες:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-κατάστημα

Αποτελέσματα:Σε αντίθεση με την ομάδα μοντέλων,τρεις δόσεις PGCD μείωσαν όλα τα επίπεδα της TGστο ήπαρ και στον ορό με δοσοεξαρτώμενο τρόπο και μείωσε τις δραστηριότητες της ALT και της AST στον ορό. Όλες οι τρεις δόσεις PGCD μείωσαν την περιεκτικότητα σε FAS με δοσοεξαρτώμενο τρόπο και αύξησαν σημαντικά την περιεκτικότητα σε LCAD στο ήπαρ.PGCD προωθείταιΟι δραστηριότητες των GSH - Px και SOD και μείωσαν σημαντικά τα περιεχόμενα MDA και LPO στο ήπαρ. Τα πειράματα RT-PCR έδειξαν ότι το PGCD αύξησε τα επίπεδα mRNA των ACOX1 και CPT2 στον ηπατικό ιστό.

Συμπέρασμα:Το PGCD μπορεί να βελτιώσει τον μεταβολισμό των λιπιδίων και την απόκριση του οξειδωτικού στρες και να μειώσει την εναπόθεση λιπιδίων στον ηπατικό ιστό ρυθμίζοντας τις εκφράσεις mRNA του ACOX1 και CPT2.

Λέξεις-κλειδιά:Εκχύλισμα φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων από Cistanche deserticola. ACOX1; CPT2;μεταβολισμός λιπιδίων;οξειδωτικό στρες; ApoE- / - ποντίκια

Μη αλκοολική λιπώδης ηπατική νόσος(NAFLD) είναι μια από τις πιο διαδεδομένες ασθένειες του ήπατος στον κόσμο, με επιπολασμό σχεδόν 30% στο γενικό πληθυσμό. Η λιπώδης ηπατική νόσος στην Κίνα αυξάνεται με ετήσιο ρυθμό 0,594% [1]. Η εμφάνιση και η ανάπτυξη της NAFLD σχετίζονται στενά με την υπερβολική θερμιδική πρόσληψη του οργανισμού. Η δίαιτα υψηλής περιεκτικότητας σε λιπαρά οδηγεί σε υπερβολική συσσώρευση λίπους στο ήπαρ και προκαλεί NAFLD[2] και το αρχικό βήμα στην παθογένειά της είναι η εναπόθεση τριακυλογλυκερόλης (TG) στα ηπατικά κύτταρα[2] 3. Μέχρι σήμερα, δεν υπάρχουν συγκεκριμένα θεραπευτικά φάρμακα που να στοχεύουν την παθογένεση της NAFLD. Η εύρεση ασφαλών, αποτελεσματικών φαρμάκων με σαφείς μηχανισμούς για την πρόληψη και τη θεραπεία της NAFLD έχει γίνει σημαντικό καθήκον για τους ερευνητές. Το Cistanche deserticola YC Ma είναι ένα παρασιτικό φυτό του γένους Cistanche στην οικογένεια Orobanchaceae. Το κύριο συστατικό του, οι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες, έχει τις λειτουργίες ενίσχυσης της ανοσοποιητικής λειτουργίας του σώματος, αντιγήρανσης, αντιακτινοβολίας, αντιοξειδωτικών και ηπατοπροστατευτικών και άλλων επιδράσεων[4-5]. Αυτή η μελέτη σκοπεύει να πραγματοποιήσει μια προκαταρκτική μελέτη σχετικά με τον μηχανισμό τουΦαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες από το Cistanche deserticola(PGCD) στη βελτίωση του μεταβολισμού των λιπιδίων.

1 Πειραματικά υλικά

1.1 Πειραματικά φάρμακα

Οι σαρκώδεις μίσχοι του Cistanche deserticola (περιεκτικότητα σε υγρασία 8,5%) αγοράστηκαν από την Hotan Dichen Pharmaceutical Co., Ltd.; Οι ουσίες αναφοράς φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων (κύρια συστατικά βερμπασκοσίδη και εχινακεσίδη) (καθαρότητα και οι δύο > 98%) αγοράστηκαν από την Manster, Chengdu, Sichuan Biotechnology Co., Ltd. Ατορβαστατίνη: Pfizer Shanghai; Ezetimibe: Merck Pharmaceuticals Co., Ltd.

1.2 Πειραματόζωα

Αρσενικά ποντίκια C57BL/6J ηλικίας 6 έως 8 εβδομάδων και ποντίκια ApoE-/-, σωματικού βάρους (20 ± 2) g, που αγοράστηκαν από την Changzhou Cavins Experimental Animal Co., Ltd., αριθμός άδειας: SCXK (Su) 2016-0010 , 12 h / 12 h κύκλος φωτός, θερμοκρασία (22 ± 1) βαθμός, υγρασία 50% ~ 60%, ελεύθερη πρόσληψη τροφής και νερού. Πριν από το πείραμα, τα ποντίκια τράφηκαν με μια τυπική δίαιτα για 1 εβδομάδα για να προσαρμοστούν. Όλες οι φροντίδες και τα πειράματα σε ζώα ακολουθούν τους κανονισμούς της Επιτροπής Δεοντολογίας Πειραματικών Ζώων του Shandong First Medical University (Αρ. Δεοντολογίας: W202107080303).

1.3 Πειραματικό ρεπράκτορες

Τροφή με υψηλή περιεκτικότητα σε λιπαρά: Harlan Teklad; Κιτ TG, ALT, AST: Beijing Solebao Biotechnology Co., Ltd.; Κιτ FAS, LCAD: Shanghai Langton Biotechnology Co., Ltd.; Κιτ GSH-Px: Shanghai Jining Biotechnology Co., Ltd.; Κιτ SOD, MDA, LPO, BCA: Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd.; Κιτ Trizol: Invitrogen, Carlsbad, CA; Εκκινητές ACOX1 και CPT2: σχεδιασμένοι από την Sangon Bioengineering (Shanghai) Co., Ltd.

1. 4 Experimental Instruments Hei - VAP Expert Rotary Vaporator: Γερμανία

Heidolph; Πολυλειτουργικός αναγνώστης μικροπλακών Varioskan LUX: ThermoFisher; FD8508 στεγνωτήριο κενού: Ilshin, Νότια Κορέα; F6/10 ομογενοποιητής: Shanghai Fluoroco; Υγρός χρωματογράφος υψηλής απόδοσης Agilent1260, φασματοφωτόμετρο UV Cary 3500: Agilent Technologies Ltd.; Όργανο Quant studio5RT - PCR: Thermo Fisher Biochemicals, Inc.

2.3.1 Μάζα σώματος και δείκτης ήπατος

Στο τέλος της 12ης εβδομάδας, τα ποντίκια ήταν νηστικά και ζυγίστηκαν. Τα ποντίκια αναισθητοποιήθηκαν με πεντοβαρβιτάλη νατρίου και θυσιάστηκαν. Τα συκώτια συλλέχθηκαν για τον υπολογισμό του ηπατικού δείκτη.

2.3.2 Ανίχνευση δείκτη ορού

Πάρτε τον ορό και ανιχνεύστε τις δραστηριότητες της ασπαρτικής αμινοτρανσφεράσης του ορού (AST) και της αμινοτρανσφεράσης της αλανίνης (ALT) με τη σειρά σύμφωνα με τη λειτουργία του κιτ. Το BCA καθορίζει την περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη στον ορό και ανιχνεύει την περιεκτικότητα σε TG.

2.3.3 Ανίχνευση παραγόντων που σχετίζονται με το μεταβολισμό των λιπιδίων στον ηπατικό ιστό

Κάτω από συνθήκες 4 μοιρών, ζυγίστε μια κατάλληλη ποσότητα φρέσκου ήπατος και ομογενοποιήστε το σε PBS, φυγοκεντρήστε (ακτίνα φυγοκέντρησης 7,5 cm, 3 000 r/min) το ομογενοποίημα για 1 λεπτό, πάρτε το υπερκείμενο και μετρήστε την περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη του ηπατικό ιστό από BCA. Περιεκτικότητα TG στον ιστό, μέθοδος ELISA για την ανίχνευση της συνθάσης λιπαρών οξέων (FAS) και της περιεκτικότητας αφυδρογονάσης ακυλ-CoA μακράς αλυσίδας (LCAD) στον ιστό του ήπατος.

2.3.4 Ανίχνευση οξειδωτικών παραγόντων που σχετίζονται με τον ηπατικό ιστό

Υπό συνθήκες 4 μοιρών, ζυγίστε μια κατάλληλη ποσότητα φρέσκου ήπατος και ομογενοποιήστε το σε PBS, φυγοκεντρήστε το ομογενοποίημα (ακτίνα φυγόκεντρου 7,5 cm, 3 000 r/min) για 15 λεπτά, πάρτε το υπερκείμενο και μετρήστε την περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη του ηπατικό ιστό με BCA. Ακολουθήστε τα αντιδραστήρια Οι οδηγίες του κουτιού ανιχνεύουν δραστηριότητες υπεροξειδάσης υπεροξειδάσης (SOD) και υπεροξειδάσης γλουταθειόνης (GSH-Px) και ταυτόχρονα ανιχνεύουν τα επίπεδα μηλονοδιαλδεΰδης (MDA) και υπεροξειδίου των λιπιδίων (LPO).

2. 3. 5 Ανίχνευση RT-PCR

Έκφραση mRNA ACOX1/CPT2 σε ηπατικό ιστό: Πάρτε μια κατάλληλη ποσότητα φρέσκου ηπατικού ιστού, χρησιμοποιήστε ένα κιτ Trizol για να εξαγάγετε mRNA ολικού ηπατικού ιστού, χρησιμοποιήστε την αντίστροφη μεταγραφάση MuLV για να συνθέσετε cDNA και χρησιμοποιήστε cDNA ως πρότυπο για την εκτέλεση ποσοτικών φθορισμού σε πραγματικό χρόνο Ανίχνευση PCR (Qpcr). Οι συνθήκες αντίδρασης ήταν: προ-μετουσίωσης στους 95 βαθμούς για 2 λεπτά. μετουσίωση στους 95 βαθμούς για 10 δευτερόλεπτα, ανόπτηση: 60 μοίρες για 30 δευτερόλεπτα, επέκταση σε 72 μοίρες για 35 δευτερόλεπτα, 34 κύκλοι και τέλος επέκταση στους 72 βαθμούς για 5 λεπτά, και ποσοτικοποίηση σε πραγματικό χρόνο με αυτόματο αναλυτή. Έκφραση mRNA ACOX1 και CPT2. Λογισμικό Rotor-gene Q. 1.7 (Qiagen) χρησιμοποιήθηκε για ανάλυση δεδομένων και η μέθοδος 2-△△Ct χρησιμοποιήθηκε για την μέτρηση των σχετικών επιπέδων mRNA και GAPDH. Κάθε ομάδα πειραμάτων διεξήχθη παράλληλα > 3 φορές. Οι αλληλουχίες εκκινητών είναι οι εξής: GAPDH, ανάντη: 5' - GCCACCC AGAAGACTGTG - 3', κατάντη: 5' - ATGTAGGCCATGAGGTCCAC - 3'; ACOX1, ανάντη: 5' -CGCCACCTT CAATCC AGAGT - 3' κατάντη: 5' -TCTGCGATGCCAAATTCCCT - 3'; CPT2, ανάντη: 5'- TCCTCCTACTC AGGACGCAA - 3' κατάντη: TTGGGATCTTCCGCTCACAC.

2.4 Στατιστικές μέθοδοι

SPSS 20.0 χρησιμοποιήθηκε στατιστικό λογισμικό για την ανάλυση δεδομένων. Τα δεδομένα μετρήσεων εκφράστηκαν ως (χ ± s). Η μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης χρησιμοποιήθηκε για σύγκριση μεταξύ των ομάδων. P < 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική διαφορά.