Ταχύτατος ταυτόχρονος προσδιορισμός έξι αποτελεσματικών συστατικών στο Cistanche Tubulosa με φασματοσκοπία εγγύς υπέρυθρης ακτινοβολίας
Mar 06, 2022
Επικοινωνία: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com
Xinhong Wang, Xiaoguang Wang και Yuhai Guo
Αφηρημένη:
Ο ποσοτικός προσδιορισμός πολλαπλών αποτελεσματικών συστατικών σε ένα δεδομένο φυτό συνήθως απαιτεί πολύ μεγάλη ποσότητα αυθεντικών φυσικών προϊόντων. Σε αυτή τη μελέτη, προτείναμε μια γρήγορη και μη καταστροφική μέθοδο για τον ταυτόχρονο προσδιορισμό εχινακοσίδης, βερμπασκοσίδης, μαννιτόλης, σακχαρόζης, γλυκόζης και φρουκτόζης σεCistanche tubulosaμε φασματοσκοπία εγγύς υπέρυθρη (NIRS). Η φασματοσκοπία διάχυτης ανάκλασης κοντά στο υπέρυθρο (DRS) και η υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC) διεξήχθησαν σε 116 παρτίδες δειγμάτων Cistanche tubulosa. Τα δεδομένα DRS υποβλήθηκαν σε επεξεργασία χρησιμοποιώντας τυπικές μεθόδους κανονικής ποικιλίας (SNV) και πολλαπλασιαστικής διόρθωσης διασποράς (MSC). Η μερική παλινδρόμηση ελαχίστων τετραγώνων (PLSR) χρησιμοποιήθηκε για τη δημιουργία μοντέλων βαθμονόμησης για στοιχεία ενδιαφέροντος στο Cistanche tubulosa. Στη συνέχεια, όλα τα μοντέλα αξιολογήθηκαν με τον υπολογισμό του ριζικού μέσου τετραγώνου σφάλματος βαθμονόμησης (RMSEC), του συντελεστή συσχέτισης βαθμονόμησης (r). Οι τιμές r και των έξι μοντέλων βαθμονόμησης προσδιορίστηκαν ότι είναι μεγαλύτερες από 0.94, υποδηλώνοντας ότι κάθε μοντέλο είναι αξιόπιστο. Ως εκ τούτου, τα ποσοτικά μοντέλα NIR που αναφέρονται σε αυτή τη μελέτη μπορούν να είναι κατάλληλα για να ποσοτικοποιήσουν με ακρίβεια τα περιεχόμενα έξι φαρμακευτικών συστατικών σεCistanche tubulosa.
Λέξεις-κλειδιά: Cistanche tubulosa; υγρη ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΑ ΥΨΗΛΗΣ ΑΠΟΔΟΣΗΣ; φασματοσκοπία κοντά στο υπέρυθρο. μερικά ελάχιστα τετράγωνα
Εισαγωγή
Cistanche(Hoffmg. Et Link) είναι ένα πολυετές φανερογαμικό γένος της οικογένειας των φυτών Orobanchaceae. Τα περισσότερα είδη που ανήκουν στο γένος Cistanche έχουν χρησιμοποιηθεί ως φαρμακευτικό φυτό εδώ και χιλιετίες στην Κίνα. έχουν τη φήμη του ανώτερου τονωτικού. και είναι γνωστά ως «Ginseng of the Deserts» [1,2].Cistanche tubulosaείναι υποχρεωτικό παράσιτο των ριζών του πολυετούς φυτού Tamarix Chinensis. Έχει τεκμηριωθεί στην Κινεζική Φαρμακοποιία ως η αυθεντική πηγή του Cistanches Herba (κινεζική ονομασία: Roucongrong) από την έκδοση του 2005 [3]. Η σύγχρονη φαρμακολογική έρευνα για τα είδη Cistanche ξεκίνησε τη δεκαετία του 1980 [4]. Φαρμακολογικές έρευνες έδειξαν ότι τα εκχυλίσματα φυτών Cistanche διαθέτουν ένα ευρύ φάσμα δράσεων, όπως θεραπεία νεφρικής ανεπάρκειας και γεροντικής δυσκοιλιότητας, προώθηση της ικανότητας μάθησης και απομνημόνευσης, κατά της νόσου Alzheimer, ενίσχυση της ανοσίας, αντιγήρανση, κατά της κούρασης κ.λπ. [1,5-7]. Τις τελευταίες τρεις δεκαετίες, περιεκτικές και συστηματικές φαρμακολογικές μελέτες έχουν συνδυαστεί με φυτοχημικές έρευνες για να φωτίσουν την υλική βάση των ευεργετικών επιδράσεων των ριζών των φυτών Cistanche. Αυτές οι έρευνες δείχνουν ότι οι φαινυλαιθανοειδείς γλυκοσίδες (PhGs) ήταν τα κύρια αποτελεσματικά συστατικά στα φυτά Cistanche που διαδραματίζουν βασικούς ρόλους για τη θεραπεία της νεφρικής ανεπάρκειας, της ανικανότητας [8], της αντιγήρανσης [9] και της νόσου του Alzheimer [10]. Τα περιεχόμενα δύο PhG (εχινακοσίδη και βερμπασκοσίδη) απαιτούνταν στην Κινεζική Φαρμακοποιία. Εν τω μεταξύ, οι υδατάνθρακες όπως η μαννιτόλη, η σακχαρόζη, η γλυκόζη και η φρουκτόζη στα φυτά Cistanche έχουν την καθαρτική λειτουργία και οι ομάδες υδατανθράκων των φυτών Cistanche έχουν χρησιμοποιηθεί για τη θεραπεία της δυσκοιλιότητας [11].
Άγριοι πόροι τουCistanche tubulosaδιανέμονται κυρίως στην περιοχή γύρω από την έρημο Taklamakan στη νότια Αυτόνομη Περιοχή Xinjiang στην Κίνα. Παρόμοια με πολλά άλλα είδη που χρησιμοποιούνται ως παραδοσιακά κινέζικα φάρμακα (TCM), το C. tubulosa είναι μεγάλης οικονομικής αξίας και σχεδόν εξαφανίστηκε στον άγριο βιότοπό του λόγω της υπερβολικής συλλογής. Η καλλιέργεια του C. tubulosa ξεκίνησε τη δεκαετία του 1990 στην Κίνα για να εξασφαλιστεί η προμήθεια πρώτων υλών για το Cistanches Herba καθώς και η προστασία των πόρων των άγριων φυτών. Από το 2017, σχεδόν 13 χιλιάδες εκτάρια καλλιεργούμενης C. tubulosa υπάρχουν στην επαρχία Hotan στο Xinjiang [12,13]. Απαιτείται πρόοδος στην τεχνολογία φύτευσης για επέκταση της καλλιέργειας καθώς και βελτίωση της ποιότηταςCistanche tubulosa.
Ο πρωταρχικός σκοπός της καλλιέργειαςCistanche tubulosaείναι η παραγωγή Cistanches Herba, όντας πλούσια σε αυτά τα αποτελεσματικά συστατικά. Ωστόσο, το περιεχόμενο των αποτελεσματικών συστατικών του Cistanches Herba, όπως τα PhGs και οι ολιγοσακχαρίτες, μπορεί να επηρεαστεί σημαντικά από πολλούς παράγοντες κατά την παραγωγή [12,13]. Θα πρέπει να διερευνηθεί ένα σύστημα ανίχνευσης σε πραγματικό χρόνο της ποιότητας του C. tubulosa. Ως εκ τούτου, είναι απαραίτητο να αναπτυχθεί μια μέθοδος υψηλής απόδοσης για την πλήρη κάλυψη της απαίτησης ανάλυσης μεγάλου αριθμού δειγμάτων σε σύντομο χρονικό διάστημα. Παραδοσιακά, ο προσδιορισμός αυτών των πρωταρχικών αποτελεσματικών συστατικών, όπως τα PhGs και οι υδατάνθρακες, στο C. tubulosa γινόταν συνήθως χρησιμοποιώντας υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC) [14,15]. Αν και είναι ακριβές και αξιόπιστο, είναι χρονοβόρο και επίπονο για τη συλλογή και την επεξεργασία δεδομένων. Επιπλέον, απαιτείται επίσης πολύς χρόνος και προσπάθεια για την προετοιμασία του δείγματος που συνήθως περιλαμβάνει κονιοποίηση, εκχύλιση και διήθηση των αναλύσεων HPLC. Ως εκ τούτου, απαιτείται μια σαφής αρχή και ένα εύκολο στη χρήση εργαλείο για τη λήψη σχετικά μεγάλου όγκου δεδομένων. Ευτυχώς, η φασματοσκοπία εγγύς υπέρυθρη ακτινοβολία (NIRS) έχει χρησιμοποιηθεί εκτενώς για την αξιολόγηση των γεωργικών προϊόντων [16], των τροφίμων [17], των ιατρικών δειγμάτων [18] και των φαρμακευτικών προϊόντων [19] επειδή είναι γρήγορη καθώς και μη καταστροφική. Επομένως, το NIRS θα μπορούσε να ταιριάζει ακριβώς με τις απαιτήσεις για αποτελεσματικές μετρήσεις των TCM και δεν προκαλεί έκπληξη το γεγονός ότι το NIRS έχει εφαρμοστεί για ποιοτική ταυτοποίηση [20,21] και ποσοτικοποίηση των ενώσεων [22] σε TCM.
Σε αυτή τη μελέτη, τα περιεχόμενα έξι αποτελεσματικών συστατικών, συμπεριλαμβανομένης της εχινακοσίδης, της βερμπασκοσίδης, της μαννιτόλης, της σακχαρόζης, της γλυκόζης και της φρουκτόζης σε 116 παρτίδες δειγμάτων C. tubulosa που συλλέχθηκαν από την επαρχία Hotan στο Xinjiang μεταξύ 2013-2015 προσδιορίστηκαν αρχικά με HPLC. Στη συνέχεια, τα μοντέλα βαθμονόμησης αυτών των έξι συνιστωσών καθιερώθηκαν με τη μέθοδο μερικής παλινδρόμησης ελαχίστων τετραγώνων (PLSR). Αυτά τα μοντέλα στη συνέχεια επικυρώθηκαν με τον συντελεστή συσχέτισης και τα σφάλματα πρόβλεψης στα σύνολα βαθμονόμησης. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η αναπτυγμένη μέθοδος θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως αξιόπιστη μέθοδος για την ποσοτική ανάλυση του C. tubulosa.
Αποτέλεσμα
Ανάλυση HPLC
Τα περιεχόμενα εχινακοσίδης και βερμπασκοσίδης προσδιορίστηκαν με μια καλά καθορισμένη μέθοδο HPLC-UV στη βιβλιογραφία [3,23] και τέσσερις υδατάνθρακες (μαννιτόλη, σακχαρόζη, γλυκόζη και φρουκτόζη) προσδιορίστηκαν με μια καλά καθορισμένη μέθοδο HPLC-ELSD στο τη βιβλιογραφία [24] και για τα 116 δείγματα. Οι μέθοδοι προετοιμασίας και προσδιορισμού δειγμάτων περιγράφηκαν στις Ενότητες 3.1 και 3.3. Το σχήμα 1 δείχνει τα χαρακτηριστικά χρωματογραφήματα των μικτών προτύπων. Μπορεί να φανεί ότι και τα έξι αποτελεσματικά συστατικά ήταν διαχωρισμένα στη γραμμή βάσης και επομένως μπορούσαν να ποσοτικοποιηθούν. Η μέθοδος HPLC επικυρώθηκε πριν από τη δοκιμή του δείγματος. Τα κύρια αποτελέσματα της μεθόδου HPLC παρατίθενται στον Πίνακα 1. Μια ευνοϊκή γραμμική σχέση (r=0.9998) και η ανάκτηση (98,5 τοις εκατό ) της μεθόδου προσδιορισμού εχινακοσίδης εμφανίζονται στα αποτελέσματα, το ίδιο αποτέλεσμα με όλα τα πέντε συστατικά. Επομένως, τα περιεχόμενα των έξι αποτελεσματικών συστατικών μπορούν να προσδιοριστούν με ακρίβεια. Όλες οι καθορισμένες περιοχές περιεχομένου συνοψίζονται στον Πίνακα 1.
Ανάλυση NIRS
Το σχήμα 2 δείχνει τα φάσματα NIR (4000–10,000 cm−1) των δειγμάτων C. tubulosa. Σημαντικές κορυφές απορρόφησης εμφανίστηκαν από 4000 cm−1 έως 7500 cm−1 σε όλα τα δείγματα, ενώ ήπιες διακυμάνσεις εμφανίστηκαν από 7500 cm−1 έως 10.000 cm−1. Η μετατόπιση της βασικής γραμμής των φασμάτων NIR συνέβη επειδή το δείγμα επηρεάστηκε εύκολα από παράγοντες όπως το μέγεθος και το χρώμα των σωματιδίων (Εικόνα 2Α). Χρησιμοποιήθηκαν μαθηματικές προεπεξεργασίες των φασμάτων για να μειώσουν την επίδραση των περιττών πληροφοριών σε κάποιο βαθμό. Οι μαθηματικές προεπεξεργασίες περιελάμβαναν την πρώτη παραγωγή (1η παραγωγή), τη δεύτερη παραγωγή (2η παραγωγή), την τυπική κανονική ποικιλία (SNV) και τη διόρθωση πολλαπλασιαστικής διασποράς (MSC). Το σχήμα 2Β δείχνει τη 2η παραγωγή των φασμάτων NIR του C. tubulosa και οι σημαντικές παραλλαγές που εμφανίστηκαν από τρεις περιοχές, 4000–4500 cm−1, 5000–5500 cm−1, και 7000–7500 cm−1, παρατηρούνται προφανώς .
Καθιέρωση Μοντέλων Ποσοτικής Βαθμονόμησης
Η παλινδρόμηση μερικών ελαχίστων τετραγώνων (PLSR) είναι μια κλασική μέθοδος μοντελοποίησης και έχει εφαρμοστεί ευρέως σε ποσοτικά μοντέλα λόγω της υψηλής ποιότητας των αποτελεσμάτων. Τα πλεονεκτήματα του PLSR περιλαμβάνουν την καλή του ικανότητα πρόβλεψης και τη σχετική απλότητα. Το PLSR έχει επίσης εφαρμοστεί ευρέως στη δημιουργία μοντέλων ποσοτικής βαθμονόμησης TCM [25]. Με βάση τα προκατεργασμένα φάσματα NIR και το μοντέλο ποσοτικής ανάλυσης NIR για τα έξι αποτελεσματικά συστατικά στο C. tubulosa καθιερώθηκε χρησιμοποιώντας τη μέθοδο PLSR με δεδομένα ανάλυσης HPLC ως πραγματικές τιμές. Τα 116 δείγματα χωρίστηκαν τυχαία σε σετ βαθμονόμησης και επικύρωσης με αναλογία 3:1. Οι καταλληλότερες συνθήκες για τη βαθμονόμηση επιλέχθηκαν με χαμηλό RMSEC και υψηλό συντελεστή συσχέτισης.
Επιλογή της ζώνης κυμάτων για τα μοντέλα βαθμονόμησης
Η επιλογή μιας κατάλληλης ζώνης κυμάτων ήταν ένα σημαντικό βήμα για τη δημιουργία μοντέλων βαθμονόμησης. Σε αυτήν τη μελέτη, συγκρίθηκαν τα φάσματα διαστήματος NIR 4000–7500 cm-1 (συνιστάται από το λογισμικό αναλυτών TQ) και 4000–10.000 cm-1. Παρατηρήθηκε ότι αυτό το εύρος ήταν ακατάλληλο για τη βαθμονόμηση στο διάστημα μεταξύ 4000 cm-1 και 7500 cm-1 από τον Πίνακα 2. Ως εκ τούτου, στην τρέχουσα μελέτη, τα φασματικά διαστήματα για τα έξι χημικά συστατικά ήταν όλα επιλεγμένα από το διάστημα από 4000 έως 10.000 cm-1 συγκρίνοντας τις επιδόσεις του RMSEC και του συντελεστή συσχέτισης.
Επιλογή του βέλτιστου αριθμού παραγόντων για τα μοντέλα βαθμονόμησης
Το PLSR εξηγεί το μέγιστο ποσό μεταβλητότητας στα δεδομένα μειώνοντας τη διάσταση των δεδομένων φασμάτων με τον υπολογισμό των παραγόντων. Το πρόβλημα της «ανεπάρκειας» εμφανίστηκε λόγω ανεπαρκών πληροφοριών που προέκυψαν από περιορισμένο αριθμό παραγόντων. Ωστόσο, η επιλογή των παραγόντων μεγαλύτερων από τις βέλτιστες τιμές που εισάγονται στο μοντέλο θα επιφέρει το πρόβλημα της «υπερβολικής προσαρμογής». Είτε η «υπερπληροφορία» είτε η «υπερβολική προσαρμογή» θα μειώσει την προγνωστική ισχύ των καθιερωμένων μοντέλων [22]. Το Σχήμα 3 δείχνει τη σχέση μεταξύ RMSECV και παραγόντων και για τις έξι ενώσεις. Επομένως, επιλέξαμε εκείνους τους παράγοντες που αντιστοιχούν στις χαμηλότερες τιμές του RMSECV. Η βέλτιστη επιλογή παραγόντων για τα μοντέλα βαθμονόμησης παρατίθεται στον Πίνακα 3.
Επιλογή Φασματικής Προεπεξεργασίας για τα Μοντέλα Βαθμονόμησης
Ένας άλλος πιο κρίσιμος παράγοντας επιρροής για τα μοντέλα βαθμονόμησης είναι η φασματική προεπεξεργασία που στοχεύει στη μείωση της επιρροής της σκέδασης και της μετατόπισης της γραμμής βάσης, στη βελτίωση των αναλογιών σήματος προς θόρυβο και στην εξάλειψη των ακανόνιστων διακυμάνσεων. Οι μέθοδοι πολλαπλασιαστικής διόρθωσης σκέδασης (MSC) και τυπικής κανονικής μεταβλητής (SNV) χρησιμοποιήθηκαν για την εξάλειψη της επιρροής της σκέδασης ακτινοβολίας που συνηθίζεται. Για την επίλυση των επιπτώσεων της μετατόπισης της γραμμής βάσης, συγκρίθηκαν τα φάσματα 1ου και 2ου παραγώγου και επιλέχθηκε η 2η παραγωγή [26]. Για το επιθυμητό αποτέλεσμα, εξομαλύναμε τα φάσματα με τον αλγόριθμο φίλτρου Savitzky–Golay (SG) πριν από την παραγωγή για να αποτρέψουμε τη μεγέθυνση του θορύβου. Ο Πίνακας 3 δείχνει τις πληροφορίες για τη φασματική προεπεξεργασία και τα αποτελέσματά της για τα μοντέλα βαθμονόμησης.
Αξιολόγηση των Καθιερωμένων Μοντέλων
Ένα καλό μοντέλο βαθμονόμησης NIRS θα πρέπει να έχει χαμηλές τιμές RMSEC και RMSEP, καθώς και υψηλό συντελεστή συσχέτισης (r) και μικρές διαφορές μεταξύ RMSEC και RMSEP [27-29]. Τα μοντέλα βαθμονόμησης των έξι επιλεγμένων ενώσεων καθιερώθηκαν σύμφωνα με τις διαδικασίες που αναφέρονται παραπάνω (Πίνακας 3). Οι τιμές RMSEC και r για το σύνολο βαθμονόμησης της εχινακοσίδης ήταν 27,6 και 0,9808, αντίστοιχα. Οι παράμετροι απόδοσης άλλων μοντέλων χημικών ενώσεων παρατίθενται στον Πίνακα 3, από τον οποίο μπορούμε να συμπεράνουμε ότι τα καθιερωμένα μοντέλα προκύπτουν ικανοποιητικά αποτελέσματα πρόβλεψης και μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την ταχεία ποσοτική ανάλυση του C. tubulosa. Τα διαγράμματα διασποράς των έξι χημικών ενώσεων φαίνονται στο Σχήμα 4 για να κάνουν τα μοντέλα βαθμονόμησης πιο περιγραφικά και να παρατηρούνται οπτικά. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 4, υπήρξαν μικρές διαφορές μεταξύ των προγνωστικών και των μετρούμενων τιμών, επειδή οι περισσότερες κουκκίδες κατανεμήθηκαν γύρω από την παλινδρομική καμπύλη με μια εξίσωση ως y=x. Επομένως, άριστες προγνωστικές επιδόσεις παρατηρήθηκαν στο Σχήμα 4.
Υλικά και μέθοδοι
Η προετοιμασία των δειγμάτων
Εκατόν δεκαέξι δείγματα C. tubulosa συλλέχθηκαν από την επαρχία Hotan στην αυτόνομη περιοχή Xinjiang από το 2013 έως το 2015. Όλα τα δείγματα καλλιεργήθηκαν, αλλά συλλέχθηκαν σε διαφορετικά στάδια ανάπτυξης. Το φρέσκο βάρος των δειγμάτων κυμαινόταν από 20 g έως 1000 g. Μετά την ξήρανση στον ήλιο, τα αποξηραμένα δείγματα συνθλίβονται και κοσκινίζονται μέσω ενός 60-πλέγματος κόσκινου [3,23].
Συλλογή Φασματοσκοπικών Δεδομένων NIR
Τα φάσματα NIR των δειγμάτων συλλέχθηκαν σε διάστημα 8 cm-1 στη φασματική περιοχή 4000–10.000 cm-1 με σύστημα Antaris MXFT-NIR (Thermo Scientific, Madison, WI, ΗΠΑ) εξοπλισμένο με φορητό προσαρμογέα ανάκλασης οπτικών ινών. Κάθε φάσμα ελήφθη με κατά μέσο όρο 64 σαρώσεις. Όλα τα δείγματα αφέθηκαν να εξισορροπηθούν σε θερμοκρασία δωματίου (25 °C) πριν από τη σάρωση των φασμάτων NIR για να διασφαλιστεί ότι τα δείγματα αναλύθηκαν στην ίδια θερμοκρασία. Η υγρασία στο εργαστήριο διατηρήθηκε σε επίπεδο περιβάλλοντος.
Συλλογή δεδομένων HPLC
Προετοιμασία εκχύλισης
Ένα γραμμάριο σκόνης C. tubulosa εκχυλίστηκε με 50 mL μεθανόλης 50 τοις εκατό σε κωνική φιάλη με υπερήχους (500 W, 40 kHz) για 30 λεπτά. Το εκχύλισμα φυλάχθηκε στους 4 ◦C. Το υπερκείμενο του εκχυλίσματος διηθήθηκε για να ληφθεί δείγμα για ανάλυση HPLC [3,23].
Ταυτόχρονος Προσδιορισμός Εχινακοσίδης και Βερμπασκοσίδης με HPLC-UV
Η υγρή χρωματογραφική ανάλυση διεξήχθη σε σύστημα Shimadzu UHPLC (Shimadzu, Kyoto, Ιαπωνία) που αποτελείται από δύο μονάδες παροχής διαλύτη LC-20ADXR, μια αντλία LC-20AD, έναν δειγματολήπτη SIL{-20ACXRauto , ένας φούρνος στήλης CTO-20AC, ένας ανιχνευτής SPD-M20A DAD, ένας απαερωτήρας DGU-20A3R και ένας ελεγκτής ICBM-20.
Μια στήλη Grace Prevail Carbohydrate ES (150 × 2,1 mm, 2,7 mm) που χρησιμοποιήθηκε για τους χρωματογραφικούς διαχωρισμούς διατηρήθηκε στους 35 ◦C. Η κινητή φάση αποτελούνταν από ακετονιτρίλιο (Α) και 0.1 τοις εκατό υδατικό μυρμηκικό οξύ (Β) και χορηγήθηκε ακολουθώντας το πρόγραμμα βαθμίδωσης ως εξής: 0–7 λεπτά, γραμμική βαθμίδα 10–20 τοις εκατό Α; 7–15 λεπτά, 20 τοις εκατό Α; και 15–20 λεπτά, γραμμική κλίση 20–10 τοις εκατό Α. Ο ρυθμός συναδέλφου της κινητής φάσης ήταν 0,4 mL/min. Η παρακολούθηση UV πραγματοποιήθηκε στα 330 nm.
Ταυτόχρονος προσδιορισμός μαννιτόλης, σακχαρόζης, γλυκόζης και φρουκτόζης με HPLC-ELSD
Η HPLC πραγματοποιήθηκε σε σύστημα LC της σειράς Agilent 1100 (Palo Alto, CA, USA) που αποτελείται από έναν απαερωτή aG1322A, μια τεταρτοταγή αντλία G1311A, έναν αυτόματο δειγματολήπτη G1311A, έναν ελεγκτή θερμοκρασίας στήλης G1316A και έναν ανιχνευτή DAD G1315B.
Μια στήλη Sigma Prevail Carbohydrate ES (4,6 × 250 mm, 5 μm) χρησιμοποιήθηκε για χρωματογραφικούς διαχωρισμούς και διατηρήθηκε σε θερμοκρασία στήλης 25 ◦C. Η κινητή φάση αποτελούνταν από ακετονιτρίλιο και νερό (77:23, ο/ο) και το ισοκρατικό σύμμαχο παρεχόταν με ρυθμό 0,7 mL/min. Τα λύματα παρακολουθήθηκαν χρησιμοποιώντας έναν ανιχνευτή σκέδασης φωτός εξάτμισης (ELSD) με προεπιλεγμένες παραμέτρους [23,24].
Επεξεργασία δεδομένων
Το TQ Analyst (έκδοση 8.0, Thermo Scientific, Madison, WI, USA) χρησιμοποιήθηκε για τη διαίρεση των συνόλων βαθμονόμησης και επικύρωσης, τη μαθηματική προεπεξεργασία των φασμάτων, τη δημιουργία μοντέλων βαθμονόμησης και άλλους υπολογισμούς. Το Origin (έκδοση 9.1) χρησιμοποιήθηκε για τη δημιουργία των φιγούρων.
συμπεράσματα
Ευχαριστίες: Αυτή η εργασία υποστηρίχθηκε από το Εθνικό Πρόγραμμα Σχεδιασμού Επιστήμης και Τεχνολογίας της Κίνας (2015BAD29B00-04).
Συνεισφορές συγγραφέα: Ο Xinhong Wang συνέλαβε και σχεδίασε τα πειράματα. Ο Xinhong Wang και ο Xiaoguang Wang εκτέλεσαν τα πειράματα. Ο Xinhong Wang και ο Yuhai Guo έγραψαν την εφημερίδα.
Σύγκρουση συμφερόντων: Οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν υπάρχουν συγκρούσεις συμφερόντων.
βιβλιογραφικές αναφορές
Jiang, Υ.; Tu, PF Ανάλυση των χημικών συστατικών σε είδη cistanche. J. Chromatogr. 2009, 1216, 1970–1979. [CrossRef] [PubMed]
Xu, R.; Chen, J.; Chen, S.-L.; Liu, Τ.-Ν.; Zhu, W.-C.; Ο Xu, J. Cistanche deserticola Ma καλλιεργήθηκε ως νέα καλλιέργεια στην Κίνα. Genet. Πόρος. Crop Evol. 2008, 56, 137–142. [CrossRef]
Επιμέλεια επιτροπής κινεζικής φαρμακοποιίας. Chinese Pharmacopoeia, 2005th ed.; Chemical Industrial Press: Πεκίνο, Κίνα, 2005; Τόμος 1, σελ. 90.
Kobayashi, Η.; Komatsu, J. Συστατικά cistanchE herba (1). Yakugaku Zasshi 1983, 103, 508–511. [CrossRef] [PubMed]
Τραγούδι, ZH; Lei, L.; Tu, PF Πρόοδοι στην έρευνα της φαρμακολογικής δραστηριότητας σε φυτά φουσκώματος σιτανίσι. Σύνδεσμος et. Πηγούνι. Παράδοση. Βότανο. Drugs 2003, 34, 473-476.
Xiong, Q.; Kadota, S.; Tani, Τ.; Namba, Τ. Αντιοξειδωτικά αποτελέσματα φαινυλαιθανοειδών από Cistanche deserticola. Biol. Pharm. Ταύρος. 1996, 19, 1580–1585. [CrossRef] [PubMed]
Xuan, GD; Liu, CQ Έρευνα σχετικά με την επίδραση των φαινυλαιθανοειδών γλυκοσιδίων (PEG) του Cistanche deserticola στην αντιγήρανση σε ηλικιωμένα ποντίκια που προκαλούνται από D-γαλακτόζη. J. Chin. Med. Μητήρ. 2008, 31, 1385–1388.
Sato, Τ.; Kozima, S.; Kobayashi, Κ.; Kobayashi, H. Φαρμακολογικές μελέτες για το Cistanchis Herba. I. Επιδράσεις των συστατικών του Cistanchis Herba στο φύλο και τη μαθησιακή συμπεριφορά σε ποντίκια με χρόνια στρες. Yakugaku Zasshi 1986, 105, 1131–1144. [CrossRef]
Shen, CY; Jiang, JG; Yang, L.; Wang, DW; Zhu, W. Αντιγηραντικά ενεργά συστατικά από βότανα και θρεπτικά συστατικά που χρησιμοποιούνται στην παραδοσιακή κινεζική ιατρική: φαρμακολογικοί μηχανισμοί και συνέπειες για την ανακάλυψη φαρμάκων. Br. J. Pharmacol. 2016, 11, 1395–1425. [CrossRef] [PubMed]
Li, Ν.; Wang, J.; Ma, J.; Gu, Ζ.; Jiang, C.; Yu, L.; Fu, X. Neuroprotective Effects of Cistanches Herba Therapy σε ασθενείς με μέτρια νόσο Alzheimer. Evid. Βασισμένο Συμπλήρωμα. Εναλλακτική. Med. 2015, 2015. [CrossRef] [PubMed]
Gao, JY; Jiang, Υ.; Dai, F.; Han, ZL; Liu, HY; Bao, Ζ.; Zhang, TM; Tu, PF Study on lacative Constituents in Cistanche deserticola YC Ma. Mod. Πηγούνι. Med. 2015, 17, 307–310.
Tu, PF; Chen, QL; Jiang, Υ.; Guo, YH; Yang, TX; Wang, XY; Aierkan, Μ.; Li, XB; Du, Υ.; Nan, ZD; et al. Τεχνικές καλλιέργειας του Cistanche tubulosa και του ξενιστή του Tamarix spp. Mod. Πηγούνι. Med. 2015, 17, 349–358.
Tu, PF; Jiang, Υ.; Guo, YH; Tian, YZ; Li, XB; Wang, XY; Wei, J.; Chen, QL; Aierkan, M. Αναπτύσσοντας την οικολογική βιομηχανία βοτάνων cistanches για την προώθηση του οικολογικού πολιτισμού της δυτικής περιοχής της ερήμου. Mod. Πηγούνι. Med. 2015, 17, 297–301.
Lu, DY; Zhang, JY; Yang, ZY; Liu, HM; Li, S.; Wu, BJ; Ma, ZG Ποσοτική ανάλυση cistanches herba χρησιμοποιώντας υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης σε συνδυασμό με ανίχνευση διάταξης διόδων και φασματομετρία μάζας υψηλής ανάλυσης σε συνδυασμό με χημειομετρικές μεθόδους. J. Sep. Sci. 2013, 36, 1945–1952. [CrossRef] [PubMed]Molecules 2017, 22, 843 9 από 9
Jiang, Υ.; Li, SP; Wang, YT; Chen, XJ; Tu, PF Διαφοροποίηση βότανων με δακτυλικό αποτύπωμα με υψηλής απόδοσης υγρή χρωματογραφία-διόδου ανίχνευσης συστοιχίας-φασματομετρία μάζας. J. Chromatogr. 2009, 1216, 2156–2162. [CrossRef] [PubMed]
