Σημασία διαφορετικών ορίων περιεχομένου για τα συστατικά δείκτη των Cistanche deserticola και C. tubulofloris στην κινεζική φαρμακοποιία με βάση διαφορικά συστατικά ⅱ

Περίληψη

Σκοπός:Για να μελετήσουν τα διαφορικά συστατικά και να συγκρίνουν το περιεχόμενό τους μεταξύ του Cistanche Tubulosa και του C. deserticola και αναλύστε τη σημασία των διαφορετικών ορίων περιεχομένου για τα συστατικά των δεικτών μεταξύ των δύο φυτών στην κινεζική φαρμακοποιία (έκδοση 2020). Μέθοδοι: Τα διαφορικά συστατικά ταυτοποιήθηκαν με φασματομετρία υγρού χρωματογραφίας σε συνδυασμό με πολυπαραγοντική στατιστική ανάλυση και το περιεχόμενο των διαφορικών συστατικών προσδιορίστηκε με υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης. Αποτελέσματα: Οι διαφορικές ενώσεις ήταν η Α, ισοακτεοσίδη, εχινακοσίδη και ακτινοσίδη. Το Echinacoside είχε το υψηλότερο περιεχόμενο και στα δύο φυτά, ακολουθούμενη από την ακτεοσίδη. Η περιεκτικότητα σε εχινακοσίδη, ακτεοσίδη και ισοακτεοσίδη σε C. tubulosa ήταν υψηλότερη από εκείνη του C. deserticola (p<0.01), and no cistanoside A was detected in C. tubulosa. Conclusion: There are differences in the chemical composition between C. deserticola and C. tubulosa. Cistanoside A can be taken as a maker component in C. deserticola. Echinacoside and acteoside are the common components in both plants, and they are specified in the Chinese Pharmacopoeia (2020 edition) as the marker components in both plants. The different content limits for the two components between C. deserticola and C. tubulosa reflect the objectivity in the standard.

Λέξεις -κλειδιά: cistanche deserticola;Cistanche tubulosa; Cistanoside α; ισοακτεοσίδη.εχινακοσίδη; ακτεοσίδη

 

 

 

 

Cistanche deserticolaείναι το αποξηραμένο σαρκώδες στέλεχος με φουσκωτά φύλλα του cistanche deserticola yc ma ή cistanche tubulosa (schenk) wight, ένα φυτό της οικογένειας Orobanchaceae [1]. Πρόκειται για ένα τονωτικό και φαρμακευτικό φαγητό, γνωστό ως "ερήμου ginseng". Διανέμεται κυρίως στην εσωτερική Μογγολία, τη Ningxia, το Gansu, το Xinjiang και άλλες περιοχές [2]. Το Cistanche Deserticola είναι ζεστό στη φύση, γλυκιά και αλμυρή γεύση, και εισέρχεται στους νεφρούς και τους μεγάλους μεσημβρινούς. Έχει τα αποτελέσματα της θρέψης του ήπατος και του νεφρού, ωφελώντας την ουσία και το αίμα και την υγρασία των εντέρων και τη διευκόλυνση των κινήσεων του εντέρου. Μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τη θεραπεία της ανεπάρκειας του νεφρού, της ανικανότητας και της στειρότητας, της πόνης της μέσης και των γόνατων, της αδυναμίας των τενόντων και των οστών και της δυσκοιλιότητας που προκαλούνται από τα ξηρά έντερα [1]. Οι σύγχρονες έρευνες δείχνουν ότι τα σαρκώδη στελέχη με φύλλα κλίμακας του cistanche deserticola περιέχουν κυρίως μια ποικιλία χημικών συστατικών όπως φαινυλαιθανοειδή γλυκοσίδες, ιρινοειδή τερπένια και γλυκοσίδες τους, λιγνές και σάκχαρα [3]. Μεταξύ αυτών, τα φαινυλαιθανοειδή γλυκοσίδια είναι τα σημαντικότερα δραστικά συστατικά, τα οποία έχουν φαρμακολογικές επιδράσεις όπως η αντι-γήρανση [4], το αντιοξειδωτικό, το αντι-εύκαμπτο και το καθαρτικό [5].
Υπάρχουν περίπου 20 είδη Cistanche στον κόσμο και υπάρχουν 5 είδη στη χώρα μου: Cistanche Deserticola, Cistanche Tubulosa, C. salsa (Camy.) G.Beck, C. sinensis G. Beck και C. salsa var. albiflora pf tu et zclou. Η έκδοση του 2020 της φαρμακοποιίας της Λαϊκής Δημοκρατίας της Κίνας (εφεξής που αναφέρεται ως "κινεζική φαρμακοποιία") ορίζει ότι τα δύο πρώτα είδη είναι το αρχικό είδος της Cistanche Deserticola [6].

Cistanche deserticola

Πριν από την έκδοση του 2005 της κινεζικής φαρμακοποιίας, η μόνη προέλευση που προέρχεται από την Cistanche Deserticola ήταν η Cistanche Deserticola. Λόγω της υψηλής ζήτησης στις εγχώριες και διεθνείς αγορές και η έλλειψη πόρων, η Cistanche Tubulosa προστέθηκε ως νόμιμη προέλευση. Ωστόσο, οι τιμές των δύο προέλευσης της Cistanche deserticola στην αγορά είναι πολύ διαφορετικές, με την τιμή του Cistanche Tubulosa να είναι μόνο 1/4 έως 1/6 από εκείνη της Cistanche deserticola [7]. Οι διαφορές στη σύνθεση και τις φαρμακολογικές επιδράσεις αυτών των δύο προέλευσης αξίζουν μακροχρόνια έρευνα και αξιοποίηση. Όσον αφορά τις διαφορές στους τύπους των συστατικών, Huang Xiongmei et al. [8] διαπίστωσε ότι το Cistancheside A ήταν το κύριο διαφοροποιητικό συστατικό μέσω της χαρακτηριστικής μελέτης φάσματος των δύο προέλευσης. Όσον αφορά τη διαφορά στο περιεχόμενο των συστατικών, οι Gao Yan et al. [9] διαπίστωσε ότι οι αναλογίες περιεχομένου της εχινακοσίδης προς verbascoside και verbascoside προς ισοποσασκοσίδη σε cistanche deserticola και cistanche tubulosa ήταν αρκετά διαφορετικές μέσω της εξαιρετικά υψηλής απόδοσης υγρή χρωματογραφία. Zhu Nailiang et αϊ. [10] βρέθηκε μέσω της ανάλυσης δακτυλικών αποτυπωμάτων ότι η περιεκτικότητα σε φαινυλαιθανοειδή γλυκοσίδες στην Cistanche deserticola ήταν σημαντικά χαμηλότερη από εκείνη του Cistanche Tubulosa και η περιεκτικότητα των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσίδων σε σωληνοειδές του Cistanche ήταν σημαντικά υψηλότερη από αυτή των ιριδίων γλυκοσίδων.
Η ερευνητική μας ομάδα χρησιμοποίησε φασματομετρία υγρής χρωματογραφίας-μάζας σε συνδυασμό με την πολυπαραγοντική στατιστική ανάλυση για να συγκριθεί οι διαφορές στους τύπους των χημικών συστατικών μεταξύ της Cistanche deserticola και του Cistanche Tubulosa, των διαφορικών δεικτών και του προσδιορισμού των περιεχομένων τους, έτσι ώστε να παρέχει μια αναφορά για τον εντοπισμό της προέλευσης της ερημικής Cistanche και της ορθολογικής χρήσης της Cistanche Tubulosa στην κλινική πρακτική. Επιπλέον, συγκρίνοντας τις διαφορές στα περιεχόμενα των στοιχείων του δείκτη φαρμακοποιίας (εχινακοσίδη και verbascoside) των δύο αρχικών cistanches, εξηγήθηκε η αναγκαιότητα ορίζοντας τα συνδυασμένα όρια των δύο συστατικών των cistanches και cistanches tubulosa αντίστοιχα.

 

1 υλικά

1.1 όργανα

Ultimate 3 000 εξαιρετικά υψηλής απόδοσης υγρής φάσης φάσης υγρού φάσης φάσης-ηλεκτροστατικού πεδίου διαδοχικά ιόντα υψηλής ανάλυσης φασματόμετρο υψηλής ανάλυσης (UPLC-LTQ Orbitrap XL, Thermo Fisher Scientific, USA). 2695 Υγρό χρωματογράφος υψηλής απόδοσης, ανιχνευτής υπεριώδους 2489 (Waters, USA). BT125D 1/100.000 Ηλεκτρονικό υπόλοιπο (Sartorius Instrument Systems, Γερμανία). KQ -500 DE CNC Ultrasonic Cleaner (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); PL2002 Ηλεκτρονικό υπόλοιπο [Mettler-Toledo Instrument (Shanghai) Co., Ltd.].

 

Cistanche tubulosa

1.2 Δοκιμάστε φάρμακα

Οι ουσίες αναφοράς Echinacoside, Cistancheside Α, verbascoside και Isoverbosaside (καθαρότητα μεγαλύτερη από 98%, αριθμοί παρτίδας PS000867, PS010950, PS000683 και PS001059 αντίστοιχα) αγοράστηκαν από την Chengdu Pusi Biotechnology Co., Ltd. φασματομετρία μάζας μεθανόλη (Fisher); μάζα φασματομετρίας μυρμηκικό μυρμηκικό οξύ (καθαρότητα: 99%, Sigma Aldrich). Το νερό ήταν ο Watsons απεσταγμένο νερό.

 

1,3 δείγματα

10 παρτίδες φετάλης cistanche deserticola και 10 παρτίδες φεγγέων Cistanche Tubulosa ταυτοποιήθηκαν από τον καθηγητή Li Xiangri της πανεπιστημίου της κινεζικής ιατρικής του Πεκίνου. Λεπτομερείς πληροφορίες εμφανίζονται στον Πίνακα 1.

 

2 μέθοδοι

2.1 Μελέτη για τα διάφορα συστατικά της Cistanche Deserticola από διαφορετικές προέλευσης

2.1.1 Προετοιμασία δοκιμαστικής λύσης

Πάρτε περίπου 0. 2 g ξηρού δείγματος σκόνης (που περνούσε μέσω κόσκινου αριθ. 4), ζυγίστε με ακρίβεια και τοποθετήστε σε μια ογκομετρική φιάλη 50 ml, προσθέστε 25 ml μεθανόλης 50% μετά από ψύξη, ζυγίστε και μεταβείτε στο Filtr, για να αποκτήσετε.

 

2.1.2 Χρωματογραφικές συνθήκες

Waters Acquity UplCtm BECH C18 Χρωματογραφική στήλη (1 0 0 mm × 2,1 mm, 1,7 μm), θερμοκρασία στήλης 35 βαθμών, θερμοκρασία θάλαμο δείγματος 1 0 βαθμός, όγκος έγχυσης δείγματος 3 μΐ, κλίση με μεθανόλη (a) {}}. (Β) ως κινητή φάση (0 λεπτά, 10%Α, 0 ~ 4 λεπτά, 10%~ 26%Α, 4 ~ 18 λεπτά, 26%~ 40%Α, 18 ~ 24 λεπτά, 40%~ 100%Α, 24 ~ 28 λεπτά, 100%α), μήκος κύματος ανίχνευσης 330 nm, ρυθμός ροής 0,3 ml · min -1.

 

2.1.3 Συνθήκες φασματομετρίας μάζας

Χρησιμοποιήθηκε πηγή ιόντων ηλεκτροψεκασμού (ESI), σάρωση αρνητικής λειτουργίας ιόντων, η τριχοειδής θερμοκρασία ήταν 350 βαθμοί, ο ρυθμός ροής του όγκου αερίου ήταν 30 arb, το σύστημα ροής του βοηθητικού αερίου ήταν 10 ARB, η τάση ψεκασμού ήταν 3 kV, η τριχοειδής τάση ήταν -35 V

Cistanche tubulosa

2.1.4 Ανάλυση κύριας συνιστώσας (PCA)

Μετά την απόκτηση της δισδιάστατης μήτρας των ακριβών ζεύγους δεδομένων διατήρησης μάζας, ο πίνακας οργάνων θα εμφανίσει όλες τις αυτόματα εισαγόμενες πληροφορίες χρόνου διατήρησης και η μέθοδος PCA της ενότητας Extended Statistics θα χρησιμοποιηθεί για ανάλυση.

 

2.1.5 Ορθογώνια μερική ανάλυση των ελάχιστων τετραγώνων (OPLS-DA)

Με την εκτέλεση δισδιάστατης ανάλυσης δεδομένων με OPLS-DA, ελήφθησαν μεγάλο αριθμό ορθογωνοποιημένων φάσματος, γεγονός που μπορεί να δείξει σαφώς τις διαφορές μεταξύ των δύο ομάδων δειγμάτων. Στη μορφή S-Plot, τα ζεύγη δεδομένων χρόνου συγκράτησης μάζας και στα δύο άκρα της καμπύλης σχήματος S αντιπροσωπεύουν τα πιο αξιόπιστα χαρακτηριστικά ιόντα από κάθε ομάδα δείγματος.

 

2.2 Προσδιορισμός διαφορικών εξαρτημάτων

 

2.2.1 Προετοιμασία μικτής λύσης αναφοράς

 

Πάρτε τις κατάλληλες ποσότητες εχινακοσίδης, Cistancheside Α, verbascoside και Isoverascoside σε 1 0 ML καφέ ογκομετρική φιάλη, διαλύστε και αραιώστε στο σημάδι με 5 0% μεθανόλη και προετοιμάστε τις μεικτές λύσεις αποθεμάτων αναφοράς με συγκέντρωση μάζας {6}. 0,384 και 0,312 mg · ml -1, αντίστοιχα.

 

2.2.2 Προετοιμασία διαλύματος δοκιμής

 

Η μέθοδος είναι η ίδια όπως στο 2.1.1.

 

2.2.3 Χρωματογραφικές συνθήκες

Χρησιμοποιήθηκε στήλη Agilent Eclipse XDB-C18 (25 0 mm × 4,6 mm, 5 μm), με μεθανόλη (a) -0. 15 ~ 20 λεπτά, 21%~ 25%Α.

 

2.2.4 Μεθοδολογική έρευνα

2.2.4.1 Διερεύνηση γραμμικής σχέσης

Ακριβώς πιπέτα {{0}}. 1, 0. Εισάγετε το δείγμα για προσδιορισμό, χρησιμοποιήστε την περιοχή της χρωματογραφικής κορυφής ως τεταγμένη (y) και τη συγκέντρωση ως abscissa (x), σχεδιάστε μια γραφική παράσταση και εκτελέστε ανάλυση παλινδρόμησης για να αποκτήσετε τις εξισώσεις γραμμικής παλινδρόμησης διαφορετικών ουσιών αναφοράς.

 

2.2.4.2 Πείραμα ακριβείας

Πάρτε το μικτό διάλυμα αναφοράς του εχινακοσιδίου, του Cistancheside Α, της verbascoside και του Isoverbaccoside, εισάγετε συνεχώς την επιφάνεια αιχμής της εχινακοσίδης, την Cistancheside Α, το verbascoside και το isoverbaccoside και τον υπολογίστε την τιμή RS κάθε συστατικού αντίστοιχα.

 

2.2.4.3 Πείραμα σταθερότητας

Πάρτε την ίδια δοκιμαστική λύση Cistanche Deserticola (Αριθμός παρτίδας: 16 0 901), εισάγετε το σε 0, 2, 4, 8, 12, 24 ώρες, καθορίστε την περιεκτικότητα σε εχινακοσίδη, Cistancheside Α, verbascoside και Isoverbaccoside στο διάλυμα δοκιμής και υπολογίστε την τιμή RSD κάθε συστατικού αντίστοιχα.

 

2.2.4.4 Πείραμα επαναληψιμότητας

Πάρτε το ίδιο δείγμα (αριθμός παρτίδας: 160901) σκόνη, προετοιμάστε 6 διαλύματα δοκιμής σύμφωνα με τη μέθοδο κάτω από 2.1.1, έγχυση και μέτρηση, υπολογίστε το περιεχόμενο της εχινακοσίδης, το cistancheside Α, το verbascoside και το isoverbascoside σε κάθε διάλυμα δοκιμής και υπολογίστε την τιμή RSD κάθε συστατικού.

 

2.2.4.5 Πείραμα ανάκτησης δείγματος

Ζυγίστε με ακρίβεια 6 δείγματα cistanche deserticola (αριθμός παρτίδας: 160901) με γνωστό περιεχόμενο, προσθέστε λύση αναφοράς ισοδύναμη με το γνωστό περιεχόμενο της εχινακοσίνης, Cistancheside Α, verbascoside και isoverbascoside, παρασκευάστε διαλύματα δοκιμών σύμφωνα με τη μέθοδο κάτω από 2.1.1, έγχυση και μέτρηση και υπολογίστε το μέσο δείγμα αποκατάστασης.