Ρενοπροστατευτικά αποτελέσματα μιας φόρμουλας Bushen Kaixuan Tongluo με βάση το Cistanche σε ποντίκια Db/db μέσω ενεργοποίησης της οδού σηματοδότησης CAMP/PKA/CREB

3. Αποτελέσματα

3.1 Επιδράσεις του τύπου Bushen Kaixuan Tongluo με βάση το Cistanche στη γενική κατάσταση των ποντικών db/db

Τα ποντίκια στην κενή ομάδα ήταν ενεργά και είχαν γυαλιστερή γούνα. Αντίθετα, τα ποντίκια στην ομάδα μοντέλων εμφανίστηκαν παχύσαρκα, ληθαργικά και σημαντικά λιγότερο ενεργά. Τα ποντίκια στις ομάδες θεραπείας εμφάνισαν διάφορους βαθμούς βελτίωσης στη γενική κατάσταση σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου.

 

 

 

Φόρμουλα Bushen Kaixuan Tongluo με βάση το Cistanche για την υγεία των νεφρών και του ήπατος

 

3.2 Επιδράσεις της φόρμουλας στο σωματικό βάρος ποντικών db/db

Καθ' όλη τη διάρκεια της πειραματικής περιόδου, το σωματικό βάρος των ποντικών στην ομάδα μοντέλου αυξήθηκε σημαντικά σε σύγκριση με την κενή ομάδα (P<0.01). Compared with the model group, mice in all treatment groups showed a downward trend in body weight, with differences appearing from week 8 onward. The high-dose Φόρμουλα με βάση το Cistancheομάδα έδειξε το πιο έντονο αποτέλεσμα. (Βλέπε Πίνακα 2)

3.3 Επιδράσεις στη νεφρική λειτουργία

Σε σύγκριση με την τυφλή ομάδα, η κρεατινίνη ορού (Scr) στην ομάδα μοντέλου παρουσίασε ανοδική τάση, αν και όχι στατιστικά σημαντική, ενώ το άζωτο ουρίας αίματος (BUN), η αλβουμίνη ούρων (uALB) και η αναλογία λευκωματίνης προς κρεατινίνη (ACR) ήταν σημαντικά αυξημένα (P<0.05). Compared with the model group, mice in the formula-treated groups showed a decreasing trend in Scr (not significant), and significantly reduced levels of BUN, uALB, and ACR (P<0.05), with the medium-dose group showing the best results. In the irbesartan group, Scr and BUN showed a downward trend (not significant), while uALB and ACR were significantly reduced (P<0.01). (See Table 3)

3.4 Επιδράσεις στη λειτουργία του ήπατος και στο μεταβολισμό των λιπιδίων

Σε σύγκριση με την κενή ομάδα, η ALT, η AST, η ολική χοληστερόλη (TC) και τα τριγλυκερίδια (TG) ήταν σημαντικά αυξημένα στην ομάδα μοντέλου (P<0.05). Compared with the model group, the treatment groups showed a decreasing trend in AST and ALT (not significant), and a significant decrease in TC (P<0.01). TG levels were significantly reduced in the medium-dose formula group (P<0.05), while other formula groups showed a downward trend (not significant). In the irbesartan group, TC showed a decreasing trend (not significant), and TG was significantly reduced (P<0.01). (See Table 4)

3.5 Επιδράσεις στο μεταβολισμό της γλυκόζης

Σε σύγκριση με την κενή ομάδα, τα επίπεδα γλυκόζης αίματος νηστείας (FBG), λεπτίνης (LEP), γλυκοζυλιωμένης πρωτεΐνης ορού (GSP) και ινσουλίνης (INS) ήταν σημαντικά αυξημένα στην ομάδα μοντέλου (P<0.05). Compared with the model group, FBG showed no significant downward trend in any group; LEP levels decreased (not significant) in the formula groups, whereas irbesartan significantly reduced LEP (P<0.05). All treatment groups showed significantly reduced GSP and INS levels (P<0.05), with the high-dose Φόρμουλα με βάση το Cistancheομάδα που δείχνει το καλύτερο αποτέλεσμα. (Βλέπε Πίνακα 5)

 

3.6 Επιδράσεις στη Νεφρική Ιστοπαθολογία

ΑΥΤΟΣ χρώση: Η τυφλή ομάδα έδειξε φυσιολογική νεφρική αρχιτεκτονική με κανονική σπειραματική μορφολογία και άθικτα σωληναριακά επιθηλιακά κύτταρα. Η ομάδα του μοντέλου εμφάνισε ακανόνιστα σπειράματα, μέτριο πολλαπλασιασμό των μεσαγγειακών κυττάρων, φλεγμονώδη διήθηση και εκφυλισμό κενοτοπίων σε σωληναριακά επιθηλιακά κύτταρα. Αυτά τα παθολογικά χαρακτηριστικά ανακουφίστηκαν στις ομάδες χαμηλής, μεσαίας και υψηλής δόσης φόρμουλας και ιρβεσαρτάνης. (Βλέπε Εικόνα 1)

Χρώση PAS: Η κενή ομάδα έδειξε ελάχιστη εναπόθεση εξωκυτταρικής μήτρας (ECM). Η ομάδα μοντέλων είχε σημειωμένη συσσώρευση ECM και παχύρρευστες βασικές μεμβράνες. Οι ομάδες θεραπείας εμφάνισαν διάφορους βαθμούς βελτίωσης. (Βλέπε Εικόνα 2)

Χρώση Masson: Η κενή ομάδα αποκάλυψε φυσιολογική σπειραματική δομή με ελάχιστη εναπόθεση κολλαγόνου. Η ομάδα του μοντέλου έδειξε εκτεταμένο κολλαγόνο με μπλε χρωματισμό στα σπειράματα και στο νεφρικό διάμεσο. Οι παθολογικές αλλαγές μετριάστηκαν σε όλες τις ομάδες θεραπείας. (Βλέπε Εικόνα 3)

 

3.7 Επιδράσεις στην έκφραση p-PKA και p-CREB στον νεφρικό ιστό

Σε σύγκριση με την τυφλή ομάδα, η χρώση p-PKA και p-CREB στους νεφρικούς ιστούς της ομάδας μοντέλου ήταν σημαντικά μειωμένη (P<0.01). Compared with the model group, the medium-dose formula group had significantly increased p-PKA expression (P<0.01), and p-CREB showed an upward trend (not statistically significant). (See Figure 4, Table 6)

 

3.8 Επιδράσεις στην έκφραση πρωτεΐνης p-PKA, PKA, p-CREB, CREB και Bcl-2

Σε σύγκριση με την κενή ομάδα, η ομάδα μοντέλου έδειξε σημαντικά μειωμένη έκφραση των p-PKA/PKA, p-CREB/CREB και Bcl-2 (P<0.05). These levels were significantly elevated in the medium-dose Φόρμουλα με βάση το Cistancheομάδα (Π<0.01). (See Figure 5, Table 7)

 

4. Συζήτηση

Αν και η βιβλιογραφία της παραδοσιακής κινεζικής ιατρικής (TCM) δεν περιγράφει ρητά τη διαβητική νεφρική νόσο (DKD), συμπτώματα όπως τα αφρώδη ούρα ευθυγραμμίζονται με καταστάσεις TCM, όπως "θολότητα ούρων" και "guan ge". Βασισμένος σε δεκαετίες κλινικής εμπειρίας, ο καθηγητής Lü Cuiyan ανέπτυξε τοΦόρμουλα Bushen Kaixuan Tongluo, χρησιμοποιώνταςCistancheστη θέση του Astragalus ως το βότανο μονάρχης για τονωτικό Qi και Yang, σε συνδυασμό με Aconite για τη θέρμανση του νεφρού και τη μετατροπή της θολότητας.

Η Salvia και ο Hirudo ενεργούν ως βότανα για να ενεργοποιήσουν το αίμα και να ξεμπλοκάρουν τις εξασφαλίσεις, ενώ η Saposhnikovia, ο Bombyx batryticatus και ο τζίτζικας διώχνουν τον άνεμο και τα παθογόνα. Το Rehmannia και το Cornus θρέφουν την ουσία των νεφρών. Ο Αχύρανθος οδηγεί τα βότανα προς τα κάτω. Οι Rosa laevigata, Euryale, Rubus και Cnidium εδραιώνουν την ουσία. Το Dioscorea ενισχύει τη σπλήνα και τα νεφρά. Ο συνδυασμός επιτυγχάνει τόνωση σπλήνας-νεφρού, αφαίρεση θολότητας και επίλυση στάσης, παρουσιάζοντας πολλά υποσχόμενη κλινική αποτελεσματικότητα.

Σύγχρονες φαρμακολογικές μελέτες δείχνουν ότι τα συστατικά της φόρμουλας δρουν σε πολλαπλούς στόχους για τη βελτίωση της νεφρικής λειτουργίας:

Τανσινόνη ΙΙΑκαιιρουδίνηαναστέλλουν τη σηματοδότηση TGF-/Smad, μειώνοντας την ίνωση και τις διαταραχές της μικροκυκλοφορίας

Πολυσακχαρίτες Saposhnikoviaρυθμίζουν προς τα κάτω τη φλεγμονή που προκαλείται από NF-κΒ

Ιριδοειδείς γλυκοσίδες από την Cornusενεργοποιήστε το μονοπάτι Nrf2/ARE για την ενίσχυση των αντιοξειδωτικών ενζύμων

Στερόλες Αχυράνθηςρυθμίζουν την οδό PI3K/Akt, αναστέλλοντας την απόπτωση των ποδοκυττάρων

Dioscinενεργοποιεί το AMPK/mTOR για τη ρύθμιση της αυτοφαγίας και του μεταβολισμού των επιθηλιακών κυττάρων

ΟΔιαδρομή σηματοδότησης cAMP, κεντρικό στον κυτταρικό μεταβολισμό της ενέργειας και στην έκφραση γονιδίων, είναι ζωτικής σημασίας για τη νεφρική ομοιόσταση. Η αδενυλική κυκλάση (AC) δημιουργεί cAMP, η οποία ενεργοποιεί αλλοστερικά την PKA. το ενεργοποιημένο PKA φωσφορυλιώνει το CREB για να σχηματίσει το p-CREB, το οποίο μετατοπίζεται στον πυρήνα και ξεκινά τη μεταγραφή γονιδίων-στόχων όπωςBcl-2, προάγοντας τα αντι-αποπτωτικά αποτελέσματα και μειώνοντας τη νεφρική βλάβη.

Στο DKD, η παρατεταμένη υπεργλυκαιμία διαταράσσει την ισορροπία του cAMP αναστέλλοντας τη λειτουργία AC και ενισχύοντας την υποβάθμιση που προκαλείται από PDE, οδηγώντας σε μειωμένα επίπεδα cAMP. Αυτό βλάπτει τη σηματοδότηση PKA/CREB, θέτει σε κίνδυνο τη μιτοχονδριακή λειτουργία, την αντιοξειδωτική άμυνα και την έκφραση αντι-αποπτωτικών γονιδίων, επιταχύνοντας τη σπειραματική σκλήρυνση και τη διάμεση ίνωση.

Η έρευνα δείχνει ότιενεργοποίηση της οδού cAMP/PKAβοηθά στη διατήρηση της ακεραιότητας του διαφράγματος της σχισμής των ποδοκυττάρων και στη μείωση της πρωτεϊνουρίας. Εξάλλου,CREBεπάγει μεταγραφικά αντιοξειδωτικά ένζυμα όπωςSOD2, μετριάζοντας το οξειδωτικό στρες των σωληναρίων.Bcl-2μειώνει επίσης τη διαρροή ROS από μιτοχόνδρια, προστατεύοντας τα ποδοκύτταρα και τα σωληναριακά κύτταρα υπό υπεργλυκαιμία.

Η αποκατάσταση των φυσιολογικών επιπέδων γλυκόζης μειώνει τη συσσώρευση AGE, ανακουφίζοντας την πάχυνση της βασικής μεμβράνης και τον τραυματισμό των ποδοκυττάρων. Η βελτίωση των λιπιδικών προφίλ μειώνει την νεφρική εναπόθεση λιπιδίων και τη διήθηση των μακροφάγων, καθυστερώντας έτσι την εξέλιξη της ίνωσης.

Ωστόσο,Η έρευνα σχετικά με το πώς η φόρμουλα Bushen Kaixuan Tongluo επηρεάζει την DKD μέσω της οδού cAMP παραμένει περιορισμένη.

Σε αυτή τη μελέτη, ποντίκια db/db χρησιμοποιήθηκαν για την προσομοίωση ανθρώπινης DKD. ΟΦόρμουλα με βάση το CistancheΣημαντικά βελτιωμένη νεφρική λειτουργία, γενική κατάσταση και μεταβολικές διαταραχές σε ποντίκια, με ευνοϊκά προφίλ ασφάλειας του ήπατος. Η ιστοπαθολογία έδειξε μειωμένη πάχυνση της σπειραματικής βασικής μεμβράνης, μεσαγγειακή επέκταση και διάμεση εναπόθεση κολλαγόνου - χαρακτηριστικές βλάβες DKD.

Σε μοριακό επίπεδο, ο τύποςρυθμισμένη προς τα πάνω έκφραση mRNA και πρωτεΐνης των PKA, CREB και Bcl-2, ενισχύοντας έτσι τη φωσφορυλίωση του PKA και του CREBενεργοποίηση της οδού cAMP, βελτιώνοντας την αντιοξειδωτική ικανότητα και αποκαθιστώντας τη λειτουργία φραγμού διήθησης.

Σύναψη

ΟΦόρμουλα Bushen Kaixuan Tongluo με βάση το Cistanche:

Βελτιώνει τη λειτουργία του ήπατος και των νεφρών

Διορθώνει τις μεταβολικές διαταραχές της γλυκόζης και των λιπιδίων

Ενεργοποιεί τοΔιαδρομή σηματοδότησης cAMP/PKA/CREB

Μειώνει τη νεφρική ίνωση και το οξειδωτικό στρες

Παρέχει νεφρική προστασία σε DKD

Αυτά τα ευρήματα παρέχουν μια φαρμακολογική βάση για την κλινική εφαρμογή του και υποστηρίζουν τη στόχευση της οδού cAMP ως πιθανή στρατηγική για τη θεραπεία DKD. Η μελλοντική έρευνα θα πρέπει να διερευνήσει κατάντη μόρια όπως το BDNF για να αποσαφηνιστεί περαιτέρω ο μηχανισμός.