Η ποσοτική πρωτεομική μελέτη αποκαλύπτει την οδό ινωδογόνου στην πολυκυστική νόσο του ήπατος Ⅱ
Nov 22, 2023
3. Αποτελέσματα
3.1. Τα νεφρά και το ήπαρ δεν ακολουθούν τους ίδιους κυστικούς μηχανισμούς
Προηγούμενες μελέτες έδειξαν ότι η πρώιμη αδρανοποίηση του γονιδίου Pkd1 (πριν από το p12) πυροδοτεί ταχεία ανάπτυξη πολυκυστικής νόσου (κυστικό παράθυρο), ενώ η αδρανοποίηση μετά το p14 οδηγεί σε όψιμο σχηματισμό κύστης μετά από 4-5 μήνες, με ήπιο φαινότυπο (μη κυστικό παράθυρο). [19]. Χρησιμοποιώντας το ίδιο ορθολογικό μοντέλο ADPKD (Pkd1cond/cond, Tam-Cre) [18,19], διερευνήσαμε εάν αυτό το παράθυρο νεφρικής ανάπτυξης αντιστοιχούσε χρονικά με ένα παρόμοιο παράθυρο ηπατικής ανάπτυξης. Για να γίνει μια άμεση σύγκριση με τις προηγούμενες μελέτες μας [37], τα ποντίκια προκλήθηκαν με ταμοξιφαίνη να αδρανοποιήσουν το γονίδιο Pkd1 στις μεταγεννητικές ημέρες 14 (ρ14) και 12 (ρ12) και θυσιάστηκαν σε ηλικία 30 ημερών (ρ30). Είναι ενδιαφέρον ότι παρατηρήσαμε έναν κυστικό φαινότυπο και στα δύο χρονικά σημεία με διαφορετικό βαθμό νόσου (ήπια και σοβαρή), υποδηλώνοντας ότι ο νεφρός και το ήπαρ έχουν ανεξάρτητα κυστικά αναπτυξιακά παράθυρα (Εικόνα 1α) και/ή πιθανούς διαφορετικούς χρόνους και εξέλιξη της νόσου . Δεν βρέθηκαν διαφορές μεταξύ αρσενικών και θηλυκών σε αυτήν την ηλικία σφαγής μεταξύ των δύο παραθύρων αδρανοποίησης (η=6 χρησιμοποιήθηκε για κάθε ομάδα μεταλλαγμένων). Τα μεταλλαγμένα ζώα p14 παρουσίασαν έναν ηπιότερο φαινότυπο από την ομάδα μεταλλαγμένων p12 με χαμηλότερες τιμές κυστικού δείκτη, αριθμό κύστεων και ηπατική λειτουργία σύμφωνα με την τιμή ορού ALP (Εικόνα 1β–δ). Αυτή είναι η πρώτη μελέτη που δείχνει διαφορετικά αναπτυξιακά παράθυρα/μηχανισμούς για την ηπατική και νεφρική ανεπάρκεια Pkd1. Αυτές οι μοριακές διαφορές θα πρέπει να προσδιοριστούν σε μελλοντικές μελέτες.
Εικόνα 1. Χαρακτηρισμός του φαινοτύπου του κυστικού ήπατος την ημέρα 30 από τα στάδια p12 και p14. Η διαγραφή Pkd1 στο p12 φέρει μια πιο σοβαρή κυστογένεση. (α) Αντιπροσωπευτικές μακροσκοπικές και μικροσκοπικές εικόνες χρωματισμένης αιματοξυλίνης-ηωσίνης από συκώτια Pkd1cond/cond;Tam-Cre ποντικιού Wild Type (WT, Pkd1cond/cond;Tam-Cre−) και Mutant (KO, Pkd1cond/Cre+Tam; ) με διαγραφή του γονιδίου Pkd1 που προκαλείται από ταμοξιφαίνη κατά τη μεταγεννητική ημέρα 14 (ομάδα ρ14) και 12 (ομάδα ρ12). Όλα τα ποντίκια θυσιάστηκαν στο p30. Γραμμή κλίμακας, 2 mm (πάνω πλαίσιο) 100 μm (κάτω πλαίσιο). Το n αντιπροσωπεύει τον αριθμό των δειγμάτων ανά ομάδα και το Bd σημαίνει τον χοληδόχο πόρο. (β, γ) Ηπατικός κυστικός δείκτης και αριθμός κύστεων των διαφορετικών φαινοτύπων. (δ,ε) Τιμές ALP και ALT ορού αίματος. Οι ράβδοι αντιπροσωπεύουν μέσο όρο ± SEM σε όλες τις περιπτώσεις. p < 0,05 από Student's t-test (two-tail) θεωρήθηκε ως σημαντικό αποτέλεσμα. Το ns αντιπροσωπεύει μη σημασία. * p < 0,05, ** p < 0,01, *** p < 0,001.
Κάντε κλικ στο cistanche herba για νεφρική νόσο
3.2. Κυνηγετικό όπλο και SWATH-MS Proteomic Analysis σε PLD
Όπως αναφέρεται στο Σχήμα 2, πραγματοποιήσαμε διαφορική ανάλυση πρωτεώματος και στα δύο κυστικά στάδια (ρ12—σοβαρή κυστική νόσος- και ρ14—ήπια κυστική νόσος—) των μεταλλαγμένων (ΚΟ) σε σύγκριση με ζώα άγριου τύπου (WT), προκειμένου να ταυτοποιήσουμε και χαρακτηρίζουν σχετικούς μοριακούς μηχανισμούς που υφίστανται ηπατική κυστογένεση και εξέλιξη της νόσου.
Εικόνα 2. Εικονογραφημένο σχήμα ροής εργασίας. Χρησιμοποιήσαμε ένα μοντέλο ποντικού ADPKD (Pkd1cond/cond, Tam-Cre ποντίκια) στο οποίο η γενετική αδρανοποίηση του Pkd1 προκλήθηκε από τη χορήγηση ταμοξιφαίνης κατά τη μεταγεννητική ημέρα 10 (p10) και p11 (ταχεία εξέλιξη της νόσου) ή p15 και p16 (καθυστερημένη εξέλιξη της νόσου ) σύμφωνα με τον αναπτυξιακό διακόπτη για την νεφρική κυστογένεση, που ορίζει τις δύο ομάδες της μελέτης που ονομάζονται p12 και p14 αντίστοιχα [19]. Και για τις δύο ομάδες, χρησιμοποιήσαμε ένα n ίσο ή μεγαλύτερο από έξι άτομα άγριου τύπου (WT) και Μεταλλαγμένα (KO) σε κάθε κατάσταση και όλα τα ζώα θυσιάστηκαν σε p30. Μελετήσαμε το διαφορικό πρωτεόμα του ήπατος WT και KO και στις δύο σοβαρότητες της ηπατικής κυστικής νόσου (Εικόνα 1), χρησιμοποιώντας τόσο την ποσοτική πρωτεομική ανάλυση SWATH-MS όσο και την ανάλυση DDA-MS απόκτησης εξαρτώμενης από δεδομένα. Από τις πρωτεΐνες με σημαντική αλλαγή σε αφθονία, χρησιμοποιήσαμε βιοπληροφορική Εικόνα 2. Εικονογραφημένο σχήμα ροής εργασίας. Χρησιμοποιήσαμε ένα μοντέλο ποντικού ADPKD (ποντίκια Pkd1cond/cond;Tam-Cre) στο οποίο η γενετική αδρανοποίηση του Pkd1 προκλήθηκε από τη χορήγηση ταμοξιφαίνης κατά τη μεταγεννητική ημέρα 10 (p10) και p11 (ταχεία εξέλιξη της νόσου) ή p15 και p16 (καθυστερημένη εξέλιξη της νόσου ) σύμφωνα με τον αναπτυξιακό διακόπτη για την νεφρική κυστογένεση, που ορίζει τις δύο ομάδες της μελέτης που ονομάζονται p12 και p14 αντίστοιχα [19]. Και για τις δύο ομάδες, χρησιμοποιήσαμε ένα n ίσο ή μεγαλύτερο από έξι άτομα άγριου τύπου (WT) και μεταλλαγμένου (KO) σε κάθε κατάσταση και όλα τα ζώα θυσιάστηκαν σε p30. Μελετήσαμε το διαφορικό πρωτεόμα του ήπατος WT και KO και στις δύο σοβαρότητες της ηπατικής κυστικής νόσου (Εικόνα 1), χρησιμοποιώντας τόσο την ποσοτική πρωτεομική ανάλυση SWATH-MS όσο και την ανάλυση DDA-MS απόκτησης εξαρτώμενης από δεδομένα κυνηγετικού όπλου. Από τις πρωτεΐνες με σημαντική αλλαγή σε αφθονία, χρησιμοποιήσαμε εργαλεία βιοπληροφορικής για να ανιχνεύσουμε νέους θεραπευτικούς στόχους και μονοπάτια που εμπλέκονται σε ασθένειες. Τέλος, επικυρώσαμε αυτούς τους στόχους χρησιμοποιώντας πρώτα in silico (ανάλυση DDA vs SWATH) και τέλος in vivo στρατηγικές, καθώς και RT-qPCR, Western blotting και ανοσοϊστοχημεία. p σημαίνει μεταγεννητική ημέρα
Μοτίβο έκφρασης πρωτεΐνης στην ηπατική κυστογένεση Αρχικά, πραγματοποιήσαμε ανάλυση φασματομετρίας μάζας πρωτεϊνών με λήψη εξαρτώμενης από δεδομένα κυνηγετικού όπλου DDA-MS ή DDA. Αυτή η ανάλυση επιτρέπει τον χαρακτηρισμό του πρωτεώματος από πλήρη και μεμονωμένα δείγματα, παρέχοντας την παρουσία/απουσία πρωτεϊνών με υψηλή ευαισθησία αλλά χωρίς να παρέχει την ποσοτικοποίησή τους. Εξετάσαμε αποκλειστικά όλες τις πρωτεΐνες που εκφράζονται διαφορετικά σε περισσότερα από πέντε ανεξάρτητα δείγματα από ένα σύνολο έξι δειγμάτων, για τα στάδια p14 και p12 ατόμων άγριου τύπου και μεταλλαγμένων ατόμων, αντίστοιχα (Εικόνα S1). Στο p14, εντοπίστηκαν 1 αποκλειστικές πρωτεΐνες WT (ή ρυθμισμένες προς τα κάτω για τη νόσο) και 7 αποκλειστικές (προρυθμισμένες) πρωτεΐνες MUT, ενώ στο p12, παρατηρήθηκαν οκτώ πρωτεΐνες αποκλειστικές για WT και έξι αποκλειστικές πρωτεΐνες MUT (Εικόνα S1).
Στη συνέχεια, χρησιμοποιήσαμε μια μέθοδο που μας επέτρεψε να ποσοτικοποιήσουμε διαφορικά εκφραζόμενες πρωτεΐνες. Πραγματοποιήσαμε μια ποσοτική πρωτεομική ανάλυση SWATH–MS στα ίδια δείγματα που χρησιμοποιήσαμε για το DDA, λαμβάνοντας ~1500 πρωτεΐνες ανά δείγμα και περισσότερες από 2000 πρωτεΐνες σε κάθε ομάδα μελέτης. Αρχικά, πραγματοποιήσαμε κανονικοποίηση αθροίσματος συνολικής επιφάνειας (TAS) για να αξιολογήσουμε ότι τα δείγματά μας ακολούθησαν ένα κανονικό πρότυπο κατανομής, όπως φαίνεται στα Σχήματα S2 και S3. Στη συνέχεια, μελετήσαμε την πρωτεΐνη με σημαντικές διαφορές μεταξύ των ομάδων Wild Type και Mutant. Ο Πίνακας 1 δείχνει τις πρωτεΐνες με σημαντική αλλαγή σε αφθονία με διπλάσια αύξηση (up-regulated) ή μείωση (down-regulated) και σημαντική προσαρμοσμένη τιμή p (σύμφωνα με το παραμετρικό Student's t-test) σε WT vs Δείγματα MUT σε p14 και p12. Συνολικά, έξι πρωτεΐνες έδειξαν σημαντικές διαφορές στην αφθονία πρωτεϊνών μεταξύ των ομάδων WT p14 και MUT-p14 (πέντε πρωτεΐνες με ρύθμιση προς τα πάνω και μία πρωτεΐνες με ρύθμιση προς τα κάτω). Μεταξύ WT-p12 και MUT-p12, 26 πρωτεΐνες (20 πρωτεΐνες ρυθμισμένες προς τα πάνω και 6 πρωτεΐνες ρυθμισμένες προς τα κάτω) έδειξαν σημαντικές διαφορές (Εικόνα 3α και Πίνακας 1). Γραφικά, αυτές οι παραλλαγές μπορούν να παρατηρηθούν μέσω διαγραμμάτων ηφαιστείων, τα οποία δημιουργήθηκαν με τη γραφική παράσταση των αλλαγών log(2) φορές για όλες τις πρωτεΐνες που προσδιορίζονται έναντι της τιμής p −log(10) τους (Εικόνα 3β). Σημαντικές διαφορές μεταξύ των επιπέδων αφθονίας πρωτεϊνών μπορούν να απεικονιστούν στον χάρτη θερμότητας με εξατομικευμένες τιμές σύμφωνα με τις περιοχές της φασματικής βιβλιοθήκης και το επίπεδο ομαδοποίησης στην ανάλυση του χάρτη θερμότητας συστάδων (Εικόνες 3c και S4). Αυτά τα συμπλέγματα που ανιχνεύονται από την ανάλυση SWATH–MS μας βοηθούν να αναγνωρίσουμε αυτά τα ποιοτικά διαχωρισμένα δείγματα, τα οποία πρέπει να ληφθούν υπόψη για την ποσοτική ανάλυση (Εικόνα S5). Πραγματοποιήθηκε μια μη εποπτευόμενη πολυμεταβλητή στατιστική ανάλυση χρησιμοποιώντας ανάλυση κύριου συστατικού (PCA) για τη σύγκριση των δεδομένων μεταξύ των δειγμάτων (Εικόνα S6). Ο χάρτης θερμότητας και τα δεδομένα PCA κατέδειξαν αναπαραγωγιμότητα μεταξύ των δειγμάτων εις τριπλούν καθώς τα τρία αντίγραφα συγκεντρώθηκαν στενά και στις δύο αναλύσεις. Μπορούμε να παρατηρήσουμε τόσο στο PCA όσο και στην ανάλυση συστάδων χαρτών θερμότητας (Εικόνες S5 και S6) πώς ορισμένα δείγματα δεν ομαδοποιήθηκαν σωστά, επικαλύπτοντας μεταξύ των δύο συστάδων. Ωστόσο, μπορούμε να δούμε την τάση διαχωρισμού δεδομένων στα συμπλέγματα Wild Type και Mutant. Ο μικρότερος αριθμός πρωτεϊνών με σημαντικές διαφορές στο p14 έναντι του p12 θα μπορούσε να δικαιολογηθεί από τον διαφορετικό βαθμό σοβαρότητας (Εικόνα 2), υποδηλώνοντας ότι ο αριθμός των πρωτεϊνών και των οδών αυξάνεται με βάση τη σοβαρότητα και την κατάσταση της νόσου του κυστικού φαινοτύπου.
3.3. Ανάλυση ομαδοποίησης, εμπλουτισμού μονοπατιού και αλληλεπίδρασης πρωτεΐνης-πρωτεΐνης της γονιδιακής έκφρασης σε PLD
Για να καθορίσουμε τη λειτουργία που σχετίζεται με τις διαφορικά εκφραζόμενες πρωτεΐνες που προσδιορίζονται από την ανάλυση SWATH-MS, χρησιμοποιήσαμε διάφορα βιοπληροφορικά εργαλεία και μορφές αναλύσεων. Οι αναλύσεις όρων και μονοπατιών γονιδιακής οντολογίας (GO) πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας FunRich [39,40], String [41] και Reactome [42]. Οι πρωτεΐνες ταξινομήθηκαν σε ανάλυση εμπλουτισμού γονιδίου FunRich. Όσον αφορά τη βιολογική διαδικασία, η πιο εμπλουτισμένη ομάδα πρωτεϊνών για την ομάδα p14 (ήπια κυστική) σχετιζόταν με τη μεταφορά λιπαρών οξέων και τη βιοσύνθεση προσταγλανδινών και για την ομάδα p12 (σοβαρή κυστική) με δραστηριότητα ινωδογόνου/ινώδους, προσκόλληση κυττάρου-κυττάρου/μήτρας και μεταβολική διαδικασία (Εικόνα 4α, επάνω πίνακας). Το ANXA2 και το σύμπλεγμα ινωδογόνου ήταν τα δύο πιο εμπλουτισμένα κυτταρικά συστατικά στις ομάδες p14 και p12, αντίστοιχα. Επιπλέον, ο εξωκυτταρικός χώρος ήταν το κυτταρικό συστατικό με το υψηλότερο ποσοστό πρωτεϊνών και στις δύο ομάδες (Εικόνα 4α, κάτω πλαίσιο). Ομοίως, η ίδια ανάλυση καθιερώθηκε με την ανάλυση χορδών, προσδιορίζοντας διαφορετικές μεταβολικές διεργασίες ως την κύρια βιολογική διεργασία και τον εξωκυτταρικό χώρο ως το πιο εμπλουτισμένο κυτταρικό συστατικό. σύμφωνα με τα αποτελέσματα GO (Σχήμα S7a). Τέλος, επαναλάβαμε την ανάλυση με την πλατφόρμα Reactome, διαπιστώνοντας ότι ο μεταβολισμός και το ανοσοποιητικό σύστημα ήταν οι πιο εμπλουτισμένες οδοί (Εικόνα S7b).
Πραγματοποιήθηκε επίσης ανάλυση πρωτεΐνης-πρωτεΐνης ή ομαδικής ανάλυσης βασισμένη σε ανάλυση χορδών προκειμένου να διερευνηθούν πιθανές αλληλεπιδράσεις πρωτεΐνης-πρωτεΐνης (αλληλεπιδράσεις με πειραματικά στοιχεία). Πολυάριθμες αλληλεπιδράσεις πρωτεϊνών εντοπίστηκαν σε διαφορετικές ομάδες (Εικόνα S8), αλλά ένα σύμπλεγμα στο p14 και ένα άλλο στο p12 ήταν οι πιο σχετικές με βάση τον αριθμό των αλληλεπιδράσεων μεταξύ των πρωτεϊνών και το επίπεδο έκφρασης (Εικόνα 4β). Το σύμπλεγμα p{4}} περιέχει πρωτεΐνη αννεξίνης A2 (ANXA2_P07356) που σχετίζεται με διάφορες κυτταρικές λειτουργίες, όπως η ινωδόλυση, η κινητικότητα των κυττάρων (στα επιθηλιακά κύτταρα), μια πρωτεΐνη που σχετίζεται με την ακτίνη Αλληλεπιδράσεις κυτταροσκελετού και κυττάρου-μήτρας [43], που αλληλεπιδρούν με δύο άλλες πρωτεΐνες που εμπλέκονται στην ενδοκυτταρική μεταφορά λιπιδίων (FABP1_P12710 και FABP5_Q05816). Είναι ενδιαφέρον ότι μια άλλη σχετική ομάδα πρωτεϊνών εντοπίστηκε στο σύμπλεγμα p12-με μια πολύ ισχυρή αλληλεπίδραση πρωτεΐνης-πρωτεΐνης μεταξύ πολλών ινωδογόνων (FGL1_Q71KU9, FIBB_Q8K0E8, FIBA{{22 }}E9PV24 και FIBGG_Q8VCM7). Τα ινωδογόνα εμπλέκονται στην ανάπτυξη των ηπατοκυττάρων και μεσολαβούν στην εξάπλωση των αιμοπεταλίων, στο διάμεσο κολλαγόνο και στις ινωτικές αλλοιώσεις [44]. Επιπλέον, βρέθηκε ότι πρόσθετες πρωτεΐνες αλληλεπιδρούν με ινωδογόνα (Σχήμα S8), όπως το p-συστατικό αμυλοειδούς ορού (SAMP{31}}P12246), η αιμοπηξίνη (HEMO_Q91X72) ή η οξειδάση υδροξυοξέων 2 (HAOX{ {37}}Q9NYQ2). Σύμφωνα με τα αποτελέσματα των συμβολοσειρών, τα σύμπλοκα ANXA2 και ινωδογόνου ήταν επίσης τα πιο εμπλουτισμένα κυτταρικά συστατικά που προσδιορίστηκαν από την ανάλυση FunRich (Εικόνα 4α). Είναι ενδιαφέρον ότι κατά τη σύγκριση των δεδομένων που ελήφθησαν από την ανάλυση DDA και SWATH, επιβεβαιώσαμε ότι αρκετές πρωτεΐνες που ταυτοποιήθηκαν από το SWATH ταυτοποιήθηκαν επίσης με ανάλυση DDA, συμπεριλαμβανομένων αρκετών που σχετίζονται με πρωτεΐνες συμπλόκου ινωδογόνου (SAMP/Apcs και S10A9/S100a9, Πίνακας S3).
3.4. Η επικύρωση της ανάλυσης SWATH-MS αποκαλύπτει το σύμπλεγμα ινωδογόνου ως νέο μοριακό μηχανισμό που σχετίζεται με το PLD
Με βάση αυτά τα δεδομένα, επιλέξαμε από την ανάλυση SWATH–MS (Εικόνα S9) τις τροποποιημένες πρωτεΐνες που σχετίζονται με το σύμπλεγμα ινωδογόνου στα στάδια p12 και p14 για in vivo επικύρωση με RT-qPCR, Western blotting και ανοσοϊστοχημεία, για να καθορίσουμε την επιβεβαίωσή τους όσο το δυνατόν στόχους της νόσου. Οκτώ από 10 από αυτές τις επιλεγμένες πρωτεΐνες επικυρώθηκαν σε επίπεδο mRNA με RT-qPCR (Εικόνα 5). ένα ρυθμισμένο προς τα πάνω στο 14-στάδιο (ANXA2_P07356) και στο p12-ομάδα (SAMP_P12246, FGL1_Q71KU9, ILK{{ 17}}O55222, S10A9_P31725, FIBB_Q8K0E8, HEMO_Q91X72, FIBA_E9PV24 και FIBG_Q8VCM7) και ένα κάτω- ρυθμίζεται στην ομάδα p12 (HAOX2_Q9NYQ2). Είναι ενδιαφέρον ότι η γονιδιακή έκφραση των δύο πρωτεϊνών με μεγαλύτερη απόσταση ή λιγότερες αλληλεπιδράσεις με την ομάδα ινωδογόνου (ILK και S10A9) ήταν οι μόνες που δεν επικυρώθηκαν (Εικόνα 5γ).
Η ανοδική ρύθμιση του συμπλέγματος ινωδογόνου (πρωτεΐνες ANXA2, SAMP, FIBB, FIBA, FIBG και HAOX2) επιβεβαιώθηκε περαιτέρω με ανάλυση Western blotting (WB) (Εικόνα 6). Συνολικά, η γονιδιακή έκφραση και το WB ήταν σε μεγάλο βαθμό συνεπή με τα πρωτεομικά δεδομένα SWATH-MS. Τέλος, πραγματοποιήσαμε επίσης ανοσοϊστοχημεία επικύρωση του συμπλέγματος ινωδογόνου σε δείγματα μεταλλαγμένου και πολυκυστικού ήπατος (Εικόνα 7). Η χρώση ινωδογόνου ρυθμίστηκε έντονα προς τα πάνω στα επιθηλιακά κύτταρα που επενδύουν τις κύστες και τις διαστολές του χοληφόρου πόρου (Εικόνα 7α). Αυτά τα αποτελέσματα αποκαλύπτουν, για πρώτη φορά, το σύμπλεγμα ινωδογόνου ως πιθανή οδό που σχετίζεται με την ηπατική κυστογένεση και ως πιθανό μελλοντικό θεραπευτικό στόχο για PLD.
Εικόνα 5. Επικύρωση πιθανών στόχων PLD με RT-qPCR. Γονιδιακή έκφραση 8 έως 10 επιλεγμένων στόχων που συσχετίζονται με δεδομένα SWATH-MS. RT-qPCR της προς τα πάνω ρυθμισμένης επιλεγμένης αννεξίνης στόχου p14 Α2 (Anxa2) (α). Η αυξημένη ρύθμιση p12 στοχεύει το συστατικό p αμυλοειδούς, ορό (Apcs, γονίδιο SAMP), ινωδογόνο 1 (Fgl1), αλυσίδα βήτα ινωδογόνου (Fgb), αιμοπηξίνη (Hpx), αλυσίδα άλφα ινωδογόνου (Fga), αλυσίδα γάμμα ινωδογόνου (Fgg) (β), κινάση συνδεδεμένη με ιντεγκρίνη (Ilk) και S10{{3{32}}}} πρωτεΐνη δέσμευσης ασβεστίου Α9 (S100a9) (γ). και ρυθμισμένη προς τα κάτω p12 οξειδάση υδροξυοξέων 2 (Hao2) (δ). n=6 χρησιμοποιήθηκε για κάθε ομάδα πρωτεΐνης. Το Gapdh χρησιμοποιήθηκε ως γονίδιο νοικοκυριού. Οι ράβδοι αντιπροσωπεύουν μέσο όρο ± SEM. Χρησιμοποιήθηκε το t-test Student με δύο ουρές και η τιμή p < 0,05 θεωρήθηκε σημαντική. ns: μη σημαντικό (p Μεγαλύτερο ή ίσο με 0,05), * p < 0,05, ** p < 0,01, *** p < 0,001.
Εικόνα 7. Το σύμπλεγμα ινωδογόνου ρυθμίζεται προς τα πάνω στο κυστικό επιθήλιο. (α, β) Αντιπροσωπευτικές εικόνες ανοσοϊστοχημείας ινωδογόνου σε χοληφόρο πόρο (άνω τμήμα) και ηπατικό παρέγχυμα (κάτω πλαίσιο) (α) και ποσοτικοποίηση του (β). n=6 χρησιμοποιήθηκε για κάθε ομάδα. Η ανάλυση ανοσοϊστοχημείας έδειξε αυξημένη ρύθμιση του ινωδογόνου μέσω του κυστικού επιθηλίου. Τα δείγματα αντιστοιχούσαν στην ομάδα p12. Οι γραμμές κλίμακας αντιπροσωπεύουν 100 μm. Bd σημαίνει χοληδόχος πόρος. Οι ράβδοι αντιπροσωπεύουν μέσο όρο ± SEM. Χρησιμοποιήθηκε το t-test Student με δύο ουρές και η τιμή p < 0,05 θεωρήθηκε σημαντική. *** p < 0,001.
Υποστήριξη της Wecistanche-Ο μεγαλύτερος εξαγωγέας κιστάνι στην Κίνα:
Διεύθυνση ηλεκτρονικού ταχυδρομείου:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel:+86 15292862950
Αγορά για περισσότερες λεπτομέρειες Λεπτομέρειες:
https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop
