Έρευνα Πολυσακχαριτών Cistanche που Καθαρίζουν τις Ελεύθερες Ρίζες

Για περισσότερες πληροφορίες:ali.ma@wecistanche.com

Wang Guowei Zhao Fang

(Σχολή Χημείας και Χημικής Μηχανικής, Πανεπιστήμιο Shihezi, Beisi Road, Shihezi City, Xinjiang 832000)

Λέξεις-κλειδιά: Cistanche; Πολυσακχαρίτης Cistanche,πολυσακχαρίτηςαπό cistanche? ελεύθερες ρίζες

Το σώμα παράγει συνεχώς διάφορες αντιδραστικές ρίζες οξυγόνου (ROS) στη διαδικασία του οξειδωτικού μεταβολισμού των δραστηριοτήτων της ζωής, οι οποίες είναι ενδιάμεσα προϊόντα που παράγονται από την οξειδοαναγωγική αντίδραση του αερόβιου μεταβολισμού του ανθρώπινου σώματος. Μελέτες έχουν βρει αυτή την υπερβολήελεύθερες ρίζεςθα επιτεθεί σε μακρομοριακές ουσίες της ζωής και διάφορα οργανίδια, προκαλώντας διάφορες βλάβες στο σώμα σε επίπεδα μοριακών, κυτταρικών και ιστικών οργάνων, επιταχύνοντας τη διαδικασία γήρανσης του σώματος και προκαλώντας θρόμβους αίματος, διαβήτη και αθηροσκλήρωση. , Όγκοι και άλλες ασθένειες [1]. Καθώς τα χημικά συντιθέμενα αντιοξειδωτικά είναι τοξικά για το ανθρώπινο σώμα, η αναζήτηση φυσικών αντιοξειδωτικών υψηλής απόδοσης και χαμηλής τοξικότητας που μπορούν να καθαρίσουν τις ελεύθερες ρίζες οξυγόνου έχει γίνει ένα hot spot στους τομείς της ιατρικής, των τροφίμων και της χημικής μηχανικής τα τελευταία χρόνια.

Cistanche [Cistanche deserticola (YC Ma.)]ως επί το πλείστον παρασιτεί στις ρίζες του Tamarisk, Nitraria και Haloxylon ammodendron. Είναι ένα σπάνιο κινέζικο φάρμακο στη χώρα μου και είναι γνωστό ως"τζίνσενγκ της ερήμου"[2]. Ο πολυσακχαρίτης cistanche cistanche είναι ένα από τα κύρια βιολογικά λειτουργικά ενεργά συστατικά τουκιστανάκι, αλλά δεν έχει αναφερθεί εάν τοπολυσακχαρίτης κιστάνχης έχει ως αποτέλεσμα τον καθαρισμό των ελεύθερων ριζών. Στην παρούσα εργασία χρησιμοποιήθηκε η μέθοδος της φασματικής ανάλυσης για τον προσδιορισμόη επίδραση σάρωσης του πολυσακχαρίτη Cistanche στις ελεύθερες ρίζες ανιόντων υπεροξειδίου, στις ελεύθερες ρίζες υδροξυλίου, στις ρίζες D PPH και στις ελεύθερες ρίζες απλού οξυγόνου, έτσι ώστενα αξιολογήσει την αντιοξειδωτική του δράση. Αξιοποιήστε πλήρως αυτόν τον φυσικό πόρο για να παράσχετε μια επιστημονική βάση.

Κάντε κλικ στο στέλεχος Cistanche για ελεύθερες ρίζες

Αυτή η έρευνα μελετάΠολυσακχαρίτης Cistanchein vitroαντιοξειδωτικόδραστηριότητα. Λαμβάνοντας ως έλεγχο το ασκορβικό οξύ, η αντίδραση τύπου Fenton παράγει ελεύθερες ρίζες υδροξυλίου, η αυτοοξείδωση της ντοπαμίνης παράγει ανιόν υπεροξειδίουελεύθερες ρίζες, η αντίδραση του υποχλωριώδους νατρίου και του υπεροξειδίου του υδρογόνου για την παραγωγή απλών ριζών οξυγόνου, διφαινυλ πικρή υδραζίνη ως πειραματικό μοντέλο, με χρήση υπεριώδους φασματοφωτομετρίας 2ορατής και μεθόδου ανάλυσης χημειοφωταύγειας, για πρώτη φορά για τον προσδιορισμό της επίδρασης σάρωσηςCistanche πολυσακχαρίτηςε στις ελεύθερες ρίζες ανιόντων υπεροξειδίου, ελεύθερες ρίζες υδροξυλίου, D PPH ·ελεύθερες ρίζες(ρίζες διφαινυλ υδραζινο) και μονό οξυγόνο.Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι οι πολυσακχαρίτες του Cistanche είχαν προφανή αποτελέσματα σάρωσης στις προαναφερθείσες ελεύθερες ρίζες και τα αποτελέσματα σάρωσης συσχετίστηκαν θετικά με τη συγκέντρωση πολυσακχαριτών.

Συσκευές και αντιδραστήρια: UV 22401 υπεριώδες-ορατό φασματοφωτόμετρο (Shimadzu Corporation, Japan); Lum at LB9507 υπερευαίσθητο φωτόμετρο σωλήνα (Berthold Technologies, Γερμανία). Περιστροφικός εξατμιστής R E252CS (Shanghai Yarong Biochemical Co., Ltd.) Instrument Factory); HW 2SY ηλεκτρονική κατσαρόλα σταθερής θερμοκρασίας λουτρού νερού (Jintan Xinhang Instrument Factory). Μετρητής οξύτητας pH S23C (Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd.); D ZF26020 φούρνος στεγνώματος κενού (Shanghai Yiheng Technology Co., Ltd.).

Εκχύλισμα Cistancheαγοράζεται από την Kuitun Medicinal Materials Corporation. Λουμινόλη (Luminol, Sigma, ΗΠΑ), Ντοπαμίνη (Εθνικό Ινστιτούτο Ελέγχου Φαρμακευτικών και Βιολογικών Προϊόντων της Κίνας), FeSO 4, ED TA, βιταμίνη C, H 2O 2, NaClO, Na2CO 3, NaHCO 3 κ.λπ. εγχώριο αναλυτικό αντιδραστήριο. Το πειραματικό νερό είναι απεσταγμένο νερό με ιοντοανταλλαγή.

οeμέθοδος εξαγωγής τουΠολυσακχαρίτες Cistanche: Πάρτε 30 γρσκόνη κιστάνικαι τοποθετήστε το σε μια φιάλη Erlenmeyer 500mL και μουλιάστε σε πετρελαϊκό αιθέρα (60-90 βαθμό ), αιθέρα και κλάσμα όγκου θερμού διαλύματος αιθανόλης 80 τοις εκατό (30 μοίρες ) για 6 ώρες και το υπόλειμμα θα εξατμιστεί μέχρι να στεγνώσει. . Το υπόλειμμα του φίλτρου εμποτίστηκε σε νερό σε αναλογία στερεού-υγρού 1:10 για 24 ώρες και θερμάνθηκε στους 30 βαθμούς για να εκχυλιστεί 100 λεπτά. Μετά την ολοκλήρωση της εκχύλισης, το υπερκείμενο λήφθηκε με φυγοκέντρηση. Το υπερκείμενο συμπυκνώθηκε υπό ελαττωμένη πίεση και στη συνέχεια καταβυθίστηκε με προσθήκη 3 φορές του όγκου αιθανόλης 95 τοις εκατό, παραμονή για 24 ώρες στους 4 βαθμούς, συλλέγοντας το ίζημα μετά τη φυγοκέντρηση και ξήρανση υπό κενό για να ληφθεί ο ακατέργαστος πολυσακχαρίτης Cistanche cistanche. Ζυγίστε 1. 00 g ακατέργαστου πολυσακχαρίτη, διαλύστε τον σε νερό και αραιώστε σε ογκομετρική φιάλη 50 mL και αφήστε στην άκρη για δοκιμή.

Το τεστ του πολυσακχαρίτης cistanche σε ελεύθερη ρίζα υπεροξειδίου (O) ικανότητα καθαρισμού: η χρήση της ντοπαμίνης αυτο-οξείδωσης για την παραγωγή υπεροξειδίου ελεύθερες ρίζες δοκιμή τοπολυσακχαρίτης κιστάνχης για τον καθαρισμό ελεύθερων ριζών υπεροξειδίουικανότητα [3]. Προσθέστε 0.1mm olöL pH=10.12 στον ξηρό και βαθμονομημένο δοκιμαστικό σωλήνα διαδοχικά, 3.0mL ρυθμιστικού διαλύματος ανθρακικών, 3.0mL νερού, και 0,5 mL διαλύματος δείγματος πολυσακχαρίτη διαφορετικών συγκεντρώσεων και τοποθετήστε το σε υδατόλουτρο 30 βαθμών για προθέρμανση για 5 λεπτά. Προσθέστε 1.0mL 2.0mm olöL ντοπαμίνης προθερμασμένη σε υδατόλουτρο στους 30 βαθμούς, ανακατέψτε το αμέσως, διατηρήστε την αντίδραση στους 30 βαθμούς για 5 λεπτά και αμέσως σταματήστε την αντίδραση με 2 σταγόνες 10molöL HCl. Χρησιμοποιήστε ρυθμιστικό διάλυμα ως αναφορά, μετρήστε την απορρόφηση στα 221 nm (Δείγμα Α), η τυφλή ομάδα αντικαθιστά το δείγμα με 0,5 mL νερού (κενό Α) και η ομάδα ελέγχου αντικαθιστά το δείγμα με 0,5 mL ασκορβικού οξέος. Κάθε δείγμα ελέγχεται παράλληλα 3 φορές και παίρνει τη μέση τιμή του. Ο ρυθμός δέσμευσης ριζών υπεροξειδίου (%)=(Ένα τυφλό δείγμα) öA τυφλό × 100 τοις εκατό .

Πείραμα σχετικά με την ικανότητα σάρωσης του πολυσακχαρίτη Cistanche σε ελεύθερη ρίζα ·OH

Το σύστημα EDTA 2Fe (Ê) 2 μπλε μεθυλενίου 2H 2O 2 χρησιμοποιήθηκε για να ελεγχθεί η ικανότηταΠολυσακχαρίτης Cistancheγια τον καθαρισμό των ελεύθερων ριζών υδροξυλίου. Η αρχή είναι ότι η αντίδραση τύπου Feton μεταξύ ED TA 2Fe(Ê) και υπεροξειδίου του υδρογόνου παράγει ρίζες ·OH, οι οποίες μειώνουν τη χαρακτηριστική κορυφή απορρόφησης του διαλύματος μπλε του μεθυλενίου στα 660nm. Σε μια σειρά από δοκιμαστικούς σωλήνες 10mL με πώματα, προσθέστε διάλυμα 1 5mm oLöL FeSO 4.{{2{0}mL, 5 mm oLöL διάλυμα EDTA 1,2 mL, 0.{ {29}}3mol N aH 2 PO 4 2N a2H PO 4 (pH=7}.4) ρυθμιστικό διάλυμα 2 ,0 mL, 20 mm olöL διάλυμα υπεροξειδίου του υδρογόνου 1,3 mL, μετά την ανακίνηση, προσθέστε 0,2 mm olöL μεθυλενίου μπλε διάλυμα 0,7 mL και στη συνέχεια προσθέστε διαφορετικές συγκεντρώσεις του διαλύματος δοκιμής, βιταμίνη C 1,0 mL και αραιώστε με νερό στο 10. 00mL, μετά την ανάμειξη, επωάστε στους 37 βαθμούς για 30 λεπτά, μετρήστε την απορρόφηση κάθε διαλύματος στα 660 nm και αντικαταστήστε το διάλυμα δείγματος με νερό στην τυφλή ομάδα. Κάθε δείγμα δοκιμάστηκε 3 φορές παράλληλα και ελήφθη η μέση τιμή. Ο ρυθμός δέσμευσης ριζών OH του δείγματος (%)=[(A 2-A 1) ö(A 0-A 1) × 100 τοις εκατό . Στον τύπο: Μια τιμή απορρόφησης 0 - του άθικτου σωλήνα. Μια 1 - τιμή απορρόφησης του κατεστραμμένου σωλήνα. Μια τιμή απορρόφησης 2 - μετά την προσθήκη του δείγματος.

Πείραμα σχετικά με την ικανότητα σάρωσης του πολυσακχαρίτη Cistanche στην ελεύθερη ρίζα D PPH

Πάρτε {{0}}.1 mL διαλύματος πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola και προσθέστε το σε 5.0 mL διαλύματος D PPH ·, ανακατέψτε γρήγορα και αφού παραμείνει για 10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου, το μετράται η μεταβολή απορρόφησης σε μήκος κύματος 517 nm [4]. Κάθε δείγμα δοκιμάστηκε 3 φορές παράλληλα και ελήφθη η μέση τιμή. Ποσοστό κάθαρσης του δείγματος D PPH · ( ​​τοις εκατό )=1- [(AB) öA 0] × 100 τοις εκατό .

Στον τύπο: A 0 - τιμή απορρόφησης της D PPH χωρίς προσθήκη δείγματος (1,9 mL D PPH συν 0.1 mL 50 τοις εκατό αιθανόλη). ΕΝΑ - τιμή απορρόφησης μετά την αντίδραση μεταξύ δείγματος και D PPH. σι - τυφλό Η τιμή απορρόφησης του δείγματος (δείγμα 0.1 mL συν 1. 9 mL 50 τοις εκατό αιθανόλη).

Δοκιμή μονήρους οξυγόνου 1O 2 για σάρωση πολυσακχαρίτη Cistanche

Το απλό οξυγόνο (1O 2) παράγεται από τη χημική αντίδραση μεταξύ NaClO και H 2O 2 στους 37 βαθμούς [5]. Το διάλυμα που χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό του 1O 2 είναι 100L 2. 8mm olöL διάλυμα NaClO, 400L 5mm olöL διάλυμα NaOH, 300L 10mm olöL διαλύματα H 2O 2, 50L 1mm olöL διάλυμα Luminol. Κατά τη διάρκεια της αντίδρασης, το διάλυμα αντίδρασης προστίθεται στο διάλυμα του δείγματος και ο αναλυτής χημειοφωταύγειας καταγράφει αυτόματα τη διαδικασία αντίδρασης ταυτόχρονα. Πάρτε NaClO 2H 2O 2 2N NaOH 2 Luminol ως τυφλό μάρτυρα. Ξεκινήστε την αντίδραση και προσθέστε το διάλυμα αντίδρασης από τη δεξαμενή του οργάνου χημειοφωταύγειας στο σωλήνα δείγματος σύμφωνα με την ποσότητα που έχει οριστεί από το πρόγραμμα. Στη συνέχεια, η ένταση χημειοφωταύγειας του μίγματος της αντίδρασης καταγραφόταν στο χαρτί καταγραφής κάθε 5 δευτερόλεπτα και κάθε δείγμα μετρήθηκε παράλληλα 3 φορές και ελήφθη η μέση τιμή. Το ποσοστό κάθαρσης υπολογίζεται σύμφωνα με τον ακόλουθο τύπο: ποσοστό κάθαρσης ( εκατοστιαία αναλογία )=(ένταση φωτεινής έντασης ελέγχου - φωτεινή ένταση δείγματος) ö φωτεινή ένταση ελέγχου × 100 τοις εκατό 3.

Η σαρωτική επίδραση των πολυσακχαριτών του cistanche στις ελεύθερες ρίζες υπεροξειδίου

Η χημική φύση των ελεύθερων ριζών υπεροξειδίου είναι ενεργή, η οποία μπορεί να προκαλέσει τα λιπαρά οξέα στο βιοφίλμ να παράγουν υπεροξείδια, τα οποία με τη σειρά τους καταστρέφουν τα κύτταρα [6]. Σε αυτό το άρθρο, η μέθοδος ντοπαμίνης χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό της ικανότητας σάρωσης των ελεύθερων ριζών υπεροξειδίου. Δείτε την Εικόνα 1 γιατην ικανότητα σάρωσης του Cistanche στις ελεύθερες ρίζες υπεροξειδίου.Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι:Οι πολυσακχαρίτες Cistanche μπορούν να αναστείλουν τις παραγόμενες ελεύθερες ρίζες υπεροξειδίουμε την αυτο-οξείδωση της ντοπαμίνης και εντός του εύρους της μετρούμενης συγκέντρωσης (0-8m gömL), αυξάνεται με την αύξηση της συγκέντρωσης, αλλά η ικανότητα σάρωσης είναι χαμηλότερη από αυτή του ασκορβικού οξέος.

Καθαριστική επίδραση της ελεύθερης ρίζας υπεροξειδίου του πολυσακχαρίτη cistanche OH

Η ρίζα υπεροξειδίου του ΟΗ είναι μια από τις πιο ενεργές ελεύθερες ρίζες οξυγόνου στο ενεργό οξυγόνο. Μπορεί να αντιδράσει με σχεδόν οποιοδήποτε βιολογικό μακρομόριο σε ζωντανά κύτταρα, το οποίο μπορεί να οδηγήσει σε υπεροξείδωση λιπιδίων των ιστών του σώματος, πολυμερισμό πρωτεϊνών και αποπολυμερισμό, κατακερματισμό νουκλεϊκού οξέος κ.λπ. επιτάχυνση της γήρανσης του οργανισμού [7]. Το Σχήμα 2 δείχνει την ικανότητα σάρωσης των πολυσακχαριτών cistanche σε ελεύθερες ρίζες υπεροξειδίου ΟΗ. Τα πειραματικά αποτελέσματα δείχνουν ότιο πολυσακχαρίτης του Cistanche έχει καλή δράση καθαρισμού στο ·OHελεύθερες ρίζες,και αυξάνεται με την αύξηση της συγκέντρωσης.

Η ικανότητα σάρωσης του πολυσακχαρίτη Cistanche cistanche στην ελεύθερη ρίζα D PPH

Η ρίζα D PPH (διφαινυλο-πικρή ρίζα υδραζίνο) είναι μια σταθερή ελεύθερη ρίζα, η οποία είναι μωβ σε οργανικούς διαλύτες και έχει ισχυρή απορρόφηση κοντά στα 517 nm. Μετά την προσθήκη αντιοξειδωτικών, ένα μέρος των ελεύθερων ριζών θα εξαλειφθεί και η απορρόφηση θα εξασθενήσει, κάτι που μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την αξιολόγηση της αντιοξειδωτικής δράσης της ουσίας [8]. Η ικανότητα σάρωσης των πολυσακχαριτών Cistanche σε ελεύθερες ρίζες D PPH φαίνεται στο Σχήμα 3. Τα πειραματικά αποτελέσματα δείχνουν ότι η ικανότητα σάρωσης του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola στις ελεύθερες ρίζες D PPH συσχετίζεται θετικά με τη συγκέντρωσή του και η ικανότητα σάρωσης είναι μεγαλύτερη από αυτή του ασκορβικό οξύ.

Η ικανότητα σάρωσης των πολυσακχαριτών του cistanche στις ελεύθερες ρίζες 1O 2

Το απλό οξυγόνο είναι διεγερμένο μοριακό οξυγόνο με ενεργές χημικές ιδιότητες. Δεδομένου ότι τα ασύζευκτα ηλεκτρόνια έχουν την τάση να ζευγαρώνουν, οι ελεύθερες ρίζες εμφανίζουν πιο ενεργές χημικές ιδιότητες [9]. Το Σχήμα 4 δείχνει την ικανότητα σάρωσης του πολυσακχαρίτη Cistanche deserticola σε ελεύθερες ρίζες 1O 2. Τα πειραματικά αποτελέσματα δείχνουν ότι η ικανότητα τουΠολυσακχαρίτες Cistancheγια την αφαίρεση του απλού οξυγόνου είναι χαμηλότερο από αυτό του ασκορβικού οξέος στην περιοχή των {{0}}.0m gömL. Όταν η συγκέντρωση είναι μεγαλύτερη από 4,0 m gömL, η ικανότητα απομάκρυνσης των πολυσακχαριτών Cistanche cistanche είναι μεγαλύτερη από αυτή του ασκορβικού οξέος.

Συμπερασματικά: Μέσω διαφορετικών συστημάτων αντιδραστικών ριζών ελεύθερων οξυγόνου, μελετήθηκε λεπτομερώς η in vitro αντιοξειδωτική δράση του πολυσακχαρίτη Cistanche. Μπορεί να φανεί από τα πειραματικά αποτελέσματα ότι εντός του εύρους συγκέντρωσης δοκιμής, το εκχύλισμα πολυσακχαρίτη Cistanche έχει σαρωτικά αποτελέσματα στις ελεύθερες ρίζες υπεροξειδίου O, στις ελεύθερες ρίζες υπεροξειδίου ΟΗ, στις ελεύθερες ρίζες D PPH και στις ελεύθερες ρίζες 1 O 2. Τα αποτελέσματα δεν είναι τα ίδια. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι ο πολυσακχαρίτης Cistanche είναι ένα αποτελεσματικό εξωγενές φυσικό αντιοξειδωτικό, το οποίο αξίζει περαιτέρω έρευνας, ανάπτυξης και ολοκληρωμένης χρήσης.

βιβλιογραφικές αναφορές

[1] Ling Guanting. Αντιοξειδωτικά τρόφιμα και υγεία [M]. Beijing: Chemical Industry Press, 2004. 1-58.

[2] Gao Ming, Tian Ziyu, Cai Hongmei, κ.λπ. Αλκαλική εκχύλιση και χημική ανάλυση πολυσακχαριτών Cistanche deserticola[J]. Agriculture Food Science and Technology, 2008, 2 (3): 32-34.

[3] Shi Shuangqun, Song Xinfang. Αυτοοξείδωση της ντοπαμίνης[J]. Journal of Hebei Normal University, 1997, 21(4): 387-389.

[4] Zhang Zhiqing, Tian Yingjuan, Zhang Jing. Μελέτη για την αντιοξειδωτική δράση των πολυσακχαριτών ρίζας[J]. Chinese Materia Medica, 2008, 31(2): 268-271.

[5] Li Haiping, Zhang Shuhai, Zhang Chunsheng. Μελέτη για την αντιοξειδωτική δράση του πολυσακχαρίτη από Pleurotus ostreatus [J]. Έρευνα και ανάπτυξη τροφίμων, 2008, 29(4): 56-60.

[6] Μο Τζιαν. Εισαγωγή στη Βιολογία των Ιατρικών Ελεύθερων Ριζών [Μ]. Beijing: People's Medical Publishing House, 1989. 21-25.

[7] F Frederick V L. Ελεύθερες Ρίζες [J ]. Clinical Chemistry, 1993, 65 (12): 374-377.

[8] M at suda M, N agaham a Y, Sato T et a l. Το DM Y είναι ένα ειδικό γονίδιο τομέα DM που απαιτείται για την ανάπτυξη M ale στο ψάρι Medaka [J ]. Nature, 2002, 30: 559-563.

[9] Kanofsky J R. Single Oxygen Production by L actoperoxidase[J]. Journal of Biological Chemistry, 1983, 258 (10): 5991-5993.