Η φορμονονετίνη μετριάζει την αυτοάνοση προστατίτιδα μέσω διαμόρφωσης JAK/STAT και ανοσολογικής εξισορρόπησης: Επιπτώσεις για πρόσθετα εκχυλίσματος CP/CPPS και TCM Cistanche
Dec 10, 2025
Σκοπός:Για να διερευνηθεί πώς η φορμονονετίνη (FN) ρυθμίζει τη διαφοροποίηση των κυττάρων T helper τύπου 1 (Th1) και την πόλωση των μακροφάγων μέσω σηματοδοτικών μονοπατιών JAK/STAT σε ένα μοντέλο ποντικού πειραματικής αυτοάνοσης προστατίτιδας (EAP).
Μέθοδοι:Σαράντα αρσενικά μη παχύσαρκα διαβητικά ποντίκια (NOD) χωρίστηκαν τυχαία σε τέσσερις ομάδες: φυσιολογικό έλεγχο, έλεγχο μοντέλου EAP, χαμηλή δόση FN (LFN, 50 mg/kg) και υψηλή δόση FN (HFN, 100 mg/kg). Η ΕΑΡ προκλήθηκε στις τρεις τελευταίες ομάδες με υποδόρια ένεση προστατικών αντιγόνων (PAgs) γαλακτωματοποιημένων σε πλήρες ανοσοενισχυτικό Freund (CFA). Μετά τη μοντελοποίηση, οι ομάδες LFN και HFN έλαβαν ενδογαστρική FN στα 50 ή 100 mg/kg/ημέρα, αντίστοιχα. τα κανονικά και τα μοντέλα ελέγχου έλαβαν νατριούχο καρβοξυμεθυλοκυτταρίνη (CMC-Na). Την ημέρα 42 μετά την έναρξη της θεραπείας, τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία και συλλέχθηκαν ιστοί. Η παθολογία του προστάτη αξιολογήθηκε με χρώση HE. Η διαφοροποίηση των κυττάρων Th1 και η πόλωση των μακροφάγων στον προστάτη αξιολογήθηκαν με διπλή χρώση ανοσοφθορισμού (CD4 με ιντερφερόνη-[IFN-]· επαγώγιμη συνθάση νιτρικού οξειδίου [iNOS] και CD206). Οι αναλογίες των κυττάρων Th1 και των μακροφάγων στον σπλήνα μετρήθηκαν με κυτταρομετρία ροής και τα επίπεδα IFN και παράγοντα νέκρωσης όγκου (TNF-) ορού με ELISA. Τα φωσφορυλιωμένα (ρ)-JAK1, JAK1, p-JAK2, JAK2, p-STAT1 και STAT1 σε ιστό προστάτη προσδιορίστηκαν με στύπωμα Western.
Αποτελέσματα: Σε σύγκριση με τα μοντέλα ελέγχου, και οι δύο δόσεις FN οδήγησαν σε πιο εύρυθμη διάταξη των αδενικών επιθηλιακών κυττάρων, μείωσαν σημαντικά τις βαθμολογίες φλεγμονής του προστάτη (P < 0,05), μείωσαν την αναλογία των κυττάρων Th1 και των δεικτών μακροφάγων Μ1 (P < 0,05) και αύξησαν τους δείκτες μακροφάγων M2 σε ιστό προστάτη και σπλήνα (5.0 <0). Τα επίπεδα IFN- και TNF- στον ορό μειώθηκαν σημαντικά στις ομάδες LFN και HFN (P <0,05). Σε μοριακό επίπεδο, οι αναλογίες p-JAK1/JAK1, p-JAK2/JAK2 και p-STAT1/STAT1 στον ιστό του προστάτη ήταν όλες σημαντικά μειωμένες (P <0,05), υποδεικνύοντας ότι η FN ασκεί θεραπευτικά αποτελέσματα στο EAP ρυθμίζοντας τη σηματοδότηση JAK/STAT, προάγοντας την εξισορρόπηση της φλεγμονής και την αποκατάσταση της φλεγμονής.
Σύναψη:Το FN ανακουφίζει το EAP αναστέλλοντας τα μονοπάτια σηματοδότησης JAK/STAT και ρυθμίζοντας τη διαφοροποίηση Th1 και την πόλωση των μακροφάγων. Αυτά τα ευρήματα, μαζί με το αυξανόμενο ενδιαφέρον για τα συμπληρώματα παραδοσιακής κινεζικής ιατρικής (TCM), όπως τα συμπληρώματα εκχυλίσματος Cistanche για τη ρύθμιση του ανοσοποιητικού και την υποστήριξη του πυελικού πόνου, προτείνουν μια στρατηγική πολλαπλών στόχων που αξίζει περαιτέρω επικύρωση σε αυστηρές, αξιολογημένες ρυθμίσεις από ομοτίμους.
Λέξεις-κλειδιά:φορμονονετίνη;αυτοάνοση προστατίτιδα; φλεγμονώδης απόκριση; Μονοπάτια σηματοδότησης JAK/STAT. ποντίκια?Συμπλήρωμα εκχυλίσματος βοτάνου TCM Cistanche; ανοσοτροποποίηση
Συμπλήρωμα εκχυλίσματος βοτάνου TCM Cistanche
Υποστήριξη της Wecistanche-Ο μεγαλύτερος εξαγωγέας κιστάνι στην Κίνα:
Διεύθυνση ηλεκτρονικού ταχυδρομείου:wallence.suen@wecistanche.com
Εισαγωγή
Η χρόνια προστατίτιδα/σύνδρομο χρόνιου πυελικού πόνου (CP/CPPS) επηρεάζει το 5%-10% των ανδρών και αντιπροσωπεύει περίπου το 90% όλων των περιπτώσεων προστατίτιδας. Είναι ιδιαίτερα διαδεδομένο σε νέους και μεσήλικες άνδρες, παρουσιάζοντας κυρίως πόνο στο κάτω μέρος της κοιλιάς, στο περίνεο και στην περιοχή της πυέλου, που συχνά συνοδεύεται από συμπτώματα του κατώτερου ουροποιητικού συστήματος και μερικές φορές στυτική δυσλειτουργία. Οι τρέχουσες θεραπείες πρώτης γραμμής περιλαμβάνουν μη στεροειδή αντιφλεγμονώδη φάρμακα (ΜΣΑΦ), αντιβιοτικά και αναστολείς των αδρενεργικών υποδοχέων, είτε μόνα τους είτε σε συνδυασμό. Ωστόσο, τα υψηλά ποσοστά υποτροπής οδηγούν πολλούς ασθενείς να είναι δυσαρεστημένοι με αυτά τα σχήματα. Ως εκ τούτου, χρειάζονται επειγόντως νέες θεραπευτικές παρεμβάσεις και βαθύτερη γνώση της παθογένειας της CP/CPPS.
Συμπλήρωμα εκχυλίσματος Cistanche βότανο CM Οφέλη
Ένας αυξανόμενος όγκος στοιχείων δείχνει ότι η απορρύθμιση του ανοσοποιητικού συστήματος παίζει κρίσιμο ρόλο στην ανάπτυξη της CP/CPPS. Οι ασθενείς συνήθως παρουσιάζουν εκτεταμένη διήθηση Τ λεμφοκυττάρων και μονοκυττάρων στον ιστό του προστάτη και αυξημένα λευκοκύτταρα σε εκφρασμένες προστατικές εκκρίσεις, όπου κυριαρχούν τα CD4+ Τ λεμφοκύτταρα και τα μακροφάγα. Τα προκλινικά δεδομένα υποδηλώνουν περαιτέρω ότι οι ανοσοκατασταλτικές στρατηγικές μπορούν να ανακουφίσουν τη φλεγμονή και τον πόνο στην CP/CPPS. Έτσι, η στόχευση της διήθησης λευκοκυττάρων και της φλεγμονώδους απόκρισης μπορεί να είναι αποτελεσματική για την ανακούφιση των συμπτωμάτων. Η φορμονονετίνη (FN), μια κύρια βιοδραστική ισοφλαβόνη σε πολλά βότανα TCM, διαθέτει αντιοξειδωτικές και αντιφλεγμονώδεις ιδιότητες. Το εάν το FN μπορεί να βελτιώσει το CP/CPPS παραμένει ασαφές. Εδώ, αξιολογήσαμε το θεραπευτικό αποτέλεσμα του FN σε ένα μοντέλο EAP ποντικού. Παράλληλα με το αυξανόμενο κλινικό ενδιαφέρον για ολοκληρωμένες προσεγγίσεις, σημειώνουμε ότι τα συμπληρώματα εκχυλίσματος βοτάνου TCM Cistanche διερευνώνται για ανοσοτροποποιητική και αντιφλεγμονώδη υποστήριξη σε σύνδρομα πυελικού πόνου. Αν και δεν είναι το επίκεντρο αυτής της μελέτης, εντάσσουν το FN σε ένα ευρύτερο θεραπευτικό τοπίο που βασίζεται στο TCM.
Υλικά και Μέθοδοι
Ζώα
Αρσενικά ποντίκια NOD ηλικίας 6-7 εβδομάδων ελήφθησαν από το Κέντρο Πειραματικών Ζώων του Πανεπιστημίου Παραδοσιακής Κινεζικής Ιατρικής της Σαγκάης (SUTCM) (άδεια SYXK [Hu] 2020-0009· πιστοποιητικό SCXK [Jing] 2021-0006). Τα ζώα στεγάστηκαν σε κύκλους 12 ωρών φωτός/12 ωρών σκότους με ad libitum πρόσβαση σε τροφή και νερό. Όλες οι διαδικασίες εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Ιδρυματικής Φροντίδας και Χρήσης Ζώων του SUTCM (Αρ. Έγκρισης PZSHUTCM2301040003).
Αντιδραστήρια και Φάρμακα
Φορμονονετίνη (MedChemExpress, HY‑N0183); πλήρες ανοσοενισχυτικό Freund (CFA; Sigma-Aldrich, F5881). αλατούχο διάλυμα ρυθμισμένο με φωσφορικά (PBS); αλβουμίνη ορού βοοειδών (BSA); υπερευαίσθητα κιτ ECL (Shanghai YaYme Biotech, CB012, PS113, SQ201). αντισώματα έναντι των p‑JAK1, JAK1, p‑JAK2, JAK2, p‑STAT1, STAT1, GAPDH και DAPI (Cell Signaling Technology, #74129, #3344, #3776, #3230, #9167, #9172, #5); Ρυθμιστικό διάλυμα RIPA και δοκιμασία πρωτεΐνης BCA (Thermo Fisher Scientific, 89901, Α55866); Κιτ χρώσης HE (Servicebio, GP1031); iNOS και CD206 (Abcam, ab178945, ab125028); APC anti-mouse CD3, FITC anti-mouse CD4, PE anti-mouse IFN‑ (BioLegend, 100235, 100405, 505807).
Όργανα
Συσκευή ηλεκτροφόρησης (E11001, Bio-Rad); ομοεστιακό μικροσκόπιο σάρωσης λέιζερ (LSM 780, Zeiss); Κυτταρόμετρο ροής CytoFLEX (Beckman Coulter).
Ίδρυση Μοντέλου ΕΑΠ
Μετά από μία εβδομάδα εγκλιματισμού, τα ποντίκια τυχαιοποιήθηκαν σε τέσσερις ομάδες (n=10): έλεγχος, μοντέλο, χαμηλή δόση FN (50 mg/kg) και υψηλή δόση FN (100 mg/kg). Η ΕΑΡ προκλήθηκε σύμφωνα με προηγούμενες μεθόδους. Το υπερκείμενο που περιέχει προστατικά αντιγόνα (PAg) παρασκευάστηκε από ομογενοποίηση προστάτη αρουραίου Sprague-Dawley και αναμίχτηκε 1:1 με CFA. Τις ημέρες 0 και 28, τα ποντίκια έλαβαν υποδόριες ενέσεις και στα δύο οπίσθια πέλματα, στο κάτω μέρος της πλάτης και στη βάση της ουράς είτε PAg (300 ug/ποντίκι, ομάδες EAP) είτε PBS (μάρτυρας), γαλακτωματοποιημένα με CFA (150 μL/ποντίκι). Οι ομάδες FN έλαβαν καθημερινά ενδογαστρικό FN (50 ή 100 mg/kg). Οι ομάδες ελέγχου και μοντέλων έλαβαν CMC-Na αντιστοίχισης όγκου. Το πείραμα τελείωσε την 42η ημέρα και ακολούθησε ανθρώπινη ευθανασία.
HE Χρώση προστατικού ιστού
Οι προστάτες στερεώθηκαν σε 4% παραφορμαλδεΰδη, αφυδατώθηκαν, ενσωματώθηκαν σε παραφίνη και τεμαχίστηκαν στα 5 μm. Οι τομές χρωματίστηκαν χρησιμοποιώντας κιτ HE και απεικονίστηκαν με ομοεστιακή μικροσκοπία. Η φλεγμονή βαθμολογήθηκε με 0-3 με βάση τα καθιερωμένα κριτήρια, με το 0 να υποδηλώνει καμία φλεγμονή και το 3 να υποδηλώνει έντονη διήθηση φλεγμονωδών κυττάρων.
Κυτταρομετρία ροής για Th1 κύτταρα και μακροφάγα
Εναιωρήματα μονοκυττάρων παρασκευάστηκαν και διατηρήθηκαν σε PBS με 0,5% BSA. Η επιφανειακή και η ενδοκυτταρική χρώση ακολούθησαν τυπικά πρωτόκολλα χρησιμοποιώντας APC anti-CD3, FITC anti-CD4 και PE anti-IFN- . Τα κύτταρα διεγέρθηκαν με 50 ng/mL PMA, 1 ug/mL ιονομυκίνης και 5 ug/mL brefeldin A στους 37 βαθμούς για 4 ώρες, στη συνέχεια χρωματίστηκαν ενδοκυτταρικά στους 4 βαθμούς για 30 λεπτά. Τα δεδομένα ελήφθησαν σε CytoFLEX και αναλύθηκαν με FlowJo.
Χρώση ανοσοφθορισμού για μακροφάγα
Οι σταθεροποιημένες τομές προστάτη αποπαραφινώθηκαν, υποβλήθηκαν σε ανάκτηση αντιγόνου και μπλοκαρίστηκαν με ορό κατσίκας 10% για 30 λεπτά. Τα πρωτογενή αντισώματα (iNOS, CD206) εφαρμόστηκαν όλη τη νύχτα στους 4 βαθμούς. Μετά από πλύσεις PBS, εφαρμόστηκαν δευτερεύοντα αντισώματα επισημασμένα με φθοροφόρο για 1 ώρα στους 37 βαθμούς στο σκοτάδι. Οι πυρήνες αντιχρωματίστηκαν με DAPI για 5 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου, ακολουθούμενες από πλύσεις PBS και τοποθέτηση για μικροσκοπία φθορισμού.
Μέτρηση Κυτοκίνης
Οι IFN- και TNF- ορού ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας κιτ ELISA σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.
Western Blot
Οι ιστοί του προστάτη λύθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα RIPA (με αναστολείς πρωτεάσης και φωσφατάσης). Η συγκέντρωση πρωτεΐνης μετρήθηκε με δοκιμασία BCA. Παρασκευάστηκαν πηκτές κατάλληλων ποσοστών. ίσες ποσότητες πρωτεΐνης ηλεκτροφορήθηκαν και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες PVDF. Τα πρωτογενή αντισώματα (p-JAK1, JAK1, p-JAK2, JAK2, p-STAT1, STAT1, GAPDH, όλα 1:1000) επωάστηκαν όλη τη νύχτα στους 4 βαθμούς, ακολουθούμενα από έκπλυση και επώαση με συζευγμένα με HRP .5000h δευτερογενή αντισώματα (1: Οι ζώνες οπτικοποιήθηκαν με ενισχυμένη χημειοφωταύγεια και απεικονίστηκαν. Η σχετική έκφραση πρωτεΐνης υπολογίστηκε με πυκνομετρική ανάλυση.
Στατιστική ανάλυση
Τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας GraphPad Prism 9.0. Χρησιμοποιήθηκε μονόδρομη ANOVA για συγκρίσεις πολλαπλών ομάδων. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SD. P Μικρότερο ή ίσο με 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντικό.
Συζήτηση
Αυτή η μελέτη καταδεικνύει ότι η φορμονονετίνη μετριάζει την ιστοπαθολογική φλεγμονή, καταστέλλει την πόλωση Th1, μετατοπίζει τους φαινοτύπους των μακροφάγων από το προφλεγμονώδες M1 στο προδιλυτικό M2 και ρυθμίζει προς τα κάτω τη φωσφορυλίωση JAK1/2-STAT1 στον ιστό του προστάτη σε ένα μοντέλο ποντικού EAP. Η μειωμένη συστηματική IFN‑ και TNF‑ επιβεβαιώνει περαιτέρω τις αντιφλεγμονώδεις και ανοσορυθμιστικές επιδράσεις της FN. Αυτά τα αποτελέσματα ευθυγραμμίζονται με προηγούμενες αναφορές μονοπατιών JAK/STAT που διαμορφώνουν FN σε μοντέλα ισχαιμίας-επαναιμάτωσης και αθηροσκλήρωσης, υπογραμμίζοντας τους διατηρημένους αντιφλεγμονώδεις μηχανισμούς. Στο ευρύτερο πλαίσιο της TCM, οι οδοί ολοκληρωμένης φροντίδας μερικές φορές περιλαμβάνουν βοτανικά όπως συμπληρώματα εκχυλίσματος Cistanche (Rou Cong Rong), τα οποία έχουν διερευνηθεί για ανοσοτροποποίηση, κόπωση και ουρογεννητική υποστήριξη. Αν και το εκχύλισμα Cistanche δεν δοκιμάστηκε εδώ, μελλοντικές ελεγχόμενες μελέτες θα μπορούσαν να συγκρίνουν ή να συνδυάσουν το FN με τυποποιημένα συμπληρώματα εκχυλίσματος βοτάνου TCM για τη διερεύνηση πιθανής συνέργειας στη φλεγμονή που συνδέεται με το JAK/STAT και στα αποτελέσματα του πυελικού πόνου. Οποιαδήποτε κλινική μετάφραση θα πρέπει να συμμορφώνεται με πρότυπα τεκμηριωμένα, ελεγχόμενη από την ποιότητα προμήθεια και παρακολούθηση ασφάλειας.
συμπεράσματα
Η φορμονονετίνη ανακουφίζει την πειραματική αυτοάνοση προστατίτιδα αναστέλλοντας τη σηματοδότηση JAK/STAT και ρυθμίζοντας τη διαφοροποίηση Th1 και την πόλωση των μακροφάγων. Αυτά τα ευρήματα παρέχουν ένα μηχανιστικό σκεπτικό για περαιτέρω ανάπτυξη στρατηγικών FN-και δυνητικά συμπληρωματικών TCM, όπως τα συμπληρώματα εκχυλίσματος Cistanche, ως ανοσοτροποποιητικές παρεμβάσεις για CP/CPPS, που εκκρεμεί επικύρωση σε αυστηρές, αξιολογημένες από ομοτίμους προκλινικές και κλινικές μελέτες.
Αναφορές
[1] He SL, Zhang ZJ, Wu JH, et al. Επίδραση της στυτικής δυσλειτουργίας στα ψυχολογικά συμπτώματα σε ασθενείς με CP/CPPS. Journal of Hunan Normal University (Medical Sciences), 2021, 18(5): 27–30.
[2] Polackwich AS, Shoskes DA. Χρόνια προστατίτιδα/σύνδρομο χρόνιου πυελικού πόνου: Ανασκόπηση αξιολόγησης και θεραπείας. Καρκίνος προστάτη και ασθένειες του προστάτη, 2016, 19(2): 132–138.
[3] Sun Y, Liu Y, Liu B, et al. Αποτελεσματικότητα του βελονισμού για CP/CPPS: Μια τυχαιοποιημένη δοκιμή. Annals of Internal Medicine, 2021, 174(10): 1357–1366.
[4] Franco JV, Turk T, Jung JH, et al. Μη φαρμακολογικές παρεμβάσεις για τη θεραπεία της CP/CPPS. Cochrane Database of Systematic Reviews, 2019, 10: CD012551.
[5] Rees J, Abrahams M, Doble A, et al. Διάγνωση και θεραπεία χρόνιας βακτηριακής προστατίτιδας και CP/CPPS: Μια συναινετική κατευθυντήρια γραμμή. BJU International, 2015, 116(4): 509–525.
[6] Pena VN, Engel N, Gabrielson AT, et al. Διαγνωστικές και διαχειριστικές στρατηγικές για CP/CPPS. Drugs & Aging, 2021, 38(10): 845–886.
[7] Chen L, Zhang M, Liang C. CP/CPPS: Άλλη μια αυτοάνοση ασθένεια; Archives of Immunology and Therapy Experimentalis, 2021, 69(1): 24.
[8] Murphy SF, Schaeffer AJ, Thumbikat P. Ανοσολογικοί μεσολαβητές του συνδρόμου χρόνιου πυελικού πόνου. Nature Reviews Urology, 2014, 11(5): 259–269.
[9] Appiya SM, Khan FU, Naveed M, et al. Παρεμβάσεις για CP/CPPS: Πού βρισκόμαστε και τι ακολουθεί; European Journal of Pharmacology, 2019, 857: 172429.
[10] Yu L, Zhang Y, Chen Q, et al. Η φορμονονετίνη προστατεύει από τη φλεγμονή που σχετίζεται με την εγκεφαλική ισχαιμία-επαναιμάτωση μέσω του JAK2/STAT3. Biomedicine & Pharmacotherapy, 2022, 149: 112836.
[11] Ma X, Wang J. Formononetin: Ένα μονοπάτι για την προστασία των νευρώνων. Frontiers in Integrative Neuroscience, 2022, 16: 908378.
[12] Ma C, Xia R, Yang S, et al. Η φορμονονετίνη εξασθενεί την αθηροσκλήρωση μέσω της αλληλεπίδρασης KLF4–SRA σε ποντικούς ApoE−/−. Theranostics, 2020, 10(3): 1090–1106.
[13] Du HX, Yue SY, Niu D, et al. Η μικροχλωρίδα του εντέρου ρυθμίζει τη διαφοροποίηση Th17/Treg στο EAP μέσω προπιονικού. Frontiers in Immunology, 2022, 13: 915218.
[14] Du H, Chen X, Zhang L, et al. Το EAP προκαλεί εξασθένηση της μαθησιακής μνήμης και νευροπλαστικές αλλαγές σε ποντίκια. Cellular and Molecular Neurobiology, 2020, 40(1): 99–111.
[15] Zhang Y, Feng R, Chen S, et al. Η αιτιολογική επίδραση του CXCR7 στον τραυματισμό και την ίνωση του EAP. International Immunopharmacology, 2025, 144: 113368.
